Uzročnik sifilisa. Taksonomija

br. 23 Uzročnik sifilisa. Taksonomija. Karakteristično. Mikrobiološka dijagnostika. Liječenje.
Treponema paladij; T. entericum
Morfologija: tipične treponeme s 8-12 vijuga, lokomotorni sustav - 3 periplazmatske flagele na svakom polu stanice. Mrlja po Gramu se ne percipira, prema Romanovsky-Giemsa - blago ružičasta, otkrivena impregnacijom srebrom.
kulturnih dobara: virulentni soj na kućnom ljubimcu. mediji ne rastu, akumulacija kulture događa se zarazom kunića u testisu. Virulentni sojevi se uzgajaju na podlozi s tkivom mozga i bubrega.
Biokemijska svojstva: mikroaerofil
Antigenska struktura: kompleks, ima specifične proteinske i lipoidne antigene, potonji je po sastavu identičan kardiolipinu ekstrahiranom iz goveđeg srca (difosfadilglicerin)
Čimbenici patogenosti: adhezini su uključeni u proces pričvršćivanja, lipoproteini sudjeluju u razvoju imunopatoloških procesa.
Otpornost: osjetljivo na sušenje, sunčevu svjetlost, ostaje na predmetima dok se ne osuši. Pod nepovoljnim uvjetima prelazi u L-forme i stvara ciste.
Patogeneza: Uzročnik sifilisa. S mjesta ulaznih vrata treponeme ulaze u regionalne limfne čvorove, gdje se množe. Nadalje, T. prodire u krvotok, gdje se veže za endoteliocite, uzrokujući endarteritis, što dovodi do vaskulitisa i nekroze tkiva. S krvlju se T. širi po tijelu, zasijavajući organe: jetru, bubrege, kosti, kardiovaskularni i živčani sustav.
Imunitet: Ne razvija se zaštitni imunitet. Kao odgovor na antigene patogena razvijaju se HNL i autoimuni procesi. Humoralni imunitet se proizvodi protiv lipoidnog antigena T. i titar je IgA i IgM.
mikroskopski pregled. Provodi se s primarnim sifilisom tijekom pojave tvrdog šankra. Materijal za istraživanje: iscjedak šankra, sadržaj regionalnih limfnih čvorova, iz kojih se priprema "zdrobljena" kapljica i ispituje u tamnom polju. Uz pozitivan rezultat, vidljive su tanke upletene niti duljine 6-14 mikrona, koje imaju 10-12 jednolikih malih kovrča pravilnog oblika. Blijedu treponemu karakteriziraju pokreti poput klatna i savijanja prema naprijed. S razvojem lezija na oralnoj sluznici sa sekundarnim sifilisom, kao i s lokalizacijom tvrdog šankra u usnoj šupljini, potrebno je razlikovati blijedu treponemu od saprofitnih treponema, koji su predstavnici normalne mikroflore. U ovom slučaju od odlučujuće je dijagnostičke važnosti otkrivanje tipičnih treponema u punktatu regionalnih limfnih čvorova.
Serodijagnostika. Wassermanova reakcija postavljena je istodobno s 2 antigena: 1) specifična, koja sadrži antigen patogena - treponema uništena ultrazvukom; 2) nespecifični - kardiolipin. Ispitivani serum se razrijedi u omjeru 1:5 i postavi RSK prema općeprihvaćenoj metodi. S pozitivnom reakcijom uočava se kašnjenje hemolize, s negativnom reakcijom dolazi do hemolize eritrocita; intenzitet reakcije procjenjuje se prema tome od (+ + + +) do (-). Prvo razdoblje sifilisa je seronegativno i karakterizira ga negativna Wassermanova reakcija. U 50% pacijenata reakcija postaje pozitivna ne prije 2-3 tjedna nakon pojave tvrdog šankra. U drugom i trećem razdoblju sifilisa učestalost pozitivnih reakcija doseže 75-90%. Nakon tijeka liječenja, Wassermanova reakcija postaje negativna. Paralelno s Wassermanovom reakcijom provodi se reakcija mikroprecipitacije s nespecifičnim kardiolipinskim antigenom i ispitivanim inaktiviranim krvnim serumom ili plazmom. U jažicu na ploči od pleksiglasa (ili na obično staklo) nakapaju se 3 kapi seruma i doda se 1 kap kardiolipinskog antigena. Smjesa se temeljito miješa i rezultati se uzimaju u obzir. Pozitivna reakcija s krvnim serumom bolesnika sa sifilisom karakterizirana je stvaranjem i gubitkom pahuljica različitih veličina; s negativnim rezultatom opaža se jednolika opalescencija svjetla.
RIF – reakcija neizravne imunofluorescencije – specifična je u dijagnostici sifilisa. Kao antigen koristi se suspenzija treponema tkiva. Koristi se reakcija RIF_200. Serum bolesnika se inaktivira na isti način kao i kod Wassermannove reakcije, a razrijedi se u omjeru 1:200. Kapi antigena se nanose na stakalce, suše i fiksiraju 5 minuta u acetonu. Zatim se pacijentov serum nanosi na lijek, nakon 30 minuta se opere i osuši. Sljedeći korak je tretiranje preparata fluorescentnim serumom protiv humanih globulina. Preparat pregledajte fluorescentnim mikroskopom, bilježeći stupanj luminiscencije treponeme.
Specifična je i RIT reakcija imobilizacije treponema. Živa kultura treponema dobiva se uzgojem u testisu kunića. Testis se drobi u posebnom mediju u kojem treponeme ostaju pokretne. Reakcija se postavlja na sljedeći način: suspenzija tkivnih (mobilnih) treponema se sjedini u epruveti s ispitivanim serumom i doda se svježi komplement. U jednu se kontrolnu epruvetu umjesto ispitnog seruma dodaje serum zdrave osobe, a u drugu umjesto svježeg komplementa dodaje se inaktivirani - inaktivni komplement. Nakon držanja na 35 °C u anaerobnim uvjetima (anaerostat), iz svih epruveta priprema se “usitnjeni” kapasti pripravak te se u tamnom polju određuje broj pokretnih i nepokretnih treponema.
Liječenje: Penicilini, tetraciklini, lijekovi koji sadrže bizmut.

