N acetil l cisteina beneficiază și dăunează. Acetilcisteină - instrucțiuni complete
, zaharină , zaharoza , aromatizatoare .
Pe lângă substanța principală, fiecare pachet de pulbere conține aditiv aromatizant „Aromatic” Lămâie , lactoză monohidrat , .
Formular de eliberare
Medicamentul este disponibil sub formă de soluție pentru uz intern sau capsule. În plus, o astfel de formă de eliberare este cunoscută sub numele de tablete efervescente.
efect farmacologic
Mucolitic acțiune.
Farmacodinamica si farmacocinetica
Despre acetilcisteină Este important să știți ce este și care este mecanismul său de acțiune înainte de a utiliza medicamentul. Este un derivat aminoacid cisteină . Efectul medicamentului Acetilcisteină se datorează faptului că acesta grupare sulfhidril despica disulfură conexiuni acide mucopolizaharide din spută . Aceasta este ceea ce cauzează mucolitic acțiune. Mucoreglator activitatea depinde de secreția crescută de substanțe mai puțin vâscoase sialomucine de către celulele caliciforme . Pe celule epiteliale mucoasa bronșică, aderența bacteriană este redusă. Acest lucru se datorează scăderii vâscozității spută si promotii clearance-ul mucociliar .
Efectul dezinfectant al medicamentului se datorează acțiunii liberului sulfhidril grupul care influențează toxine electrofile oxidative , neutralizându-le.
Acest medicament protejează celulele de radicalii liberi atât prin interacțiune directă cu aceștia, cât și prin transport cisteină pentru sinteza .
Medicamentul se descompune rapid atunci când este utilizat intern. Dar el biodisponibilitate – aproximativ 10%. Gradul de legare la proteinele plasmatice este de 50%. Concentrația maximă se observă după 60-180 de minute. Substanța activă poate fi furnizată prin bariera placentară și se acumulează în lichidul amniotic. Timpul de înjumătățire este de 60 de minute. La – până la 8 ore.
Excretat în principal de rinichi ca inactivi. O parte este excretată neschimbată de către intestine. În plasmă se determină neschimbat și, de asemenea, ca metabolitul N-acetilcisteină , ester de cisteină Și N,N-diacetilcisteină .
Indicatii de utilizare
Medicamentul este utilizat pentru separarea dificilă spută , plămâni , cataral Și otita purulentă , îndepărtarea secrețiilor vâscoase din căile respiratorii după operații, precum și în cazul stărilor posttraumatice. În plus, printre mărturiile sale se numără boli pulmonare interstițiale , fibroză chistică , plămânii , otrăvire
Contraindicații
Acest remediu nu trebuie utilizat în timpul unei exacerbări, pulmonar , hipersensibilitate la drog hemoptizie , .
Efecte secundare
Medicamentul poate provoca reacții adverse, cum ar fi:
- eczemă, spasm bronșic ;
- greaţă, stomatita , vărsături, senzație de stomac plin;
În cazuri rare, sunt posibile tinitus, arsuri la locul injectării (dacă se utilizează o soluție), precum și o tuse reflexă. rinoree iar iritaţia locală a căilor respiratorii cu inhalare aplicarea.
Instrucțiuni de utilizare a acetilcisteinei (metodă și dozare)
Dozele sunt selectate în funcție de vârsta și natura bolii pacientului.
Instrucțiunile de utilizare a acetilcisteinei indică faptul că, pentru copiii de 2-6 ani, este de obicei indicată o doză zilnică de 100 mg de 3 ori sau 200 mg de 2 ori. Medicamentul este utilizat sub formă de granule solubile în apă. Și pentru copiii cu vârsta sub 2 ani, este prescrisă o doză zilnică de 2 ori 100 mg. La rândul lor, copiilor de 6-14 ani li se administrează 200 mg zilnic de 2 ori, în caz de fibroză chistică – 200 mg de 3 ori. Medicamentul poate fi luat sub formă de tablete efervescente, capsule sau granule.
Adulții iau 200 mg de medicament de 2-3 ori pe zi, sub orice formă posibilă de eliberare.
Pentru aerosoliterapie 20 ml dintr-o soluție 10% sunt pulverizate în dispozitive cu ultrasunete, iar 6 ml dintr-o soluție 10% sunt pulverizate în dispozitive cu supapă de distribuție. Inhalare faceți în fiecare zi timp de 15-20 de minute de 2-4 ori. Pentru afecțiunile acute, terapia durează 5-10 zile, pentru afecțiunile cronice – până la șase luni.
Cu puternic secretolitic acțiunea trebuie absorbită secret , precum și reducerea frecvenței de utilizare și dozare a medicamentului.
Supradozaj
În caz de supradozaj, medicamentul poate provoca greață, dureri abdominale și vărsături.
substanță-pulbere Reg. Nr.: FS-000013
Grupa clinica si farmacologica:
Forma de eliberare, compoziție și ambalare
substanţă -pudra.
50 kg - saci (1) - bidoane din carton.
Descrierea componentelor active ale medicamentului " Acetilcisteină»
efect farmacologic
Agent mucolitic. Subțiază mucusul, îi crește volumul, facilitează secreția și promovează expectorația. Acțiunea acetilcisteinei este asociată cu capacitatea grupărilor sale sulfhidril de a rupe legăturile disulfurice ale mucopolizaharidelor acide ale sputei, ceea ce duce la depolarizarea mucoproteinelor și la scăderea vâscozității mucusului. Rămâne activ în prezența sputei purulente.
Are efect antioxidant datorită prezenței unei grupe SH care poate interacționa cu și neutraliza toxinele oxidative electrofile. Acetilcisteina ajută la creșterea sintezei glutationului, care este un factor antioxidant important în protecția intracelulară și asigură menținerea activității funcționale și a integrității morfologice a celulei.
Indicatii
Boli și afecțiuni respiratorii însoțite de formarea sputei vâscoase și mucopurulente: bronșită acută și cronică, traheită datorată infecției bacteriene și/sau virale, pneumonie, bronșiectazie, astm bronșic, atelectazie prin blocarea bronhiilor cu un dop de mucus, sinuzită ( pentru a facilita trecerea secrețiilor), fibroza chistică (ca parte a terapiei combinate).
Îndepărtarea secrețiilor vâscoase din tractul respirator în condiții posttraumatice și postoperatorii.
Supradozaj cu paracetamol.
Regimul de dozare
Individual. Oral pentru adulți și copii peste 6 ani - 200 mg de 2-3 ori pe zi; copii cu vârsta cuprinsă între 2 și 6 ani - 200 mg de 2 ori / zi sau 100 mg de 3 ori / zi, până la 2 ani - 100 mg de 2 ori / zi.
IM pentru adulți - 300 mg 1 dată/zi, pentru copii - 150 mg 1 dată/zi.
Efect secundar
Din sistemul digestiv: rareori - arsuri la stomac, greață, vărsături, diaree, senzație de plenitudine în stomac.
Reactii alergice: rar - erupție cutanată, mâncărime, urticarie, bronhospasm.
Cu injecție intramusculară superficialăși în prezența unei sensibilități crescute, poate apărea o senzație de arsură ușoară și care trece rapid și, prin urmare, se recomandă injectarea medicamentului adânc în mușchi.
Pentru utilizare prin inhalare: posibilă tuse reflexă, iritație locală a căilor respiratorii; rar - stomatită, rinită.
Alții: rar - sângerări nazale, rar - tinitus.
Din parametrii de laborator: o scădere a timpului de protrombină este posibilă datorită administrării de doze mari de acetilcisteină (este necesară monitorizarea stării sistemului de coagulare a sângelui), modificări ale rezultatelor testului pentru determinarea cantitativă a salicilaților (test colorimetric) și test pentru determinarea cantitativă a cetonelor (testul nitroprusiatului de sodiu).
Contraindicații
Ulcer peptic al stomacului și duodenului în faza acută, hemoptizie, hemoragie pulmonară, sensibilitate crescută la acetilcisteină.
Sarcina și alăptarea
Nu au fost efectuate studii clinice adecvate și strict controlate privind siguranța acetilcisteinei în timpul sarcinii și alăptării.
În timpul sarcinii și alăptării, utilizarea acetilcisteinei este posibilă numai dacă beneficiul așteptat pentru mamă depășește riscul potențial pentru făt sau sugar.
Utilizați pentru disfuncția ficatului
Acetilcisteina trebuie utilizată cu prudență la pacienții cu boli hepatice.
Utilizați pentru insuficiență renală
Acetilcisteina trebuie utilizată cu prudență la pacienții cu boli de rinichi.
Aplicație pentru copii
Când se utilizează acetilcisteină la pacienții cu astm bronșic, este necesar să se asigure drenajul sputei. La nou-născuți, se utilizează numai din motive de sănătate în doză de 10 mg/kg sub stricta supraveghere a unui medic.
Oral pentru copii peste 6 ani - 200 mg de 2-3 ori pe zi; copii cu vârsta cuprinsă între 2 și 6 ani - 200 mg de 2 ori / zi sau 100 mg de 3 ori / zi, până la 2 ani - 100 mg de 2 ori / zi.
Instrucțiuni Speciale
Acetilcisteina este utilizată cu prudență la pacienții cu astm bronșic, boli ale ficatului, rinichilor și glandelor suprarenale. Când se utilizează acetilcisteină la pacienții cu astm bronșic, este necesar să se asigure drenajul sputei. La nou-născuți, se utilizează numai din motive de sănătate în doză de 10 mg/kg sub stricta supraveghere a unui medic.
Trebuie respectat un interval de 1-2 ore între administrarea de acetilcisteină și antibiotice.
Acetilcisteina reacționează cu unele materiale precum fierul, cuprul și cauciucul utilizate în dispozitivul de pulverizare. În locurile de posibil contact cu soluția de acetilcisteină, trebuie utilizate piese din următoarele materiale: sticlă, plastic, aluminiu, metal cromat, tantal, argint sterling sau oțel inoxidabil. După contact, argintul se poate păta, dar acest lucru nu afectează eficacitatea acetilcisteinei și nu dăunează pacientului.
Interacțiuni medicamentoase
Interacțiuni medicamentoase
Utilizarea simultană a acetilcisteinei cu antitusive poate crește stagnarea sputei din cauza suprimării reflexului de tuse.
Când sunt utilizate simultan cu antibiotice (inclusiv tetraciclină, ampicilină, amfotericină B), este posibilă interacțiunea acestora cu grupul tiol al acetilcisteinei.
Acetilcisteina reduce efectul hepatotoxic al paracetamolului.
Deținătorii brevetului RU 2549433:
Invenţia se referă la o metodă de tratare a unui mamifer cu endometrioză. Această metodă include administrarea orală pulsată sau intermitentă timp de 3-5 zile consecutive, urmată de o pauză de 2-4 zile sau timp de 1-3 zile consecutive, urmată de o pauză de 1-2 zile a unei compoziții farmaceutice care conține N-acetil-L-cisteină, într-o perioadă de cel puțin două luni. N-acetil-L-cisteina în această metodă se administrează într-o doză cuprinsă între 20 și 90 mg/kg/zi. Metoda revendicată oferă un efect mai semnificativ asupra simptomelor endometriozei în comparație cu administrarea zilnică tradițională de N-acetil-L-cisteină. 10 salariu f-ly, 7 ill., 2 mese, 3 pr.
DOMENIU AL INVENTIEI
Prezenta invenție se referă la o compoziție farmaceutică care conține N-acetil-L-cisteină utilă în tratamentul endometriozei și indicații asociate endometriozei.
Endometrioza reprezintă a treia cauză de spitalizare ginecologică în Statele Unite și afectează aproximativ 14 milioane de femei în Europa. Ratele de incidență utilizate pe scară largă pentru endometrioză includ 5-10% din toate femeile de vârstă reproductivă și 30-40% din toate femeile cu probleme de infertilitate. Este o boală caracterizată prin prezența țesutului în afara cavității uterine, care este histologic identic cu endometrul, adică membrana care căptușește interiorul uterului mamiferelor. Acest țesut poziționat anormal se dezvoltă în excrescențe sau leziuni (numite și implanturi sau noduli) care răspund la ciclul menstrual în același mod ca țesutul endometrial al uterului: în fiecare lună, țesutul crește, se descompune și se elimină. În timp ce sângele menstrual curge din uter, sângele și țesuturile vărsate din excrescențe endometriale nu au cum să iasă. Acest lucru duce la sângerare internă, ruperea vaselor de sânge și a țesuturilor din leziuni și inflamație cronică ulterioară.
