Agentul cauzal al sifilisului. Taxonomie

Nr. 23 Agentul cauzal al sifilisului. Taxonomie. Caracteristică. Diagnosticul microbiologic. Tratament.
Treponema paladiu; T. entericum
Morfologie: treponeme tipice cu 8-12 spirale, aparat motor - 3 flageli periplasmatici la fiecare pol celular. Pata Gram nu este percepută; pata Romanovsky-Giemsa este ușor roz, evidențiată de impregnarea argintie.
Proprietăți culturale: tulpină virulentă pe groapă. nu crește în medii, acumularea culturii se produce prin infectarea iepurelui în testicul. Tulpinile virulente sunt cultivate pe medii care conțin țesut cerebral și renal.
Proprietăți biochimice: microaerofil
Structura antigenică: complex, are antigeni proteici și lipoizi specifici, acesta din urmă este identic ca compoziție cu cardiolipina extrasă din inima bovină (difosfadilglicerol)
Factori de patogenitate: adezinele sunt implicate în procesul de atașare, lipoproteinele sunt implicate în dezvoltarea proceselor imunopatologice.
Rezistenta: sensibil la uscare, lumina soarelui, ramane pe obiecte pana la uscare. În condiții nefavorabile, se transformă în forme L și formează chisturi.
Patogeneză: provoacă sifilis. De la poarta de intrare, treponemul intră în ganglionii limfatici regionali, unde se înmulțesc. În continuare, T. pătrunde în fluxul sanguin, unde se atașează de celulele endoteliale, provocând endarterită, ducând la vasculită și necroză tisulară. Odată cu sângele, T. se răspândește în tot corpul, însămânțând organele: ficat, rinichi, oase, sistemul cardiovascular și sistemul nervos.
Imunitatea: imunitatea protectoare nu este dezvoltata. Ca răspuns la antigenele patogeni, se dezvoltă HRT și procesele autoimune. Imunitatea umorală este dezvoltată ca răspuns la antigenul lipoid T. și este un titru de IgA și IgM.
Examinare microscopica. Efectuați pentru sifilisul primar în timpul apariției șancrului. Material pentru cercetare: descărcarea șancrului, conținutul ganglionilor limfatici regionali, din care se prepară o picătură „zdrobită” și se examinează într-un câmp întunecat. Dacă rezultatul este pozitiv, sunt vizibile fire de 6-14 microni lungi, ondulate subțiri, având 10-12 bucle mici uniforme de formă regulată. Treponema pallidum se caracterizează prin mișcări de tip pendul și de flexie de translație. Odată cu dezvoltarea leziunilor pe mucoasa bucală în timpul sifilisului secundar, precum și cu localizarea chancroidului în cavitatea bucală, este necesar să se diferențieze Treponema pallidum de Treponema saprofită, care sunt reprezentanți ai microflorei normale. În acest caz, detectarea treponemelor tipice în punctatul ganglionilor limfatici regionali are o importanță diagnostică decisivă.
Serodiagnostic. Reacția Wasserman se realizează concomitent cu 2 antigene: 1) specifici, care conțin antigenul agentului patogen - treponeme distruse prin ultrasunete; 2) nespecific - cardiolipina. Serul de testat este diluat într-un raport de 1:5 și RSC este plasat conform metodei general acceptate. Cu o reacție pozitivă, se observă o întârziere a hemolizei, cu o reacție negativă, are loc hemoliza globulelor roșii; intensitatea reacției se apreciază corespunzător de la (+ + + +) la (-). Prima perioadă de sifilis este seronegativă și se caracterizează printr-o reacție Wasserman negativă. La 50% dintre pacienți, reacția devine pozitivă nu mai devreme de 2-3 săptămâni de la apariția șancrului. În a doua și a treia perioadă de sifilis, frecvența reacțiilor pozitive ajunge la 75-90%. După cursul tratamentului, reacția Wasserman devine negativă. În paralel cu reacția Wasserman, se efectuează o reacție de microprecipitare cu un antigen cardiolipin nespecific și testul a inactivat ser sau plasmă sanguină. Se aplică 3 picături de ser într-un godeu de pe o placă de plexiglas (sau sticlă obișnuită) și se adaugă 1 picătură de antigen cardiolipin. Amestecul este bine amestecat și rezultatele sunt luate în considerare. O reacție pozitivă cu serul sanguin al unui pacient cu sifilis se caracterizează prin formarea și pierderea de fulgi de diferite dimensiuni; cu rezultat negativ se observă opalescență uniformă a luminii.
RIF - reactie indirecta de imunofluorescenta - este specifica pentru diagnosticul de sifilis. O suspensie de treponeme tisulare este utilizată ca antigen. Este utilizată reacția RIF_200. Serul pacientului este inactivat în același mod ca și pentru reacția Wassermann și diluat în raport de 1:200. Picăturile de antigen se aplică pe lamele de sticlă, se usucă și se fixează în acetonă timp de 5 minute. Apoi, serul pacientului este aplicat pe preparat, după 30 de minute se spală și se usucă. Următorul pas este tratarea medicamentului cu ser fluorescent împotriva globulinelor umane. Preparatul este studiat cu ajutorul unui microscop fluorescent, notând gradul de luminescență al treponemelor.
Specifică este și reacția RIT de imobilizare a treponemelor. O cultură vie de Treponema se obține prin cultivarea lui într-un testicul de iepure. Testiculul este zdrobit într-un mediu special în care treponemele rămân mobile. Reacția se realizează după cum urmează: o suspensie de treponeme tisulare (motile) este combinată într-o eprubetă cu serul de testare și se adaugă complement proaspăt. Într-un tub de control, în locul serului de testare, se adaugă serul unei persoane sănătoase, în celălalt, în loc de complement proaspăt, se adaugă inactivat - inactiv. După menținerea la 35 °C în condiții anaerobe (anaerostat), din toate eprubetele se prepară o picătură „zdrobită” și se determină numărul de treponeme mobile și imobile într-un câmp întunecat.
Tratament: peniciline, tetracicline, medicamente care conțin bismut.

Sifilisul este o boală venerică umană ciclică cauzată de o spirochetă pallidum; Stadiul I se manifestă prin chancroid (fr. şancrul– ulcer), stadiul II – afectarea pereților vaselor de sânge și diverse erupții cutanate, stadiul III – gingii în diferite organe cu afectare a sistemului nervos. Gumma (lat. . gumii- gingie) este un infiltrat cronic sub forma unui nod, predispus la carii si ulceratii. gumă sifilitică ( sin.: granulom sifilitic, sifilidă guma, sifilomul terțiar) este o gumă emisferică nedureroasă, care este o manifestare a sifilisului terțiar activ. Agent patogen - Treponema pallidum– a fost descoperit în 1905 de F. Schaudin și E. Hoffmann.

T. pallidum– un microorganism în formă de spirală, dimensiuni 0,09 – 0,18 x 6 – 20 microni. Numărul de spire spiralate este de la 8 la 12, spirele sunt uniforme, situate la aceeași distanță unele de altele, aproximativ 1 micron, înălțimea scade spre capete. Într-un microscop electronic arată ca un șarpe sau râme. La ambele capete ale treponemului sunt atașate blefaroplaste cu flageli, al căror număr variază de la două la mai multe; ele formează un fir axial răsucit în jurul cilindrului protoplasmatic al spirochetei. În condiții nefavorabile poate forma chisturi. În corpul animalelor, poate apărea un caz asemănător unei capsule de natură mucopolizaharidă.

