A láb mycosisának tünetei. Gombás bőrbetegségek laboratóriumi diagnosztikája Felületes mikózisok diagnosztikájában nem alkalmazható

A pikkelyt vagy a hajat egy tárgylemezre helyezzük (az üveget zsírtalanítani kell), és megtöltjük egy, két vagy három csepp 30%-os maró-kálium- vagy nátronlúg-oldattal, és fedőlemezzel letakarjuk. 2-3 percig, enyhe melegítéssel alkoholégő lángján, fedőpohárral enyhén nyomja meg a készítményt, amíg
szürke felhő a pikkelyek vizsgálatakor. A hajat nem szabad tönkretenni, ilyen melegítés hatására csak megduzzad. Sötétített membránnal végzett mikroszkópos vizsgálat (100-200-szoros nagyítás) gombás elemeket - spórákat vagy micéliumszálakat - tár fel. A mikroszkópos vizsgálat sikerének szükséges feltétele a pikkelyek és a szőrzet kinyerésének alapossága, amelyet speciális csipesszel (szempilla csipesszel) kell kivenni az érintett területekről. Nemcsak a jól látható szőrszálakra, kéregekre, pikkelyekre kell figyelni, hanem az alig észrevehető szőrmaradványokra (ún. tuskók) és mitesszerekre is, amelyeket szikével vagy szövettani tűvel távolítanak el. Soha nem szabad megelégednie azzal, hogy a beteget az érintett területekre irányítja, magának az orvosnak kell alaposan megvizsgálnia a teljes fejbőrt.

A trichophytosis által érintett hajban a gombaspórák láncba rendeződnek. A microsporia esetében a spórák sokkal kisebbek, mint az ótvar esetében, nem alkotnak láncot, és a haj külső részén helyezkednek el. A haj belsejében septate micélium zsinórok futnak. A haj olyan, mintha fedőbe lenne öltözve és vitába szállva. A varasodásnál polimorf spórák, durva, változatos szálak és általában légbuborékok figyelhetők meg (48. ábra).

Ebben az esetben a gombák nem érintik teljesen az egész hajat, de az érintetlen területek megmaradnak.
Ahhoz, hogy a sima bőrből nyersanyagot kapjunk, lekaparjuk a pikkelyeket. az elváltozás perifériás területeit éles kanállal vagy szikével. Kényelmesebb a körmök éles orvosi késsel (szikével) kaparni, kis, de mély részeket eltávolítani a körömlemez belső felületéről, vagy lekaparni a pityriasis port a köröm kanos lemezeiről.
A kiindulási anyagot kémcsőben lúggal felforraljuk, majd ebben a kémcsőben 12-20 órán át állni hagyjuk.
Ezt követően a tartalmat centrifugálják, és az üledéket mikroszkóp alatt vizsgálják (N. A. Chernogubov módszere).
A gombák jól fejlődnek szénhidrátot és fehérjét tartalmazó mesterséges táptalajokon. Különösen gyakoriak az úgynevezett eredeti Sabouraud táptalajok, a sörsör, az agar és a zöldségek.

2. Kóros anyag laboratóriumi vizsgálata

2.1. Mikroszkópos vizsgálatok

A gomba morfológiai elemeinek - élesztősejtek, pszeudomicélium, micélium, konidioforok, konídiumok, mély mycosisok szöveti formái - kimutatására natív és festett készítményekben vizsgálják a patológiás anyagot.

A folyékony patológiás anyagot festetlen állapotban a következő tisztítófolyadékokban vizsgáljuk: alkohol és glicerin keveréke (etil-alkohol 1 rész, glicerin 2 rész, desztillált víz 2 rész), Lugol-oldat (1 g kristályos jód, 2 g kálium-jodid, 150 ml vízben), valamint vízben vagy sóoldatban. A natív készítmények elkészítéséhez egy csepp anyagot csepegtetünk egy tárgylemezre hurokkal vagy pipettával, majd 1-2 csepp tisztítófolyadékot csepegtetünk, fedőüveggel lefedjük és kis, 1:80-as nagyítással mikroszkóppal (10x-es szemlencse) és 8x objektív), amelyen élesztősejtek klaszterei és pszeudomicélium, micélium és más gombaelemek láthatók. Nagy, 1:400-as nagyításnál az egyes sejtek jellemezhetők.

Sűrű kóros anyagot (bőr, körömpikkely) csepp 10-20%-os KOH-oldatba helyezünk, égőláng fölött enyhén melegítjük (a jobb macerálás érdekében), amíg a csepp peremén alkálikristályok jelennek meg. Ezután a cseppet fedőlemezzel letakarjuk, enyhén rányomjuk és mikroszkóposan megvizsgáljuk, először kis nagyítással, hogy megtaláljuk a skálát, majd nagy nagyítással.

A hajanyagban a hajat körülvevő spórák köpenye (ectothrix) vagy a haj belsejében (endothrix) gombaelemek általában nagyon jól láthatóak. A hajsérülések, valamint a spórák mérete a dermatofiták különböző típusaira jellemző. A gombás struktúrák és műtermékek közötti differenciáldiagnózis szükséges. Az álpozitív eredmények lehetséges forrásai a lipidcseppek, légbuborékok, textilszálak és az úgynevezett „mozaikgomba”. A lipidcseppek élesztősejtekre hasonlíthatnak, ami a gyengén megtisztított anyagokban a leggyakoribb. A textilszálak általában külön fekszenek az epidermisz, a haj vagy a köröm anyagától. Nagyobbak, mint a gombás hifák, egyenetlen vastagságúak és nem tartalmaznak septumokat. A „mozaikgomba” egy olyan műtermék, amelyet a KOH kristályosodása során kapnak a készítmények túlzott melegítése miatt. A gombákkal ellentétben nincs egyértelmű sejtosztódás.

A gombás fertőzések diagnosztizálásának fontos lépése a színes készítmények elkészítése. Bármilyen kóros anyagot (kenetkészítményeket, szervlenyomatokat, centrifugákat és természetesen szövettani metszeteket) három fő feldolgozási módnak kell alávetni: 1) festés PAS módszerrel a valódi gombák - eumycetes - azonosítására; 2) festés Gram-módszerrel vagy módosításokkal Gram-Weigert szerint, Bogolepov szerint Brown-Brenna szerint - a kísérő bakteriális mikrobiota azonosítására, az aktinomyceták és a nocardia azonosítására; 3) Ziehl-Nielson módszer szerinti festés vagy Kinyon módszer szerinti módosítás - savrezisztens mikroorganizmusok azonosítására, elsősorban Mycobacterium tuberculosis-szal való indikációra és differenciálásra, lepra, nocardia és spóraképző élesztőgombák kórokozóinak kimutatására.

A PAS módszer (Piodic Acid Schiff) magában foglalja a semleges poliszacharidok azonosítását a mikroorganizmusok falában. A legtöbb eumycetes falában változó koncentrációban glükán-mannán komplex található, aminek következtében elszíneződés lép fel.

A prokarióták (baktériumok) PAS-negatívnak bizonyulnak, beleértve a mikológus érdeklődésére számot tartó aktinomycetákat és nocardiát. Az actinomycoticus drusen képződése során azonban úgynevezett „cement” képződik, amely a vegetatív aktinomikózisos micéliumot granulátummá ragasztja, ami szintén PAS-pozitív foltot ad. Ezzel kapcsolatban ez a módszer az aktinomikózis diagnosztizálására is alkalmazható.

A PAS reakció (és annak módosítása) a legfontosabb módszer a gombás fertőzés szöveti formáinak diagnosztizálására. A módszer a szénhidrátok glikolcsoportjainak periodikus vagy krómsavval történő oxidációján alapul. A perjodsav az 1,2- és 1,4-glikolokat aldehidekké oxidálja, és megbontja a kötéseket a hidroxilcsoportokat hordozó szénatomok között. Az aldehidcsoportok az aldehid Schiff-reagens segítségével is kimutathatók. In situ, a gomba falában a heteropoliszacharid komplex intenzíven lilás-vörös színűvé válik (módszertan - lásd a mellékleteket).

A környező szövetek színének elnyomására világoszöld, metanolsárga stb. kezelést („ellenszínt”) alkalmaznak. Ebben az esetben csak gombasejteket észlelnek, ami nagyon hasznos a kórokozó szövetekben vagy kenetkészítményekben történő kimutatásának szakaszában. Ugyanakkor nem lehet megítélni a szervezet reakcióját és szöveti elváltozásait az ilyen gyógyszerekre. Mindig szükséges párhuzamos preparátumok festése PAS módszerrel, további hematoxilinnel történő festéssel.

A gyakorlatban nem csak a PAS módszert alkalmazzák a klasszikus változatban, hanem annak különféle módosításait is: krómsavval történő oxidáció (jódsav helyett) - ez a Bauer-reakció, Gridley-festés, impregnálás methenamin ezüsttel a Gomory szerint. Grocott módszer. Mindegyiket sikeresen alkalmazzák a gombák szöveti formáinak kimutatására, és ugyanazon az elven alapulnak (technika - lásd a függeléket). 3. táblázat.

3. táblázat

A gombák szövetformáinak tinctoriális tulajdonságai

(kóros anyagban, szövettani metszetekben)

Opportunista mikózisok	Észlelési módszerek
Candidiasis	PAS vagy Gridley festés
Aspergillosis	Hematoxilin és eozin, Gomori-Grocott impregnálás
Zygomycosis	Hematoxilin és eozin
Cryptococcosis	Alcian kék (Mowry módszer szerint) + PAS reakció + hematoxilin
Pneumocystis	Festés Bauer módszerrel, impregnálás Gomory-Grocott szerint, festés tioninnal
Fusarium	Festés Romanovsky-Giemsa módszerrel, Wright módszerrel
Scedosporiasis
Trichosporosis	Hematoxilin és eozin, Romanowsky-Giemsa festés
Feohifomikózis és kromomikózis	Hematoxilin és eozin
Elsődleges patogén mikózisok:	Észlelési módszerek
Kokcidioidózis	PAS reakció + hematoxilin
Histoplasmosis	impregnálás Gomory-Grocott szerint, festés Bauer módszerrel, festés Romanovsky-Giemsa módszerrel
Észak-amerikai blastomikózis
Paracoccidiosis	PAS reakció, impregnálás Gomory-Grocott szerint
Adiaspiromikózis	Hematoxilin és eozin, RAS reakció
Pseudomikózisok:	Észlelési módszerek
Actinomycosis	Hematoxilin és eozin, Gram-Weigert festés
Nocardiosis	festés Ziehl-Neelsen módszer szerint, Kinyon módszer szerint, Gram módszer szerint.