Sifilis je ciklički pojavljiva spolno prenosiva bolest kod ljudi uzrokovana spirochete pallidum; Stadij I očituje se tvrdim šankrom (fr. šankr- ulkus), II stadij - oštećenje stijenki krvnih žila i razni osipi, III - gume u raznim organima s oštećenjem živčanog sustava. Guma (lat. . gumena guma- guma) - kronični infiltrat u obliku čvora, sklon propadanju i ulceraciji. Sifilitička guma ( sin.: syphilitic granuloma, gummous syphilis, tertiary syphiloma) je bezbolna hemisferična guma koja je manifestacija tercijarnog aktivnog sifilisa. Patogen - Treponema pallidum- otkrili su 1905. F. Shaudin i E. Hoffmann.

T. pallidum- mikroorganizam spiralnog oblika, dimenzija 0,09 - 0,18 x 6 - 20 mikrona. Broj uvojaka spirale je od 8 do 12, uvojci su jednolični, nalaze se na istoj udaljenosti jedan od drugog oko 1 μm, visina se smanjuje prema krajevima. U elektronskom mikroskopu izgleda kao zmija ili kišna glista. Na oba kraja treponema nalaze se blefaroplasti s pričvršćenim flagelama, čiji broj varira od dva do nekoliko, oni čine aksijalnu nit upletenu oko protoplazmatskog cilindra spirohete. U nepovoljnim uvjetima može formirati ciste. U životinja se može pojaviti omotač mukopolisaharidne prirode sličan kapsuli.

Treponema se slabo boji anilinskim bojama, zbog čega se uzročnik sifilisa naziva blijeda spiroheta. Reducira srebrni nitrat u metalno srebro, koje se taloži na površini mikroba i čini ga vidljivim u tkivima: kada se boje po Morozovu, treponeme izgledaju smeđe ili gotovo crne. Kada se boje prema Romanovsky - Giemsa, dobivaju blijedo ružičastu boju.

Treponeme se obično množe poprečnom diobom, dok podijeljene stanice mogu neko vrijeme stati jedna na drugu. Vrijeme podjele je oko 30 sati.

Žive treponeme su vrlo pokretne, čine pokrete oko vlastite uzdužne osi, kao i fleksije, valovite i translacijske pokrete.