Cele mai frecvente două simptome ale endometriozei sunt durerea și infertilitatea. Simptomele pot include: dismenoree, care este durere înainte sau după perioadele menstruale și durere în timpul sau după sex; dureri cronice pelvine sau inferioare ale spatelui și intestinului; perioade menstruale abundente sau pete și sângerări între menstruații; mișcări dureroase ale intestinului sau urinare dureroasă în timpul perioadelor menstruale; infertilitate.
Cauza endometriozei este în prezent necunoscută și au fost propuse mai multe teorii pentru a raționaliza migrarea ectopică și implantarea celulelor endometriale. Dovezile recente stabilesc o legătură între apariția endometriozei și starea alterată a țesutului de origine: endometrul eutopic. Domeniul este din ce în ce mai încrezător că migrarea necontrolată, implantarea și creșterea endometrioamelor apar din tulburări în celulele endometriale eutopice.
În prezent, nu există un tratament pentru endometrioză. Există multe opțiuni de tratament și modalități de a minimiza simptomele cauzate de această afecțiune. Cu excepția utilizării analgezicelor pentru tratamentul durerii, tratamentul endometriozei este asociat în principal cu suprimarea funcției ovariane în secreția de estrogen și, în consecință, tratamente hormonale la diverși subiecți, până la inducerea menopauzei în cele mai multe cazuri. cazuri severe. Chirurgia este utilizată pentru îndepărtarea endometrioamelor, aderențelor, implanturilor peritoneale și leziunilor profunde localizate în septul rectovaginal sau în alte locuri (de exemplu, vezică urinară, intestin) și pentru a calma durerea. Cu toate acestea, recidivele apar atât după tratamentul terapeutic, cât și după tratamentul chirurgical. Femeile tinere cu endometrioză se confruntă adesea cu decizii dificile cu privire la reproducerea lor viitoare. Tratamentele hormonale menite să suprime funcția ovariană sunt incompatibile cu sarcina.
N-acetil-L-cisteina (denumită în continuare NAC) este un medicament binecunoscut care a fost utilizat în principal ca agent mucolitic și în tratamentul intoxicației cu paracetamol. În ultimii ani, a fost, de asemenea, recunoscut ca având alte proprietăți benefice, cum ar fi efecte antiinflamatorii și anti-proliferative, și a fost propus pentru a trata o serie de tulburări și simptome diferite, cum ar fi schizofrenia, diabetul și cancerul.
Studiile anterioare care examinează mecanismele moleculare care stau la baza și asociate endometriozei au sugerat că ratele crescute de proliferare celulară în endometrioză pot fi induse de stresul oxidativ în țesutul endometriotic cauzat de radicalii liberi sau ROS (specii reactive de oxigen). Astfel, s-a sugerat că noile strategii terapeutice pentru endometrioză se pot baza pe antioxidanți și eliminatori de ROS, cum ar fi NAC.
FUNDAL ART
Charlotte Ngo și colab. a sugerat (The American Journal of Pathology (2009), Vol. 175, No. I, paginile 225-234) că stresul oxidativ poate induce sau spori proliferarea celulelor endometrioide în endometrioză. Prin urmare, antioxidanți precum NAC au fost propuși pentru tratamentul endometriozei. Studiile pe linii celulare primare de la pacienți cu endometrioză, precum și într-un model de șoarece implantat cu țesut endometrioid derivat din om, au arătat că NAC a abolit semnele de stres oxidativ, precum și creșterea proliferării în modelele respective. Astfel, s-a sugerat că antioxidanții precum NAC ar putea fi folosiți ca un tratament sigur și eficient pentru endometrioză.
Nastaran Foyouzi et al. a sugerat de asemenea (Fertility and Sterility (2004), Vol.82, Suppl. 3, paginile 1019-1022) că antioxidanții precum NAC pot fi utilizați pentru a trata endometrioza. Articolul descrie un studiu in vitro în care celulele izolate de la subiecți sănătoși, precum și pacienții cu endometrioză au fost tratați cu un alt antioxidant, cum ar fi NAC. Toți antioxidanții au inhibat proliferarea celulelor stromale endometriale.
În Yan Wo și Sun-Wei Guo (Gynecologic and Obstetric Investigation (2006), Vol.62, No. 4, pages 193-205; European Journal of Obstetrics & Gynecology and Reproductive Biology, (2008), Vol.137, pages 198 -203); cererea de brevet US 2007/0287676 A1) a examinat efectul NAC asupra proliferării și opririi ciclului celular în celulele stromale endometriale umane nemuritoare și a comparat cu alți agenți propuși pentru tratamentul endometriozei. S-a demonstrat că NAC are efecte atât asupra proliferării, cât și asupra stopării ciclului celular, deși nu la fel de pronunțat ca inhibitorii histon-deacetilazei.
Într-un studiu realizat de S. Estany et al. (Journal of reproductive Immunology (2007), Vol. 75, paginile 1-10) s-a demonstrat că activitatea antioxidantă a NAC și a altor agenți antioxidanti asupra celulelor endometriale din cultură a îmbunătățit viabilitatea celulelor oxidate prin prevenirea indusei de H 2 O 2 citotoxicitate celulară.
Alte tehnici anterioare înrudite includ US 2003/0190381 A1, WO 2004/096206 A2, US 6239137 B1, US 2003/0119875 A1, US 2004/0014672 A1 şi WO 2005/028.
Un alt stadiu al tehnicii care descrie acţiunea moleculară a NAC în tratamentul cancerului include T. Parasassi, et. al. (Cell Death and Differentiation (2005), Vol. 12, Nr. 10, paginile 1285-1296); E. K. Krasnowska et. al. (Free Radicals Biology and Medicine 2008, 45(11): 1566-72) și A.C. Gustafson et. al. (BMC Cancer (2005), 5:75).
OBIECTIVELE INVENŢIEI
Rezultatul clinic al tratamentului cu NAC pentru endometrioză, după cunoștințele inventatorilor, nu a fost determinat în stadiul tehnicii și nici nu a fost propus un regim de dozare eficient pentru tratamentul endometriozei sau utilizarea NAC pentru tratamentul indicațiilor asociate cu endometrioza.
Prin urmare, scopul principal al prezentei invenții este de a oferi o soluție la problema preparării unei compoziții farmaceutice care conține N-acetil-L-cisteină (NAC) pentru tratamentul endometriozei și indicațiilor asociate endometriozei la om și mamifere. Un aspect al acestui obiectiv este de a furniza o compoziție farmaceutică care conține N-acetil-L-cisteină (NAC) pentru utilizare într-un regim de dozare eficient pentru tratamentul endometriozei și simptomelor asociate endometriozei la mamifere, inclusiv la oameni.
REZUMATUL INVENŢIEI
S-a sugerat că NAC ar putea fi utilizat în noi strategii terapeutice pentru endometrioză bazate pe utilizarea sa ca antioxidant și captator de ROS. Arătăm aici că NAC induce modificări moleculare și celulare care nu numai că inhibă proliferarea, dar induce și diferențierea țesutului bolnav față de țesutul normal.
Aceste cunoștințe i-au determinat pe inventatorii prezenți să propună o nouă utilizare a NAC în tratamentul endometriozei și indicațiilor asociate cu endometrioza la un pacient uman sau mamifer. In afara de asta? a fost propusă o serie de doze eficiente de NAC în tratamentul endometriozei. Într-o variantă de realizare a prezentei invenții, regimul de tratament prescris poate fi utilizat, de exemplu, pentru a controla frecvența și intensitatea simptomelor dureroase (dismenoree, dispareunie și durere pelvină cronică aciclică), pentru a reduce dimensiunea leziunilor endometriotice în cele din urmă până când acestea dispar. , pentru a reduce recăderile după intervenție chirurgicală și/sau pentru a îmbunătăți fertilizarea. Practic nu există efecte secundare ale acestui tratament și, în special, acest tratament nu previne sarcina.
Prezenta invenție furnizează o compoziție farmaceutică care conține N-acetil-L-cisteină pentru utilizare în tratamentul unui mamifer, inclusiv al unui om, cu endometrioză, în care compoziția este pentru administrare orală pulsată sau intermitentă, pe o perioadă de două luni. sau mai mult, N-acetil-L-cisteină la o doză cuprinsă între 20 și 90 mg/kg/zi pe zi atunci când este administrată.
Într-o variantă de realizare a invenției, este furnizată o compoziție farmaceutică care conține N-acetil-L-cisteină pentru utilizarea de mai sus, în care compoziția este destinată a fi administrată timp de 3-5 zile consecutive, urmate de o pauză de 2-4 zile. Într-o altă variantă de realizare, compoziția farmaceutică care conține N-acetil-L-cisteină este destinată a fi administrată timp de 1-3 zile consecutive, urmate de 1-2 zile libere.
Într-o variantă de realizare a invenției este furnizată o compoziție farmaceutică care conține N-acetil-L-cisteină pentru utilizarea de mai sus, în care compoziția este destinată să administreze N-acetil-L-cisteină într-o doză de 30 până la 60 mg/kg/zi pe zi de administrare . Într-un alt exemplu de realizare, compoziția farmaceutică este destinată să administreze N-acetil-L-cisteină la o doză de 30 până la 45 mg/kg/zi pe zi de administrare.
Într-o variantă de realizare a invenției, o compoziție farmaceutică care conține N-acetil-L-cisteină este furnizată pentru utilizare așa cum este descris mai sus, în care compoziția farmaceutică este protejată de lumină. Într-un alt exemplu de realizare, compoziţia farmaceutică este o tabletă solubilă în apă. Într-un alt exemplu de realizare, compoziţia farmaceutică conţine bicarbonat de sodiu. Într-o variantă de realizare, compoziţia farmaceutică este un medicament cu eliberare lentă şi/sau un medicament protector gastric.
Într-o variantă de realizare a invenției, este furnizată o compoziție farmaceutică care conține N-acetil-L-cisteină pentru utilizare în tratamentul durerii cauzate de endometrioză. Într-un alt exemplu de realizare, compoziţia farmaceutică este pentru utilizare în tratamentul infertilităţii cauzate de endometrioză. Într-un alt exemplu de realizare, compoziţia farmaceutică este pentru utilizare în pretratarea mamiferelor cu endometrioză înainte de laparoscopie sau intervenţie chirurgicală. Într-o variantă de realizare, compoziţia farmaceutică este pentru utilizare în tratamentul mamiferelor cu endometrioză, după laparoscopie sau intervenţie chirurgicală, pentru a preveni recidivele.
Într-un aspect al invenției, este furnizată o metodă de tratare a unui mamifer cu endometrioză, cuprinzând administrarea orală la respectivul mamifer a unei compoziții farmaceutice care cuprinde N-acetil-L-cisteină într-un regim de dozare pulsat sau intermitent pe o perioadă de două. luni sau mai mult, N-acetil-L-cisteină la o doză care variază de la 20 până la 90 mg/kg/zi pe zi atunci când este administrată. Într-o variantă de realizare a metodei, compoziţia farmaceutică este administrată timp de 3-5 zile consecutive urmate de o pauză de 2-4 zile. Într-un alt exemplu de realizare, compoziţia farmaceutică este administrată timp de 1-3 zile consecutive, urmată de o pauză de 1-2 zile.
Într-o variantă de realizare a metodei, doza de N-acetil-L-cisteină este de la 30 la 60 mg/kg/zi pe zi de administrare. Într-o altă variantă de realizare a metodei, doza de N-acetil-L-cisteină este de la 30 la 45 mg/kg/zi pe zi de administrare.
Într-o variantă de realizare, metoda este pentru tratarea durerii cauzate de endometrioză. în alte exemple de realizare, metoda este pentru tratamentul infertilității cauzate de endometrioză, pentru pretratarea mamiferelor cu endometrioză înainte de laparoscopie sau intervenție chirurgicală, sau pentru tratamentul după laparoscopie sau intervenție chirurgicală, pentru a preveni reapariția leziunilor endometriotice.