Ha feltételezzük a cryptococcosis diagnózisát, tanácsos módszereket alkalmazni a tokanyag specifikus kimutatására. Cr.neoformans glikozaminoglikánokat (savas poliszacharidokat) tartalmaz. Erre a célra alciánkék (Mowry módszer szerint), bázikus barna (Shubich módszer szerint) és mucikarmin festést alkalmaznak. A hármas festés nagyon hasznos: PAS reakció, majd kezelés Alcian kékkel, majd hematoxilin. Ebben az esetben lehetővé válik a cryptococcusok és más hasonló morfológiájú gombák szöveti formáinak megkülönböztetése.

A kóros anyag (szövettani készítmények) leírása tartalmazza a gombák szövetformáinak morfológiájára és méretére, színárnyalati jellemzőire, a gazdaszövetekkel való kapcsolatára, a fagocitózis jelenlétére és a kísérő mikrobióta meghatározására vonatkozó adatokat.

2.2. Kóros anyag elvetése és a sejtek mennyiségi számlálása élesztőgombák által okozott mikózisokban

A gombakultúrák beszerzése szükséges azok azonosításához és a gombaellenes szerekkel szembeni érzékenységük meghatározásához.

A vizsgálat előtt a köpetet steril gyöngyökkel rázva 5-10 percig homogenizáljuk. Ha a köpet sok nyákot tartalmaz és rosszul homogenizálódott, 1-2 ml steril sóoldatot adhatunk hozzá. A köpet mikroszkópos vizsgálata natív vagy festett készítményekben történik. Ha a köpet mikroszkópos vizsgálata nagy nagyítással gombás elemeket mutat a látómezőben, akkor 1:10, 1:100, 1:1000 hígításban kell elvetni, ha gombás elemeket nem észlelünk, a köpetet hígítatlanul vetjük el. A hígításokat folyékony tápközegben (sörlé, Sabouraud, 1% pepton víz) vagy steril sóoldatban készítik. Minden hígításból 0,1 ml-t oltunk be spatulával 2 csésze sörceagarra, Sabouraud agarra vagy MPA-ra antibakteriális antibiotikumok – penicillin és sztreptomicin, biomicin (100-200 egység/ml táptalaj) – hozzáadásával. A táptalajt termosztátban +37 C-on előszárítjuk, mert kondenzátum jelenlétében a telepek növekedése összefolyhat. A terméseket termosztátban +37 o C-on 48 órán át inkubáljuk, majd ha azonos típusú élesztőkolóniák szaporodnak, mennyiségileg megszámoljuk. A vizsgált anyag 1 ml-ében vagy 1 g-jában lévő élesztősejtek számának (n) kiszámítása az n = авс képlet szerint történik, ahol a az egy Petri-csészén lévő telepek átlagos száma, b = 10 térfogattal. 0,1 ml oltóanyag, c a ürülék hígítási foka (10 100 1000).

Számítási példa: az 1:1000 hígítású edényeken átlagosan 60 telep nőtt, míg a vizsgált ürülék 1 ml-e 60 x 10 x 1000 = 600 000 élesztősejtet tartalmaz.

A BAL, a hörgők, maxilláris üregek mosófolyadéka, az epe (A, B, C adagok), gyomornedv, nyombéltartalom, vizelet centrifugacsövekbe kerül, és 10-15 percig centrifugálják, majd a felülúszó folyadékot gyorsan leeresztik. Az üledékből natív készítményeket készítenek a mikroszkópos vizsgálathoz. Ha a mikroszkópos vizsgálat minden látómezőben élesztősejteket tár fel, akkor a vetést 0,1 ml-es 1:100 és 1:1000 hígításokban végezzük szilárd táptalajra, és 37 C-on 48 órán át inkubáljuk. nem mutatják ki az élesztősejteket, a hígítás nélkül elvetett üledéket. Az élesztőflóra mennyiségét 1 ml kóros anyagra számítjuk.

Az ürüléket mérőkanállal 0,2 g mennyiségben vesszük, 1,8 ml folyékony sörlébe helyezzük, és üvegrúddal alaposan összekeverjük. Az így kapott hígítást (1:10) 5-10 percig állni hagyjuk, majd 1:100, 1:1000 hígításokat készítünk, és 0,1 ml-es térfogatban 2 Petri-csészékre oltjuk be agar táptalajjal. Az élesztőflóra mennyiségét 1 g székletre vetítjük.

Gerincvelői folyadék. Jellemezze megjelenését (átlátszó vagy zavaros, színtelen vagy színes, vér, üledék jelenléte). Mikroszkópos kenetek a cerebrospinális folyadék üledékéből centrifugálás után. Három készítményt készítenek: natív - egy csepp steril sóoldatban; natív - egy csepp tintában és kenetben a PAS módszerrel történő festéshez, Gram és Alcian blue Mowry szerint.

Mikroszkópia gerincvelői folyadék natív és színes készítményekben lehetővé teszi bimbózó élesztősejtek és gomba micélium töredékeinek, vagy gennyes agyhártyagyulladást okozó baktériumok (meningococcus, pneumococcus, Haemophilus influenzae stb.) jelenlétének meghatározását. A tintakészítményben kapszuláris gomba észlelhető. Cryptococcus neoformans. Ugyanakkor a tinta szürke hátterén bimbózó élesztősejtek láthatók, amelyeket a kapszula világos glóriája vesz körül. A tintakészítmények élesztőformákat is tartalmazhatnak Candida albicans amelyeknek nincs világos glóriája a kapszulának a sejt körül.

Kr. neoformánsok Alcian blue festéssel (Mowry) is kimutatható. A színezés a tokszerű heteropoliszacharidok szelektív kimutatása miatt következik be Cr.neoformans. Ha egy Gram-festett készítményben bakteriális flórát észlelnek, megfelelő bakteriológiai módszerekkel a liquor további vizsgálatát végezzük. Az üledék mikroszkópos vizsgálata után a folyadékot 3 csésze frissen készített, szárított cefre-agarra vagy Sabouraud-agarra, valamint folyékony sörcefre vagy folyékony Sabouraud táptalajra oltják. Az 1. és 2. csésze tápagar felületére 2-3 csepp folyékony üledéket csepegtessünk, majd spatulával alaposan dörzsöljük be, a 3. csésze agar felületének három pontján pedig 1 cseppet oltsunk be a fonalas gombák kimutatására. A maradék folyadékot 5 ml folyékony sörcefre vagy Sabouraud agarra öntjük. A növények inkubálása két hőmérsékleti körülmény között történik: 1. csésze - +37 o C-on, valamint 2. és 3. csésze, valamint folyékony közegbe vetés - +28 o C - +30 o C. A növényeket +37 o C hőmérsékleten tekintjük meg. 2 és 5 napon, valamint 28-30 o C-on - a növekedés 4., 7., 10. napján. Ha az 5. napon +37 o C-on és a 10. napon 28-30 o C-on nincs növekedés, folyékony táptalajról sörlé vagy Sabouraud agar tányérokra kell vetni. Ha az élesztőflóra nem növekszik, a folyadék beoltásának eredménye negatívként kerül rögzítésre.

Fistulák KIBOCSÁTÁSA. A vizsgálat az anyag mikroszkópos vizsgálatával kezdődik natív vagy festett készítményekben. Ezután az anyagot agar táptalajra (sörcefre vagy Sabouraud) oltják be, amelyből 2-3 cseppet csészébe csepegtetünk, és spatulával eloszlatjuk az agar felületén. A növényeket 48 órán át +37 o C-on inkubáljuk.

A nyálkahártyák KIBOCSÁTÁSA.

1. A tampont egy kémcsőbe helyezzük 2 ml folyékony tápközeggel (sörlé, Sabouraud-féle táptalaj vagy MPB), és 5-7 percig rázzuk anélkül, hogy a dugót átáztatnánk. Készítsen 1:10, 1:100 arányú hígításokat, és mindegyik hígításból oltson be 0,1 ml-t két csésze cefre-agarra, Sabouraud agarra vagy MPA-ra. A szilárd táptalajra és a folyékony tápközeggel készült kémcsövet tamponnal (dúsítás céljából) +37 C hőmérsékleten inkubáljuk. 48 óra elteltével megszámoljuk a telepek számát és a tamponnal vett élesztősejtek számát. megközelítőleg meghatározott. Ehhez a kifejlett élesztőkolóniák számát megszorozzuk 20-zal és a hígítással. Ha nincs telepnövekedés a lemezeken, a felvett hígításokat a dúsító táptalajból újra oltják egy lemezre sörcefrével.

2. A vetés történhet úgy, hogy egy pálcikát forgatással mozgat a táptalaj felületén. Ebben az esetben az élesztőkolóniák számát nem vesszük figyelembe, hanem csak a növekedés jelenlétét és intenzitását jegyezzük fel: egyedi telepek, jelentős vagy folyamatos növekedés, a mikrobiota növekedésének hiánya.

VÉR. A vértenyésztéshez szükséges vénás vérmintákat legalább 1:5 arányban dúsító tápközeggel kell hígítani, hogy a vér baktericid tulajdonságai ne gátolják a gomba növekedését. Oltsunk be 5-10 ml frissen vett vért 50-100 ml táptalajba (folyékony Sabouraud 2% glükózzal vagy Kitt-Tarozzi táptalaj regenerálása után). Tenyésztéshez vért vehet véralvadásgátlóval (1:10 5%-os nátrium-citrát oldat). A növényeket 10 napig termesztik +37 o C-on, az 5. és 10. napon kontrollvetést végeznek. Steril pipettával szedjük az üledéket, amelyből 3 cseppet bakteriológiai hurokkal szórunk a cefre agar felületére Petri-csészékbe. A magvas poharakat +37 o C hőmérsékletű termosztátba helyezzük 2-5 napra. Élesztőflóra növekedése esetén előzetes választ adunk a gomba vérben való jelenlétére, és a tenyészetet nemzetségre és fajra határozzuk meg.

Leírnak egy másik módszert a mikoflóra vértenyésztésére (H. Rieth). Ebben az esetben 5-10 ml vért csepegtetünk be. Steril pipettával csepegtessünk 40-50 csepp vért egy sűrű tápközeg felületére egy Petri-csészében, a cseppek között 0,5 cm távolságra. A vetés két Petri-csészén történik, az egyik edényben +37 o C-on, a másikban szobahőmérsékleten 2-5 napig inkubálva.

szervszövet DARABOK. Petri-csészében sűrű tápközeg felületén lenyomatot készítünk a tesztszövetből, majd hurokkal szitáljuk. Ugyanezt a szövetdarabot 50 ml folyékony táptalajba helyezzük (sörlé, Sabouraud táptalaj). A növényeket termosztátban +37 o C hőmérsékleten 5 napig inkubáljuk.

