Helmintológiai módszerek. A protozoonok tanulmányozásának alapvető módszerei

A protozoonok 4 osztályba sorolhatók:

Ha encystated, a mikroorganizmus megszerzi lekerekített formaés védőhéjjal letakarva. Ciszta formájában a protozoonok kevésbé érzékenyek rá kedvezőtlen tényezők környezet.

A következők lehetnek kutatás tárgyai:

Jegyzet:A diagnosztikának sok fajtája létezik, azokat a típusokat fogjuk figyelembe venni, amelyek a legelterjedtebbek a klinikai laboratóriumi gyakorlatban.

Magán típusú diagnosztika

A laboratóriumi asszisztens minden konkrét esetben egy adott kórokozó felkutatását kapja, néha a fő kórokozóval együtt.

Ennek a mikroorganizmusnak 6 faja van, amely képes élni az emberi bélben. Klinikai jelentősége Csak a dizentériás amőbának van, amely vegetatív formában és ciszták formájában fordul elő.

Ezenkívül immunológiai módszereket alkalmaznak:

• indirekt immunfluoreszcencia;
• indirekt agglutináció (INA);
• radiális immundiffúzió.

Jegyzet: szerológiai módszerek nem informatívak, és csak a főbb kiegészítéseként használatosak kétes esetekben.

Csillószok diagnosztikája

Az ebbe a nemzetségbe tartozó mikroorganizmusok patogén formája a balantidium. Ez egy olyan mikroba, amely balantidiasist okoz, a vastagbél fekélyes folyamatával járó betegséget. A kórokozót a natív kenetben vegetatív forma és ciszta formájában mutatják ki. A kenet anyagát (ürülék és nyálka) szigmoidoszkópos vizsgálat során veszik, és speciális táptalajra helyezik.

A flagellaták diagnózisa (Leishmania, Giardia, Trypanosomes, Trichomonas)

A Leishmania, a trypanosomes, a lamblia és a trichomonas veszélyesek az emberre.

Leishmania- mikrobák, leishmaniasis okozója, vérkenetben vizsgálják, anyagok csontvelő, bőrinfiltrátumokból származó kaparék. Egyes esetekben a leishmania diagnosztizálása során tápközegen tenyésztést alkalmaznak.

Trypanoszómák– kórokozók álomkór(amerikai/afrikai trypanosomiasis vagy Chagas-kór).

Az afrikai változat meghatározása a kezdeti időszak kutatás során perifériás vér. A betegség előrehaladtával patológiás mikrobák találhatók a nyirokcsomók szúrásának anyagában, és előrehaladott stádiumban - a cerebrospinális folyadékban.

A tripanoszómák diagnosztizálásához, ha Chagas-kór gyanúja merül fel, a vizsgált anyagot mikroszkóp alatt, kis nagyítással vizsgálják. Ebben az esetben a keneteket és a vastag cseppet előre megfestik.

Trichomonas(bél, orális,) az érintett nyálkahártyákról vett anyagok mikroszkópos vizsgálatával mutatják ki.

A sporozoák azonosítása (malária plazmódium, kokcidózis kórokozója stb.)

Az emberre a leggyakoribb és legveszélyesebb faj a maláriás plazmódium, amelynek 4 fő kórokozója van: kórokozó tercián malária, négynapos malária, trópusi maláriaés malária ovális.

A Plasmodium (sporogony) szexuális fejlődése az Anopheles szúnyogokban megy végbe. Aszexuális (szöveti és eritrocita skizogónia) - emberi májszövetben és eritrocitákban. Ezeket a funkciókat életciklus figyelembe kell venni a malária plazmódium diagnosztizálásánál.

Így egy frissen megbetegedett beteg vérében kimutathatók a sporogony ciklus csírasejtjei. De a maláriás rohamok csúcspontján a skizonták nagy számban jelennek meg a vérben.

Ráadásul be különböző fázisok maláriás láz megjelenik különféle formák plazmódium:

• a hideg időszak alatt a vér megtelik merozoitákkal, egyfajta skizonttal;
• megemelt hőmérsékleten a gyűrű alakú trofozoiták felhalmozódnak az eritrocitákban;
• a hőmérséklet csökkenését az amőbaszerű trofozoiták túlsúlya jellemzi;
• időszakokban normál állapot a vér a skizonták felnőtt formáit tartalmazza.

A malária kórokozójának (malária plazmódium) vizsgálatát kenetben és vastag cseppben végezzük.

Jegyzet:A kenetek és vastag vércseppek vizsgálatával a malária diagnózisa néha téves. A vérlemezkék bizonyos esetekben tévesen a malária kórokozójának tulajdoníthatók. Néha a leukociták és más sejtek fragmentumai is szimulálják a plazmódiumot.

A protozoonok tanulmányozásának alapvető módszerei

Nézzük röviden a protozoák jelenlétének legáltalánosabb kutatási módszereit.

A protozoonok diagnosztizálása natív kenet és Lugol-oldattal festett kenet (székletben) segítségével

A gyógyszert ürülék emulziójából állítják elő izotóniás oldatban. Két csepp nátrium-klórt és Lugol-oldatot csepegtetünk egy tárgylemezre. A vizsgálati anyagot fapálcikával mindkét készítményhez adjuk, és az üveggel való letakarást követően különböző mikroszkópi felbontáson nézzük meg.

