სეროლოგიური რეაქციები. ნალექის რეაქცია

ეს სტატია ყურადღებას გაამახვილებს ნალექების რეაქციის ფენომენზე. აქ განვიხილავთ ამ ფენომენის თავისებურებებს, დიფუზიის ფენომენს, ზოგად მახასიათებლებს, როლს ადამიანის ცხოვრებაში და მრავალი სხვა.

ფენომენის შესავალი

ნალექი არის სეროლოგიური ტიპის ფენომენი, რომლის დროსაც ხსნადი ანტიგენები ურთიერთქმედებენ ანტისხეულებთან და, შედეგად, წარმოიქმნება ნალექი.
ნალექის რეაქციის ზოგადი მახასიათებელია ანტიგენისა და ანტისხეულების შეთანხმებული გავლენის ფორმა. ამ ტიპის ურთიერთქმედება შესაძლებელს ხდის საკვლევ ნივთიერებაში უცნობი ანტიგენების არსებობის დადგენას ცნობილი ანტისხეულების და ანტიგენების დამატებით. ნალექის პროცესი მარილების არსებობის გარეშე გაუარესდება და საუკეთესო ოპტიმალური მდგომარეობს 7.0-7.4 pH-ის ფარგლებში.

რეაქციის კომპონენტები

ნალექების რეაქციის კომპონენტებს შორის გამოირჩევა სამი ძირითადი ელემენტი:

1. ანტიგენი, რომელიც მოლეკულური ხასიათისაა. ის წვრილად დაყოფილ მდგომარეობაშია, სხვა სიტყვებით რომ ვთქვათ, ხსნადია. და ასევე ასეთ ანტიგენს ეწოდება პრეციპიტოგენი, რომელიც არის ლიზატი ან ქსოვილის ექსტრაქტი და ა.შ. აგლუტინოგენს აქვს უჯრედის თანდაყოლილი ზომა, ხოლო ნალექი პროპორციულია მოლეკულის ზომისა. ანტიგენის ხსნარი ხასიათდება გამჭვირვალობით.
2. ანტისხეული, რომელიც ნაპოვნია ადამიანის სისხლის შრატში, ასევე იმუნური დიაგნოსტიკური შრატში, რომელიც შეიცავს შესწავლილ ანტისხეულებს.
3. ელექტროლიტები არის ნატრიუმის ქლორიდის ხსნარი, რომელიც ხასიათდება იზოტონური მდგომარეობით.

პრეციპიტოგენის მიღება

ნალექის რეაქცია შეუძლებელია პრეციპიტოგენის გარეშე, რომელიც მიიღება მასალების დაფქვით და მათგან ცილოვანი ანტიგენების ამოღებით. მოპოვება ხდება ადუღების ან სხვა მეთოდებით.
პრეციპიტოგენების თვალსაჩინო მაგალითია ლიზატები, აგრეთვე ქსოვილებისა და ორგანოების ექსტრაქტები, სისხლის შრატი, მიკრობების ბულიონის კულტურებზე დაფუძნებული სხვადასხვა სახის ფილტრატები, აგრეთვე მიკროორგანიზმების მარილიანი ექსტრაქტები და აუტოლიზური ნივთიერებები.

დადგმა ნალექებში

ახლა მოდით შევხედოთ ნალექების რეაქციის დაყენების მეთოდს.
ტარდება რგოლის ნალექის რეაქცია, რომელიც ხდება სპეციალურად მომზადებულ საცდელ მილებში. შრატი შეჰყავთ ჭურჭლის ღრუში, ასხამენ მას კედლის გასწვრივ პიპეტის ცხვირის გამოყენებით. შემდეგ, ნალექის შესაბამისი რაოდენობა ზემოდან საგულდაგულოდ ფენა, შემდეგ კი ტესტის მილი ჰორიზონტალურიდან ვერტიკალურ მდგომარეობაშია მოყვანილი. ნალექის რეაქციის დაყენება და გათვალისწინება ძალიან სკრუპულოზური ოპერაციაა. შედეგი მხედველობაში მიიღება ანტიგენსა და ანტისხეულს შორის საზღვარზე თეთრი რგოლის გაჩენის შემდეგ. თუ რეაქციის რეაქტიული ელემენტები ერთმანეთს შეესაბამება, მაშინ ისინი ურთიერთობენ, მაგრამ ეს შესამჩნევი ხდება მათი ურთიერთქმედების ხანგრძლივი პერიოდის შემდეგ.
ნალექის რეაქცია ასევე ტარდება პეტრის ჭურჭელში ან შუშის სლაიდზე, სადაც ხდება აგარის გელი გადატანა მცირე ფენად. გამკვრივების შემდეგ, გელში ამოიჭრება მცირე რაოდენობის ჭები, რომელშიც განთავსდება ანტიგენები და ანტისხეულები. ამ მოქმედების განხორციელების ორი გზა არსებობს: რადიალური იმუნოდიფუზიის მეთოდი და ორმაგი იმუნოდიფუზია.

Ზოგადი ინფორმაცია

ნალექების მექანიკა აგლუტინაციის მოწყობილობის მსგავსია. იმუნური ტიპის შრატის გავლენის ქვეშ, ანტიგენი, რომელმაც უკვე მოახდინა რეაქცია, ამცირებს მის გამჭვირვალობას როგორც შრატის, ასევე ანტიგენის.
რეაქციის რეგისტრაცია შეიძლება გაუმჯობესდეს ანტიგენების ანტისხეულებზე შრეებით. შედეგად, შეიძლება შეინიშნოს რგოლის ფორმის ნალექების გამოჩენა. ამ ფენომენს ეწოდება რგოლის ნალექი და ხორციელდება სპეციალურ მილებში, რომელთა დიამეტრი 2,5-დან 3,5 მმ-მდეა. ნალექის რეაქციის ერთ-ერთი ყველაზე გავრცელებული მაგალითია ჯილეხის დიაგნოზი.
ნალექი შესაძლებელს ხდის აგარში დიფტერიის კულტურის ტოქსიკურობის დონის განსაზღვრას.
განხილული რეაქციის დროს ხდება ანტიგენური კომპლექსების და ანტისხეულების დალექვა. ნალექი არის იმუნოლოგიური ფენომენი, რომელიც საშუალებას იძლევა განისაზღვროს ანტისხეულების შემცველობა სისხლის შრატში ავადმყოფი ან ვაქცინირებული ადამიანებისა და ცხოველების.

ტიტრირების შედეგი

მნიშვნელოვანია ვიცოდეთ, რომ ზემოაღნიშნული მეთოდის ტიტრირებით მიღებული მონაცემები არ არის რაოდენობრივი. ანტისხეულების შემცველი რაოდენობის რაოდენობრივი შეფასების შესაქმნელად და გასაანალიზებლად M. Heidelberger-მა და E. Kabat-მა შეიმუშავეს რეაქციის სპეციალური ტექნიკა, რომელიც ეფუძნება ეკვივალენტური ზონის ძიებასა და იდენტიფიკაციას. ანტიგენების ასაკობრივი რაოდენობის შერევა ანტიშრატის მუდმივ მოცულობასთან იწვევს თავდაპირველად წარმოქმნილი ნალექის ზრდას, შემდეგ კი ის კვლავ მცირდება ანტიგენური კომპლექსების დაშლის უნარის გაზრდის გამო. თითოეულ მილში შემავალ ზენატანებში ანტისხეულების რაოდენობის განსაზღვრით, შეგიძლიათ აღმოაჩინოთ, რომ ანტისხეულების მქონე კერძების გარკვეულ რაოდენობაში არ იქნება სითხე. აქ, სხვა საცდელ მილებთან შედარებით, წარმოიქმნება ყველაზე დიდი ნალექი. ამის წყალობით და ცილების მთლიანი მნიშვნელობიდან ანტიგენური ცილის ნალექის გამოკლებით, შესაძლებელია კონკრეტულად შესწავლილი შრატის მოცულობაში შემავალი ანტისხეულების ზუსტი მნიშვნელობის მიღება. შემდეგი, ნალექში ცილის მოლეკულების რაოდენობა განისაზღვრება აზოტის რაოდენობით ან კოლორიმეტრული მეთოდების გამოყენებით.

ღირებულებების შეფასება

სადიაგნოსტიკო მეთოდოლოგიაში ნალექების მნიშვნელობების შეფასებამ უნდა გაითვალისწინოს ანტისხეულების იმუნურ შრატში არსებობის ალბათობა, რომელსაც არ გააჩნია ნალექის თვისება, რაც ნიშნავს, რომ თავად ნალექი შეიძლება არ წარმოიქმნას ანტიგენებთან რეაქციის შემდეგ. ასეთი მოლეკულების სიაში შედის ნაწილობრივი ანტისხეულები და ზოგიერთი სახეობა გამა A-გლობულინების ჯგუფიდან.

ნალექის რეაქცია ლაბორატორიულ პირობებში თავის გამოყენებას პოულობს სხვადასხვა სახის მოდიფიკაციაში. მაგალითად, თერმოპრეციპიტაციის რეაქცია გამოიყენება ბოტულიზმის, ჯილეხის და სხვა ბაქტერიული ანტიგენების გამოსავლენად, რომლებიც არ ექვემდებარება თერმულ დენატურაციას. რგოლის ნალექისგან განსხვავებით, ამ ტიპის რეაქცია იყენებს მასალის ფილტრებს მოხარშულ მდგომარეობაში.
კომპლექსურ ნარევში ნალექი არ იძლევა ნარევის ცალკეული ელემენტების თვისებების დახასიათების საშუალებას. ასეთ შემთხვევებში ადამიანი მიმართავს აგარში ნალექის მეთოდს, ასევე იყენებს იმუნოელექტროფერეზს.

დიფუზური ნალექი

კვლევის ამ სფეროში არსებობს დიფუზური ნალექების რეაქციის კონცეფცია (DPR). იგი ეფუძნება ანტისხეულების და ხსნადი ანტიგენების გელში დიფუზიის უნარს. დიფუზია არის გარკვეული ნივთიერების მოლეკულის უნარი შეაღწიოს მეორის მოლეკულებში, რაც გამოწვეულია თერმული მოძრაობით.
გელი არის დისპერსიული ტიპის სისტემა, რომელშიც თხევადი ფაზა თანაბრად ნაწილდება მყარ ფაზაში. ყველაზე ხშირად, აგარის გელი გამოიყენება ამ რეაქციისთვის.
პარამეტრების მიცემის შემდეგ, რომლითაც მოლეკულები შეიძლება გავრცელდნენ ერთმანეთისკენ, მათ შეხვედრას თან ახლავს ანტიგენი + ანტისხეულების კომპლექსის წარმოქმნა. ასეთი ნეოპლაზმი შეიძლება გავრცელდეს თავად გელში ყოფნისას და ის ნალექის სახით მიიღებს ზოლის ფორმას, რომელიც შეიძლება გამოვლინდეს შეუიარაღებელი თვალით. თუ ანტიგენი და ანტისხეული ჰომოლოგიურია, ზოლი არ წარმოიქმნება.
პირობების შექმნა, რომლებშიც მოხდება დიფუზია აგარის ფენაში ყოფნისას, მოიცავს კომპონენტების ჩამოსხმას, მაგრამ ჭაბურღილების საერთო რაოდენობა და მათი შედარებითი პოზიცია განისაზღვრება პრობლემის ტიპის მიხედვით, რომელიც უნდა გადაიჭრას. RPD აძლევს ადამიანს შესაძლებლობას აღმოაჩინოს და ამოიცნოს უცნობი იზოლირებული ვირუსები ცნობილი ანტისხეულების შრატის გამოყენებით ტესტირებით.

