Laboratorul bacteriologic studiază. Laborator bacteriologic - laboratoare, paraclinici

Introducere

Ca și partea generală a oricărei alte științe, bacteriologia generală nu se ocupă de probleme specifice (să zicem, identificarea speciilor individuale de bacterii), ci de probleme în general; metodologia sa acoperă proceduri de bază care sunt utilizate pe scară largă într-o mare varietate de studii de laborator. Acest material didactic nu are ca scop identificarea niciunui grup de microorganisme. Aceasta este sarcina următoarelor publicații - despre microbiologia privată și sanitară. Cu toate acestea, metodele prezentate aici pot fi utile în orice domeniu în care sunt implicate bacterii și pot fi aplicate la probleme practice care implică izolarea și tiparea bacteriilor.

Bacteriologia a devenit o știință numai după ce au fost dezvoltate tehnici unice prin care continuă să influențeze și să pătrundă în domenii științifice ulterioare precum virologia, imunologia și biologia moleculară. Tehnica de utilizare a culturilor pure dezvoltată de R. Koch și reacțiile imunologice și analiza chimică utilizate pentru prima dată de L. Pasteur nu și-au pierdut semnificația.

Metodologia bacteriologiei generale este reflectată în această publicație folosind o structură tipică manualelor standard din această disciplină. Cu toate acestea, spre deosebire de atelierele de laborator despre cursul de microbiologie pentru universități, acesta este prezentat mai detaliat în unele secțiuni și este doar pentru referință. Această structură ține cont de pregătirea și specializarea specifică a bacteriologilor și experților veterinari. Adesea materialul este prezentat în mod arbitrar, așa că unele metode sunt menționate de mai multe ori, din dorința de a demonstra interrelația lor.

Laborator bacteriologic

Laboratoarele bacteriologice ca unități structurale sunt organizate ca parte a laboratoarelor veterinare regionale, raionale, interraionale, precum și în structura laboratoarelor veterinare zonale. Sunt organizate și la centrele de supraveghere sanitară și epidemiologică, în spitale de boli infecțioase, spitale generale, unele spitale specializate (de exemplu, în tuberculoză, reumatologie, dermatovenerologie), și în policlinici. Laboratoarele bacteriologice fac parte din instituții de cercetare specializate. Laboratoarele bacteriologice sunt utilizate în mod constant pentru a confirma sau a stabili o evaluare a adecvării cărnii în scopuri alimentare conform VSE.

Obiectele cercetării în laboratoarele bacteriologice sunt:

1. Evacuări din organism: urină, fecale, spută, puroi, precum și sânge, material patologic și cadaveric.

2. Obiecte ale mediului exterior: apa, aer, pamant, spalaturi de la utilaje, furaje, materii prime tehnologice obtinute din sacrificarea animalelor de ferma.

3. Produse alimentare, mostre de carne și produse din carne, lapte și produse lactate care trebuie evaluate pentru a se potrivi în scopuri alimentare.

Spații de laborator bacteriologic și echipamente la locul de muncă

Specificul muncii microbiologice impune ca încăperea alocată laboratorului să fie izolată de camere de zi, unități alimentare și alte spații de producție non-core.

Laboratorul bacteriologic cuprinde: săli de laborator pentru cercetări bacteriologice și săli de utilitate; autoclavă sau sterilizare pentru dezinfecția deșeurilor și a ustensilelor contaminate; spălătorie echipată pentru spălat vase; bucatarie bacteriologica – pentru prepararea, imbutelierea, sterilizarea si depozitarea mediilor nutritive; vivarium pentru păstrarea animalelor de experiment; material pentru depozitarea reactivilor de rezervă, a vaselor, a echipamentelor și a echipamentelor de uz casnic.

Camerele de utilitate enumerate, ca unități structurale independente, fac parte din mari laboratoare bacteriologice. În laboratoarele mici, bucătăria bacteriologică și cea de sterilizare sunt combinate într-o singură cameră; Nu există încăpere specială pentru păstrarea animalelor de experiment.

Spațiile laboratoarelor microbiologice sunt împărțite în 2 zone în funcție de gradul de pericol pentru personal:

I. Zona „infecțioasă” - o cameră sau un grup de săli de laborator în care agenții biologici patogeni sunt manipulați și depozitați, personalul este îmbrăcat cu îmbrăcămintea de protecție adecvată.

II. Zona „curată” - spații în care nu se lucrează cu material biologic, personalul este îmbrăcat cu îmbrăcăminte personală.

Cele mai luminoase și mai spațioase încăperi sunt alocate sălilor de laborator în care se efectuează toate studiile bacteriologice. Peretii din aceste incaperi, la o inaltime de 170 cm fata de podea, sunt vopsiti in culori deschise cu vopsea in ulei sau acoperiti cu gresie. Podeaua este acoperită cu relin sau linoleum. Acest tip de finisaj vă permite să utilizați soluții dezinfectante atunci când curățați camera.

Fiecare cameră trebuie să aibă o chiuvetă cu apă curentă și un raft pentru o sticlă de soluție dezinfectantă.

Una dintre camere este dotată cu o cutie de sticlă - o cameră izolată cu vestibul (pre-box) pentru efectuarea lucrărilor în condiții aseptice. În cutie sunt așezate o masă pentru semănat și un scaun, iar deasupra locului de muncă sunt montate lămpi bactericide. Un dulap pentru depozitarea materialului steril este plasat în anticamera. Ferestrele și ușile camerelor din zona „contagioasă” trebuie sigilate. Ventilația de evacuare existentă din zona „infecțioasă” trebuie izolată de alte sisteme de ventilație și echipată cu filtre fine de aer.

Sala de laborator este dotata cu mese de tip laborator, dulapuri si rafturi pentru depozitarea echipamentelor, ustensilelor, vopselelor si reactivilor necesari muncii.

Organizarea corectă a locului de muncă pentru bacteriolog și asistent de laborator este foarte importantă pentru muncă. Mesele de laborator sunt instalate lângă ferestre. Atunci când le amplasați, trebuie să vă străduiți să vă asigurați că lumina cade în față sau din lateralul persoanei care lucrează, de preferință pe partea stângă, dar în niciun caz din spate. Este indicat ca încăperile de analiză, în special pentru microscopie, să aibă ferestre orientate spre nord sau nord-vest, deoarece munca necesită lumină uniformă, difuză. Iluminarea suprafeței meselor pentru lucru ar trebui să fie de 500 de lux. Pentru ușurința dezinfectării, suprafața meselor de laborator este acoperită cu plastic sau tapițată cu fier. Fiecărui angajat al laboratorului i se atribuie un loc de muncă separat de 150 x 60 cm.

Toate locurile de muncă sunt echipate cu articole necesare pentru munca bacteriologică de zi cu zi, a căror listă este dată în tabelul 1.

Tabelul 1.

Elemente necesare pentru lucrări bacteriologice

Numele articolului	Cantitate aproximativă
1. Set de vopsele și reactivi pentru vopsire
2. Lame de sticlă	25-50
3. Ochelari de acoperire	25-50
4. Ochelari cu gauri	5-10
5. Raft pentru eprubete
6. Ansa bacteriană
7. Spatule de sticla
8. Spatule metalice
9. Borcan de vată
10. Pipete gradate la 1, 2, 5, 10 ml	25 din fiecare volum
11. Pipete Pasteur	25-50
12. Penseta, foarfeca, bisturiu	Până la 1
13. Recipiente cu soluții dezinfectante
14. Microscop cu iluminator
15. Lupa 5´
16. Ungere cu ulei de imersie
17. Hârtie de filtru	3-5 foi
18. Borcan cu solutie dezinfectanta pentru pipete
19. Arzător cu alcool sau gaz
20. Instalatie pentru preparate de colorat
21. Clepsidra timp de 1 sau 2 minute	Până la 1
22. Para cu tub de cauciuc
23. Creion pe sticlă
24. Borcan de vată alcoolică
25. Ustensile sterile necesare	-

Dezinfectare

Dezinfecția este distrugerea microorganismelor din obiectele din mediu.

În laboratoarele de microbiologie, măsurile de dezinfecție sunt utilizate foarte larg. La terminarea lucrărilor cu material infecțios, angajații laboratoarelor bacteriologice efectuează dezinfecția preventivă a mâinilor și a locului de muncă.

