혈청학적 반응. 침전 반응

이 기사에서는 침전 반응 현상에 중점을 둘 것입니다. 여기에서는 이 현상의 특징, 확산 현상, 일반적인 특성, 인간 생활에서의 역할 등을 살펴보겠습니다.

현상 소개

침전은 가용성 항원이 항체와 상호 작용하여 결과적으로 침전물이 형성되는 혈청학적 유형의 현상입니다.
침전반응의 일반적인 특징은 항원과 항체가 공동으로 영향을 미치는 형태이다. 이러한 유형의 상호 작용을 통해 알려진 항체와 항원을 추가하여 시험 물질에 알려지지 않은 항원의 존재를 확인할 수 있습니다. 염이 존재하지 않는 침전 과정은 더 악화될 것이며, 최적의 최적 상태는 pH 7.0-7.4 범위 내에 있습니다.

반응의 구성 요소

침전 반응의 구성 요소 중 세 가지 주요 요소가 구별됩니다.

1. 본질적으로 분자적인 항원입니다. 잘게 나누어진 상태, 즉 용해성이다. 또한 이러한 항원을 조직의 용해물 또는 추출물인 침전물이라고 합니다. 침전물은 구성 입자의 크기에 따라 응집원과 특징적인 차이가 있습니다. 응집원은 고유한 세포 크기를 갖고 있는 반면 침전원은 분자 크기에 비례합니다. 항원 용액은 투명성이 특징입니다.
2. 연구된 항체를 포함하는 면역 진단 혈청뿐만 아니라 인간 혈청에서도 발견되는 항체입니다.
3. 전해질은 등장성 상태를 특징으로 하는 염화나트륨 용액입니다.

침전제 획득

물질을 분쇄하고 그로부터 단백질 항원을 추출하여 얻어지는 침전제 없이는 침전반응이 불가능하다. 추출은 끓이거나 다른 방법으로 발생합니다.
침전물의 눈에 띄는 예는 용해물, 조직 및 기관 추출물, 혈청, 미생물의 국물 배양을 기반으로 한 다양한 유형의 여과액, 미생물의 식염수 추출물 및 자동 분해물 물질입니다.

강수량의 단계

이제 침전 반응을 설정하는 방법을 살펴보겠습니다.
특별히 준비된 시험관에서 일어나는 고리 침전 반응이 수행됩니다. 혈청을 접시의 구멍에 넣고 피펫의 코를 사용하여 벽을 따라 붓습니다. 다음으로, 그 위에 침전제 적당량을 조심스럽게 쌓은 후, 시험관을 수평에서 수직 위치로 가져옵니다. 침전 반응을 설정하고 고려하는 것은 매우 세심한 작업입니다. 결과는 항원과 항체 사이의 경계에 흰색 고리가 나타난 후에 고려됩니다. 반응의 반응 요소가 서로 일치하면 의사 소통하지만 오랜 시간 동안 상호 작용하면 눈에 띄게됩니다.
침전 반응은 또한 페트리 접시나 유리 슬라이드에서 수행되며, 한천 겔이 옮겨져 작은 층에 적용됩니다. 젤이 굳은 후 항원과 항체가 들어갈 젤에 소수의 웰을 잘라냅니다. 이 작업을 수행하는 방법에는 방사형 면역확산 방법과 이중 면역확산 방법의 두 가지가 있습니다.

일반 정보

침전 메커니즘은 응집 장치와 유사합니다. 면역형 혈청의 영향에 노출되면 이미 반응한 항원이 감소합니다. 중요한 조건은 혈청과 항원 모두의 투명성입니다.
반응의 등록은 항원을 항체 위에 겹쳐서 향상시킬 수 있습니다. 그 결과, 고리 모양의 석출물이 나타나는 것을 관찰할 수 있다. 이 현상을 고리 침전이라고 하며 직경 2.5~3.5mm의 특수 튜브에서 수행됩니다. 강수 반응의 가장 널리 퍼진 사례 중 하나는 탄저병 진단입니다.
침전을 통해 한천에서 디프테리아 배양물의 독성 수준을 결정할 수 있습니다.
고려중인 반응 중에 항원 복합체와 항체의 침전이 발생합니다. 침전은 아프거나 백신을 접종한 인간과 동물의 혈청에 있는 항체 함량의 양을 결정하는 것을 가능하게 하는 면역학적 현상입니다.

적정의 결과

위의 방법을 적정하여 얻은 데이터는 정량적 데이터가 아니라는 점을 아는 것이 중요합니다. 포함된 항체 수의 정량적 추정치를 생성하고 분석하기 위해 M. Heidelberger와 E. Kabat는 등가 구역의 검색 및 식별을 기반으로 하는 특수 반응 기술을 개발했습니다. 연령별 항원 수를 일정한 양의 항혈청과 혼합하면 초기에 형성된 침전물이 증가한 다음 항원 복합체를 용해하는 능력이 증가하여 다시 감소합니다. 각 튜브에 포함된 상등액의 항체 양을 측정하면 항체가 포함된 특정 수의 접시에 액체가 없다는 것을 알 수 있습니다. 여기서는 다른 시험관과 비교하여 가장 큰 침전물이 형성됩니다. 이를 통해 총 단백질 값에서 항원성 단백질 침전물을 빼면 특별히 연구된 혈청의 양에 포함된 항체의 정확한 값을 얻을 수 있습니다. 다음으로, 침전물 내 단백질 분자의 양은 질소의 양이나 비색법을 사용하여 결정됩니다.

가치 추정

진단 방법에서 침전 값을 평가하려면 침전물 자체가 항원과 반응한 후 침전물 자체가 형성되지 않을 수 있음을 의미하는 침전물 자체가 형성되지 않는 항체가 면역 혈청에 존재할 가능성을 고려해야 합니다. 이러한 분자 목록에는 부분 항체와 감마 A-글로불린 그룹의 일부 종이 포함됩니다.

실험실 조건에서의 침전 반응은 다양한 유형의 변형에 적용됩니다. 예를 들어, 열침전 반응은 열 변성이 발생하지 않는 보툴리누스 중독, 탄저병 등의 박테리아 항원을 검출하는 데 사용됩니다. 고리 침전과 달리 이 유형의 반응에서는 끓인 상태의 해당 물질의 여과액을 사용합니다.
복잡한 혼합물의 침전은 혼합물의 개별 요소의 특성을 특성화하는 것을 허용하지 않습니다. 이러한 경우 사람은 한천에 침전시키는 방법을 사용하고 면역 전기 영동법도 사용합니다.

확산 강수량

이 연구 분야에는 확산 석출 반응(DPR)이라는 개념이 있습니다. 이는 항체와 수용성 항원이 젤에 확산되는 능력을 기반으로 합니다. 확산은 열 운동으로 인해 특정 물질의 분자가 다른 물질의 분자에 침투하는 능력입니다.
겔은 고체상에 액체상이 균일하게 분포되어 있는 분산형 시스템이다. 대부분의 경우 이 반응에는 한천 젤이 사용됩니다.
분자가 서로를 향해 확산될 수 있는 매개변수를 제공한 후, 이들의 만남은 항원 + 항체 복합체의 형성을 동반합니다. 이러한 신생물은 젤 자체에 있는 동안 확산될 수 있으며 육안으로 감지할 수 있는 스트립 형태로 침전됩니다. 항원과 항체가 상동성이라면 밴드가 형성되지 않습니다.
한천 층에 있는 동안 확산이 일어나는 조건을 만드는 것은 구성 요소를 붓는 것과 관련이 있지만, 웰의 총 수와 그 상대 위치는 해결해야 하는 문제의 유형에 따라 결정됩니다. RPD는 알려진 항체 혈청을 사용한 테스트를 통해 알려지지 않은 분리된 바이러스를 검출하고 식별할 수 있는 능력을 제공합니다.