SCURTĂ DESCRIERE A MATERIALELOR GRAFICE
Prezenta invenție va fi explicată mai detaliat în următoarea descriere, cu referire la desenele însoțitoare, în care:
Figura 1 prezintă efectul inhibitor al NAC asupra creșterii leziunilor endometriotice la șoareci, așa cum s-a demonstrat în Exemplul 1. Greutatea totală medie a animalelor martor (n=10) și tratate cu NAC (n=10), la 21 de zile după implantare, cu eroare standard . Semnificație p<0,05. Во вставках над гистограммами воспроизведены типичные картины эндометриом для контроля (А) и обработки NAC (В). Полоска: 1 см;
Figura 2A prezintă geluri reprezentative RT-PCR (reacție în lanț a polimerazei în timp real) semicantitative, așa cum este demonstrat în exemplul 1. Figura 2B prezintă expresia redusă a COX-2 și MMP-9 în chisturile șoarecilor tratați cu NAC, așa cum este demonstrat în exemplu. 1. Valori RT-PCR semi-cantitative mediate pentru 5 șoareci martor și 5 tratați cu NAC cu eroare standard;
Figura 3 prezintă mișcarea E-caderinei în chisturile șoarecilor tratați cu NAC, așa cum s-a demonstrat în exemplul 1. Imagini reprezentative ale imunocolorării E-cadherinei în endometrioame de la șoareci martor (A și B) și tratați cu NAC (C și D). În probele de control, colorarea maronie difuză poate fi observată în întreaga citoplasmă a celulelor epiteliale, în timp ce în probele tratate cu NAC această colorare este în mod clar limitată la nivelul contactelor celulă-celulă. Mărire originală 40x;
Figura 4 prezintă colorarea Cox-2 atenuată în chisturile animalelor tratate cu NAC, așa cum este demonstrat în Exemplul 1. Imagini reprezentative ale colorării imunohistochimice a chisturilor de la șoarecii martor (A-C) și de la șoarecii tratați cu NAC (D-F). Probele de control au arătat o prezență vizibilă a colorației maronii în mai multe zone, în timp ce abia a putut fi detectată în probele tratate cu NAC. Mărire originală 40x;
Figura 5 prezintă colorarea Ki-67 atenuată în chisturile animalelor tratate cu NAC, așa cum s-a demonstrat în Exemplul 1. Imagini reprezentative ale colorării imunohistochimice a chisturilor de la șoarecii martor (A-C) și șoarecii tratați cu NAC (D-F). Săgețile indică celulele colorate, în proliferare. Mărire originală 40x;
Figura 6 este o reprezentare schematică a stadiului tehnicii care demonstrează mai multe mecanisme în lucru atunci când celulele în proliferare, după cum este exemplificat de celulele canceroase, sunt tratate cu NAC. Aceste mecanisme se reduc la diferențierea terminală a celulelor. Exemplele de aici arată, de asemenea, că cel puţin unele dintre aceste efecte apar, de asemenea, atunci când NAC din prezenta invenţie este utilizat pentru a trata endometrioza;
Figura 7 prezintă rezultatele unui studiu clinic preliminar efectuat pe un total de 64 de femei, 33 tratate cu NAC și 31 martori netratate. Modificarea dimensiunii chistului după trei luni de tratament NAC a fost măsurată prin ultrasunete ca diametru maxim. Figura 7A arată modificarea mărimii chistului în numere absolute la pacienții tratați și la controale. Figura 7B arată aceeași comparație ca o modificare procentuală.
DESCRIEREA DETALIATĂ A INVENŢIEI
NAC în general
N-acetil-L-cisteina (NAC) este un cunoscut medicament farmaceutic cu moleculă mică cu formula chimică
Proprietățile NAC sunt în principal legate de grupul său tiol, ceea ce îl face eficient în majoritatea căilor biochimice care implică glutationul tripeptidic (GSH), prezent în toate țesuturile umane în concentrații relativ mari, chiar și peste 10 mM. Cisteina este într-adevăr printre cei trei aminoacizi care conțin GSH, așa că NAC este considerat un precursor al GSH cu cisteina sa deacetilata. NAC a fost și continuă să fie utilizat pe scară largă ca agent mucolitic, în care modul de acțiune se referă în general la întreruperea redox a punților sensibile de disulfură de cisteină din proteinele mucusului. De fapt, NAC este implicat într-un ciclu redox complex al grupărilor tiol, în care acționează mai multe enzime. Într-adevăr, de o importanță fiziologică excepțională este ciclul disulfurei, un mecanism general prin care activitatea proteinelor și semnalizarea celulară sunt reglate. Enzimele cum ar fi protein tirozin fosfatazele și tirozin kinazele, de exemplu, joacă roluri cheie în controlul ciclului celular, proliferarea și diferențierea celulară, iar multe dintre ele sunt reglate de starea redox a cisteinelor lor.
În general, deși mecanismele detaliate de acțiune nu au fost pe deplin elucidate, NAC pare să acționeze pe toate căile biochimice în care este implicat GSH. Enzimele și proteinele a căror activitate este modulată de GSH acționează în mai multe procese, fie direct, fie printr-o rețea de căi de transducție a semnalului. În această situație, NAC poate acționa în mod similar cu GSH sau poate fi chiar mai eficient decât GSH.
GSH, de exemplu, formează de obicei conjugați cu metaboliți reactivi formați de paracetamol și promovează detoxifierea acestora. Cu toate acestea, atunci când se ia prea mult paracetamol, GSH devine epuizat și metaboliții paracetamolului încep să interacționeze cu proteinele celulare, ducând în cele din urmă la moartea celulei. În tratamentul insuficienței hepatice fulminante după otrăvirea cu paracetamol, NAC acționează în locul GSH în detoxifierea metaboliților paracetamolului. Se crede că NAC nu are practic efecte secundare nedorite, așa cum este indicat și de dozele mari de NAC utilizate în tratamentul intoxicației cu paracetamol - probabil aproximativ 40 g/zi pentru un pacient de 70 kg.
Spre deosebire de tripeptida GSH, care poate fi descompusă în stomac, molecula simplă de NAC difuzează liber în aproape toate țesuturile și celulele. Studiile farmacocinetice ale NAC au identificat concentrații plasmatice maxime atinse în aproximativ o oră, cu un timp de înjumătățire de aproximativ trei ore. Clearance-ul complet are loc între șase și douăsprezece ore.
NAC ca agent antiproliferativ, de diferențiere
Am descoperit recent că N-acetil-L-cisteina (NAC) are un efect antiproliferativ marcat asupra celulelor canceroase de origine epitelială - aceeași origine ca și celulele endometriale (Cell Death and Differentiation 2005, 12(10): 1285-1296) . Deși cancerul și endometrioza sunt predominant boli care nu au legătură, ele împărtășesc unele proprietăți comune care, în cele din urmă, i-au condus pe inventatori la ideea că NAC ar putea fi, de asemenea, util în tratamentul endometriozei. În special, endometrioza, la fel ca și cancerul, este o boală proliferativă, deși cu un mecanism molecular și o etiologie diferite necunoscute. Observațiile obținute pentru cancer vor fi prezentate în această specificație ca fundal pentru efectele NAC și ca mod probabil de acțiune și în endometrioză.
NAC a fost utilizat pentru a opri proliferarea și a induce diferențierea în două linii celulare de adenocarcinom și în celulele cheratinocite normale primare, toate celulele de origine epitelială. În aceste sisteme, diferențierea a fost caracterizată morfologic, biochimic și prin analiza expresiei genelor (analiza expresiei genelor este acoperită pe larg în BMC Cancer 2005, 5: 75).
Într-un studiu asupra cancerului, efectul antiproliferativ al NAC nu a fost asociat cu moartea celulară sau toxicitatea, ci a fost în schimb o consecință a activării căii de diferențiere fiziologică, care poate fi privită ca normalizare a funcțiilor celulare în raport cu țesutul de origine.
Pe lângă proliferarea redusă, morfologia celulelor canceroase tratate cu NAC a fost, de asemenea, modificată. In vitro, celulele epiteliale atunci când proliferează activ prezintă o morfologie neregulată - morfologie mezenchimală - și formează adesea mai multe straturi multicelulare. În schimb, atunci când celulele sunt supuse procesului de diferențiere către structura și funcția țesutului țintă final, ele opresc proliferarea, morfologia lor devine poligonală regulată, fiecare celulă este uneori mai groasă și formează un monostrat de celule adiacente. Acest proces este însoțit de conexiuni crescute celulă-celulă și celulă-substrat, în concordanță cu o trecere de la un mezenchimal proliferativ la un fenotip adeziv, mai puțin mobil și diferențiat.
În general, au fost detectate o serie complexă de modificări metabolice după adăugarea de NAC la celulele canceroase, toate acestea au dus la oprirea proliferării necontrolate și la inducerea diferențierii terminale, așa cum este prezentat în diagrama prezentată în Figura 6.
În special, tratamentul cu NAC a indus o creștere semnificativă a complexelor de adeziune celulă-celulă și celulă-substrat.Proliferarea necontrolată poate fi atribuită unei stări în care celulele și-au pierdut inhibarea contactului și capacitatea lor de a răspunde la semnalele de diferențiere. Celulele care intră în calea de diferențiere prezintă o creștere marcată a complexelor de joncțiune celulă-celulă, iar acest proces este, de asemenea, denumit inhibarea contactului. Unele dovezi sugerează că semnalele pentru ca celulele să intre în punctul final de diferențiere sunt generate de componentele complexelor intercelulare înșiși. Aceste conexiuni sunt, de asemenea, o cale de răspândire a semnalelor între celule.
Celulele migratoare, precum celulele endometriale din endometrioză, trebuie, pe lângă un număr redus de complexe de adeziune, să aibă și să secrete cantități suficiente de metaloproteinaze ale matricei active, enzime menite să degradeze matricea extracelulară, pentru a permite migrarea prin matricea extracelulară. în acest model de cancere epiteliale, s-a descoperit că NAC inhibă această enzimă, sugerând că migrarea celulelor a fost întârziată. De asemenea, Exemplul 1 al acestei dezvăluiri arată că NAC, atunci când este utilizat conform prezentei invenţii pentru tratamentul endometriozei, suprimă expresia metaloproteinazei matriceale 9 (MMP-9). Acest lucru sugerează că NAC poate inhiba migrarea celulelor atât de la endometrul eutopic la implanturi noi (prevenirea recidivei), cât și în țesutul endometriotic (prevenirea leziunilor ulterioare).
Efectul cunoscut al NAC se referă și la efectul său antiinflamator, motivul adăugării sale la familia de medicamente antiinflamatoare nesteroidiene (AINS). Profilul de expresie genică a celulelor tratate cu NAC a arătat o suprimare a ciclooxigenazei-2 (COX-2), a cărei inducție genică este asociată cu răspunsuri inflamatorii. De asemenea, acest efect al NAC a fost confirmat în țesutul endometrioid în Exemplul 1 de aici, sugerând că NAC poate reduce, de asemenea, simptomele asociate cu inflamația în endometrioză.
Ca exemplu al capacității NAC de a modula transducția semnalului în celule prin statutul redox al cisteinelor sensibile, enzima non-receptor tirozin kinază c-Src a fost studiată într-un model in vitro de celule de carcinom de colon (CaCo-2) și ovarian. celule de carcinom (OVCAR-3) (Free Radicals Biology and Medicine 2008, 45(11): 1566-72). c-Src este implicat în comutatorul de proliferare/diferențiere și este activ în asamblarea/dezasamblarea complexelor asociate și organizarea citoscheletică. Această kinază este activată și supraexprimată într-un număr de cancere umane, în special în carcinomul de colon și ovarian. Eforturile internaționale notabile de dezvoltare a medicamentelor sunt într-adevăr direcționate către căutarea unor inhibitori specifici de c-Src. În schimb, s-a descoperit că prin simpla tratare a celulelor de adenocarcinom cu NAC, scopul de a suprima c-Src ar putea fi atins printr-un mecanism legat de tranzițiile redox la reziduurile sensibile de cisteină din c-Src, capabil să dezactiveze această kinază, eliberând. este în endolizozomi, unde este stocat sau distrus. Astfel, diferențierea terminală indusă de NAC în celulele de adenocarcinom a fost asociată cu suprimarea c-Src. Este de remarcat faptul că activitatea acestei kinaze pare a fi importantă în timpul fazei deciduale a ciclului celular endometrial, sugerând astfel implicarea dereglării acesteia în endometrioză (Endocrine Journal, 2008, 55(5): 795-810).