Materialul patologic uzat (fecale, urină, spută, diverse tipuri de lichide, sânge) este dezinfectat înainte de a-l arunca în canalizare.

Pipetele gradate și Pasteur, spatule de sticlă și instrumentele metalice contaminate cu material patologic sau cu o cultură de microbi, imediat după utilizare, se coboară în borcane de sticlă cu o soluție dezinfectantă amplasată pe masă la fiecare loc de muncă.

Lamele și paharele de acoperire utilizate în muncă sunt, de asemenea, supuse dezinfectării obligatorii, deoarece chiar și un frotiu fix și colorat reține uneori microorganisme viabile care pot fi o sursă de contaminare în interiorul laboratorului. Numai acele vase în care au fost cultivate microorganisme nu sunt tratate cu dezinfectanți. Se pune in rezervoare metalice sau pubele, sigilat si supus autoclavarii.

Alegerea dezinfectantului, concentrația soluției acestuia, raportul dintre cantitatea de dezinfectant și materialul de dezinfectat, precum și durata perioadei de dezinfectare se stabilesc în funcție de condițiile specifice, ținând cont, în primul rând, de stabilitatea. a microbilor dezinfectați, gradul de contaminare așteptat, compoziția și consistența materialului în care se află .

Dezinfectarea mâinilor după lucrul cu material infecțios și când acesta intră în contact cu pielea. La terminarea lucrărilor cu material infecțios, mâinile sunt dezinfectate profilactic. Un șervețel de vată sau tifon se umezește cu o soluție de cloramină 1%, mai întâi mâna stângă, apoi mâna dreaptă se șterge în următoarea succesiune: dosul mâinii, suprafața palmară, spațiile interdigitale, paturile unghiale. Astfel, zonele cel mai puțin contaminate sunt tratate mai întâi, apoi se trece la zonele cele mai puternic contaminate ale pielii. Ștergeți-vă mâinile timp de 2 minute cu două tampoane succesive. Atunci când mâinile sunt contaminate cu o cultură a unui microb patogen sau material patologic, zonele contaminate ale pielii sunt mai întâi dezinfectate. În acest scop, acestea sunt acoperite timp de 3-5 minute cu vată umezită cu o soluție de cloramină 1%, apoi vata este aruncată într-un rezervor sau găleată cu material rezidual, iar mâinile sunt tratate cu un al doilea tampon în același scop. mod ca în timpul dezinfectării preventive. După tratamentul cu cloramină, spălați-vă mâinile cu apă caldă și săpun. Când se lucrează cu bacterii care formează spori, tratamentul manual se efectuează cu 1% cloramină activată. Dacă materialul infecțios intră în contact cu mâinile, expunerea la dezinfectant crește la 5 minute.

Sterilizarea

Sterilizarea, spre deosebire de dezinfecție, implică distrugerea tuturor microorganismelor vegetative și purtătoare de spori, patogene și nepatogene din obiectul sterilizat. Sterilizarea se realizează în diferite moduri: abur, aer cald uscat, fierbere, filtrare etc. Alegerea uneia sau alteia metode de sterilizare este determinată de calitatea și proprietățile microflorei obiectului sterilizat.

Pregatirea si sterilizarea echipamentelor de laborator

Înainte de sterilizare, sticlăria de laborator este spălată și uscată. Tuburile de testare, flacoanele, sticlele, saltelele și baloanele sunt închise cu dopuri din tifon de bumbac. Puneți capace de hârtie peste dopurile de pe fiecare vas (cu excepția eprubetelor).

Dopurile din cauciuc, plută și sticlă sunt sterilizate într-o pungă separată legată de gâtul vasului. Vasele Petri se sterilizeaza invelite in hartie, cate 1-10 bucati fiecare. pipete Pasteur 3-15 buc. învelit în hârtie de împachetat. O bucată de vată este plasată în partea superioară a fiecărei pipete pentru a preveni intrarea materialului în mediul înconjurător. La ambalarea pipetelor trebuie avută mare grijă pentru a nu rupe capetele sigilate ale capilarelor. În timpul funcționării, pipetele sunt scoase din pungă prin capătul superior.

Bumbacul de siguranță se introduce în partea superioară a pipetelor gradate, ca în pipetele Pasteur, și apoi se înfășoară în hârtie groasă, pretăiată în fâșii de 2-2,5 cm lățime și 50-70 cm lungime. capătul stâng este pliat și înfășurat vârful pipetei, apoi, rotind pipeta, înfășurați o fâșie de hârtie pe ea. Pentru a preveni desfacerea hârtiei, capătul opus este răsucit sau lipit. Volumul pipetei împachetate este scris pe hârtie. Dacă există cutii de creioane, pipetele gradate sunt sterilizate în ele.

Sticla de laborator este sterilizată:

a) căldură uscată la o temperatură de 180°C, respectiv 160°C, timp de 1 oră și 150 de minute.

b) în autoclavă la o presiune de 1,5 atm. timp de 60 de minute, pentru a distruge microflora sporilor - 90 de minute la 2 atm.

Sterilizarea seringilor. Seringile sunt sterilizate sub formă dezasamblată: separat cilindrul și pistonul într-o soluție de bicarbonat de sodiu 2% timp de 30 de minute. Când se lucrează cu microfloră purtătoare de spori, sterilizarea se efectuează într-o autoclavă la 132±2°C (2 atm.) timp de 20 de minute, la 126±2°C (1,5 atm.) - 30 minute. Seringa sterilizată este asamblată după ce s-a răcit, se introduce un piston în cilindru, se pune un ac, după ce s-a scos mai întâi dornul din acesta. Acul, cilindrul și pistonul se iau cu penseta, care se sterilizează împreună cu seringa.

Sterilizarea instrumentelor metalice. Instrumentele metalice (foarfece, bisturii, pensete etc.) se sterilizeaza intr-o solutie de bicarbonat de sodiu 2%, care previne rugina si pierderea claritatii. Se recomandă să înfășurați lamele bisturiilor și foarfecelor cu vată înainte de a le scufunda în soluție.

Sterilizarea anselor bacteriene. Buclele bacteriene din sârmă de platină sau nicrom sunt sterilizate în flacăra unui arzător cu alcool sau gaz. Această metodă de sterilizare se numește calcinare sau flambare.

Bucla este plasată în poziție orizontală în partea inferioară, cea mai rece a flăcării arzătorului pentru a preveni stropirea materialului patogen ars. După ce arde, bucla este mutată într-o poziție verticală, mai întâi partea inferioară, apoi partea superioară a firului este încălzită la roșu și suportul buclei este ars. Calcinarea durează în general 5-7 secunde.

Pregatire pentru sterilizarea si sterilizarea hartiei, tifonului si vatei. Vata, tifon, hârtie de filtru sunt sterilizate într-un cuptor cu căldură uscată la o temperatură de 160°C în decurs de o oră de la momentul în care termometrul citește această temperatură sau într-o autoclavă la o presiune de 1 atm. în 30 de minute.

Înainte de sterilizare, hârtia și tifonul sunt tăiate în bucăți, iar vata este rulată în bile sau tampoane de dimensiunea necesară. După aceasta, fiecare tip de material separat, una sau mai multe bucăți, este înfășurat în hârtie groasă. Dacă pachetul se rupe, materialul sterilizat trebuie sterilizat din nou, deoarece sterilitatea acestuia este afectată.

Sterilizarea mănușilor și a altor produse din cauciuc. Produsele din cauciuc (mănuși, tuburi etc.) contaminate cu forma vegetativă a microbilor se sterilizează prin fierbere într-o soluție de bicarbonat de sodiu 2% sau curgerea cu abur timp de 30 de minute; când este contaminat cu microfloră purtătoare de spori, în autoclavă la o presiune de 1,5-2 atm. timp de 30 sau 20 de minute. Înainte de sterilizare, mănușile de cauciuc sunt stropite cu talc în interior și în exterior pentru a preveni lipirea lor. Se pune tifon între mănuși. Fiecare pereche de manusi este invelita separat in tifon si in aceasta forma este pusa in cutii.