A talált protozoonokat bizonyos jellemzők alapján rögzítik. A pontosság érdekében készítsen 2-3 készítményt ugyanabból az anyagból. Kétséges esetekben az elemzést 2-3 héten keresztül többször megismételjük.

A módszer képes kimutatni a vegetatív és cisztás formákat:

• lamblia;
• balantidium;
• dizentériás amőba.

A patogén formák mellett nem patogén protozoákat is azonosítanak. Is egészséges hordozók vannak luminális és cisztás formák.

Fontos:a pontatlanságok és hibák elkerülése érdekében a kutatást ismételten el kell végezni.

A natív és festett kenet módszerrel végzett protozoonok diagnosztizálásának eredményének tartalmaznia kell a kórokozó formájának leírását (luminális, ciszta, szövet).

Kutatási követelmények:

• az elemzésre vett anyagot (folyékony széklet) a székletürítés után legkésőbb 30 perccel megvizsgálják;
• a formalizált székletet a székletürítést követő 2 órán belül diagnosztizálni kell;
• az anyag nem tartalmazhat szennyeződéseket ( fertőtlenítőszerek, víz, vizelet);
• az anyaggal való munkához csak fából készült pálcikákat használjon, amelyek nem alkalmasak a nyálka elcsúszása miatt;
• A botokat használat után azonnal el kell égetni.

Konzerválási módszer (székletvizsgálat) a protozoonok diagnosztizálására

A vizsgálatot a protozoonok tartósítószerrel történő rögzítésével végzik. A különbség e módszer és az előző között az, hogy a tartósítószerek lehetővé teszik a gyógyszer hosszú távú megőrzését.

Felhasznált tartósítószerek:

• Talicska. Tartósítószer összetevőket tartalmaz: 0,7 ml nátrium-klorid, 5 ml formalin, 12,5 ml 96%-os alkohol, 2 g fenol és 100 ml desztillált víz. Színező összetétel: 0,01% tionin (azura) oldat.
• Safarliev megoldása. Összetevők: 1,65 g cink-szulfát, 10 ml formalin, 2,5 g kristályos fenol, 5 ml ecetsav, 0,2 g metilénkék, 100 ml víz. Ezt a tartósítószert olyan esetekben használják, amikor az anyagot több mint egy hónapig kell tárolni.

Az üres palackokba tartósítószert töltenek, 3:1 arányban töltik bele az anyagot, majd szükség esetén festéket adnak hozzá. Az eredményeket 2-3 gyógyszer vizsgálatakor értékelik.

Formalin-éter dúsítási módszer (a protozoonok székletben való jelenlétének elemzése)

Ez a diagnosztikai módszer lehetővé teszi a protozoon ciszták elkülönítését és koncentrálását. Az elemzéshez a következő összetevőkre van szükség: formaldehid (10 ml), 0,85 g izotóniás oldat, desztillált víz, kénsav-éter, Lugol-féle megoldás.

A bioanyag és a felsorolt ​​folyadékok keverékét összekeverik és centrifugálják. A kémcső alján kapott üledéket Lugol-oldattal megfestjük, és ciszták és vegetatív formák jelenlétére vizsgáljuk.

Módszer a Leishmania (csontvelőkenet) kimutatására

A leishmaniasis diagnosztizálására a következő reagenseket használják: Nikiforov-keverék (kén-éter és etanol), foszfát puffer, Azur-eozin Romanovsky szerint.

A csontvelő-anyagot nagyon óvatosan helyezzük egy tárgylemezre speciális képzés. Merítési rendszerrel ellátott mikroszkópot használnak.

BAN BEN akut időszak pontban észlelik a betegségeket nagyszámú leishmania.

Jegyzet:Néha vérsejtek hasonlíthat a feldolgozott Leishmania-ra, ezért nagyon fontos, hogy a laboratóriumi technikus legyen óvatos és elegendő tapasztalattal rendelkezzen a független kutatás elvégzéséhez.

Módszer a leishmania kimutatására a bőrinfiltrátumból származó kenetben

A szükséges reagensek hasonlóak az előző elemzéshez.

A vizsgálati anyagot a meglévő tuberkulózis vagy fekélyes tartalomból nyerik. Leishmaniasis gyanúja esetén a kaparást nagyon óvatosan, szikével, vér nélkül végezzük. Ezután a készítményt üvegen készítjük el. A kapott eredmények pontosságának biztosítása érdekében több készítményt egyidejűleg vizsgálnak meg.

A betegség jelenlétében a leishmania a vizsgálati anyagban jelenlévő makrofágok, fibroblasztok és limfoid sejtek között is kimutatható.

Módszer a patológiás szövetek kaparásával nyert tiszta Leishmania tenyészet izolálására

Ezzel a protozoon diagnosztizálási módszerrel a szövetkaparékot egy speciálisba helyezik tápközeg, amelyben a Leishmania aktív szaporodása következik be.

A kaparás felvétele előtt a bőrt alaposan alkohollal kezeljük, majd bemetszést készítünk a gumóba, melynek aljáról eltávolítjuk a tartalmát és médiummal kémcsőbe helyezzük. Az anyagot többször veszik, majd különböző kémcsövekbe helyezik. Ezután a termesztés termosztátban történik 22-24 fokos hőmérsékleten. Az eredményeket mikroszkóp alatt értékelik. Ezt a módszert akkor alkalmazzák, amikor más, olcsóbb és gyors utakat A protozoonok diagnosztizálása hatástalan.