NAC și endometrioza
După cum s-a explicat în secțiunea anterioară, s-a sugerat anterior că NAC ar putea fi utilizat în noi strategii terapeutice pentru endometrioză bazate pe utilizarea sa ca antioxidant și captator de ROS. În studiile despre cancerul epitelial descrise mai sus, inventatorii de față au descoperit că NAC a avut unele efecte benefice, altele decât cele ale unui antioxidant și captator de ROS, asupra celulelor canceroase epiteliale și că astfel de efecte ar putea fi utile și în tratamentul celulelor endometrioide, în dacă celulele endometrioide răspund în mod similar. În special, era de așteptat ca efectele antiproliferative și de diferențiere ale NAC găsite în cancer să apară și atunci când NAC este utilizat în tratamentul endometriozei.
Se credea că dacă NAC avea următoarele efecte moleculare observate în cancer și asupra țesutului endometrioid, ar putea fi util în tratamentul endometriozei;
1) o creștere a conexiunilor celulă-celulă și celulă-substrat în conformitate cu o trecere de la un fenotip proliferativ la unul diferențiat;
2) o scădere a expresiei metaloproteinazelor matriceale asociată cu o scădere a migrației celulare;
3) scăderea expresiei ciclooxigenazei-2 (COX-2), asociată cu un răspuns inflamator redus;
4) modularea activității c-Src pentru a regla ciclul de proliferare/decidualizare endometrială și pentru a asigura o posibilă sarcină.
Prin urmare, sa emis ipoteza că NAC poate avea următoarele efecte fiziologice în endometrioză:
1) reducerea proliferării celulelor endometriale;
2) reducerea inflamației cronice locale și astfel ameliorarea durerii asociate;
3) normalizarea țesutului sursă, endometrul eutopic, printr-un ciclu de proliferare-diferențiere mai regulat;
4) scăderea numărului de celule endometriale ectopice asociate cu scăderea motilității celulare datorită atât scăderii metaloproteinazelor tisulare, cât și scăderii joncțiunilor celulă-celulă și celulă-substrat;
5) reorganizarea conformației receptorului de estrogen prin reasamblarea punților disulfurice la reziduurile relevante de cisteină.
În general, toate rezultatele propuse au fost confirmate fie direct, fie indirect prin răspunsul pacienților în studiul clinic și prin analiza histologică a biopsiilor acestora sau, la modelul animal, la nivel de morfologie, histologie, biochimie și biologie moleculară.
Mai exact, am descoperit că NAC a redus de fapt expresia ciclooxigenazei-2 (COX-2) și a metaloproteinazei matriceale 9 (MMP-9) în țesutul endometrioid. Ei demonstrează, de asemenea, că NAC induce relocalizarea E-caderinei din citoplasmă în țesutul endometriotic la joncțiunile celulă-celulă în țesutul tratat cu NAC. Acest lucru indică o creștere a conexiunilor intercelulare, ceea ce este în concordanță cu o scădere a proliferării celulare. Într-adevăr, alte efecte cum ar fi creșterea expresiei p21 și scăderea expresiei Ki-67 indică, de asemenea, că tratamentul cu NAC în endometrioză are ca rezultat scăderea proliferării celulare. De asemenea, demonstrăm că aceste efecte moleculare ale tratamentului NAC al endometriozei au ca rezultat o reducere a dimensiunii leziunilor endometriotice, ameliorarea durerii și sarcina dorită. Un avantaj atunci când se utilizează NAC pentru tratarea endometriozei sau a indicațiilor legate de endometrioză este că nu necesită utilizarea tratamentelor hormonale utilizate în mod obișnuit pentru endometrioză, care suprimă funcția ovariană. Utilizarea NAC crește astfel comparativ probabilitatea ca aceste paciente să rămână gravide. Tratamentul cu NAC înainte de operație a dus, de asemenea, la endometrioame mai regulate și compacte, care au fost mai ușor de îndepărtat și au cauzat foarte puține sângerări în timpul laparoscopiei.
Schema de receptie
Dintr-un studiu al tratamentului cu NAC în liniile celulare de adenocarcinom și celulele cheratinocite normale primare (Cell Death and Differentiation 2005, 12(10): 1285-1296), sa concluzionat că doza eficientă de NAC pentru a induce un efect de diferențiere antiproliferativ a variat și depindea de tipul celulei. Astfel, originea țesutului dictează că trebuie determinată pentru fiecare țesut concentrația efectivă de NAC care este necesară pentru ca blocarea completă a proliferării să fie observată. În plus, doza de NAC a fost, de asemenea, corelată cu malignitatea celulară. În detaliu, în timp ce celulele normale au necesitat o doză mică pentru a opri proliferarea și a iniția diferențierea, celulele carcinomului cu un prognostic caracteristic caracteristic au necesitat o concentrație mai mare de NAC.
În scopul prezentei invenții, a fost dezvoltat un regim de dozare NAC pentru tratamentul endometriozei la un mamifer, inclusiv un om, pe baza următoarelor criterii:
1) o doză de NAC pe zi care este în concordanță cu alte tratamente clinice curente și se consideră că nu are efecte secundare nedorite;
2) o doză care este considerată suficient de mare pentru a îndeplini cerința celulelor care proliferează anormal pentru a le pune pe calea diferențierii;
3) având în vedere scăderea raportată a nivelurilor plasmatice de NAC după un tratament prelungit (Pendyala L, Creaven PJ. Cancer Epidemiol Biomarkers Prev. 1995; 4:245-51), o întrerupere a tratamentului pentru aproximativ jumătate din fiecare săptămână a fost considerată răspunsul biologic optim. la tratament timp de două luni sau mai mult.
O compoziţie a prezentei invenţii care conţine NAC pentru tratamentul endometriozei sau indicaţiilor asociate cu endometrioza, conform unui exemplu de realizare, trebuie administrată la o doză de la aproximativ 20 până la 90 mg/kg/zi. Limita inferioară se bazează pe dublul dozei utilizate pentru acțiunea mucolitică, adică se știe că are un efect fiziologic în sine. Limita superioară se bazează pe considerația că dozele mai mari s-au dovedit a cauza probleme de stomac la mulți pacienți. Într-un alt exemplu de realizare a prezentei invenţii, compoziţia conţine NAC pentru administrare la o doză de aproximativ 30-60 mg/kg/zi. Limita inferioară s-a dovedit a fi eficientă pentru endometrioză, iar limita superioară este cunoscută că practic nu are efecte secundare. Într-o altă variantă de realizare a prezentei invenţii, compoziţia conţine NAC pentru administrare la o doză de aproximativ 30-45 mg/kg/zi. În mod surprinzător, această doză mică s-a dovedit a fi eficientă pentru endometrioză.
Într-o variantă de realizare, compoziţia trebuie administrată pe o perioadă de timp care este de două luni sau mai mult, sau de preferinţă trei luni sau mai mult. Pentru a preveni o scădere a nivelurilor plasmatice de NAC după un tratament pe termen lung, NAC la doza prescrisă poate fi administrată într-o manieră intermitentă, adică în conformitate cu un regim de dozare/tratament intermitent. Administrare sau tratament intermitent înseamnă că tratamentul este întrerupt pentru perioade, adică că compoziția farmaceutică este administrată pentru o perioadă de timp, de exemplu câteva zile, urmată de o pauză în administrare, în care compoziția farmaceutică nu este administrată pentru o perioadă. de timp, de exemplu pentru câteva zile. Tratamentul intermitent poate fi regulat, cum ar fi tratamentul pentru un număr fix de zile sau săptămâni, urmat de o pauză pentru un număr fix de zile sau săptămâni. Exemplele includ regimuri repetate de 4 zile de tratament urmate de 3 zile libere în fiecare săptămână sau 2 săptămâni de tratament urmate de 1 săptămână de pauză. Un caz special de tratament intermitent obișnuit este tratamentul cu puls, adică tratamentul regulat și durata pauzei, de exemplu, administrarea la fiecare două zile sau administrarea timp de două zile urmată de o pauză de două zile și așa mai departe. De asemenea, sunt posibile regimurile de tratament intermitent neregulat care se repetă neregulat sau au un regim mai complex care se repetă, de exemplu, în funcție de răspunsul la tratament. în diferite exemple de realizare ilustrative ale prezentei invenţii, doza prescrisă de NAC este administrată timp de 3-5 zile consecutive urmate de 2-4 zile libere, sau administrată timp de 1-3 zile consecutive urmate de 1-2 zile libere.
Într-o variantă de realizare, cu referire la o greutate corporală de aproximativ 60 kg, doza de NAC este în intervalul de la 1,2 până la 5,4 g/zi, de preferinţă 1,8 până la 3,6 g/zi. Această doză poate fi împărțită în două sau mai multe, de preferință trei sau patru, administrări zilnice, fie una, fie două doze (de exemplu, pastile) fiecare, în care fiecare doză poate conține, de exemplu, 0,15-2,7 g NAC sau de preferință 0,6- 1,2 g NAC. Tratamentul implică administrarea dozelor de mai sus pulsat sau intermitent, de exemplu la fiecare două zile sau timp de trei până la patru zile consecutive în fiecare săptămână, cu o pauză de patru până la trei zile, respectiv. Durata totală minimă a tratamentului este de două luni, fără o durată maximă. Pentru pacienții cu alte greutăți, de exemplu subiecții cu greutăți mai mari sau mai mici decât cele indicate, doza zilnică trebuie ajustată corespunzător.
Într-o variantă de realizare a prezentei invenții, o compoziție farmaceutică pentru tratamentul endometriozei sau simptomelor asociate endometriozei cuprinde NAC la o doză de 150-5400 mg pentru administrare în două sau mai multe administrări pe zi pentru o perioadă de cel puțin 2 luni, cum ar fi ca cel putin 3 luni. Într-un exemplu de realizare preferat al prezentei invenţii, compoziţia farmaceutică conţine NAC la o doză de 230-3600 mg pentru administrare în două sau mai multe administrări pe zi pe o perioadă de cel puţin 2 luni, cum ar fi cel puţin 3 luni. Tratamentul include administrarea dozelor de mai sus pulsat sau intermitent, de exemplu la fiecare a doua zi sau timp de trei până la patru zile consecutive în fiecare săptămână, cu o pauză de patru până la trei zile, respectiv.
Compoziții farmaceutice
Compoziţia farmaceutică conform prezentei invenţii poate fi preparată într-un mod care este în sine cunoscut unui specialist în domeniul farmaceutic. Compoziţia poate conţine o cantitate eficientă de NAC în conformitate cu invenţia, precum şi un purtător sau excipient adecvat care serveşte ca vehicul de livrare sau vehicul pentru ingredientul activ. Astfel de purtători sau excipienţi sunt cunoscuţi în domeniu şi includ solide cum ar fi acid citric, citrat de sodiu, carbonat de sodiu (acid) plus aroma. Compoziţia farmaceutică este de preferinţă adaptată pentru administrare orală. Astfel de compoziţii pot fi administrate în diferite forme, în prezent, de preferinţă sub formă de tablete. Sunt de asemenea posibile şi alte forme, cum ar fi capsule, supozitoare, soluţii, suspensii, siropuri sau altele asemenea.
Invenţia necesită o evaluare strictă a calităţii farmaceutice a preparatului NAC pentru a obţine o doză eficientă. Prin urmare, ar trebui utilizate medicamente generice de marcă sau certificate. NAC nu este o moleculă stabilă, iar porțiunea sa tiol activă poate fi ușor oxidată de oxigen, lumină și alte radiații, astfel încât o doză eficientă nu poate fi atinsă. Medicamentul este astfel de preferință protejat de lumină, în tablete solubile, cu bicarbonat de sodiu, care ajută la îndepărtarea parțială a oxigenului din apă în timpul dizolvării.
S-a observat că dozele mari de NAC pot provoca dureri abdominale. Pentru a depăși acest lucru, este posibil să se ofere NAC într-o compoziție de protecție gastrică adecvată pentru prevenirea eliberării/solubilității NAC în stomac. Astfel de compoziţii sunt bine cunoscute în domeniu şi pot fi utilizate în prezenta invenţie. De exemplu, se pot folosi învelișuri de tablete care sunt rezistente la fluidele gastrice și permit eliberarea medicamentului numai în intestine după ce a trecut prin stomac. Compoziţiile utilizate în mod obişnuit includ polimeri cum ar fi derivaţi de celuloză, copolimeri metacrilat amino esteri. Acoperirea protejează miezul tabletei de degradarea în mediul acid al stomacului prin utilizarea unui polimer sensibil la pH care se umflă sau se solubilizează după trecerea prin stomac ca răspuns la o creștere a pH-ului, eliberând medicamentul.