Do danas ne postoji takva metoda koja bi dosljedno mogla dobiti kulture treponema. Treponema pallidum, patogena za ljude, nikada nije uzgajana na umjetnim hranjivim podlogama, u pilećim embrijima ili u kulturama stanica. One vrste njihovih sojeva koje rastu u anaerobnim uvjetima vjerojatno su saprofitne spirohete, bliske uzročniku sifilisa. Njihova fiziologija ostaje malo proučena. Treponeme su kemoorganotrofi, nemaju katalazu i oksidazu, a mogu fermentirati ugljikohidrate. Rastu na vrlo bogatoj podlozi koja sadrži do 11 aminokiselina, vitamine, soli i serumski albumin. Najbolji način uzgoja patogenih spiroheta je zaraza zeca u testisu (eksperimentalni orhitis). Predloženo je da postoji T. pallidumživotni ciklus, uključujući, osim spiralnog oblika, zrnati stadij i stadij cistastih sferičnih tijela. Upravo granulirani oblici ovih mikroorganizama mogu proći kroz bakterijske filtre.

Antigeni treponema slabo su poznati. Utvrđeno je da treponema sadrži komplekse proteina, polisaharida i lipida. Antigenski sastav treponema kulture i tkiva toliko je blizak da se antigeni pripravljeni iz treponeme kulture mogu koristiti za CSC u dijagnozi sifilisa. U ljudskom tijelu treponeme stimuliraju proizvodnju protutijela koja uzrokuju imobilizaciju i smrt živih pokretnih treponema, vežu komplement u prisutnosti suspenzije T. pallidum ili srodne spirohete, a također se otkrivaju u neizravnom RIF-u.

Uzročnik sifilisa ne stvara egzotoksine. Blijede treponeme su relativno nestabilne na vanjske utjecaje. Brzo ugibaju sušenjem i na povišenim temperaturama (na 55 °C 15 minuta). U 0,3 - 0,5% otopini HCl trenutno gube pokretljivost; također ga brzo gube i umiru u prisutnosti preparata arsena, bizmuta i žive. U punoj krvi ili u serumu na 4 °C ostaju vitalni 24 sata, što treba uzeti u obzir kod transfuzije krvi.

Epidemiologija. Sifilis je tipična spolno prenosiva bolest. Izvor infekcije je bolesna osoba, obično zarazna 3 do 5 godina; bolesnici s kasnim oblicima sifilisa nisu zarazni. Infekcija u velikoj većini slučajeva nastaje raznim vrstama spolnih i obiteljskih kontakata, rijetko transplacentalno s bolesne majke na dijete (kongenitalni sifilis) ili kao profesionalna infekcija kontaktom s medicinskim osobljem. U prirodnim uvjetima samo osoba pati od sifilisa, u eksperimentu je moguće zaraziti majmune, hrčke i zečeve. Kod majmuna se na mjestu ubrizgavanja treponema razvija tvrdi šankr, kod kunića i hrčaka infekcija je asimptomatska.

Patogeneza i klinika. Razdoblje inkubacije za stečeni sifilis varira od 2 do 10 tjedana, obično 20 do 28 dana. Ulazna vrata infekcije najčešće su sluznice spolnih organa, rjeđe - usne šupljine, kao i oštećena koža. Na mjestu uvođenja, patogen se umnožava, formira se primarni sifilom (tvrdi šankr) - erozija ili ulkus sa zbijenom bazom. Nadalje, patogen ulazi u limfni sustav, razvija se limfangitis i regionalni limfadenitis. Ovo je tipična klinika primarnog sifilisa, koja traje 1,5 - 2 mjeseca. Tada ti znakovi nestaju. Sekundarno razdoblje sifilisa povezano je s generalizacijom procesa, kada se povećavaju mnogi limfni čvorovi, a na koži i sluznicama pojavljuju se osipi; mogu se uočiti oštećenja unutarnjih organa i živčanog sustava. Razlikuju se sekundarni svježi i sekundarni rekurentni sifilis. Sa svakim sljedećim relapsom, intenzitet osipa postaje manje izražen, a razdoblja između recidiva se povećavaju. Elementi osipa sadrže veliki broj živih treponema, tijekom tog razdoblja pacijent je najzarazniji. Trajanje sekundarnog sifilisa je do 4 godine ili više. Nadalje, bolest ulazi u dugo asimptomatsko razdoblje, nakon čega se nakon nekoliko godina razvija tercijarni sifilis. Istodobno se uočavaju velike organske lezije unutarnjih organa, kardiovaskularnog sustava, središnjeg živčanog sustava, kostiju, formiraju se gume, praćene raspadom tkiva i degenerativnim promjenama. Karakteristična klinička karakteristika sifilisa je odsutnost bilo kakvih subjektivnih pritužbi pacijenta (bol, svrbež, žarenje itd.).