애플리케이션

침전법은 질병 진단뿐만 아니라 법의학 분야에서도 널리 사용됩니다. 강수 반응을 사용하지 않는 범죄 무기에서 발견된 혈액의 종류, 장기나 조직의 일부를 판별하는 것이 가능한 분석은 상상하기 어렵습니다. 이 과정에서 다양한 동물과 조류를 면역화하여 얻은 침전 혈청이 사용됩니다. 혈청 역가 수준이 최소 1:10,000 이상인 것이 중요하며, 특이도도 충분해야 합니다. 검출된 혈흔이나 딱지에서 신체 검사를 위한 추출물을 만듭니다. 이 용액은 이후 침전성 혈청에 노출됩니다. 이 반응을 이용하면 인간과 동물 모두의 조직과 기관 단백질의 종류를 알아내는 것이 가능합니다. 탁한 추출물을 얻으려면 한천에 침전을 시켜야 합니다.

결론

우리가 읽은 정보를 분석해 보면 침전 반응은 항체를 사용하여 다양한 항원을 진단할 수 있게 해주기 때문에 인간에게 매우 중요하다는 결론을 내릴 수 있습니다. 이 현상은 법의학에서도 널리 사용되며 혈액, 조직의 유형을 식별할 수 있게 해줍니다. 또는 특정 주제와 관련된 기관. 해결하려는 문제의 새로운 요구에 따라 사용되는 여러 가지 유형과 침전 방법이 있습니다.

침전 반응(RP)은 침전물이라고 불리는 구름 형태의 항체와 가용성 분자 항원의 복합체가 형성되고 침전되는 것입니다. 이는 항원과 항체를 동일한 양으로 혼합하여 형성됩니다. 그 중 하나를 초과하면 면역 복합체 형성 수준이 감소합니다.

RP는 시험관(고리 침전 반응), 젤, 영양 배지 등에 넣습니다. 반액체 한천 또는 아가로스 젤의 다양한 RP가 널리 퍼져 있습니다. Ouchterlony에 따른 이중 면역확산, 방사형 면역확산, 면역전기영동 등이 있습니다.

기구. 병리학적 물질, 환경적 물질 또는 순수 세균 배양물로부터 추출된 투명한 콜로이드 가용성 항원을 사용하여 수행됩니다. 이 반응은 항체 역가가 높은 명확한 진단 침전 혈청을 사용합니다. 침전 혈청의 역가는 항원의 가장 높은 희석으로 간주되며, 이는 면역 혈청과 상호작용할 때 눈에 보이는 침전물(탁도)의 형성을 유발합니다.

링 침전 반응은 0.2-0.3 ml의 침전 혈청이 첨가되는 좁은 시험관 (직경 0.5 cm)에서 수행됩니다. 그 후, 파스퇴르 피펫을 이용하여 항원용액 0.1~0.2ml를 천천히 층층히 쌓는다. 튜브를 조심스럽게 수직 위치로 옮기고 1~2분 후에 반응을 기록합니다. 양성 반응의 경우 혈청과 시험 항원 사이의 경계에 흰색 고리 형태로 침전물이 나타납니다. 대조 튜브에서는 침전물이 형성되지 않습니다.

15. 보체 관련 반응: 용혈 반응, 보체 고정 반응. 메커니즘, 구성 요소, 응용 프로그램.

보체고정반응(CFR)은 항원과 항체가 서로 대응할 때 항체의 Fc 단편을 통해 보체(C)가 부착되는 면역복합체를 형성하는 반응, 즉 항원-항체 복합체에 의해 보체가 결합하는 반응이다. 항원-항체 복합체가 형성되지 않으면 보체는 유리 상태로 유지됩니다.

AG와 AT의 특정 상호작용은 보체의 흡착(결합)을 동반합니다. 보체 고정 과정은 시각적으로 명확하지 않기 때문에 J. Bordet과 O. Zhang은 보체가 고정되었는지 여부를 나타내는 지표로 용혈 시스템(양 적혈구 + 용혈 혈청)을 사용할 것을 제안했습니다.

AG-AT 콤플렉스. AG와 AT가 서로 대응하면, 즉 면역 복합체가 형성되면 보체는 이 복합체에 결합되어 용혈이 발생하지 않습니다. AT가 AG에 해당하지 않으면 복합체가 형성되지 않고 보완되어 자유롭게 남아 두 번째 시스템과 결합하여 용혈을 유발합니다.

구성 요소. 보체 고정 반응(CFR)은 복잡한 혈청학적 반응입니다. 이를 수행하려면 AG, AT 및 보체(첫 번째 시스템), 양 적혈구 및 용혈 혈청(두 번째 시스템)의 5가지 성분이 필요합니다.

CSC의 항원은 다양한 사멸 미생물, 이들의 용해물, 박테리아 성분, 병리학적으로 변형된 정상 기관, 조직 지질, 바이러스 및 바이러스 함유 물질의 배양물일 수 있습니다.

신선하거나 건조된 기니피그 혈청이 보완물로 사용됩니다.

기구. RSK는 두 단계로 수행됩니다: 1단계 - 항원 + 항체 + 보체의 세 가지 구성 요소를 포함하는 혼합물의 배양; 2 단계 (지시자) - 양 적혈구와 이에 대한 항체가 포함 된 용혈 혈청으로 구성된 용혈 시스템을 추가하여 혼합물에서 자유 보체를 감지합니다. 반응의 1단계에서는 항원-항체 복합체가 형성되면 보체와 결합하게 되며, 2단계에서는 항체에 의해 감작된 적혈구의 용혈이 일어나지 않게 됩니다. 반응은 긍정적이다. 항원과 항체가 서로 일치하지 않으면(시험 샘플에 항원이나 항체가 없음) 보체는 유리 상태로 유지되고 2단계에서는 적혈구-항적혈구 항체 복합체에 결합하여 용혈을 유발합니다. 부정적인 반응. RSC는 많은 감염성 질환, 특히 매독(Wassermann 반응)을 진단하는 데 사용됩니다.

면역진단 반응. 항원-항체 반응 및 표지된 성분과의 반응. 미생물 식별 및 감염성 질환 진단에 활용됩니다.

면역 반응은 아픈 사람과 건강한 사람의 진단 및 면역학 연구에 사용됩니다. 이를 위해 그들은 다음을 사용합니다. 혈청학적 방법(위도부터 혈청 - 유청과 로고 - 교육), 즉 혈청 및 기타 체액뿐만 아니라 신체 조직에서 결정된 항원-항체 반응을 사용하여 항체 및 항원을 연구하는 방법입니다.

환자의 혈청에서 병원체 항원에 대한 항체가 검출되면 질병을 진단할 수 있습니다. 혈청학적 연구는 또한 미생물 항원, 다양한 생물학적 활성 물질, 혈액형, 조직 및 종양 항원, 면역 복합체, 세포 수용체 등을 식별하는 데 사용됩니다.

환자로부터 미생물을 분리할 때, 면역진단 혈청, 즉 특정 항체를 함유한 과면역화된 동물의 혈액 혈청을 사용하여 병원체의 항원 특성을 연구함으로써 병원체를 식별합니다. 이것이 소위 혈청학적 식별미생물.

