Sintomi di micosi dei piedi. Diagnosi di laboratorio delle malattie fungine della pelle Non utilizzato nella diagnosi delle micosi superficiali

Le scaglie o i capelli vengono posti su un vetrino (il vetro deve essere sgrassato) e riempiti con una, due o tre gocce di una soluzione al 30% di potassio caustico o soda caustica e coperti con un coprioggetto. Per 2-3 minuti, con leggero riscaldamento sulla fiamma di un fornello ad alcool, pressare leggermente il preparato con un vetrino coprioggetto fino a quando
nuvola grigia durante l'esame delle scale. I capelli non dovrebbero essere distrutti, si gonfiano solo con tale riscaldamento. L'esame microscopico (ingrandimento 100-200 volte) con diaframma oscurato rivela elementi fungini: spore o fili di micelio. Una condizione necessaria per il successo dell'esame microscopico è l'accuratezza nell'ottenimento di squame e peli, che devono essere prelevati dalle zone interessate con apposite pinzette (pinzette per ciglia). È necessario prestare attenzione non solo ai capelli, alle croste e alle squame chiaramente visibili, ma anche ai residui di capelli appena visibili (i cosiddetti monconi) e ai punti neri, che vengono rimossi con un bisturi o un ago istologico. Non dovresti mai accontentarti di indicare al paziente le aree interessate, il medico stesso deve esaminare attentamente l'intero cuoio capelluto.

Nei capelli affetti da tricofitosi, le spore fungine sono disposte in una catena. Nella microsporia le spore sono molto più piccole che nella tigna, non formano catene e si trovano all'esterno del pelo. Ci sono corde di micelio settato che corrono all'interno dei capelli. I capelli sono come se fossero vestiti con una copertura e una disputa. Nella crosta si osservano spore polimorfiche, filamenti grossolani e variegati e solitamente bolle d'aria (Fig. 48).

In questo caso, i funghi non colpiscono completamente l'intero capello, ma rimangono aree non interessate.
Per ottenere materiale dalla pelle liscia, le squame vengono raschiate via. aree periferiche della lesione con un cucchiaio affilato o un bisturi. È più conveniente raschiare le unghie con un coltello medico affilato (bisturi), rimuovendo sezioni piccole ma profonde dalla superficie interna della lamina ungueale o raschiando via la polvere di pitiriasi dalle placche cornee dell'unghia.
Il materiale di partenza viene fatto bollire in una provetta con alcali e poi lasciato riposare in questa provetta per 12-20 ore.
Successivamente, il contenuto viene centrifugato e il sedimento viene esaminato al microscopio (metodo di N.A. Chernogubov).
I funghi crescono bene su terreni nutritivi artificiali contenenti carboidrati e sostanze proteiche. Particolarmente comuni sono il cosiddetto terreno Sabouraud originale, il mosto di birra, l'agar e le verdure.

2. Esame di laboratorio di materiale patologico

2.1. Studi microscopici

Per rilevare gli elementi morfologici del fungo - cellule di lievito, pseudomicelio, micelio, conidiofori, conidi, forme tissutali di micosi profonde - il materiale patologico viene esaminato in preparati nativi e colorati.

Il materiale patologico liquido viene esaminato allo stato non colorato nei seguenti liquidi chiarificanti: una miscela di alcol con glicerina (alcol etilico 1 parte, glicerina 2 parti, acqua distillata 2 parti), soluzione di Lugol (1 g di iodio cristallino, 2 g di ioduro di potassio, 150 ml di acqua), nonché in acqua o soluzione salina. Per preparare le preparazioni native, si applica una goccia di materiale su un vetrino utilizzando un'ansa o una pipetta, quindi si applicano 1-2 gocce di liquido chiarificante, si copre con un vetrino coprioggetto e si osserva al microscopio a basso ingrandimento di 1:80 (oculare 10x e obiettivo 8x), in cui si possono vedere grappoli di cellule di lievito e pseudomicelio, micelio e altri elementi di funghi. Con un ingrandimento elevato di 1:400 è possibile caratterizzare le singole cellule.

Il materiale patologico denso (pelle, squame delle unghie) viene posto in una goccia di soluzione KOH al 10-20%, leggermente riscaldata sulla fiamma del bruciatore (per una migliore macerazione) fino alla comparsa di cristalli alcalini attorno alla periferia della goccia. Quindi la goccia viene coperta con un vetrino coprioggetto, premuta leggermente ed esaminata al microscopio, prima a basso ingrandimento per trovare la scala, poi ad alto ingrandimento.

Nel materiale dei capelli, il mantello di spore che circonda i capelli (ectothrix) o all'interno dei capelli (endothrix) è solitamente molto chiaramente visibile. Le lesioni dei peli, così come la dimensione delle spore, sono specifiche per i diversi tipi di dermatofiti. È necessaria la diagnosi differenziale tra strutture fungine e artefatti. Possibili fonti di risultati falsi positivi includono goccioline lipidiche, bolle d'aria, fibre tessili e il cosiddetto “fungo mosaico”. Le goccioline lipidiche possono assomigliare alle cellule di lievito, un risultato più comune nel materiale scarsamente depurato. Le fibre tessili di solito si trovano separate dal materiale dell'epidermide, dei capelli o delle unghie. Sono più grandi delle ife fungine, hanno uno spessore irregolare e non contengono setti. Il “fungo mosaico” è un manufatto ottenuto durante la cristallizzazione del KOH a causa dell'eccessivo riscaldamento dei preparati. A differenza dei funghi, non esiste una chiara divisione in cellule.

Un passo importante nella diagnosi delle infezioni fungine è la preparazione di preparati colorati. Qualsiasi materiale patologico (preparati di strisci, impronte di organi, centrifughi e, ovviamente, sezioni istologiche) deve essere sottoposto a tre tipi principali di lavorazione: 1) colorazione con il metodo PAS per identificare veri funghi - eumiceti; 2) colorazione secondo il metodo Gram o in modifiche secondo Gram-Weigert, secondo Bogolepov, secondo Brown-Brenna - per identificare il microbiota batterico accompagnatorio, per identificare actinomiceti e nocardia; 3) colorazione secondo il metodo Ziehl-Nielson o modifica secondo il metodo Kinyon - per identificare microrganismi resistenti agli acidi, principalmente per indicazione e differenziazione con Mycobacterium tuberculosis, per rilevare agenti causali di lebbra, nocardia e lieviti sporigeni.

Il metodo PAS (Piodic Acid Schiff) prevede l'identificazione dei polisaccaridi neutri nelle pareti dei microrganismi. Nelle pareti della maggior parte degli eumiceti è presente un complesso glucano-mannano in concentrazioni variabili, a causa del quale si verifica la colorazione.

I procarioti (batteri) risultano PAS-negativi, compresi gli actinomiceti e la nocardia di interesse per il micologo. Tuttavia, durante la formazione delle drusen actinomicotiche, si forma un cosiddetto “cemento”, che incolla il micelio actinomicotico vegetativo in un granulo, che dà anche una colorazione PAS-positiva. A questo proposito, questo metodo è applicabile anche nella diagnosi dell'actinomicosi.

La reazione PAS (e la sua modifica) è il metodo più importante per diagnosticare le forme tissutali di infezione fungina. Il metodo si basa sull'ossidazione dei gruppi glicolici dei carboidrati con acido periodico o cromico. L'acido periodico ossida 1,2 e 1,4 glicoli in aldeidi e rompe i legami tra gli atomi di carbonio che portano gruppi idrossilici. I gruppi aldeidici possono essere rilevati anche utilizzando il reagente Aldeide Schiff. In situ, nelle pareti del fungo, il complesso eteropolisaccaridico si colora intensamente di rosso porpora (metodologia - vedi appendici).

Per sopprimere il colore dei tessuti circostanti, viene utilizzato il trattamento ("controcolore") con verde chiaro, giallo metanile, ecc. In questo caso vengono rilevate solo le cellule fungine, il che è molto utile nella fase di indicazione dell'agente patogeno nei tessuti o nei preparati di striscio. Allo stesso tempo, non è possibile giudicare la risposta dell’organismo e l’alterazione dei tessuti a tali farmaci. È sempre necessario colorare le preparazioni parallele con il metodo PAS con colorazione aggiuntiva con ematossilina.

In pratica, non viene utilizzato solo il metodo PAS nella versione classica, ma anche le sue varie modifiche: ossidazione con acido cromico (invece di acido iodico) - questa è la reazione di Bauer, colorazione di Gridley, impregnazione con argento metenamina secondo Gomory- Metodo Grocott. Tutti vengono utilizzati con successo per rilevare forme tissutali di funghi e si basano sullo stesso principio (tecnica - vedere Appendice). Tabella 3.

Tabella 3

Proprietà tintoriali delle forme tissutali dei funghi

(nel materiale patologico, nelle sezioni istologiche)

Micosi opportunistiche	Metodi di rilevamento
Candidosi	Colorazione PAS o Gridley
Aspergillosi	Ematossilina ed eosina, impregnazione Gomori-Grocott
Zigomicosi	Ematossilina ed eosina
Criptococcosi	Blu Alcian (secondo il metodo Mowry) + reazione PAS + ematossilina
Pneumocisti	Colorazione secondo il metodo Bauer, impregnazione secondo Gomory-Grocott, colorazione con tionina
Fusarium	Colorazione secondo il metodo Romanovsky-Giemsa, secondo il metodo Wright
Scedosporiasi
Tricosporosi	Ematossilina ed eosina, colorazione di Romanowsky-Giemsa
Feoifomicosi e cromomicosi	Ematossilina ed eosina
Micosi patogene primarie:	Metodi di rilevamento
Coccidioidosi	Reazione PAS + ematossilina
Istoplasmosi	impregnazione secondo Gomory-Grocott, colorazione con il metodo Bauer, colorazione con il metodo Romanovsky-Giemsa
Blastomicosi nordamericana
Paracoccidiosi	Reazione PAS, impregnazione secondo Gomory-Grocott
Adiaspiromicosi	Ematossilina ed eosina, reazione RAS
Pseudomicosi:	Metodi di rilevamento
Actinomicosi	Ematossilina ed eosina, colorazione Gram-Weigert
Nocardiosi	colorazione secondo il metodo Ziehl-Neelsen, secondo il metodo Kinyon, secondo il metodo Gram.