Imunitet. Protiv sifilisa ne nastaje ni prirodna ni umjetna imunost; postoji samo infektivni imunitet, a dok on postoji, osoba praktički nije osjetljiva na novu infekciju. Infektivni imunitet razvija se 10-11 dana nakon pojave tvrdog šankra (imunitet šankra), tijekom tog razdoblja ili se ne opaža ponovna infekcija, ili novi šankr koji je nastao abortivno (superinfekcija). U budućnosti, sa superinfekcijom, priroda nastalih lezija odgovara stadiju bolesti u vrijeme ponovne infekcije. Superinfekcija se objašnjava privremenim slabljenjem ili "raspadom" infektivnog imuniteta. Od superinfekcije potrebno je razlikovati reinfekciju, tj. novu, ponovnu infekciju osobe koja je prethodno bolovala od sifilisa (izliječila se) i time izgubila infektivni imunitet. Opisani su slučajevi čak tri puta obolijevanja od sifilisa. Razdoblje inkubacije u takvih bolesnika je kraće, češće se razvijaju višestruki ulcerozni šankri s limfadenitisom, serološke reakcije postaju ranije pozitivne. U sekundarnom razdoblju papule na koži često su erodirane. To se objašnjava činjenicom da se kod sifilisa razvija reakcija preosjetljivosti odgođenog tipa, nakon liječenja, senzibilizirani limfociti ostaju u tijelu dugo vremena. Infektivna imunost je nesterilne prirode i posljedica je humoralnih čimbenika: u serumu bolesnika nalaze se imunoglobulini klasa G, A i M.

Laboratorijska dijagnostika. Za dijagnozu sifilisa optimalan je integrirani pristup, koji uključuje istodobnu upotrebu nekoliko metoda. Tradicionalno se dijele na izravne, koje omogućuju dokazivanje prisutnosti patogena u ispitivanom materijalu (infekcija životinja, razne vrste mikroskopija i molekularno-genetske metode za otkrivanje DNA). T. pallidum- PCR i DNA sondiranje), te neizravni - serološki testovi za otkrivanje protutijela. Zauzvrat, serološki testovi su predstavljeni ne-treponemalnim i treponemalnim.

Ispitni materijal za otkrivanje treponema izravnim metodama je iscjedak tvrdog šankra ili njegovog punktata, punktata limfnog čvora, struganja roseole, cerebrospinalne tekućine. Uzročnik se najbolje detektira u nativnom materijalu mikroskopijom u tamnom polju (vidi sliku 111.4) ili fazno-kontrastnom mikroskopijom, koja omogućuje promatranje različitih tipova kretanja živog patogena. Ako je već započeto liječenje antibioticima, uzročnik se ne može otkriti u patološkom materijalu. Po potrebi se provodi izravni (ili neizravni) RIF ili se preparat boji po Romanovsky-Giemsi. Ove metode se koriste samo za ranu dijagnozu sifilisa.

Serološki testovi mogu se koristiti u različitim stadijima bolesti, osim kod seronegativnog primarnog sifilisa. Obično se koristi kompleks seroloških reakcija. Do netreponemski testovi s vizualnim određivanjem rezultata uključuju: reakciju fiksacije komplementa (Wassermannova reakcija \u003d RSKk \u003d RW) s kardiolipinskim antigenom srčanog mišića bika (križno reagirajući antigen), reakciju mikroprecipitacije (MR ili RMP) - mikroreakcija s plazmom i inaktiviranim serumom; RPR - brzi plazma reagin test, i druge reakcije. Stručnjaci smatraju da je za masovni probir najbolje koristiti dva testa: RPR i RPHA ili ELISA jer je RPR osjetljiviji u primarnom sifilisu, RPHA u kasnijim stadijima bolesti, a ELISA u svim stadijima. Mikroskopski čitljivi netreponemski testovi uključuju VDRL test i USR test. Netreponemski testovi koriste se kao testovi probira, jer mogu dati lažno pozitivne rezultate. NA treponema testovi koriste antigene treponemskog podrijetla. Koriste se za potvrdu rezultata netreponemskih testova (lažno pozitivnih?) kod kliničke, epidemiološke i anamnestičke sumnje na sifilis, za dijagnostiku latentnih i kasnih oblika, za retrospektivnu dijagnozu. Treponemski testovi uključuju: RSKt (RSK s treponemskim antigenom), RIBT (ili RIT) - reakcija imobilizacije blijede treponeme, RIF (jedna od najboljih reakcija), RPHA, ELISA, imunobloting.