Sterilizarea culturilor microbiene patogene. Eprubete și pahare care conțin culturi microbiene care nu sunt necesare pentru lucrări ulterioare sunt plasate într-un rezervor metalic, capacul este sigilat și supus sterilizării. Culturile de microbi patogeni, forme vegetative, sunt ucise într-o autoclavă timp de 30 de minute la o presiune de 1 atm. Livrarea rezervoarelor pentru sterilizare în autoclavă se efectuează de către o persoană special desemnată împotriva unei semnături. Regimul de sterilizare se consemnează într-un jurnal special. La distrugerea culturilor de microbi din grupele I și II de patogenitate, precum și a materialelor contaminate sau suspectate a fi contaminate cu agenți patogeni alocați acestor grupe, rezervoarele cu material rezidual sunt transferate pe tăvi metalice cu laturile înalte în prezența unei persoane însoțitoare autorizate să lucrați cu materiale infecțioase.

Tipuri de sterilizare

Sterilizarea prin fierbere. Sterilizarea prin fierbere se realizează într-un sterilizator. Apa distilată este turnată în sterilizator, deoarece apa de la robinet formează depuneri. (Obiectele din sticlă se scufundă în apă rece, obiectele metalice în apă fierbinte cu adaos de bicarbonat de sodiu). Articolele de sterilizat se fierb la foc mic timp de 30-60 de minute. Începutul sterilizării este considerat a fi momentul în care apa fierbe în sterilizator. La sfârșitul fierberii, instrumentele sunt luate cu pensete sterile, care sunt fierte împreună cu alte articole.

Sterilizare la căldură uscată. Sterilizarea la căldură uscată se realizează într-un cuptor Pasteur. Materialul pregatit pentru sterilizare este asezat pe rafturi astfel incat sa nu intre in contact cu peretii. Dulapul este închis și apoi încălzirea este pornită. Durata sterilizării la temperatura de 150°C este de 2 ore, la 165°C - 1 oră, la 180°C - 40 minute, la 200°C - 10-15 minute (la 170°C hârtia și vata se rotesc galben, iar la temperaturi mai ridicate carbonizat). Începutul sterilizării este considerat a fi momentul în care temperatura din cuptor atinge înălțimea dorită. La sfârșitul perioadei de sterilizare, cuptorul este oprit, dar ușile dulapului nu se deschid până când nu se răcesc complet, deoarece aerul rece care intră în dulap poate cauza formarea de fisuri pe vasele fierbinți.

Sterilizare cu abur sub presiune. Sterilizarea cu abur sub presiune se realizează într-o autoclavă. Autoclava este formată din două boilere introduse una în alta, o carcasă și un capac. Cazanul exterior se numește cameră apă-abur, cazanul interior se numește cameră de sterilizare. Aburul este generat într-un cazan de apă-abur. Materialul de sterilizat se pune in cazanul interior. Există mici găuri în partea de sus a cazanului de sterilizare prin care trece aburul din camera de apă-abur. Capacul autoclavei este înșurubat ermetic pe carcasă. Pe lângă principalele părți enumerate, autoclavul are o serie de părți care îi reglează funcționarea: manometru, sticlă apometrului, supapă de siguranță, supape de evacuare, supape de aer și condens. Manometrul este utilizat pentru a determina presiunea creată în camera de sterilizare. Presiunea atmosferică normală (760 mm Hg) este considerată zero, prin urmare, într-o autoclavă inactivă, acul manometrului este la zero. Există o anumită relație între citirile manometrului și temperatură (Tabelul 2).

Masa 2.

Relația dintre citirile manometrului și temperatura de fierbere a apei

Linia roșie de pe scara manometrului determină presiunea maximă de funcționare care este permisă în autoclavă. Supapa de siguranță servește pentru a proteja împotriva creșterii excesive a presiunii. Este setat la o anumită presiune, adică presiunea la care trebuie efectuată sterilizarea; atunci când acul manometrului trece linia, supapa autoclavei se deschide automat și eliberează excesul de abur, încetinind astfel creșterea ulterioară a presiunii.

Pe peretele lateral al autoclavei se află un pahar de măsurare a apei care arată nivelul apei din cazanul apă-abur. Există două linii orizontale pe tubul de sticlă a contorului de apă - inferior și superior, indicând nivelul admisibil de apă inferior și superior în camera de apă-abur, respectiv. Supapa de aer este concepută pentru a elimina aerul din camerele de sterilizare și apă-abur la începutul sterilizării, deoarece aerul, fiind un slab conductor de căldură, perturbă regimul de sterilizare. În partea inferioară a autoclavei există un robinet de condensare pentru a elibera camera de sterilizare de condensul format în timpul perioadei de încălzire a materialului sterilizat.

Reguli pentru lucrul cu o autoclavă. Înainte de a începe lucrul, inspectați autoclavul și echipamentul de control. În autoclavele cu control automat al aburului, săgețile de pe manometrul electric de vacuum al camerei de apă-abur sunt setate în conformitate cu modul de sterilizare: săgeata de jos este setată la 0,1 atm. inferior, superior - cu 0,1 atm. peste presiunea de lucru, camera de apă-abur este umplută cu apă până la marcajul superior al paharului de măsurare. În perioada de umplere cu apă, robinetul de pe conducta prin care intră aburul în cameră este ținut deschis pentru a permite ieșirea liberă a aerului din cazan. Camera de sterilizare a autoclavei este încărcată cu materialul de sterilizat. După aceasta, capacul (sau ușa) autoclavei este închis, bine fixat cu o încuietoare centrală sau șuruburi; pentru a evita deformarea, înșurubați șuruburile în cruce (de-a lungul diametrului). Apoi porniți sursa de încălzire (curent electric, abur), închizând supapa de pe conducta care leagă sursa de abur la camera de sterilizare. Odată cu începutul formării aburului și creării presiunii în camera de apă-abur, se efectuează purjarea (eliminarea aerului din cazanul de sterilizare). Metoda de îndepărtare a aerului este determinată de designul autoclavului. La început, aerul iese în porțiuni separate, apoi apare un flux neted, continuu de abur, care indică faptul că aerul a fost complet deplasat din camera de sterilizare. După îndepărtarea aerului, robinetul este închis și începe o creștere treptată a presiunii în camera de sterilizare.

Începutul sterilizării este considerat a fi momentul în care acul manometrului indică presiunea setată. După aceasta, intensitatea de încălzire este redusă, astfel încât presiunea din autoclavă să rămână la același nivel pentru timpul necesar. La sfârșitul timpului de sterilizare, încălzirea este oprită. Închideți supapa din conducta care furnizează abur în camera de sterilizare și deschideți supapa de pe conducta de condensare (în jos) pentru a reduce presiunea aburului în cameră. După ce acul manometrului scade la zero, slăbiți încet dispozitivele de prindere și deschideți capacul autoclavei.

Temperatura și durata sterilizării sunt determinate de calitatea materialului care se sterilizează și de proprietățile microorganismelor cu care este infectat.

Controlul temperaturii în camera de sterilizare se efectuează periodic prin teste bacteriologice. Biotestele sunt produse de laboratoarele bacteriologice ale Centrului de Științe Sensibile. Dacă aceste teste nu sunt trecute, se verifică starea tehnică a autoclavei.

Sterilizarea cu abur curgător. Sterilizarea cu abur care curge se efectuează într-un aparat de abur Koch sau într-o autoclavă cu capacul deșurubat și supapa de evacuare deschisă. Aparatul Koch este un cilindru metalic gol cu ​​fund dublu. Spațiul dintre plăcile superioare și inferioare este umplut 2/3 cu apă (există un robinet pentru a scurge apa rămasă după sterilizare). Capacul aparatului are un orificiu în centru pentru un termometru și câteva orificii mici pentru ca aburul să iasă. Materialul de sterilizat este încărcat liber în camera dispozitivului pentru a asigura contactul maxim cu aburul. Începutul sterilizării este considerat a fi timpul din momentul în care apa fierbe și aburul intră în camera de sterilizare. Într-un aparat cu abur fluid, mediile nutritive sunt în principal sterilizate, ale căror proprietăți se modifică la temperaturi peste 100°C. Sterilizarea cu abur curgător trebuie repetată, deoarece o singură încălzire la o temperatură de 100°C nu asigură dezinfecția completă. Această metodă se numește sterilizare fracționată: materialul sterilizat este tratat cu abur curgător timp de 30 de minute pe zi, timp de 3 zile. În intervalele dintre sterilizări, materialul este păstrat la temperatura camerei pentru ca sporii să germineze în forme vegetative, care mor în timpul încălzirii ulterioare.