Se si ipotizza una diagnosi di criptococcosi è consigliabile utilizzare metodiche per la rilevazione specifica del materiale capsulare Cr.neoformans contenenti glicosaminoglicani (polisaccaridi acidi). A questo scopo viene utilizzata la colorazione con blu alcian (secondo il metodo Mowry), marrone base (secondo il metodo Shubich) e la colorazione mucicarminio. Molto utile è la tripla colorazione: reazione PAS, poi trattamento con blu Alcian, poi ematossilina. In questo caso diventa possibile la differenziazione tra criptococchi e forme tissutali di altri funghi con morfologia simile.

La descrizione del materiale patologico (preparati istologici) include dati sulla morfologia e dimensione delle forme tissutali dei funghi, le loro caratteristiche tintoriali, la relazione con i tessuti ospiti, la presenza di fagocitosi e la determinazione del microbiota associato.

2.2. Semina di materiale patologico e conteggio quantitativo delle cellule nelle micosi causate da funghi lieviti

L'ottenimento di colture di funghi è necessario per la loro identificazione e determinazione della sensibilità ai farmaci antifungini.

Prima dell'esame, l'espettorato viene omogeneizzato per 5-10 minuti agitando con sfere sterili. Se l'espettorato contiene molto muco ed è scarsamente omogeneizzato, è possibile aggiungervi 1-2 ml di soluzione salina sterile. L'espettorato viene esaminato al microscopio in preparazioni native o colorate. Se l'esame microscopico dell'espettorato ad alto ingrandimento mostra elementi fungini nel campo visivo, allora deve essere seminato in diluizioni di 1:10, 1:100, 1:1000; se non vengono rilevati elementi fungini, l'espettorato viene seminato non diluito. Le diluizioni vengono preparate in un mezzo nutritivo liquido (mosto, Sabouraud, acqua peptonata all'1%) o in soluzione salina sterile. Da ciascuna diluizione, 0,1 ml vengono inoculati utilizzando una spatola in 2 tazze di wort agar, agar Sabouraud o MPA con l'aggiunta di antibiotici antibatterici - penicillina e streptomicina, biomicina (100-200 unità/ml di terreno). Il mezzo nutritivo è pre-essiccato in un termostato a +37 C, perché in presenza di condensa la crescita delle colonie può essere confluente. Le colture vengono incubate in un termostato a + 37°C per 48 ore e poi, se si sviluppano colonie di lievito dello stesso tipo, vengono conteggiate quantitativamente. Il calcolo del numero di cellule di lievito (n) in 1 ml o 1 g del materiale di prova viene effettuato secondo la formula n = авс, dove a è il numero medio di colonie su una capsula Petri, b = 10 con un volume di inoculo di 0,1 ml, c è il grado di diluizione degli escrementi (10.100.1000).

Esempio di calcolo: su piastre con diluizione 1:1000 sono cresciute in media 60 colonie, mentre 1 ml degli escrementi in studio contiene 60 x 10 x 1000 = 600.000 cellule di lievito.

BAL, liquido di LAVAGGIO dei bronchi, delle cavità mascellari, della bile (porzioni A, B, C), del succo gastrico, del contenuto duodenale, dell'urina vengono trasferiti in provette da centrifuga e centrifugati per 10-15 minuti, dopodiché il liquido surnatante viene rapidamente drenato. Dal sedimento vengono preparati preparati nativi per la microscopia. Se la microscopia rivela cellule di lievito in ciascun campo visivo, la semina viene effettuata in diluizioni di 1:100 e 1:1000, 0,1 ml ciascuna, su terreni nutritivi solidi e incubata a 37 C per 48 ore. non rivelare cellule di lievito, il sedimento seminato senza diluizione. La quantità di flora di lievito viene calcolata per 1 ml di materiale patologico.

Le FECI vengono prelevate con un misurino nella quantità di 0,2 g, poste in 1,8 ml di mosto liquido e mescolate accuratamente con una bacchetta di vetro. La diluizione risultante (1:10) viene lasciata riposare per 5-10 minuti, si preparano diluizioni 1:100, 1:1000 e si inoculano in un volume di 0,1 ml su 2 piastre Petri con terreno agarizzato. La quantità di flora di lievito viene registrata per 1 g di feci.

Liquido cerebrospinale. Caratterizzarne l'aspetto (trasparente o torbido, incolore o colorato, presenza di sangue, sedimenti). Strisci microscopici del sedimento del liquido cerebrospinale dopo la centrifugazione. Vengono preparati tre preparati: nativo - in una goccia di soluzione salina sterile; nativo - in una goccia di inchiostro e uno striscio per la colorazione con il metodo PAS, Gram e Alcian blu secondo Mowry.

Microscopia liquido cerebrospinale nei preparati nativi e colorati permette di determinare la presenza di cellule di lievito in erba e frammenti di micelio fungino, o di batteri che causano meningiti purulente (meningococco, pneumococco, Haemophilus influenzae, ecc.). Nella preparazione dell'inchiostro potrebbe essere rilevato un fungo capsulare. Criptococco neoformans. Allo stesso tempo, sullo sfondo grigio dell'inchiostro, circondate da un leggero alone della capsula, sono visibili le cellule di lievito in erba. Le preparazioni di inchiostro possono contenere anche forme di lievito candida albicans che non presentano un leggero alone della capsula attorno alla cellula.

Cr. neoformans può anche essere rilevato utilizzando la colorazione Alcian blu (Mowry). La colorazione avviene a causa del rilevamento selettivo dell'eteropolisaccaride capsulare caratteristico di Cr.neoformans. Se viene rilevata flora batterica in una preparazione colorata con Gram, viene effettuato un ulteriore esame del liquido cerebrospinale utilizzando metodi batteriologici appropriati. Dopo la microscopia del sedimento, il liquido viene inoculato su 3 tazze di agar di mosto essiccato o di agar Sabouraud appena preparato, nonché su mosto liquido o terreno Sabouraud liquido. Applicare 2-3 gocce di sedimento liquido sulla superficie dell'agar nutriente delle tazze 1 e 2, strofinare accuratamente con una spatola e inoculare 1 goccia in tre punti sulla superficie dell'agar della tazza 3 per rilevare funghi filamentosi. Il liquido rimanente viene trasferito in 5 ml di mosto liquido o agar Sabouraud. Le colture vengono incubate a due condizioni di temperatura: tazza 1 - a +37 o C, e tazze 2 e 3 e semina in mezzo liquido - a +28 o C - +30 o C. Vengono visualizzate le colture ad una temperatura di +37 o C al 2 e 5 giorno e a 28 - 30 o C - il 4, 7, 10 giorno di crescita. Se il 5° giorno ad una temperatura di +37 oC e il 10° giorno ad una temperatura di 28-30 oC non si verifica crescita, seminare da un mezzo nutritivo liquido su piastre con mosto o agar Sabouraud. Se non si verifica alcuna crescita della flora del lievito, il risultato dell'inoculazione del liquido viene registrato come negativo.

SCARICO delle fistole. Lo studio inizia con la microscopia del materiale in preparazioni native o colorate. Quindi il materiale viene inoculato su un mezzo di agar (mosto o Sabouraud), per il quale 2-3 gocce dello scarico vengono applicate in una tazza e distribuite sulla superficie dell'agar con una spatola. Le colture vengono incubate per 48 ore a +37 o C.

SCARICO delle mucose.

1. Il tampone viene posto in una provetta con 2 ml di terreno liquido (mosto, terreno di Sabouraud o MPB) e agitato per 5-7 minuti senza immergere il tappo. Preparare diluizioni 1:10, 1:100 e inoculare 0,1 ml di ciascuna diluizione su due tazze di wort agar, agar Sabouraud o MPA. Le vaccinazioni su terreni solidi e una provetta con terreno liquido con un tampone (per l'arricchimento) vengono incubate a una temperatura di +37 C. Dopo 48 ore, viene contato il numero di colonie e viene calcolato il numero di cellule di lievito prelevate con un tampone approssimativamente determinato. Per fare ciò, il numero di colonie di lievito coltivate viene moltiplicato per 20 e la diluizione. Se non si verifica crescita di colonie sulle piastre, le diluizioni prelevate vengono riseminate dal terreno di arricchimento su una piastra con wort agar.

2. La semina può essere effettuata spostando un tampone con rotazione sulla superficie del mezzo nutritivo. In questo caso non viene preso in considerazione il numero di colonie di lievito, ma si nota solo la presenza e l’intensità della crescita: colonie singole, crescita significativa o continua, mancata crescita del microbiota.

SANGUE. I campioni di sangue venoso per l'emocoltura devono essere diluiti con terreno di arricchimento almeno 1:5 in modo che le proprietà battericide del sangue non inibiscano la crescita dei funghi. Inoculare rispettivamente 5-10 ml di sangue appena prelevato in 50-100 ml di terreno nutritivo (Sabouraud liquido con glucosio al 2% o terreno Kitt-Tarozzi dopo la sua rigenerazione). Per la coltura è possibile prelevare il sangue con un anticoagulante (soluzione 1:10 di citrato di sodio al 5%). Le colture vengono coltivate per 10 giorni a +37 o C con semina controllata nei giorni 5 e 10. Utilizzando una pipetta sterile, prelevare il sedimento, 3 gocce del quale vengono sparse con un'ansa batteriologica sulla superficie dell'agar del mosto nelle piastre Petri. Le tazze seminate vengono poste in un termostato con una temperatura di +37 o C per 2-5 giorni. In caso di crescita della flora del lievito, viene data una risposta preliminare sulla presenza del fungo nel sangue e la coltura viene determinata in base al genere e alla specie.