A videó áttekintésével megtekintheti, hogyan fejtik meg a gyakorlatban a protozoonok jelenlétére vonatkozó teszteket egy csepp vér segítségével:

Lotin Alexander, orvosi rovatvezető

A széklet vizsgálata két módszerrel történik:

1. Makroszkópos – bélférgeket, fejüket, szegmenseiket, strobila töredékeit észlelni. Az ürülék kis részeit lapos fürdőben vagy Petri-csészében vízzel összekeverjük, és jó megvilágítás mellett nézzük sötét háttér, szükség esetén nagyítóval. Minden gyanús képződményt csipesszel egy másik, vízzel feltöltött csészébe vagy tárgylemezre helyezünk egy csepp hígított glicerinben.

A módszerrel védekező Az ürülék vizsgálati részét egy üveghengerben vízzel összekeverjük, majd ülepítés után lecsepegtetjük felső réteg víz. Ez többször megismétlődik. Amikor a folyadék átlátszóvá válik, lecsepegtetjük, és az üledéket Petri-csészében megvizsgáljuk.

2. Mikroszkópos – férgek peték és lárvák kimutatására. Számos kutatási módszer létezik.

1). Natív kenet – a legelterjedtebb és technikailag legelérhetőbb kutatási módszer. Minden féreg tojása és lárvája kimutatható. Kis számú tojás esetén azonban nem mindig lehet megtalálni őket. Ezért a dúsítási módszert alkalmazzák.

1). Fülleborg módszer – ez egy dúsítási módszer, amely a helminthiasis peték telített NaCl-oldatban való lebegtetésén alapul (1,2-es sűrűség; 400 g NaCl 1 liter vízben; 40%-os NaCl-oldat). A módszer hatékonyabb, mint a natív kenet. 2-5 g ürüléket üvegedényekbe helyezünk, NaCl-oldattal töltjük, megkeverjük, majd 45 perc elteltével fémhurokkal eltávolítjuk a kapott filmet, majd egy csepp glicerint helyezünk egy tárgylemezre. Vizsgálja meg mikroszkóp alatt. A módszer hátránya a különböző helminták, törpe galandféreg tojásainak lassú megjelenése - 15-20 perc múlva, orsóféreg - 1,5 óra, ostorféreg - 2-3 óra.

2) Kalantaryan módszer – szintén dúsítási módszer, de telített NaNO 3 oldatot (1,38 sűrűségű) használnak. A legtöbb tojás lebegése nem szükséges. Hátránya, hogy a tojások hosszú ideig tartó oldatban tartása azt a tényt eredményezi, hogy egyes tojások megduzzadnak, leülnek az aljára, és eltűnnek a felületi filmről.

3. Goryachev-módszer – pete lerakódás elve alapján, kimutatás kis tojásokat trematodes Oldatként telített NaCl-oldatot használunk, és a tetejére óvatosan 3-4 ml ürülékoldatot rétegzünk. 15-20 óra elteltével a trematode tojások leülepednek az aljára. A folyadékot leürítjük, és az üledéket tárgylemezre helyezzük mikroszkóp alá.

4. Shulman csavaró módszer – helminth lárvák kimutatására a székletben. Csak a frissen ürített székletet vizsgálják. 2-3 g-ot egy üvegedénybe teszünk, és 5-szörös mennyiségű vizet adunk hozzá, gyorsan felkavarjuk egy pálcikával anélkül, hogy az edény falát megérinnénk - 20-30 perc, majd a rudat gyorsan eltávolítjuk, és egy csepp végén lévő folyadékot egy tárgylemezre visszük és mikroszkóppal vizsgáljuk.

5. Berman-módszer – a bélféreg lárváinak hő felé vándorló képességén alapul, és a székletben való azonosításukra szolgál.

6. Harada és Mori módszer (lárvátenyésztési módszer), és kampósféreg-fertőzés vizsgálatára ajánlott. A módszer azon alapul, hogy melegben és nedves szűrt papíron a kampósféreg tojásaiból filariform lárvák fejlődnek, amelyek könnyen kimutathatók. 15 g ürüléket egy szűrt papírcsík közepére helyezzük az ürülékkel ellátott papírt egy tégelybe úgy, hogy az alsó végét vízbe merítsük, a felső végét pedig dugóval rögzítjük. Az edényt termosztátban 28 0 C-on 5-6 napig tartjuk. A filariform lárvák ezalatt fejlődnek ki, és leszállnak a vízbe. A folyadékot nagyítóval vizsgáljuk. Ha nehezen észlelhető, a folyadékot centrifugálják, és először 60 0 °C-ra melegítve elpusztítják a lárvákat. A laboránsnak kesztyűt kell viselnie.

7. Az enterobiasis módszerei – féregpeték kimutatása és szarvasmarha galandféreg.

a) kaparás a perianalis redőkből – fából készült pálcikára erősen feltekercselt és 50%-os glicerinoldattal megnedvesített vattakoronggal. A laboratóriumban a tampont 1-2 csepp 50%-os vizes glicerinoldattal lemossák.

b) ragacsos atka módszer (Graham módszer)

A ragasztószalagot a perianális redőkre helyezzük, majd a ragasztóréteget tárgylemezre helyezzük és mikroszkóp alatt megvizsgáljuk.