미생물학 및 면역학에서는 표지된 항체 및 항원을 사용하는 응집, 침전, 중화 반응, 보체 관련 반응(방사선면역학, 효소면역분석, 면역형광법)이 널리 사용됩니다. 나열된 반응은 등록된 효과와 제조 기술이 다르지만 모두 기본입니다. 항원과 항체의 상호작용 반응을 기반으로 하며 항체와 항원을 모두 검출하는 데 사용됩니다. 면역 반응은 높은 민감도와 특이도를 특징으로 합니다.

아래는 주요 면역진단 반응의 원리와 도표입니다. 반응을 설정하는 자세한 기술은 에 나와 있습니다. 면역진단에 대한 실제 지침.

응집 반응 - RA(위도부터 응집력- 나티오- 접착)은 항체가 미립자 항원(박테리아, 적혈구 또는 기타 세포, 항원이 흡착된 불용성 입자 및 거대분자 응집체)과 결합하는 간단한 반응입니다. 예를 들어 등장성 염화나트륨 용액을 첨가할 때 전해질이 있을 때 발생합니다.

응집 반응에는 광범위, 지시, 간접 등 다양한 옵션이 사용됩니다. 응집 반응은 플레이크 또는 침전물의 형성으로 나타납니다.

RA는 다음 용도로 사용됩니다.

예를 들어 브루셀라증(Wright, Heddelson 반응), 장티푸스 및 파라티푸스(Vidal 반응) 및 기타 전염병이 있는 환자의 혈청 내 항체 측정;

환자로부터 분리된 병원체의 결정;

적혈구 동종항원에 대한 단클론 항체를 사용하여 혈액형을 결정합니다.

환자의 항체를 확인하려면 놓다상세한 응집 반응:환자의 혈청을 희석하여 첨가 진단(죽은 미생물의 현탁) 37°C에서 몇 시간 동안 배양한 후 응집이 발생한, 즉 침전물이 형성된 혈청의 가장 높은 희석(혈청 역가)이 기록됩니다.

응집의 성질과 속도는 항원과 항체의 유형에 따라 다릅니다. 예를 들어 진단(O- 및 R-항원)과 특정 항체의 상호 작용 특성이 있습니다. 와의 응집반응 O-진단(열에 의해 박테리아가 죽고 열 안정성을 유지함) O-항원)미세한 응집의 형태로 발생합니다. H-diagnosticum(포름알데히드에 의해 죽고 열에 불안정한 편모 H-항원을 유지하는 박테리아)과의 응집 반응은 거칠고 더 빠르게 진행됩니다.

환자에게서 분리한 병원균을 확인해야 할 경우에는 다음과 같이 기재한다. 지표 응집 반응,진단 항체(응집 혈청)를 사용하여, 즉 병원체의 혈청형 분석이 수행됩니다. 유리 슬라이드에서 지표 반응이 수행됩니다. 환자로부터 분리된 병원체의 순수 배양액을 진단용 응집 혈청 한 방울에 1:10 또는 1:20으로 희석하여 첨가합니다. 컨트롤이 근처에 배치됩니다. 혈청 대신 염화나트륨 용액 한 방울이 적용됩니다. 혈청과 미생물이 함유된 방울에 응집성 침전물이 나타날 때, 광범위한 응집반응병원체 현탁액 2-3 방울이 첨가되는 응집 혈청의 희석이 증가하는 시험관에. 응집은 침전물의 양과 액체의 투명도에 따라 고려됩니다. 진단 혈청의 역가에 가까운 희석액에서 응집이 관찰되면 반응은 양성으로 간주됩니다. 동시에, 대조가 고려됩니다: 등장성 염화나트륨 용액으로 희석된 혈청은 투명해야 하며, 동일한 용액에 있는 미생물 현탁액은 침전물 없이 균일하게 흐려야 합니다.

서로 다른 관련 박테리아가 동일한 진단용 응집 혈청에 의해 응집될 수 있어 식별이 어렵습니다. 그러므로 그들은 사용한다 흡착된 응집 혈청,교차반응 항체가 관련 세균에 흡착되어 제거된 것입니다. 그러한 혈청은 이 박테리아에만 특이적인 항체를 보유합니다. 특수 단일수용체 진단용 응집 혈청의 생산은 A. Castellani(1902)에 의해 제안되었습니다.

간접(수동) 적혈구응집 반응 (RNGA, RPGA)는 표면에 항원 또는 항체가 흡착된 적혈구를 사용하는 방식으로, 혈청의 해당 항체 또는 항원과 상호 작용하여 적혈구가 바닥에 달라붙어 침전됩니다. 시험관이나 세포 다섯가리비 퇴적물의 형태로 존재한다(그림 13.2). ■ 음성 반응의 경우 적혈구는 "버튼" 형태로 고정됩니다. 일반적으로 항체는 흡착된 적혈구인 항원성 적혈구 진단법을 사용하여 RNGA에서 검출됩니다. ~에항원과 함께. 때로는 항체가 흡착되는 항체 적혈구 진단이 사용됩니다. 예를 들어, 보툴리눔 독소는 적혈구 항체 보툴리눔 독소를 첨가하여 검출할 수 있습니다(이 반응을 역간접 적혈구응집 반응-롱). RNGA는 감염성 질환을 진단하고 성선 자극 호르몬을 결정하는 데 사용됩니다. 다섯임신을 확립할 때 소변을 검사하여 약물, 호르몬 및 기타 경우에 대한 과민성을 확인합니다.

응고반응 . 병원체 세포는 면역진단용 혈청을 전처리한 포도상구균을 이용하여 판별합니다. 포도상구균 함유 단백질 에이,~에 호감을 갖고 있다 FC - 면역글로불린의 단편은 비특이적으로 항균 항체를 흡착하며, 이는 환자로부터 분리된 해당 미생물과 활성 센터와 상호 작용합니다. 응고의 결과로 포도상 구균, 진단 혈청 항체 및 검출된 미생물로 구성된 플레이크가 형성됩니다.

적혈구응집 억제 반응 (RTGA)는 면역 혈청 항체에 의한 바이러스 항원의 차단, 억제를 기반으로 하며 그 결과 바이러스는 적혈구를 응집시키는 능력을 상실합니다(그림 13.3). RTGA는 다양한 바이러스성 질병을 진단하는 데 사용되며, 그 원인 물질(인플루엔자 바이러스, 홍역, 풍진, 진드기 매개 뇌염 등)은 다양한 동물의 적혈구를 응집시킬 수 있습니다.

혈액형 결정을 위한 응집 반응 혈액형 항원 A(II), B(III)에 대한 면역 혈청 항체와 적혈구의 응집을 사용하여 ABO 시스템(섹션 10.1.4.1 참조)을 확립하는 데 사용됩니다. 대조군은 항체를 포함하지 않는 혈청, 즉 혈청입니다. AB (GU)혈액형; 그룹 A(II), B(III)의 적혈구에 포함된 항원. 음성 대조군에는 항원이 포함되어 있지 않습니다. 즉, 그룹 0(I) 적혈구가 사용됩니다.

안에 Rh 인자를 결정하기 위한 응집 반응(섹션 10.1.4.1 참조) 항 붉은털원숭이 혈청(적어도 두 가지 다른 시리즈)을 사용하십시오. 연구 중인 적혈구 막에 Rh 항원이 있으면 이들 세포의 응집이 발생합니다. 모든 혈액형의 표준 Rh 양성 및 Rh 음성 적혈구가 대조군으로 사용됩니다.