Viene descritto un altro metodo di emocoltura per la micoflora (H. Rieth). In questo caso, 5-10 ml di sangue vengono inoculati in gocce. Applicare 40-50 gocce di sangue sulla superficie di un mezzo nutriente denso in una capsula Petri con una pipetta sterile, a una distanza di 0,5 cm tra le gocce. La semina viene effettuata su due piastre Petri, incubando in una ad una temperatura di +37 oC e nell'altra a temperatura ambiente per 2-5 giorni.

PEZZI di tessuto d'organo. Viene fatta un'impronta con il campione di tessuto sulla superficie di un mezzo nutritivo denso in una capsula di Petri, quindi viene effettuata la setacciatura con un cappio. Lo stesso pezzo di tessuto viene posto in 50 ml di mezzo nutriente liquido (mosto, mezzo Sabouraud). Le colture vengono incubate in un termostato ad una temperatura di +37 oC per 5 giorni.

PELLE e squame delle unghie. La semina delle squame viene effettuata indipendentemente dai risultati della microscopia. Per fare ciò, utilizzando una spatola micologica sterile inumidita nella condensa del terreno, le scaglie vengono trasferite in una provetta su wort agar inclinato in 2-3 punti, premendole sulla superficie del terreno. A seconda della quantità di materiale ricevuto per la ricerca, l'inoculazione viene effettuata in 2-3 provette. Le colture vengono incubate in un termostato ad una temperatura di 28-37 oC per un massimo di 5 giorni.

I metodi di identificazione rapida sono ampiamente utilizzati C. albicans. Questa specie è in grado di formare tubi germinali e brevi filamenti di pseudomicelio entro diverse ore (2-4 ore a 37 o C) su siero di sangue, albume d'uovo, terreno di Eagle, terreno 199, ecc. In pratica i laboratori utilizzano siero umano (residui di reazioni sierologiche), dove a 37°C si formano tubi germinali e dopo 24 ore si formano grovigli di pseudomicelio. Per amore dell'apparenza C. albicans questo fenomeno è tipico nel 90% dei casi. I germogli si formano meno frequentemente C.tropicalis.

2.3. Esame microscopico e coltura di materiale patologico per sospette micosi da muffe

Il materiale patologico può essere esaminato in preparazioni native e colorate. Vetrini e vetrini coprioggetto destinati alla preparazione di microvetrini devono essere conservati in una miscela di alcol ed etere (1:1) per evitare la contaminazione dell'aria con micobiota. Prima dell'uso, i vetrini e i coprioggetto vengono sterilizzati sulla fiamma di un bruciatore.

Microscopia del materiale

MICROSCOPIA dell'espettorato. Per preparare preparazioni native, l'espettorato viene trasferito in una capsula Petri sterile ed esaminato su uno sfondo nero per rilevare piccole particelle (grumi). I grumi possono essere purulenti, purulenti-mucosi, purulenti-sanguinosi. La dimensione dei grumi varia di dimensione entro 0,3-3 mm di diametro, il loro colore può essere grigio, giallastro, verdastro. Per preparare microvetrini nativi, i singoli grumi vengono trasferiti con aghi da dissezione o un'ansa batteriologica in una goccia di alcol con glicerina o in una goccia di soluzione KOH al 10%. Coprire con un vetro di copertura, applicare una leggera pressione con un ago da dissezione e un microscopio a ingrandimenti del microscopio bassi (1:80, oculare 10x e obiettivo 8x) e alti (1:400, oculare 10x e obiettivo 40x).

I preparati a base di acque di risciacquo, essudato, nonché bile, urina, succo gastrico e liquori vengono preparati da sedimento nativo o da sedimento ottenuto mediante centrifugazione (a 1500 giri/min per 5 minuti). Il sedimento viene trasferito con un'ansa o una pipetta Pasteur in una goccia di soluzione di KOH al 10% su un vetrino, coperto con un coprioggetto ed esaminato al microscopio a basso e alto ingrandimento.

Per preparare i preparati colorati, i grumi o la goccia di sedimento da esaminare vengono distribuiti uniformemente con aghi da dissezione o con un vetrino più piccolo sulla superficie di un vetrino sterile fino ad ottenere uno striscio sottile. Lo striscio risultante viene essiccato all'aria, fissato con alcol metilico o miscela di Nikiforov (parti uguali di alcol etilico al 96% ed etere) per 3-5 minuti, oppure fiammandolo tre volte sulla fiamma di un bruciatore. Lo striscio fissato viene colorato utilizzando il metodo Gram, il metodo PAS e il bianco calcofluor. Il campione colorato viene microscopico utilizzando un sistema di microscopio a immersione (1:900, oculare 10x, obiettivo 90x).

Materiale per la semina

Quando si esamina qualsiasi materiale patologico per funghi filamentosi, questo viene inoculato su terreno Sabouraud solido o mosto con l'aggiunta di penicillina e streptomicina (100-200 unità/ml di terreno). La semina si effettua in due ripetizioni, tenendo conto delle diverse condizioni di temperatura per la crescita dei funghi filamentosi (+37 oC e +28 oC), sempre in 3 punti al centro della coppa. Il tempo di incubazione è di 4-5 giorni.

L'espettorato (grumi selezionati) viene trasferito con un'ansa batteriologica o una pipetta Pasteur sulla superficie del terreno o del mosto di Sabouraud. Il sito di semina è contrassegnato con una matita sul retro del fondo della piastra Petri. Le piastre Petri seminate vengono poste in un termostato con il coperchio rivolto verso l'alto.

Dopo un certo periodo di incubazione, i piatti seminati vengono esaminati e se viene rilevata la sporulazione, viene determinata la coltura fungina. Se non c'è sporulazione, il fungo viene sottoposto a subcoltura sul terreno differenziale di Czapek per un'ulteriore identificazione.

Il sedimento dell'acqua di lavaggio dei bronchi, delle cavità mascellari, dell'essudato, dell'urina, del succo gastrico (nativo o dopo centrifugazione) viene prelevato con una pipetta e inoculato in un volume di 0,1 ml. Le feci vengono diluite 1:10 (1 g di feci e 9 ml di liquido) in terreno di Sabouraud liquido o soluzione liquida isotonica sterile di cloruro di sodio, emulsionata, lasciata depositare per 10 minuti per sedimentare particelle di grandi dimensioni e il surnatante viene inoculato in un volume di 0,1 ml. Lo scarico dal canale uditivo esterno e dalla faringe, prelevato con un tampone, viene inoculato facendo passare attentamente ciascun lato del tampone sulla superficie del mezzo nutritivo. I tamponi possono essere inoculati. Per fare questo, i tamponi vengono posti in 10 ml di terreno Sabouraud liquido o mosto liquido con perle di vetro ed emulsionati per 10 minuti, inoculati con 0,1 ml di tampone di lavaggio con un prato (secondo Leshchenko V.M., 1973), o in tre punti.

Le squame della pelle e delle unghie vengono posizionate sulla superficie del mezzo nutritivo, premendole con cura.

Il sedimento del liquido cerebrospinale (centrifuga a 1500 giri/min per 5 minuti) viene inoculato in due tazze da 0,1 ml di terreno e il resto viene inoculato in un terreno di arricchimento (terreno liquido Sabouraud o mosto liquido), versato in provette da 5 ml. Le piastre inoculate vengono incubate come di consueto e le provette inoculate sul terreno di arricchimento vengono incubate a + 28 C per 10 giorni.

Se si verifica la crescita di un fungo filamentoso su un terreno solido, la sua coltura viene determinata da questo inoculo; se non si verifica alcuna crescita su agar Sabouraud o wort agar, il fungo viene studiato dal terreno di arricchimento. Per fare ciò, la coltura fungina viene nuovamente sottoposta a subcoltura sul mezzo denso differenziale di Czapek e successivamente identificata.

Da un pezzo di tessuto d'organo (biopsia, autopsia), viene lasciata un'impronta sulla superficie di un mezzo solido, esaminando il lato tagliato del pezzo in tre punti. Allo stesso tempo, pezzi di tessuto vengono posti in 50 ml di mezzo nutritivo liquido (Saburo, mosto).

Se si sospetta fungemia, il sangue viene esaminato in due o tre ripetizioni. Inoculare 5 o 10 ml di sangue rispettivamente in 50 o 100 ml di terreno liquido Sabouraud con glucosio al 2%. Le colture vengono coltivate a +37 C e +28 C per 10 giorni. La prima ispezione delle colture viene effettuata dopo 5 giorni, la seconda dopo 10 giorni. Il quinto giorno è possibile osservare la crescita del fungo filamentoso sotto forma di una massa di feltro sul fondo e di una pellicola superficiale. Il micelio viene sottoposto a subcoltura sul terreno differenziale di Czapek per determinare il genere e il tipo di fungo. Se non si osserva alcuna crescita fungina il giorno 5, i raccolti vengono conservati fino a 10 giorni e se non si verifica alcuna crescita, i risultati del test vengono registrati come negativi.

Quando si semina in tre punti, la crescita del fungo in due e tre punti è definita diagnosticamente significativa, in un punto - casuale. Se necessario, è possibile riseminare.

Identificazione di colture di muffe isolate

Dopo aver isolato la coltura, i funghi filamentosi vengono sottoposti a subcoltura sul terreno differenziale di Czapek per la determinazione generica e, se possibile, della specie.

Nella pratica dei laboratori diagnostici, di norma, utilizzano criteri di identificazione culturale e morfologica: valutano il modello di crescita di una coltura fungina su terreni agarizzati (diagnostica culturale, macromorfologia) e la micromorfologia del fungo.

Nei casi difficili vengono utilizzati ulteriori metodi diagnostici (studio dell'attività enzimatica, caratteristiche della temperatura della crescita di alcune muffe).

Il concetto di macromorfologia (caratteristiche culturali) comprende la struttura della colonia (soffice, feltrata, vellutata, ragnatela, lanosa, sfilacciata, farinosa, ecc.), la superficie (piatta, piegata, irregolare, a forma di cupola, a forma di nucleo, zonale , ecc.), pigmentazione della colonia fungina e del substrato (varie tonalità di verde, blu, viola, nero, grigio, ecc.), presenza di essudato sulla superficie della colonia.