Treponemul nu se colorează bine cu coloranții cu anilină, motiv pentru care agentul cauzal al sifilisului se numește spirocheta palid. Reduce azotatul de argint în argint metalic, care se depune pe suprafața microbilor și îl face vizibil în țesuturi: atunci când sunt colorați conform lui Morozov, treponemele apar maro sau aproape negre. Când sunt colorate conform Romanovsky-Giemsa, ele capătă o culoare roz pal.

Treponemele se reproduc de obicei prin diviziune transversală, iar celulele divizate pot adera unele la altele pentru o perioadă de timp. Timpul de împărțire este de aproximativ 30 de ore.

Treponemele vii sunt foarte mobile, făcând mișcări în jurul propriei axe longitudinale, precum și mișcări de flexie, de valuri și de translație.

Până în prezent, nu există nicio metodă prin care să fie posibilă obținerea stabilă a culturilor de treponeme. Treponema pallidum, patogen pentru om, nu a fost niciodată cultivat în medii nutritive artificiale, în embrioni de pui sau culturi celulare. Acele varietăți ale tulpinilor lor care cresc în condiții anaerobe sunt probabil spirochete saprofite, apropiate de agentul cauzal al sifilisului. Fiziologia lor rămâne puțin studiată. Treponemele sunt chemoorganotrofe, nu au catalază și oxidază și pot fermenta carbohidrații. Ele cresc pe medii foarte bogate care conțin până la 11 aminoacizi, vitamine, săruri și albumină serică. Cel mai bun mod de a crește spirochete patogene este de a infecta un iepure în testicul (orhită experimentală). S-a sugerat că există T. pallidum ciclul de viață, incluzând, pe lângă forma spirală, stadiul granular și stadiul corpurilor sferice asemănătoare chistului. Formele granulare ale acestor microorganisme sunt capabile să treacă prin filtrele bacteriene.

Antigenii de treponema sunt slab studiati. S-a stabilit că treponemele conțin complexe de proteine, polizaharide și lipide. Compoziția antigenică a treponemelor culturale și tisulare este atât de apropiată încât antigenele preparate din treponemele culturale pot fi utilizate pentru RSC în diagnosticul sifilisului. În corpul uman, treponemele stimulează producția de anticorpi, care provoacă imobilizarea și moartea treponemelor mobile vii, fixează complementul în prezența unei suspensii. T. pallidum sau spirochete înrudite și sunt detectate și în RIF indirect.

Agentul cauzal al sifilisului nu produce exotoxine. Treponema pallidum este relativ nerezistent la influențele externe. Mor rapid atunci când sunt uscate și la temperaturi ridicate (la 55 °C timp de 15 minute). Într-o soluție 0,3 - 0,5% HCI își pierd instantaneu mobilitatea; De asemenea, îl pierd rapid și mor în prezența arsenului, bismutului și mercurului. În sângele integral sau ser la 4 °C rămân viabile timp de 24 de ore, lucru care trebuie luat în considerare la transfuzii de sânge.

Epidemiologie. Sifilisul este o boală venerică tipică. Sursa de infecție este o persoană bolnavă, de obicei contagioasă de 3 până la 5 ani; pacienții cu forme tardive de sifilis nu sunt contagioși. Infecția are loc în marea majoritate a cazurilor prin diferite tipuri de contacte sexuale și casnice, rareori pe cale transplacentară de la o mamă bolnavă la copil (sifilis congenital) sau ca infecție profesională prin contact între personalul medical. În condiții naturale, doar oamenii suferă de sifilis; în experimente, maimuțele, hamsterii și iepurii pot fi infectați. La maimuțe, șancru se dezvoltă la locul injectării treponemului; la iepuri și hamsteri, infecția este asimptomatică.

Patogenie și clinică. Perioada de incubație pentru sifilisul dobândit variază de la 2 până la 10 săptămâni, de obicei 20 – 28 de zile. Punctele de intrare pentru infecție sunt cel mai adesea membranele mucoase ale organelor genitale, mai rar cavitatea bucală, precum și pielea deteriorată. La locul de penetrare, agentul patogen se înmulțește și se formează sifilom primar (șancru dur) - eroziune sau ulcer cu o bază compactată. Apoi, agentul patogen intră în sistemul limfatic și se dezvoltă limfangita și limfadenita regională. Acesta este un tablou clinic tipic al sifilisului primar, care durează 1,5 - 2 luni. Apoi aceste semne dispar. Perioada secundară a sifilisului este asociată cu generalizarea procesului, când mulți ganglioni limfatici se măresc și apar erupții cutanate pe piele și membranele mucoase; Pot apărea leziuni ale organelor interne și ale sistemului nervos. Există sifilis secundar proaspăt și secundar recurent. Cu fiecare recidivă ulterioară, intensitatea erupției cutanate devine mai puțin pronunțată, iar perioadele dintre recidive cresc. Elementele erupției cutanate conțin un număr mare de treponeme vii; în această perioadă pacientul este cel mai contagios. Durata sifilisului secundar este de până la 4 ani sau mai mult. Boala intră apoi într-o perioadă lungă asimptomatică, după care, după câțiva ani, se dezvoltă sifilisul terțiar. În acest caz, se observă leziuni organice grave ale organelor interne, ale sistemului cardiovascular, ale sistemului nervos central, ale oaselor, se formează gume, însoțite de deteriorarea țesuturilor și modificări degenerative. O trăsătură clinică caracteristică a sifilisului este absența oricăror plângeri subiective din partea pacientului (durere, mâncărime, arsură etc.).

Imunitate. Nu există imunitate naturală sau artificială împotriva sifilisului; Există doar imunitate infecțioasă și, atâta timp cât aceasta există, o persoană nu este practic susceptibilă la o nouă infecție. Imunitatea infecțioasă se dezvoltă la 10-11 zile de la apariția unui șancru dur (imunitate chancroidă); în această perioadă, fie nu se observă reinfecția, fie șancrul nou format este avort (superinfecție). Ulterior, în timpul suprainfecției, natura leziunilor rezultate corespunde stadiului bolii în momentul reinfectării. Suprainfecția se explică printr-o slăbire temporară sau „defalcare” a imunității infecțioase. Este necesar să se distingă reinfecția de suprainfecție, adică o nouă infecție repetată a unei persoane care a avut anterior sifilis (vindecat) și, prin urmare, și-a pierdut imunitatea infecțioasă. Au fost descrise chiar și trei cazuri de sifilis. Perioada de incubație la astfel de pacienți este mai scurtă, șancrul ulcerativ multiplu cu limfadenită se dezvoltă mai des, iar reacțiile serologice devin pozitive mai devreme. În perioada secundară, papulele de pe piele se erodează adesea. Acest lucru se explică prin faptul că, cu sifilis, se dezvoltă o reacție de hipersensibilitate de tip întârziat; după tratament, limfocitele sensibilizate rămân în organism mult timp. Imunitatea infecțioasă este de natură nesterilă și este cauzată de factori umorali: imunoglobulinele din clasele G, A și M se găsesc în serul pacientului.

Diagnosticul de laborator. Pentru a diagnostica sifilisul, este optimă o abordare integrată, care implică utilizarea simultană a mai multor metode. Ele sunt împărțite în mod tradițional în cele directe, care fac posibilă demonstrarea prezenței unui agent patogen în materialul studiat (infecția animalelor, diferite tipuri de microscopie și metode genetice moleculare de detectare a ADN-ului). T. pallidum– sondarea PCR și ADN), și indirecte – teste serologice pentru depistarea anticorpilor. La rândul lor, testele serologice sunt reprezentate de teste netreponemale și treponemale.