განაცხადი

ნალექი ფართოდ გამოიყენება არა მხოლოდ დაავადებების დიაგნოსტიკაში, არამედ პოულობს თავის გამოყენებას სასამართლო მედიცინაში. ძნელი წარმოსადგენია ანალიზი, რომლის დროსაც შესაძლებელი იქნება სისხლის, ორგანოს ან ქსოვილის სახეობის დადგენა დანაშაულებრივ იარაღზე, რომელიც არ იყენებს ნალექის რეაქციას. ამ პროცესის დროს გამოიყენება ნალექიანი შრატები, რომლებიც მიიღება სხვადასხვა ცხოველისა და ფრინველის იმუნიზაციით. მნიშვნელოვანია, რომ შრატის ტიტრის დონე იყოს მინიმუმ 1:10,000 და მას ასევე უნდა ჰქონდეს საკმარისი სპეციფიკა. აღმოჩენილი სისხლის ლაქიდან ან მისი ქერქიდან კეთდება ექსტრაქტი ფიზიკური გამოკვლევისთვის. ხსნარი, რომელიც შემდგომში ექვემდებარება ნალექის შრატს. ამ რეაქციის გამოყენებით შესაძლებელია განვსაზღვროთ როგორც ადამიანის, ისე ცხოველის ქსოვილისა და ორგანოს ცილების ტიპები. მოღრუბლული ექსტრაქტების მიღება აიძულებს ადამიანს მიმართოს ნალექს აგარზე.

დასკვნები

ჩვენ მიერ წაკითხული ინფორმაციის გაანალიზებით, შეგვიძლია დავასკვნათ, რომ ნალექის რეაქციები უაღრესად მნიშვნელოვანია ადამიანისთვის, რადგან ისინი საშუალებას გვაძლევს ამოვიცნოთ სხვადასხვა ანტიგენები ანტისხეულების გამოყენებით, ეს ფენომენი ასევე ფართოდ გამოიყენება სასამართლო მედიცინაში და საშუალებას აძლევს იდენტიფიცირებას სისხლის, ქსოვილის ტიპი ან ორგანო კონკრეტულ საგანთან მიმართებაში. არსებობს ნალექების რამდენიმე ტიპი და მეთოდი, რომლებიც გამოიყენება მოგვარებული პრობლემის წარმოქმნილი საჭიროებების შესაბამისად.

ნალექის რეაქცია (RP) არის ხსნადი მოლეკულური ანტიგენის კომპლექსის წარმოქმნა და დალექვა ანტისხეულებით ღრუბლის სახით, რომელსაც ეწოდება ნალექი. იგი წარმოიქმნება ანტიგენებისა და ანტისხეულების ექვივალენტური რაოდენობით შერევით; ერთი მათგანის სიჭარბე ამცირებს იმუნური კომპლექსის ფორმირების დონეს.

RP მოთავსებულია საცდელ მილებში (რგოლის ნალექის რეაქცია), გელებში, მკვებავ გარემოში და ა.შ. ფართოდ არის გავრცელებული RP-ის ჯიშები ნახევრად თხევად აგარს ან აგაროზის გელში: ორმაგი იმუნოდიფუზია Ouchterlony-ის მიხედვით, რადიალური იმუნოდიფუზია, იმუნოელექტროფორეზი და ა.შ.

მექანიზმი. იგი ტარდება გამჭვირვალე კოლოიდური ხსნადი ანტიგენებით, რომლებიც ამოღებულია პათოლოგიური მასალისგან, გარემოს ობიექტებიდან ან სუფთა ბაქტერიული კულტურებიდან. რეაქცია იყენებს მკაფიო სადიაგნოსტიკო პრეციპიტაციურ შრატს ანტისხეულების მაღალი ტიტრით. ნალექის შრატის ტიტრი მიიღება ანტიგენის უმაღლეს განზავებად, რაც იმუნურ შრატთან ურთიერთობისას იწვევს ხილული ნალექის - სიმღვრივის წარმოქმნას.

რგოლის დალექვის რეაქცია ტარდება ვიწრო საცდელ მილებში (დიამეტრი 0,5 სმ), რომლებშიც ემატება 0,2-0,3 მლ დალექილი შრატი. შემდეგ პასტერის პიპეტის გამოყენებით ნელ-ნელა ფენავენ 0,1-0,2 მლ ანტიგენის ხსნარს. მილები საგულდაგულოდ გადადის ვერტიკალურ მდგომარეობაში. დადებითი რეაქციის შემთხვევაში ნალექი ჩნდება შრატისა და საცდელი ანტიგენის საზღვარზე საკონტროლო მილებიდან არ წარმოიქმნება ნალექი.

15. კომპლემენტის შემცველი რეაქცია: ჰემოლიზის რეაქცია, კომპლემენტის ფიქსაციის რეაქცია. მექანიზმი, კომპონენტები, აპლიკაცია.

კომპლემენტის ფიქსაციის რეაქცია (CFR) არის ის, რომ როდესაც ანტიგენები და ანტისხეულები შეესაბამება ერთმანეთს, ისინი ქმნიან იმუნურ კომპლექსს, რომელსაც კომპლემენტი (C) მიმაგრებულია ანტისხეულების Fc ფრაგმენტის მეშვეობით, ანუ კომპლემენტი შეკრულია ანტიგენ-ანტისხეულის კომპლექსით. თუ ანტიგენ-ანტისხეულის კომპლექსი არ ჩამოყალიბდა, მაშინ კომპლემენტი თავისუფალი რჩება.

AG და AT-ის სპეციფიკურ ურთიერთქმედებას თან ახლავს კომპლემენტის ადსორბცია (დაკავშირება). ვინაიდან კომპლემენტის ფიქსაციის პროცესი ვიზუალურად არ ჩანს, ჯ. ბორდეტმა და ო. ჟანგმა შემოგვთავაზეს ჰემოლიზური სისტემის (ცხვრის სისხლის წითელი უჯრედები + ჰემოლიზური შრატი) გამოყენება, როგორც ინდიკატორი, რომელიც აჩვენებს არის თუ არა კომპლემენტი ფიქსირდება.

AG-AT კომპლექსი. თუ AG და AT შეესაბამება ერთმანეთს, ანუ ჩამოყალიბდა იმუნური კომპლექსი, მაშინ კომპლემენტი დაკავშირებულია ამ კომპლექსით და ჰემოლიზი არ ხდება. თუ AT არ შეესაბამება AG-ს, მაშინ კომპლექსი არ წარმოიქმნება და კომპლიმენტი, თავისუფალი რჩება, ერწყმის მეორე სისტემას და იწვევს ჰემოლიზს.

კომპონენტები. კომპლემენტის ფიქსაციის რეაქცია (CFR) არის რთული სეროლოგიური რეაქცია. მის განსახორციელებლად საჭიროა 5 ინგრედიენტი, კერძოდ: AG, AT და კომპლემენტი (პირველი სისტემა), ცხვრის ერითროციტები და ჰემოლიზური შრატი (მეორე სისტემა).

CSC-ის ანტიგენი შეიძლება იყოს სხვადასხვა მოკლული მიკროორგანიზმების კულტურები, მათი ლიზატები, ბაქტერიების კომპონენტები, პათოლოგიურად შეცვლილი და ნორმალური ორგანოები, ქსოვილის ლიპიდები, ვირუსები და ვირუსის შემცველი მასალები.

ახალი ან გამხმარი ზღვის გოჭის შრატი გამოიყენება როგორც შემავსებელი.

მექანიზმი. RSK ტარდება ორ ფაზაში: 1 ფაზა - სამი კომპონენტის ანტიგენის + ანტისხეულის + კომპლემენტის შემცველი ნარევის ინკუბაცია; მე-2 ფაზა (ინდიკატორი) - ნარევში თავისუფალი კომპლემენტის გამოვლენა მასში ჰემოლიზური სისტემის დამატებით, რომელიც შედგება ცხვრის ერითროციტებისა და მათ მიმართ ანტისხეულების შემცველი ჰემოლიზური შრატისგან. რეაქციის 1-ლ ფაზაში, როდესაც წარმოიქმნება ანტიგენ-ანტისხეულის კომპლექსი, კომპლემენტი აკავშირებს, შემდეგ კი მე-2 ფაზაში არ მოხდება ანტისხეულებით მგრძნობიარე ერითროციტების ჰემოლიზი; რეაქცია დადებითია. თუ ანტიგენი და ანტისხეული არ ემთხვევა ერთმანეთს (სატესტო ნიმუშში არ არის ანტიგენი ან ანტისხეული), კომპლემენტი რჩება თავისუფალი და მე-2 ფაზაში შეუერთდება ერითროციტ - ანტიერითროციტების ანტისხეულების კომპლექსს, რაც იწვევს ჰემოლიზს; უარყოფითი რეაქცია. RSC გამოიყენება მრავალი ინფექციური დაავადების დიაგნოსტიკისთვის, კერძოდ, სიფილისის (ვასერმანის რეაქცია)

იმუნოდიაგნოსტიკური რეაქციები. ანტიგენ-ანტისხეულის რეაქციები და რეაქციები ეტიკეტირებულ კომპონენტებთან. გამოიყენება მიკროორგანიზმების იდენტიფიკაციისა და ინფექციური დაავადებების დიაგნოსტიკისთვის.

იმუნური რეაქციები გამოიყენება დიაგნოსტიკურ და იმუნოლოგიურ კვლევებში ავადმყოფ და ჯანმრთელ ადამიანებში. ამ მიზნით იყენებენ სეროლოგიური მეთოდები(ლათ. შრატი - შრატი და ლოგოები - სწავლება), ანუ ანტისხეულების და ანტიგენების შესწავლის მეთოდები სისხლის შრატში და სხვა სითხეებში, აგრეთვე სხეულის ქსოვილებში განსაზღვრული ანტიგენ-ანტისხეულების რეაქციების გამოყენებით.

პათოგენური ანტიგენების საწინააღმდეგო ანტისხეულების გამოვლენა პაციენტის სისხლის შრატში დაავადების დიაგნოსტიკის საშუალებას იძლევა. სეროლოგიური კვლევები ასევე გამოიყენება მიკრობული ანტიგენების, სხვადასხვა ბიოლოგიურად აქტიური ნივთიერებების, სისხლის ჯგუფების, ქსოვილისა და სიმსივნური ანტიგენების, იმუნური კომპლექსების, უჯრედული რეცეპტორების და ა.შ.

პაციენტისგან მიკრობის იზოლირებისას პათოგენის იდენტიფიცირება ხდება მისი ანტიგენური თვისებების შესწავლით იმუნური დიაგნოსტიკური შრატების გამოყენებით, ანუ ჰიპერიმუნიზირებული ცხოველების სისხლის შრატები, რომლებიც შეიცავს სპეციფიკურ ანტისხეულებს. ეს არის ე.წ სეროლოგიური იდენტიფიკაციამიკროორგანიზმები.