La micromorfologia di un fungo da una coltura viene studiata utilizzando preparati che, a seconda del genere del fungo, vengono preparati come segue: una goccia di liquido per preparare i preparati (parti uguali di alcol, glicerina e acqua) viene applicata su un bicchiere diapositiva; al suo interno viene posto un pezzo di micelio, tagliato con una spatola micologica dalla colonia a forma di triangolo, catturando le parti centrale e periferica, e il pezzo tagliato viene raddrizzato con due aghi da dissezione con cura per evitare la formazione di bolle d'aria . In alcuni casi (muco e rizopo), durante la preparazione del farmaco, il micelio viene steso su un vetrino asciutto, su di esso viene applicata una goccia di liquido e coperto con un vetrino coprioggetto. I preparati vengono osservati al microscopio a basso e alto ingrandimento. Si studia il substrato e il micelio aereo, si nota la presenza o l'assenza di setti (setti) e si presta attenzione alla natura della sporulazione: conidiofori con conidi e sporangi con sporangispore.

I conidiofori variano nella struttura: da semplici ife spore singole a formazioni ramificate simili ad alberi. I conidiofori si trovano singolarmente o in gruppi; differiscono nettamente dalle ife vegetative del micelio, incolori o colorate, ascendenti, erette, a cascata, striscianti. Possono essere costituiti da una cella e da un gran numero di celle di diverse forme e dimensioni, ciascuna delle quali ha il proprio nome. Ad esempio, nel genere Aspergillus, il conidioforo è costituito dalle seguenti cellule: gambo, rigonfiamento vescicolare, sterigmi, catene di conidi. Nel genere Penicillium il conidioforo ha la forma di pennelli semplici o complessi, costituiti anche da varie cellule: rami di ramiè, metule, fialidi, catene di conidi.

Le muffe Mucor e Rhizopus sporulano sotto forma di sporangi con endosporangiospore. Lo sporangio si trova all'estremità dello sporangioforo. Gli sporangi sono sferici o a forma di pera, la maggior parte con una colonna speciale, che è una continuazione dello sporangioforo all'interno dello sporangio. Le sporangiospore sono rotonde, incolori o colorate.

I conidi (spore) delle muffe sono polimorfi (cilindrici, sferici, ovali, ellissoidali, ovoidali, a forma di pera, a forma di clava), uni e multicellulari, di dimensioni e colore variabili, singoli, in catene o raccolti in teste e disposti in grappoli. La superficie dei conidi può essere liscia, ruvida, spinosa, verrucosa, ispida, ecc.

Esame microscopico e coltura di materiale patologico per micosi causate da funghi dimorfici

Con queste micosi è necessario tenere conto del dimorfismo degli agenti patogeni.

Materiale patologico per infezioni micotiche patogene primarie (coccidioidosi, istoplasmosi, paracoccidioidosi, blastomicosi nordamericana), nonché cromomicosi, sporotricosi e micetomi possono essere pus, espettorato, raschiature da lesioni ulcerative sulla pelle e sulle mucose, liquido cerebrospinale, sangue, pezzi sottoposti a biopsia da lesioni sconfitte.

La difficoltà nell'individuare gli agenti causali di queste micosi è che, a causa del loro dimorfismo, la microscopia del materiale patologico rivelerà forme tissutali del fungo, il più delle volte cellule di lievito di varie morfologie o sferule con endospore, completamente diverse dagli elementi dello stesso fungo estratto dalla sua coltura coltivata ad una temperatura di +28 - +30 o C su normale agave Sabouraud, con un valore di pH più vicino all'acido. Bisogna però tenere presente che in alcuni funghi dimorfici è possibile ottenere in coltura una fase di crescita del fungo di lievito, che spesso ricorda la sua forma tissutale, ma quando coltivati ​​in terreni ricchi di proteine ​​con una reazione leggermente alcalina (pH = 7,6 - 7,8 ), ad una temperatura di 37 o C.

Quanto sopra vale per i funghi: Histoplasma capsulatum, Blastomyces dermatitidis, Paracoccidioides brasiliensis, Coccidioides immitis E Sporothrix schenckii.

La diagnosi di laboratorio delle micosi causate dai funghi qui menzionati si basa sul rilevamento delle forme tissutali nel materiale patologico mediante microscopia, sull'isolamento della coltura del patogeno e sulla sua identificazione mediante caratteristiche culturali e morfologiche.

L'esame microscopico viene effettuato in preparati non colorati su un vetrino in una goccia di soluzione al 10% di alcali caustici o in una miscela di alcol e glicerina in volumi uguali o in strisci colorati (Tabella 3).

L'inoculazione di materiale patologico viene effettuata sui suddetti mezzi nutritivi in ​​piastre Petri utilizzando una spatola batteriologica secondo il metodo generalmente accettato.

2.5. Esame microscopico e coltura di materiale patologico per dermatomicosi (cheratomicosi e dermatofitosi).

Oggetto dello studio sono le micosi superficiali, che colpiscono solo lo strato di cheratina dell'epidermide, e i dermatofiti, che colpiscono la pelle e le sue appendici (capelli, unghie), i cui agenti causali sono funghi legati al genere Trichophyton, Microsporum ed Epidermophyton.

La ricerca micologica di laboratorio comprende le stesse fasi delle altre micosi: microscopia del materiale e ottenimento di una coltura pura al momento della semina. La corretta raccolta del materiale influenza notevolmente il successo della microscopia e dell'acquisizione della coltura.

Il materiale patologico viene esaminato il prima possibile dopo la raccolta. Innanzitutto è diviso in tre parti: per la microscopia, la coltivazione e il riesame. La microscopia del materiale patologico è il metodo più semplice e veloce per stabilire la presenza di un fungo nei tessuti. Il materiale frantumato viene posto al centro di un vetrino in una goccia di soluzione di KOH al 10-20% e riscaldato leggermente sulla fiamma di una lampada ad alcool fino ad ottenere un bordo biancastro lungo il bordo della goccia, coperto con un vetrino coprioggetto e lasciato per 5-10 minuti (capelli, squame cutanee) e 30 - 40 minuti (unghie) per macerazione e chiarifica; il materiale può essere lavorato senza riscaldamento, per questo il preparato viene lasciato in una soluzione di KOH al 20% per 30-60 minuti.

Microscopia prima al microscopio a basso ingrandimento, poi ad alto ingrandimento.

La coltura è necessaria per isolare e identificare l'agente patogeno. Il materiale inoculato viene frantumato il più possibile e inoculato in quantità minime su agar inclinato in provette in 2-3 punti distanti 1-2 cm Almeno 2-3 provette (capelli) e 4-5 provette (squame della pelle e delle unghie) vengono inoculati con il materiale di un campione. Per l'isolamento primario dei dermatofiti, è preferibile utilizzare terreno standard agar Sabouraud con glucosio al 2-4% o agar mosto contenente antibiotici antibatterici (penicillina 50 μg/ml + streptomicina 50 μg/ml o biomicina 200 unità/ml) e anti- antibiotico antimuffa actidione (cicloesimide) 0,1 - 0,5 mg/ml. L'actidione non influenza la crescita dei dermatofiti e inibisce molte muffe, nonché le specie Candida e Cryptococcus.

Le colture vengono incubate a 22-30 oC (meglio 28 oC). La comparsa di crescita di dermatofiti si osserva dal 4° al 12° giorno di incubazione nei punti di semina lungo i bordi del materiale introdotto. Se non si verifica crescita entro 30 giorni, i risultati della coltura sono considerati negativi. In condizioni ottimali, le colture primarie di molti dermatofiti possono essere identificate 7-10 giorni dopo la semina, ma le colture dovrebbero essere monitorate per 20-30 giorni. Le colture primarie crescono in modo relativamente lento e quando si utilizzano terreni senza antibiotici, i dermatofiti possono essere soppressi da batteri o muffe a crescita più rapida. Quando appare la crescita nella semina primaria, è necessario setacciare dal bordo della colonia su un terreno differenziale fresco per ottenere una coltura pura, che servirà come materiale per l'identificazione del dermatofito isolato.

2.6. Metodi sierologici per la diagnosi delle micosi

L'importanza delle metodiche sierologiche consiste principalmente in: identificazione dei pazienti con probabili micosi invasive; conferma della natura micotica delle malattie allergiche; esame di screening di gruppi a rischio di sviluppare micosi.

Risultati falsi positivi dei test sierologici sono possibili con micocarriage e in persone sane sensibilizzate con antigeni fungini; i test negativi possono verificarsi in immunodeficienza anche in presenza di micosi invasiva in corso.

Metodi di routine generalmente accettati per la diagnosi sierologica delle micosi
descritto in modo sufficientemente dettagliato / P.N. Kashkin, V.V. Lisin. "Pratico
guida alla micologia medica", Medicina, 1983/. Tuttavia, in tempi recenti
decenni ci sono stati notevoli cambiamenti negli approcci metodologici /Elinov N.P.,
2001/. Sono state proposte procedure originali per la rilevazione di antigeni e anticorpi
alcuni metaboliti delle cellule fungine; sono stati creati test diagnostici speciali
kit ("balene"), ad esempio Pastorex ® Candida, per la determinazione in
Reazioni di "agglutinazione al lattice" di epitopi oligomannosici ripetuti di antigene
strutture/espresse su un gran numero di macromolecole
fungo; per la determinazione dell'antigene mannano della Candida, ad es.
siero di un paziente affetto da candidemia, è possibile utilizzare il kit Platelia ® Candida.
Utilizzando il primo set, la soglia per determinare le strutture antigeniche è 2,5 ng/ml, utilizzando il secondo insieme al metodo _____________, la soglia per determinare - 0,5ng/ml.

Gli agenti causali delle micosi vengono spesso identificati durante i test di laboratorio su vari materiali clinici

Sangue

• Candida
• Criptococco
• Gli agenti patogeni miceliali vengono rilevati raramente negli esami del sangue, tranne che Fusarium

Liquido cerebrospinale

• Candida
• Criptococco

Secrezione di pus da ascessi, ulcere, ecc.