Materialul care trebuie testat pentru detectarea treponeamelor prin metode directe este descărcarea șancrului sau punctat, ganglionul limfatic punctat, răzuirea rozeolei și lichidul cefalorahidian. Agentul patogen este cel mai bine detectat în materialul nativ prin microscopie în câmp întunecat (vezi Fig. 111.4) sau cu contrast de fază, care permite observarea diferitelor tipuri de mișcare ale agentului patogen viu. Dacă tratamentul cu antibiotice a început deja, agentul patogen nu poate fi detectat în materialul patologic. Dacă este necesar, se efectuează RIF direct (sau indirect) sau preparatul este colorat conform Romanovsky-Giemsa. Aceste metode sunt utilizate numai pentru diagnosticarea precoce a sifilisului.

Testele serologice pot fi utilizate în diferite stadii ale bolii, cu excepția sifilisului primar seronegativ. De obicei se folosește un complex de reacții serologice. LA non-treponemic testele cu determinarea vizuală a rezultatelor includ: reacția de fixare a complementului (reacția Wassermann = RSKk = RW) cu antigenul cardiolipin al mușchiului cardiac bovin (antigenul cu reacție încrucișată), reacția de microprecipitare (MR, sau RMP) - microreacția cu plasmă și ser inactivat; RPR - test rapid de reagină în plasmă și alte reacții. Experții consideră că pentru examinarea în masă este mai bine să folosiți două teste: RPR și RPGA sau ELISA, deoarece RPR este mai sensibil în sifilisul primar, RPGA - în etapele ulterioare ale bolii și ELISA - în toate etapele. Testele non-treponemale cu citirea microscopică a rezultatelor includ testul VDRL și testul USR. Testele non-treponemale sunt folosite ca teste de screening, deoarece pot da rezultate fals pozitive. ÎN treponemală testele folosesc antigene de origine treponemală. Ele sunt utilizate pentru confirmarea rezultatelor testelor non-treponemice (fals pozitive?) pentru suspiciunea clinică, epidemiologică și anamnestică de sifilis, pentru diagnosticul formelor latente și tardive, pentru un diagnostic retrospectiv. Testele treponemice includ: RSKt (RSK cu antigen treponemic), RIBT (sau RIT) - reacție de imobilizare a Treponema pallidum, RIF (una dintre cele mai bune reacții), RPGA, ELISA, imunoblot.

Diagnosticul microbiologic al sifilisului

Munca practica

Medicina si medicina veterinara

Numele de treponem „pal” a fost dat datorită capacității sale scăzute de colorare. Există și alte treponeme patogene: T. pertenue - agentul cauzator al tisului, T. carateum - agentul cauzator al pintei, T. bejel - agentul cauzal al spirochetozei cronice generalizate (bejel). Agenții patogeni specificați și cei cauzați...

Orientări pentru studenți pentru lecția practică nr. 36.

Tema lecției:

Ţintă: Studiul metodelor de diagnostic microbiologic, terapie și prevenire a sifilisului.

Modulul 2 . Microbiologie specială, clinică și de mediu.

Subiectul 36: Diagnosticul microbiologic al sifilisului.

Relevanța subiectului:

Agentul cauzal al sifilisului

Sifilisul este o boală venerică infecțioasă cauzată de Treponema pallidum, caracterizată prin leziuni ale pielii, organelor interne, oaselor și sistemului nervos. Există sifilis dobândit și congenital.

Taxonomie. Agentul cauzal al sifilisului - treponema pallidum (Treponema pallidum) - a fost descoperit în 1905 de F. Schaudinn și E. Hoffman; aparține familiei Spirochaetaceae, divizia Gracilicutes.

Morfologie și proprietăți tinctoriale.Numele de treponem „pal” a fost dat datorită capacității sale scăzute de colorare. Există și alte treponeme patogene: T. pertenue - agentul cauzator al tisului, T. carateum - agentul cauzator al pintei, T. bejel - agentul cauzal al spirochetozei cronice generalizate (bejel). Acești agenți patogeni și bolile pe care le provoacă sunt mai frecvente în regiunile cu climă caldă și umedă. Treponema pallidum este o bacterie subțire în formă de spirală, de 4 până la 14 microni lungime, cu bucle mici uniforme (8-14 bucle); împreună cu forma spirală poate avea și alte forme - sub formă de chisturi, granule, forme L; colorat conform Romanovsky-Giemsa într-o culoare caracteristică roz slab. Mișcările variază de la elicoidal la flexie.

Cultivare.Treponema pallidum este un anaerob obligatoriu, extrem de solicitant cu mediile nutritive. Treponemul cultivat pe medii nutritive - o spirochetă de cultură - se deosebește de cel patogen prin faptul că este mai puțin virulent, dar antigenele lor sunt similare, ceea ce este folosit în serodiagnostica sifilisului.

Structura antigenică.Treponema pallidum se caracterizează prin conexiuni antigenice cu alte treponeame, precum și cu lipoizi din țesuturile animale și umane. În agentul patogen au fost identificate mai multe antigene, dintre care unul, antigenul lipoid, este identic cu extractul lipoid din inima bovină.

Rezistenţă. Treponema pallidum este slab rezistent în mediu; la 55 0 C moare în 15 minute, este sensibil la uscare, lumină, săruri de mercur, bismut, arsenic, penicilină. Pe obiectele de uz casnic rămâne infecțios până se usucă; bine conservată în ţesutul cadaveric.

Susceptibilitatea animalelor.Experimental, procesul patologic poate fi indus în testicul și pielea iepurilor și în pielea marilor maimuțe.

Epidemiologie. Sursa de infecție este o persoană bolnavă. Infecția apare în principal prin contact sexual, rar prin obiecte de uz casnic (ochelari, periuțe de dinți, țigări etc.) contaminate cu scurgeri de la pacient; Infecția prin săruturi, lapte de la o mamă care alăptează (sifilis domestic) este posibilă; cazurile de infecție prin transfuzii de sânge de la donatori cu sifilis nu pot fi excluse.

Patogenie și tablou clinic.Agentul cauzal al sifilisului intră în organism prin piele sau membrana mucoasă, se răspândește prin organe și țesuturi, provocând deteriorarea acestora. Perioada de incubație durează în medie 3-4 săptămâni. După perioada de incubație, sifilisul apare ciclic sub formă de perioade primare, secundare și terțiare. La locul de introducere a agentului patogen (pe organele genitale, în cavitatea bucală etc.) apare o leziune primară - șancru - o compactare puternic delimitată cu un ulcer la suprafață. Perioada secundară de sifilis durează 3-4 ani, caracterizată printr-o erupție cutanată și o încălcare a stării generale a corpului. Perioada terțiară se caracterizează prin leziuni ale pielii, mucoaselor, organelor interne, oaselor și sistemului nervos: apar formațiuni care sunt predispuse la carii și ulcerații.

Imunitate. Nu există imunitate înnăscută la sifilis. Cu sifilis, se dezvoltă imunitatea nesterilă; După recuperare, imunitatea nu este păstrată, astfel încât bolile recurente sunt posibile.

Microscopia în câmp întunecat este utilizată pentru a detecta Treponema pallidum în secreția chancroidă. Până la sfârșitul perioadei primare și în perioada secundară, reacțiile sergologice ale lui Wasserman, reacțiile sedimentare ale lui Kahn, testele citocolice și alte teste care detectează anticorpi la treponema pallidum devin pozitive. În timpul examinărilor de masă, o reacție de selecție sau microreacție pe sticlă este utilizată cu o picătură de sânge sau ser și un antigen special. Laboratoarele de cercetare folosesc, de asemenea, reacția de imobilizare a treponemelor și alte metode moderne.