Mikrobiološka dijagnostika sifilisa

Praktični rad

Medicina i veterina

Ime "blijeda" treponema dobila je zbog niske sposobnosti bojenja. Postoje i drugi patogeni treponemi: T. pertenue - uzročnik frmbezije, T. carateum - uzročnik pinta, T. bejel - uzročnik kronične generalizirane spirohetoze (bejel). Navedeni uzročnici i nazvani ...

Metodičke upute studentima za praktičnu nastavu br.36.

Tema lekcije:

Cilj: Proučavanje metoda mikrobiološke dijagnostike, terapije i prevencije sifilisa.

Modul 2 . Specijalna, klinička i ekološka mikrobiologija.

Tema 36: Mikrobiološka dijagnostika sifilisa.

Relevantnost teme:

Uzročnik sifilisa

Sifilis je zarazna spolno prenosiva bolest koju uzrokuje Treponema pallidum, a karakterizirana je oštećenjem kože, unutarnjih organa, kostiju i živčanog sustava. Postoje stečeni i kongenitalni sifilis.

Taksonomija. Uzročnik sifilisa - blijeda treponema (Treponema pallidum) - otkrili su 1905. F. Shaudin i E. Hoffman; pripada obitelji Spirochaetaceae, odjel Gracilicutes.

Morfologija i tinktorijalna svojstva.Ime "blijeda" treponema dobila je zbog niske sposobnosti bojenja. Postoje i drugi patogeni treponemi: T. pertenue - uzročnik frmbezije, T. carateum - uzročnik pinta, T. bejel - uzročnik kronične generalizirane spirohetoze (bejel). Ovi patogeni i bolesti koje uzrokuju češći su u regijama s vrućom i vlažnom klimom. Blijeda treponema - tanka bakterija spiralnog oblika, duljine od 4 do 14 mikrona, s ujednačenim malim kovrčama (8-14 kovrča); zajedno sa spiralom može imati i druge oblike - u obliku cista, granula, L-formi; obojen prema Romanovsky-Giemsi u karakterističnu blijedoružičastu boju. Pokreti od spirale do fleksije.

Uzgoj.Blijeda treponema je obligatni anaerob, izuzetno izbirljiv prema hranjivim medijima. Treponema uzgojena na hranjivim podlogama - kulturalna spiroheta - razlikuje se od patogene niže virulentnosti, ali su im antigeni slični, što se koristi u serodijagnostici sifilisa.

Antigenska struktura.Blijedu treponemu karakteriziraju antigene asocijacije s drugim treponemama, kao i lipoidima životinjskih i ljudskih tkiva. U patogenu je identificirano nekoliko antigena, od kojih je jedan, lipoidni antigen, identičan lipoidnom ekstraktu goveđeg srca.

otpornost. U okolišu, blijeda treponema je slabo otporna; u 55 0 C umire unutar 15 minuta, osjetljiv na sušenje, svjetlost, soli žive, bizmut, arsen, penicilin. Na kućanskim predmetima ostaje zarazna dok se ne osuši; dobro očuvano u tkivu leša.

osjetljivost životinja.Eksperimentalno se može izazvati patološki proces u testisu i na koži kunića, te u koži čovjekolikih majmuna.

Epidemiologija. Izvor infekcije je bolesna osoba. Infekcija se javlja uglavnom spolnim kontaktom, rijetko putem kućanskih predmeta (čaše, četkice za zube, cigarete itd.) kontaminiranih iscjetkom bolesnika; moguća je infekcija poljupcima, mlijekom dojilje (kućni sifilis), nisu isključeni slučajevi infekcije tijekom transfuzije krvi od darivatelja sa sifilisom.