C) kaparás szemrudakkal (Rabinovich-módszer). A perianális kaparáshoz üveg szemrudakat használnak, amelyek széles részét speciális ragasztóval vonják be, amely lehetővé teszi a gombapeték megtartását.

Vér, epe, köpet és izmok vizsgálata

A vérmikroszkóppal filaria lárvákat találunk.

Köpet vizsgálata - paraganim peték, orsóféreg lárvák, necator, strongyloid, echinococcus hólyag elemei.

Izomvizsgálat - trichinellózis gyanúja esetén megvizsgálják a beteg vagy a holttest izmait, illetve azt a húst, amely feltehetően fertőződött meg. A trichinoszkópia céljából az izmot apró darabokra vágják és egy kompresszorba helyezik, ez két széles, vastag pohár, amely összetöri az izmokat, és kapszulák formájában találják meg a Trichinella lárvákat - kompressziós módszer.

Emésztési módszer - az izmokat mesterséges gyomornedvvel töltik fel (oldat sósavbólés pepszin). Az izmok megemésztődnek, és a lárvák könnyen azonosíthatók. Az invázió intenzitásának meghatározása: lárvák száma legfeljebb 200 per 1 g izomszövet– az invázió mérsékelt intenzitása; 500-ig – intenzív; 500 felett – szuperintenzív invázió.

Szerológiai módszerek

Helmintológiai kutatási módszerek. A féregfertőzések diagnosztizálásának módszerei közvetlen módszerekre oszthatók, amelyek maguknak a helmintáknak vagy azok töredékeinek, valamint a féreglárváknak és a petéknek a közvetlen kimutatásán alapulnak (széklet, vizelet, epe és nyombéltartalom, köpet, vér és szövetek, anyag vizsgálati módszerei) a perianalis területről és a subungualis terekből való kaparással nyert), és közvetett, amelyek segítségével feltárják másodlagos változások, amely a férgek létfontosságú tevékenysége következtében keletkezik az emberi szervezetben (a vér morfológiai összetételének vizsgálata, immunológiai módszerek a helminth fertőzések diagnosztizálására, Röntgen vizsgálatok stb.). A direkt módszerek közül a legelterjedtebbek a katológiai módszerek, amelyek makro- és mikrohelmintoszkóposra oszlanak. Egyes esetekben speciális módszereket alkalmaznak.

Makrohelmitoszkópos kutatási módszerek bélférgek vagy azok töredékeinek (scolex, szegmensek, cestodes strobila részei) felkutatására irányul. Azon helminthiasisok diagnosztizálására szolgálnak, amelyekben a tojások nem ürülnek ki a beteg ürülékében, vagy kis mennyiségben ürülnek ki, és nem mindig (például enterobiasis esetén pinwormok találhatók a székletben, taeniasis esetén - szegmensek).

Az ürülékben lévő pinwormok vagy cestoda szegmensek kimutatásához a székletet szabad szemmel vizsgálják. Mert megkülönböztető diagnózis Taeniasis esetén ajánlott a vízzel hígított ürüléket külön kis adagokban fekete fotóküvettákban vagy Petri-csészékben sötét háttér előtt megtekinteni. A helminták töredékére gyanús nagy képződményeket nagyító alatt vizsgálják két tárgylemez között. Ha szerint klinikai indikációk kis helminták vagy cestodafejek kimutatását javasolják a kezelés után, majd a gyanús részecskéket nagyító alatt, egy csepp glicerinben, és szükség esetén mikroszkóp alatt is megvizsgálják.

Mikrohelmintoszkópos kutatási módszerek(kvalitatív) a helmintpeték és a lárvák azonosítását célozzák. A Kato szerinti vastag kenet módszert alkalmazzuk celofán fedőlemezzel. A Kato keverék 6-ból áll ml 3%-os vizes malachitzöld oldat, 500 ml glicerin és 500 ml 6%-os fenolos oldat. Kato tányérok (a hidrofil celofánt 20×40 méretű darabokra vágják mm) merítve 24-ig h a Kato keverékbe úgy, hogy egymás mellett legyenek (3-5 ml Kato oldat 100 tányéronként). 100 mgürüléket üveglemezre helyezzük, Kato szerint celofán fedőlemezzel letakarjuk és lenyomjuk, hogy az ürülék a celofán lemez határain belül az üveglemezre kenődjön. A kenetet szobahőmérsékleten hagyjuk, hogy 40-50 fokkal világosodjon min, majd mikroszkóp alatt megvizsgálták. A forró évszakban, hogy a készítmény ne száradjon ki, helyezzen nedves szivacsot az elkészített készítmény tányérjára.

Minden típusú bélféreg teljes kimutatásához a Kato vastag kenet módszert kell alkalmazni celofán fedőlemezzel az egyik dúsító módszerrel kombinálva. Ezek közül a legelterjedtebb a Kalantaryan módszer és a Fulleborn módszer.