Tindalizare. Tyndalizarea este sterilizarea fracționată folosind temperaturi sub 100°C, propusă de Tyndall. Materialul de sterilizat se incalzeste intr-o baie de apa dotata cu termostat timp de o ora la temperatura de 60-65°C timp de 5 zile sau la 70-80°C timp de 3 zile. În intervalele dintre încălzire, materialul tratat este menținut la o temperatură de 25°C pentru ca sporii să germineze în forme vegetative, care mor în timpul încălzirii ulterioare. Tindalizarea este utilizată pentru a defertiliza mediile nutritive care conțin proteine.

Sterilizare mecanică cu ultrafiltre bacteriene. Filtrele bacteriene sunt folosite pentru a elibera lichidul de bacteriile conținute în acesta, precum și pentru a separa bacteriile de viruși, fagi și exotoxine. Virușii nu sunt reținuți de filtrele bacteriene și, prin urmare, ultrafiltrarea nu poate fi considerată sterilizare în sensul acceptat al cuvântului. Pentru fabricarea ultrafiltrelor se folosesc materiale fin poroase (caolin, azbest, nitroceluloză etc.) care pot prinde bacterii.

Filtrele de azbest (filtrele Seitz) sunt plăci de azbest cu o grosime de 3-5 mm și un diametru de 35 și 140 mm pentru filtrarea unor volume mici și mari de lichid. În țara noastră, filtrele de azbest sunt fabricate în două mărci: „F” (filtrare), care rețin particulele în suspensie, dar lasă trecerea bacteriilor, și „SF” (sterilizant), mai dens, reținând bacteriile. Înainte de utilizare, filtrele de azbest sunt montate în dispozitive de filtrare și împreună cu acestea sunt sterilizate în autoclavă. Filtrele de azbest sunt folosite o singură dată. Ultrafiltrele cu membrana sunt realizate din nitroceluloza si sunt discuri albe cu diametrul de 35 mm si grosimea de 0,1 mm.

Filtrele bacteriene diferă în dimensiunea porilor și sunt desemnate prin numere de serie (Tabelul 3).

Tabelul 3.

Filtre bacteriene

Imediat înainte de utilizare, filtrele cu membrană sunt sterilizate prin fierbere. Filtrele se pun în apă distilată, se încălzesc la o temperatură de 50-60°C, pentru a nu se răsuci, și se fierb la foc mic timp de 30 de minute, schimbând apa de 2-3 ori. Pentru a evita deteriorarea, filtrele sterilizate sunt scoase din sterilizator cu o pensetă flambată și răcită, cu vârfuri netede.

Pentru filtrarea lichidelor, filtrele bacteriene sunt montate în dispozitive speciale de filtrare, în special, un filtru Seitz.

Este format din 2 părți: una superioară, în formă de cilindru sau pâlnie, și o parte inferioară de susținere a aparatului, cu o așa-numită masă de filtrare realizată dintr-o plasă metalică sau o placă ceramică curată, pe care o membrană sau azbest. se pune filtrul. Partea de susținere a aparatului are forma unei pâlnii, a cărei parte conică este situată în dopul de cauciuc al gâtului balonului Bunsen. În stare de funcționare, partea superioară a dispozitivului este fixată de partea inferioară cu șuruburi. Înainte de a începe filtrarea, joncțiunile diferitelor părți ale instalației sunt umplute cu parafină pentru a crea o etanșare. Tubul de evacuare al balonului este conectat cu un tub de cauciuc cu pereți groși la o pompă cu jet de apă, ulei sau bicicletă. După aceasta, lichidul filtrat este turnat în cilindrul sau pâlnia aparatului și pompa este pornită, creând un vid în vasul de primire. Ca urmare a diferenței de presiune rezultată, lichidul filtrat trece prin porii filtrului în recipient. Microorganismele rămân pe suprafața filtrului.

Prepararea frotiurilor

Pentru a studia microorganismele sub formă colorată, se face un frotiu pe o lamă de sticlă, se usucă, se fixează și apoi se colorează.

Materialul de testat este distribuit într-un strat subțire pe suprafața unei lame de sticlă bine degresate.

Frotiurile se prepară din culturi microbiene, material patologic (sputa, puroi, urină, sânge etc.) și din organele cadavrelor.

Tehnica de preparare a frotiurilor este determinată de natura materialului studiat.

Prepararea frotiurilor din culturi microbiene cu mediu nutritiv lichid și din material patologic lichid (urină, lichid cefalorahidian etc.). O picătură mică de lichid de testare este aplicată cu o buclă bacteriană pe o lamă de sticlă și, folosind mișcări circulare, buclele sunt distribuite într-un strat uniform sub forma unui cerc cu diametrul unei monede penny.

Pregătirea frotiurilor de sânge. O picătură de sânge este aplicată pe lama de sticlă, mai aproape de unul dintre capete. A doua - sticlă șlefuită, care ar trebui să fie mai îngustă decât sticla obiectului, este așezată pe prima la un unghi de 45° și adusă la o picătură de sânge până când intră în contact cu aceasta. După ce sângele s-a răspândit de-a lungul marginii lustruite, se face o mișcare de alunecare cu sticla de la dreapta la stânga, distribuind uniform sângele într-un strat subțire pe toată suprafața sticlei. Grosimea cursei depinde de unghiul dintre ochelari: cu cât unghiul este mai ascuțit, cu atât cursa este mai subțire. Un frotiu pregătit corespunzător are o culoare roz deschis și aceeași grosime pe tot parcursul.

Se prepară o picătură groasă. O picătură de sânge este aplicată în mijlocul lamei folosind o pipetă Pasteur, sau sticla este aplicată direct pe picătura de sânge proeminentă. Sângele aplicat pe sticlă este uns cu o buclă bacteriană, astfel încât diametrul frotiului rezultat să corespundă mărimii unei monede penny. Paharul este lăsat în poziție orizontală până când sângele se usucă. Sângele din „picătura groasă” este distribuit neuniform, formând o margine neuniformă.

Pregătirea unui frotiu dintr-un material vâscos (sputa, puroi). Sputa sau puroiul aplicat pe diapozitiv mai aproape de marginea îngustă este acoperit cu o altă lamă. Ochelarii sunt ușor apăsați unul împotriva celuilalt.

După aceasta, capetele libere ale paharului sunt prinse cu degetele 1 și 2 ale ambelor mâini și mutate în direcții opuse, astfel încât, atunci când se mișcă, ambii ochelari se potrivesc strâns unul cu celălalt. Rezultatul este pete cu material distribuit uniform care ocupă o suprafață mare.

Prepararea frotiurilor din culturi din medii nutritive solide. O picătură de apă se pune în mijlocul unei lame de sticlă curată, bine unsă, și se introduce în ea o buclă bacteriană cu o cantitate mică din cultura microbiană studiată, astfel încât picătura de lichid să devină ușor tulbure. După aceasta, excesul de material microbian de pe buclă este ars într-o flacără și frotiul este pregătit conform metodei descrise mai sus.

Pregătirea frotiurilor din organe și țesuturi. În scopul dezinfectării, suprafața organului este cauterizată cu fălcile încălzite ale pensetei, se face o incizie în acest loc și se decupează o bucată mică de țesut din adâncime cu foarfece ascuțite, care este plasată între două lame de sticlă. . Apoi procedați în același mod ca atunci când pregătiți un frotiu din puroi și spută. Dacă țesutul organului este dens, atunci se face o răzuire din adâncimea inciziei cu un bisturiu. Materialul obținut prin răzuire este distribuit într-un strat subțire pe suprafața sticlei cu bisturiu sau buclă bacteriană.

Pentru a studia poziția relativă a elementelor de țesut și a microorganismelor din acesta, se fac frotiuri de amprentă. Pentru a face acest lucru, o bucată mică de țesut decupată din mijlocul organului se apucă cu penseta și se aplică succesiv de mai multe ori cu suprafața tăiată pe o lamă de sticlă, obținându-se astfel o serie de frotiuri-amprente.