BŐR és köröm pikkelyek. A pikkelyek vetését a mikroszkópos vizsgálat eredményétől függetlenül végzik. Ehhez a táptalaj kondenzátumában megnedvesített steril mikológiai spatulával a pikkelyeket kémcsőbe 2-3 ponton ferde cefre agarra visszük, a táptalaj felületére szorítva. A kutatásra beérkezett anyag mennyiségétől függően 2-3 kémcsőben történik az oltás. A növényeket termosztátban, 28-37 o C-on, legfeljebb 5 napig inkubálják.

A gyors azonosítási módszereket széles körben alkalmazzák C. albicans. Ez a faj több órán belül (37 o C-on 2-4 óra) képes csíracsöveket és rövid pseudomycelium szálakat képezni vérszérumon, tojásfehérjén, Eagle táptalajon, 199 táptalajon stb. A gyakorlatban a laboratóriumok humán szérumot (szerológiai reakciókból származó maradványokat) használnak, ahol 37 o C-on csíracsövek képződnek, majd 24 óra elteltével pszeudomycelium gubancok képződnek. A látszat kedvéért C. albicans ez a jelenség az esetek 90%-ában jellemző. A hajtások ritkábban alakulnak ki C. tropicalis.

2.3. Patológiás anyag mikroszkópos vizsgálata és tenyésztése penészgomba által okozott mikózis gyanúja miatt

A kóros anyag natív és festett készítményekben vizsgálható. A mikrolemezek készítésére szánt tárgylemezeket és fedőpoharakat alkohol és éter (1:1) keverékében kell tárolni, hogy elkerüljük a levegő mikobiotával való szennyeződését. Használat előtt a tárgylemezeket és fedőlemezeket égő lángja felett sterilizáljuk.

Az anyag mikroszkópos vizsgálata

A köpet MIKROSZKÓPIÁJA. A natív készítmények elkészítéséhez a köpetet steril Petri-csészébe visszük át, és fekete háttér előtt megvizsgáljuk, hogy kis részecskéket (csomókat) észleljünk. A csomók lehetnek gennyesek, gennyes-nyálkás, gennyes-véresek. A csomók mérete 0,3-3 mm átmérőn belül változik, színük lehet szürke, sárgás, zöldes. A natív mikrolemezek elkészítéséhez az egyes csomókat bonctűkkel vagy bakteriológiai hurokkal átvisszük egy csepp alkoholba glicerinnel vagy egy csepp 10%-os KOH-oldatba. Fedje le fedőüveggel, fejtsen ki enyhe nyomást boncolótűvel és mikroszkóppal alacsony (1:80, 10x okulár és 8x objektív) és magas (1:400, 10x szemlencse és 40x objektív) mikroszkóp nagyítással.

Az öblítővízből, váladékból, valamint epéből, vizeletből, gyomornedvből és lúgból készült készítményeket natív üledékből vagy centrifugálással nyert üledékből készítik (1500 fordulat/perc sebességgel 5 percig). Az üledéket hurokkal vagy Pasteur-pipettával csepp 10%-os KOH-oldatba visszük át egy tárgylemezre, fedjük le fedőlemezzel és vizsgáljuk a mikroszkóp kis és nagy nagyításával.

A festett preparátumok elkészítéséhez a vizsgálandó üledékcsomókat vagy cseppeket boncolótűkkel vagy kisebb tárgylemezzel egyenletesen elosztjuk a steril tárgylemez felületén, amíg vékony kenetet nem kapunk. A kapott kenetet levegőn szárítjuk, metil-alkohollal vagy Nikiforov keverékével (egyenlő arányban 96%-os etil-alkohol és éter) rögzítjük 3-5 percig, vagy háromszori lánggal égő lángon. A rögzített kenetet Gram-módszerrel, PAS-módszerrel és kalkofluor-fehérrel festjük. A megfestett mintát immerziós mikroszkóp rendszerrel (1:900, 10x szemlencse, 90x objektív) mikroszkóppal vizsgálják.

Vetőanyag

Bármilyen kóros anyag fonalas gombák kimutatására irányuló vizsgálatakor szilárd Sabouraud táptalajra vagy sörcefre oltják be penicillin és sztreptomicin (100-200 egység/ml táptalaj) hozzáadásával. A vetés két ismétlésben történik, figyelembe véve a fonalas gombák termesztésének eltérő hőmérsékleti viszonyait (+37 o C és +28 o C), mindig 3 ponton a csésze közepén. A lappangási idő 4-5 nap.

A köpetet (kiválasztott csomókat) bakteriológiai hurokkal vagy Pasteur-pipettával juttatják a Sabouraud-féle táptalaj vagy sörlé felületére. A vetés helyét ceruzával jelöljük meg a Petri-csésze aljának hátoldalán. A magozott Petri-csészéket fedővel felfelé helyezzük termosztátba.

Egy bizonyos inkubációs időszak után a magvas edényeket megvizsgáljuk, és ha spórásodást észlelünk, meghatározzuk a gombakultúrát. Ha nincs spóraképződés, a gombát Czapek-féle differenciál táptalajra tenyésztik a további azonosítás céljából.

A hörgők, maxilláris üregek mosóvíz üledéket, váladékot, vizeletet, gyomornedvet (natív vagy centrifugálás után) pipettával vesszük és 0,1 ml térfogatban beoltjuk. A székletet 1:10 arányban hígítjuk (1 g széklet és 9 ml folyadék) folyékony Sabouraud-féle tápközegben vagy folyékony, steril izotóniás nátrium-klorid-oldatban, emulgeáljuk, 10 percig hagyjuk ülepedni a nagy részecskék ülepedéséhez, majd a felülúszót egy térfogatban beoltjuk. 0,1 ml. A külső hallójáratból és a garatból származó, tamponnal vett váladékot úgy oltjuk be, hogy a tampon mindkét oldalát óvatosan átvezetjük a táptalaj felületén. A tamponokból származó tamponok beolthatók. Ehhez a tamponokat 10 ml folyékony Sabouraud tápközegbe vagy üveggyöngyökkel ellátott folyékony sörlébe helyezik, és 10 percig emulgeálják, majd 0,1 ml tamponnal beoltják a gyeppel (Leshchenko V.M., 1973 szerint), vagy három ponton.

A tápközeg felületére bőr- és körömpikkelyeket helyezünk, óvatosan megnyomva.

Az agy-gerincvelői folyadék üledéket (1500 fordulat/perc sebességgel centrifugáljuk 5 percig) két 0,1 ml-es csésze táptalajba oltjuk, a maradékot pedig dúsító táptalajba (Sabouraud folyékony táptalaj vagy folyékony sörlé) 5 ml-es csövekbe öntjük. A beoltott edényeket a szokásos módon inkubáljuk, és a dúsító táptalajra oltott csöveket + 28 C-on 10 napig inkubáljuk.

Ha szilárd táptalajon fonalas gomba szaporodik, a tenyészetét ebből az oltásból határozzuk meg, ha pedig Sabouraud agaron vagy sörsörce-agaron nincs szaporodás, akkor a gombát a dúsító táptalajról vizsgáljuk. Ennek érdekében a gombakultúrát újra Czapek differenciális sűrű táptalajon szubkultúrázzák, majd azonosítják.

A szervszövet darabjából (biopszia, boncolás) szilárd táptalaj felületére lenyomatot készítenek, a darab vágott oldalát három ponton megvizsgálva. Ugyanakkor a szövetdarabokat 50 ml folyékony tápközegbe (Saburo, sörce) helyezzük.

Gombásodás gyanúja esetén két-három ismétlésben vérvizsgálatot végeznek. Oltson be 5 vagy 10 ml vért 50 vagy 100 ml 2% glükózt tartalmazó Sabouraud folyékony táptalajba. A növényeket +37 C és +28 C hőmérsékleten termesztik 10 napig. A növények első vizsgálatát 5 nap múlva, a másodikat 10 nap múlva végzik el. Az ötödik napon a fonalas gomba növekedését figyelheti meg, alul filccsomó és felületi film formájában. A micéliumot Czapek-féle differenciális táptalajon továbbtenyésztjük, hogy meghatározzuk a gomba nemzetségét és típusát. Ha az 5. napon nem figyelhető meg gombásodás, a növényeket legfeljebb 10 napig tartják, és ha nincs növekedés, akkor a vizsgálati eredményeket negatívnak kell nyilvántartani.

Három ponton történő vetés esetén a gomba növekedése két és három ponton diagnosztikailag szignifikáns, egy ponton véletlenszerű. Szükség esetén lehetőség van újravetésre.

Izolált penészkultúrák azonosítása

A tenyészet izolálása után fonalas gombákat szubkultúrázunk Czapek-féle differenciál táptalajra általános és lehetőség szerint fajmeghatározás céljából.

A diagnosztikai laboratóriumok gyakorlatában általában kulturális és morfológiai azonosítási kritériumokat alkalmaznak: értékelik a gombakultúra növekedési mintáját agar táptalajon (kultúradiagnosztika, makromorfológia) és a gomba mikromorfológiáját.

Nehéz esetekben további diagnosztikai módszereket alkalmaznak (enzimatikus aktivitás, egyes penészgombák növekedésének hőmérsékleti jellemzőinek tanulmányozása).

A makromorfológia (kulturális jellemzők) fogalmába beletartozik a telep szerkezete (bolyhos, filc, bársonyos, pókhálós, gyapjas, rongyos, lisztes stb.), felszíne (lapos, hajtogatott, göröngyös, kupola alakú, mag alakú, zónaszerű). stb.), a gombatelep és a szubsztrát pigmentációja (a zöld, kék, lila, fekete, szürke különböző árnyalatai stb.), váladék jelenléte a telep felszínén.

A tenyészetből származó gomba mikromorfológiáját olyan készítményekkel vizsgálják, amelyeket a gomba nemzetségétől függően a következőképpen állítanak elő: egy pohárra cseppentjük a készítmények elkészítéséhez szükséges folyadékot (egyenlő arányban alkohol, glicerin és víz). csúszik; egy darab micéliumot helyezünk bele, amelyet mikológiai spatulával háromszög alakban vágunk ki a telepről, rögzítve a központi és a perifériás részt, majd a levágott darabot két boncolótűvel kiegyenesítjük, ügyelve arra, hogy elkerüljük a légbuborékok képződését. . Egyes esetekben (mucor és rhizopus) a gyógyszer elkészítésekor a micéliumot száraz üveglemezre terítjük, csepp folyadékot csepegtetünk rá és fedőlemezzel lefedjük. A preparátumokat mikroszkóp alatt, kis és nagy nagyítással nézzük. Vizsgálják a szubsztrátot és a légmicéliumot, megjegyzik a septa (septa) jelenlétét vagy hiányát, és figyelmet fordítanak a spóraképződés természetére: a konidiofórok konídiumokkal és a sporangiumok sporangipórákkal.