Patogeneza i klinička slika.Uzročnik sifilisa ulazi u tijelo kroz kožu ili sluznicu, širi se kroz organe i tkiva, uzrokujući njihovo oštećenje. Period inkubacije traje u prosjeku 3-4 tjedna. Nakon razdoblja inkubacije, sifilis se odvija ciklički u obliku primarnog, sekundarnog i tercijarnog razdoblja. Na mjestu unošenja uzročnika (na genitalijama, u usnoj šupljini itd.) Nastaje primarna lezija - tvrdi šankr - oštro ograničena brtva s čirom na površini. Sekundarno razdoblje sifilisa traje 3-4 godine, karakterizira ga osip, kršenje općeg stanja tijela. Tercijarno razdoblje karakterizira oštećenje kože, sluznice, unutarnjih organa, kostiju, živčanog sustava: pojavljuju se formacije koje su sklone propadanju, ulceracija.

Imunitet. Ne postoji urođeni imunitet na sifilis. Uz sifilis se razvija nesterilni imunitet; Nakon liječenja imunitet nije očuvan, pa su moguća ponavljanja bolesti.

Mikroskopija tamnog polja koristi se za otkrivanje blijede treponeme u iscjetku tvrdog šankra. Do kraja primarnog iu sekundarnom razdoblju, Wassermannove sergološke reakcije, Kahnove sedimentne reakcije, citokolični i drugi testovi koji otkrivaju antitijela na blijedu treponemu postaju pozitivni. U masovnim ispitivanjima koristi se selekcijska reakcija, odnosno mikroreakcija na staklu, s kapi krvi ili seruma i posebnim antigenom. Istraživački laboratoriji također koriste reakciju imobilizacije treponema i druge suvremene metode.

Shema mikrobioloških istraživanja sifilisa

Mikroskopski pregled Serodijagnostika

(kompleks seroloških reakcija):

Wassermanova reakcija

Reakcija imobilizacije treponema

Mikroskopiranje nativnog preparata RIF

U tamnom polju

ODGOVOR ODGOVOR

Liječenje. Najučinkovitiji antimikrobni agensi su antibiotici iz serije penicilina. Također se koriste pripravci bizmuta, joda i dr.

Prevencija. Ne postoji specifična profilaksa. Nespecifična prevencija sastoji se u poštivanju pravila higijene, kao iu provođenju kompleksa sanitarnih i higijenskih mjera javne prirode: evidentiranje pacijenata sa sifilisom, hospitalizacija svih pacijenata sa zaraznim oblicima, uključujući sve članove obitelji. oboljele osobe u pregledu, sistematski pregled rizičnih skupina, edukacija stanovništva i dr.

Specifični ciljevi:

Upoznati se s morfologijom uzročnika sifilisa.

Odredite značajke kliničkog tijeka sifilisa.

Definirajte pojmove "tkiva" i "kulturne" treponeme.

Interpretirati rezultate mikroskopskog pregleda.

Proučiti metode serološke dijagnoze sifilisa.

Upoznati se s metodama prevencije i specifične terapije.

Biti u mogućnosti:

  • Prikupiti materijal za istraživanje od pacijenata
  • Interpretirati rezultate mikroskopskog pregleda
  • Znati izvesti Wassermanovu reakciju

Teorijska pitanja:

1. Patogen.

  • Svojstva. otpornost.
  • Patogenost za ljude i životinje. Patogeni čimbenici, toksini.
  • Patogeneza bolesti u ljudi, imunitet.
  • Mikrobiološka dijagnostika.
  • Specifična prevencija i liječenje

2. Ciljevi postavljanja Wassermanove reakcije.

3. Dijagnostička vrijednost Wassermanove reakcije i sedimentnih reakcija.

4. Mehanizam Wassermanove reakcije.

5. Značajke imuniteta kod sifilisa.

Praktični zadaci koji se izvode u nastavi:

  • Mikroskopiranje demonstracijskih preparata.
  • Skiciranje pokaznih mikropreparata u protokolu.
  • Analiza sheme laboratorijske dijagnostike.
  • Formulacija protokola.

Književnost:

1. Korotyaev A.I., Babichev S.A., Medicinska mikrobiologija, imunologija i virologija / Udžbenik za medicinska sveučilišta, St. Petersburg: “Specijalna literatura”, 1998.- 592 str.

2. Timakov V.D., Levashev V.S., Borisov L.B. Mikrobiologija / Udžbenik.-2. izdanje, revidirano. i dodatni - M.: Medicina, 1983, - 512s.