მიკრობიოლოგიასა და იმუნოლოგიაში ფართოდ გამოიყენება აგლუტინაცია, ნალექი, ნეიტრალიზაციის რეაქციები, კომპლემენტის შემცველი რეაქციები, ეტიკეტირებული ანტისხეულების და ანტიგენების გამოყენებით (რადიოიმუნოლოგიური, ფერმენტული იმუნოანალიზი, იმუნოფლუორესცენტური მეთოდები). ჩამოთვლილი რეაქციები განსხვავდება რეგისტრირებული ეფექტისა და წარმოების ტექნიკით, თუმცა, ისინი ყველა ძირითადია. დაფუძნებულია ანტიგენის ანტისხეულთან ურთიერთქმედების რეაქციაზე და გამოიყენება როგორც ანტისხეულების, ასევე ანტიგენების გამოსავლენად. იმუნური რეაქციები ხასიათდება მაღალი მგრძნობელობითა და სპეციფიკურობით.

ქვემოთ მოცემულია ძირითადი იმუნოდიაგნოსტიკური რეაქციების პრინციპები და დიაგრამები. აღწერილია რეაქციების დაყენების დეტალური ტექნიკა. პრაქტიკული მითითებები იმუნოდიაგნოსტიკისთვის.

აგლუტინაციის რეაქცია - RA(ლათ. აგლუტი- ნაცია- ადჰეზია) არის მარტივი რეაქცია, რომელშიც ანტისხეულები აკავშირებენ კორპუსკულარულ ანტიგენებს (ბაქტერიებს, ერითროციტებს ან სხვა უჯრედებს, მათზე ადსორბირებული ანტიგენებით უხსნად ნაწილაკებს, აგრეთვე მაკრომოლეკულურ აგრეგატებს). ეს ხდება ელექტროლიტების თანდასწრებით, მაგალითად, როდესაც ემატება იზოტონური ნატრიუმის ქლორიდის ხსნარი.

აგლუტინაციის რეაქციის სხვადასხვა ვარიანტები გამოიყენება: ვრცელი, ინდიკატური, ირიბი და ა.შ. აგლუტინაციის რეაქცია ვლინდება ფანტელების ან ნალექის წარმოქმნით.

RA გამოიყენება:

ანტისხეულების განსაზღვრა სისხლის შრატში პაციენტებში, მაგალითად, ბრუცელოზით (რაიტი, ჰედელსონის რეაქცია), ტიფური ცხელება და პარატიფოიდური ცხელება (ვიდალის რეაქცია) და სხვა ინფექციური დაავადებები;

პაციენტისგან იზოლირებული პათოგენის განსაზღვრა;

სისხლის ჯგუფების განსაზღვრა ერითროციტების ალოანტიგენების წინააღმდეგ მონოკლონური ანტისხეულების გამოყენებით.

პაციენტში ანტისხეულების დასადგენად დადებადეტალური აგლუტინაციის რეაქცია:დაამატეთ პაციენტის სისხლის შრატის განზავებას დიაგნოსტიკა(მოკლული მიკრობების შეჩერება) და 37 °C-ზე ინკუბაციიდან რამდენიმე საათის შემდეგ აღინიშნება შრატის ყველაზე მაღალი განზავება (შრატის ტიტრი), რომლის დროსაც მოხდა აგლუტინაცია, ანუ წარმოიქმნა ნალექი.

აგლუტინაციის ბუნება და სიჩქარე დამოკიდებულია ანტიგენისა და ანტისხეულების ტიპზე. ამის მაგალითია დიაგნოსტიკის (O- და R-ანტიგენების) ურთიერთქმედების თავისებურებები სპეციფიკურ ანტისხეულებთან. აგლუტინაციის რეაქციასთან O-დიაგნოსტიკა(სითბოს შედეგად მოკლული ბაქტერიები, რომლებიც ინარჩუნებენ სითბოს სტაბილურობას O-ანტიგენი)ხდება წვრილმარცვლოვანი აგლუტინაციის სახით. აგლუტინაციის რეაქცია H-diagnosticum-თან (ფორმალდეჰიდის მიერ მოკლული ბაქტერია, რომელიც ინარჩუნებს თერმოლაბილური ფლაგელის H-ანტიგენს) უხეშია და უფრო სწრაფად მიმდინარეობს.

თუ საჭიროა პაციენტისგან იზოლირებული პათოგენის დადგენა, ჩადეთ ინდიკატური აგლუტინაციის რეაქცია,სადიაგნოსტიკო ანტისხეულების გამოყენებით (აგლუტინირებადი შრატი), ანუ ტარდება პათოგენის სეროტიპიზაცია. საჩვენებელი რეაქცია ტარდება მინის სლაიდზე. პაციენტისგან იზოლირებული პათოგენის სუფთა კულტურა ემატება დიაგნოსტიკური აგლუტინაციის შრატის წვეთს 1:10 ან 1:20 განზავებით. მახლობლად მოთავსებულია კონტროლი: შრატის ნაცვლად, ნატრიუმის ქლორიდის ხსნარის წვეთი გამოიყენება. როდესაც შრატისა და მიკრობების შემცველ წვეთში ჩნდება ფლოკულენტური ნალექი, ა ფართო აგლუტინაციის რეაქციასაცდელ მილებში აგლუტინირებული შრატის მზარდი განზავებით, რომლებსაც ემატება 2-3 წვეთი პათოგენის სუსპენზია. აგლუტინაცია გათვალისწინებულია ნალექის რაოდენობით და სითხის გამჭვირვალობის ხარისხით. რეაქცია დადებითად ითვლება, თუ აგლუტინაცია შეინიშნება დიაგნოსტიკური შრატის ტიტრთან ახლოს განზავებაში. ამავდროულად, მხედველობაში მიიღება კონტროლი: შრატი განზავებული ნატრიუმის ქლორიდის იზოტონური ხსნარით უნდა იყოს გამჭვირვალე, მიკრობების სუსპენზია იმავე ხსნარში უნდა იყოს ერთგვაროვნად მოღრუბლული, ნალექის გარეშე.

სხვადასხვა დაკავშირებული ბაქტერიების აგლუტინაცია შესაძლებელია ერთი და იგივე დიაგნოსტიკური აგლუტინაციის შრატით, რაც ართულებს მათ იდენტიფიკაციას. ამიტომ იყენებენ ადსორბირებული აგლუტინაციის შრატი,საიდანაც ჯვარედინი რეაქტიული ანტისხეულები ამოღებულია დაკავშირებული ბაქტერიების ადსორბციით. ასეთი შრატები ინარჩუნებენ მხოლოდ ამ ბაქტერიისთვის სპეციფიკურ ანტისხეულებს. სპეციალური მონორეცეპტორული სადიაგნოსტიკო აგლუტინაციის შრატების წარმოება შემოთავაზებული იყო ა. კასტელანის მიერ (1902).

არაპირდაპირი (პასიური) ჰემაგლუტინაციის რეაქცია (RNGA, RPGA) ემყარება ერითროციტების გამოყენებას ანტიგენებით ან ანტისხეულებით, რომლებიც ადსორბირებულია მათ ზედაპირზე, რომელთა ურთიერთქმედება სისხლის შრატის შესაბამის ანტისხეულებთან ან ანტიგენებთან იწვევს ერითროციტების შეკრულობას და ტესტის ბოლოში ვარდნას. მილი ან უჯრედი ვგახეხილი ნალექის სახით (სურ. 13.2). ნეგატიური რეაქციის შემთხვევაში სისხლის წითელი უჯრედები დნება ■ ღილაკის სახით. როგორც წესი, ანტისხეულები გამოვლენილია RNGA-ში ანტიგენური ერითროციტების დიაგნოსტიკის გამოყენებით, რომელიც არის ერითროციტები ადსორბირებული. onმათ ანტიგენებით. ზოგჯერ გამოიყენება ანტისხეულების ერითროციტების დიაგნოსტიკა, რომელზედაც ადსორბირდება ანტისხეულები. მაგალითად, ბოტულინის ტოქსინის აღმოჩენა შესაძლებელია მასში ერითროციტული ანტისხეულის ბოტულინის ტოქსინის დამატებით (ამ რეაქციას ე.წ. არაპირდაპირი ჰემაგლუტინაციის საპირისპირო რეაქცია- რონგ). RNGA გამოიყენება ინფექციური დაავადებების დიაგნოსტიკისა და გონადოტროპული ჰორმონის დასადგენად ვშარდი ორსულობის დადგენისას, მედიკამენტების, ჰორმონების და ზოგიერთ სხვა შემთხვევაში ჰიპერმგრძნობელობის იდენტიფიცირება.

კოაგლუტინაციის რეაქცია . პათოგენური უჯრედები განისაზღვრება იმუნური დიაგნოსტიკური შრატით წინასწარ დამუშავებული სტაფილოკოკის გამოყენებით. პროტეინის შემცველი სტაფილოკოკები A,რომელსაც აქვს მიდრეკილება Fc - იმუნოგლობულინების ფრაგმენტი, არასპეციფიკურად ადსორბირებს ანტიმიკრობულ ანტისხეულებს, რომლებიც შემდეგ ურთიერთქმედებენ აქტიურ ცენტრებთან პაციენტებისგან იზოლირებულ შესაბამის მიკრობებთან. კოაგლუტინაციის შედეგად წარმოიქმნება ფანტელები, რომლებიც შედგება სტაფილოკოკის, დიაგნოსტიკური შრატის ანტისხეულებისა და აღმოჩენილი მიკრობისგან.

ჰემაგლუტინაციის დათრგუნვის რეაქცია (RTGA) ეფუძნება ბლოკადას, ვირუსული ანტიგენების დათრგუნვას იმუნური შრატის ანტისხეულებით, რის შედეგადაც ვირუსები კარგავენ სისხლის წითელი უჯრედების აგლუტინაციის უნარს (ნახ. 13.3). RTGA გამოიყენება მრავალი ვირუსული დაავადების დიაგნოსტიკისთვის, რომელთა გამომწვევ აგენტებს (გრიპის ვირუსები, წითელა, წითურა, ტკიპებით გამოწვეული ენცეფალიტი და ა.შ.) შეუძლიათ სხვადასხვა ცხოველის სისხლის წითელი უჯრედების აგლუტინაცია.

აგლუტინაციის რეაქცია სისხლის ჯგუფების დასადგენად გამოიყენება ABO სისტემის დასამყარებლად (იხ. განყოფილება 10.1.4.1) სისხლის წითელი უჯრედების აგლუტინაციის გამოყენებით იმუნური შრატის ანტისხეულებით სისხლის ჯგუფის ანტიგენების A (II), B (III) წინააღმდეგ. კონტროლი არის: შრატი, რომელიც არ შეიცავს ანტისხეულებს, ანუ შრატს AB (GU)სისხლის ტიპები; ანტიგენები, რომლებიც შეიცავს A (II), B (III) ჯგუფების სისხლის წითელ უჯრედებში. უარყოფითი კონტროლი არ შეიცავს ანტიგენებს, ანუ გამოიყენება 0 (I) ჯგუფის ერითროციტები.