A konidioforok szerkezetükben változatosak: az egyszerű, egyetlen spórát hordozó hifáktól az elágazó faszerű képződményekig. A konidioforok egyenként vagy csoportosan helyezkednek el, jelentősen eltérnek a micélium vegetatív hifáitól, színtelenek vagy színesek, felszállóak, felállók, lépcsőzetesek, kúszóak. Egy cellából és nagyszámú, különböző alakú és méretű cellából állhatnak, amelyek mindegyikének saját neve van. Például az Aspergillus nemzetségben a konidiofor a következő sejtekből áll: szár, hólyagos duzzanat, sterigmák, konídiumok láncai. A Penicillium nemzetségben a konidiofor egyszerű vagy összetett ecsetek formájú, amelyek szintén különféle sejtekből állnak: rami ágak, metulák, fialidok, konídiumláncok.

A Mucor és a Rhizopus penészgombák sporangiumok formájában, endosporangiospórákkal spóráznak. A sporangium a sporangiofor végén található. A sporangiumok gömb- vagy körte alakúak, legtöbbjük speciális oszloppal rendelkezik, amely a sporangiophore folytatása a sporangiumon belül. A sporangiospórák kerekek, színtelenek vagy színesek.

A penészgombák konídiumai (spórák) polimorf (hengeres, gömb alakú, ovális, ellipszoid, tojásdad, körte alakú, bot alakú), egy- és többsejtűek, különböző méretűek és színűek, egyesek, láncban vagy fejben gyűjtve és elrendezve. klaszterekben. A konídiumok felülete lehet sima, érdes, tüskés, szemölcsös, sörtéjű stb.

Kóros anyag mikroszkópos vizsgálata és tenyésztése dimorf gombák által okozott mikózisokra

Ezekkel a mikózisokkal kapcsolatban figyelembe kell venni a kórokozók dimorfizmusát.

A primer patogén gombás fertőzések (kokcidioidózis, hisztoplazmózis, paracoccidioidosis, észak-amerikai blastomikózis), valamint kromomikózis, sporotrichosis és mycetomák kóros anyaga lehet genny, köpet, bőr és nyálkahártya fekélyes elváltozásaiból származó kaparék, cerebrospinalis, cerebrospinalis biopsziás darabok a léziókból vereségek.

E mikózisok kórokozóinak azonosításának nehézsége az, hogy dimorfizmusuk miatt a kóros anyag mikroszkópos vizsgálata során a gomba szöveti formáit, leggyakrabban különböző morfológiájú élesztősejteket vagy endospórákos szferulákat tárnak fel, amelyek teljesen eltérnek ugyanazon gomba elemeitől. +28 - +30 o C hőmérsékleten, normál Sabouraud agávén termesztett tenyészetéből kivont gomba, a savashoz közelebbi pH-értékkel. Figyelembe kell azonban venni, hogy egyes kétalakú gombáknál előfordulhat, hogy a tenyészetben a gombák szaporodásának élesztőfázisát lehet elérni, amely gyakran a szöveti formájára emlékeztet, de ha fehérjében gazdag tápközegben termesztik, enyhén lúgos reakcióval (pH). = 7,6 - 7,8 ), 37 o C hőmérsékleten.

A fentiek a gombákra vonatkoznak: Histoplasma capsulatum, Blastomyces dermatitidis, Paracoccidioides brasiliensis, Coccidioides immitisÉs Sporothrix schenckii.

Az itt említett gombák által okozott mikózisok laboratóriumi diagnosztikája a kóros anyagban lévő szöveti formák mikroszkópos kimutatásán, a kórokozótenyészet izolálásán és annak kulturális és morfológiai jellemzők alapján történő azonosításán alapul.

A mikroszkópos vizsgálatot nem festett készítményeken végezzük üveglemezen egy csepp lúg 10%-os oldatában vagy azonos térfogatú alkohol és glicerin keverékében, vagy festett kenetben (3. táblázat).

A kóros anyag beoltását a fent említett táptalajokon Petri-csészékben végezzük bakteriológiai spatulával az általánosan elfogadott módszer szerint.

2.5. Dermatomycosis (keratomycosis és dermatophytosis) patológiás anyag mikroszkópos vizsgálata és tenyésztése.

A vizsgálat tárgya a felületes, csak az epidermisz keratinrétegét érintő mikózisok, valamint a bőrt és annak függelékeit (haj, köröm) érintő dermatofiták, melyek kórokozói a nemzetséghez tartozó gombák. Trichophyton, Microsporum és Epidermophyton.

A laboratóriumi mikológiai kutatások ugyanazokat a lépéseket tartalmazzák, mint más mikózisok esetében: az anyag mikroszkópos vizsgálata és a vetés során tiszta tenyészet kinyerése. A megfelelő anyaggyűjtés nagymértékben befolyásolja a mikroszkópos vizsgálat és a tenyésztés sikerét.

A kóros anyagot a begyűjtés után a lehető leghamarabb megvizsgálják. Először három részre oszlik: mikroszkópos vizsgálatra, tenyésztésre és újbóli vizsgálatra. A kóros anyag mikroszkópos vizsgálata a legegyszerűbb és leggyorsabb módszer a gomba szövetekben való jelenlétének megállapítására. A zúzott anyagot egy tárgylemez közepére helyezzük cseppnyi 10-20%-os KOH-oldatba, és alkohollámpa lángja fölött enyhén melegítjük, amíg a csepp széle mentén fehéres peremet nem kapunk, és fedőüveggel letakarjuk. és hagyjuk hatni 5-10 percig (haj, bőr pikkelyek) és 30-40 percig (köröm) maceráláshoz és derítéshez; az anyag melegítés nélkül feldolgozható, ehhez a készítményt 20%-os KOH-oldatban 30-60 percig hagyjuk.

Mikroszkóp először alacsony, majd nagy nagyítású mikroszkóp alatt.

A tenyésztés szükséges a kórokozó izolálásához és azonosításához. A beoltott anyagot lehetőleg összetörjük, és minimális mennyiségben ferde agarra oltjuk kémcsövekben 2-3 ponton 1-2 cm távolságra.Legalább 2-3 kémcső (haj) és 4-5 kémcső (bőr- és körömpikkelyeket) egy minta anyagával oltjuk be. A dermatofiták elsődleges izolálásához a legjobb, ha 2-4% glükózt tartalmazó, 2-4% glükózt tartalmazó Sabouraud agar táptalajt vagy sörcefrét tartalmazó agart használunk, amely antibakteriális antibiotikumokat (50 μg/ml penicillin + 50 μg/ml sztreptomicin vagy 200 egység/ml biomicin) és anti- penészgomba antibiotikum aktidion (cikloheximid) 0,1-0,5 mg/ml. Az aktidion nem befolyásolja a dermatofiták növekedését, és számos penészgombát, valamint Candida és Cryptococcus fajokat gátolja.

A növényeket 22-30 o C-on (legjobb 28 o C-on) inkubáljuk. A dermatofiták növekedése a keltetés 4. és 12. napjától figyelhető meg a bevitt anyag szélei mentén lévő vetési pontokon. Ha 30 napon belül nincs növekedés, a tenyésztési eredmények negatívnak minősülnek. Optimális körülmények között számos dermatofita primer tenyészete a vetés után 7-10 nappal azonosítható, de a növényeket 20-30 napig ellenőrizni kell. Az elsődleges tenyészetek viszonylag lassan növekednek, és antibiotikumok nélküli táptalaj használata esetén a dermatofiták elnyomhatják a gyorsabban növekvő baktériumokat vagy penészgombákat. Amikor a növekedés megjelenik az elsődleges oltásban, a telep széléről friss differenciált táptalajra kell szitálni, hogy tiszta tenyészetet kapjunk, amely anyagként szolgál az izolált dermatofiton azonosításához.

2.6. Szerológiai módszerek a mikózisok diagnosztizálására

A szerológiai módszerek jelentősége elsősorban a következőkben rejlik: a valószínű invazív mycosisban szenvedő betegek azonosítása; az allergiás betegségek gombás természetének megerősítése; mikózisok kialakulásának kockázatának kitett csoportok szűrővizsgálata.

A szerológiai tesztek álpozitív eredménye mycocarria esetén és egészséges gombaantigénekkel érzékeny embereknél lehetséges, immunhiányban negatív tesztek előfordulhatnak még folyamatban lévő invazív mycosis hátterében is.

Rutin általánosan elfogadott módszerek a mycosisok szerológiai diagnosztizálására
kellő részletességgel leírva / P.N. Kashkin, V.V. Lisin. "Gyakorlati
útmutató az orvosi mikológiához", Medicine, 1983/. Az utóbbi időben azonban
évtizedekben észrevehető elmozdulások történtek a módszertani megközelítésekben /Elinov N.P.,
2001/. Eredeti eljárásokat javasoltak az antigének és antitestek kimutatására
gombasejtek egyes metabolitjai; speciális diagnosztikai teszteket hoztak létre
készletek („bálnák”), például Pastorex ® Candida, a meghatározáshoz
antigén ismétlődő oligomannóz epitópjainak "latex agglutinációs" reakciói
szerkezetek/nagyszámú makromolekulán expresszálódnak
gomba; Candida mannán antigén meghatározására, pl.
candidémiás beteg szérumát, használhatja a Platelia ® Candida készletet.
Az első készletet használva az antigénszerkezetek meghatározásának küszöbértéke 2,5 ng/ml, a másodikat a _____________ módszerrel együtt alkalmazva, a meghatározási küszöb. - 0,5 ng/ml.

A mikózisok kórokozóit leggyakrabban különböző klinikai anyagok laboratóriumi vizsgálata során azonosítják

Vér

• Candida
• Cryptococcus
• A micélium kórokozóit ritkán mutatják ki a vérvizsgálatok, kivéve Fusarium

Gerincvelői folyadék

• Candida
• Cryptococcus

Gennyes váladékozás tályogokból, fekélyekből stb.