Uscarea și fixarea frotiurilor. Frotiul preparat pe o lamă de sticlă se usucă la aer și se fixează după uscare completă. Când este fixat, frotiul este fixat pe suprafața lamei de sticlă și, prin urmare, în timpul colorării ulterioare a preparatului, celulele microbiene nu sunt spălate. În plus, celulele microbiene ucise se colorează mai bine decât cele vii.

Există o metodă fizică de fixare, care se bazează pe efectul temperaturii ridicate asupra celulei microbiene, și metode chimice, care implică utilizarea agenților care provoacă coagularea proteinelor. Nu înregistrați frotiuri care conțin agenți patogeni din grupele de patogenitate I-II peste o flacără.

Metoda fizică de fixare. Lama cu preparatul este luată cu penseta sau degetele I și II ale mâinii drepte de coaste cu o lovitură în sus și se mișcă lin de 2-3 ori peste partea superioară a flăcării arzătorului. Întregul proces de fixare nu trebuie să dureze mai mult de 2 secunde. Fiabilitatea fixării este verificată prin următoarea tehnică simplă: suprafața fără pete a unei lame de sticlă este aplicată pe suprafața din spate a mâinii stângi. Când frotiul este fixat corect, paharul trebuie să fie fierbinte, dar să nu provoace o senzație de arsură.

Metoda de fixare chimică. Pentru a fixa frotiurile, se folosesc și substanțele chimice și compușii enumerați în Tabelul 4.

Tabelul 4.

Substanțe pentru fixarea chimică

Lama cu frotiu uscat este scufundată într-o sticlă cu un agent de fixare și apoi uscată în aer.

Tunsele de colorat

Tehnica de vopsire cu frotiu. Pentru colorarea frotiurilor se folosesc soluții de vopsea sau hârtie de colorat, așa cum a propus A.I. Sinev. Simplitatea pregătirii, ușurința în utilizare, precum și capacitatea de a stoca hârtie de cerneală pentru o perioadă nedeterminată de timp au stat la baza utilizării lor pe scară largă în diferite metode de colorare.

Tinte de colorat cu hârtie de cerneală. Pe preparatul uscat și fixat se aplică câteva picături de apă și se pun bucăți de hârtie colorate de 2´2 cm.Pe toată durata colorării hârtia trebuie să rămână umedă și să se potrivească strâns pe suprafața sticlei. La uscare, hârtia este umezită suplimentar cu apă. Durata de colorare a frotiului este determinată de metoda de colorare. La sfârșitul colorării, hârtia se îndepărtează cu grijă cu o pensetă, iar frotiul se spală cu apă de la robinet și se usucă la aer sau cu hârtie de filtru.

Colorarea frotiurilor cu soluții de colorant. Vopseaua se aplică pe preparatul uscat și fixat cu o pipetă într-o astfel de cantitate încât să acopere întregul frotiu. La colorarea frotiurilor cu soluții concentrate de coloranți (Ziehl carbol fuchsin, gențiană carbolic sau cristal violet), colorarea se face prin hârtie de filtru care reține particulele de colorant: o bandă de hârtie de filtru este așezată pe un frotiu fix și se toarnă o soluție de colorant. .

Pentru examinarea microscopică, frotiurile preparate, uscate și fixate, sunt colorate. Colorarea poate fi simplă sau complexă. Pictura simplă presupune aplicarea unei vopsele pe un frotiu pentru o anumită perioadă de timp. Cel mai adesea, pentru colorarea simplă, se folosesc alcool-apă (1:10) Pfeiffer fuchsin, albastru de metilen Leffler și safranină. Eozina, ca o vopsea acidă, este folosită numai pentru colorarea citoplasmei celulelor și colorarea fundalului. Fuchsinul acid este complet nepotrivit pentru colorarea bacteriilor.

fotografie de pe site-ul lentachel.ru

Cu doar o sută de ani în urmă, contaminarea în timpul cercetării științifice era considerată practic inevitabilă. Mulți oameni de știință își pun corpurile în pericol de moarte, studiind microbii și bacteriile despre natura cărora nu cunoșteau nimic. Astăzi, majoritatea microorganismelor periculoase care ne înconjoară au fost descrise și studiate; în plus, pentru laboratoarele bacteriologice sunt furnizate produse medicale speciale, a căror utilizare cu 99% probabilitate protejează cercetătorii de orice riscuri profesionale.

Toate obiectele cu care lucrează angajații laboratorului bacteriologic sunt saturate cu microfloră patogenă. Pentru a menține un mediu interior sănătos și pentru a evita contactul direct cu materialul contaminat, se utilizează mobilier, îmbrăcăminte și ustensile cu barieră îmbunătățită și proprietăți antimicrobiene.

Dulapuri și cutii din sticlă și metal închise ermetic, mesele de laborator convenabile pentru echipamente de dezinfecție, sterilizare și autoclave și un frigider încuiat sunt articole care asigură siguranța persoanelor care efectuează cercetări asupra probelor infectate.

Toate recipientele folosite pentru depozitarea probelor: baloane, pahare gradate sunt închise ermetic pentru a evita răspândirea microbilor în aerul din laborator.

Pentru a face recipiente, se folosește sticlă specială care nu poate fi spartă sau plastic de înaltă rezistență. Pereții dubli, o formă specială a fundului stabil, elementele de cauciuc pe capace, tăvi și cuve creează cele mai bune condiții pentru izolarea vecinilor atât de periculoși precum meningococii, streptococii, stafilococii, bacilii și clostridiile.

Înainte de a începe cercetările, personalul își îmbracă îmbrăcăminte specială: halat de protecție, mască, ochelari de protecție. Pentru a lucra cu substanțe foarte periculoase, se folosesc șorțuri cauciucate sau halate speciale cu impregnare împotriva umezelii.

Tratarea corectă în timp util a aerului cu iradiatoare ultraviolete și lămpi bactericide, utilizarea modificărilor dovedite ale spălării, furnizarea tuturor angajaților cu un set complet de îmbrăcăminte de protecție este un standard general acceptat, abaterea de la care este administrativă și în caz de consecințe grave. , se pedepsește penal.

Echipamentul cuprinzător și punerea în aplicare a tuturor măsurilor de precauție ajută la păstrarea sănătății angajaților, la reducerea morbidității profesionale și la asigurarea unei productivități ridicate a cercetării: s-a remarcat că utilizarea unui echipament de protecție fiabil și dovedit reduce anxietatea și promovează acțiuni mai rapide și mai eficiente.

Laborator bacteriologic

Laboratorul bacteriologic a fost separat ca divizie independentă în 1996.

Şef - Candidat la Ştiinţe Medicale, bacteriolog de cea mai înaltă categorie Polikarpova Svetlana Veniaminovna

DOMENIILE PRIORITARI DE ACTIVITATE

În laboratorul bacteriologic se efectuează următoarele tipuri de analize:

Examenul bacteriologic al sângelui (hemocultura) și lichidului cefalorahidian;
- examen bacteriologic al sputei, aspiratului traheal, apei de lavaj bronșic;
- examen bacteriologic al scurgerii din diverse focare de inflamatie: amigdalita, faringita, otita, sinuzita etc.;
- examenul bacteriologic al punctatelor, revărsărilor, exsudatelor;
- examinarea bacteriologică a secreției din membrana mucoasă a faringelui și a nasului pentru microflora condiționată patogenă;
- examen bacteriologic al urinei pentru determinarea gradului de bacteriurie;
- examenul bacteriologic al secretiilor genitale pentru microflora oportunista;
- examen bacteriologic al scurgerii conjunctivale;
- examinarea fecalelor pentru flora intestinală patogenă;
- examen bacteriologic al scaunului pentru disbacterioză;
- examen bacteriologic al laptelui matern;
- determinarea calitativă a antigenului streptococic grupa B;
- determinarea calitativă a antigenului Helicobacter pylori în fecalele umane;
- determinarea calitativă a antigenului toxinelor A și B Clostridium difficile în fecalele umane;
- evaluarea sensibilității/rezistenței microorganismelor izolate la antibiotice.

REALIZĂRI

În laboratorul bacteriologic se efectuează cercetări pentru izolarea, identificarea și determinarea sensibilității la antibiotice a microorganismelor patogene și condiționat patogene izolate din diverse biomateriale.