• Candida
• Criptococco
• Fusarium
• Aspergillo
• Sporotrix

Secrezioni respiratorie (espettorato, fluido BAL, biopsia bronchiale, aspirato transtracheale)

• Aspergillo
• Candida
• Criptococco
• Mucor
• Scedosporium
• Rizopus
• Sporotrix

Scarico, materiale bioptico dalle ferite

• Aspergillo
• Candida
• Fusarium
• Rizopus

Altri biosubstrati

• Candida
• Criptococco

Materiale dal torace e dalla cavità addominale; liquido sinoviale

• Aspergillo
• Candida
• Fusarium

Corpo vitreo

• Candida
• Aspergillo

IV. Criteri per la diagnosi delle micosi sistemiche: parametri clinici e di laboratorio della diagnosi finale

Esofagite

• presenza di cambiamenti caratteristici durante l'esofagoscopia
• identificazione del fungo durante la coltivazione del materiale bioptico
• presenza di pseudomicelio negli strisci colorati o segni di crescita fungina invasiva nel materiale bioptico

Polmonite

Polmonite dovuta a Candida spp.

• cambiamenti infiltrativi acuti su una radiografia del torace, in coincidenza con manifestazioni cliniche di polmonite fungina
• identificazione Candida spp. Quando si coltiva materiale del tratto respiratorio inferiore ottenuto da biopsia transtoracica, biopsia transbronchiale, risultati di biopsia polmonare o biopsia guidata toracoscopicamente
• identificazione dello pseudomicelio in materiale bioptico adeguatamente colorato

Polmonite dovuta a Aspergillus spp., Fusarium spp., Scedosporium apiospermum

• identificazione di elementi fungini nei tessuti e coltura positiva
• infiltrati persistenti o progressivi nei polmoni, resistenti alla terapia antibiotica
• rilevamento di uno di questi agenti patogeni mediante espettorato o coltura BAL
• segni clinici di polmonite (tosse, mancanza di respiro, dolore “pleurico”, respiro sibilante, rumore di attrito pleurico)
• cambiamenti caratteristici alla radiografia o alla TC dei polmoni:

Cambiamenti subpleurici infiltrativi, nodulari, ad angolo acuto o cavernosi

Sintomo di "alone" alla TAC dei polmoni

Progressione delle alterazioni infiltrative con formazione di cavità e comparsa del sintomo “falce”.

• assenza di altri agenti patogeni durante la coltura del fluido BAL che potrebbero causare i cambiamenti presentati nei polmoni

Sinusite

• segni clinici e radiologici di sinusite acuta
• segni microscopici e colturali di micosi durante l'esame del materiale aspirato o bioptico

Infezione del tratto urinario

• rilevamento di >1x10 CFU/ml con colture ripetute di urina adeguatamente raccolta

Fungemia

• Rilevazione singola di funghi durante l'emocoltura durante un periodo di aumento della temperatura corporea > 38 o C

Micosi acuta disseminata

• Fungemia in combinazione con segni colturali o istologici di danno ai tessuti profondi (compreso il tessuto sottocutaneo) o identificazione dell'agente patogeno da due biosubstrati normalmente sterili

Endoftalmite

• segni oftalmologici di endoftalmite
• identificazione dell'agente patogeno dall'occhio, dal sangue o da altri focolai di diffusione

Ascesso o osteomielite

• segni radiografici/TC/RM di osteomielite
• identificazione del patogeno nel materiale aspirato o bioptico

Meningite

• determinazione dei cambiamenti nel liquido cerebrospinale che confermano la presenza di infiammazione e rilevamento di funghi mediante microscopia nel liquido cerebrospinale
• rilevamento di funghi mediante coltura del liquido cerebrospinale o determinazione degli antigeni Cr.neoformans, Candida e Aspergillus nel QCS

Candidosi cronica disseminata (epatolienale).

Possibile

• febbre persistente o intermittente dopo la fine di un periodo di neutropenia in combinazione con segni caratteristici di danno al fegato, alla milza o ai reni

Comprovato

• quanto sopra in abbinamento alla semina Candida spp. dal sangue prima della comparsa di segni di danno al fegato, alla milza o ai reni o con segni colturali e istologici di candidosi nel materiale bioptico delle lesioni

V. CAUSE DI INFEZIONI FUNGINE

Esistono diversi principi per classificare le infezioni fungine e i loro agenti causali. Ci sembra che sia praticamente il modo più semplice e opportuno dividere i funghi patogeni in 5 gruppi principali:

1. Agenti patogeni delle micosi superficiali;

2. Agenti patogeni della dermatomicosi;

3. Agenti patogeni delle micosi sottocutanee;

4. Agenti causativi di micosi profonde (micromiceti patogeni primari, agenti causali di infezioni opportunistiche).

5. Agenti patogeni della pseudomicosi.

*Va sottolineato che i patogeni dei primi tre gruppi nei pazienti immunodepressi possono causare fungemia e lesioni multiorgano.

Nelle sezioni seguenti diamo una descrizione degli agenti causali delle micosi secondo un unico schema: il suo nome secondo la nomenclatura accettata, un elenco di sinonimi, caratteristiche macroscopiche delle colonie su mezzi nutritivi e caratteristiche microscopiche degli elementi fungini visibili sotto un microscopio in preparati nativi e da colonie. Vengono inoltre forniti dati sulla distribuzione dei funghi in natura e vengono elencate le malattie da essi provocate.

La diagnosi di laboratorio delle malattie fungine si basa sul rilevamento del fungo e sulla determinazione del suo genere e tipo. Si compone di due fasi principali: studi microscopici e culturali.

Esame microscopico

L'esame microscopico è il primo e importante collegamento per confermare la diagnosi preliminare.

Il successo dell'esame microscopico dipende in gran parte dalla corretta raccolta del materiale patologico. Per l'esame microscopico è necessario selezionare i capelli che presentano segni visibili di danno fungino (opachi, rotti, ispessiti). I peli che hanno cambiato aspetto vengono rimossi con una pinzetta per epilazione. Per rilevare singoli peli affetti da microsporia, è possibile utilizzare una lampada fluorescente con filtro Wood (bagliore blu-verdastro).

Quando si selezionano i capelli interessati, è possibile utilizzare una serie di caratteristiche aggiuntive. I peli colpiti dai microspori presentano alla base una guaina grigia di spore localizzate esternamente. In caso di tricofitosi cronica, si trovano peli corti grigi colpiti, ricurvi sotto forma di "virgole" e "punti interrogativi", nonché "punti neri" (peli neri colpiti ispessiti, spezzati all'imboccatura del follicolo). spessore delle squame. In caso di tricofitosi infiltrativa-suppurativa, per l'esame microscopico, oltre ai capelli colpiti, è possibile utilizzare pus e croste dalla lesione.

Dalle lesioni cutanee con microsporia, tricofitosi e micosi delle pieghe inguinali è necessario raschiare le squame dalla zona periferica della lesione, dove il fungo si trova in quantità maggiori. I peli del vellus vengono raschiati via insieme alle scaglie di pelle.

Quando si esaminano i capelli affetti da microsporia e tricofitosi, si presta attenzione alla posizione delle spore (all'interno o all'esterno dei capelli) e alla loro dimensione. Questi dati consentono in alcuni casi di chiarire la diagnosi, la forma clinica della micosi e l'epidemiologia.

Nella forma interdigitale della micosi dei piedi, per l'esame microscopico vengono utilizzate scaglie di pelle e frammenti dello strato corneo macerato. L'area dell'unghia che deve essere esaminata al microscopio dipende dalla forma dell'onicomicosi. Con una forma superficiale, è necessario raschiare la superficie della lamina ungueale.

Nella forma distale-laterale più comune si effettua un raschiamento dal letto ungueale, da sotto la placca (ipercheratosi subungueale) con una parte della lamina ungueale alterata tagliata. Per la forma subungueale prossimale, vengono utilizzati metodi speciali per raccogliere materiale (perforazione di finestre con un trapano, biopsia dell'unghia).

Nella forma squamoso-ipercheratosica della micosi dei piedi le squame vengono raschiate via dalla superficie plantare. Nella forma disidrotica della micosi dei piedi, le coperture delle vesciche vengono tagliate per l'esame.

Tecnica per preparare il materiale per l'esame microscopico dei capelli . Una piccola goccia di KOH al 30% viene applicata su un vetrino e i capelli interessati vengono inseriti al suo interno con un ago da dissezione. La goccia con i capelli viene leggermente riscaldata sulla fiamma di una lampada ad alcool finché il vapore non appare sopra la superficie del liquido o un bordo di cristalli cade lungo il bordo della goccia di alcali. Dopo aver coperto con un coprioggetto, l'eccesso di alcali viene rimosso con carta da filtro. Il farmaco viene esaminato prima con un ingrandimento microscopico basso e poi elevato (x 400).

Squame della pelle e delle unghie . Sottili scaglie ungueali per l'esame microscopico vengono poste su un vetrino in una goccia di KOH al 30% e riscaldate, aggiungendo alcali man mano che evapora. Il campione raffreddato e non colorato viene coperto con un vetrino coprioggetto ed esaminato al microscopio.

Le squame spesse della pelle e delle unghie vengono poste in una provetta da centrifuga e riempita con alcune gocce di KOH al 30%. La provetta viene riscaldata a ebollizione e lasciata per 20-30 minuti. Parte del materiale ammorbidito viene trasferito su un vetrino con una bacchetta di vetro, premendo con un fiammifero finché non appare una “nuvola”, dopodiché viene esaminata al microscopio.

Pus . Una goccia di pus viene mescolata con una goccia di alcol e metà e metà di glicerina ed esaminata in una preparazione nativa.

Diagnostica culturale

La diagnostica culturale viene effettuata per chiarire definitivamente la diagnosi e chiarire l'epidemiologia. Si tratta di ottenere una coltura del fungo seguita da un esame microscopico.

I capelli, le squame (pelle e unghie), le vesciche o il pus colpiti vengono inoculati su un mezzo nutritivo artificiale. Dalla comparsa di colonie giganti sulle piastre Petri, si può avere un'idea del genere dell'agente patogeno (Microsporum, Trichophyton, Epidermophyton), del suo tipo (L. canis o ferrugineum, T. violaceum, verrucosum o gypseum). Il chiarimento finale del genere e delle specie del fungo è possibile solo sulla base di un esame microscopico della coltura risultante.