Kalantaryan módszer: 100 térfogatú széles szájú palackokban mlüvegrúddal alaposan keverje meg 5 G széklet, fokozatosan adva hozzá telített nátrium-nitrát-oldatot (1 kg nátrium-nitrát per 1 l vizet forraláskor) a pohár széléig. A felületre lebegõ nagy részecskéket papírkanállal távolítják el. A sóoldat felületére tárgylemezt helyezünk (a sóoldatot addig adagoljuk, amíg a keverék teljesen érintkezésbe nem kerül a tárgylemezzel). 20-30-ban min a tárgylemezt eltávolítjuk, és a filmet mikroszkóp alatt megvizsgáljuk. Ennek a sónak a hiányában használhat telített konyhasóoldatot Fholleborn szerint (400 G só az 1-ben l forrásban lévő víz).

Annak a ténynek köszönhetően, hogy a tojások nagy fajsúly(gömbférgek megtermékenyítetlen petékje, trematoda és nagy cestoda pete) nem lebegnek, a folyadék felszíni rétegének vizsgálata mellett Fulleborn módszer alkalmazásakor az üledékből 2-4 készítményt kell mikroszkóp alatt megvizsgálni.

Speciális laboratóriumi módszerek különféle helmintiázisok vizsgálatára.

A helminták töredékeinek kimutatásához a székletet szabad szemmel vizsgálják, majd vízzel keverik, és kis részletekben Petri-csészében, sötét háttér előtt vizsgálják. Minden gyanús részecskét egy tárgylemezre helyeznek egy csepp vízben, és nagyítóval megvizsgálják. A napi adagot hengerbe helyezheti 5-10-szeres mennyiségű víz hozzáadásával. Keverés után az edényt addig hagyjuk, amíg a szuszpendált részecskék teljesen leülepednek. Felszíni réteg a folyadékokat lecsepegtetjük és felöntjük tiszta víz. A mosott üledéket kis részletekben szabad szemmel vagy nagyítóval vizsgáljuk. A peték kimutatására mikroszkópos vizsgálati módszereket alkalmaznak.

Natív kenet módszer. Kis mennyiségű széklet a különböző helyeken A vizsgálati mintát egy tárgylemezen őröljük egy csepp 50%-os glicerinoldatban, izotóniás nátrium-klorid-oldatban vagy vízben. A keveréket fedőlemezzel fedjük le, és mikroszkóp alatt nézzük.

Fulleborn lebegő módszer. A széklet egy részét összekeverjük 20 rész telített nátrium-klorid-oldattal (fajsúly ​​1,18), amelyet kis részletekben adunk hozzá. A felszínen lebegő nagy részecskéket azonnal eltávolítjuk, és a keveréket 45 percig állni hagyjuk. Ezalatt az idő alatt a nátrium-klorid-oldatnál kisebb fajsúlyú helmintpeték a felszínre úsznak. A felületi filmet körülbelül 1 cm átmérőjű huzalhurokkal eltávolítjuk, és egy tárgylemezre helyezzük mikroszkóp alatti vizsgálat céljából.

Kalantaryan módszer. A lebegő módszer hatékonysága nő, ha a nátrium-kloridot telített nátrium-nitrát-oldattal helyettesítjük. Ebben az esetben a keveréket 10-15 percig tartjuk.

A széklet nátrium-klorid- vagy nátrium-nitrát-oldattal való leülepedése után kialakuló felületi film tárgylemezzel is eltávolítható. Erre a célra az ürülék és sóoldat keverékével színültig megtöltött tégelyt tárgylemezzel letakarják úgy, hogy annak alsó felülete érintkezzen a folyadékkal. Az ülepedés után az üveget eltávolítják, és gyorsan felfelé fordítva a felülettel, amelyen a film található, mikroszkóp alatt megvizsgálják.

A csigolyaredők kaparását (a féregpeték és a szarvasmarha galandféreg onkoszférák azonosítására) reggel, tisztálkodás előtt kell elvégezni. Vízbe vagy 50%-os glicerines oldatba mártott fa spatulával kaparja körbe végbélnyílás. A kapott anyagot egy csepp vízben vagy 50%-os glicerinoldatban egy tárgylemezre visszük, és mikroszkóp alatt megnézzük. A spatula cserélhető egy nedves vattakoronggal, amellyel a perianális területet töröljük át, majd alaposan öblítsük le vízzel. A vizet centrifugálják, és az üledéket mikroszkóp alatt vizsgálják.

Behrmann-módszer (lárvák azonosítására). Háromlábú állványba helyezett üvegtölcséren egy fémhálót rögzítenek, amelyre 5-6 g ürüléket helyeztek. A tölcsér alsó végére egy bilinccsel ellátott gumicsövet helyeznek el. A tölcsért 50°-ra melegített vízzel töltjük meg úgy, hogy Alsó rész az ürüléket tartalmazó háló érintkezett a vízzel. A lárvák aktívan beköltöznek a vízbe, és felhalmozódnak a gumicső alsó részében. 4 óra elteltével a folyadékot centrifugacsövekbe engedjük le, centrifugáljuk, és az üledéket mikroszkóp alatt vizsgáljuk.

A köpet elemzése, az orrnyálka és hüvelyi folyás a pulmonalis trematode paragonimus petéinek, orsóféreg- és kampósféreg-lárváknak, tűféregpetéknek és az echinococcus hólyag töredékeinek azonosítására. A vizsgált nyálkarészt (váladék) üvegre kenjük, és makroszkóposan fekete-fehér háttér előtt, majd mikroszkóp alatt megnézzük. 25%-os antiformin oldatot adhatunk a vizsgált anyaghoz, alaposan felrázzuk, és 1-1,5 órán át állni hagyjuk, hogy a nyálka feloldódjon. Az elegyet centrifugáljuk, és a csapadékot mikroszkóp alatt megvizsgáljuk.