Schema de cercetare microbiologică pentru sifilis

Examen microscopic Serodiagnostic

(set de reacții serologice):

Reacția lui Wasserman

Reacție de imobilizare a treponemului

Microscopia preparatului nativ RIF

Într-un câmp întunecat

RĂSPUNS RĂSPUNS

Tratament. Cei mai eficienți agenți antimicrobieni sunt antibioticele peniciline. Se mai folosesc preparate din bismut, iod etc.

Prevenirea. Nu există o prevenire specifică. Prevenirea nespecifică constă în respectarea regulilor de igienă, precum și în realizarea unui set de măsuri sanitare și igienice cu caracter public: înregistrarea pacienților cu sifilis, internarea tuturor pacienților cu forme infecțioase, implicarea în examinarea tuturor membrilor familiei. a persoanei bolnave, examinarea sistematică a grupelor de risc, educația populației etc.

Obiective specifice:

Familiarizați-vă cu morfologia agentului cauzal al sifilisului.

Determinați caracteristicile cursului clinic al sifilisului.

Definiți conceptele de „țesut” și treponeme „culturale”.

Interpretați rezultatele examinării microscopice.

Metode de studiu de diagnostic serologic al sifilisului.

Familiarizați-vă cu metodele de prevenire și terapie specifică.

A fi capabil să:

• Colectați materiale pentru cercetare de la pacienți
• Interpretați rezultatele examinării microscopice
• Să fie capabil să efectueze reacția Wasserman

Întrebări teoretice:

1. Agent patogen.

• Proprietăți. Rezistenţă.
• Patogenitate pentru oameni și animale. Factori de patogenitate, toxine.
• Patogenia bolii la om, imunitatea.
• Diagnosticul microbiologic.
• Prevenție și tratament specific

2. Obiectivele punerii în scenă a reacției Wasserman.

3. Valoarea diagnostică a reacției Wasserman și a reacțiilor sedimentare.

4. Mecanismul reacției Wasserman.

5. Caracteristici ale imunității în sifilis.

Sarcini practice efectuate în clasă:

• Microscopia preparatelor demonstrative.
• Schițarea de microdiapozitive demonstrative în protocol.
• Analiza schemei de diagnostic de laborator.
• Întocmirea protocolului.

Literatură:

1. Korotyaev A.I., Babichev S.A., Microbiologie medicală, imunologie și virologie / Manual pentru universități medicale, Sankt Petersburg: „Literatura specială”, 1998. - 592 p.

2. Timakov V.D., Levashev V.S., Borisov L.B. Microbiologie / Manual - ed. a II-a, revăzută. şi suplimentare - M.: Medicină, 1983, - 512 p.

3. Pyatkin K.D. Krivoshein Yu.S. Microbiologie cu virologie și imunologie.- Kiev: Școala Vishcha, 1992. - 431 p.

4. Microbiologie medicală /Ed. V.I. Pokrovsky.- M.: GEOTAR-MED, 2001.- 768 p.

5. Ghid pentru orele practice de microbiologie, imunologie si virologie. /Ed. M.P. Zykova.- M. „Medicina”. 1977. 288 p.

6. Cherkes F.K., Bogoyavlenskaya L.B., Belskan N.A. Microbiologie. /Ed. F.K. circasian.M.: Medicină, 1986. 512 p.

7. Note de curs.

Literatură suplimentară:

1. Makiyarov K.A. Microbiologie, virologie și imunologie.- Alma-Ata.: „Kazahstan”, 1974. 372 p.

2. Titov M.V. Boli infecțioase.- K., 1995. 321 p.

3. Shuvalova E.P. Boli infecţioase.- M.: Medicină, 1990. - 559 p.

4. BME, T. 1, 2, 7.

5. Pavlovich S.A. Microbiologie medicală în grafice: Manual. indemnizatie medicala in-tov. Mn.: Mai sus. şcoală, 1986. 255 p.

Scurte linii directoare pentru lucrul într-o lecție practică.

La începutul lecției se verifică nivelul de pregătire al elevilor pentru lecție.

• Muncă independentă.
• punerea în scenă a reacţiei Wasserman.
• Luarea în considerare a reacției lui Wasserman și înregistrarea în protocol.
• Analiza și înregistrarea schemelor de diagnostic de laborator în protocol.

Munca independentă include, de asemenea, microscopia preparatelor demonstrative și schițarea acestora în protocolul de lecție.

La sfârșitul lecției, se efectuează un test de control și o analiză a rezultatelor finale ale muncii independente ale fiecărui elev.

Harta tehnologica pentru desfasurarea unei lectii practice

Nu.	Etape	Timp în min.	Modalitati de invatare	Echipamente	Locație
	Verificarea și corectarea nivelului de pregătire pentru o lecție	20	Teste la nivel de ieșire	Mese. Teste pe tema.	Cameră de studiu
	Muncă independentă	35	Grafic structura logica	Colectare de medicamente demonstrative, produse biologice.
	Automonitorizarea și corectarea materialului învățat	15	Programe de instruire țintite
	Controlul de testare	15	Teste
	Analiza rezultatelor muncii

Algoritm de lucru de laborator:

Studiul schemei de diagnostic de laborator pentru sifilis.

Microscopia frotiurilor preparate din treponeme cultivate și tisulare.

Familiarizarea cu regulile de colectare a materialului de la pacienți pentru microscopia materialului studiat.

Microscopia și analiza preparatelor demonstrative.

Schițarea drogurilor în protocol.

Înregistrarea schemelor de diagnostic de laborator în protocol.

Întocmirea protocolului.

Testare de control și analiza rezultatelor muncii independente ale fiecărui elev.

Sarcini de formare vizate:

1. Un pacient a fost internat în spital cu diagnostic de sifilis primar. Care dintre următoarele metode de diagnostic este utilizată în acest stadiu al bolii?

A . microscopie în câmp întunecat;

C. RP în gel

D. RA

E . imunofluorescență indirectă

2. La o pacientă din secția de chirurgie maxilo-facială, când s-a efectuat reacția Wasserman, s-a dovedit a fi negativă. Care dintre următoarele rezultate este folosit pentru a determina fenomenul RSC negativ?

A . prin aglutinare eritrocitară;

B . prin prezența sedimentului de celule roșii din sânge;

C . prin schimbarea culorii lichidului;

D . prin formarea peliculei

E . prin prezenţa hemolizei în eprubete.

3. La examinarea unui pacient cu KVD, s-au evidențiat erupții cutanate papulare-rozeoloase pe trunchi și membre și ganglioni limfatici măriți. Diagnosticul preliminar de sifilis. Ce metodă de diagnostic de laborator poate confirma acest diagnostic?

A. alergic;

B. biologic;

C . bacteriologic;

D . bacterioscopic;

E. ELISA

4. În timpul programării, medicul dentist a descoperit un șancru dur în gura pacientului. Care dintre următoarele metode de diagnostic de laborator poate fi utilizată pentru a face un diagnostic?

A . Reacție de imobilizare a treponemului

B . Reacția lui Wasserman

C. Reacția lui Kahn

D. RA

E . bacterioscopic

5. O femeie a venit la clinica prenatală la 8 săptămâni de sarcină. În timpul examinării, i s-a recoltat sânge pentru a verifica prezența anticorpilor specifici la treponeme. Care dintre următoarele teste serologice pot fi utilizate pentru a detecta anticorpii la treponem?