Activitatea laboratorului, bazată pe principiile microbiologiei clinice clasice, a introdus noi metode de cercetare care se bazează pe cele mai recente realizări ale tehnologiilor genetice moleculare.

Laboratorul bacteriologic realizează studii microbiologice care îndeplinesc standardele moderne rusești și internaționale.

În fiecare an, personalul de laborator efectuează examinări bacteriologice a peste 10.000 de pacienți internați în secțiile spitalului, a 6.000 de pacienți și nou-născuți în maternitate, a peste 5.000 de pacienți ai CDC și a clinicilor din Districtul Administrativ de Est, efectuând peste 45.000 de teste microbiologice pe fiecare. an.

Pe baza laboratorului s-a dezvoltat și este în continuă modernizare un „Stație de lucru automatizată pentru microbiolog, epidemiolog și chimioterapeut”, care include două programe: MICROB-AUTOMAT și SISTEM DE MONITORIZARE MICROBIOLOGIC „MICROB” (SMM). Programele ne permit să rezolvăm principalele sarcini ale serviciului de microbiologie spitalicească: monitorizarea continuă a peisajului microbian și a nivelului rezistenței sale la antibiotice pentru a prescrie antibioticoterapie adecvată și depistarea în timp util a cazurilor de infecții asociate asistenței medicale (IAA).

Pentru a asigura calitatea corespunzătoare a cercetării microbiologice, în laborator sunt introduse următoarele:

• Sistem de management al calitatii conform standardului GOST R ISO 15189 -15

„Laboratoare medicale. Cerințe speciale de calitate și competență”;

• Bazele A SE SPRIJINI tehnologii (Lean manufacturing) - abordări ale managementului de laborator care vizează îmbunătățirea calității muncii prin reducerea pierderilor: materiale, financiare, de timp;
• Sistem 5S- un instrument de lean manufacturing - organizarea unui spațiu de lucru pentru a crea condiții optime pentru efectuarea operațiunilor, menținerea ordinii, curățeniei, curățeniei, economisirii de timp și energie.

Din 2014, laboratorul participă la programul internațional de monitorizare a rezistenței la antibiotice în țările din Asia Centrală și Europa de Est, organizat de OMS(UK NEQAS) Laboratorul participă la evaluarea externă a calității cercetării de laborator în calitate de laborator expert în secțiunea „Microbiologie clinică” (FSVOK).

De mulți ani, bacteriologii desfășoară cicluri de îmbunătățire a certificării „Metode moderne de cercetare în microbiologie clinică” la spital pentru lucrătorii cu studii medii secundare din instituțiile medicale din Moscova.

HIGH TECH

• Introducerea metodelor genetice moleculare în diagnosticul bolilor infecțioase - metoda reacției în lanț a polimerazei (PCR) în timp real;

• determinarea principalelor mecanisme de dezvoltare și răspândire a rezistenței bacteriene la medicamentele antibacteriene folosind metode fenotipice și genotipice;

• utilizarea metodelor imunocromatografice exprese (IMCT) pentru diagnosticul etiologic al agenților patogeni ai bolilor infecțioase și inflamatorii;

• crearea și implementarea unui modul electronic de opinii ale experților pentru bacteriologi, medici curant, farmacologi clinici pentru interpretarea rezultatelor determinării sensibilității microorganismelor la medicamentele antimicrobiene și identificarea mecanismelor de rezistență.

ACTIVITATE ŞTIINŢIFICĂ

Pe durata existenței catedrei, în laborator au fost finalizate 2 lucrări de doctorat. Angajații departamentului fac în mod regulat prezentări la congrese, conferințe, simpozioane și seminarii internaționale, rusești, din oraș și publică în mod regulat în publicații științifice și practice.

Laboratorul bacteriologic cooperează:

• FSBI „Centrul Federal de Cercetare pentru Epidemiologie și Microbiologie”

lor. Academician de onoare N.F. Gamaleya al Ministerului Sănătății al Federației Ruse”;

• FGAU „Centrul științific pentru sănătatea copiilor” al Ministerului Sănătății al Federației Ruse;
• Instituția bugetară de stat federală „Centrul de cercetare genetică medicală” a Academiei Ruse de Științe Medicale;
• Instituția Bugetară Federală Institutul Central de Cercetare de Epidemiologie din Rospotrebnadzor;
• FBUN Moscova Institutul de Cercetare de Epidemiologie și Microbiologie numit după. G.N.Gabrichevsky Rospotrebnadzor;
• Departamentul de Medicină a Reproducerii și Chirurgie al Universității de Stat de Medicină și Stomatologie din Moscova, numit după A.I. Evdokimov (MGMSU);

Lucrările științifice se desfășoară în următoarele domenii:

• diagnosticul microbiologic și prevenirea infecțiilor asociate asistenței medicale (HAI). Ecologia microbiană în unitățile de îngrijire a sănătății.
• caracteristicile diagnosticului microbiologic al infecțiilor tractului respirator inferior la pacienții cu fibroză chistică;
• studierea mecanismelor de rezistență a enterobacteriilor la medicamentele antimicrobiene;
• dezvoltarea algoritmilor pentru diagnosticarea rapidă a purtării streptococilor de grup B la gravide și nou-născuți.

ARTICOLE, CONFERINȚE

2016

ECHIPAMENT DE LABORATOR

În prezent, laboratorul bacteriologic este dotat cu echipamente moderne:

• Analizor automat de hemocultură VersaTREK(TREK Diagnostic Systems) - capacitatea de a diagnostica sepsisul în cel mai scurt timp posibil - 90% din rezultatele pozitive sunt detectate în primele 24 de ore. Timpul maxim pentru un protocol de cercetare este de 5
• Analizor bacteriologic pentru identificarea și determinarea sensibilității microorganismelor Phoenix 100(BD) - timpul mediu pentru obținerea rezultatelor de identificare este de 6-8 ore, timpul mediu pentru obținerea rezultatelor sensibilității antimicrobiene este de 12-16 ore.
• Analizor semi-automat iEMSCititor(ThermoLabsystems), care permite nu numai identificarea și determinarea sensibilității microorganismelor, ci și rezolvarea multor probleme practice și științific-practice: determinarea contaminării microbiene a urinei și a altor biomateriale, efectuarea monitorizării de laborator a eficacității terapiei antibacteriene, evaluarea activității bactericide a serului sanguin și, de asemenea, cercetarea modelelor cinetice de creștere microbiană.

Sistemul informatic al laboratorului ALISA a fost introdus în activitatea laboratorului; fiecare post de lucru al unui bacteriolog este computerizat.

COLECTIV

Pivkina Nadezhda Vasilievna

Medic-bacteriolog de cea mai înaltă categorie, are pregătire profesională în specialitatea „Bacteriologie”. Membru al Asociației Internaționale a Microbiologilor Clinici și Chimioterapeuților Antimicrobieni (IACMAC), membru al Federației de Medicină de Laborator (FLM). Este coautor al multor articole științifice despre problemele microbiologiei clinice. Experiență de muncă în specialitate din 1992.

Timofeeva Olga Gennadievna

Bacteriolog de cea mai înaltă categorie, a efectuat un stagiu în specialitatea „Bacteriologie” și a urmat o pregătire avansată în tema „Analiză PCR în laboratoarele de diagnostic clinic”. Membru al Federației de Medicină de Laborator (FLM). În prezent lucrează la scrierea unei teze de doctorat. Are publicații despre probleme de microbiologie clinică. Experiență de lucru în specialitate din 1996.

Bondarenko Natalia Alexandrovna

Bacteriolog de prima categorie, membru al Federației de Medicină de Laborator (FLM). Este coautor al multor articole științifice despre problemele microbiologiei clinice. Experiență de muncă în specialitate din 1988.

Balina Valeria Vladimirovna

Bacteriolog, medic diagnostic de laborator clinic. Și-a efectuat stagiul de practică în specialitatea „Diagnostic de laborator clinic” și are pregătire profesională în specialitatea „Bacteriologie”. A promovat îmbunătățirea calificării la tema „Metode genetice moleculare în diagnosticul bolilor infecțioase”. Membru al Federației de Medicină de Laborator (FLM). Experiență de lucru în specialitate din 2013.

Personalul de asistenta medicala

Laboratorul angajeaza:

• 1 tehnolog medical
• 1 tehnician de laborator medical
• 5 asistenți medicali de laborator
• 1 asistent de laborator
• Toți angajații au cea mai înaltă categorie de calificare.