Elemzése nyombél és gyomornedv májmételyek, kampósférgek, Strongyloides lárvák peték azonosítására. A kapott nyombéltartalom mindhárom részét centrifugáljuk, és az üledéket mikroszkóp alatt vizsgáljuk. Tanulnak is.

Szövetkutatás. A Trichinella lárvák azonosításához a biopsziás izomdarabokat óvatosan rostokra osztják, kompresszorüvegek közé szorítják (vastag üvegek csavarokkal), és mikroszkóp alatt, sötét fénnyel megvizsgálják. A cysticerci azonosításához az izmokat preparáló tűkkel feldarabolják, az izolált hólyagot megtisztítják a környező szövetektől, két tárgylemez közé szorítják, és nagyítóval megvizsgálják.

Vérvizsgálat (a filaria lárvák kimutatására). Vizsgálja meg a lelógó cseppet egy vazelinnel szegélyezett fedőüvegen. 0,3 ml vért 10-szeres mennyiségű 3%-os oldattal keverhet össze. Az elegyet centrifugáljuk, és a csapadékot mikroszkóp alatt megvizsgáljuk. A gyógyszerek 1 ml-re történő dúsításához vénás vér adjunk hozzá 3 ml 2%-os formalinoldatot vagy 5-szörös mennyiségű folyadékot, amely 95 ml 5%-os formalinoldatból, 5 ml ecetsavból és 2 ml tömény oldatból áll. alkoholos oldat hematoxilin. Az elegyet centrifugáljuk, a csapadékot desztillált vízzel mossuk és mikroszkóp alatt vizsgáljuk. A megkülönböztetés érdekében különböző típusok filariae-t Giemsa-Romanovsky módszerrel festett kenetekkel vizsgáljuk.

Mód immunológiai diagnosztika. Allergiás diagnosztikai teszteket (lásd) a megfelelő típusú helmintákkal is alkalmaznak (agglutináció, komplementkötés).

Helmintológiai kutatási módszerek. Rizs. Helminth tojás. 1-10 - tojás orsóférgek(fonálférgek): 1 - 3 - orsóférgek (1 - megtermékenyített pete, 2 - megtermékenyített tojás fehérje nélkül, 3 - megtermékenyítetlen tojás); 4 - macska orsóférgek; 5 - húsevő orsóférgek; 5 - pinworms; 7 - ostorféreg; 8 - tominx; 9 - horogféreg; 10 - trichostrongylid. 11-15 - tojás galandférgek(cestodes): 11 - szarvasmarha galandféreg; 12 - törpe galandféreg; 13 - patkány galandféreg; 14 - sütőtök galandféreg; 15 széles szalag. 16 - 24 - mételytojás (trematodes): 16 - trematodes (schistosomes) japán; 17 - trematodes (schistosomes) vizelet - szexuális; 18 - trematodes (schistosomes) Munson; 19 - trematodes (parogonymus) tüdő; 20 - trematodes (opisthorchis) szibériai (macska); 21 - trematodes (clonorchis) chinensis; 22 - intestinalis trematodes (metagonimus); 23 - a máj trematodesa (fasciola); 24 - trematodes (dicrocelium) lándzsás.

A helmintológiai kutatás hatékony és kényelmes módszere az vastag kenet vizsgálata Kato szerint, melynek lényege, hogy vastag, glicerinnel megtisztított és malachit zölddel színezett ürülékkenetben kimutatható a helminta tojás. A Kato keverék összetétele: 6 ml 3% -os vizes malachit zöld oldat, 500 ml glicerin, 500 ml 6% fenolos oldat. Az oldat stabil, szobahőmérsékleten tárolható. A készítmények elkészítéséhez borsó nagyságú ürülékdarabokat helyezünk egy tárgylemezre, hidrofil celofán fóliával fedjük le, majd 24 órán át a Kato keverékben tartjuk, és az üvegre nyomjuk. egyenletes eloszlás anyag. A 40-60 percig tisztult keneteket mikroszkóp alatt vizsgáljuk. A kimutatott helmintpetéket megszámoljuk és morfológiai jellemzők meghatározzák a fajukat. A módszer lehetővé teszi orsóférgek, ostorférgek, cestodák, trematodák, valamint kisebb mértékben horogférgek és törpe galandférgek tojásainak azonosítását.