항-Rhesus 항체를 측정하기 위한 응집 반응(간접 Coombs 테스트)혈관 내 용혈 환자에게 사용됩니다. 이들 환자 중 일부에서는 불완전하고 1가인 항-Rhesus 항체가 검출됩니다. 이들은 Rh 양성 적혈구와 특이적으로 상호작용하지만 응집을 일으키지는 않습니다. 이러한 불완전한 항체의 존재 여부는 간접 Coombs 테스트를 통해 확인됩니다. 이를 위해 항-Rh 항체 + Rh 양성 적혈구 시스템에 항글로불린 혈청(인간 면역글로불린에 대한 항체)을 첨가하여 적혈구 응집을 유발합니다(그림 13.4). Coombs 반응을 사용하면 면역 기원 적혈구의 혈관 내 용해와 관련된 병리학 적 상태가 진단됩니다. 예를 들어 신생아의 용혈성 질환: Rh 양성 태아의 적혈구는 혈액에서 순환하는 Rh 인자에 대한 불완전한 항체와 결합합니다. Rh 음성 산모의 태반을 통과했습니다.

침전 반응

침전 반응 - RP(부터위도 프레시피토- 침전물) - 이것은 용해성 분자 항원과 항체가 혼탁한 형태로 복합체를 형성하고 침전시키는 것을 의미합니다. 침전물.이는 항원과 항체를 동일한 양으로 혼합하여 형성됩니다. 그 중 하나를 초과하면 면역 복합체 형성 수준이 감소합니다.

침전 반응은 시험관에서 수행됩니다. (고리 석출 반응),젤, 영양 배지 등에서 한천 또는 아가로스의 반액체 젤에서 다양한 침전 반응이 널리 보급되었습니다. Ouchterlony에 따른 이중 면역확산. 방사형 면역확산, 면역전기영동등.

고리 석출 반응 . 반응은 수용성 항원이 층층이 쌓인 면역 혈청이 들어 있는 좁은 침전 튜브에서 수행됩니다. 항원과 항체의 비율이 최적일 때 이 두 용액의 경계에는 불투명한 침전 고리가 형성됩니다(그림 13.5). 과잉 항원은 시약이 액체 경계로 점진적으로 확산되기 때문에 링 침전 반응의 결과에 영향을 미치지 않습니다. 장기 또는 조직의 끓여서 여과한 수성 추출물을 고리 침전 반응에서 항원으로 사용하는 경우 이 반응을 열침전반응(Ascoli 반응,탄저병이 있는/

Ouchteruny에 따른 이중 면역확산 반응 . 반응을 설정하기 위해 녹인 한천 젤을 유리판 위에 얇은 층으로 붓고 굳힌 후 2~3mm 크기의 웰을 잘라냅니다. 항원과 면역 혈청은 이 웰에 별도로 배치되어 서로를 향해 확산됩니다. 회의 지점에서 동일한 비율로 흰색 줄무늬 형태의 침전물을 형성합니다. 다성분 시스템에서는 서로 다른 항원과 혈청 항체가 있는 웰 사이에 여러 줄의 침전물이 나타납니다. 동일한 항원의 경우 침전선이 병합됩니다. 동일하지 않은 경우 교차합니다(그림 13.6).

방사형 면역확산 반응 . 한천겔을 녹인 면역세럼을 유리잔에 고르게 붓습니다. 겔에서 응고시킨 후, 항원을 다양한 희석액으로 넣는 웰을 만듭니다. 겔 속으로 확산되는 항원은 항체가 있는 웰 주위에 고리 모양의 침전 영역을 형성합니다(그림 13.7). 침전 링의 직경은 항원 농도에 비례합니다. 이 반응은 혈액 내 다양한 ​​클래스의 면역글로불린 함량, 보체 시스템 구성 요소 등을 결정하는 데 사용됩니다.

면역전기영동- 전기영동과 면역침강의 조합: 항원 혼합물을 겔의 웰에 도입하고 전기영동을 사용하여 겔에서 분리합니다. 그런 다음 면역 혈청을 전기 영동 구역과 평행한 홈에 도입하고, 그 항체는 겔 내로 확산되어 항원과 만나는 지점에서 침전선을 형성합니다.

응집반응(Ramon에 따르면) (위도에서. 치석 -양모 플레이크) - 독소-항독소 또는 톡소이드-항독소 반응 중에 시험관에서 유백색 또는 응집 덩어리(면역 침전)가 나타나는 현상입니다. 이는 항독성 혈청 또는 톡소이드의 활성을 결정하는 데 사용됩니다.

면역전자현미경- 적절한 항체로 처리된 미생물, 종종 바이러스의 전자현미경. 면역 혈청으로 처리된 바이러스는 면역 응집체(미세침전물)를 형성합니다. 항체의 "화관"은 인산 또는 기타 전자 광학적으로 밀도가 높은 제제와 대조적으로 비리온 주위에 형성됩니다.

보체와 관련된 반응

보체와 관련된 반응항원-항체 복합체에 의한 보체 활성화(보체 고정 반응, 방사상 용혈 등)에 기초합니다.

보체 고정 반응 (RSK)는 항원과 항체가 서로 대응할 때 면역 복합체를 형성한다는 것입니다. FC -항체 단편은 보체(C)에 부착됩니다. 즉, 보체는 항원-항체 복합체에 의해 결합됩니다. 항원-항체 복합체가 형성되지 않으면 보체는 유리 상태로 유지됩니다(그림 13.8). RSK는 두 단계로 수행됩니다: 1단계 - 항원 + 항체 + 보체의 세 가지 구성 요소를 포함하는 혼합물의 배양; 2 단계 (지시자) - 양 적혈구와 이에 대한 항체가 포함 된 용혈 혈청으로 구성된 용혈 시스템을 추가하여 혼합물에서 자유 보체를 감지합니다. 반응의 1단계에서는 항원-항체 복합체가 형성되면 보체와 결합하게 되며, 2단계에서는 항체에 의해 감작된 적혈구의 용혈이 일어나지 않게 됩니다. 반응은 긍정적이다. 항원과 항체가 서로 일치하지 않으면(시험 샘플에 항원이나 항체가 없음) 보체는 유리 상태로 유지되고 2단계에서는 적혈구-항적혈구 항체 복합체에 결합하여 용혈을 유발합니다. 반응은 부정적이다.

RSC는 많은 전염병, 특히 매독(Wassermann 반응)을 진단하는 데 사용됩니다.

방사상 용혈 반응(RRH) ) 양의 적혈구와 보체를 함유한 한천 젤의 우물에 넣습니다. 용혈성 혈청(양 적혈구에 대한 항체)을 젤의 우물에 도입한 후 용혈 구역이 그 주위에 형성됩니다(항체의 방사형 확산의 결과). 이러한 방식으로 인플루엔자, 풍진 및 진드기 매개 뇌염 환자의 혈청 내 항체뿐만 아니라 보체 및 용혈 혈청의 활성을 결정하는 것이 가능합니다. 이를 위해 해당 바이러스 항원이 적혈구에 흡착되고 환자의 혈청이 이러한 적혈구가 포함된 젤의 웰에 첨가됩니다. 항바이러스 항체는 적혈구에 흡착된 바이러스 항원과 상호작용하며, 그 후

그런 다음 보체 구성 요소가 이 복합체에 합류하여 용혈을 유발합니다.