Diagnosi di laboratorio della candidosi superficiale

Per i test di laboratorio per funghi simili a lieviti è necessario materiale fresco. All'esame microscopico, a seconda delle manifestazioni cliniche e della localizzazione delle lesioni, scaglie di pelle, raschiature dalle unghie, una goccia di pus da sotto la piega ungueale, depositi biancastri dalle aree interessate della mucosa orale e dei genitali esterni, pareti vaginali, Si possono prelevare raschiamenti dalla mucosa dell'uretra, nonché lavaggi dal bordo rosso delle labbra, aree interessate della pelle da pieghe grandi e piccole.

A seconda della posizione della lesione e della natura delle manifestazioni cliniche, il materiale per la ricerca viene prelevato con un batuffolo di cotone, un bisturi, un'ansa, ecc. Le scaglie della pelle e delle unghie, i frammenti dell'epidermide e i raschiati della mucosa vengono pre- trattato con KOH al 30%. Il materiale patologico viene esaminato in preparati non colorati o colorati.

Nel primo caso, il materiale viene miscelato con una pari quantità di alcol e glicerina. Quando colorati con Gram, le cellule di lievito e lo pseudomicelio appaiono viola scuro, con Ziehl-Neelsen - blu e con Romanovsky-Giemsa - rosa-viola. In questo caso, una caratteristica distintiva della cellula di lievito è il germogliamento: la scoperta di una figura a "clessidra". Il prelievo di materiale dalla mucosa del cavo orale, dai genitali, dalla pelle del bordo rosso delle labbra, dagli angoli della bocca, dalla pelle delle pieghe grandi e piccole viene effettuato con un tampone sterile. Dopo aver prelevato il materiale, il tampone viene posto in un'altra provetta sterile con mosto liquido. La provetta con il tampone viene inviata al laboratorio di microbiologia. L'isolamento di una coltura pura di funghi simili a lieviti del genere Candida viene effettuato secondo metodi microbiologici generalmente accettati.

Secondo gli scienziati, il 70% della popolazione mondiale presenta sintomi di micosi dei piedi. Questa malattia colpisce le pieghe interdigitali e la pelle delle piante dei piedi. La causa della malattia è un fungo che inizialmente veniva trovato solo in aree limitate del sud-est asiatico e dell'Africa. La Prima Guerra Mondiale, causando migrazioni di massa di persone e il deterioramento delle condizioni sanitarie, portò alla diffusione della malattia in tutto il mondo.

Cosa provoca la micosi dei piedi

Il principale agente eziologico della malattia è Trichophyton rubrum. L'infezione può essere causata da T. mentagrophytes ed Epidermophyton floccosum. I funghi del genere Candida e i microrganismi della muffa possono diventare microbi patogeni molto meno frequentemente.

I fattori di rischio più significativi per la malattia:

• diabete;
• stato di immunodeficienza (AIDS);
• piedi piatti;
• aterosclerosi delle arterie periferiche;
• vene varicose degli arti inferiori.

Condizioni esterne favorevoli allo sviluppo dell'infezione:

• scarpe chiuse non assorbenti;
• lesioni ai piedi (calli, abrasioni);
• fare sport.

I sintomi del piede d'atleta si verificano più spesso negli uomini adulti. I bambini raramente si ammalano.

Sintomi di micosi dei piedi

Man mano che la malattia si sviluppa, compaiono desquamazione e secchezza della pelle, prurito e bruciore, soprattutto negli spazi tra le dita, e la comparsa di crepe dolorose sotto le dita. A volte i primi sintomi di micosi del piede sono vesciche che scoppiano con la formazione di erosioni. Spesso la malattia si presenta in forma cancellata, manifestata solo da una leggera desquamazione, che ricorda la farina, nelle pieghe tra le dita.

Esistono 4 forme cliniche della malattia.

La variante interdigitale, o intertriginosa, è la più comune. La pelle tra le dita diventa rossa, si screpola, lo strato superficiale si bagna e si sbuccia. Questi segni si estendono alla pianta dei piedi e sono accompagnati da forte prurito e bruciore. Spesso è associata un'infiammazione batterica.

La variante squamoso-ipercheratosica è associata a grave ispessimento e screpolatura della pelle. La suola diventa rossa e si sbuccia. Nella zona del tallone compaiono crepe profonde e dolorose; il prurito è solitamente insolito. Questa è spesso una lesione bilaterale ed è anche chiamata “piede a mocassino”.

La variante disidrotica è accompagnata dalla comparsa di numerose piccole vescicole pruriginose e dolorose. Si fondono tra loro, formando grandi bolle. Le coperture delle vesciche scoppiano, rivelando una superficie lucida, vulnerabile e dolorosa: l'erosione. Le manifestazioni esterne assomigliano all'eczema.

L'infiammazione microbica è spesso associata a linfonodi inguinali ingrossati, febbre, dolore alla gamba, nausea, mal di testa e altri segni di intossicazione. Con la forma disidrotica si verifica spesso un'allergia ai funghi: eczema micotico. È accompagnato da eruzioni cutanee su aree del corpo non infette dal fungo, ad esempio sulle mani.

La versione cancellata di solito passa inosservata. È accompagnato da una leggera desquamazione della pelle tra il pollice e l'indice e/o l'anulare e il mignolo del piede. Non c'è prurito.

Segni di micosi dei piedi

Diversi tipi di micosi dei piedi possono essere malattie indipendenti o verificarsi come parte di un'infezione fungina generale del corpo. A volte il segno "due piedi - una mano" si presenta con il coinvolgimento di questi organi. Può verificarsi onicomicosi, una distruzione fungina dell'unghia. A volte vengono colpite contemporaneamente le pieghe inguinali.

I principali sintomi e il trattamento della micosi del piede sono presentati nella foto:

Pelle scrostata

Pelle secca e screpolata

Bolle ed erosioni

Diagnostica

Un dermatologo esperto può riconoscere i diversi tipi di micosi dei piedi durante la prima visita. Tuttavia, per confermare la diagnosi è necessario l’esame microscopico. Per questo vengono utilizzate le squame della lesione, raschiate con una spatola e trattate con una soluzione alcalina. Il materiale risultante viene esaminato al microscopio e vengono rilevati gli agenti patogeni.

La microscopia diretta è veloce, economica e facile da eseguire, ma non è in grado di determinare quale tipo di fungo causa la malattia. Pertanto, il materiale viene inoculato in un mezzo nutritivo, seguito da un esame colturale del materiale risultante. Tuttavia, è possibile ottenere una coltura del fungo dopo averlo rilevato al microscopio solo nel 20-6% dei casi.

Tipi di trattamento per la micosi dei piedi

I farmaci per il trattamento delle malattie fungine dovrebbero essere prescritti da un dermatologo. Di solito, il trattamento della micosi del piede viene effettuato utilizzando mezzi esterni.

Uno dei farmaci efficaci per questa malattia è il clotrimazolo. Nel nostro negozio puoi acquistarlo a basso costo. Il medicinale sotto forma di lozione, Clotrimazolo, per unghie e pelle, sopprime la proliferazione di funghi nello spessore dello strato corneo dell'epitelio. Se sono interessate le pieghe interdigitali, la lozione viene applicata quotidianamente sulla pelle pulita e asciutta dei piedi per una settimana, più a lungo se necessario.

In caso di grave cheratinizzazione e screpolature della pelle è necessario prima rimuovere i depositi di pelle morta. Ciò richiede l'uso di farmaci esfolianti. Ad esempio, vengono prescritti unguento salicilico, creme con acido lattico o urea. Dopo aver rimosso i depositi cornei, la lozione si usa 1 – 2 volte al giorno.

Nella variante disidrotica, il primo passo è ridurre il pianto. Per questo vengono utilizzate lozioni con tannino o acido borico. Nei casi più gravi, al trattamento vengono aggiunti glucocorticoidi. Quindi applicare la lozione Clotrimazolo secondo il regime abituale.

Se il piede è usurato, trattarlo con una lozione una volta al giorno per 7-10 giorni, ma la durata del ciclo è individuale e determinata dal medico.

Terapia sistemica

Il piede d'atleta a lungo termine o ricorrente può richiedere farmaci antifungini orali. Passano dal tratto gastrointestinale nel flusso sanguigno e poi nella pelle, dove distruggono i funghi. Vengono utilizzati tre farmaci principali:

• fluconazolo;
• itraconazolo;
• terbinafina

La durata dell'assunzione di questi farmaci è di almeno un mese. Il loro prezzo è piuttosto alto. Pertanto prevenire la micosi del piede è sempre più facile e vantaggioso che curarla.

I farmaci sistemici vengono prescritti particolarmente spesso se il fungo ha colpito non solo la pelle, ma anche le unghie. In questo caso, i farmaci si accumulano nella parte in crescita della lamina ungueale e un'unghia sana ricresce gradualmente. Per migliorare l'effetto, l'unghia può essere completamente rimossa chirurgicamente, dopo di che viene ripristinata senza funghi.

Nei pazienti anziani è spesso necessaria una combinazione di rimozione delle unghie e terapia antifungina sistemica e locale. In questo gruppo di pazienti, le unghie spesso crescono lentamente, la circolazione sanguigna nei piedi è compromessa, quindi per ottenere l'effetto sono necessarie una grande dose di farmaci e un lungo ciclo di trattamento.

Trattamento con rimedi popolari

Usare solo ricette di medicina tradizionale non aiuterà a sbarazzarsi del fungo. Tuttavia, tale aggiunta alla terapia convenzionale accorcia il corso del trattamento e accelera il recupero.