Szintén széles körben használt dúsítási módszerek. A flotációs módszerek alapelve, hogy a székletet sóoldatban szuszpendálják, aminek a relatív sűrűsége nagyobb a bélférgek tojásaihoz képest, aminek következtében felúszik a felszínre. A felületi film tartalmát mikroszkóp alatt vizsgáljuk. A következő oldatokat használják dúsító keverékként: asztali só- 400 g 1 liter vízben (relatív sűrűség Fulleborn szerint -1,18); nátrium-nitrát - 1 kg 1 liter vízben (relatív sűrűsége a "Kalantaryan-1,38" szerint); nátrium-nitrát - 900 g és kálium-nitrát - 400 g 1 liter vízben (relatív sűrűsége Brudastov és Krasnonos-1,48 szerint). az oldatokat felforraljuk és lehűtjük.
Kutatás céljából tegyünk 5-10 g ürüléket egy pohárba vagy cseréppohárba, adjunk hozzá 100-200 ml sóoldatot és alaposan keverjük össze. Ezután a lebegő nagy részecskéket fa spatulával vagy papír- vagy kartonkanállal eltávolítják, és azonnal széles tárgylemezt visznek fel a felületi filmre úgy, hogy a sóoldat és a tárgylemez teljesen érintkezzen. Miután a keveréket 30-40 percig állni hagytuk, a tárgylemezt eltávolítjuk, a filmmel felfelé a mikroszkóp alá helyezzük, és a teljes felületet gondosan megvizsgáljuk. A kiszáradás elkerülése érdekében 2-3 csepp 50%-os glicerines oldatot adhat hozzá. A felületi fólia dróthurokkal is eltávolítható. A flotációs módszerek hatékonysága a relatív sűrűség növekedésével nő sóoldatok. Ezekkel a módszerekkel kimutatható a fonálférgek, cestodák és trematodák tojásai.

A tojások székletben történő kimutatására a Krasilnikov ülepítési módszert alkalmazzák. Az ürüléket 1%-os mosószer oldattal keverjük össze ( mosópor„Lotus” stb.) 1:10 arányban, amíg szuszpenzió nem képződik. A mosószer hatására a széklet különböző összetevői (fehérjék, zsírok, szöveti elemek) feloldódnak. 30 perc elteltével a cső tartalmát 1-2 percig rázatjuk, majd 5 percig centrifugáljuk. Az üledékből preparátumokat készítenek és mikroszkóp alatt megvizsgálják.
BAN BEN terepviszonyok, valamint a lakosság tömeges féregfertőzöttségi vizsgálatakor kényelmes a Kato vastagkenet módszer alkalmazása. BAN BEN fekvőbeteg állapotok A betegek vizsgálatakor célszerű a leghatékonyabb flotációs módszereket alkalmazni. Ha a mikroszkópos vizsgálat során ezeket a módszereket alkalmazzuk, célszerű megszámolni a készítményben található tojásokat. Ha a széklet vizsgálatához vett minta vagy térfogat standardizált (például 1 teáskanál vagy evőkanál), és állandó egyenletes térfogatú sóoldat, akkor nagyjából meg lehet ítélni az invázió intenzitását. Ez a mennyiségi elszámolás hasznos lehet az előírt kezelés igazolására és a féregtelenítés hatékonyságának felmérésére. Ezen kívül más, pontosabb módszerekkel is megállapítható a fertőzés intenzitása. kvantitatív módszerek, különösen a Stoll-módszer.

Tenarhynchosis és enterobiasis diagnosztizálására A perianalis-rektális kaparék tanulmányozásának módszerét alkalmazzák. 50%-os glicerines oldatba mártott fa spatulával kaparja le a perianális redőket reggel, mielőtt székletürítést végez a kerületben. végbélnyílásÉs alsó szakaszok végbél. A kapott, fedőlemez szélével ellátott spatuláról megtisztított anyagot csepp 50%-os glicerinoldatban üveglemezre helyezzük, fedőlemezzel letakarjuk és mikroszkóp alatt megvizsgáljuk. Megvizsgálhat egy cellulózszalag csíkot is, amelyet először a tapadó oldalával a perinanális redőkhöz nyomnak, majd tárgylemezre helyezve mikroszkóposan megvizsgálják.

Fonálféreg lárvák kimutatása székletben Berman módszerrel. A módszer a lárvák termotróp tulajdonságán alapul. Kutatáshoz vegyünk 1 evőkanál ürüléket, és helyezzük fémhálóba vagy több réteg gézből álló hálóba egy drótvázra. A hálót egy állványra szerelt tölcsérbe kell beépíteni. A tölcsérhez egy bilinccsel ellátott gumicső van rögzítve. A háló felemelése után a tölcsért megtöltjük vízzel (+40°...+50°C hőmérséklet) úgy, hogy a háló alsó része vízbe merüljön. A székletből származó lárvák aktívan vándorolnak a meleg vízés leülepedve felhalmozódnak a tölcsér alsó részében. 2-4 óra elteltével a bilincset kinyitjuk, a vizet centrifugacsőbe engedjük és 2-3 percig centrifugáljuk. Ezután a felülúszó folyadékot lecsepegtetjük, az üledéket tárgylemezre visszük és mikroszkóp alatt megvizsgáljuk, ahol a strongyloidiasis kórokozójának mozgékony lárváit találjuk.

Harada módszer és A Mori lehetővé teszi a horogféreg és a necator lárvák megkülönböztetését. A kampósféreg lárváit szűrőpapíron tenyésztik. Ebből a célból a betegtől legkésőbb a székletürítés után 1 órával vett 0,5 g friss ürüléket 12X1,5 cm-es szűrőpapírcsíkokra viszünk, a csík mindkét végét tisztán hagyva. A csík egyik végét egy kémcsőbe merítjük, amelynek negyedét vízzel töltjük, a másikat dugóval rögzítjük. A kémcsöveket +26... + 28°C hőmérsékletű termosztátba helyezzük. A petékből fejlődő lárvák a szűrőpapíron keresztül leszállnak a kémcső aljára. 5-6 nap elteltével a papírcsíkot eltávolítjuk, és a kémcsőben maradt folyadékot nagyítóval megvizsgáljuk vagy centrifugáljuk. A centrifugálás során keletkezett csapadékot fénymikroszkóp alatt vizsgáljuk. Ha tetraéderes csövek helyett használjuk befőttesüveg(15ХХХ7 cm méretű), melynek falaihoz 4 db papírcsík van rögzítve, az elemzések hatékonysága nő (G. M. Maruashvili et al., 1966).