A. Reacția lui Wright

B . Reacția lui Wasserman

C. Reacția Vidal

D . Reacția Bordet-Gengou

E. RTGA.

6. Pentru a confirma diagnosticul de sifilis, tehnicianul de laborator a efectuat o reacție serologică, în care a folosit serul sanguin al pacientului, antigenul cardiolipidic, complementul și un sistem indicator. Care este numele reacției date?

A . Reacție de imobilizare a treponemului;

B . Reacția Wasserman;

C. Reacția lui Kahn

D. RP

E . reacție de imunofluorescență.

7. La efectuarea unei reacții serologice pentru a detecta anticorpi la agentul cauzal al sifilisului în serul sanguin al pacientului, treponemele au fost incubate cu serul pacientului în condiții anaerobe, după care bacteriile și-au pierdut mobilitatea. Ce reacție a fost dată și ce înseamnă?

A . Reacție Wasserman, pacientul are sifilis;

B .Reacția Wassermann, pacientul se află într-o perioadă de incubație;

C . Reacție de imobilizare a treponemului, pacientul are sifilis;

D . reacție indirectă de imunofluorescență, pacientul are sifilis;

E . Reacție de imobilizare a treponemului, pacientul a suferit cândva de sifilis.

8. Pentru diagnosticul serologic al sifilisului folosind reacția Wasserman, medicul de laborator a pregătit următorii reactivi: antigen cardiolipidic, soluție izotonică de clorură de sodiu, sistem hemolitic. Ce altă componentă este necesară pentru a pune în scenă această reacție?

A . treponem viu;

B . globule roșii de oaie;

C. completa;

D . ser antiglobulinic;

E . ser precipitant diagnostic.

9. Într-o microlamă preparată dintr-un punct punct al ganglionilor limfatici ai pacientului, colorat conform Romanovsky-Giemsa, medicul a identificat microorganisme subțiri cu 12-14 bucle uniforme de culoare roz pal. Despre ce agent cauzal al bolii infecțioase putem vorbi în acest caz?

A . febră recurentă;

B. leptospiroza;

C. leishmanioza

D. sifilis

E. tripanosomiaza.

10. O răzuire a mucoasei bucale a fost luată de la un pacient cu suspiciune de sifilis primar. Microscopia unui frotiu colorat folosind metoda Romanovsky-Giemsa a evidențiat bacterii violet contorte. Care dintre următoarele concluzii este corectă?

A . pacientul a fost diagnosticat T. pallidum;

B . Pacientul s-a dovedit a avea forme atipice T. pallidum;

C . Pacientul a fost diagnosticat cu treponeme nepatogene;

D . a fost aleasă greșită metoda de vopsire;

E. -

11. Un clinician a suspectat sifilis primar la un pacient. Ce material de cercetare este necesar să colectăm pentru a confirma diagnosticul?

A . lichid tisular din șancrul și ganglionii limfatici punctați;

B . răzuire de la erupții cutanate;

C. fluid cerebrospinal;

D. mucus din nas

E. salivă.

12. S-a prelevat sânge de la un pacient cu suspiciune de sifilis secundar pentru testare. Ce metodă de diagnosticare este adecvată pentru a confirma diagnosticul?

A . Reacția Vidal;

B . test de alergie;

D . Reacția Bordet-Gengou

E . metoda bacteriologica

C . reacție indirectă de imunofluorescență.

Precum și alte lucrări care te-ar putea interesa
68128.		Cuvintele din vârf sunt raiul în suflet	78,5 KB
	Meta: absorbiți cunoștințele academice din teoria literaturii, analiza ideologică și artistică a operei poetice și îmbunătățiți înțelegerea lecturii semnificative; dezvolta o viziune mai poetică asupra imaginilor; a subdiviza iubirea la cuvantul artistic si la natura naturala. Voi citi versurile poetice și vei fi vinovat...
68129.		Joc intelectual „Distracție literară” Vei fi mereu în inimile oamenilor, Taras!	43,5 KB
	Shevchenko dezvoltă o înțelegere logică a virazne citind vikhovuvaty până la cuvântul lui Shevchenko și tsikavіst până la dezvoltarea creativității sale. Taras Shevchenko Taras Acest nume rebel și profetic este cunoscut nu numai de ucraineni, ci și de restul lumii. Izvorul lui Shevchenko cu apa Dzherelnoy este ca o rugăciune spirituală pentru oameni.
68130.		Cunoașterea Țării Logicii	28,5 KB
	Astăzi, copiii sunt trimiși la noi cu un cost fără precedent. Copiii merg la școală pe cel mai scurt traseu, dar se pot plimba prin diverse labirinturi ani de zile. Copiii urcă și coboară din autobuz. Axa companiei este ordinea în care copiii stau. Borya Petrik Yurko Vira Stas Ira.
68131.		Analogie. Ia-i pe cei mici pentru o analogie	263,5 KB
	Tip de lecție: lecție stăpânită și începător Abilități: figuri geometrice și obiecte mici de jucat Fotograf; Seturi individuale de figuri geometrice ale gurii bebelușului în succesiune. Schimb locurile și fac ordine. Toate figurile sunt în culori diferite Și acum deschide ochii și minune-te...
68132.		Călătorind de-a lungul oceanului de direcții logice	27,5 KB
	Meta: Cunoașteți copii cu concepte diferite; dezvolta gândirea, limbajul, memoria, diligența; arată umilință, curaj. Mergeți la lecție Vă rugăm să rețineți subiectele și să notați lecția. Astăzi, costul călătoriilor în jurul lumii cu vaporul crește. Sunt o mulțime de beneficii diferite care ne așteaptă. Lyudina este un lucru dulce. Gândurile se transformă în cuvinte.
68133.		Concepte nebunești și fără sens. Cerere de repetare	84,5 KB
	Meta: să clarifice și să sistematizeze cunoștințele elevilor despre conceptele conceptelor nebunești și absurde pentru a înțelege temeinic cunoștințele elevilor pentru a dezlega sarcinile logice pentru a dezvolta conștientizarea logică a conștientizării respectului pentru memoria realității; inspiră dragoste pentru creaturi, trezește interesul cognitiv pentru fiecare ființă vie, formulează autoiluminări...
68136.		MODERNIZAREA VEHICULELOR ÎN UCRAINA: MECANISME DE REGLEMENTARE INSTITUȚIONALĂ	188 KB
	Eficacitatea și eficiența funcționării sistemului de iluminat al Ucrainei la începutul secolului XXI vor fi asigurate doar dacă nu vor fi supuse celor mai înalte mandate oră-ora generate de economie Această instabilitate, criză demografică, -vid cultural.

T. pallidum subspecia pallidum este o bacterie în formă de spirală care măsoară 6-14x0,2-0,3 µm; în culturi pot fi mari. Buclele spiralate sunt aceleași ca înălțime, pot fi până la 14. Capabile de a forma forme de L.

De bază metoda de reproducere a sifilisului- diviziune transversală. Agentul cauzal al sifilisului Nu este foarte stabil în mediul extern și moare când se usucă, dar la frig persistă până la 50 de zile. Încălzirea la o temperatură de 40 °C timp de o oră duce la pierderea proprietăților patogene; la 48 °C bacteriile mor în 10 minute.