IN აგლუტინაციის რეაქციები Rh ფაქტორის დასადგენად(იხ. განყოფილება 10.1.4.1) გამოიყენეთ ანტირეზუსის შრატები (მინიმუმ ორი განსხვავებული სერია). თუ შესწავლილი ერითროციტების მემბრანაზე არის Rh ანტიგენი, ხდება ამ უჯრედების აგლუტინაცია. სისხლის ყველა ჯგუფის სტანდარტული Rh-დადებითი და Rh-უარყოფითი ერითროციტები კონტროლს ემსახურება.

აგლუტინაციის რეაქცია ანტი-რეზუსის ანტისხეულების დასადგენად (ირიბი Coombs ტესტი)გამოიყენება ინტრავასკულარული ჰემოლიზის მქონე პაციენტებში. ზოგიერთ პაციენტში გამოვლენილია ანტირეზუსის ანტისხეულები, რომლებიც არასრული და ერთვალენტურია. ისინი კონკრეტულად ურთიერთობენ Rh-დადებით ერითროციტებთან, მაგრამ არ იწვევენ მათ აგლუტინაციას. ასეთი არასრული ანტისხეულების არსებობა განისაზღვრება არაპირდაპირი Coombs ტესტით. ამისათვის ანტი-Rh ანტისხეულების + Rh-დადებითი ერითროციტების სისტემას ემატება ანტიგლობულინის შრატი (ანტისხეულები ადამიანის იმუნოგლობულინების წინააღმდეგ), რაც იწვევს ერითროციტების აგლუტინაციას (სურ. 13.4). კუმბსის რეაქციის გამოყენებით, დიაგნოზირებულია იმუნური წარმოშობის ერითროციტების ინტრავასკულარულ ლიზასთან დაკავშირებული პათოლოგიური პირობები, მაგალითად, ახალშობილის ჰემოლიზური დაავადება: Rh-დადებითი ნაყოფის ერითროციტები ერწყმის სისხლში მოცირკულირე Rh ფაქტორის არასრულ ანტისხეულებს, რომლებსაც აქვთ. გაიარა პლაცენტაში Rh-უარყოფითი დედისგან.

ნალექის რეაქციები

ნალექის რეაქცია - RP (საიდანლათ. praecipito- ნალექი) - ეს არის ხსნადი მოლეკულური ანტიგენის კომპლექსის წარმოქმნა და დალექვა ანტისხეულებით ღრუბლის სახით, ე.წ. დააჩქაროს.იგი წარმოიქმნება ანტიგენებისა და ანტისხეულების ექვივალენტური რაოდენობით შერევით; ერთი მათგანის სიჭარბე ამცირებს იმუნური კომპლექსის ფორმირების დონეს.

ნალექის რეაქციები ტარდება საცდელ მილებში (რგოლი ნალექის რეაქცია),გელებში, მკვებავ გარემოში და ა.შ. გავრცელდა ნალექის რეაქციების მრავალფეროვნება აგარის ან აგაროზის ნახევრად თხევად გელებში: ორმაგი იმუნოდიფუზია Ouchterlony-ის მიხედვით. რადიალური იმუნოდიფუზია, იმუნოელექტროფორეზიდა ა.შ.

რგოლი ნალექის რეაქცია . რეაქცია ტარდება ვიწრო ნალექის მილებში იმუნური შრატით, რომელზედაც იხსნება ხსნადი ანტიგენი. ანტიგენისა და ანტისხეულების ოპტიმალური თანაფარდობით, ამ ორი ხსნარის საზღვარზე წარმოიქმნება ნალექის გაუმჭვირვალე რგოლი (ნახ. 13.5). ანტიგენის სიჭარბე გავლენას არ ახდენს რგოლის ნალექის რეაქციის შედეგზე რეაგენტების თანდათანობითი დიფუზიის გამო თხევადი საზღვარზე. თუ ორგანოების ან ქსოვილების მოხარშული და გაფილტრული წყლიანი ექსტრაქტები გამოიყენება როგორც ანტიგენები რგოლის ნალექის რეაქციაში, მაშინ ამ რეაქციას ე.წ. თერმონალექის რეაქცია (ასკოლის რეაქცია,ჯილეხით/

ორმაგი იმუნოდიფუზიური რეაქცია Ouchteruny-ის მიხედვით . რეაქციის დასაყენებლად გამდნარ აგარის გელს აყრიან თხელ ფენად შუშის თეფშზე და გამკვრივების შემდეგ ამოიჭრება 2-3 მმ ზომის ჭები. ანტიგენები და იმუნური შრატები ცალ-ცალკეა მოთავსებული ამ ჭაბურღილებში, რომლებიც ერთმანეთის მიმართ დიფუზობენ. შეხვედრის ადგილზე, ექვივალენტური პროპორციებით, ისინი ქმნიან ნალექს თეთრი ზოლის სახით. მრავალკომპონენტიან სისტემებში ნალექის რამდენიმე ხაზი ჩნდება ჭაბურღილებს შორის სხვადასხვა ანტიგენებით და შრატის ანტისხეულებით; იდენტური ანტიგენებისთვის, ნალექის ხაზები ერწყმის; არაიდენტურისთვის ისინი იკვეთებიან (სურ. 13.6).

რადიალური იმუნოდიფუზიის რეაქცია . იმუნური შრატი გამდნარი აგარის გელით თანაბრად ასხამენ მინაზე. გელში გამაგრების შემდეგ კეთდება ჭები, რომლებშიც ანტიგენი მოთავსებულია სხვადასხვა განზავებაში. ანტიგენი, რომელიც დიფუზირდება გელში, აყალიბებს რგოლების ფორმის ნალექის ზონებს ჭაბურღილების გარშემო ანტისხეულებით (ნახ. 13.7). ნალექის რგოლის დიამეტრი ანტიგენის კონცენტრაციის პროპორციულია. რეაქცია გამოიყენება სისხლში სხვადასხვა კლასის იმუნოგლობულინების, კომპლემენტის სისტემის კომპონენტების და ა.შ.

იმუნოელექტროფორეზი- ელექტროფორეზისა და იმუნოპრეციპიტაციის კომბინაცია: ანტიგენების ნარევი შეჰყავთ გელის ჭებში და გამოიყოფა გელში ელექტროფორეზის გამოყენებით. შემდეგ, იმუნური შრატი შეჰყავთ ღარში ელექტროფორეზის ზონების პარალელურად, რომლის ანტისხეულები გელში დიფუზირებით წარმოქმნიან ნალექის ხაზებს ანტიგენთან შეხვედრის ადგილზე.

ფლოკულაციის რეაქცია(რამონის მიხედვით) (ლათ. ფლოკუსი -მატყლის ფანტელები) - ოფლდენტური ან ფლოკულენტური მასის გამოჩენა (იმუნოპრეციპიტაცია) სინჯარაში ტოქსინ-ანტიტოქსინის ან ტოქსოიდ-ანტიტოქსინის რეაქციის დროს. იგი გამოიყენება ანტიტოქსიკური შრატის ან ტოქსოიდის აქტივობის დასადგენად.

იმუნური ელექტრონული მიკროსკოპია- მიკრობების, ხშირად ვირუსების ელექტრონული მიკროსკოპია, დამუშავებული შესაბამისი ანტისხეულებით. იმუნური შრატით დამუშავებული ვირუსები ქმნიან იმუნურ აგრეგატებს (მიკროპრეციპიტატებს). ვირიონების ირგვლივ წარმოიქმნება ანტისხეულების „კოროლა“, რომელიც კონტრასტშია ფოსფოტუნგსტინის მჟავასთან ან სხვა ელექტრონ-ოპტიკურად მკვრივ პრეპარატებთან.

რეაქციები, რომლებიც მოიცავს კომპლემენტს

რეაქციები, რომლებიც მოიცავს კომპლემენტსეფუძნება კომპლემენტის აქტივაციას ანტიგენ-ანტისხეულის კომპლექსით (კომპლმენტის ფიქსაციის რეაქცია, რადიალური ჰემოლიზი და სხვ.).

კომპლემენტის ფიქსაციის რეაქცია (RSK) არის ის, რომ როდესაც ანტიგენები და ანტისხეულები შეესაბამება ერთმანეთს, ისინი ქმნიან იმუნურ კომპლექსს, რომლის მეშვეობითაც Fc -ანტისხეულის ფრაგმენტი მიმაგრებულია კომპლემენტთან (C), ანუ კომპლემენტი შეკრულია ანტიგენ-ანტისხეულის კომპლექსით. თუ ანტიგენ-ანტისხეულის კომპლექსი არ არის ჩამოყალიბებული, მაშინ კომპლემენტი თავისუფალი რჩება (სურ. 13.8). RSK ტარდება ორ ფაზაში: 1 ფაზა - სამი კომპონენტის ანტიგენის + ანტისხეულის + კომპლემენტის შემცველი ნარევის ინკუბაცია; მე-2 ფაზა (ინდიკატორი) - ნარევში თავისუფალი კომპლემენტის გამოვლენა მასში ჰემოლიზური სისტემის დამატებით, რომელიც შედგება ცხვრის ერითროციტებისა და მათ მიმართ ანტისხეულების შემცველი ჰემოლიზური შრატისგან. რეაქციის 1-ლ ფაზაში, როდესაც წარმოიქმნება ანტიგენ-ანტისხეულის კომპლექსი, კომპლემენტი აკავშირებს, შემდეგ კი მე-2 ფაზაში არ მოხდება ანტისხეულებით მგრძნობიარე ერითროციტების ჰემოლიზი; რეაქცია დადებითია. თუ ანტიგენი და ანტისხეული არ ემთხვევა ერთმანეთს (სატესტო ნიმუშში არ არის ანტიგენი ან ანტისხეული), კომპლემენტი რჩება თავისუფალი და მე-2 ფაზაში შეუერთდება ერითროციტ - ანტიერითროციტების ანტისხეულების კომპლექსს, რაც იწვევს ჰემოლიზს; რეაქცია უარყოფითია.

RSC გამოიყენება მრავალი ინფექციური დაავადების, კერძოდ, სიფილისის (ვასერმანის რეაქცია) დიაგნოსტიკისთვის.

რადიალური ჰემოლიზის რეაქცია (RRH) ) მოთავსებულია აგარის გელის ჭებში, რომელიც შეიცავს ცხვრის სისხლის წითელ უჯრედებს და კომპლემენტს. გელის ჭაბურღილებში ჰემოლიზური შრატის (ანტისხეულები ცხვრის სისხლის წითელი უჯრედების წინააღმდეგ) შეყვანის შემდეგ მათ გარშემო წარმოიქმნება ჰემოლიზის ზონა (ანტისხეულების რადიალური დიფუზიის შედეგად). ამ გზით შესაძლებელია დადგინდეს კომპლემენტის და ჰემოლიზური შრატის აქტივობა, აგრეთვე ანტისხეულები სისხლის შრატში გრიპის, წითურას და ტკიპებით გამოწვეული ენცეფალიტის მქონე პაციენტებში. ამისათვის ვირუსის შესაბამისი ანტიგენები ადსორბირდება ერითროციტებზე და პაციენტის სისხლის შრატს ამატებენ ამ ერითროციტების შემცველ გელის ჭებს. ანტივირუსული ანტისხეულები ურთიერთქმედებენ ერითროციტებზე შეწოვილ ვირუსულ ანტიგენებთან, რის შემდეგაც

შემდეგ კომპლემენტის კომპონენტები უერთდებიან ამ კომპლექსს, რაც იწვევს ჰემოლიზს.