O altă opțiune este reducerea dozei de NAC care intră în fluxul sanguin în același timp. Administrarea NAC de trei sau mai multe ori pe zi poate fi dificil de gestionat de către pacient. În ciuda acestui fapt, administrarea repetată poate fi de dorit pentru a obține o concentrație seric NAC aproape constantă. Pentru a depăși aceste probleme, administrarea o dată sau de două ori pe zi, cum ar fi dimineața și seara, poate fi mai ușor de efectuat pentru pacient. O opțiune este de a oferi NAC într-o formulare cu eliberare lentă (numită și eliberare susținută sau eliberare controlată). Această compoziție face posibilă administrarea unei doze mai mari la intervale mai lungi, deoarece poate reduce rata de difuzie și absorbție a NAC în fluxul sanguin. Doza este apoi distribuită în sânge pe o perioadă lungă de timp în cantități mici, de exemplu peste 12+12 ore în cazul unui regim de dozare de două ori pe zi. Multe tehnologii și compoziții diferite pentru eliberare susținută sunt cunoscute de mult timp în domeniu și pot fi utilizate în prezenta invenție. în astfel de tehnologii, substanţa activă este, de exemplu, încapsulată într-o înveliş sau o matrice care este insolubilă sau mai puţin solubilă în fluidul corporal în care este administrată. Compoziţiile care au efect combinat de eliberare lentă şi protecţie gastrică sunt de asemenea posibile şi pot fi utilizate în prezenta invenţie.
Aplicații/indicații medicale ale prezentei invenții
Prezenta invenţie s-a dovedit a fi utilă în multe aspecte asociate cu endometrioza şi poate fi utilizată atât pentru tratamentul endometriozei, cât şi pentru tratamentul diferitelor indicaţii asociate cu endometrioza. Tratamentul diferitelor indicații asociate cu endometrioza include, de exemplu, tratamentul pentru ameliorarea simptomelor bolii, cum ar fi durerea și inflamația; tratament pentru a crește șansele de sarcină; pre-tratament înainte de intervenția chirurgicală pentru a facilita îndepărtarea leziunilor endometriotice și pentru a îmbunătăți rezultatul intervenției chirurgicale; tratament după intervenție chirurgicală pentru a preveni reapariția leziunilor; și tratament preventiv în cazul factorilor de risc confirmați, evaluați sau prezența endometriozei ereditare.
S-a demonstrat că NAC conform prezentei invenţii reduce dimensiunea leziunii şi readuce ţesutul proliferativ la un ţesut mai diferenţiat, normal. Astfel, într-o variantă de realizare a prezentei invenţii, compoziţia farmaceutică conţine NAC pentru tratamentul endometriozei cu scopul de a reduce - în cele din urmă până la dispariţie - endometrioamele, adeziunile, implanturile peritoneale şi leziunile profunde localizate în septul rectovaginal sau în altă parte.
S-a demonstrat de asemenea că NAC din prezenta invenție reduce simptomele durerii cauzate de endometrioză. Astfel, într-un alt exemplu de realizare a prezentei invenţii, compoziţia farmaceutică conţine NAC pentru a calma durerea asociată cu endometrioza.
Într-un alt exemplu de realizare a prezentei invenţii, compoziţia farmaceutică conţine NAC pentru a induce o sarcină dorită la o pacientă cu endometrioză.
Într-un alt exemplu de realizare a prezentei invenţii, compoziţia farmaceutică conţine NAC pentru pretratament înainte de laparoscopie sau intervenţie chirurgicală în cazuri de endometrioză, pentru a facilita îndepărtarea masei, pentru a reduce sângerarea, pentru a face ţesuturile să devină mai compacte/mai puţin fragile.
Într-un alt exemplu de realizare a prezentei invenţii, compoziţia farmaceutică conţine NAC pentru a preveni recidivele după laparoscopie sau intervenţie chirurgicală.
Într-un alt exemplu de realizare a prezentei invenţii, compoziţia farmaceutică conţine NAC pentru utilizare în cazul factorilor de risc confirmaţi, evaluaţi pentru prevenirea endometriozei datorate unei boli ereditare.
Invenţia va fi acum descrisă şi ilustrată în continuare prin intermediul următoarelor exemple. Trebuie remarcat, totuşi, că aceste exemple nu trebuie interpretate ca limitând invenţia în niciun fel.
Exemplul 1 Efectul NAC într-un model de șoarece de endometrioză
Materiale și metode
Substanțe. Dacă nu este specificat, toate substanțele chimice proveneau de la Sigma-Aldrich, Milano, Italia.
Animale. 36 de șoareci femele BALB/C în vârstă de 6-8 săptămâni au fost achiziționați de la Charles River Italia (Calco, Italia). S-au furnizat ad libitum hrana cu peleți (dietă standard îmbogățită; Mucedola, Milano, Italia) și apă. Animalele au fost ținute într-un ciclu lumină/întuneric de 16/8 ore în condiții controlate. Înainte de orice procedură invazivă, șoarecii au fost anesteziați prin injectare intraperitoneală a 0,4 ml de soluție salină conținând 2,5% avertină.
Inducerea endometriozei. Inducerea endometriozei a fost efectuată urmând metoda descrisă în Somigliana şi colab., Hum Reprod 1999 Dec;14(12):2944-50. Intervențiile chirurgicale au fost efectuate în condiții curate. Pe scurt, coarnele uterine ale șoarecilor singenici au fost îndepărtate printr-o mică incizie mediană în abdomen chiar sub ombilic și plasate într-o cutie Petri care conține soluție salină tamponată cu fosfat (PBS). Fragmentele endometriale au fost obținute prin zdrobirea fină a coarnelor uterine cu ajutorul unei lame de ras. Fragmentele au fost suspendate în 0,6 ml PBS și inoculate rapid în cavitatea peritoneală a șoarecilor primitori într-un raport de un donator la doi primitori. Șoarecii cu endometrioză indusă au fost împărțiți aleatoriu în două grupuri de câte 12 șoareci fiecare: control și tratament NAC.
procesare NAC. La o zi după implantarea endometrului, șoarecii din grupul de tratament au fost hrăniți cu tub cu 100 μL de soluție stoc NAC 10 mg/mL în apă. Grupul de control a primit doar apă. Administrarea NAC a fost continuată zilnic timp de 21 de zile. Având în vedere greutatea corporală medie a șoarecelui de 22,5 ± 0,7, o doză de NAC 1 mg/șoarece corespunde la 44 mg/kg/zi. Nu au existat semne de toxicitate bazată pe doză bazată pe greutatea corporală - neschimbată la sfârșitul tratamentului - în ceea ce privește consumul de alimente, îngrijirea sau nivelurile de activitate în comparație cu martorii. La sfârșitul tratamentului, șoarecii au fost uciși prin luxație de col uterin.
Colecția de endometrioame. La sfârșitul tratamentului, animalele au fost sacrificate și leziunile endometrioide au fost excizate cu grijă din țesutul înconjurător și au fost evaluate greutatea și numărul lor total. Chisturile au fost fie fixate imediat în formaldehidă 10%, fie congelate în azot lichid și depozitate la -80°C.
Histologie și imunohistochimie. Probele fixate cu formol au fost încorporate în parafină și secțiuni de țesut (5 μm grosime) au fost colorate cu hematoxilină-eozină. Toate lamelele microscopice au fost evaluate de un patolog cu experiență, care a fost orbit la studiu, iar diagnosticul histologic al endometriozei sa bazat pe identificarea morfologică a țesutului glandular endometrial și a stromei.
Pentru imunohistochimie, secțiunile au fost deparafinate și rehidratate în etanol de calitate. Pentru extragerea antigenului, secțiunile au fost puse la microunde timp de 6 minute în tampon citrat 0,1 M (pH 6,0) și activitatea peroxidazei endogene a fost blocată prin incubare timp de 20 de minute în 3% H202/metanol. Secțiunile au fost spălate în PBS/TritonX-100, scufundate în 1% PBS-albumină serică bovină (BSA) timp de 15 minute pentru a bloca situsurile de legare nespecifice și apoi incubate cu anticorpul primar selectat diluat în PBS-BSA 1%. Pentru imunotestarea ciclooxigenazei (COX)-2 (de la iepure la șoarece policlonal, Cayman Chemical, Milano, Italia), Ki-67 (de la iepure la om policlonal, Monosan Xtra, DBA Italia, Segrate, Italia) și E-cadherin (BD Biosciences) , Milano, Italia) incubarea a fost efectuată peste noapte la 4°C și diluțiile au fost 1:100, 1:600, respectiv 1:200. Colorația imunohistochimică a fost continuată utilizând DAKO Cytomation LSAB2 System-HRP (Dako Italia, Milano, Italia), iar situsurile de legare a anticorpilor au fost vizualizate utilizând o soluție de strept complex de avidină-biotină peroxidază de anticorp policlonal anti-iepure folosind diaminobenzidină ca cromogen. Secțiunile au fost contracolorate cu hematoxilină, deshidratate, montate în balsam de Canada și apoi vizualizate cu un microscop Leica. Cuantificarea expresiei Ki-67 a fost efectuată într-o manieră oarbă de către doi observatori independenți; fiecare observator a numărat cel puțin 200 de celule în mai mult de 10 câmpuri selectate aleatoriu pentru fiecare probă, iar indicele de etichetare Ki-67 a fost exprimat ca procent.
Extracția ARN, RT-PCR semicantitativă (reacția în lanț a polimerazei cu transcripție inversă) și qRT-PCR (RT-PCR cantitativă). ARN-ul total a fost izolat prin lizarea chisturilor endometriale congelate cu un TissueLyser (QIAGEN, Milano, Italia) folosind reactiv Trizol (Invitrogen, Milano, Italia) conform instrucțiunilor producătorului. Un microgram de ARN total din fiecare probă a fost tratat cu 1 U de DNază I (Invitrogen) și transcris invers cu 200 U de transcriptază inversă Superscript III (Invitrogen) folosind 250 ng de primeri selectați aleatoriu într-un volum final de 20 μl. Același produs ADNc obținut din fiecare probă a fost utilizat pentru amplificarea PCR ulterioară cu seturi de primeri pregătite pentru genele țintă. Gena ARN constitutivă 18S a fost utilizată ca control intern. Probele de control negative au constat dintr-un amestec de reacție și primeri fără un șablon de ADNc. Secvențele de primer (Tabelul 1) au fost proiectate folosind software-ul Primer-BLAST, disponibil online la: http://www.ncdi.nlm.nih.gov/
În primul rând, relația dintre probă și gena constitutivă a fost calculată prin amplificarea sincronă a mARN-ului specific genei și a ARN-ului 18S în același tub de reacție. Deoarece această procedură nu a avut succes pentru toate probele - posibil din cauza numărului relativ mic de transcrieri specifice și, prin urmare, amplificării preferențiale a ARNm 18S - pentru a preveni inexactitățile cantitative care decurg din efectele competitive, genele țintă și ADNc 18S generate într-una și aceeași reacție RT, amplificat în tuburi separate. Pentru a documenta amplificarea exponențială, a fost generat un grafic de amplificare pentru ARN 18S și a fost selectat numărul adecvat de cicluri. PCR semi-cantitativă a fost efectuată într-un volum de reacție de 25 μl cu 1 μl ADNc, 2 mM MgCl2, 0,2 mM dNTPs, 0,5 μM din fiecare primer și 1,25 U de polimerază Hotstart Taq (QIAGEN). Amplificarea PCR a fost efectuată utilizând iCycler (Bio-Rad, Milano, Italia). Produsele PCR au fost apoi separate electroforetic pe un gel de agaroză 1,5% și colorate cu bromură de etidio. Nivelurile țintă de ARNm au fost evaluate prin scanare densitometrică și normalizate față de controalele încărcate cu 18S. Analizele densitometrice ale produselor PCR au fost efectuate folosind software-ul de procesare a imaginii Quantity One (VersaDOC, Bio-Rad).
| tabelul 1 | |||||
| Secvența de primeri utilizați pentru qRT-PCR semi-cantitativă | |||||
| ARNm țintă | Grunduri | Urmare | Recoacere (timp de 30 de secunde) | Numărul de cicluri | Produs PCR (perechi de baze) |
| 18S ARN NR_003278.1 | invers direct | CGCGGTTCTATTTTGTTGGT | 60°C | 18-24 | 219 |
| AGTCGGCATCGTTATGGTC | |||||
| SOX-2 NM_011198.3 |
invers direct | CCCCCACAGTCAAAAGACACT | 60°C | 35 | 196 |
| AGTTGCTCATCACCCCACTC | |||||
| MMP-9 NM_013599.2 | invers direct | TGAATCAGCTGGCTTTTGTG | 60°C | 35 | 242 |
| GTGGATAGCTCGGTGGTGTT | |||||
| P21 (cdknla) NM_007669.4 | invers direct | TCCACAGCGATATCCAGACA | 60°C | 35 | 196 |
| ACGAAGTCAAAGTTCCACCG |
rezultate
Efectul tratamentului cu NAC asupra creșterii leziunilor endometrioide. La douăzeci și unu de zile după inducerea endometriozei, toți șoarecii experimentali au fost sacrificați și endometrioamele lor au fost îndepărtate și colectate. Dintre cei 12 șoareci martor, unul a murit și unul nu a dezvoltat endometrioame. Din cei 12 șoareci tratați cu NAC, doi nu au dezvoltat endometrioame. Din punct de vedere morfologic, leziunile ectopice erau mari, chistice și vascularizate: constau din chisturi pline de lichid care erau fie de culoare albă, roșie, fie ocazional maro și erau localizate de preferință pe peritoneul cavității abdominopelvine. În inserturile din Figura 1.1, inventatorii prezintă imagini reprezentative ale chisturilor de la animalele de control (A) și tratate cu NAC (B). În medie, s-a observat o reducere semnificativă a greutății în grupul de tratament (n=10) comparativ cu martorii (n=10) (Figura 1).