Pagina 5 din 91

Pentru a efectua studii microbiologice, există laboratoare bacteriologice la spitale și clinici sau independent de acestea. Aceștia primesc pentru cercetare diverse materiale obținute de la persoane bolnave (sputa, urină, puroi, fecale, sânge, lichid cefalorahidian etc.). În plus, există și laboratoare sanitare și bacteriologice în care apa, aerul și produsele alimentare sunt supuse controlului bacteriologic.
Rolul laboratoarelor bacteriologice este mare și în prevenirea bolilor infecțioase. Unii oameni, după ce suferă de o boală infecțioasă (febră tifoidă, dizenterie, difterie etc.), continuă să elibereze microbi patogeni în mediu. Aceștia sunt așa-numiții purtători de bacterii. Purtătorii de bacterii se găsesc și în rândul oamenilor sănătoși. Prin identificarea unor astfel de purtători de bacterii, laboratoarele bacteriologice ajută autoritățile sanitare să efectueze o serie de măsuri preventive.
Apa și produsele alimentare contaminate cu microorganisme patogene pot provoca epidemii (boli în masă) de febră tifoidă, holeră etc., motiv pentru care controlul sanitar și bacteriologic zilnic asupra calității apei potabile, laptelui și altor produse este atât de important.
Un laborator bacteriologic trebuie să aibă la dispoziție cel puțin trei încăperi: 1) o cameră mică - o cameră de înregistrare pentru primirea și eliberarea testelor; 2) gătire și spălare medii - pentru pregătirea mediilor nutritive și spălarea vaselor; 3) un laborator de cercetare bacteriologică. Este indicat să aveți o cameră pentru păstrarea animalelor de experiment (vivarium). Fiecare camera trebuie sa aiba mobilier corespunzator (masa de bucatarie si de laborator, diverse dulapuri, taburete etc.).
Următoarea este o listă cu cele mai importante elemente necesare în munca zilnică de laborator. Scopul utilizării lor, metoda de manipulare a acestora, precum și principiul proiectării lor sunt descrise în secțiunile relevante ale cursului.
Dispozitive optice. Microscop biologic cu sistem de imersie, lupe, aglutinoscop.
Dispozitive pentru sterilizare si incalzire. Autoclave, aparate cu abur fluid, dulap de uscare, filtre Seitz, termostate, sterilizatoare pentru instrumente.
Echipamente pentru medii de gătit. O pâlnie pentru filtrare la cald, o pâlnie pentru turnarea mediilor, o baie de apă, oale de diferite dimensiuni, cântare tarate cu greutăți, o mașină de tocat carne, suporturi din metal și lemn pentru filtrare.
Instrumente. Bisturii de diverse forme si tipuri: foarfece, drepte, curbate, cu varf tocit, foarfece intestinale, pensete anatomice si chirurgicale, seringi.
Obiecte din sticla. Pahare pentru lame, lame cu godeu, lame de acoperire, tuburi bacteriologice, tuburi scurte pentru reactii serologice (aglutinare), centrifuge, vase Heidepreich*, tuburi si baghete din sticla, pipete gradate de 1, 2, 5, 10 ml, pipete Pasteur, sticla sticle de vopsea cu pipete, pahare de sticla si baloane de diferite marimi, cilindri de diferite marimi, pâlnii filtrante etc.

*Până acum, printre majoritatea microbiologilor și în manuale, vasele pentru obținerea de colonii izolate de microbi se numesc vase Petri, nu vase Heidenreich, ceea ce nu corespunde adevăratei stări de fapt. Cupele au fost introduse pentru prima dată în practica de laborator de microbiologul rus Heidenreich.

Diverse articole. Bucla bacteriană, sârmă de platină, tuburi de cauciuc, cântare de corn manual cu greutăți, suporturi (din lemn, metal) pentru eprubete, termometre, cuști pentru animale, dispozitive pentru fixarea animalelor, centrifugă.
Produse chimice, vopsele, materiale pentru medii etc. Agar-agar, gelatină, alb în foi, ulei de imersie, hârtie de filtru, vată absorbantă și simplă, tifon, alcool etilic, coloranți anilin (magenta, gențiană și violet cristal, vezuvină, metilen) albastru, neutralrot, safranin etc.), vopsea Giemsa, acizi (azotic, clorhidric, sulfuric, carbolic, fosforic, picric, oxalic etc.), alcalii (potasiu caustic, sodă caustică, amoniac, sodă), săruri (nitrat de potasiu , permanganat de potasiu, sulfură de sodiu, clorură de sodiu etc.).

Masa de laborator

Pentru a efectua cercetări microbiologice, asistentul de laborator trebuie să aibă un loc de muncă echipat corespunzător. Masa de laborator trebuie să aibă o anumită înălțime, astfel încât să fie ușor de microscopat în timp ce stați la ea (Fig. 9). Dacă este posibil, masa trebuie acoperită cu linoleum și fiecare loc de muncă trebuie acoperit cu o tavă galvanizată sau o sticlă oglindă. Locul de muncă ar trebui să fie echipat cu un microscop, suporturi pentru eprubete și vopsele, o buclă de platină și un ac pentru inoculare, o ceașcă cu punte pentru preparate, o șaibă, o clepsidră, lame și ochelari de acoperire, pipete, un set de vopsele, hârtie de filtru, un arzător cu alcool sau gaz și un borcan cu o soluție dezinfectantă (Lysol, acid carbolic, sublimat, cloramină sau lizoform), în care se pun lamele și lamele de sticlă folosite, pipete, baghete de sticlă etc., pentru dezinfecție. care microbii cresc nu pot fi dezinfectati cu substante chimice. Urmele de dezinfectanți pe astfel de vase le fac ulterior improprii pentru creșterea și reproducerea microorganismelor. După utilizare, vasele sunt plasate în rezervoare metalice sau găleți cu capac, sigilate și sterilizate în autoclavă. După utilizare, instrumentele mici (pensete, bisturii, foarfece) se pun într-un sterilizator și se fierb timp de 30-60 de minute sau se scufundă într-o soluție de săpun-cloramină carbolic 3-5% timp de 30-60 de minute.

Orez. 9. Tehnica de microscopie a obiectelor bacteriologice.

Locul de muncă trebuie păstrat absolut curat. Este inacceptabil ca masa să fie contaminată cu materialul infecțios examinat (urină, fecale, puroi etc.). În acest din urmă caz, materialul infecțios de pe masă se poate răspândi la alte obiecte din jur și apoi este posibilă infecția intralaborator. După terminarea lucrărilor, asistentul de laborator trebuie să facă ordine la locul de muncă pentru care este responsabil și, în scopul prevenirii, șterge sticla de la locul de muncă cu o bucată de vată umezită cu o soluție 5% de acid carbolic sau cloramină.

Reguli de lucru și comportament în laborator

Când lucrează cu material infecțios, lucrătorii de laborator trebuie să-și amintească posibilitatea de a se infecta ei înșiși și de a transfera boala infecțioasă în familia, apartamentul lor etc. Prin urmare, trebuie să fie atenți, atenți, îngrijiți și pedant în munca lor.
Când lucrați în laboratoare, trebuie respectate următoarele reguli:

1. Este obligatoriu să fii în laborator, și cu atât mai mult să lucrezi în el, în halat și batic sau șapcă.
2. Nu vă mutați inutil dintr-o cameră de laborator în alta și utilizați numai locul de muncă și echipamentele desemnate.
3. Nu mâncați și nu fumați în laborator.
4. Când lucrați cu materiale infecțioase și culturi vii, utilizați unelte adecvate: pensete, cârlige, spatule și alte obiecte care trebuie distruse sau inofensive după utilizare (ardere pe flacăra unui arzător, fierbere etc.). Aspirați materialul infecțios lichid în pipete nu cu gura, ci cu ajutorul baloanelor, becurilor, turnați lichid cu material infecțios dintr-un vas în altul numai peste un recipient (tavă, lighean) în care un lichid dezinfectant (soluție de acid carbolic, Lysol) se toarnă. . Semănatul și reînsămânțatul se efectuează prin arderea eprubetelor, spatulelor, buclelor de platină, pipetelor etc., pe flacăra arzătorului.
5. Dacă vasele se sparg sau se vărsă lichid care conține materiale infecțioase sau culturi vii, dezinfectați imediat zona de lucru contaminată, îmbrăcămintea și mâinile. Toate acestea ar trebui făcute în prezența sau sub supravegherea conducătorului laboratorului, care trebuie imediat informat despre accident.
6. Dacă este posibil, distrugeți toate articolele și materialele folosite și inutile (cel mai bine este să le ardeți sau să le neutralizați complet în mașini de sterilizare sau lichide dezinfectante).