면역 부착 반응(IAR) ) 면역 혈청으로 처리된 미립자 항원(박테리아, 바이러스)에 의한 보체 시스템의 활성화를 기반으로 합니다. 그 결과, 활성화된 보체의 세 번째 구성요소(C3b)가 형성되어 면역 복합체의 일부로 미립자 항원에 부착됩니다. 적혈구, 혈소판 및 대식세포는 C3b에 대한 수용체를 가지고 있으며, 이로 인해 이들 세포가 C3b를 운반하는 면역 복합체와 혼합되면 결합 및 응집이 발생합니다.

중화반응

면역 혈청의 항체는 항체에 의한 미생물 항원의 차단과 관련된 민감한 세포 및 조직에 대한 미생물 또는 독소의 손상 효과를 중화시킬 수 있습니다. 중립화. 중화반응(RN)은 항원-항체 혼합물을 동물이나 민감한 시험 대상(세포 배양, 배아)에 도입하여 수행됩니다. 동물 및 시험 대상에서 미생물이나 그 항원 또는 독소의 손상 효과가 없는 경우 면역 혈청의 중화 효과 및 이에 따른 항원-항체 복합체 상호 작용의 특이성을 나타냅니다(그림 13.9).

면역형광 반응 - RIF(Coons 방법)

방법에는 직접, 간접(그림 13.10), 보완의 세 가지 주요 유형이 있습니다. Koons 반응은 미생물 항원을 식별하거나 항체를 결정하는 신속한 진단 방법입니다.

직접 RIF 방법 형광 색소로 표지된 항체가 포함된 면역 혈청으로 처리된 조직 항원이나 미생물이 형광 현미경의 자외선에서 빛을 낼 수 있다는 사실에 기초합니다.

이러한 발광 혈청으로 처리된 도말에 있는 박테리아는 녹색 테두리 형태로 세포 주변을 따라 빛납니다.

간접 RIF 방법 형광 색소로 표지된 항글로불린(항항체) 혈청을 사용하여 항원-항체 복합체를 식별하는 것으로 구성됩니다. 이를 위해 미생물 현탁액의 도말을 토끼 항균 진단 혈청의 항체로 처리합니다. 그런 다음 미생물 항원과 결합하지 않은 항체를 씻어내고, 형광색소로 표지된 항글로불린(항토끼) 혈청을 도말 처리하여 미생물에 남아 있는 항체를 검출합니다. 그 결과 미생물+토끼항균항체+형광색소로 표지된 항토끼항체의 복합체가 형성된다. 이 복합체는 직접법과 마찬가지로 형광현미경으로 관찰된다.

효소면역흡착법 또는 분석(ELISA)

엘리사 -태그 효소(고추냉이 퍼옥시다제, 베타-갈락토시다제 또는 알칼리성 포스파타제)에 접합된 해당 항체를 사용하여 항원을 검출합니다. 항원을 효소 표지된 면역 혈청과 결합한 후 기질/발색체를 혼합물에 첨가합니다. 기질은 효소에 의해 절단되고 반응 생성물의 색상이 변합니다. 색상의 강도는 결합된 항원 및 항체 분자의 수에 정비례합니다.

고체상 ELISA - 면역 반응의 구성 요소 중 하나(항원 또는 항체)가 폴리스티렌 플레이트의 웰과 같은 고체 담체에 흡수되는 경우 면역학적 테스트의 가장 일반적인 변형입니다.

항체를 측정할 때, 환자의 혈청, 효소로 표지된 항글로불린 혈청, 효소의 기질(색소원)을 항원이 흡착된 플레이트의 웰에 순차적으로 첨가합니다.

다른 성분을 첨가한 후 매번 철저한 세척을 통해 결합되지 않은 시약을 웰에서 제거합니다. 결과가 양성이면 발색체 용액의 색이 변합니다. 고체상 담체는 항원뿐만 아니라 항체에도 감작될 수 있습니다. 그런 다음 항체가 흡착된 웰에 원하는 항원을 첨가하고, 효소로 표지된 항원에 대한 면역 혈청을 첨가한 다음, 효소의 기질을 첨가합니다.

경쟁력 있는 ELISA 옵션 . 표적 항원과 효소 표지 항원은 제한된 양의 면역 혈청 항체를 결합하기 위해 서로 경쟁합니다. 또 다른 테스트 - 당신이 찾고 있는 항체

그리고 표지된 항체는 항원을 두고 서로 경쟁합니다.

방사면역학적 방법 또는 분석(RIA)

방사성 핵종(125 J, 14 C, 3 H, 51 Cr 등)으로 표지된 항원 또는 항체를 이용한 항원-항체 반응을 기반으로 한 고감도 방법입니다. 상호 작용 후 생성된 방사성 면역 복합체가 분리되고 해당 방사능이 적절한 계수기(베타 또는 감마 방사선)에서 결정됩니다.

방사선의 강도는 결합된 항원과 항체 분자의 수에 정비례합니다.

~에 고체상 RIA 버전 반응 성분 중 하나(항원 또는 항체)는 폴리스티렌 마이크로패널의 웰과 같은 고체 지지체에 흡착됩니다. 또 다른 방법 옵션은 경쟁력 있는 RIA.원하는 항원과 방사성 핵종 표지 항원은 제한된 양의 면역 혈청 항체에 결합하기 위해 서로 경쟁합니다. 이 옵션은 테스트 재료의 항원 양을 결정하는 데 사용됩니다.

RIA는 미생물 항원을 식별하고 호르몬, 효소, 약물 및 면역글로불린뿐만 아니라 시험 물질에 미량 농도(10~ |0 -I0~ 12 g/l)로 포함된 기타 물질을 결정하는 데 사용됩니다. 이 방법은 특정 환경 위험을 초래합니다.

면역블로팅

면역블로팅(IB)- 전기영동과 ELISA 또는 RIA의 조합을 기반으로 한 매우 민감한 방법입니다.

폴리아크릴아미드 겔에서 전기영동을 사용하여 항원을 분리한 후 이동합니다(블로팅 - 영어. 얼룩, 얼룩)을 젤에서 활성화된 종이나 니트로셀룰로오스 막에 바르고 ELISA를 사용하여 현상합니다. 회사는 "오점"을 사용하여 이러한 스트립을 생산합니다.

항원. 환자의 혈청이 이 스트립에 도포됩니다. 그런 다음 배양 후 결합되지 않은 항체로부터 환자를 세척하고 효소로 표지된 인간 면역글로불린에 대한 혈청을 적용합니다. 스트립에 형성된 복합 항원 + 환자 항체 + 인간 Ig에 대한 항체는 효소의 작용에 따라 색상이 변하는 기질/발색체를 추가하여 검출됩니다(그림 13.12).

IB는 HIV 감염 등의 진단 방법으로 사용됩니다.

13.1. 항원항체반응과 그 응용

항원이 도입되면 체내에 항체가 형성됩니다. 항체는 합성을 일으킨 항원에 상보적이며 결합할 수 있습니다. 항원과 항체의 결합은 두 단계로 구성됩니다. 첫 번째 단계는 항체 Fab 단편의 활성 중심에 대한 항원 결정자의 신속한 결합이 일어나는 특이적 단계입니다. 결합은 반데르발스 힘, 수소 및 소수성 상호작용으로 인해 발생한다는 점에 유의해야 합니다. 결합 강도는 항체의 활성 부위와 항원의 에피토프 사이의 공간적 대응 정도에 따라 결정됩니다. 특정 단계 후에는 느린 단계가 시작됩니다. 비특이적이며 가시적인 물리적 현상(예: 응집 중 플레이크 형성 등)으로 나타납니다.