• Candida
• Cryptococcus
• Fusarium
• Aspergillus
• Sporotrix

Légúti váladék (köpet, BAL folyadék, hörgőkefe biopszia, transztracheális aspirátum)

• Aspergillus
• Candida
• Cryptococcus
• Mucor
• Scedosporium
• Rhizopus
• Sporotrix

Kibocsátás, biopsziás anyag a sebekből

• Aspergillus
• Candida
• Fusarium
• Rhizopus

Egyéb bioszubsztrátok

• Candida
• Cryptococcus

Anyag a mellkasból és a hasüregből; ízületi folyadék

• Aspergillus
• Candida
• Fusarium

Üveges test

• Candida
• Aspergillus

IV. A szisztémás mycosisok diagnózisának kritériumai: a végső diagnózis klinikai és laboratóriumi paraméterei

Nyelőcsőgyulladás

• jellemző változások jelenléte az oesophagoscopia során
• a gomba azonosítása a biopsziás anyag tenyésztése során
• pszeudomicélium jelenléte a festett kenetekben, vagy invazív gombásodás jelei a biopsziás anyagban

Tüdőgyulladás

Tüdőgyulladás miatt Candida spp.

• akut infiltratív változások a mellkas röntgenfelvételén, amelyek egybeesnek a gombás tüdőgyulladás klinikai megnyilvánulásaival
• azonosítás Candida spp. Transthoracalis biopsziából, transzbronchiális biopsziából, tüdőbiopsziás leletekből vagy thoracoscoposan irányított biopsziából nyert anyag tenyésztésekor az alsó légutakból
• a pseudomycelium azonosítása megfelelően festett biopsziás anyagban

Tüdőgyulladás miatt Aspergillus spp., Fusarium spp., Scedosporium apiospermum

• gombás elemek azonosítása szövetekben és pozitív tenyészet
• tartós vagy progresszív infiltrátumok a tüdőben, rezisztensek az antibiotikum-terápiára
• ezen kórokozók egyikének kimutatása köpet vagy BAL tenyésztéssel
• tüdőgyulladás klinikai tünetei (köhögés, légszomj, „pleurális” fájdalom, sípoló légzés, pleurális súrlódási zaj)
• jellegzetes változások a tüdő röntgen- vagy CT-vizsgálatán:

Subpleurális infiltratív, göbös, akut szögű vagy barlangos elváltozások

A „halo” tünete a tüdő CT-vizsgálatán

Az infiltratív változások előrehaladása az üregek kialakulásával és a „sarló” tünet megjelenésével

• egyéb kórokozók hiánya a BAL-folyadék tenyésztésekor, amelyek a tüdőben előforduló elváltozásokat okozhatják

Sinusitis

• az akut sinusitis klinikai és radiológiai tünetei
• a mycosis mikroszkópos és kulturális jelei az aspirátum vagy biopsziás anyag vizsgálatakor

Húgyúti fertőzés

• >1x10 CFU/ml kimutatása megfelelően összegyűjtött vizelet ismételt tenyésztésével

Fungemia

• Gombák egyszeri kimutatása vértenyésztés során 38 o C feletti testhőmérséklet-emelkedés időszakában

Akut disszeminált mycosis

• Fungemia a mély szövetek (beleértve a bőr alatti szöveteket is) károsodásának kulturális vagy szövettani jeleivel kombinálva, vagy a kórokozó azonosítása két normálisan steril bioszubsztrátból

Endophthalmitis

• az endoftalmitis szemészeti tünetei
• a kórokozó azonosítása szemből, vérből vagy más terjedési gócokból

Tályog vagy osteomyelitis

• az osteomyelitis radiográfiás/CT/MRI jelei
• a kórokozó azonosítása aspirátumban vagy biopsziás anyagban

Agyhártyagyulladás

• a gyulladás jelenlétét igazoló CSF-változások meghatározása és a gombák kimutatása CSF mikroszkóppal
• gombák kimutatása CSF tenyésztésével vagy antigének meghatározása Cr.neoformans, Candida és Aspergillus a CSF-ben

Krónikus disszeminált (hepatolienalis) candidiasis

Lehetséges

• tartós vagy időszakos láz a neutropeniás periódus lejárta után, a máj-, lép- vagy vesekárosodás jellegzetes tüneteivel kombinálva

Igazolt

• a fentieket vetéssel kombinálva Candida spp. a vérből a máj-, lép- vagy vesekárosodás jeleinek megjelenése előtt, vagy a léziókból származó biopsziás anyagban a candidiasis kulturális, szövettani jeleivel

V. GOMBÁS FERTŐZÉSEK OKAI

A gombás fertőzések és kórokozóik osztályozására különböző elvek vonatkoznak. Számunkra úgy tűnik, hogy gyakorlatilag a legegyszerűbb és legcélravezetőbb a kórokozó gombákat 5 fő csoportra osztani:

1. A felületes mikózisok kórokozói;

2. A dermatomycosis kórokozói;

3. A szubkután mikózisok kórokozói;

4. Mély mikózisok kórokozói (primer patogén mikromikéták, opportunista fertőzések kórokozói).

5. A pszeudomikózis kórokozói.

* Hangsúlyozandó, hogy az első három csoportba tartozó kórokozók immunszupprimált betegeknél fungemiát és több szervi elváltozást is okozhatnak.

A következő részekben egyetlen séma szerint adjuk meg a mikózisok kórokozóinak leírását: az elfogadott nómenklatúra szerinti elnevezését, szinonimák felsorolását, a táptalajokon található telepek makroszkopikus jellemzőit, valamint a gombaelemek mikroszkopikus jellemzőit, amelyek az alatta láthatók. mikroszkóp natív készítményekben és telepekről. Adatokat közölnek a gombák természetben való elterjedéséről és az általuk okozott betegségekről is.

A gombás betegségek laboratóriumi diagnosztikája a gomba kimutatásán, nemzetségének és típusának meghatározásán alapul. Két fő szakaszból áll: mikroszkopikus és kulturális tanulmányokból.

Mikroszkópos vizsgálat

A mikroszkópos vizsgálat az első és fontos láncszem az előzetes diagnózis megerősítésében.

A mikroszkópos vizsgálat sikere nagymértékben függ a kóros anyag helyes gyűjtésétől. A mikroszkópos vizsgálathoz olyan hajat kell kiválasztani, amelyen láthatók a gombás károsodás jelei (fénytelen, töredezett, megvastagodott). A megváltozott megjelenésű szőrszálakat epiláló csipesszel távolítják el. A mikrospóriás szőrszálak egyetlen érintett szőrszálának kimutatásához használjon faszűrős fénycsövet (zöldes-kék fényű).

Az érintett haj kiválasztásakor számos további jellemzőt lehet használni. A mikrospórák által érintett haj tövében kívülről elhelyezkedő spórák szürke buroka van. Krónikus trichophytosis esetén rövid, szürke érintett szőrszálak, „vesszők” és „kérdőjelek” formájában görbültek, valamint „fekete pontok” (a tüsző szájánál letört, megvastagodott fekete érintett szőrszálak) találhatók a a pikkelyek vastagsága. Infiltratív-gennyes trichophytosis esetén mikroszkópos vizsgálathoz az érintett szőrön kívül az elváltozásból származó genny és kéreg is használható.

A mikrospóriás bőrelváltozásokból, trichophytosisból és inguinalis redők mycosisából a pikkelyeket le kell kaparni az elváltozás perifériás zónájából, ahol a gomba nagyobb mennyiségben található. A vellusszőrt a bőrpelyhekkel együtt lekaparjuk.

A microsporia és a trichophytosis által érintett hajszálak vizsgálatakor figyelmet kell fordítani a spórák elhelyezkedésére (a hajon belül vagy kívül) és méretükre. Ezek az adatok bizonyos esetekben lehetővé teszik a diagnózis, a mycosis klinikai formája és az epidemiológia tisztázását.

A láb mycosisának interdigitális formájában bőrpikkelyeket és a macerált stratum corneum törmelékét használják mikroszkópos vizsgálatra. A mikroszkópos vizsgálathoz szükséges köröm területe az onychomycosis formájától függ. Felületes formában meg kell kaparni a körömlemez felületét.

A leggyakoribb disztális-laterális formában a körömágyból, a lemez alól kaparást alkalmaznak (subungualis hyperkeratosis) a levágott, megváltozott körömlemez egy részével. A proximális subungualis forma esetében speciális módszereket alkalmaznak az anyaggyűjtésre (ablak fúrása fúróval, körömbiopszia).

A láb mycosisának pikkelyes-hiperkeratotiás formájában a pikkelyeket lekaparják a talpfelületről. A láb mycosisának dyshidrotikus formájában a hólyagok fedelét vizsgálat céljából levágják.

A haj mikroszkópos vizsgálatához szükséges anyag elkészítésének technikája . Egy kis csepp 30%-os KOH-t csepegtetünk egy tárgylemezre, és az érintett hajszálat egy boncolótűvel belehelyezzük. A szőrcseppet alkohollámpa lángja fölött enyhén felmelegítjük, amíg a folyadék felszíne felett gőz nem jelenik meg, vagy a lúgcsepp széle mentén kristályperem hullik ki. A fedőlemezzel való lefedés után a felesleges lúgot szűrőpapírral távolítjuk el. A gyógyszert először alacsony, majd nagy (400-szoros) mikroszkópos nagyítással vizsgálják.

Bőr és köröm pikkelyek . A mikroszkópos vizsgálathoz vékony köröm pikkelyeket helyezünk egy tárgylemezre csepp 30%-os KOH-ban, és melegítjük, miközben lúgot adunk hozzá, amint az elpárolog. A lehűtött, festetlen mintát fedőlemezzel letakarjuk, és mikroszkóp alatt megvizsgáljuk.

A vastag bőr- és körömpikkelyeket egy centrifugacsőbe helyezzük, és néhány csepp 30%-os KOH-val megtöltjük. A kémcsövet felforraljuk és 20-30 percig állni hagyjuk. A megpuhult anyag egy részét üvegrúddal üveglapra visszük, gyufával addig nyomjuk, amíg „felhő” meg nem jelenik, majd mikroszkóp alatt megvizsgáljuk.

Genny . Egy csepp gennyet összekeverünk egy csepp alkohollal és fele-fele glicerinnel, és natív készítményben megvizsgáljuk.

Kulturális diagnosztika

Kulturális diagnosztikát végeznek a diagnózis végleges tisztázása és az epidemiológia tisztázása érdekében. Ez magában foglalja a gomba tenyészetének beszerzését, majd mikroszkópos vizsgálatot.

Az érintett hajat, pikkelyeket (bőr és köröm), hólyagokat vagy gennyeket mesterséges táptalajra oltják be. A Petri-csészéken óriási telepek megjelenésével képet kaphatunk a kórokozó nemzetségéről (Microsporum, Trichophyton, Epidermophyton), típusáról (L. canis vagy ferrugineum, T. violaceum, verrucosum vagy gypseum). A gomba nemzetségének és fajának végleges tisztázása csak a kapott tenyészet mikroszkópos vizsgálata alapján lehetséges.