È utile fare ogni sera pediluvi caldi per 10 minuti, quindi tamponare accuratamente i piedi con un asciugamano, soprattutto tra le dita, e applicare la lozione medicinale Clotrimazolo per unghie e pelle. Ingredienti utili per il bagno che alleviano l'infiammazione e riducono il prurito:

• celidonia alle erbe e erba di San Giovanni;
• radici di bardana;
• erba di assenzio;
• foglie di eucalipto;
• aghi di abete;
• fondi freschi di caffè macinato preparato;
• sale;
• una miscela di sapone da bucato grattugiato, bicarbonato di sodio, permanganato di potassio e senape in polvere.

Le zone interessate possono essere lubrificate con catrame di betulla o un unguento preparato autonomamente a base di 100 grammi di burro mescolato con una testa d'aglio schiacciata. Utile anche la propoli, che può essere fasciata sulle unghie doloranti.

È utile fare impacchi con rimedi naturali. Innanzitutto, vengono lasciati per 1 o 2 ore e, se tollerati, durante la notte. Vengono utilizzati i seguenti ingredienti:

• polpa di zucca;
• semi di ravanello nero tritati;
• menta piperita, macinata con sale;
• foglie di bardana o sorbo, leggermente ammorbidite con il mattarello.

È efficace lubrificare le zone interessate con i succhi di alcune piante e altri rimedi naturali:

• soluzione alcolica di propoli;
• succo di cipolla o aglio;
• succo di celidonia;
• olio dell'albero del tè.

Prevenzione delle malattie

Per evitare la micosi o prevenirne le ricadute è necessaria una prevenzione semplice ma costante:

• in estate indossare scarpe traspiranti in materiale naturale;
• quando si visitano piscine, bagni, docce pubbliche, indossare pantofole di gomma individuali;
• non indossare le scarpe di qualcun altro, ad esempio durante la visita;
• utilizzare solo la propria attrezzatura igienica: forbici, pietra pomice, lima per unghie.

Per evitare la reinfezione, le solette e le superfici interne delle scarpe devono essere trattate regolarmente con disinfettanti. Una ricetta popolare ben nota è una soluzione di essenza di aceto, ma ha un odore acuto e sgradevole.

I medici raccomandano l'uso del farmaco Mikospray, che non ha solo un effetto antifungino ma anche antibatterico. Mycospray è ottimo non solo per trattare le scarpe, ma anche da applicare sui piedi prima di visitare luoghi pubblici per proteggere i piedi.

I residenti di Mosca e delle regioni possono acquistare farmaci per il trattamento della micosi del piede e per la sua prevenzione nel nostro negozio online. Hanno dimostrato efficacia e sicurezza. Il loro utilizzo è consigliato a tutte le persone che non vogliono contrarre il fungo del piede o liberarsene rapidamente.

Diagnosi di precisione delle micosi invasive non facile. Ciò è spiegato non solo dalle difficoltà nell'ottenere una coltura di funghi, ma anche nell'interpretare i risultati della ricerca, poiché i funghi, sia lieviti che filamentosi, possono colonizzare le mucose e contaminare i campioni studiati. A questo proposito, la diagnosi delle micosi invasive si basa su un approccio integrato, che comprende non solo i risultati degli studi micologici (culturali) e sierologici (determinazione dell'antigene fungino), ma anche i sintomi clinici dell'infezione fungina, i dati dei metodi di ricerca ausiliari ( computer o risonanza magnetica, ultrasuoni).

Gruppo di cooperazione euro-americano per lo studio delle micosi invasive Sono stati sviluppati criteri per la diagnosi di micosi invasive in pazienti immunocompromessi. Sono stati presentati nel 2001 alla Conferenza internazionale sugli antimicrobici e la chemioterapia (ICAAC, Chicago) e nel 2002 in versione stampata. Sono stati definiti i criteri per la micosi invasiva provata, probabile e possibile, che sono raccomandati per l'uso negli studi clinici ed epidemiologici

Micosi invasiva provata causata da funghi filamentosi: rilevamento del micelio fungino in biopsie o aspirati durante l'esame istologico o citologico o isolamento di una coltura da campioni ottenuti in condizioni asettiche da una lesione normalmente sterile, che, secondo i risultati di studi clinici e radiologici, è associata a infezione, con la eccezione degli studi su urina e mucose.

Micosi invasiva provata causata da funghi di lievito: rilevamento di cellule di lievito (i funghi del genere Candida possono formare pseudomicelio o vero micelio) in biopsie o aspirati, ad eccezione di campioni provenienti da membrane mucose, o isolamento di colture da campioni ottenuti in condizioni asettiche da una lesione normalmente sterile, che secondo ai risultati dell'esame clinico e radiologico associato ad un'infezione, ad eccezione delle urine, dei campioni dei seni e delle mucose, o al rilevamento mediante microscopio e colorazione specifica (in una goccia di inchiostro di china, macchia di mucicarminio) di cellule di lievito o di un antigene positivo di Cryptococcus spp. nel liquido cerebrospinale.

Fungemia causata da funghi filamentosi: isolamento di emocolture di funghi, ad eccezione di Aspergillus spp. e Penicillium spp., compreso Penicillium marneffei, in combinazione con sintomi clinici di un processo infettivo compatibile con l'agente patogeno isolato.

Fungemia causata da funghi di lievito: isolamento di emocolture di Candida o altri lieviti da pazienti con segni clinici di infezione associati a questo patogeno.

Complesso di studi diagnostici per micosi invasive

Biomateriale in studio	Indicazioni, media utilizzati, significato
Sangue	Indicazioni: febbre persistente (4-5 giorni o più) durante la terapia con antibiotici ad ampio spettro; seconda “ondata” di febbre durante la terapia antibiotica Raccolta del sangue da una vena in fiale per batteri aerobi* oppure in terreno selettivo per funghi, ripetuto (2-3 volte al giorno con intervallo di 1 ora) Significato diagnostico: isolamento di funghi di lievito, attenta interpretazione quando si isolano funghi filamentosi, ad eccezione di Fusarium spp.
Catetere venoso	Indicazioni: isolamento dei funghi lieviti dal sangue Il catetere venoso centrale o periferico viene rimosso in tutti i casi di isolamento del lievito dal sangue Per la ricerca micologica si utilizza una sezione distale del catetere rimossa asetticamente lunga 5-6 cm Lo studio viene effettuato in modo semiquantitativo (metodo Maki) o metodo quantitativo su terreno di Sabouraud Significato diagnostico: isolamento di funghi di lievito in uno studio semiquantitativo di 15 CFU o più, in uno studio quantitativo - 103 CFU/ml o più per confermare la diagnosi di infezione associata al catetere o infezione del catetere
Secrezione delle vie respiratorie superiori, espettorato, liquidi di lavaggio dalla trachea, bronchi, liquido di lavaggio broncoalveolare	Indicazioni: sospetto di micosi causate da funghi filamentosi o Cryptococcus neoformans; febbre prolungata durante terapia antibiotica ad ampio spettro e neutropenia Microscopia di campioni con calcofluor bianco (rilevazione di micelio o pseudomicelio); semina su terreno di Sabouraud; determinazione dell'antigene dell'Aspergillus nel liquido di lavaggio broncoalveolare in presenza di lesioni polmonari caratteristiche dell'aspergillosi invasiva Significato diagnostico: isolamento di funghi filamentosi o Cryptococcus neoformans
Liquido cerebrospinale	Indicazioni: sintomi di meningite; rilevamento di una o più lesioni nel cervello mediante tomografia computerizzata o risonanza magnetica; Sintomi "cerebrali" dovuti a febbre e neutropenia Microscopia con calcofluoro bianco, in una goccia di inchiostro; determinazione dell'antigene di Aspergillus, Cryptococcus; semina mercoledì a Sabouraud Significato diagnostico: rilevamento di funghi, sia lieviti che filamentosi; antigene positivo
Biopsie, aspirati, liquido peritoneale, liquido pleurico	Indicazioni: segni clinici e/o radiologici di micosi invasiva; febbre durante la terapia con antibiotici ad ampio spettro. Microscopia con calcofluoro bianco, coltura su terreno di Sabouraud Significato diagnostico: rilevamento di funghi, sia lieviti che filamentosi

* La frequenza di isolamento dei funghi dal sangue era identica quando il sangue iniziale veniva prelevato in entrambe le fiale con terreno di coltura batterica e con terreno selettivo per funghi. Lo studio è stato condotto utilizzando un analizzatore batteriologico VASTES 9240.

Possibile micosi invasiva diagnosticata in base alla combinazione dei seguenti criteri:
un segno dalla categoria dei criteri microbiologici;
un segno dalla categoria “significativo” o due dal gruppo di sintomi clinici “meno significativi” del processo infettivo.

Possibile micosi invasiva diagnosticata sulla base di una combinazione dei seguenti criteri:
la presenza di almeno un fattore di rischio che induce lo sviluppo di micosi invasiva;
un segno dalla categoria dei criteri microbiologici o un segno dalla categoria dei sintomi clinici “significativi” (due dal gruppo dei “meno significativi”) del processo infettivo.

Il concetto " possibile micosi invasiva» Non è raccomandato l'uso in studi clinici che studiano l'efficacia dei farmaci antifungini. È possibile utilizzare questo termine quando si analizza la terapia antifungina empirica, gli studi epidemiologici e lo studio della farmacoeconomia.

A ricerca micologica Gli aspirati o le biopsie sterili tengono conto non solo dell'isolamento delle colture fungine, ma anche del rilevamento del micelio o dello pseudomicelio mediante microscopia. Nei preparati istologici, Aspergillus è difficile da differenziare da Fusarium spp., Sceclosporium apiospermum e alcuni altri funghi filamentosi. Per la diagnosi differenziale è necessario eseguire uno studio immunoistochimico con anticorpi anti-Aspergillus.

Isolamento di funghi di lievito dal sangue in almeno uno studio appartiene alla categoria delle micosi invasive “comprovate” e costituisce un’indicazione assoluta alla prescrizione di antimicotici sistemici nei pazienti con neutropenia. La frequenza di rilevamento dei funghi di lievito nel sangue è bassa, anche con la candidosi diffusa è del 35-50%.
Effettuare emocolture ripetute aumenta la probabilità di ottenere risultati positivi.