면역반응은 항체와 항원 사이의 상호작용으로, 이러한 반응은 특이적이며 매우 민감합니다. 그들은 의료 행위에 널리 사용됩니다. 면역 반응의 도움으로 다음과 같은 문제를 해결할 수 있습니다.

알려진 항원에 의한 알려지지 않은 항체의 결정(항원 진단). 이 작업은 환자의 혈청 내 병원체에 대한 항체를 결정해야 할 때 발생합니다(혈청진단). 항체를 찾으면 진단을 확인할 수 있습니다.

알려진 항체(진단용 혈청)를 사용하여 알려지지 않은 항원을 결정합니다. 본 연구는 환자의 물질로부터 분리된 병원체 배양물을 동정(혈청형 분석)할 때와 검출할 때 수행합니다.

혈액 및 기타 생물학적 체액에 있는 미생물 항원과 독소. 면역반응에는 단계 기술과 기록된 효과에 따라 다양한 유형이 있습니다. 이는 응집 반응(RA), 침전 반응(RP), 보체 관련 반응(RSC), 표지된 성분을 사용하는 반응(RIF, ELISA, RIA)입니다.

13.2. 응집반응

응집 반응(RA)은 전해질 존재 하에서 항원과 항체의 상호작용에 대한 면역 반응으로, 항원은 미립자 상태(적혈구, 박테리아, 항원이 흡착된 라텍스 입자)입니다. 응집 과정에서 미립자 항원은 항체에 의해 서로 접착되는데, 이는 응집성 침전물의 형성으로 나타납니다. 플레이크의 형성은 항체가 두 개의 활성 중심을 가지고 있고 항원이 다가이기 때문에 발생합니다. 여러 항원 결정인자를 가지고 있습니다. RA는 환자의 물질에서 분리된 병원체를 식별하고 환자의 혈청 내 병원체에 대한 항체를 검출하는 데 사용됩니다(예: 브루셀라증에 대한 Wright 및 Heddleson 반응, 장티푸스 및 파라티푸스에 대한 Widal 반응).

RA를 진단하는 가장 간단한 방법은 유리에 대한 반응입니다. 이는 환자에게서 분리된 병원균을 확인하는 데 사용되는 대략적인 RA입니다. 반응이 확립되면 진단용 응집 혈청을 유리 슬라이드(1:10 또는 1:20의 희석 비율)에 적용한 다음 환자의 배양액을 추가합니다. 응집성 침전물이 방울에 나타나면 반응은 긍정적입니다. 컨트롤이 근처에 배치됩니다. 혈청 대신 염화나트륨 용액 한 방울이 적용됩니다.

진단용 응집 혈청이 흡착되지 않으면 1, 희석됩니다(역가 - 응집이 발생해야 하는 희석). 확장된 RA를 시험관에 넣고1 흡착되지 않은 응집 혈청은 공통(교차 반응) 항원을 가지고 있는 관련 박테리아를 응집시킬 수 있습니다. 그러므로 그들은 사용한다 흡착된 응집 혈청,

환자로부터 분리된 병원체 현탁액 2-3방울을 첨가하는 응집 혈청의 희석액. 응집은 침전물의 양과 시험관 내 액체의 정화 정도에 따라 고려됩니다. 진단용 혈청의 역가에 가까운 희석액에서 응집이 관찰되면 반응은 양성으로 간주됩니다. 반응에는 대조군이 동반됩니다. 등장성 염화나트륨 용액으로 희석된 혈청은 투명해야 하며, 동일한 용액에 있는 미생물 현탁액은 침전물 없이 균일하게 흐려야 합니다.

환자의 혈청 내 병원체에 대한 항체를 확인하기 위해 전체 규모 RA가 사용됩니다. 이를 설정할 때 환자의 혈청을 시험관에 희석하고 동일한 양의 진단 현탁액(죽은 미생물 현탁액)을 시험관에 첨가합니다. 인큐베이션 후 응집이 발생한 최고 혈청 희석액을 결정합니다. 침전물(혈청 역가)이 형성되었습니다. 이 경우 O-diagnosticum(열에 의해 사멸되고 열안정성 O-항원을 유지하는 박테리아)과의 응집 반응이 세립형 응집의 형태로 발생합니다. H-diagnosticum(포름알데히드에 의해 죽고 열에 불안정한 편모 H-항원을 유지하는 박테리아)과의 응집 반응은 거칠고 더 빠르게 진행됩니다.

간접(수동) 적혈구응집 반응(RNGA 또는 RPGA)는 RA의 한 유형입니다. 이 방법은 매우 민감합니다. RNGA의 도움으로 두 가지 문제를 해결할 수 있습니다. 환자의 혈청에서 알려진 항원이 흡착된 적혈구인 항원 적혈구 진단이 추가된 항체를 결정하는 것입니다. 테스트 물질에 항원이 있는지 확인합니다. 이 경우 반응을 역간접 적혈구응집 반응(RONHA)이라고도 합니다. 이 과정에서 항체 적혈구 진단(표면에 항체가 흡착된 적혈구)이 시험 물질에 첨가됩니다. 이 반응에서 적혈구는 운반체 역할을 하며 면역 집합체 형성에 수동적으로 관여합니다. 긍정적인 반응으로 수동적으로 접착된 적혈구는 부채꼴 모양의 가장자리("우산")가 있는 균일한 층으로 구멍 바닥을 덮습니다. 응집이 없으면 적혈구는 구멍의 중앙 오목한 부분에 축적되어 가장자리가 날카롭게 정의된 소형 "버튼"을 형성합니다.

응고반응흡착된 항체를 이용해 병원체 세포(항원)를 판별하는 데 사용됩니다. 황색포도상구균,단백질 A를 함유하고 있습니다. 단백질 A는 면역글로불린의 Fc 단편에 대한 친화성을 가지고 있습니다. 덕분에 항체는 Fc 단편을 통해 간접적으로 포도상구균에 결합하고, Fab 단편은 바깥쪽으로 향하게 되어 환자에게서 분리한 해당 미생물과 상호작용할 수 있게 된다. 이 경우 플레이크가 형성됩니다.

적혈구응집 억제 반응(HAI)바이러스 감염 진단에 사용되며 혈구응집 바이러스로 인한 감염에만 사용됩니다. 이들 바이러스는 표면에 적혈구가 바이러스에 첨가될 때 적혈구응집 반응(HRA)을 담당하는 헤마글루티닌이라는 단백질을 함유하고 있습니다. RTGA는 항체로 바이러스 항원을 차단하는 것을 포함하며, 그 결과 바이러스는 적혈구를 응집시키는 능력을 상실합니다.

쿰스 반응 -불완전 항체 측정을 ​​위한 RA. 브루셀라증과 같은 일부 전염병에서는 병원체에 대한 불완전한 항체가 환자의 혈청에 순환합니다. 불완전 항체는 완전 항체처럼 항원 결합 부위가 두 개가 아닌 하나의 항원 결합 부위를 갖기 때문에 차단 항체라고 합니다. 따라서 항원 진단제가 추가되면 불완전한 항체가 항원에 결합하지만 서로 접착되지는 않습니다. 반응을 나타내기 위해 항글로불린 혈청(인간 면역글로불린에 대한 항체)을 첨가하면 반응의 첫 번째 단계에서 형성된 면역 복합체(항원 진단 + 불완전 항체)의 응집이 발생합니다.