A felületes candidiasis laboratóriumi diagnózisa

Az élesztőszerű gombák laboratóriumi vizsgálatához friss anyag szükséges. Mikroszkópos vizsgálatra, az elváltozások klinikai megnyilvánulásaitól és lokalizációjától függően bőrpelyhek, körömkaparék, körömredő alól egy-egy gennycsepp, a szájnyálkahártya és a külső nemi szervek érintett területeiről, hüvelyfalakról fehéres lerakódások, nyálkahártyáról lehúzható húgyhártya membránok, valamint lemosások az ajkak vörös szegélyéről, a bőr érintett területei nagy és kis redők.

Az elváltozás helyétől és a klinikai megnyilvánulások jellegétől függően a kutatáshoz szükséges anyagot vattacsomóval, szikével, hurokkal stb. veszik. A bőr- és körömpikkelyeket, a hámtörmeléket és a nyálkahártya-kaparékot elő- 30%-os KOH-val kezeljük. A kóros anyagot nem festett vagy festett készítményekben vizsgálják.

Az első esetben az anyagot azonos mennyiségű alkohollal és glicerinnel keverjük össze. Grammal festve az élesztősejtek és a pszeudomicélium sötétlilának, Ziehl-Neelsennél kéknek, Romanovsky-Giemsanál pedig rózsaszín-lilának tűnik. Ebben az esetben az élesztősejt megkülönböztető jellemzője a bimbózás - egy „homokóra” figura felfedezése. A szájüreg nyálkahártyájából, a nemi szervekből, az ajkak vörös szegélyének bőréből, a szájzugból, a nagy és kis redők bőréből steril tamponnal történik az anyagfelvétel. Az anyag felvétele után a tampont egy másik steril csőbe helyezzük folyékony cefrével. A kémcsövet a tamponnal a mikrobiológiai laboratóriumba küldik. A Candida nemzetséghez tartozó élesztőszerű gombák tiszta kultúrájának izolálását általánosan elfogadott mikrobiológiai módszerekkel végezzük.

A tudósok szerint a világ lakosságának 70% -ánál a láb mycosisának tünetei vannak. Ez a betegség az interdigitális redőket és a talp bőrét érinti. A betegség oka egy gomba, amelyet kezdetben csak Délkelet-Ázsia és Afrika korlátozott területein találtak meg. Az első világháború, amely az emberek tömeges vándorlását és az egészségügyi feltételek romlását okozta, a betegség elterjedéséhez vezetett az egész világon.

Mi okozza a láb mycosisát

A betegség fő kórokozója a Trichophyton rubrum. A fertőzést a T. mentagrophytes és az Epidermophyton floccosum okozhatja. A Candida nemzetséghez tartozó gombák és a penészgombák sokkal ritkábban válhatnak patogén mikrobává.

A betegség legjelentősebb kockázati tényezői:

• cukorbetegség;
• immunhiányos állapot (AIDS);
• lúdtalp;
• a perifériás artériák ateroszklerózisa;
• alsó végtagok varikózisai.

A fertőzés kialakulását elősegítő külső körülmények:

• zárt, nem nedvszívó cipők;
• lábsérülések (kalluszok, horzsolások);
• sportolni.

A lábgombásodás tünetei leggyakrabban felnőtt férfiaknál jelentkeznek. A gyerekek ritkán betegek.

A láb mycosisának tünetei

A betegség kialakulásával hámló és száraz bőr, viszketés és égő érzés jelentkezik, különösen az ujjak között, és fájdalmas repedések jelennek meg az ujjak alatt. Néha a láb mycosisának első tünetei a hólyagok, amelyek eróziók kialakulásával törnek fel. A betegség gyakran törölt formában jelentkezik, csak enyhe, lisztre emlékeztető hámlásban nyilvánul meg az ujjak közötti redőkben.

A betegségnek 4 klinikai formája van.

Az interdigitális vagy intertriginális változat a leggyakoribb. Az ujjak közötti bőr kipirosodik, megreped, a felületi réteg nedves lesz és hámlik. Ezek a jelek a talpra is kiterjednek, és súlyos viszketéssel és égéssel járnak. Gyakran bakteriális gyulladás társul.

A laphám-hiperkeratotikus változat a bőr súlyos megvastagodásával és repedésével jár. A talp kipirosodik és hámlik. Mély, fájdalmas repedések jelennek meg a sarok területén, a viszketés általában nem jellemző. Ez gyakran kétoldali elváltozás, és „mokaszin lábnak” is nevezik.

A diszhidrotikus változatot többszörös kis viszkető, fájdalmas hólyagok megjelenése kíséri. Összeolvadnak egymással, nagy buborékokat képezve. A hólyagok fedelei szétrepednek, fényes, sebezhető, fájdalmas felületet - eróziót - tárnak fel. A külső megnyilvánulások az ekcémához hasonlítanak.

A mikrobiális gyulladás gyakran társul megnagyobbodott inguinalis nyirokcsomókkal, lázzal, lábfájdalommal, hányingerrel, fejfájással és egyéb mérgezési jelekkel. A dyshidrotikus formában gyakran előfordul allergia a gombákkal szemben - gombás ekcéma. Kiütések kísérik a test azon részein, amelyek nem fertőzöttek gombával, például a kézen.

A törölt változat általában észrevétlen marad. Ezt a bőr enyhe hámlása kíséri a láb nagy- és mutató- és/vagy gyűrűs- és kisujja között. Nincs viszketés.

A láb mycosisának jelei

A lábak különböző típusú mycosisai lehetnek független betegségek, vagy a test általános gombás fertőzésének részeként fordulhatnak elő. Néha a „két láb - egy kéz” jel ezeknek a szerveknek a bevonásával fordul elő. Előfordulhat onychomycosis, a köröm gombás elpusztítása. Néha az inguinalis redők egyidejűleg érintettek.

A láb mycosisának fő tünetei és kezelése a képen látható:

Hámló bőr

Száraz és repedezett bőr

Buborékok és eróziók

Diagnosztika

A tapasztalt bőrgyógyász már az első vizsgálat során felismeri a lábgombák különböző típusait. A diagnózis megerősítéséhez azonban mikroszkópos vizsgálat szükséges. Ehhez a lézió pikkelyeit használják, spatulával lekaparják és lúgos oldattal kezelik. A kapott anyagot mikroszkóp alatt megvizsgálják, és kimutatják a kórokozókat.

A közvetlen mikroszkópos vizsgálat gyors, olcsó és könnyen elvégezhető, de nem tudja megállapítani, hogy melyik gomba okozza a betegséget. Ezért az anyagot táptalajra oltják, majd a kapott anyag tenyésztési vizsgálatát követik. Mikroszkópos kimutatás után azonban csak az esetek 20-6%-ában lehet a gomba tenyészetét megszerezni.

A láb mycosisának kezelésének típusai

A gombás betegségek kezelésére szolgáló gyógyszereket bőrgyógyásznak kell felírnia. Általában a láb mycosisának kezelését külső eszközökkel végzik.

Ennek a betegségnek az egyik hatékony gyógyszere a klotrimazol. Üzletünkben alacsony áron megvásárolhatja. A körmökre és a bőrre ápoló krém formájú gyógyszer, a Clotrimazol, amely elnyomja a gombák elszaporodását a hám stratum corneum vastagságában. Ha az interdigitális redők érintettek, a krémet naponta vigyük fel a tiszta, száraz lábbőrre egy hétig, szükség esetén hosszabb ideig.

A bőr súlyos keratinizációja és repedezése esetén először el kell távolítani az elhalt bőrlerakódásokat. Ehhez hámlasztó gyógyszerek alkalmazása szükséges. Például szalicilsavas kenőcsöt, tejsavas vagy karbamidos krémeket írnak fel. A kérges lerakódások eltávolítása után a krémet naponta 1-2 alkalommal kell használni.

A diszhidrotikus változatban az első lépés a sírás csökkentése. Ehhez tannint vagy bórsavat tartalmazó krémeket használnak. Súlyos esetekben glükokortikoidokat adnak a kezeléshez. Ezután alkalmazza a Clotrimazole lotiont a szokásos adagolási rend szerint.

Ha a láb elhasználódott, 7-10 napon keresztül naponta egyszer kezeljük krémmel, de a kúra időtartama egyéni és az orvos által meghatározott.

Szisztémás terápia

Hosszú távú vagy visszatérő lábgombásodás esetén orális gombaellenes gyógyszerekre lehet szükség. A gyomor-bél traktusból a véráramba, majd a bőrbe jutnak, ahol elpusztítják a gombákat. Három fő gyógyszert használnak:

• flukonazol;
• itrakonazol;
• terbinafin

Ezen gyógyszerek szedésének időtartama legalább egy hónap. Az ára meglehetősen magas. Ezért a láb mycosisának megelőzése mindig könnyebb és jövedelmezőbb, mint a gyógyítás.

A szisztémás gyógyszereket különösen gyakran írják fel, ha a gomba nemcsak a bőrt, hanem a körmöket is érintette. Ebben az esetben a gyógyszerek felhalmozódnak a körömlemez növekvő részében, és fokozatosan visszanő az egészséges köröm. A hatás javítása érdekében a köröm műtéti úton teljesen eltávolítható, majd gomba nélkül helyreállítható.

Idős betegeknél gyakran szükséges a köröm eltávolítása és a szisztémás és helyi gombaellenes terápia kombinációja. Ebben a betegcsoportban a körmök gyakran lassan nőnek, a láb vérkeringése károsodott, ezért a hatás eléréséhez nagy adag gyógyszer és hosszú kezelés szükséges.

Kezelés népi gyógymódokkal

Csak a hagyományos orvoslás receptjei használata nem segít megszabadulni a gombától. A hagyományos terápia ilyen kiegészítése azonban lerövidíti a kezelési folyamatot és felgyorsítja a gyógyulást.

Hasznos minden este 10 percig meleg lábfürdőt venni, majd alaposan megveregetni a lábát törülközővel, különösen a lábujjak között, és bekenni a körmökre és a bőrre Clotrimazole gyógytejet. Hasznos fürdő összetevők, amelyek enyhítik a gyulladást és csökkentik a viszketést:

• gyógynövény celandin és orbáncfű;
• bojtorján gyökerek;
• ürömfű;
• eukaliptusz levelek;
• fenyő tűk;
• friss őrlemény főzött őrölt kávéból;
• só;
• reszelt mosószappan, szódabikarbóna, kálium-permanganát és mustárpor keveréke.