NAC reduce expresia COX-2 și MMP-9 și oprește proliferarea. Analiza RT-PCR a arătat că, în comparație cu chisturile de la șoarecii martor (n=5), tratamentul cu NAC (n=5) a indus o scădere semnificativă a nivelurilor de ARNm de COX-2 (-32%) și MMP-9 (-34%). , cu semnificație p<0,01, которые нормализовали к экспрессии 18S (Фиг.2А и В). Ген Р21, обычно экспрессирующийся только, когда цикл пролиферации блокирован, ни разу не экспрессировался в 5 контролях, хотя он экспрессировался в 3 из 5 изучаемых NAC-обработанных образцах (типичный пример на Фиг.2А).
NAC declanșează relocalizarea E-caderinei. Detectarea imunohistochimică a E-caderinei a fost pozitivă în 100% dintre cazurile studiate. Etichetarea a fost limitată la celulele epiteliale glandulare, în timp ce nicio probă nu a prezentat colorare stromală. La nivel celular, în chisturile de la șoarecii de control, am constatat că colorarea cu E-cadherină a fost dispersată în întreaga citoplasmă celulară, în timp ce în chisturile de la șoarecii tratați cu NAC, E-caderina a fost detectată în principal de-a lungul joncțiunilor celulă-celulă (Figura 3). E-cadherina face parte dintr-un complex de aderență multiproteică, astfel încât prezența sa crescută la limitele celulare indică o aderență intercelulară crescută. În plus, și în concordanță cu expresia P21 descrisă mai sus, această relocare este în concordanță cu pierderea comportamentului proliferativ în celulele trecute la diferențierea terminală (Conacci-Sorrell și colab., J. Clin. Invest. 2002, 109: 987-991; Parasassi și colab. Cell Death Differ. 2005, 12: 1285-1296).
Tratamentul NAC reduce cantitatea de Cox-2 în endometrioame. Detectarea imunohistochimică a proteinei Cox-2 asociată inflamației a arătat că, în comparație cu chisturile de la șoarecii martor, probele colectate de la șoarecii tratați cu NAC au prezentat o colorare destul de atenuată, care în unele cazuri a fost complet absentă (Figura 4).
NAC reduce numărul de celule în proliferare. Antigenul Ki-67 (Ki-67) este un marker clasic al proliferării celulare, în celulele în fază repaus, care lipsesc complet expresia Ki-67. Când șoarecii de control au fost utilizați pentru a colora chisturile, au putut fi detectate puține celule marcate (săgețile din panourile A-C din Figura 5). În schimb, foarte puține celule marcate au fost găsite în chisturile șoarecilor tratați cu NAC (săgețile din panourile D-F din Figura 5). Evaluarea statistică efectuată pe 8 animale din fiecare grup (10 imagini/200 celule de șoarece) a furnizat o reducere de 54% a celulelor în proliferare (Tabelul II).
Discuţie
Un model animal de endometrioză a fost eficient în inducerea implanturilor endometriale ectopice. Doar un animal din grupul de control și doi din grupul tratat cu NAC nu au avut endometrioame.
În conformitate cu așteptările, greutatea - proporțională cu dimensiunea - a chisturilor a fost mai mică la șoarecii tratați cu NAC. Acest lucru poate fi explicat prin efectul antiproliferativ al NAC (Parasassi şi colab., Cell Death Differ. 2005, 12: 1285-1296), care este ilustrat pe larg aici prin analiza expresiei genelor şi imunohistochimie. Într-adevăr, P21, o genă exprimată numai în celule diferențiate, neproliferante, a fost observată la 60% dintre animalele tratate cu NAC, în timp ce nu a fost exprimată la martori. În schimb, proteina Ki-67, care este exprimată numai în celulele în proliferare, a arătat o scădere cu 54% a numărului de șoareci tratați cu NAC față de șoarecii martor.
Proteinele relevante în endometrioză, cum ar fi MMP-9 (Collette și colab., Hum Reprod 2006; 21:3059-3067) și Cox-2 (Carli și colab., Endocrinology 2009; 150: 3128-3137), au prezentat o scădere după Tratamentul NAC. MMP-9 este considerată esențială pentru mișcarea celulelor și comportamentul invaziv, în timp ce Cox-2 este o enzimă de manual asociată cu inflamația. Ambele gene înrudite au prezentat o scădere de aproximativ 30% după tratamentul NAC. În plus, cantitatea de Cox-2 a fost de asemenea examinată prin colorare histochimică în chisturi, iar rezultatele au arătat o atenuare relevantă a colorării.
Pe baza conceptului larg acceptat care consideră E-caderina citoplasmatică ca un marker al comportamentului proliferativ al celulelor, în timp ce prezența sa în complexul de adeziune intercelulară, dimpotrivă, este considerată atât ca marker, cât și ca inductor al diferențierii, autorii invenția a studiat, de asemenea, localizarea E-cadherinei în chisturile de control și șoarecii tratați cu NAC. Rezultatele sunt în perfect acord cu datele anterioare obținute de inventatori asupra celulelor de adenocarcinom (Parasassi și colab., Cell Death Differ. 2005,12: 1285-1296), indicând mișcarea E-caderinei de la citoplasma celulară la marginile celulei. după tratamentul NAC. Această asociere a E-cadherinei cu complexul de adeziune este, de asemenea, în concordanță cu un comportament celular mai puțin mobil și mai puțin invaziv.
În concluzie, din toate punctele de vedere luate în considerare, NAC poate reprezenta tratamentul optim pentru endometrioză. Când este transferat în tratamentul femeilor, acest medicament are un avantaj semnificativ, neavând practic efecte secundare în comparație cu amploarea efectelor nedorite ale tratamentului hormonal. Prin urmare, NAC poate fi utilizat pentru a reduce dimensiunea chisturilor, pentru a reduce inflamația locală și durerea cronică asociată și pentru a reduce recurența după intervenție chirurgicală. Acest ultim punct se datorează scăderii proliferării și scăderii motilității celulare.
Exemplul 2. Studiu clinic preliminar al efectului NAC în tratamentul endometriozei.
Scopul studiului. Acest studiu clinic pilot a fost conceput pentru a trata femeile cu endometrioză folosind NAC în loc de alte tratamente. Singurul tratament suplimentar posibil a fost analgezicele pentru a calma durerea atunci când a fost nevoie.
Criteriile de includere a pacientului. În acest studiu au fost incluse femeile cu un diagnostic inițial de endometrioză bazat pe durere și confirmarea bolii prin ecografie ovariană și pacienții cu recurență a durerii și/sau endometriom ovarian după tratamentul laparoscopic.
Înainte de tratament, intensitatea simptomelor durerii a fost măsurată utilizând o scală vizuală analogă (VAS) cu 10 puncte și caracteristicile endometrioamelor ovariene folosind ultrasunete transvaginale. În timpul tratamentului NAC, alte tratamente au fost excluse, cu excepția analgezicelor pentru durere atunci când este necesar.
Pacienții. Din februarie 2008 până în iulie 2010, 64 de femei cu vârsta medie de 35±7 ani (±DS) diagnosticate cu endometrioză ovariană au fost incluse în studiu, dintre care 33 li s-a prescris tratament NAC (vârsta medie: 37±6 ani), în timp ce 31 nu au urmat NAC sau orice alt tratament și au fost considerați cazuri martor (vârsta medie: 33±8 ani). Toate aveau unul sau mai multe chisturi la unul sau ambele ovare.
Tratament. Doza prescrisă de NAC a fost apropiată de cea utilizată în studiul pe animale, 30 mg/kg/zi. În practică, pentru o greutate corporală medie de 60 kg, au fost prescrise trei doze orale de 600 mg NAC de trei ori pe zi timp de trei zile consecutive în fiecare săptămână cu patru zile libere pentru toți pacienții înscriși. Rezultatele au fost 1,8 g NAC pe zi, 5,4 g pe săptămână, 21,6 g pe lună. Aceste tratamente precise s-au bazat pe următoarele considerente: 1) doza de 1,8 g NAC pe zi este în acord cu alte tratamente clinice curente și se consideră că nu are efecte secundare nedorite; 2) stabiliți parametrii farmacocinetici ai NAC, trei doze zilnice de 0,6 mg se apropie de niveluri plasmatice aproape constante fără disconfort pentru pacienți în timpul tratamentului complex; 3) a stabilit o reducere documentată a nivelurilor plasmatice de NAC după un tratament pe termen lung (Pendyala L, Creaven PJ. Cancer Epidemiol Biomarkers Prev. 1995;4:245-51), oprirea tratamentului pentru aproximativ jumătate din fiecare săptămână oferă un răspuns biologic optim pe termen lung. -tratament pe termen lung, de exemplu două până la șase luni sau mai mult.
Control. Intensitatea simptomelor durerii (scala durerii VAS) și dimensiunea endometrioamelor ovariene (examen clinic și US) au fost evaluate după primele trei luni de tratament. La nevoie, după 3 luni se efectuează tratament laparoscopic.
rezultate
Datele după prima perioadă de urmărire de trei luni sunt descrise mai jos.
Modificarea dimensiunii chistului (neschimbată, mărită sau redusă) după trei luni de tratament NAC, care a fost măsurată prin ultrasunete ca diametru maxim, este prezentată în Figura 7A (numărul absolut de chisturi) și Figura 7B (procentul de chisturi). Cifrele arată o comparație între chisturile la pacienții tratați cu NAC și chisturile la martorii netratați. Ca procent (Figura 7B), s-a observat o reducere a dimensiunii chistului în 38% din cazuri, în timp ce la martori, doar mai puțin de 10% din cazuri au prezentat o reducere spontană. Având în vedere reducerea dimensiunii endometriomului, mai mulți (21 din 33) pacienți au decis să anuleze sau să amâne laparoscopia planificată.
Senzațiile de durere s-au schimbat și după tratamentul cu NAC. Durerea a fost evaluată înainte și după trei luni de tratament folosind o scală vizuală analogică (VAS) cu 10 puncte, zero reprezentând nicio durere și 10 reprezentând cea mai mare durere imaginabilă. Intensitatea simptomelor a fost clasificată ca fără (0), ușoară (1-4), moderată (5-7) sau severă (8-10). Pacienții tratați cu NAC au raportat o reducere medie a durerii de 7,6±0,3 până la 5,1±0,8 (p<0,01) после трех месяцев лечения.
Nu au fost raportate efecte secundare nocive.
Deși inventatorii nu au evaluat dacă pacientele au dorit sarcina și, prin urmare, nu pot caracteriza semnificația statistică a constatărilor, inventatorii raportează, de asemenea, trei cazuri de sarcină care aparent nu este posibilă cu terapiile de endometrioză utilizate în prezent, care vizează suprimarea funcției ovariene.