იმუნური ერთგულების რეაქცია (IAR) ) ეფუძნება კომპლემენტის სისტემის გააქტიურებას კორპუსკულური ანტიგენებით (ბაქტერიები, ვირუსები), რომლებიც მკურნალობენ იმუნური შრატით. შედეგად, წარმოიქმნება კომპლემენტის გააქტიურებული მესამე კომპონენტი (C3b), რომელიც მიმაგრებულია კორპუსკულარულ ანტიგენზე, როგორც იმუნური კომპლექსის ნაწილი. ერითროციტებს, თრომბოციტებს და მაკროფაგებს აქვთ C3b რეცეპტორები, რის გამოც, როდესაც ეს უჯრედები შერეულია C3b მატარებელ იმუნურ კომპლექსებთან, ხდება მათი შერწყმა და აგლუტინაცია.

ნეიტრალიზაციის რეაქცია

იმუნური შრატის ანტისხეულებს შეუძლიათ გაანეიტრალონ მიკრობების ან მათი ტოქსინების მავნე მოქმედება მგრძნობიარე უჯრედებსა და ქსოვილებზე, რაც დაკავშირებულია ანტისხეულების მიერ მიკრობული ანტიგენების ბლოკადასთან, ე.ი. ნეიტრალიზაცია. ნეიტრალიზაციის რეაქცია(RN) ხორციელდება ცხოველებში ან მგრძნობიარე საცდელ ობიექტებში (უჯრედების კულტურა, ემბრიონები) ანტიგენ-ანტისხეულის ნარევის შეყვანით. ცხოველებში და საცდელ ობიექტებში მიკროორგანიზმების ან მათი ანტიგენების ან ტოქსინების მავნე ზემოქმედების არარსებობის შემთხვევაში, ისინი საუბრობენ იმუნური შრატის განეიტრალებაზე და, შესაბამისად, ანტიგენ-ანტისხეულის კომპლექსის ურთიერთქმედების სპეციფიკაზე (ნახ. 13.9).

იმუნოფლუორესცენციის რეაქცია - RIF (Coons მეთოდი)

არსებობს სამი ძირითადი ტიპის მეთოდი: პირდაპირი, ირიბი (სურ. 13.10), კომპლემენტით. კუნსის რეაქცია არის სწრაფი დიაგნოსტიკური მეთოდი მიკრობული ანტიგენების იდენტიფიცირებისთვის ან ანტისხეულების დასადგენად.

პირდაპირი RIF მეთოდი ემყარება იმ ფაქტს, რომ ქსოვილის ანტიგენები ან მიკრობები, რომლებიც დამუშავებულია იმუნური შრატებით, ანტისხეულებით, რომლებიც ეტიკეტირებულია ფტოროქრომებით, შეუძლიათ ბრწყინავდნენ ფლუორესცენტური მიკროსკოპის UV სხივებში.

ასეთი ლუმინესცენტური შრატით დამუშავებული ნაცხის ბაქტერიები ანათებენ უჯრედის პერიფერიის გასწვრივ მწვანე საზღვრის სახით.

არაპირდაპირი RIF მეთოდი შედგება ანტიგენ-ანტისხეულის კომპლექსის იდენტიფიცირებისგან, ანტიგლობულინის (ანტისხეულის) შრატის გამოყენებით, რომელიც ეტიკეტირებულია ფტოროქრომით. ამისათვის მიკრობების სუსპენზიის ნაცხი მკურნალობენ ანტიმიკრობული კურდღლის დიაგნოსტიკური შრატის ანტისხეულებით. შემდეგ ანტისხეულები, რომლებიც არ არის შეკრული მიკრობული ანტიგენებით, ირეცხება და მიკრობებზე დარჩენილი ანტისხეულები გამოვლენილია ნაცხის დამუშავებით ფტოროქრომებით ეტიკეტირებული ანტიგლობულინის (კურდღლის საწინააღმდეგო) შრატით. შედეგად წარმოიქმნება მიკრობების + ანტიმიკრობული კურდღლის ანტისხეულების + ანტიკურდღლის ანტისხეულების კომპლექსი, ეტიკეტირებული ფტოროქრომით. ეს კომპლექსი შეინიშნება ფლუორესცენტურ მიკროსკოპში, როგორც პირდაპირი მეთოდით.

ფერმენტული იმუნოსორბენტული მეთოდი ან ანალიზი (ELISA)

ELISA -ანტიგენების გამოვლენა მათი შესაბამისი ანტისხეულების გამოყენებით, რომლებიც კონიუგირებულია ტეგ ფერმენტთან (ცხენოსანი პეროქსიდაზა, ბეტა-გალაქტოზიდაზა ან ტუტე ფოსფატაზა). ანტიგენის შერწყმის შემდეგ ფერმენტებით მონიშნულ იმუნურ შრატთან, ნარევს ემატება სუბსტრატი/ქრომოგენი. სუბსტრატი იშლება ფერმენტის მიერ და იცვლება რეაქციის პროდუქტის ფერი - ფერის ინტენსივობა პირდაპირპროპორციულია შეკრული ანტიგენისა და ანტისხეულების მოლეკულების რაოდენობისა.

მყარი ფაზის ELISA - იმუნოლოგიური ტესტის ყველაზე გავრცელებული ვარიანტი, როდესაც იმუნური რეაქციის ერთ-ერთი კომპონენტი (ანტიგენი ან ანტისხეულები) სორბირებულია მყარ მატარებელზე, მაგალითად, პოლისტიროლის ფირფიტების ჭაბურღილებში.

ანტისხეულების განსაზღვრისას პაციენტის სისხლის შრატი, ანტიგლობულინის შრატი ეტიკეტირებული ფერმენტით და სუბსტრატი (ქრომოგენი) ფერმენტისთვის თანმიმდევრულად ემატება სორბირებული ანტიგენის მქონე ფირფიტების ჭებს.

ყოველ ჯერზე სხვა კომპონენტის დამატების შემდეგ, დაუკავშირებელი რეაგენტები ამოღებულია ჭებიდან საფუძვლიანი გარეცხვით. თუ შედეგი დადებითია, ქრომოგენის ხსნარის ფერი იცვლება. მყარი ფაზის მატარებელი შეიძლება იყოს სენსიბილიზებული არა მხოლოდ ანტიგენით, არამედ ანტისხეულებითაც. შემდეგ სასურველ ანტიგენს ემატება ჭაბურღილები სორბირებული ანტისხეულებით, ემატება იმუნური შრატი ფერმენტით ეტიკეტირებული ანტიგენის წინააღმდეგ და შემდეგ ემატება ფერმენტის სუბსტრატი.

კონკურენტული ELISA ვარიანტი . სამიზნე ანტიგენი და ფერმენტით მარკირებული ანტიგენი კონკურენციას უწევენ ერთმანეთთან შეზღუდული რაოდენობის იმუნური შრატის ანტისხეულების შეკავშირებას. კიდევ ერთი ტესტი - ანტისხეულები, რომლებსაც ეძებთ

და მარკირებული ანტისხეულები კონკურენციას უწევენ ერთმანეთს ანტიგენებისთვის.

რადიოიმუნოლოგიური მეთოდი ან ანალიზი (RIA)

უაღრესად მგრძნობიარე მეთოდი, რომელიც დაფუძნებულია ანტიგენ-ანტისხეულის რეაქციაზე ანტიგენების ან რადიონუკლიდით მარკირებული ანტისხეულების გამოყენებით (125 J, 14 C, 3 H, 51 Cr და ა.შ.). მათი ურთიერთქმედების შემდეგ, წარმოქმნილი რადიოაქტიური იმუნური კომპლექსი გამოიყოფა და მისი რადიოაქტიურობა განისაზღვრება შესაბამის მრიცხველში (ბეტა ან გამა გამოსხივება):

გამოსხივების ინტენსივობა პირდაპირპროპორციულია შეკრული ანტიგენისა და ანტისხეულების მოლეკულების რაოდენობასთან.

ზე მყარი ფაზის RIA ვერსია რეაქციის ერთ-ერთი კომპონენტი (ანტიგენი ან ანტისხეულები) სორბირებულია მყარ გადამზიდავზე, მაგალითად, პოლისტიროლის მიკროპანელების ჭაბურღილებში. მეთოდის კიდევ ერთი ვარიანტია კონკურენტული RIA.სასურველი ანტიგენი და რადიონუკლიდური მარკირებული ანტიგენი კონკურენციას უწევენ ერთმანეთთან შეზღუდული რაოდენობის იმუნური შრატის ანტისხეულების დასაკავშირებლად. ეს ვარიანტი გამოიყენება ტესტის მასალაში ანტიგენის რაოდენობის დასადგენად.

RIA გამოიყენება მიკრობული ანტიგენების იდენტიფიცირებისთვის, ჰორმონების, ფერმენტების, წამლებისა და იმუნოგლობულინების, აგრეთვე სხვა ნივთიერებების, რომლებიც შეიცავს საცდელ მასალას მცირე კონცენტრაციებში - 10~ |0 -I0~ 12 გ/ლ. მეთოდი გარკვეულ გარემოს საფრთხეს უქმნის.

იმუნობლოტირება

იმუნობლოტირება (IB)- ძალიან მგრძნობიარე მეთოდი, რომელიც დაფუძნებულია ელექტროფორეზისა და ELISA-ს ან RIA-ს კომბინაციაზე.

ანტიგენი იზოლირებულია ელექტროფორეზის გამოყენებით პოლიაკრილამიდის გელში, შემდეგ გადადის (ბლოტი - ინგლისურიდან. ბლოტი, ლაქა) გელისგან გააქტიურებულ ქაღალდზე ან ნიტროცელულოზის მემბრანაზე და განვითარებულია ELISA-ს გამოყენებით. კომპანიები აწარმოებენ ასეთ ზოლებს "ბლოტებით"

ანტიგენები. ამ ზოლებზე პაციენტის შრატი გამოიყენება. შემდეგ, ინკუბაციის შემდეგ, პაციენტს რეცხავენ შეუკავშირებელი ანტისხეულებისგან და გამოიყენება შრატი ადამიანის იმუნოგლობულინების საწინააღმდეგოდ, ეტიკეტირებული ფერმენტით. ზოლზე წარმოქმნილი კომპლექსური ანტიგენი + პაციენტის ანტისხეული + ანტისხეული ადამიანის Ig-ს წინააღმდეგ, გამოვლენილია სუბსტრატის/ქრომოგენის დამატებით, რომელიც ფერს ფერმენტის მოქმედებით იცვლის (ნახ. 13.12).

IB გამოიყენება როგორც აივ ინფექციის დიაგნოსტიკური მეთოდი და ა.შ.