Az érintett területeket nyírkátrányral vagy 100 gramm vajból összetört fokhagymával összekevert saját készítésű kenőccsel kenjük be. Hasznos még a propolisz, ami a fájó körmökre köthető.

Hasznos borogatást készíteni természetes gyógymódokból. Először 1-2 órán át állni hagyjuk, és ha tolerálják, egy éjszakán át. A következő összetevőket használják:

• sütőtök pép;
• zúzott fekete retek magvak;
• sóval őrölt borsmenta;
• bojtorján- vagy berkenyelevél, sodrófával kissé megpuhítva.

Hatékony az érintett területek kenése egyes növények levével és más természetes gyógymódokkal:

• propolisz alkoholos oldata;
• hagyma vagy fokhagyma lé;
• celandin lé;
• teafa olaj.

Betegségmegelőzés

A mycosis elkerülése vagy visszaesésének megakadályozása érdekében egyszerű, de állandó megelőzésre van szükség:

• nyáron viseljen természetes anyagból készült légáteresztő cipőt;
• úszómedencék, fürdők, nyilvános zuhanyzók látogatásakor viseljen egyedi gumipapucsot;
• ne viseljen valaki más cipőjét például látogatáskor;
• csak a saját higiéniai felszerelését használja - olló, habkő, körömreszelő.

Az újbóli fertőzés elkerülése érdekében a cipők talpbetétét és belső felületét rendszeresen fertőtlenítőszerrel kell kezelni. Egy jól ismert népi recept az ecetesszenciás oldat, de éles, kellemetlen szagú.

Az orvosok javasolják a Mikospray gyógyszer használatát, amely nemcsak gombaellenes, hanem antibakteriális hatással is rendelkezik. A Mycospray nemcsak a cipők kezelésére alkalmas, hanem a láb védelmére is, mielőtt nyilvános helyekre látogatna.

Moszkva és a régiók lakosai online áruházunkban vásárolhatnak gyógyszereket a láb mycosisának kezelésére és megelőzésére. Bizonyítottan hatékonyak és biztonságosak. Használatuk minden olyan ember számára ajánlott, aki nem szeretne lábgombával megfertőződni, vagy gyorsan megszabadulni tőle.

Az invazív mikózisok precíziós diagnosztikája Nem könnyű. Ez nem csak a gombatenyészet megszerzésének nehézségeivel magyarázható, hanem a kutatási eredmények értelmezésében is, mivel a gombák, élesztők és fonalasok egyaránt képesek megtelepedni a nyálkahártyán és szennyezni a vizsgált mintákat. Ebben a tekintetben az invazív mycosisok diagnózisa integrált megközelítésen alapul, amely nemcsak a mikológiai (kulturális) és szerológiai (gomba antigén meghatározása) eredményeit tartalmazza, hanem a gombás fertőzés klinikai tüneteit, a segédkutatási módszerek adatait is. számítógépes vagy mágneses rezonancia képalkotás, ultrahang).

Európai-Amerikai Együttműködési Csoport invazív mikózisok tanulmányozására Az invazív mikózisok diagnosztizálásának kritériumait immunhiányos betegeknél dolgozták ki. 2001-ben az Antimikrobiális és Kemoterápiás Nemzetközi Konferencián (ICAAC, Chicago) mutatták be, 2002-ben pedig nyomtatásban. Meghatározták a bizonyított, valószínű és lehetséges invazív mycosis kritériumait, amelyek klinikai és epidemiológiai vizsgálatokban történő felhasználása javasolt.

Bizonyított invazív mycosis, amelyet fonalas gombák okoznak: gomba micélium kimutatása biopsziákban vagy aspirátumokban szövettani vagy citológiai vizsgálat során, vagy tenyészet izolálása aszeptikus körülmények között, normál steril lézióból származó mintákból, amely klinikai és radiológiai vizsgálatok eredményei szerint fertőzéssel jár, a vizelet és a nyálkahártyák vizsgálata kivételével.

Élesztőgombák által okozott bizonyítottan invazív mycosis: élesztősejtek kimutatása (a Candida nemzetséghez tartozó gombák pszeudomyceliumot vagy valódi micéliumot képezhetnek) biopsziákban vagy aspirátumokban, a nyálkahártyákból vett minták kivételével, vagy tenyészet izolálása normál steril lézióból aszeptikus körülmények között vett mintákból, amelyek a a fertőzéssel összefüggő klinikai és radiológiai vizsgálatok eredményeire, kivéve a vizelet, az orrmelléküregekből és nyálkahártyákból vett mintákat, illetve az élesztősejtek vagy a a Cryptococcus spp. pozitív antigénje. a cerebrospinális folyadékban.

fonalas gombák által okozott fungemia: gombák vértenyészetének izolálása, kivéve az Aspergillus spp. és Penicillium spp., beleértve a Penicillium marneffeit, az izolált kórokozóval kompatibilis fertőző folyamat klinikai tüneteivel kombinálva.

Élesztőgombák által okozott fungemia: Candida vagy más élesztőgombák vértenyészetből történő izolálása olyan betegekből, akiknél a kórokozóhoz kapcsolódó fertőzés klinikai tünetei vannak.

Invazív mikózisok diagnosztikai vizsgálatainak komplexuma

Vizsgált bioanyag	Jelzések, használt média, jelentés
Vér	Javallatok: tartós láz (4-5 nap vagy több) a széles spektrumú antibiotikumokkal végzett kezelés során; láz második „hulláma” az antibiotikum-terápia során Vérgyűjtés a vénából ampullákba aerob baktériumok számára* vagy gombák számára szelektív táptalajba, ismételve (napi 2-3 alkalommal 1 órás időközzel) Diagnosztikai jelentősége: élesztőgombák izolálása, gondos értelmezés fonalas gombák izolálásakor, kivéve a Fusarium spp.
Vénás katéter	Javallatok: élesztőgombák izolálása a vérből A centrális vagy perifériás vénás katétert minden élesztőgomba vérből történő izolálása esetén eltávolítják A mikológiai kutatáshoz a katéter 5-6 cm hosszú, aszeptikusan eltávolított disztális szakaszát használjuk, a vizsgálatot félkvantitatív (Maki módszer) vagy kvantitatív módszerrel Sabouraud táptalajon végezzük. Diagnosztikai jelentősége: élesztőgombák izolálása 15 CFU vagy több félkvantitatív vizsgálatban, kvantitatív vizsgálatban - 103 CFU/ml vagy több a katéterrel összefüggő fertőzés vagy katéterfertőzés diagnózisának megerősítésére
Felső légúti váladékozás, köpet, légcső, hörgők, bronchoalveoláris mosófolyadék	Javallatok: fonalas gombák vagy Cryptococcus neoformans által okozott mikózisok gyanúja; elhúzódó láz széles spektrumú antibiotikum-terápia és neutropenia során Minták mikroszkópos vizsgálata kalkofluor fehérrel (micélium vagy pszeudomicélium kimutatása); vetés Sabouraud táptalajra; Aspergillus antigén meghatározása bronchoalveoláris mosófolyadékban invazív aspergillózisra jellemző tüdőléziók jelenlétében Diagnosztikai jelentősége: fonalas gombák vagy Cryptococcus neoformans izolálása
Gerincvelői folyadék	Javallatok: agyhártyagyulladás tünetei; agyi elváltozás(ok) kimutatása számítógépes tomográfia vagy mágneses rezonancia képalkotás segítségével; láz és neutropénia okozta "agyi" tünetek Mikroszkóp kalkofluor fehérrel, egy csepp tintával; Aspergillus, Cryptococcus antigén meghatározása; vetés Sabouraud szerdán Diagnosztikai jelentősége: gombák kimutatása, élesztő és fonalas; pozitív antigén
Biopsziák, aspirátumok, peritoneális folyadék, pleurális folyadék	Javallatok: az invazív mycosis klinikai és/vagy radiológiai tünetei; láz a széles spektrumú antibiotikumokkal végzett kezelés során. Mikroszkóp kalkofluor fehérrel, tenyésztés Sabouraud táptalajon Diagnosztikai jelentősége: gombák kimutatása, élesztő és fonalas

* A gomba vérből történő izolálásának gyakorisága azonos volt, amikor a kezdeti vért mindkét fiolába baktériumtenyésztő tápközeggel és szelektív gomba tápközeggel szívtuk. A vizsgálatot VASTES 9240 típusú bakteriológiai analizátorral végeztük.

Lehetséges invazív mycosis a következő kritériumok kombinációja alapján diagnosztizálják:
egy jel a mikrobiológiai kritériumok kategóriájából;
egy tünet a „szignifikáns” kategóriából, vagy kettő a „kevésbé jelentős” fertőző folyamat klinikai tüneteinek csoportjából.

Lehetséges invazív mycosis a következő kritériumok kombinációja alapján diagnosztizálják:
legalább egy invazív mycosis kialakulását kiváltó kockázati tényező jelenléte;
egy tünet a mikrobiológiai kritériumok kategóriájából vagy egy jel a „szignifikáns” (kettő a „kevésbé jelentősek” csoportból) a fertőző folyamat klinikai tünetei.

A koncepció " lehetséges invazív mycosis» Nem javasolt a gombaellenes szerek hatékonyságát vizsgáló klinikai vizsgálatok során használni. Ezt a kifejezést használhatja az empirikus gombaellenes terápia, az epidemiológiai vizsgálatok és a farmakoökonómia tanulmányozása során.

Nál nél mikológiai kutatás a steril aspirátumok vagy biopsziák nemcsak a gombakultúrák izolálását veszik figyelembe, hanem a micélium vagy pszeudomicélium mikroszkópos kimutatását is. Szövettani készítményekben az Aspergillus nehezen különböztethető meg a Fusarium spp., Sceclosporium apiospermum és néhány más fonalas gombától. A differenciáldiagnózishoz immunhisztokémiai vizsgálatot kell végezni az Aspergillus elleni antitestekkel.

Élesztőgombák izolálása a vérből legalább egy vizsgálatban a „bizonyítottan” invazív mycosis kategóriájába tartozik, és abszolút indikációja a szisztémás antimikotikumok felírásának neutropeniában szenvedő betegeknél. Az élesztőgombák vérből történő kimutatásának gyakorisága alacsony, még disszeminált candidiasis esetén is 35-50%.
Véghezvitel ismételt vérkultúrák növeli a pozitív eredmények elérésének valószínűségét.