De remarcat a fost observația, raportată de un chirurg cu experiență, că la laparoscopie după tratamentul NAC endometriomul a fost mai regulat și compact și mai ușor de îndepărtat, prin urmare asociat cu o reducere semnificativă a sângerării în timpul laparoscopiei.
Într-un alt caz, un nodul de pe septul rectovaginal a dispărut, demonstrând eficacitatea NAC în afara endometrioamelor ovariene.
Exemplul 3: Efectele tratamentului cu puls, intermitent și zilnic NAC asupra endometriozei induse experimental: hipersensibilitatea vaginală la șobolani ca semnal de durere - studiu pilot
Materiale și metode
Animale. Au fost utilizați șaisprezece șobolani Sprague-Dawley femele adulte nefertilizate. Ei cântăreau 200-230 g la începutul studiului și au fost ținuți individual într-o cameră cu temperatură controlată în cuști de plastic căptușite cu așternut. Șobolanii au avut acces liber la apă și mâncare de șobolan și au fost ținuți într-un ciclu de lumină/întuneric de 12 ore cu luminile aprinse la ora 07:00. Starea reproductivă (pre-estru, estru, post-estru și diestru) a fost determinată prin lavaj vaginal zilnic.
Model experimental și pregătire prechirurgicală. Înainte de inducerea endometriozei, șobolanii au fost antrenați să efectueze un răspuns de evitare pentru a opri dilatația vaginală produsă de un balon de latex gonflabil. Un mic balon din latex, neumflat, a fost conectat la un cateter subțire, lubrifiat înainte de introducerea în mijlocul canalului vaginal. Umflarea balonului cu diferite volume de aer a întins canalul vaginal. Presiunea produsă de fiecare volum de întindere a fost măsurată pentru monitorizare folosind un senzor de presiune de volum mic. Aparatul de testare a fost o mică cameră cilindrică din plexiglas concepută pentru a conține șobolanul într-o manieră care să-l împiedice să se rotească. Deschiderea spatelui camerei a permis ca cateterului atașat la stimulatorul vaginal să fie conectat la dispozitivul de stimulare. Elementul fotosensibil a determinat poziția șobolanului în cameră. Dacă șobolanul s-a întins ca parte a unui răspuns de evitare, fasciculul de lumină a fost întrerupt și expunerea a fost oprită. Șobolanii au fost lăsați să se obișnuiască cu camera de testare prin plasarea lor în cameră timp de 15 minute pe zi, timp de 5 zile. Sobolanii au fost apoi conditionati in timpul sesiunilor de antrenament la un raspuns de evitare mecanica pentru a reduce distensia vaginala, ceea ce a implicat sobolanul sa-si extinda capul pentru a intrerupe fasciculul de lumina. Toți șobolanii au învățat răspunsul de evitare în 4 sesiuni. După antrenament, a început sesiunea de testare.
Sesiunile de testare au fost efectuate de 3 ori/saptamana in zile neconsecutive. Fiecare sesiune de testare a inclus o serie de studii controlate de evitare. Fiecare încercare a constat în umflarea rapidă a balonului (1 ml/s) la un volum fix, care a fost menținut fie până când șobolanul a făcut un răspuns de evitare, fie timp de 15 secunde, iar balonul a fost dezumflat rapid. Diferite volume de expansiune, inclusiv un volum de control (0,01 ml), au fost injectate fiecare de trei ori într-o ordine aleatorie. O perioadă de așteptare maximă de 15 secunde a fost considerată lipsă de răspuns.
Timpul până la răspuns și răspunsurile de evitare au fost măsurate în funcție de volumul de expansiune pentru fiecare sesiune, așa cum este descris în Cason AM și colab. (Horm Behav. (2003), Vol. 44, paginile 123-31). Cu cât timpul de răspuns este mai scurt și volumul care dă răspunsul este mai mic, cu atât reacția de evitare la șobolan este mai puternică. Pentru fiecare șobolan, răspunsurile de evitare și presiunea/volumele din toate sesiunile pentru acel șobolan (cel puțin 12 sesiuni) au fost reunite și au fost calculate valorile medii. Toate cele patru grupuri experimentale (a se vedea mai jos) au constatat că răspunsurile de evitare de bază la distensia vaginală înainte de operația de endometrioză au fost foarte similare.
Inducerea endometriozei. Endometrioza la șobolani poate fi indusă experimental prin autotransplant de bucăți de uter. Chirurgia pentru endometrioză a fost efectuată urmând protocolul dezvoltat inițial de Vernon și Wilson 1985 (Fertility and Sterility, 1985, Vol. 44, paginile 684-694). Șobolanii aflați în diestru au fost anesteziați, așezați pe o pernă de încălzire pentru a menține temperatura corpului și a fost efectuată o intervenție chirurgicală. S-a făcut o incizie abdominală pe linia mediană pentru a expune uterul. Patru bucăți de corn uterin au fost suturate în jurul cascadei alternative de artere mezenterice care alimentează porțiunea caudală a intestinului subțire. Recuperarea postoperatorie a fost fără evenimente, iar ciclul obișnuit al estului a fost reluat la toți șobolanii în decurs de o săptămână.
Tratamentul NAC.
Toți șobolanii au fost tratați cu NAC 60 mg/kg/zi (în ziua administrării, când este cazul) sau placebo timp de 8 săptămâni după intervenție chirurgicală. Sobolanii au fost impartiti in patru grupuri experimentale:
Primul grup a primit tratament cu puls NAC, care este tratament o dată la două zile.
Al doilea grup a primit tratament NAC intermitent, adică tratament zilnic timp de 5 zile și 2 zile de repaus (adică 2 zile fără tratament).
Al treilea grup a primit zilnic tratament NAC.
Al patrulea grup a primit un tratament simulat, adică un tratament placebo.
Răspunsurile de evitare pentru oprirea distensiei vaginale, așa cum este descris mai sus, au fost evaluate după 8 săptămâni.
rezultate
Rezultatele arată că hiperalgezia vaginală (sensibilitate crescută la durere) a fost indusă la șobolani după intervenția chirurgicală a uterului.
Răspunsurile de evitare (adică timpul până la răspuns și numărul de răspunsuri în 15 secunde pentru o anumită cantitate de distensie în comparație cu grupul de control) și presiunea vaginală au fost determinate pentru diferite cantități de distensie a canalului vaginal. Sunt prezentate rezultatele pentru patru grupuri experimentale diferite (valorile pentru grupul de tratament simulat au fost folosite ca valori de bază).
Scăderea relativă a răspunsului de evitare la 0,5 ml volum de distensie față de grupul de tratament simulat a fost:
1. Pentru grupul de tratament cu impuls NAC: reducerea răspunsului de evitare cu 32%;
2. Pentru grupul de tratament intermitent NAC: reducerea cu 28% a evitarii;
3. Pentru grupul de tratament zilnic cu NAC: scăderea răspunsului de evitare cu 18%.
În mod remarcabil, rezultatele arată astfel că efectul de reducere a durerii indus de tratamentul NAC a fost mai vizibil în grupul cu tratament cu puls și în grupul cu tratament intermitent, comparativ cu grupul care a primit tratament zilnic.
1. O metodă de tratare a unui mamifer cu endometrioză, incluzând administrarea orală pulsată sau intermitentă timp de 3-5 zile consecutive, urmate de 2-4 zile libere sau timp de 1-3 zile consecutive urmate de 1-2 zile libere dintr-o compoziție farmaceutică care conține N -acetil-L-cisteină, pe o perioadă de cel puțin două luni, în care N-acetil-L-cisteină se administrează în doză de 20 până la 90 mg/kg/zi pe zi de administrare.
2. Metodă conform revendicării 1, în care N-acetil-L-cisteină se administrează în doză de 30 până la 60 mg/kg/zi pe zi de administrare.
3. Metodă conform revendicării 2, în care N-acetil-L-cisteină se administrează în doză de 30 până la 45 mg/kg/zi pe zi de administrare.
4. Metodă conform revendicării 1, în care compoziția farmaceutică care conține N-acetil-L-cisteină este protejată de lumină.
5. Metodă conform revendicării 1, în care compoziția farmaceutică care conține N-acetil-L-cisteină este o tabletă solubilă în apă.
6. Metodă conform revendicării 1, în care compoziţia farmaceutică care conţine N-acetil-L-cisteină conţine bicarbonat de sodiu.
7. Metodă conform revendicării 1, în care compoziția farmaceutică care conține N-acetil-L-cisteină conține o acoperire de tabletă polimerică pe bază de derivați de celuloză sau copolimeri metacrilat de amino ester, care asigură eliberarea medicamentului în intestin.
8. Metodă conform revendicării 1, care este utilizată în tratamentul durerii cauzate de endometrioză.
Grupul de invenții se referă la medicină și se referă la o compoziție stabilă de sildenafil nanostructurat care inhibă fosfodiesteraza specifică cGMP de tip 5 (PDEV), care conține o bază de sildenafil nanostructurată sau sărurile sale acceptabile farmaceutic având o dimensiune medie a particulelor mai mică de aproximativ 500 nm, a stabilizator, în care compoziția se obține într-un flux un reactor continuu bazat pe tehnologia microfluidelor și în care compoziția are o structură semiamorfă.(57) Invenția se referă la domeniul medicinei și are scopul de a influența microcirculația în țesutul osos în timpul osteoporozei experimentale și fracturilor pe fondul acesteia. // 2540481
Invenția se referă la industria farmaceutică și este o soluție oftalmică care conține riboflavină și vitamina E pentru a proteja structurile interne ale globului ocular de razele UV-A sau pentru a trata keratoconus prin metoda de reticulare transepitelială.
Invenția se referă la industria farmaceutică și este o soluție de perfuzie echilibrată care conține cloruri de sodiu, potasiu și magneziu, un solvent și succinat de L-arginină de sodiu cu formula: , iar componentele din soluție sunt într-un anumit raport în masă%. Invenția asigură o activitate de detoxifiere crescută, toxicitate scăzută și o gamă largă de aplicații clinice. 11 tab., 6 pr.
Invenţia se referă la o metodă de tratare a unui mamifer cu endometrioză. Această metodă include administrarea orală pulsată sau intermitentă timp de 3-5 zile consecutive, urmată de o pauză de 2-4 zile sau timp de 1-3 zile consecutive, urmată de o pauză de 1-2 zile a unei compoziții farmaceutice care conține N-acetil-L-cisteină, într-o perioadă de cel puțin două luni. N-acetil-L-cisteina în această metodă se administrează într-o doză cuprinsă între 20 și 90 mg/zi. Metoda revendicată oferă un efect mai semnificativ asupra simptomelor endometriozei în comparație cu administrarea zilnică tradițională de N-acetil-L-cisteină. 10 salariu f-ly, 7 ill., 2 mese, 3 pr.
Compoziția și forma de eliberare a medicamentului
200 mg - plicuri (20) - pachete de carton.
200 mg - plicuri (30) - pachete de carton.
efect farmacologic
Agentul mucolitic este un derivat al aminoacidului cisteină. Are efect mucolitic, crește volumul sputei, facilitează evacuarea acesteia datorită efectului direct asupra proprietăților reologice ale sputei. Acțiunea acetilcisteinei este asociată cu capacitatea grupărilor sale sulfhidril de a rupe legăturile disulfurice intra și intermoleculare ale mucopolizaharidelor acide ale sputei, ceea ce duce la depolarizarea mucoproteinelor și la scăderea vâscozității sputei.
Reduce hiperplazia indusă a celulelor mucoide, sporește producția de surfactanți prin stimularea pneumocitelor de tip II, stimulează activitatea mucociliară, ceea ce duce la îmbunătățirea clearance-ului mucociliar.
Rămâne activ în prezența sputei purulente, mucopurulente și mucoase.
Crește secreția de sialomucine mai puțin vâscoase de către celulele caliciforme, reduce aderența bacteriilor la celulele epiteliale ale mucoasei bronșice. Stimulează celulele mucoase ale bronhiilor, a căror secreție este lizată de fibrină. Are un efect similar asupra secrețiilor formate în timpul bolilor inflamatorii ale organelor ORL.
Are efect antioxidant datorită capacității grupărilor sale reactive sulfhidril (grupe SH) de a se lega de radicalii oxidativi și astfel de a-i neutraliza.