13.1. ანტიგენ-ანტისხეულების რეაქციები და მათი გამოყენება

ანტიგენის შეყვანისას ორგანიზმში წარმოიქმნება ანტისხეულები. ანტისხეულები ავსებენ ანტიგენს, რამაც გამოიწვია მათი სინთეზი და შეუძლიათ მასთან დაკავშირება. ანტიგენების ანტისხეულებთან შეკავშირება ორი ფაზისგან შედგება. პირველი ეტაპი სპეციფიკურია, რომელშიც ხდება ანტიგენური დეტერმინანტის სწრაფი შებოჭვა ანტისხეულების Fab ფრაგმენტის აქტიურ ცენტრთან. უნდა აღინიშნოს, რომ კავშირი გამოწვეულია ვან დერ ვაალის ძალებით, წყალბადით და ჰიდროფობიური ურთიერთქმედებით. კავშირის სიმტკიცე განისაზღვრება ანტისხეულის აქტიურ ადგილსა და ანტიგენის ეპიტოპს შორის სივრცითი შესაბამისობის ხარისხით. კონკრეტული ფაზის შემდეგ იწყება უფრო ნელი ფაზა - არასპეციფიკური, რომელიც ვლინდება ხილული ფიზიკური ფენომენით (მაგალითად, ფანტელების წარმოქმნა აგლუტინაციის დროს და ა.შ.).

იმუნური რეაქციები არის ურთიერთქმედება ანტისხეულებსა და ანტიგენებს შორის და ეს რეაქციები სპეციფიკური და ძალიან მგრძნობიარეა. ისინი ფართოდ გამოიყენება სამედიცინო პრაქტიკაში. იმუნური რეაქციების დახმარებით შეიძლება მოგვარდეს შემდეგი პრობლემები:

უცნობი ანტისხეულების განსაზღვრა ცნობილი ანტიგენებით (ანტიგენური diagnosticum). ეს ამოცანა ხდება მაშინ, როდესაც აუცილებელია პაციენტის სისხლის შრატში პათოგენის ანტისხეულების დადგენა (სეროდიაგნოსტიკა). ანტისხეულების აღმოჩენა საშუალებას გაძლევთ დაადასტუროთ დიაგნოზი;

უცნობი ანტიგენების განსაზღვრა ცნობილი ანტისხეულების გამოყენებით (დიაგნოსტიკური შრატი). ეს კვლევა ტარდება პაციენტის მასალისგან იზოლირებული პათოგენის კულტურის იდენტიფიცირებისას (სეროტიპინგი), ასევე გამოვლენისას

მიკრობული ანტიგენები და მათი ტოქსინები სისხლში და სხვა ბიოლოგიურ სითხეებში. არსებობს მრავალი სახის იმუნური რეაქცია, რომლებიც განსხვავდება ინსცენირების ტექნიკით და დაფიქსირებული ეფექტით. ეს არის აგლუტინაციის რეაქციები (RA), ნალექების რეაქციები (RP), რეაქციები, რომლებიც მოიცავს კომპლემენტს (RSC), რეაქციები ეტიკეტირებული კომპონენტების გამოყენებით (RIF, ELISA, RIA).

13.2. აგლუტინაციის რეაქცია

აგლუტინაციის რეაქცია (RA) არის ანტიგენის ანტისხეულებთან ურთიერთქმედების იმუნური რეაქცია ელექტროლიტების თანდასწრებით, ხოლო ანტიგენი კორპუსკულარულ მდგომარეობაშია (სისხლის წითელი უჯრედები, ბაქტერიები, ლატექსის ნაწილაკები ადსორბირებული ანტიგენებით). აგლუტინაციის დროს კორპუსკულური ანტიგენები ერთმანეთში აწებება ანტისხეულებით, რაც გამოიხატება ფლოკულენტური ნალექის წარმოქმნით. ფანტელების წარმოქმნა ხდება იმის გამო, რომ ანტისხეულებს აქვთ ორი აქტიური ცენტრი, ხოლო ანტიგენები პოლივალენტურია, ე.ი. აქვს რამდენიმე ანტიგენური განმსაზღვრელი. RA გამოიყენება პაციენტის მასალისგან გამოყოფილი პათოგენის იდენტიფიცირებისთვის, ასევე პაციენტის სისხლის შრატში პათოგენის ანტისხეულების გამოსავლენად (მაგალითად, რაიტის და ჰედლსონის რეაქციები ბრუცელოზისთვის, ვიდალის რეაქცია ტიფური ცხელებისთვის და პარატიფოიდური ცხელებისთვის).

RA დიაგნოსტიკის უმარტივესი გზაა რეაქცია მინაზე, ეს არის სავარაუდო RA, რომელიც გამოიყენება პაციენტისგან იზოლირებული პათოგენის დასადგენად. როდესაც რეაქცია დამყარებულია, დიაგნოსტიკური აგლუტინაციის შრატი გამოიყენება მინის სლაიდზე (განზავებით 1:10 ან 1:20), შემდეგ ემატება პაციენტის კულტურა. რეაქცია დადებითია, თუ წვეთში ჩნდება ფლოკულენტური ნალექი. მახლობლად მოთავსებულია კონტროლი: შრატის ნაცვლად, ნატრიუმის ქლორიდის ხსნარის წვეთი გამოიყენება. თუ სადიაგნოსტიკო აგლუტინაციის შრატი არ არის ადსორბირებული 1, მაშინ იგი განზავებულია (ტიტრამდე - განზავება, რომლის დროსაც უნდა მოხდეს აგლუტინაცია), ე.ი. ჩადეთ გაფართოებული RA სინჯარებში გაზრდით

1 არაადსორბირებული აგლუტინაციის შრატში შეიძლება მოხდეს დაკავშირებული ბაქტერიების აგლუტინაცია, რომლებსაც აქვთ საერთო (ჯვარედინი რეაქციის) ანტიგენები. ამიტომ იყენებენადსორბირებული აგლუტინაციის შრატი, საიდანაც ჯვარედინი რეაქტიული ანტისხეულები ამოღებულია დაკავშირებული ბაქტერიების ადსორბციით. ასეთი შრატები ინარჩუნებენ ანტისხეულებს, რომლებიც სპეციფიკურია მხოლოდ მოცემული ბაქტერიისთვის.

აგლუტინირებადი შრატის განზავება, რომელსაც ემატება პაციენტისგან იზოლირებული პათოგენის სუსპენზია 2-3 წვეთი. აგლუტინაცია მხედველობაში მიიღება საცდელ მილებში ნალექის რაოდენობით და სითხის გასუფთავების ხარისხით. რეაქცია დადებითად ითვლება, თუ აგლუტინაცია შეინიშნება დიაგნოსტიკური შრატის ტიტრთან ახლოს განზავებაში. რეაქციას თან ახლავს კონტროლი: შრატი განზავებული ნატრიუმის ქლორიდის იზოტონური ხსნარით უნდა იყოს გამჭვირვალე, მიკრობების სუსპენზია იმავე ხსნარში უნდა იყოს ერთნაირად მოღრუბლული, ნალექის გარეშე.

პაციენტის სისხლის შრატში პათოგენის მიმართ ანტისხეულების დასადგენად გამოიყენება სრულმასშტაბიანი RA. მისი დაყენებისას პაციენტის სისხლის შრატი განზავებულია სინჯარებში და თანაბარი რაოდენობით დიაგნოსტიკური სუსპენზია (მოკლული მიკრობების სუსპენზია) ემატება სინჯარებს. ინკუბაციის შემდეგ განისაზღვრება შრატის ყველაზე მაღალი განზავება, რომლის დროსაც მოხდა აგლუტინაცია, ე.ი. წარმოიქმნა ნალექი (შრატის ტიტრი). ამ შემთხვევაში აგლუტინაციის რეაქცია O-diagnosticum-თან (ბაქტერია გათბობით მოკლული, თერმოსტაბილური O-ანტიგენის შენარჩუნებით) ხდება წვრილმარცვლოვანი აგლუტინაციის სახით. აგლუტინაციის რეაქცია H-diagnosticum-თან (ფორმალდეჰიდის მიერ მოკლული ბაქტერია, რომელიც ინარჩუნებს თერმოლაბილური ფლაგელის H-ანტიგენს) უხეშია და უფრო სწრაფად მიმდინარეობს.

არაპირდაპირი (პასიური) ჰემაგლუტინაციის რეაქცია(RNGA ან RPGA) არის RA-ს ტიპი. ეს მეთოდი ძალიან მგრძნობიარეა. RNGA-ს დახმარებით ორი პრობლემის გადაჭრაა შესაძლებელი: პაციენტის სისხლის შრატში ანტისხეულების დადგენა, რომელსაც ემატება ანტიგენური ერითროციტური დიაგნოსტიკა, ეს არის ერითროციტები, რომლებზეც ცნობილი ანტიგენები ადსორბირდება; განსაზღვროს ანტიგენების არსებობა ტესტის მასალაში. ამ შემთხვევაში რეაქციას ზოგჯერ უწოდებენ საპირისპირო არაპირდაპირი ჰემაგლუტინაციის რეაქციას (RONHA). პროცედურის დროს ტესტ მასალას ემატება ანტისხეული ერითროციტების დიაგნოსტიკა (ერითროციტები მათ ზედაპირზე ადსორბირებული ანტისხეულებით). ამ რეაქციაში სისხლის წითელი უჯრედები მოქმედებენ როგორც მატარებლები და პასიურად მონაწილეობენ იმუნური აგრეგატების ფორმირებაში. დადებითი რეაქციით, პასიურად წებოვანი სისხლის წითელი უჯრედები ფარავს ხვრელის ფსკერს თანაბარ ფენად გახეხილი კიდეებით („ქოლგა“); აგლუტინაციის არარსებობის შემთხვევაში, სისხლის წითელი უჯრედები გროვდება ხვრელის ცენტრალურ ჭრილში, ქმნიან კომპაქტურ „ღილაკს“ მკვეთრად გამოხატული კიდეებით.

კოაგლუტინაციის რეაქციაგამოიყენება პათოგენური უჯრედების (ანტიგენების) დასადგენად ადსორბირებული ანტისხეულების გამოყენებით Სტაფილოკოკის ბაქტერია, A ცილას შეიცავს. A პროტეინს აქვს აფინურობა იმუნოგლობულინების Fc ფრაგმენტთან. ამის წყალობით, ანტისხეულები უკავშირდებიან სტაფილოკოკს არაპირდაპირ Fc ფრაგმენტის მეშვეობით, ხოლო Fab ფრაგმენტები ორიენტირებულია გარეთ და შეუძლიათ ურთიერთქმედება პაციენტებისგან იზოლირებულ შესაბამის მიკრობებთან. ამ შემთხვევაში ფანტელები იქმნება.

ჰემაგლუტინაციის ინჰიბიციის რეაქცია (HAI)გამოიყენება ვირუსული ინფექციების დიაგნოსტიკაში და მხოლოდ ჰემაგლუტინირებადი ვირუსებით გამოწვეული ინფექციების დროს. ეს ვირუსები თავის ზედაპირზე შეიცავს პროტეინს - ჰემაგლუტინინს, რომელიც პასუხისმგებელია ჰემაგლუტინაციის რეაქციაზე (HRA), როდესაც ვირუსებს ემატება სისხლის წითელი უჯრედები. RTGA გულისხმობს ვირუსული ანტიგენების ბლოკირებას ანტისხეულებით, რის შედეგადაც ვირუსები კარგავენ სისხლის წითელი უჯრედების აგლუტინაციის უნარს.