Toate articolele de dezinfectat trebuie colectate în interiorul laboratorului în recipiente speciale, rezervoare, găleți cu capace etc., și transferate închise într-o autoclavă, unde vor fi dezinfectate în aceeași zi. Livrarea materialului infecțios în autoclavă și sterilizarea acestuia trebuie supravegheate de lucrători de laborator special desemnați.

1. Păstrați curățenia și curățenia stricte. Dezinfectați și spălați-vă mâinile cât mai des posibil în timpul zilei de lucru și după terminarea lucrului.
2. Lucrătorii din laborator sunt supuși vaccinării obligatorii împotriva bolilor infecțioase majore (în primul rând împotriva bolilor intestinale).
3. Este obligatoriu să se efectueze zilnic înregistrări cantitative ale tuturor culturilor vii și animalelor infectate cu înregistrări în jurnale speciale și registre de contabilitate.
4. După muncă, lăsați toate materialele și culturile necesare pentru lucrări ulterioare într-un frigider încuiat sau în seif și puneți locul de muncă în ordine completă.
5. Curățarea zilnică minuțioasă a incintelor laboratorului trebuie făcută umedă cu un lichid dezinfectant.

Prezența diferitelor bacterii în intestine este considerată normală. Aceste bacterii iau parte la procesele de procesare și asimilare a alimentelor. Digestia și funcționarea corectă a intestinelor este evidențiată de fecalele formate din particule mici fără structură numite detritus.

Pentru a studia compoziția microbiană a fecalelor, se efectuează o analiză a rezervorului. Dacă numărul de bacterii crește, atunci o persoană se confruntă cu patologii intestinale, dureri abdominale de diferite tipuri și bucăți de alimente nedigerate apar în fecale. Acest studiu ne permite să identificăm agenții cauzali ai multor afecțiuni.

Clasificarea bacteriilor intestinale

Cu toate acestea, după un studiu detaliat, acestea sunt clasificate în următoarele grupe:

1. Bacterii sănătoase: lacto- și bifidobacterii, Eschecheria. Aceste microorganisme activează funcționarea intestinelor.
2. Oportuniști: enterococi, candida, clostridii, stafilococi. Aceste microorganisme devin patogene ca urmare a anumitor circumstanțe și sunt capabile să provoace dezvoltarea diferitelor patologii.
3. Patogeni: bacili, Klebsiella, Proteus, Salmonella, Shingella, Sarcinus. Acest grup de bacterii provoacă dezvoltarea unor boli grave.

Există diferite metode de examinare a scaunului. Una dintre metodele comune este analiza bacteriană.

Ce este un test de scaun?

Examinarea bacteriologică a scaunului vă permite să studiați compoziția microbiană a acestuia, precum și să determinați prezența agenților patogeni ai bolilor ulterioare:

• shigeloza;
• dizenterie;
• salmoneloză;
• febră tifoidă;
• holera și alte boli.

Analiza scaunului durează destul de mult. Studiul este efectuat înainte de prescrierea terapiei cu antibiotice.

Indicații pentru studiu

Ar trebui evidențiate principalele motive pentru a face un test de scaun:

Studiile scatologice ne permit să identificăm patologiile care apar în cavitatea intestinală:

Un test de rezervor este, de asemenea, prescris pentru a diagnostica patologiile organelor digestive.

Cum se prelevează o probă de scaun?

Înainte de a fi supus studiului, pacientul trebuie să fie supus unei pregătiri speciale timp de câteva zile.

• verdeaţă;
• sfeclă;
• peste rosu;
• rosii.

În plus, produsele din carne pot influența rezultatele studiului.

În perioada de pregătire pentru efectuarea testelor, este necesar să încetați să luați antibiotice, medicamente antiinflamatoare și medicamente care conțin enzime și fier.

Colectarea materialului pentru cercetare trebuie efectuată dimineața. Pentru a colecta fecale, utilizați un recipient steril, care poate fi achiziționat de la o farmacie. Durata de depozitare a biomaterialului în frigider nu este mai mare de 10 ore.

Cum se desfășoară cercetarea?

Examinarea bacteriologică a fecalelor face posibilă determinarea compoziției fizice și chimice a materialului, proprietățile acestuia și prezența patologiilor. Acest studiu ajută la detectarea bacteriilor din organism și a modificărilor în bioechilibrul.

O analiză scatologică a scaunului este considerată o completare a analizei bacteriene. Acest studiu ne permite să evaluăm prezența unui miros specific de fecale, consistența și densitatea acestuia, aspectul general și prezența sau absența microorganismelor.

Studiul cuprinde 2 etape:

1. Analiza macroscopică.
2. Microscopic.

Examenul microscopic evidențiază mucus, proteine, niveluri crescute de bilirubină, cheaguri de sânge și flora iodofilă în scaun. Acesta din urmă se formează datorită substanțelor active care transformă amidonul în glucoză. Detectarea florei iodofile nu indică infecție în toate cazurile. Dezvoltarea bolii este indicată de acumularea de bacterii de iod cauzată de fermentație.

Deoarece corpul copilului nu luptă bine cu flora patogenă, astfel de bacterii sunt foarte des diagnosticate în fecalele copiilor.

Astăzi se folosește metoda de însămânțare a biomaterialului studiat într-un mediu special cu anumite condiții. Experții determină capacitatea bacteriilor de a se reproduce și de a forma colonii. Pentru a obține rezultate precise, toate instrumentele utilizate, precum și recipientele cu biomaterial colectat, trebuie să fie sterile.

Microorganismele patogene sunt studiate pentru sensibilitatea la diferite medicamente antibacteriene. Studiul se caracterizează prin rezultate extrem de precise, conform cărora medicul poate prescrie medicamente.

Doar 10% din cantitatea totală a materialului studiat poate fi microfloră patogenă.

Decodificarea rezultatelor

Examinarea fecalelor vă permite să identificați și să determinați numărul oricăror bacterii. Pe baza rezultatelor obținute, medicul pune un diagnostic și prescrie tratament.

Tipuri de microfloră patogenă care pot fi găsite în fecale:

1. E coli. Ele interferează cu absorbția de calciu și fier de către organism și indică de obicei prezența viermilor.
2. Enterobacteriaceae. Cel mai adesea, aceste bacterii provoacă dezvoltarea dizenteriei și a infecțiilor intestinale.
3. E. coli cu activitate enzimatică redusă indică formarea disbacteriozei.
4. Bacteriile lactozo-negative. Ele provoacă tulburări în procesul digestiv și provoacă flatulență, arsuri la stomac, eructații frecvente și senzație de greutate.
5. Bacteriile hemolitice. Ele formează toxine care afectează negativ sistemul nervos și intestinele. Provoacă formarea de alergii.
6. Ciuperci asemănătoare drojdiei provoacă dezvoltarea stuzului.
7. Klebsiella, provoacă formarea de patologii gastroenterologice.
8. Enterococi, provoacă apariția patologiilor infecțioase ale organelor genitale, ale tractului excretor și ale sistemului genito-urinar.

Interpretarea analizei rezervorului este indicată pe formulare, care indică și indicatorii normali ai bacteriilor.

Disbioza intestinală este o patologie foarte periculoasă care distruge microflora sănătoasă. Această afecțiune duce la dezvoltarea dizenteriei și a stafilococului. Pentru a evita acest lucru, se recomandă efectuarea unui test de scaun pentru a monitoriza bioechilibrul intestinal cel puțin o dată pe an.

Analiza rezervorului este considerată un studiu de încredere care oferă informații despre funcționarea organelor sale interne importante: intestinele și stomacul. Studiul permite identificarea în timp util a microorganismelor patogene care afectează microflora normală. Este prescris atât pentru adulți, cât și pentru copii.