A schistosomiasis vizsgálati módszerei . Az ürülék vizsgálata - a széklet egy részét 250 ml vízzel összekeverjük, 3 réteg gézen átszűrjük egy kúpos edénybe, amelyet a tetejéig vízzel megtöltünk. 30 perc elteltével a folyékony réteget lecsepegtetjük, és az üledékhez egy adag vizet adunk. A csapadékot addig mossuk, amíg tiszta felülúszót nem kapunk, és mikroszkóp alatt vizsgáljuk.

Larvoszkópos módszer - 20-25 g ürüléket helyezünk egy Erlenmeyer-lombikba, amelynek oldalára felforrasztott üvegcső felfelé mutat, és megmossuk. csapvíz. Ezután a lombikot letakarjuk sötét papírral, egy forrasztott üvegcsövet hagyva a fényben +25...+30°C hőmérsékleten. A kikelt miracidiumok a meniszkusznál koncentrálódnak az oldalsó csőben, ahol nagyítóval vagy szabad szemmel is láthatóak. Vizeletvizsgálat - 100 ml vizeletet, amelyet délelőtt 10 és 14 óra között gyűjtöttünk, vagy napi adagot, ülepítünk, majd 1500 fordulat/perc sebességgel centrifugáljuk. A keletkezett üledéket felvisszük* egy tárgylemezre, és mikroszkóp alatt megvizsgáljuk. A WHO a teljes vizeletminta szűrésének módszerét javasolja. Szűrés után a szűrőket formaldehiddel kezelik, vagy felmelegítik (a tojások elpusztítására), majd megnedvesítik vizesoldat ninhidrin. A szárított készítményekben a tojásembriók lila színt kapnak.

Alkalmazása immunológiai A schistosomiasis diagnosztizálásának kutatási módszerei nehézségekkel járnak, mivel a felnőtt schistosomák és tojásaik nagyszámú olyan antigént tartalmaznak, amelyek immunreakciók, amelyek nem fajspecifikusak (D. Bradley, 1979).

Hazánkban gyártásra immunológiai reakciók mert helminthiasis felszabadul egész sor szabványos diagnosztika. Gyakorlati használat allergiája van bőrteszt echinococcosis és alveococcosis esetén RLA echinococcus antigénnel, RSC hidegben, precipitációs reakció hidegben különböző módosulatokban (gyűrűs precipitáció, kicsapás kémcsövekben vagy kapillárisokban, amelyeket trichinosis, cysticercosis és migroascariasis antigénekkel helyeznek el). A fent említett szerológiai reakciók elvégzésére szabványos diagnosztikai készleteket bakteriális készítményeket gyártó vállalkozások állítanak elő. A gyártó a gyártott diagnosztikai készletekhez mellékeli részletes utasításokat a tárolási szabályokról, a gyógyszer eltarthatósági idejéről és a releváns antigének használatára vonatkozó utasításokról a reakció szakaszolásának technikájával.

BAN BEN utóbbi évek A helminthiasis diagnosztizálására használt szerológiai reakciók listája jelentősen bővült. Erre a célra a következő reakciókat alkalmazzák: RIGA, indirekt immunfluoreszcencia (RIF), immundiffúzió gélben (RID), ellen immunoelektroforézis (CIEF), CEMA. Ezek a reakciók alkalmazhatók ascariasis, toxocariasis, trichinosis, kampósféreg-betegség, filariasis, echinococcosis és alveococcosis, opisthorchiasis, schistosomiasis, paragonimiasis esetén. Ezekre a reakciókra azonban hazánkban nem adnak ki szabványos diagnosztikai teszteket, és a diagnózisuk technikáját sem szabályozzák. Az egyes, elsősorban tudományos laboratóriumok önállóan készítenek elő specifikus antigéneket és alkalmazzák azokat különféle módosításokban. E módszerek leírása széles körben megtalálható a szakirodalomban, és nem szigorúan egységes. Az immunológiai elemzési adatok értelmezésének az immunválasz dinamikájának tanulmányozásán kell alapulnia, figyelembe véve az egyes alkalmazott módszerek specificitásának és szenzitivitásának szintjét. szerológiai reakció. Ezért a diagnózis felállításakor, valamint a lakosság szeroepidemiológiai felmérései során célszerű több, a legérzékenyebb reakciót alkalmazni. Ebből a szempontból a VIEF és a REMA eltérő reakciói jól beváltak nagy érzékenységés meglehetősen nagy specificitású (P. Ambroise-Thomas, 1978; I. E. Ballad, 1979; G. M. Negreanu, 1980; A. M. Ponomareva, 1981; A. Ya. Lysenko, 1978 stb.). A REMA hatékonyságát amőbiasisra, leishmaniasisra, trypanosomiasisra és toxoplazmózisra tesztelték (G. A. Ermolin, 1980).