კუმბსის რეაქცია - RA არასრული ანტისხეულების დასადგენად. ზოგიერთი ინფექციური დაავადების დროს, როგორიცაა ბრუცელოზი, პათოგენის მიმართ არასრული ანტისხეულები ცირკულირებს პაციენტის სისხლის შრატში. არასრულ ანტისხეულებს უწოდებენ მაბლოკირებელ ანტისხეულებს, რადგან მათ აქვთ ერთი ანტიგენის დამაკავშირებელი ადგილი და არა ორი, როგორც სრული ანტისხეულები. ამიტომ, როდესაც ემატება ანტიგენური დიაგნოსტიკა, არასრული ანტისხეულები უერთდებიან ანტიგენებს, მაგრამ არ აწებებენ მათ. რეაქციის გამოსავლენად ემატება ანტიგლობულინის შრატი (ანტისხეულები ადამიანის იმუნოგლობულინების მიმართ), რაც გამოიწვევს რეაქციის პირველ ეტაპზე წარმოქმნილი იმუნური კომპლექსების (ანტიგენური დიაგნოსტიკა + არასრული ანტისხეულები) აგლუტინაციას.

კუმბსის არაპირდაპირი რეაქცია გამოიყენება ინტრავასკულარული ჰემოლიზის მქონე პაციენტებში. ზოგიერთ პაციენტში აღმოჩენილია არასრული მონოვალენტური ანტირეზუსის ანტისხეულები. ისინი კონკრეტულად ურთიერთობენ Rh-დადებით ერითროციტებთან, მაგრამ არ იწვევენ მათ აგლუტინაციას. ამიტომ ანტი-Rh ანტისხეულების სისტემას + Rh-დადებითი ერითროციტები ემატება ანტიგლობულინის შრატი, რაც იწვევს ერითროციტების აგლუტინაციას. კუმბსის რეაქციის გამოყენებით, დიაგნოზირებულია იმუნური წარმოშობის ერითროციტების ინტრავასკულარულ ლიზისთან დაკავშირებული პათოლოგიური პირობები, მაგალითად, ახალშობილის ჰემოლიზური დაავადება, რომელიც გამოწვეულია Rh კონფლიქტით.

RA სისხლის ჯგუფების დასადგენადეფუძნება ერითროციტების აგლუტინაციას იმუნური შრატის ანტისხეულებით სისხლის ჯგუფის ანტიგენების A(II), B(III) მიმართ. კონტროლი არის შრატი, რომელიც არ შეიცავს ანტისხეულებს, ე.ი. შრატის AB(IV) სისხლის ჯგუფი და A(P) და B(III) ჯგუფების ერითროციტების ანტიგენები. ჯგუფი 0(I) სისხლის წითელი უჯრედები გამოიყენება როგორც უარყოფითი კონტროლი, რადგან მათ არ აქვთ ანტიგენები.

Rh ფაქტორის დასადგენად გამოიყენება ანტი-Rh შრატები (მინიმუმ ორი განსხვავებული სერია). თუ შესწავლილი ერითროციტების მემბრანაზე არის Rh ანტიგენი, ხდება ამ უჯრედების აგლუტინაცია.

13.3. ნალექის რეაქცია

RP არის ანტისხეულების ანტიგენებთან ურთიერთქმედების იმუნური რეაქცია ელექტროლიტების არსებობისას და ანტიგენი ხსნად მდგომარეობაშია. ნალექის დროს ხსნადი ანტიგენები ილექება ანტისხეულებით, რაც გამოიხატება ღრუბლით ნალექის ზოლების სახით. ხილული ნალექის წარმოქმნა შეინიშნება, როდესაც ორივე რეაგენტი შერეულია ექვივალენტური თანაფარდობით. ერთ-ერთი მათგანის სიჭარბე ამცირებს იმუნური კომპლექსების რაოდენობას. ნალექის რეაქციის განხორციელების სხვადასხვა გზა არსებობს.

რგოლი ნალექის რეაქციამოთავსებულია მცირე დიამეტრის ნალექის მილებში. იმუნური შრატი ემატება სინჯარას და ხსნადი ანტიგენი საგულდაგულოდ ფენდება. თუ შედეგი დადებითია, ორი ხსნარის ინტერფეისზე წარმოიქმნება რძისფერი რგოლი. რგოლის ნალექის რეაქციას, რომელიც გამოიყენება ორგანოებსა და ქსოვილებში ანტიგენების არსებობის დასადგენად, რომელთა ექსტრაქტები იხარშება და გაფილტრულია, ეწოდება თერმოპრეციპიტაციის რეაქცია (ასკოლის რეაქცია თერმოსტაბილური ანტრაქსის ანტიგენის განსაზღვრისთვის).

Ouchterlony ორმაგი იმუნოდიფუზიის რეაქცია.ეს რეაქცია ტარდება აგარის გელში. ერთიანი სისქის გელის ფენაში ჭები იჭრება ერთმანეთისგან გარკვეულ მანძილზე და ივსება შესაბამისად ანტიგენით და იმუნური შრატით. ამის შემდეგ, ანტიგენები და ანტისხეულები დიფუზირდება გელში, ხვდებიან ერთმანეთს და ქმნიან იმუნურ კომპლექსებს, რომლებიც გროვდება გელში და ხილული ხდება ზუსტი ხაზების სახით.

კვება. ეს რეაქცია შეიძლება გამოყენებულ იქნას უცნობი ანტიგენების ან ანტისხეულების იდენტიფიცირებისთვის, ასევე სხვადასხვა ანტიგენებს შორის მსგავსების შესამოწმებლად: თუ ანტიგენები იდენტურია, ნალექების ხაზები ერთდება, თუ ანტიგენები არ არის იდენტური, ნალექების ხაზები იკვეთება, თუ ანტიგენები ნაწილობრივაა. იდენტურია, იქმნება სპური.

რადიალური იმუნოდიფუზიის რეაქცია.გამდნარ აგარის გელს ემატება ანტისხეულები და გელი თანაბარი ფენით გამოიყენება მინაზე. ჭები იჭრება გელში და მათ ემატება სხვადასხვა კონცენტრაციის ანტიგენის ხსნარის სტანდარტული მოცულობა. ინკუბაციის დროს ანტიგენები ჭაბურღილიდან რადიალურად იშლება და ანტისხეულებთან შეხვედრისას წარმოქმნიან ნალექის რგოლს. სანამ ჭარბი ანტიგენი რჩება ჭაში, ხდება ნალექის რგოლის დიამეტრის თანდათანობითი ზრდა. ეს მეთოდი გამოიყენება საცდელ ხსნარში ანტიგენების ან ანტისხეულების დასადგენად (მაგალითად, სისხლის შრატში სხვადასხვა კლასის იმუნოგლობულინების კონცენტრაციის დასადგენად).

იმუნოელექტროფორეზი.ანტიგენების ნარევი ჯერ ელექტროფორეზულად გამოიყოფა, შემდეგ ნალექის საწინააღმდეგო შრატი ემატება ცილის მოძრაობის მიმართულებით მიმავალ ღარში. ანტიგენები და ანტისხეულები გელში იშლება ერთმანეთის მიმართ; ურთიერთქმედებისას ისინი ქმნიან რკალისებრ ნალექის ხაზებს.

ფლოკულაციის რეაქცია(რამონის მიხედვით) - ნალექის რეაქციის სახეობა, რომელიც გამოიყენება ანტიტოქსიკური შრატის ან ტოქსოიდის აქტივობის დასადგენად. რეაქცია ტარდება საცდელ მილებში. სინჯარაში, სადაც ტოქსოიდი და ანტიტოქსინი ექვივალენტურ თანაფარდობაშია, შეინიშნება სიმღვრივე.

13.4. კომპლემენტის ფიქსაციის რეაქცია

ანტისხეულები, რომლებიც ურთიერთქმედებენ შესაბამის ანტიგენთან, აკავშირებენ დამატებით კომპლემენტს (1 სისტემა). კომპლემენტის ფიქსაციის მაჩვენებელია ჰემოლიზური შრატით სენსიტირებული ერითროციტები, ე.ი. ანტისხეულები სისხლის წითელი უჯრედების მიმართ (მე-2 სისტემა). თუ კომპლიმენტი არ არის დაფიქსირებული პირველ სისტემაში, ე.ი. თუ ანტიგენ-ანტისხეულის რეაქცია არ მოხდა, სენსიბილიზებული სისხლის წითელი უჯრედები მთლიანად ლიზდება (უარყოფითი რეაქცია). როდესაც კომპლემენტი ფიქსირდება პირველი სისტემის იმუნური კომპლექსებით, მგრძნობიარე ერითროციტების დამატების შემდეგ, ჰემოლიზი

არ არსებობს (დადებითი რეაქცია). კომპლემენტის ფიქსაციის რეაქცია გამოიყენება ინფექციური დაავადებების (გონორეა, სიფილისი, გრიპი და სხვ.) დიაგნოსტიკისთვის.

13.5. ნეიტრალიზაციის რეაქცია

მიკრობები და მათი ტოქსინები საზიანო გავლენას ახდენენ ადამიანის სხეულის ორგანოებსა და ქსოვილებზე. ანტისხეულებს შეუძლიათ დაუკავშირდნენ ამ მავნე აგენტებს და დაბლოკონ ისინი, ე.ი. განეიტრალება. დიაგნოსტიკური ნეიტრალიზაციის რეაქცია ეფუძნება ანტისხეულების ამ მახასიათებელს. იგი ხორციელდება ცხოველებში ან მგრძნობიარე საცდელ ობიექტებში (უჯრედების კულტურა, ემბრიონები) ანტიგენ-ანტისხეულის ნარევის შეყვანით. მაგალითად, პაციენტის მასალაში ტოქსინების გამოსავლენად, 1 ჯგუფის ცხოველებს უტარებენ პაციენტის მასალას. მე-2 ჯგუფის ცხოველებს შეჰყავთ მსგავსი მასალა, წინასწარ მკურნალობენ შესაბამისი ანტიშრატით. 1 ჯგუფის ცხოველები იღუპებიან, თუ მასალაში არის ტოქსინი. ცხოველთა მეორე ჯგუფი გადარჩება ტოქსინის დამაზიანებელი ეფექტი, რადგან ის ნეიტრალდება.

13.6. რეაქციები ეტიკეტირებული ანტისხეულების ან ანტიგენების გამოყენებით

13.6.1. იმუნოფლუორესცენციის რეაქცია (RIF, Koons მეთოდი)

ეს მეთოდი გამოიყენება ექსპრეს დიაგნოსტიკისთვის. მისი გამოყენება შესაძლებელია როგორც მიკრობული ანტიგენების, ასევე ანტისხეულების გამოსავლენად.

პირდაპირი RIF მეთოდი- ანტისხეულების ანტიგენებთან ურთიერთქმედების იმუნური რეაქცია, ხოლო ანტისხეულები მონიშნულია ფტოროქრომით - ნივთიერება, რომელსაც შეუძლია გარკვეული ტალღის სიგრძის სინათლის კვანტების გამოსხივება გარკვეული ტალღის სიგრძის შუქზე ზემოქმედებისას. ამ მეთოდის თავისებურებაა არასპეციფიკური ლუმინესცენციის გამოვლენის გამორიცხვის მიზნით არასპეციფიკური ლუმინესცენციის გამოვლენის გამორიცხვის აუცილებლობა ამ მეთოდის თავისებურება. ამისათვის ჩამოიბანეთ არარეაგირებული ანტისხეულები. შედეგების შეფასება ხდება ფლუორესცენტური მიკროსკოპის გამოყენებით. ასეთი ლუმინესცენტური შრატის საშუალებით დამუშავებული ნაცხის ბაქტერიები ანათებენ უჯრედის პერიფერიის გასწვრივ მუქ ფონზე.