Agentul cauzal al sifilisului nu se colorează bine cu coloranții cu anilină (de unde și denumirea de „spirochetă palid”). Bacteriile sifilisului reduceți azotatul de argint în argint metalic, ceea ce conferă țesăturilor o culoare neagră sau maro închis.

În practica casnică, metoda Morozov de argint este larg răspândită. Potrivit Romanovsky-Giemsa, este colorat în roz și nu este patogen Treponem- în mov sau albastru. Se folosește și contrastul negativ Burri.

Proprietățile culturale ale sifilisului. Cultura agentului cauzal al sifilisului

Spirochetă palidă exigent la condițiile de cultivare, crește slab pe medii artificiale; Metodele de producere stabilă a culturilor încă lipsesc.

În țara noastră cel mai mare număr tulpini de sifilis identificat de microbiologii din Kazan V.M. Aristovsky și P.P. Geltser.

Acești „Kazan” tulpini de sifilisîmpreună cu tulpina Reiter, este folosită pentru producerea de Ag pentru serodiagnostic. Cu cultivare pe termen lung bacterii sifilis se adaptează la medii mai simple (de exemplu, Kitta-Tarozzi) și își pierd proprietățile patogene.

Colonii de sifilis mici, apar în a 3-5-a zi de cultură.

Conținutul articolului

Treponema pallidum

Morfologie și fiziologie

T. pallidum are o formă spiralată, un cilindru protoplastic, care este răsucit în 8-12 spirale. 3 flageli periplasmatici se extind de la capetele celulei. Treponema pallidum nu acceptă bine coloranții cu anilină, așa că este colorat cu vopsea Romanovsky-Giemsa. Cu toate acestea, cea mai eficientă metodă este să o studiezi într-un microscop cu câmp întunecat sau cu contrast de fază. Microaerofil. Nu crește pe medii nutritive artificiale. T. pallidum este cultivat în țesutul testicular de iepure, unde se înmulțește bine și își păstrează pe deplin proprietățile, provocând orhită la animal. Antigene. Structura antigenică a T. pallidum este complexă. Este asociat cu proteinele membranei exterioare, lipoproteinele. Acestea din urmă sunt antigene cu reacție încrucișată comune oamenilor și bovinelor. Sunt utilizați ca antigen în reacția Wassermann pentru serodiagnosticul sifilisului.

Patogenitate și patogeneză

Factorii de virulență ai Treponema pallidum includ proteinele membranei exterioare și LPS, care își manifestă proprietățile toxice după eliberarea din celulă. În același timp, aparent, capacitatea treponemului, la divizare, de a forma fragmente separate care pătrund adânc în țesuturi, poate fi atribuită și factorilor de virulență. Există trei etape în patogeneza sifilisului. Cu sifilisul primar, se observă formarea unui focar primar - șancru dur la locul porții de intrare a infecției, urmat de pătrunderea în ganglionii limfatici regionali, unde agentul patogen se înmulțește și se acumulează. Sifilisul primar durează aproximativ 6 săptămâni. A doua etapă se caracterizează prin generalizarea infecției, însoțită de pătrunderea și circulația agentului patogen în sânge, care este însoțită de erupții cutanate. Durata sifilisului secundar la pacientii netratati variaza intre 1-2 ani. În a treia etapă sunt detectate granuloame infecțioase (gume predispuse la carii), localizate în organe și țesuturi interne. Aceasta perioada la pacientii netratati dureaza cativa ani si se termina cu afectarea sistemului nervos central (paralizie progresiva) sau a maduvei spinarii (tabes dorsalis).

Imunitate

În cazul sifilisului, apare un răspuns imun umoral și celular. Anticorpii rezultați nu au proprietăți protectoare. Răspunsul imun celular este asociat cu fixarea agentului patogen și formarea de granuloame. Cu toate acestea, eliminarea treponemelor din organism nu are loc. În același timp, condițiile de mediu nefavorabile induc formarea de chisturi prin treponem, care sunt localizate în peretele vaselor de sânge. Se crede că acest lucru indică trecerea bolii în remisie. Împreună cu chisturile, treponemele formează forme L. Cu sifilis, se formează HRT, care poate fi detectată printr-un test cutanat alergic cu o suspensie ucisă de treponeme. Se crede că manifestarea perioadei terțiare a sifilisului este asociată cu HRT.

Ecologie și epidemiologie

Sifilisul este o infecție de obicei antroponotică. Doar oamenii care sunt rezervoare de infecție în natură se îmbolnăvesc. Transmiterea infecției are loc prin contact sexual și, mult mai rar, prin lenjerie intimă și alte obiecte. În mediul extern (aer), treponemele mor rapid.

Sifilis și alte treponematoze

Sifilisul este o boală venerică infecțioasă cronică a omului, are o evoluție ciclică progresivă, afectează pielea, mucoasele, organele interne și sistemul nervos. Agentul cauzal al bolii este Treponema pallidum Există trei perioade principale de dezvoltare a sifilisului, ale căror metode de diagnostic de laborator au propriile caracteristici. În perioada incipientă a bolii, materialul pentru diagnosticul de laborator este scurgerile din șancru, punctate din ganglionii limfatici, răzuire de la rozeola, sifilide etc. În perioadele secundare și terțiare se examinează serul sanguin și lichidul cefalorahidian.Din cauza faptului că izolarea culturilor pure de treponeme în laboratoarele bacteriologice convenționale este imposibilă, în perioada primară a bolii (rar mai târziu) se efectuează o metodă de diagnostic bacterioscopic. Începând din perioada secundară se folosesc în principal metode serologice.