3. Pjatkina K.D. Krivoshein Yu.S. Mikrobiologija s virologijom i imunologijom - Kijev: Vishcha škola, 1992. - 431s.

4. Medicinska mikrobiologija /Uredio V.I. Pokrovsky.- M.: GEOTAR-MED, 2001.- 768s.

5. Vodič kroz praktične vježbe iz mikrobiologije, imunologije i virologije. / Ed. M.P. Zykova.- M. "Medicina". 1977. 288s.

6. Cherkes F.K., Bogoyavlenskaya L.B., Belskan N.A. Mikrobiologija. / Ed. F.K. Cherkes M.: Medicina, 1986. 512s.

7. Bilješke s predavanja.

Dodatna literatura:

1. Makijarov K.A. Mikrobiologija, virologija i imunologija - Alma-Ata.: "Kazahstan", 1974. 372 str.

2. Titov M.V. Zarazne bolesti - K., 1995. 321s.

3. Shuvalova E.P. Zarazne bolesti.- M.: Medicina, 1990.- 559s.

4. BME, svezak 1, 2, 7.

5. Pavlovich S.A. Medicinska mikrobiologija u grafikonima: Zbornik. dodatak za liječnički in-tov. Mn.: Vysh. škola, 1986. 255str.

Kratke smjernice za rad na praktičnoj nastavi.

Na početku sata provjerava se razina pripremljenosti učenika za nastavni sat.

  • Samostalni rad.
  • formulacija Wassermanove reakcije.
  • Računanje Wassermanove reakcije i bilježenje u protokol.
  • Analiza i upisivanje shema laboratorijske dijagnostike u protokol.

Sastav samostalnog rada uključuje i mikroskopiranje demonstracijskih preparata i njihovo skiciranje u protokolu nastavnog sata.

Na kraju sata provodi se probna kontrola i analiza konačnih rezultata samostalnog rada svakog studenta.

Tehnološka karta praktične nastave

Br. p \ str

Faze

Vrijeme u min.

Načini učenja

Oprema

Mjesto

Provjera i ispravljanje izlazne razine pripreme za nastavu

20

Ispitne stavke izlazne razine

Stolovi.

Predmetni testovi.

radna soba

Samostalni rad

35

Grafikon

logična struktura

Zbirka pokaznih pripravaka, bioloških pripravaka.

Samokontrola i korekcija naučenog gradiva

15

Ciljani programi obuke

Test kontrola

15

Testovi

Analiza rezultata rada

Algoritam rada u laboratoriju:

Proučavanje sheme laboratorijske dijagnoze sifilisa.

Mikroskopiranje pripremljenih razmaza kulture i treponema tkiva.

Upoznavanje s pravilima uzimanja materijala od bolesnika za mikroskopiranje ispitivanog materijala.

Mikroskopiranje i analiza demonstracijskih preparata.

Pripreme za crtanje u protokolu.

Sheme snimanja laboratorijske dijagnostike u protokol.

Formulacija protokola.

Kontrola testa i analiza rezultata samostalnog rada svakog studenta.


Ciljani zadaci učenja:

1. U ATC je primljen bolesnik s dijagnozom "primarni sifilis". Koja se od navedenih dijagnostičkih metoda koristi u ovoj fazi bolesti?

A . mikroskopija tamnog polja;

C. RP u gelu

D. RA

E . neizravna imunofluorescencija

2. U pacijenta odjela maksilofacijalne kirurgije, kod postavljanja Wassermanove reakcije, pokazala se negativnom. Koji od sljedećih rezultata određuje fenomen negativnog RSK?

A . aglutinacijom eritrocita;

B . prisutnošću sedimenta eritrocita;

C . promjenom boje tekućine;

D . formiranjem filma

E . prisustvom hemolize u epruvetama.

3. Pregledom bolesnika s CVA utvrđeni su papularno-rozeolozni osipi na trupu i ekstremitetima te povećani limfni čvorovi. Preliminarna dijagnoza sifilisa. Kojom se metodom laboratorijske dijagnostike može potvrditi ova dijagnoza?

A. alergičan;

b. biološki;

C . bakteriološki;

D . bakterioskopski;

E. ELISA

4. Tijekom prijema, stomatolog je pronašao tvrdi šankr u usnoj šupljini pacijenta. Koje od navedenih metoda laboratorijske dijagnostike mogu poslužiti za postavljanje dijagnoze?

A . reakcija imobilizacije treponema

B . Wassermannova reakcija

C. Kahnova reakcija

D. RA

E . bakterioskopski

5. Žena je došla u trudnoću u 8. tjednu trudnoće. Prilikom pregleda izvađena joj je krv radi provjere prisutnosti specifičnih protutijela na treponemu. Kojim se od navedenih seroloških testova mogu dokazati antitijela na treponemu?