Egyéb értelmezés fonalas gombák vérben történő kimutatása esetén eredményez. A fonalas gombák nagy gyakorisága a Fusarium spp. és 40-60%-ot tesz ki. Az Aspergillus rendkívül ritkán észlelhető, a legtöbb esetben szennyeződésnek minősül, kivéve az Aspergillus terreust.

Kiválasztás Aspergillus terreus hemoblasztózisos betegek véréből valódi aspergillemiára utalhat, és a fertőzés klinikai tüneteinek jelenlétében ez az antimikotikumok felírásának alapja.

Az invazív mycosis kritériumai

Index	Kritériumok
Az invazív mycosis (makroorganizmus) előfordulását kiváltó tényezők	Neutropénia (< 0,5*109/л в течение 10 дней) Tartós láz több mint 96 órán keresztül a széles spektrumú antibiotikum-terápia során 38 °C feletti vagy 36 °C alatti testhőmérséklet és a következő hajlamosító tünetek bármelyike: elhúzódó neutropenia (több mint 10 nap) az elmúlt 60 napban, intenzív immunszuppresszív kezelés az elmúlt 30 napban, bizonyított vagy valószínű invazív mycosis az előző időszakban időszakos neutropenia vagy AIDS A GVHD tüneteinek jelenléte, elsősorban súlyos lefolyású (II. fokozat) vagy kiterjedt krónikus betegség esetén Glükokortikoidok hosszú távú (több mint 3 hét) alkalmazása az elmúlt 60 napban
Mikrobiológiai jelek	Fonalszerű gombák (beleértve az Aspergillus spp., Fusaruim spp., Sceclosporium spp. és zygomycetes) és Cryptococcus neqformans tenyészet izolálása köpetből vagy bronchoalveoláris mosófolyadékból Pozitív tenyésztési vagy citológiai vizsgálat (direkt mikroszkópos vizsgálat) az orrmelléküregek aspirátumaiból származó fonalas gombák kimutatására Fonalszerű gombák vagy Cryptococcus neoformans kimutatása citológiával/direkt mikroszkóppal köpetből vagy bronchoalveoláris mosófolyadékból Pozitív Aspergillus antigén a bronchoalveoláris mosófolyadékban, a cerebrospinális folyadékban és a vérmintákban (legalább kettő) Pozitív kriptokokkusz antigén a vérmintákban Gombaelemek kimutatása citológiai vizsgálattal vagy direkt mikroszkóppal normál steril folyadékok mintáiból (pl. Cryptococcus spp. agy-gerincvelői folyadékban) Két pozitív eredmény a vizeletben lévő élesztőtenyészetek kimutatására irányuló vizsgálatokból húgyúti katéter nélkül Candida kristályok a vizeletben húgyúti katéter nélkül Candida spp. vértenyészetekből
Klinikai tünetek Alsó légutak	Össze kell kapcsolni azzal a hellyel, ahonnan mintát vesznek a mikrobiológiai kutatáshoz A következő típusú új tüdőinfiltrátumok bármelyike ​​a CT szerint: halo jel, félhold jel, üreg konszolidációs területekkel* Alsó légúti fertőzés tünetei (köhögés, mellkasi fájdalom, vérzéscsillapítás, nehézlégzés), pleurális súrlódási dörzsölés, bármilyen új infiltráció, amely nem szerepel a nagy jelentőségű tünetek között; mellkasi folyadékgyülem
Felső légutak Nagy jelentőségű jelek Kisebb jelentőségű jelek	Invazív fertőzés radiológiai jelei az orrmelléküregekben (falerózió vagy a fertőzés átterjedése a szomszédos struktúrákra, a koponyacsontok kiterjedt pusztulása) Orrfolyás, orrdugulás, orrfekély, orrvérzés, szemkörüli ödéma, fájdalom a felső állkapocsban, fekete nekrotikus fekély vagy a kemény szájpad perforációja
központi idegrendszer Nagy jelentőségű jelek Kisebb jelentőségű jelek	Gyanús központi idegrendszeri fertőzés radiológiai jelei (mastoiditis vagy más parameningealis fókusz, extraduralis empyema, többszörös elváltozások az agyban vagy a gerincvelőben) Fokális neurológiai tünetek és jelek, beleértve a gócos rohamokat, hemiparézist; tudatzavarok, agyhártya-tünetek, az agy-gerincvelői folyadék biokémiai összetételének és sejtösszetételének zavarai (egyéb kórokozók hiányában tenyésztés és mikroszkóp szerint, tumorsejtek hiányában)

*Hasonló radiológiai képet okozó mikroorganizmusok által okozott fertőzés hiányában, beleértve az üregek kialakulását is (Mycobacterium spp., Legionella spp., Nocardia spp.).

Nál nél kimutatás a vérben vagy más élesztőgombák steril bioszubsztrátja esetén a faj szerinti azonosítás és a gombaellenes szerekkel szembeni érzékenység meghatározása szükséges, fonalas (penészes) gombák izolálásakor csak a fajra történő azonosítás, az érzékenység nincs meghatározva.

A klinikai gyakorlat A fonalas gombák érzékenységét nem tanulmányozták, mivel az ilyen gombák antimikotikumokkal szembeni érzékenységének meghatározására vonatkozó szabványok nem tökéletesek. Ezenkívül csak egy vizsgálat mutatott ki összefüggést az Aspergillus spp. érzékenysége között. valamint az invazív aspergillosis kezelésének eredményei hematológiai rosszindulatú betegeknél. A későbbi vizsgálatok egyike sem talált hasonló eredményt.

Az utóbbi időben izolált jelentések kezdtek megjelenni az A. fumigatus gombák itrakonazollal és vorikonazollal szembeni szerzett rezisztenciájáról.

A gombák fajok szerinti azonosítása Elsősorban a gombaellenes szerek kiválasztásához és a megfelelő gombaellenes terápia lefolytatásához szükséges. Így a Candida krusei rezisztens a flukonazolra, és kevésbé érzékeny az amfotericin B-re, mint más élesztőfajták; Aspergillus terreus, Scedosporium apiospermum (Pseudallescheria boydii), Trichosporon beigelii, Scopulariopsis spp. rezisztens az amfotericin B-re; A mucorales rezisztens az itrakonazolra, a vorikonazolra, a Candida glabrata dózisfüggő érzékenységet mutat a flukonazolra, és ha ilyen típusú gombát izolálnak, még az érzékeny törzseket is, növelni kell a flukonazol adagját (felnőtteknek 400 mg helyett 800 mg-ot írnak fel); A Candida lusitaniae rezisztens az amfotericin B-re.

A gombák fajok szerinti azonosítása fontos a kórházi epidemiológiai elemzés elvégzéséhez is - a fertőzés kitörésének kórokozóinak és lehetőség szerint a fertőzés forrásának azonosításához. Olyan ritka gombák által okozott fertőzési kitöréseket írtak le, mint a C. lusitaniae, C. krusei, C. lipolytica.

Alapján gombafajok azonosítása Feltételezhető a nyálkahártyák invazív mycosisa vagy gombás kolonizációja. Például az Aspergillus niger szignifikánsan kisebb valószínűséggel okoz invazív aspergillózist akut leukémiában szenvedő betegeknél, mint az Aspergillus fumigatus. Az Aspergillus niger izolálását a bronchoalveoláris mosófolyadékból leggyakrabban a légutak kolonizációjának, a köpetből pedig a levegőből származó szennyeződésnek tekintik, és további kutatásokat igényel az invazív aspergillózis diagnózisának megerősítésekor.

Alapján fonalas gombák váladéka köpetből, bronchoalveoláris folyadékból és az orrmelléküregek aspirátumából csak invazív mycosis feltételezhető, anélkül, hogy a „bizonyított” kategóriába sorolnánk. Mindazonáltal allogén csontvelő kezelésben részesülő neutropeniás betegek köpetében az Aspergillus, különösen az Aspergillus fumigatus vagy Aspergillus flavus kimutatását mindig figyelembe kell venni. Ehhez ismételt mikológiai vizsgálatra és a tüdő számítógépes tomográfiájára van szükség. Így neutropenia esetén az invazív aspergillózis kimutatásának valószínűsége pozitív Aspergillus spp. tenyészet esetén. a köpetben 80%.

Kiválasztás Cryptococcus neoformans immunhiányos betegeknél a légutakból (mosások, öblítés) diagnosztikailag jelentős. Amennyiben immunhiányos betegek légúti folyadékaiból (légcső-, hörgő-, bronchoalveolaris öblítés) származó élesztőgombák azonosítása nem igényel kutatást, akkor ezekből a mintákból a Cryptococcus neoformans azonosítására szolgáló szűrés szükséges.

Candida kimutatása a vizeletben neutropeniában és lázban szenvedő betegeknél általában a disszeminált candida fertőzés megnyilvánulásának tekintik.

Időben diagnosztika invazív sikeresen alkalmaznak egy kereskedelmi tesztet az Aspergillus spp. specifikus antigénjének keringésének kimutatására. galaktomann (a gomba sejtfalának vízben oldódó poliszacharid komponense).

Galactomann két módszerrel határozható meg: a latex agglutinációs módszerrel (Pastorex Aspergillus, BioRAD) és az enzim immunoassay módszerrel (Platelia Aspergillus, BioRAD).

Előny enzim immunoassay módszer egy alacsonyabb érzékenységi küszöb a galaktomann vérszintjének meghatározásához - 1 ng/ml vagy kevesebb, és latex agglutináció esetén - 15 ng/ml. Diagnosztikai értékű a galaktomann meghatározása a vérben (legalább 2 minta), a cerebrospinális folyadékban és a bronchoalveolaris mosásban. Az enzim immunoassay módszer szenzitivitása kb. 90%, specificitása 90-99%, allogén csontvelőben ezek a mutatók alacsonyabbak, 60-70%, illetve 80-90%-osak a profilaktikus hatás miatt. gombaellenes szerek alkalmazása (az antimikotikumok csökkentik a galaktomann küszöbszintjét).

Az esetek 40%-ában észlelés galactomann a vérben megelőzi az invazív aspergillózis megnyilvánulásait, amelyet a tüdő számítógépes vizsgálata határoz meg, és 70%-ban megelőzi a fertőzés klinikai tüneteit.

Az antigén kimutatási teszt diagnosztikus értéke Aspergillus ez a helyzet, ha a vizsgálatot ismételten elvégzik. Az Aspergillus antigén meghatározását a vérben láz alatt kell elvégezni a széles spektrumú antibiotikumokkal végzett kezelés során a neutropeniában szenvedő betegeknél hetente kétszer; az antibakteriális terápia során fellépő vagy továbbra is fennálló tüdőgyulladásra; amikor elváltozásokat észlelnek a tüdőszövetben (számítógépes tomográfia).