Examen bacterioscopic

Înainte de a lua material patologic, ulcerul sifilitic este mai întâi șters cu un tampon de bumbac pentru a îndepărta placa sebacee și microflora contaminantă. Apoi fundul șancrului este iritat cu un bisturiu sau o spatulă de metal, sau ulcerul este stors energic din lateral cu degetele într-o mănușă de cauciuc pentru a elibera exudatul rănii. Dacă există o cantitate mică de lichid limpede, acesta poate fi adăugat la o picătură de soluție de clorură de sodiu 0,85%. Dacă este imposibil să luați material din partea inferioară a șancrului (fimoză, cicatrizare a ulcerului etc.), se efectuează o puncție a ganglionilor limfatici regionali.Se aplică o picătură de lichid din ulcer sau punctat pe un pahar subțire. lamă (1,1-1,2 mm), acoperită cu o lamă și examinată în câmp vizual întunecat (mai frumos!), sau folosind un microscop cu contrast de fază sau anoptral Treponemul pal în câmp vizual întunecat are aspectul unui ușor strălucitor spirală subțire și delicată cu bucle primare abrupte, uniforme, rotunjite. Mișcările sunt line, așa că se îndoaie într-un unghi. Dar, în special caracteristice ale acestuia sunt oscilațiile de tip pendul. Agentul cauzal al sifilisului trebuie distins de Treponema refringens (care colonizează organele genitale externe), care este mai gros, mai aspru, cu bucle mari neuniforme și are mișcări active neregulate, dar nu se îndoaie. Treponemele simbiozei fusosp-irohetice se disting printr-un model subțire, bucle blânde și mișcare neregulată.La diagnosticarea sifilisului oral, treponemul palid trebuie diferențiat de treponemele dentare, în special T. dentium, precum și de T. buccalis. Primul dintre ele este, în general, dificil de distins de sifilitic. Este, totuși, mai scurt, are 4-8 bucle ascuțite și nu există o mișcare asemănătoare pendulului. T. buccalis este mai gros, are bucle inițiale aspre și mișcare neregulată.Dacă există vreo îndoială, trebuie avut în vedere că toate treponemele saprofite, spre deosebire de cea palid, sunt bine colorate cu coloranți anilină. Ele nu pătrund în ganglionii limfatici, deci studiul punctatelor are o mare valoare diagnostică. Identificarea treponemelor tipice în ganglionii limfatici punctați confirmă fără îndoială diagnosticul de sifilis.Deci, examinarea în câmp întunecat a picăturilor presate este cea mai bună metodă de identificare a agentului cauzal al sifilisului. Avantajele sale sunt că materialul este examinat rapid, iar morfologia treponemelor în stare de viață este cea mai caracteristică. Frotiurile de cerneală folosind metoda Burri nu mai sunt utilizate.Dacă este imposibil să se efectueze cercetări într-un câmp vizual întunecat, se pot folosi diverse metode de colorare. Treponema pallidum nu acceptă bine coloranții cu anilină. Dintre numeroasele metode de colorare propuse, cele mai bune rezultate se obțin atunci când se utilizează colorarea Romanoveki-Giemsa. Frotiurile preparate sunt fixate cu alcool metilic sau în amestecul lui Nikiforov. Rezultatele de claritate se obțin atunci când vopseaua Romanovsky-Giemsa este turnată în preparat. Pentru a face acest lucru, fragmente de chibrituri sunt plasate într-o cutie Petri, se pune o lamă de sticlă pe ele, se unge și se toarnă colorant până când udă frotiul. Timpul de vopsire este dublat. La microscopie, treponemele pal au o culoare roz moale, în timp ce alte tipuri de treponeame sunt vopsite în albastru sau albastru-violet.Puteți folosi și metoda de argint Morozov. Treponemele își păstrează complet caracteristicile morfologice și arată maro sau aproape negru la microscop. Dar preparatele placate cu argint nu se păstrează mult timp. Recent, metodele de colorare a treponemelor sunt rar utilizate.Dacă se începe tratamentul sifilisului cu chimioterapie, este practic imposibil să se identifice agentul patogen în materiale patologice chiar și cu ajutorul unui câmp vizual întunecat. Dacă se primește un test negativ, acesta trebuie repetat.

Diagnosticul serologic al sifilisului

La efectuarea reacțiilor serologice, se folosesc acum următoarele metode de cercetare, unificate în Ucraina: reacția de fixare a complementului (CFR), imunofluorescența (RIF), imobilizarea treponemală (PIT), reacția de microprecipitare (MPR) și testul imunosorbent enzimatic (ELISA). Timp de mulți ani, principala și cea mai comună reacție a fost reacția de fixare a complementului sau reacția Wassermann (RW). Pentru a-l efectua, utilizați serul de sânge al unui pacient cu sifilis și lichid cefalorahidian în caz de afectare a sistemului nervos.Tehnica de stadializare a reacției Wasserman nu diferă de tehnica de efectuare a RSC. Singura diferență este că pentru RO se utilizează nu numai antigenul specific treponemal, ci și antigenul cardiolipin nespecific.l Prelevarea a 5-10 ml de sânge din vena ulnară se efectuează pe stomacul gol sau nu mai devreme de 6 ore după masă. Nu trebuie să luați sânge de la pacientele cu febră, după ce au consumat alcool și alimente grase, de la femeile însărcinate cu 10 zile înainte de a da naștere și de la femeile aflate în travaliu. Serul extras din sânge este încălzit la o temperatură de 56 ° C timp de 30 de minute pentru a-și inactiva propriul complement. RO trebuie plasat cu doi antigeni: specifici si nespecifici.Antigenul treponemal ecografic specific este preparat din culturi de Treponema pallidum (tulpina Reiter) crescute in eprubete si expuse la ultrasunete. Este produs sub formă de pulbere liofilizată. Antigenul cardiolipin nespecific se prepară prin extracția alcoolică a lipidelor din inima de bovină și purificarea din amestecuri de balast, ambalate în fiole de 2 ml. Pentru a introduce antigenul în PO, acesta este titrat conform acestor instrucțiuni. Imediat înainte de stadializarea RV, titrarea complementului și a serului hemolitic se efectuează conform aceleiași scheme ca în RSC. Reacția Wasserman este realizată folosind atât metode calitative, cât și cantitative. O reacție calitativă este efectuată în trei eprubete cu două antigene conform schemei obișnuite.Rezultatele reacției sunt evaluate conform sistemului 4 plus: reacție pozitivă - atunci când există o întârziere completă sau semnificativă a hemolizei (4 +, 3 +); reacție slab pozitivă - întârziere parțială a hemolizei (2 +); reacție discutabilă - ușoară întârziere a hemolizei (1 +). În cazul hemolizei complete, RO este considerat negativ.Fiecare ser care a dat o reacție calitativă pozitivă trebuie examinat folosind o metodă cantitativă cu diluția sa în serie de la 1:10 la 1:640. Titrul serului de testat (titru de reagină). ) este considerată a fi diluția sa maximă, la care provoacă o întârziere completă (4 +) sau semnificativă (3 +) a hemolizei. Metoda cantitativă de stadializare a RO este importantă pentru aprecierea eficacității tratamentului sifilisului. O scădere rapidă a titrului de reagină indică o terapie de succes. Dacă titrul seric nu scade mult timp, aceasta indică o lipsă de eficacitate a medicamentelor utilizate și necesitatea schimbării tacticii de tratament.În caz de piloză pentru sifilis primar seronegativ sau latent, terțiar sau congenital, se recomandă efectuarea testul Wasserman la frig după aceeași schemă. Dacă se suspectează neurosifilis, RO se efectuează cu lichid cefalorahidian, care este inactivat deoarece nu conține propriul complement. Lichiorul nediluat este introdus în reacție în diluții de 1: 2 și 1: 5. Reacția Wasserman devine pozitivă la 2-3 săptămâni după apariția șancrului. În sifilisul secundar, este pozitiv în 100% din cazuri, în sifilisul terțiar - în 75. În plus, în complexul de reacții serologice (CSR), se folosește ca test de screening o reacție de microprecipitare cu plasmă sanguină sau ser inactivat.

Microreacția de precipitare

Microreacția de precipitare se realizează cu antigenul cardiolipin. Principiul reacției este că atunci când în plasma sau serul unui pacient cu sifilis se adaugă o emulsie de antigen cardiolipin, se formează un precipitat (complex antigen-anticorp), care precipită sub formă de fulgi albi. Se folosește următoarea tehnică: se pipetează trei picături de plasmă (sau ser inactivat) în godeul plăcii, apoi se adaugă o picătură de emulsie standard de antigen cardiolipin. Componentele de reacție se amestecă prin agitarea plăcii timp de 5 minute, după care se adaugă trei picături de soluție de clorură de sodiu 0,9% și se lasă la temperatura camerei pentru încă 5 minute. Control obligatoriu cu ser de sânge slab pozitiv. Rezultatele sunt evaluate cu ochiul liber pe o sursă de lumină artificială. Când apar fulgi mari în gaură, reacția este considerată pozitivă (4 +, 3 +), fulgi medii și mici sunt considerați slab pozitivi (2 +, 1 +). Dacă rezultatul este negativ, nu se formează nici un precipitat.Microreacția de precipitare poate fi, de asemenea, efectuată folosind o metodă cantitativă pentru a stabili titrul anticorpilor de precipitare și a evalua eficacitatea tratamentului pe această bază. Titruri MRP mai mari se obțin cu plasmă decât cu ser. În străinătate, analogul MRP cu serul pacientului este VDRL (laborator general de cercetare a bolii), iar cu plasmă - RPR (Rapid plasma reagin).