Acetilcisteina pătrunde cu ușurință în celulă și este deacetilată la L-cisteină, din care este sintetizat glutationul intracelular. Glutationul este o tripeptidă foarte reactivă, un puternic antioxidant și citoprotector care neutralizează radicalii liberi și toxinele endogene și exogene. Acetilcisteina previne epuizarea și ajută la creșterea sintezei de glutation intracelular, care este implicat în procesele redox ale celulelor, favorizând detoxifierea substanțelor nocive. Aceasta explică acțiunea acetilcisteinei ca antidot pentru otrăvire.
Protejează alfa1-antitripsină (inhibitor de elastază) de efectele inactivante ale HOCl, un agent oxidant produs de mieloperoxidaza fagocitelor active. De asemenea, are un efect antiinflamator (prin suprimarea formării de radicali liberi și a substanțelor reactive care conțin oxigen, responsabile de dezvoltarea inflamației în țesutul pulmonar).
Farmacocinetica
Atunci când este administrat oral, este bine absorbit din tractul gastrointestinal. Este în mare măsură supus efectului de „prima trecere” prin ficat, ceea ce duce la o scădere a biodisponibilității. Legarea de proteinele din sânge până la 50% (4 ore după administrarea orală). Metabolizat în ficat și eventual în peretele intestinal. În plasmă se determină neschimbat, precum și sub formă de metaboliți - N-acetilcisteină, N,N-diacetilcisteină și ester de cisteină.
Clearance-ul renal reprezintă 30% din clearance-ul total.
Indicatii
Boli și afecțiuni respiratorii însoțite de formarea sputei vâscoase și mucopurulente: bronșită acută și cronică, traheită datorată infecției bacteriene și/sau virale, pneumonie, bronșiectazie, astm bronșic, atelectazie prin blocarea bronhiilor cu un dop de mucus, sinuzită ( pentru a facilita trecerea secrețiilor), fibroza chistică (ca parte a terapiei combinate).
Pregătire pentru bronhoscopie, bronhografie, drenaj aspirativ.
Îndepărtarea secrețiilor vâscoase din tractul respirator în condiții posttraumatice și postoperatorii.
Pentru spălarea abceselor, căilor nazale, sinusurilor maxilare, urechii medii, tratamentul fistulelor, câmpului chirurgical în timpul operațiilor pe cavitatea nazală și pe procesul mastoid.
Contraindicații
Ulcer peptic al stomacului și duodenului în faza acută, hemoptizie, hemoragie pulmonară, perioada de alăptare (alăptare), copii sub 2 ani, hipersensibilitate la acetilcisteină.
Contraindicațiile pentru utilizare la copiii sub 14 ani depind de forma de dozare și sunt indicate în instrucțiunile de utilizare a medicamentului utilizat.
Dozare
Oral pentru adulți și copii peste 6 ani - 200 mg de 2-3 ori pe zi; copii cu vârsta cuprinsă între 2 și 6 ani - 200 mg de 2 ori pe zi sau 100 mg de 3 ori pe zi.
Pentru inhalare și utilizare intratraheală, doza, frecvența de utilizare și durata cursului sunt stabilite individual.
Local - instilat în canalul auditiv extern și căile nazale 150-300 mg per 1 procedură.
Efecte secundare
Reactii alergice: urticarie, erupții cutanate, mâncărime, angioedem, reacții anafilactice, umflare a feței.
Din sistemul nervos: durere de cap.
Din organul auzului și echilibrului: zgomot în urechi.
Din sistemul cardiovascular: tahicardie, scăderea tensiunii arteriale, sângerare
Din sistemul respirator: bronhospasm, dispnee.
Din sistemul digestiv: vărsături, diaree, stomatită, greață, dispepsie.
Reacții generale: pirexie.
Interacțiuni medicamentoase
Utilizarea simultană a acetilcisteinei cu antitusive poate crește stagnarea sputei din cauza suprimării reflexului de tuse.
Când sunt utilizate simultan cu antibiotice (inclusiv ampicilină, amfotericină B), este posibilă interacțiunea acestora cu grupul tiol al acetilcisteinei.
Utilizarea simultană a acetilcisteinei și nitroglicerinei poate provoca o scădere pronunțată a tensiunii arteriale și dureri de cap.
Utilizarea concomitentă a acetilcisteinei poate fi însoțită de o scădere a concentrațiilor de carbamazepină la niveluri subterapeutice.
Acetilcisteina elimină efectele toxice ale paracetamolului.
Acetilcisteina poate interfera cu determinarea colorimetrică a salicilaților.
Acetilcisteina poate interfera cu rezultatele testului cetonelor urinare.
Instrucțiuni Speciale
Utilizați cu precauție în următoarele boli și afecțiuni: antecedente de ulcer gastric și duodenal; astm bronșic, insuficiență hepatică și/sau renală; intoleranță la histamină (utilizarea pe termen lung trebuie evitată, deoarece acetilcisteina afectează metabolismul histaminei și poate duce la semne de intoleranță, cum ar fi dureri de cap, rinită vasomotorie, mâncărime); esofag; boli ale glandelor suprarenale; hipertensiune arteriala.
Când se utilizează acetilcisteină la pacienții cu astm bronșic, este necesar să se asigure drenajul sputei.
Trebuie respectat un interval de 1-2 ore între administrarea de acetilcisteină și antibiotice.
Respectarea căii de administrare și a formei de dozare utilizate trebuie respectate cu strictețe.
Sarcina și alăptarea
Dacă este necesară utilizarea în timpul sarcinii, beneficiile așteptate ale terapiei pentru mamă și riscul posibil pentru făt trebuie cântărite cu atenție.
Contraindicat pentru utilizare în timpul alăptării (alăptării).
Utilizare în copilărie
Când se utilizează acetilcisteină la pacienții cu astm bronșic, este necesar să se asigure drenajul sputei. La nou-născuți, se utilizează numai din motive de sănătate în doză de 10 mg/kg sub stricta supraveghere a unui medic.
Oral pentru copii peste 6 ani - 200 mg de 2-3 ori pe zi; copii cu vârsta cuprinsă între 2 și 6 ani - 200 mg de 2 ori / zi sau 100 mg de 3 ori / zi, până la 2 ani - 100 mg de 2 ori / zi.
Pentru afectarea funcției renale
Acetilcisteina trebuie utilizată cu prudență la pacienții cu boli de rinichi.
Pentru disfuncția ficatului
Acetilcisteina trebuie utilizată cu prudență la pacienții cu boli hepatice.
4,7 din 5Medicamentul Acetilcisteină, cunoscut și sub numele de N-acetilcisteină sau N-acetil-L-cisteină, este un agent mucolitic destinat să faciliteze trecerea sputei vâscoase și groase într-o serie de boli respiratorii. Acetilcisteina este, de asemenea, utilizată ca tratament pentru afecțiunile rezultate dintr-o supradoză de paracetamol. În plus, substanța acetilcisteină este inclusă în picături pentru ochi.
Formula chimică a acetilcisteinei arată astfel: C5H9NO3S. Este o pulbere cristalină albă sau ușor gălbuie, cu un miros specific, subtil. Pulberea se dizolvă bine în alcool și apă.
Medicamentul este disponibil în multe țări, în diferite forme de dozare:
- sub formă de soluție injectabilă;
- sub formă de pulbere pentru prepararea unei soluții pentru administrare orală;
- sub formă de tablete efervescente;
- sub formă de soluții pentru inhalare;
- sub formă de soluții oftalmice.
În conformitate cu forma de eliberare, utilizarea acetilcisteinei poate fi intravenoasă (injecții), orală (în interior), locală (inhalare, picături pentru ochi).
Pulberile pentru prepararea soluțiilor orale și tabletele efervescente în majoritatea țărilor, inclusiv Rusia, sunt vândute în farmacii fără prescripție medicală. Medicamentele pentru administrare intravenoasă și inhalare se vând strict conform prescripțiilor.
Mecanismul de acțiune al acetilcisteinei
Acetilcisteina (sau N-Acetilcisteina), datorită prezenței unei grupări sulfhidril în molecula sa, scindează legăturile disulfurice care leagă mucoproteinele - proteinele mucusului. Sub influența medicamentului, sputa devine mai puțin densă și crește în volum și este mai ușor de expectorat. Ca urmare a creșterii volumului de spută și a creșterii ratei de descărcare a acesteia, efectul de detoxifiere este îmbunătățit, deoarece spută conține o cantitate semnificativă de deșeuri toxice ale agenților patogeni.
Grupul sulfhidril al acetilcisteinei reacționează cu anumiți receptori intracelulari, stimulând producția de glutation. Glutationul, la rândul său, este capabil să suprime anumite reacții de oxidare a lipidelor care duc la deteriorarea celulelor. Astfel, acetilcisteina are și proprietăți antioxidante.
Medicamentul este rapid și bine absorbit în intestin. Concentrația sa maximă în plasma sanguină se observă la 2-4 ore după administrare. Acetilcisteina este metabolizată în principal în ficat.
Indicații pentru utilizarea acetilcisteinei
Cele mai utilizate forme de acetilcisteină sunt orale ca agent mucolitic., facilitând evacuarea sputei. Conform instrucțiunilor, acetilcisteina este prescrisă pentru următoarele boli:
- bronșită acută și cronică;
- traheita de origine bacteriană sau virală;
- pneumonie;
- bronșiectazie;
- atelectazie (colaps, pierderea aerului) plămânului;
- astm bronsic;
- sinuzită;
- fibroza chistica (ca parte a tratamentului complex).
După cum este indicat în instrucțiuni, acetilcisteina este contraindicată în caz de hipersensibilitate a unei persoane la acest medicament, în caz de hemoragie pulmonară și hemoptizie, în caz de exacerbare a bolii ulcerului peptic.
Contraindicațiile relative pentru administrarea acetilcisteinei sunt insuficiența funcției și afectarea severă a ficatului și rinichilor.
De obicei, medicamentul nu este prescris pentru copiii mici.
Femeilor însărcinate li se prescrie acetilcisteină numai dacă beneficiile pentru mamă depășesc semnificativ riscurile patologiilor de dezvoltare pentru făt. Acetilcisteina poate fi luată în timpul alăptării.
Reacții alergice, greață și vărsături, greutate în stomac, stomatită și bronhospasm sunt rareori observate ca reacții adverse.
Dozarea medicamentului
Doza de medicament este calculată individual de către medic. Aceasta ia în considerare nu numai severitatea manifestărilor clinice, ci și vârsta și greutatea corporală a pacientului.
Cu toate acestea, există o schemă generală care arată astfel:
- copiilor de 1-2 ani li se prescrie medicamentul 100 mg, 1 dată pe zi
- pacienților cu vârsta de 2-6 ani, conform instrucțiunilor, acetilcisteina se administrează de două ori pe zi, 200 mg;
- copiii cu vârsta peste 6 ani și adulții iau medicamentul de 2-3 ori pe zi, 200 mg.
Pentru bolile acute fără complicații, durata tratamentului este de obicei de 5-7 zile. Pentru bolile cronice, medicamentul este luat pentru o lungă perioadă de timp, în cursuri. Durata cursului tratamentului este determinată de medic.
Utilizarea acetilcisteinei pentru alte boli
Pentru o serie de boli, acetilcisteina sau N-acetilcisteina este utilizată pe scară largă sub formă de injecții intravenoase.. N-acetilcisteina sub formă de soluții intravenoase a fost utilizată cu succes pentru a trata supradozele cu paracetamol. În plus, medicamentul este utilizat pe scară largă în psihiatrie pentru tratamentul diferitelor tipuri de tulburări mintale, în special schizofrenie, autism, tulburare bipolară și diverse manii. Medicamentul este, de asemenea, utilizat în tratamentul dependenței de anumite medicamente și al jocurilor de noroc excesive.
N-acetilcisteina este eficientă în tratamentul leziunilor cerebrale traumatice moderate și ușoare, leziunilor cerebrale după accidentul vascular cerebral ischemic. În aceste cazuri, medicamentul trebuie administrat cât mai curând posibil după leziune sau diagnosticul de accident vascular cerebral.
Interacțiunea acetilcisteinei cu alte medicamente
Acetilcisteina încetinește absorbția multor antibiotice, astfel încât acest medicament trebuie luat nu mai devreme de 2 ore după administrarea antibioticului.
Utilizarea acetilcisteinei reduce efectul toxic al paracetamolului asupra ficatului.
Acetilcisteina îmbunătățește efectul bronhodilatatoarelor. Și, de asemenea, efectul vasodilatator al nitroglicerinei.