간접 Coombs 반응은 혈관 내 용혈 환자에게 사용됩니다. 이들 환자 중 일부에서는 불완전한 1가 항-Rhesus 항체가 검출됩니다. 이들은 Rh 양성 적혈구와 특이적으로 상호작용하지만 응집을 일으키지는 않습니다. 따라서 항-Rh 항체 + Rh 양성 적혈구 시스템에 항글로불린 혈청이 추가되어 적혈구 응집을 유발합니다. Coombs 반응을 사용하여 면역 기원 적혈구의 혈관 내 용해와 관련된 병리학적 상태(예: Rh 충돌로 인한 신생아 용혈성 질환)를 진단합니다.

혈액형 결정을 위한 RA혈액형 항원 A(II), B(III)에 대한 면역 혈청 항체에 의한 적혈구의 응집을 기반으로 합니다. 대조군은 항체가 포함되지 않은 혈청입니다. 혈청 AB(IV) 혈액형 및 그룹 A(P) 및 B(III)의 적혈구 항원. 그룹 0(I) 적혈구는 항원이 없기 때문에 음성 대조군으로 사용됩니다.

Rh 인자를 결정하기 위해 항-Rh 혈청이 사용됩니다(적어도 두 가지 다른 시리즈). 연구 중인 적혈구 막에 Rh 항원이 있으면 이들 세포의 응집이 발생합니다.

13.3. 침전 반응

RP는 전해질 존재 하에서 항체와 항원의 상호작용에 대한 면역 반응이며, 항원은 가용성 상태입니다. 침전 동안 가용성 항원은 항체에 의해 침전되며 이는 침전 밴드 형태의 혼탁으로 나타납니다. 두 시약을 동일한 비율로 혼합하면 눈에 보이는 침전물의 형성이 관찰됩니다. 그 중 하나를 초과하면 침전된 면역 복합체의 수가 감소합니다. 침전 반응을 수행하는 방법에는 여러 가지가 있습니다.

고리 침전 반응직경이 작은 침전관에 넣습니다. 면역 혈청을 시험관에 첨가하고 가용성 항원을 조심스럽게 층층이 쌓습니다. 결과가 긍정적이면 두 용액의 경계면에 우유빛 고리가 형성됩니다. 추출물을 끓여서 여과한 장기 및 조직에 항원의 존재 여부를 확인하는 데 사용되는 고리침전반응을 열침전반응(열안정성 탄저병 항원 확인을 위한 아스콜리 반응)이라 한다.

Ouchterlony 이중 면역확산 반응.이 반응은 한천겔에서 수행됩니다. 균일한 두께의 겔층 안에 일정 거리를 두고 웰을 잘라낸 후 각각 항원과 면역 혈청을 채웁니다. 그 후, 항원과 항체가 겔 속으로 확산되어 서로 만나 면역복합체를 형성하고, 이것이 겔 속에 침전되어 정밀한 선으로 보이게 됩니다.

영양물 섭취. 이 반응은 알려지지 않은 항원이나 항체를 식별하고 다른 항원 간의 유사성을 테스트하는 데 사용할 수 있습니다. 항원이 동일하면 침전선이 합쳐지고, 항원이 동일하지 않으면 침전선이 교차하고, 항원이 부분적으로 동일하면 박차가 형성됩니다.

방사형 면역확산 반응.녹은 한천 겔에 항체를 첨가하고 겔을 유리에 균일한 층으로 도포합니다. 젤에서 웰을 잘라내고 다양한 농도의 표준 용량의 항원 용액을 웰에 첨가합니다. 배양 중에 항원은 웰에서 방사형으로 확산되고 항체와 만나 침전 고리를 형성합니다. 과잉 항원이 웰에 남아 있는 한 침전 링의 직경은 점진적으로 증가합니다. 이 방법은 검사 용액의 항원이나 항체를 결정하는 데 사용됩니다(예: 혈청 내 다양한 ​​클래스의 면역글로불린 농도를 결정하는 경우).

면역전기영동.항원 혼합물을 먼저 전기영동으로 분리한 다음, 단백질 이동 방향을 따라 흐르는 홈에 침전 항혈청을 첨가합니다.

응집반응항원과 항체는 서로를 향해 젤 안으로 확산됩니다. 상호작용하면서 그들은 아치형 강수선을 형성합니다.

(Ramon에 따르면) - 항독성 혈청 또는 톡소이드의 활성을 결정하는 데 사용되는 일종의 침전 반응입니다. 반응은 시험관에서 수행됩니다. 톡소이드와 항독소가 동일한 비율로 있는 시험관에서는 탁도가 관찰됩니다.

13.4. 보체 고정 반응

상응하는 항원과 상호작용하는 항체는 첨가된 보체(1차 시스템)와 결합합니다. 보체 고정의 지표는 용혈성 혈청에 감작된 적혈구입니다. 적혈구에 대한 항체(2차 시스템). 첫 번째 시스템에서 보완이 고정되지 않은 경우, 즉 항원-항체 반응이 일어나지 않으면 감작된 적혈구가 완전히 용해됩니다(음성반응). 감작된 적혈구를 첨가한 후 1차 시스템의 면역 복합체에 의해 보체가 고정되면 용혈이 발생합니다.

부재(긍정적 반응). 보체고정반응은 감염성 질환(임질, 매독, 인플루엔자 등)을 진단하는데 사용됩니다.

미생물과 그 독소는 인체의 기관과 조직에 해로운 영향을 미칩니다. 항체는 이러한 손상 물질에 결합하여 이를 차단할 수 있습니다. 무력화하다. 진단 중화 반응은 항체의 이러한 특징을 기반으로 합니다. 항원-항체 혼합물을 동물이나 민감한 시험 대상(세포 배양, 배아)에 도입하여 수행됩니다. 예를 들어, 환자의 물질에서 독소를 검출하기 위해 첫 번째 그룹의 동물에 환자의 물질을 주입합니다. 두 번째 그룹의 동물에는 유사한 물질을 주사하고 적절한 항혈청으로 전처리했습니다. 그룹 1의 동물은 물질에 독소가 있으면 죽습니다. 두 번째 동물 그룹은 생존합니다. 독소의 손상 효과는 중화되므로 나타나지 않습니다.

13.6. 표지된 항체 또는 항원을 사용한 반응

13.6.1. 면역형광반응(RIF, Koons 방법)

이 방법은 빠른 진단에 사용됩니다. 미생물 항원과 항체를 모두 검출하는 데 사용할 수 있습니다.

직접 RIF 방법- 항체와 항원의 상호 작용에 대한 면역 반응으로, 항체는 특정 파장의 빛에 노출되었을 때 특정 파장의 빛 양자를 방출할 수 있는 물질인 형광 색소로 표지됩니다. 이 방법의 특징은 비특이적 발광의 검출을 배제하기 위해 미반응 성분을 제거해야 한다는 것입니다. 이렇게 하려면 반응하지 않은 항체를 씻어내십시오. 결과는 형광 현미경을 사용하여 평가됩니다. 이러한 발광 혈청으로 처리된 도말에 있는 박테리아는 세포 주변을 따라 어두운 배경에서 빛납니다.

간접 RIF 방법이전 것보다 더 자주 사용됩니다. 이 반응은 두 단계로 수행됩니다. 첫 번째 단계에서는 항원이 상호작용합니다.