Altro interpretazione risultati in caso di rilevamento di funghi filamentosi nel sangue. Un'alta frequenza di isolamento dei funghi filamentosi è caratteristica di Fusarium spp. e ammonta al 40-60%. L'Aspergillus viene rilevato molto raramente, nella maggior parte dei casi è considerato una contaminazione, ad eccezione dell'Aspergillus terreus.

Selezione Aspergillus terreus dal sangue di pazienti affetti da emoblastosi può indicare una vera aspergillemia e, in presenza di sintomi clinici di infezione, costituisce la base per la prescrizione di antimicotici.

Criteri per la micosi invasiva

Indice	Criteri
Fattori che inducono la comparsa di micosi invasiva (macroorganismo)	Neutropenia (< 0,5*109/л в течение 10 дней) Febbre persistente per più di 96 ore durante terapia antibiotica ad ampio spettro Temperatura corporea superiore a 38 °C o inferiore a 36 °C e uno qualsiasi dei seguenti segni predisponenti: neutropenia prolungata (più di 10 giorni) nei 60 giorni precedenti, terapia immunosoppressiva intensiva negli ultimi 30 giorni, micosi invasiva accertata o probabile nei precedenti periodo di neutropenia o AIDS Presenza di sintomi di GVHD, principalmente casi di decorso grave (II grado) o decorso esteso di malattia cronica Uso a lungo termine (più di 3 settimane) di glucocorticoidi negli ultimi 60 giorni
Segni microbiologici	Isolamento colturale di funghi filamentosi (inclusi Aspergillus spp., Fusaruim spp., Sceclosporium spp. e zigomiceti) e Cryptococcus neqformans dall'espettorato o dal liquido di lavaggio broncoalveolare Risultati positivi dell'esame colturale o citologico (microscopia diretta) per l'individuazione di funghi filamentosi da aspirati dei seni paranasali Rilevazione di funghi filamentosi o Cryptococcus neoformans mediante citologia/microscopia diretta da espettorato o liquido di lavaggio broncoalveolare Antigene di Aspergillus positivo nel liquido di lavaggio broncoalveolare, nel liquido cerebrospinale e nei campioni di sangue (almeno due) Antigene criptococcico positivo nei campioni di sangue Rilevazione di elementi fungini mediante esame citologico o microscopia diretta in campioni di fluidi normalmente sterili (ad esempio Cryptococcus spp. nel liquido cerebrospinale) Due risultati positivi di studi sulla rilevazione di colture di lievito nelle urine in assenza di catetere urinario Cristalli di Candida nelle urine senza catetere urinario Isolamento di Candida spp. da emocolture
Segni clinici Vie respiratorie inferiori	Deve essere associato al locus da cui vengono prelevati i campioni per la ricerca microbiologica Uno qualsiasi dei seguenti tipi di nuovi infiltrati polmonari secondo la TC: segno di alone, segno di mezzaluna, cavità con aree di consolidamento* Sintomi di infezione delle basse vie respiratorie (tosse, dolore toracico, emottisi, dispnea), sfregamento pleurico, qualsiasi nuova infiltrazione non inclusa nei segni di alta significatività; versamento pleurico
Tratto respiratorio superiore Segni di grande significato Segni di minore importanza	Segni radiologici di infezione invasiva dei seni nasali (erosione della parete o diffusione dell'infezione alle strutture adiacenti, distruzione estesa delle ossa del cranio) Naso che cola, congestione nasale, ulcerazione nasale, epistassi, edema periorbitale, dolore alla mascella superiore, ulcerazione necrotica nera o perforazione del palato duro
sistema nervoso centrale Segni di grande significato Segni di minore importanza	Segni radiologici di sospetta infezione del sistema nervoso centrale (mastoidite o altro focolaio parameningeo, empiema extradurale, lesioni multiple nella sostanza del cervello o del midollo spinale) Sintomi e segni neurologici focali, comprese convulsioni focali, emiparesi; disturbi della coscienza, sintomi meningei, disturbi della composizione biochimica del liquido cerebrospinale e della sua composizione cellulare (in assenza di altri agenti patogeni, secondo coltura e microscopia, in assenza di cellule tumorali)

*In assenza di infezione causata da microrganismi che possono provocare un quadro radiologico simile, compresa la formazione di carie (Mycobacterium spp., Legionella spp., Nocardia spp.).

A rilevamento nel sangue o altri biosubstrati sterili di funghi lieviti, è necessario effettuare l'identificazione della specie e determinare la sensibilità ai farmaci antifungini; quando si isolano i funghi filamentosi (muffe), solo l'identificazione della specie, la sensibilità non è determinata.

In clinico pratica La sensibilità dei funghi filamentosi non è studiata a causa di standard imperfetti per determinare la sensibilità di tali funghi agli antimicotici. Inoltre, solo uno studio ha dimostrato una correlazione tra la suscettibilità di Aspergillus spp. e i risultati del trattamento dell'aspergillosi invasiva in pazienti con neoplasie ematologiche. Nessuno degli studi successivi ha trovato risultati simili.

Recentemente hanno cominciato ad apparire segnalazioni isolate sulla formazione di resistenza acquisita da parte dei funghi A. fumigatus all'itraconazolo e al voriconazolo.

Identificazione dei funghi per specie, soprattutto quelli ottenuti da loci sterili, è necessario principalmente per la scelta di un antimicotico e per la conduzione di un'adeguata terapia antifungina. Pertanto, Candida krusei è resistente al fluconazolo e meno sensibile di altre specie di lieviti all'amfotericina B; Aspergillus terreus, Scedosporium apiospermum (Pseudallescheria boydii), Trichosporon beigelii, Scopulariopsis spp. resistente all'amfotericina B; Le mucore sono resistenti all'itraconazolo, al voriconazolo, la Candida glabrata mostra una sensibilità dose-dipendente al fluconazolo e quando questo tipo di fungo viene isolato, anche in ceppi sensibili, la dose di fluconazolo deve essere aumentata (agli adulti vengono prescritti 800 mg invece di 400 mg); La Candida lusitaniae è resistente all'amfotericina B.

Identificazione dei funghi per specieè importante anche per condurre analisi epidemiologiche in un ospedale - identificando gli agenti causali dei focolai di infezione e, se possibile, la fonte dell'infezione. Sono stati descritti focolai di infezione causati da funghi rari come C. lusitaniae, C. krusei, C. lipolytica.

Basato identificazione delle specie di funghi Si può ipotizzare una micosi invasiva o una colonizzazione fungina delle mucose. Ad esempio, l’Aspergillus niger ha significativamente meno probabilità dell’Aspergillus fumigatus di causare aspergillosi invasiva in pazienti con leucemia acuta. L'isolamento dell'Aspergillus niger dal liquido di lavaggio broncoalveolare è spesso considerato come colonizzazione delle vie respiratorie e dall'espettorato come contaminazione dall'aria e richiede ulteriori ricerche per confermare la diagnosi di aspergillosi invasiva.

Basato secrezioni di funghi filamentosi dall'espettorato, dal liquido broncoalveolare e dall'aspirato dei seni paranasali si può solo ipotizzare una micosi invasiva, senza includerla nella categoria “provata”. Tuttavia, si deve sempre tenere in considerazione il rilevamento di Aspergillus nell’espettorato, in particolare di Aspergillus fumigatus o Aspergillus flavus, nei pazienti neutropenici che ricevono midollo osseo allogenico. Ciò richiede la ripetizione dell'esame micologico e della tomografia computerizzata dei polmoni. Pertanto, in caso di neutropenia, la probabilità di rilevare un'aspergillosi invasiva nel caso di una coltura positiva di Aspergillus spp. nell'espettorato è dell'80%.

Selezione Criptococco neoformans nei pazienti immunocompromessi dal tratto respiratorio (lavaggi, lavande) è significativo dal punto di vista diagnostico. Se l'identificazione dei funghi lieviti dai fluidi ottenuti dal tratto respiratorio (tracheale, lavaggi bronchiali, lavaggio broncoalveolare) di pazienti immunocompromessi non è una ricerca richiesta, è necessario lo screening per identificare Cryptococcus neoformans da questi campioni.

Rilevazione della candida nelle urine nei pazienti con neutropenia e febbre, è solitamente considerata una manifestazione di infezione da candida disseminata.

In modo tempestivo diagnostica invasivo utilizzare con successo un test commerciale per rilevare la circolazione di un antigene specifico di Aspergillus spp. galactomann (polisaccaride componente idrosolubile della parete cellulare del fungo).

Galattomann può essere determinata con due metodi: il metodo di agglutinazione al lattice (Pastorex Aspergillus, BioRAD) e il metodo di dosaggio immunoenzimatico (Platelia Aspergillus, BioRAD).

Vantaggio metodo di dosaggio immunoenzimaticoè una soglia di sensibilità inferiore per determinare il livello di galattomann nel sangue - 1 ng/ml o meno, e utilizzando l'agglutinazione al lattice - 15 ng/ml. La determinazione del galactomann nel sangue (almeno 2 campioni), nel liquido cerebrospinale e nel lavaggio broncoalveolare ha valore diagnostico. La sensibilità del metodo immunoenzimatico è di circa il 90%, la specificità è del 90-99%, nei riceventi di midollo osseo allogenico questi indicatori sono inferiori e sono pari rispettivamente al 60-70% e all'80-90%, a causa della profilassi uso di farmaci antifungini (gli antimicotici riducono il livello soglia di galactomann).

Nel 40% dei casi, rilevamento galattomann nel sangue è in anticipo rispetto alle manifestazioni di aspergillosi invasiva, determinate dall'esame computerizzato dei polmoni, e nel 70% è in anticipo rispetto ai sintomi clinici dell'infezione.

Valore diagnostico del test di rilevamento dell'antigene Aspergilloè il caso se lo studio viene effettuato ripetutamente. La determinazione dell'antigene dell'Aspergillus nel sangue deve essere effettuata durante la febbre durante il trattamento con antibiotici ad ampio spettro in pazienti con neutropenia 2 volte a settimana; per la polmonite che si manifesta o persiste durante la terapia antibatterica; quando vengono rilevate lesioni nel tessuto polmonare (tomografia computerizzata).