არაპირდაპირი RIF მეთოდიგამოიყენება უფრო ხშირად, ვიდრე წინა. ეს რეაქცია ორ ეტაპად ტარდება. პირველ ეტაპზე ანტიგენები ურთიერთქმედებენ

ურთიერთქმედება შესაბამის ანტისხეულებთან, წარმოქმნის იმუნურ კომპლექსებს. ყველა კომპონენტი, რომელმაც არ მოახდინა რეაქცია (ანუ არ არის იმუნური კომპლექსების ნაწილი) უნდა მოიხსნას გარეცხვით. მეორე ეტაპზე, მიღებული ანტიგენ-ანტისხეულის კომპლექსი გამოვლენილია ფტოროქრომირებული ანტიგლობულინის შრატის გამოყენებით. შედეგად წარმოიქმნება მიკრობული + ანტიმიკრობული კურდღლის ანტისხეულები + ანტისხეულები კურდღლის იმუნოგლობულინების მიმართ, ეტიკეტირებული ფტოროქრომით. შედეგების შეფასება ხდება ფლუორესცენტური მიკროსკოპის გამოყენებით.

13.6.2. ფერმენტული იმუნოანალიზის მეთოდი ან ანალიზი

ELISA არის ყველაზე გავრცელებული თანამედროვე მეთოდი, რომელიც გამოიყენება ვირუსული, ბაქტერიული, პროტოზოული ინფექციების დიაგნოსტიკისთვის, კერძოდ აივ ინფექციის, ვირუსული ჰეპატიტის და ა.შ.

ბევრი ELISA მოდიფიკაციაა. ფართოდ გამოიყენება მყარი ფაზის არაკონკურენტული ELISA. იგი ხორციელდება 96 ჭაბურღილიანი პოლისტიროლის ფირფიტებით (მყარი ფაზა). რეაქციის ჩატარებისას აუცილებელია თითოეულ ეტაპზე ჩამოიბანოთ არარეაგირებული კომპონენტები. ანტისხეულების განსაზღვრისას, სისხლის ტესტის შრატს ემატება ჭაბურღილები, რომლებზეც ანტიგენები სორბირებულია, შემდეგ ანტიგლობულინის შრატი იწერება ფერმენტით. რეაქცია ხორციელდება ფერმენტისთვის სუბსტრატის დამატებით. ფერმენტის თანდასწრებით სუბსტრატი იცვლება და ფერმენტ-სუბსტრატის კომპლექსი შეირჩევა ისე, რომ რეაქციაში წარმოქმნილი პროდუქტი შეფერადდეს. ამრიგად, დადებითი რეაქციით, შეინიშნება ხსნარის ფერის ცვლილება. ანტიგენების დასადგენად, მყარი ფაზის მატარებელი სენსიბილიზებულია ანტისხეულებით, შემდეგ ანტიგენებს თანმიმდევრულად ემატება ტესტის მასალა (ანტიგენები) და ფერმენტებით მონიშნული შრატი. იმისთვის, რომ რეაქცია მოხდეს, ემატება სუბსტრატი ფერმენტისთვის. ხსნარის ფერის შეცვლა ხდება დადებითი რეაქციით.

13.6.3. იმუნობლოტირება

ეს მეთოდი ეფუძნება ელექტროფორეზისა და ELISA-ს კომბინაციას. იმუნობლოტირების ჩატარებისას (ბლოტი ინგლისურიდან. ბლოტი- ლაქა) ანტიგენების რთული ნარევი პირველად ექვემდებარება ელექტროფორეზს პოლიაკრილამიდის გელში. მიღებული ფრაქციული ანტი-

გენის პეპტიდები გადადის ნიტროცელულოზის მემბრანაში. შემდეგ ბლოტებს მკურნალობენ სპეციფიური ანტიგენის მიმართ ფერმენტებით მონიშნული ანტისხეულებით, ე.ი. ჩაატარეთ ELISA blot. იმუნობლოტირება გამოიყენება ინფექციების დიაგნოსტიკაში, როგორიცაა აივ.

13.6.4. იმუნური ელექტრონული მიკროსკოპია

მეთოდი გულისხმობს ვირუსების (ნაკლებად ხშირად სხვა მიკრობების) მიკროსკოპირებას ელექტრონულ მიკროსკოპში, წინასწარ დამუშავებული შესაბამისი იმუნური შრატით, ეტიკეტირებული ელექტრონ-ოპტიკურად მკვრივი პრეპარატებით, მაგალითად ფერიტინი, რკინის შემცველი ცილა.

13.7. ნაკადის ციტომეტრია

სისხლის უჯრედების დიფერენცირება ხდება ლაზერული ციტოფლორომეტრიის საფუძველზე. ამისათვის სასურველი უჯრედები შეღებილია ფლუორესცენტური მონოკლონური ანტისხეულებით CD ანტიგენების მიმართ. სისხლის ნიმუში, ეტიკეტირებული ანტისხეულებით დამუშავების შემდეგ, გადის თხელი მილით და მასში გადის ლაზერის სხივი, რომელიც აღაგზნებს ფტოროქრომს ანათებს. ფლუორესცენციის ინტენსივობა კორელირებს ანტიგენების სიმკვრივეს უჯრედის ზედაპირზე და შეიძლება რაოდენობრივად გაზომოს ფოტოგამრავლების მილის გამოყენებით. მიღებული შედეგები გარდაიქმნება ჰისტოგრამაში.

ნაკადის ციტომეტრია გამოიყენება იმუნური სტატუსის დასადგენად (ლიმფოციტების ძირითადი პოპულაციების შემცველობა, უჯრედშიდა და უჯრედგარე ციტოკინების შემცველობა, NK უჯრედების ფუნქციური აქტივობა, ფაგოციტოზის აქტივობა და ა.შ.).

ღრუბლის სახით ნალექს უწოდებენ. იგი წარმოიქმნება ანტიგენებისა და ანტისხეულების ექვივალენტური რაოდენობით შერევით; ერთი მათგანის სიჭარბე ამცირებს იმუნური კომპლექსის ფორმირების დონეს. ნალექის რეაქცია ტარდება საცდელ მილებში (რგოლი ნალექის რეაქცია), გელებში, მკვებავ გარემოში და ა.შ. ნალექის რეაქციის სახეობები ფართოდ არის გავრცელებული ნახევრად თხევად აგარს ან აგაროზის გელში: ორმაგი იმუნოდიფუზია Ouchterlony-ის მიხედვით, რადიალური იმუნოდიფუზია, იმუნოელექტროფორეზი. და ა.შ.
რგოლის ნალექის რეაქცია. რეაქცია ტარდება ვიწრო ნალექის მილებში: ხსნადი ანტიგენი ფენდება იმუნურ შრატზე. ანტიგენისა და ანტისხეულების ოპტიმალური თანაფარდობით, ამ ორი ხსნარის საზღვარზე წარმოიქმნება ნალექის გაუმჭვირვალე რგოლი (ნახ. 7.50). თუ რეაქციაში ანტიგენად გამოიყენება მოხარშული და გაფილტრული ქსოვილის ექსტრაქტები, მაშინ ამ რეაქციას ეწოდება თერმოპრეციპიტაციური რეაქცია (ასკოლის რეაქცია, რომელშიც ვლინდება ჯილეხის ჰაპტენი).

ბრინჯი. 7.50.

Ouchterlony ორმაგი იმუნოდიფუზიის რეაქცია.

რეაქციის დასაყენებლად გამდნარი აგარის გელის თხელ ფენას ასხამენ შუშის ფირფიტაზე და გამკვრივების შემდეგ მასში აჭრიან ჭებს. ანტიგენები და იმუნური შრატები ცალ-ცალკე მოთავსებულია გელის ჭურჭელში, რომლებიც ერთმანეთისკენ იშლება. შეხვედრის ადგილზე, ექვივალენტური პროპორციებით, ისინი ქმნიან ნალექს თეთრი ზოლის სახით (სურ. 7.51). მრავალკომპონენტიან სისტემებში ანტიგენებითა და ანტისხეულებით ჭაბურღილებს შორის ჩნდება ნალექის რამდენიმე ხაზი; იდენტური ანტიგენებისთვის ნალექის ხაზები ერწყმის ერთმანეთს, ხოლო არაიდენტური ანტიგენებისთვის ისინი იკვეთება.

ბრინჯი. 7.51

იმუნური შრატი გამდნარი აგარის გელით თანაბრად ასხამენ მინაზე. გელში გამკვრივების შემდეგ კეთდება ჭები, რომლებშიც ანტიგენი (Ag) თავსდება სხვადასხვა განზავებაში. ანტიგენი, რომელიც დიფუზირდება გელში, ქმნის რგოლების ნალექის ზონებს ჭაბურღილების გარშემო ანტისხეულებით. ნალექის რგოლის დიამეტრი ანტიგენის კონცენტრაციის პროპორციულია (ნახ. 7.52). რეაქცია გამოიყენება სისხლის შრატში სხვადასხვა კლასის იმუნოგლობულინების, კომპლემენტის სისტემის კომპონენტების და ა.შ.

ბრინჯი. 7.52.

ელექტროფორეზისა და იმუნოპრეციპიტაციის კომბინაცია: ანტიგენების ნარევი შეჰყავთ გელის ჭაბურღილებში და გამოიყოფა გელში ელექტროფორეზის გამოყენებით, შემდეგ იმუნური შრატი ემატება გელის ღარში ელექტროფორეზის ზონების პარალელურად. იმუნური შრატის ანტისხეულები დიფუზირდება გელში და ქმნიან ნალექის ხაზებს ანტიგენთან „შეხვედრის“ ადგილზე (ნახ. 7.53).

ბრინჯი. 7.53.

ფლოკულაციის რეაქცია (რამონის მიხედვით) (ლათ. ფლოკუსი- მატყლის ფანტელები) - ოპალესცენციის ან ფლოკულენტური მასის გამოჩენა (იმუნოპრეციპიტაცია) სინჯარაში ტოქსინ-ანტიტოქსინის ან ტოქსოიდ-ანტიტოქსინის რეაქციის დროს (სურ. 7.54). იგი გამოიყენება ანტიტოქსიკური შრატის ან ტოქსოიდის აქტივობის დასადგენად.

ბრინჯი. 7.54.

დიფტერიის გამომწვევი აგენტის - C. diphtheriae შტამები შეიძლება იყოს ტოქსიგენური (ეგზოტოქსინის გამომწვევი) და არატოქსიგენური. ეგზოტოქსინის წარმოქმნა დამოკიდებულია პროფაგის ბაქტერიებში არსებობაზე, რომლებიც ატარებენ ტოქსის გენს, რომელიც აკოდირებს ეგზოტოქსინის წარმოქმნას. დაავადების შემთხვევაში, ყველა იზოლატის ტესტირება ხდება ტოქსიკურობაზე - დიფტერიის ეგზოტოქსინის წარმოება აგარის ნალექის რეაქციის გამოყენებით (სურ. 7.55).

ბრინჯი. 7.55