해당 항체와 상호 작용하여 면역 복합체를 형성합니다. 반응하지 않은(즉, 면역 복합체의 일부가 아닌) 모든 구성 요소는 세척을 통해 제거해야 합니다. 두 번째 단계에서는 형광염색 항글로불린 혈청을 사용하여 생성된 항원-항체 복합체를 검출합니다. 결과적으로 미생물 + 항균 토끼 항체 + 형광 색소로 표지된 토끼 면역글로불린에 대한 항체의 복합체가 형성됩니다. 결과는 형광 현미경을 사용하여 평가됩니다.

13.6.2. 효소 면역분석 방법 또는 분석

ELISA는 바이러스, 박테리아, 원충 감염 진단, 특히 HIV 감염, 바이러스 간염 등의 진단에 사용되는 가장 일반적이고 현대적인 방법입니다.

ELISA 수정이 많이 있습니다. 고체상 비경쟁 ELISA가 널리 사용됩니다. 이는 96웰 폴리스티렌 플레이트(고체상)에서 수행됩니다. 반응을 수행할 때에는 각 단계에서 미반응 성분을 씻어낼 필요가 있다. 항체를 결정할 때 항원이 흡착된 웰에 시험 혈청을 첨가한 후 효소로 표지된 항글로불린 혈청을 첨가합니다. 반응은 효소에 대한 기질을 첨가하여 수행됩니다. 효소가 존재하면 기질이 변하고 효소-기질 복합체가 선택되어 반응에서 형성된 생성물이 착색됩니다. 따라서 긍정적인 반응으로 용액의 색상 변화가 관찰됩니다. 항원을 결정하기 위해서는 고상 담체를 항체로 감작시킨 후, 시험물질(항원)과 항원에 대한 효소가 표지된 혈청을 순차적으로 첨가합니다. 반응이 일어나기 위해서는 효소의 기질이 첨가됩니다. 용액의 색상 변화는 긍정적인 반응으로 발생합니다.

13.6.3. 면역블로팅

이 방법은 전기영동과 ELISA의 조합을 기반으로 합니다. 면역블로팅을 수행할 때(영어로 블로팅. 얼룩- 스팟) 항원의 복합 혼합물을 먼저 폴리아크릴아미드 겔에서 전기영동합니다. 생성된 분별된 항-

유전자 펩타이드는 니트로셀룰로오스 막으로 전달됩니다. 그런 다음 블롯은 특정 항원에 대한 효소 표지 항체로 처리됩니다. ELISA 블롯을 수행합니다. 면역블로팅은 HIV와 같은 감염의 진단에 사용됩니다.

13.6.4. 면역전자현미경

이 방법에는 철 함유 단백질인 페리틴과 같은 전자 광학 밀도가 높은 제제로 표지된 적절한 면역 혈청으로 전처리된 전자 현미경으로 바이러스(덜 일반적으로 다른 미생물)를 현미경으로 관찰하는 작업이 포함됩니다.

13.7. 유세포분석

혈액 세포는 레이저 세포형광측정법을 기반으로 분화됩니다. 이를 위해 원하는 세포를 CD 항원에 대한 형광 단일클론 항체로 염색합니다. 표지된 항체로 처리된 혈액 샘플은 얇은 튜브를 통과하고 레이저 빔이 통과하여 형광색소를 자극하여 빛을 냅니다. 형광 강도는 세포 표면의 항원 밀도와 상관관계가 있으며 광전자 증배관을 사용하여 정량적으로 측정할 수 있습니다. 얻은 결과는 히스토그램으로 변환됩니다.

유세포 분석법은 면역 상태(림프구의 주요 집단 함량, 세포내 및 세포외 사이토카인 함량, NK 세포의 기능적 활성, 식세포작용 활성 등)를 결정하는 데 사용됩니다.

침전물이라고 불리는 탁한 형태. 이는 항원과 항체를 동일한 양으로 혼합하여 형성됩니다. 그 중 하나를 초과하면 면역 복합체 형성 수준이 감소합니다. 침전 반응은 시험관(고리 침전 반응), 겔, 영양배지 등에서 수행됩니다. 반액체 한천 또는 아가로스 겔에서의 침전 반응의 다양한 종류가 널리 퍼져 있습니다. Ouchterlony에 따른 이중 면역확산, 방사형 면역확산, 면역전기영동 , 등.
고리 침전 반응. 반응은 좁은 침전 튜브에서 수행됩니다. 수용성 항원이 면역 혈청 위에 층을 이루고 있습니다. 항원과 항체의 비율이 최적일 때 이 두 용액의 경계에는 불투명한 침전 고리가 형성됩니다(그림 7.50). 끓여서 여과한 조직 추출물을 반응의 항원으로 사용하는 경우 이 반응을 열침전 반응(Ascoli 반응, 탄저병 합텐이 검출되는 반응)이라고 합니다.

쌀. 7.50.

Ouchterlony 이중 면역확산 반응.

반응을 설정하기 위해 녹은 한천 젤의 얇은 층을 유리판에 붓고 경화 후 우물을 잘라냅니다. 항원과 면역 혈청은 젤의 웰에 별도로 배치되어 서로를 향해 확산됩니다. 회의 지점에서 동일한 비율로 흰색 줄무늬 형태의 침전물을 형성합니다(그림 7.51). 다성분 시스템에서는 항원과 항체가 있는 웰 사이에 여러 줄의 침전물이 나타납니다. 동일한 항원의 경우 침전선이 병합되고 동일하지 않은 항원의 경우 침전선이 교차합니다.

쌀. 7.51

한천겔을 녹인 면역세럼을 유리잔에 고르게 붓습니다. 겔에서 경화시킨 후, 항원(Ag)을 다양한 희석액으로 넣는 웰을 만듭니다. 겔 속으로 확산되는 항원은 항체가 있는 웰 주위에 고리 침전 영역을 형성합니다. 침전 링의 직경은 항원 농도에 비례합니다(그림 7.52). 이 반응은 혈청 내 다양한 ​​클래스의 면역글로불린, 보체 시스템 구성 요소 등을 결정하는 데 사용됩니다.

쌀. 7.52.

전기영동과 면역침강의 조합: 항원 혼합물을 겔의 웰에 도입하고 전기영동을 사용하여 겔에서 분리한 다음, 전기영동 구역과 평행한 겔 홈에 면역 혈청을 첨가합니다. 면역 혈청의 항체는 겔로 확산되어 항원과 "만나는" 부위에 침전선을 형성합니다(그림 7.53).

쌀. 7.53.

응집 반응(Ramon에 따름) (위도부터 플로커스- 양모 플레이크) - 독소-항독소 또는 톡소이드-항독소 반응 중 시험관에서 유백색 또는 응집 덩어리(면역침전)가 나타나는 현상(그림 7.54). 이는 항독성 혈청 또는 톡소이드의 활성을 결정하는 데 사용됩니다.

쌀. 7.54.

디프테리아의 원인균인 C. diphtheriae는 독성(외독소 생성)과 비독성을 나타낼 수 있습니다. 외독소의 형성은 외독소의 형성을 암호화하는 독소 유전자를 운반하는 프로파지의 박테리아 내 존재에 달려 있습니다. 질병이 있는 경우 모든 분리균주에 독성원성(한천 침전 반응을 사용하여 디프테리아 외독소 생성)을 테스트합니다(그림 7.55).

쌀. 7.55