Reacția de imunofluorescență (RIF)

Grupul de reacții specifice care sunt utilizate pe scară largă pentru diagnosticul serologic al sifilisului include reacția indirectă de imunofluorescență. Ca antigen, folosește o suspensie de tulpina patogenă de Treponema palid Nichols din parenchimul testiculelor de iepure în a 7-a zi după infecție. Reacția este efectuată în două modificări: RIF-ABS și RIF-200. În prima opțiune, se folosește un sorbent de anticorpi (sonicat) - antigen treponemic ultrasonic pentru CSC. Este produs de întreprinderea Kaunas pentru producerea preparatelor bacteriene (Lituania). Cu optiunea RIF-200 serul pacientului este diluat de 200 de ori pentru a elimina influenta anticorpilor antitreponemici de grup RIF-ABS se realizeaza pe lame de sticla subtiri, bine degresate. Pe spatele paharului, un tăietor de sticlă marchează 10 cercuri cu diametrul de 0,7 cm.În interiorul cercului, pe sticlă se aplică un antigen - o suspensie de treponem palid - într-o asemenea cantitate încât să fie 50-60 dintre ele. în câmpul vizual. Frotiurile se usucă la aer, se fixează pe flacără și în acetonă timp de 10 minute. Adăugați 0,2 ml de sorbent (sonicat) și 0,5 ml de ser sanguin al pacientului într-o eprubetă separată și amestecați bine. Amestecul se aplică pe frotiu (antigen) astfel încât să se acopere uniform și se păstrează timp de 30 de minute într-o cameră umedă la 3–7 ° C (reacție de fază II). După aceasta, frotiul se spală cu tampon fosfat, se usucă și se aplică ser fluorescent anti-shobulin timp de 30 de minute, plasat într-o cameră umedă la 37 ° C (faza II). Preparatul se spală din nou cu tampon fosfat, se usucă și se examinează la microscop fluorescent.Cu o reacție pozitivă, treponemul palid emit o lumină verde-aurie, cu o reacție negativă, nu strălucesc.Tehnica de instalare a RIF-200 este la fel ca RIF-ABS, doar serul sanguin al pacientului este pre-diluat de 200 de ori cu tampon fosfat. Când se efectuează o reacție de imunofluorescență cu lichidul cefalorahidian al unui pacient cu sifilis al sistemului nervos, se utilizează RIF-c și RIF-10, adică Lichiorul este introdus în reacție neinactivat și diluat, sau diluat 1:10.

Reacția de imobilizare a Treponema pallidum (PIT)

Reacția de imobilizare a treponemului palid (PIT) se bazează pe fenomenul de pierdere a mobilității acestora în prezența anticorpilor antitreponemici imobilizatori din serul și complementul pacientului în condiții de anaerobioză. O suspensie de treponem palid din țesutul testicular al unui iepure infectat cu tulpina de laborator Nichols este utilizată ca antigen în reacție. Suspensia se diluează cu o soluție sterilă de clorură de sodiu 0,85%, astfel încât în ​​câmpul vizual să fie 10-15 spirochete.Pentru a efectua reacția, se utilizează 0,05 ml de ser sanguin al pacientului, 0,35 ml de antigen și 0,15 ml de complement. amestecat într-o eprubetă sterilă. Experimentul este însoțit de controale ser, antigen și complement. Eprubetele sunt plasate într-un anerostat, se creează condiții anatomice și se păstrează într-un termostat timp de 18-20 ore la o temperatură de 35 ° C. Apoi se prepară picături presate din fiecare eprubetă, se numără cel puțin 25 de treponeme și câte dintre ele sunt mobile și se notează câte sunt notate. Procentul de imobilizare specifică a treponemului pallidum se calculează folosind formula: x = (A-B) / B * 100, unde X este procentul de imobilizare, A este numărul de treponeme mobile din tubul de control, B este numărul de treponeme mobile. treponem în eprubetă. Reacția este considerată pozitivă atunci când procentul de imobilizare este de 50 sau mai mult, slab pozitiv - de la 30 la 50, îndoielnic - de la 20 la 30 și negativ - de la 0 la 20. În laboratoarele practice se utilizează metoda mai simplă melanger PIT pentru M.M. Ovchinnikov. Condițiile experimentale anaerobe sunt create prin plasarea amestecului de reacție (ser, antigen, complement) într-un amestec, ambele capete sunt închise cu un inel de cauciuc. Tehnica melanger vă permite să faceți fără echipamente și aparate complexe pentru crearea anaerobiozei, dar dă rezultate care nu sunt obținute prin tehnica clasică de microanaerostat.Reacțiile de imobilizare a treponemului și imunofluorescența sunt considerate cele mai specifice în diagnosticul serologic al sifilisului. Și totuși, PIT, în ciuda specificității sale, nu este recomandat pentru utilizare în practica larg răspândită din cauza laboriosității implementării sale.

Testul imunosorbent legat de enzime (ELISA)

Testul imunosorbent enzimatic (ELISA) se efectuează atât cu antigenul cadriolipin (reacție nespecifică, de selecție), cât și cu antigenul treponemal (reacție specifică), ceea ce confirmă diagnosticul de sifilis Principiul metodei ELISA indirectă este că antigenul adsorbit pe fază solidă în godeurile tabletei se adaugă ser de testare. Dacă conține anticorpi împotriva treponemelor, se formează un complex antigen-anticorp (faza II). După spălarea anticorpilor nespecifici nelegați, în godeuri se adaugă ser antiglobulină conjugat cu o enzimă (cel mai adesea peroxidază de hrean). Conjugatul este atașat ferm de complexul antigen-anticorp (faza II).După spălarea conjugatului nelegat, se adaugă în godeuri substratul de colorare OPD - ortofenilendiamină (faza III). Reacția peroxidazei este oprită prin adăugarea de acid sulfuric. Pentru control se folosesc aceleasi probe cu seruri pozitive si evident negative.Rezultatele analizei se inregistreaza cu ajutorul unui fotometru care determina densitatea optica in mod dual-wave (492 nm si 620 nm). Pentru a configura o reacție cu anticorpi enzimatici, în plus față de un fotometru, aveți nevoie de pipete automate cu unul și opt canale cu vârf de polipropilenă și seturi corespunzătoare de sisteme de testare de diagnostic.Metoda ELISA este utilizată pe scară largă în diagnosticul serologic al sifilisului. Este la fel de eficient pentru depistarea bolii în perioada de incubație (1-2 săptămâni după infectare), cu manifestări clinice ale bolii și formelor sale latente. Foarte des, ELISA este folosit in examenele de screening ale populatiei, in special la statiile de transfuzie de sange.In practica de laborator se folosesc uneori si reactia de adeziune imuna (IAR) si reactia indirecta de hemaglutinare (IRHA). Primul dintre ele se bazează pe faptul că treponemele testiculare patogene ale tulpinii Nichols, atunci când sunt amestecate cu serul pacientului în prezența complementului și a globulelor roșii umane, aderă la suprafața globulelor roșii. RNGA este utilizat pe scară largă pentru diagnosticarea sifilisului datorită simplității sale metodologice. Devine pozitiv în trei săptămâni de la infecție. Un rezultat pozitiv de reacție rămâne ani de zile după recuperare. Un analog al acestei reacții în străinătate este TRHA (hemoaglutinarea Treponema pallidum).