A. Wrightova reakcija

B . Wassermannova reakcija

C. Vidalova reakcija

D . Bordet-Gangu reakcija

E. RTGA.

6. Za potvrdu dijagnoze sifilisa laborant je napravio serološki test, u kojem je upotrijebio bolesnikov krvni serum, kardiolipidni antigen, komplement i indikatorski sustav. Kako se zove navedena reakcija?

A . reakcija imobilizacije treponema;

B . Wassermanova reakcija;

C. Kahnova reakcija

D. RP

E . reakcija imunofluorescencije.

7. Prilikom provođenja serološkog testa za otkrivanje protutijela na uzročnika sifilisa u krvnom serumu bolesnika, treponeme su inkubirane sa serumom bolesnika u anaerobnim uvjetima, nakon čega su bakterije izgubile pokretljivost. Kakav je bio odgovor i što to znači?

A . Wassermanova reakcija, pacijent ima sifilis;

B .Wassermanova reakcija, bolesnik ima period inkubacije;

C . reakcija imobilizacije treponema, pacijent ima sifilis;

D . reakcija neizravne imunofluorescencije, pacijent ima sifilis;

E . reakcija imobilizacije treponeme, pacijent je nekada imao sifilis.

8. Za serološku dijagnozu sifilisa pomoću Wassermanove reakcije laborant je pripremio sljedeće reagense: kardiolipidni antigen, izotonična otopina natrijevog klorida, hemolitički sustav. Koja je druga komponenta potrebna za izvođenje ove reakcije?

A . žive treponeme;

B . ovčji eritrociti;

C. upotpuniti, dopuna;

D . antiglobulinski serum;

E . dijagnostički precipitirajući serum.

9. U mikropreparatu pripremljenom iz punktata pacijentovih limfnih čvorova, obojenih prema Romanovsky-Giemsi, liječnik je otkrio tanke mikroorganizme s 12-14 jednolikih kovrča blijedoružičaste boje. O uzročniku koje zarazne bolesti u ovom slučaju možemo govoriti?

A . povratna groznica;

b. leptospiroza;

C. lišmanijaza

D. sifilis

E. tripanosomijaza.

10. Pacijentu sa sumnjom na primarni sifilis uzet je struganje oralne sluznice. Mikroskopski pregled razmaza obojenog po metodi Romanovsky-Giemsa otkrio je zamršene ljubičaste bakterije. Koji je od sljedećih zaključaka točan?

A . pacijentu je dijagnosticirana T. pallidum;

B . Pacijent ima atipični oblik T. pallidum;

C . pacijent ima nepatogene treponeme;

D . odabrana je pogrešna metoda bojenja;

E. -

11. Kliničar je posumnjao na primarni sifilis kod pacijenta. Koji istraživački materijal treba uzeti za potvrdu dijagnoze?

A . tkivna tekućina iz tvrdog šankra i punktata limfnih čvorova;

B . struganje od kožnih osipa;

C. liker;

D. sluz iz nosa

E. slina.

12. Uzeta je krv pacijentu sa sumnjom na sekundarni sifilis. Koju dijagnostičku metodu treba koristiti za potvrdu dijagnoze?

A . Vidalova reakcija;

B . alergijski test;

D . Bordet-Gangu reakcija

E . bakteriološka metoda

C . reakcija neizravne imunofluorescencije.


Kao i druga djela koja bi vas mogla zanimati

68128. Riječi u vírshí - ja raj u duši 78,5 KB
Meta: uništiti akademska znanja o teoriji književnosti i idejno-umjetničkoj analizi pjesničkog djela radi lakšeg čitanja na različite načine; figurativno razvijati pjesničke misli; okrenuti ljubav prema umjetničkoj riječi i prema zavičajnoj prirodi. Ja ću pročitati poetske redove, a vi ste krivi za podnošenje ...
68129. Intelektualna igra "Književna vesselka" Živiš u srcima ljudi, Taras! 43,5 KB
Ševčenka razviti logično razmišljanje različitim čitanjem, naučiti razumjeti Ševčenkove riječi i razviti svoju kreativnost. Taras Shevchenko Taras Tse buntovno proročanstvo ime je poznato ne samo Ukrajincima, ali u cijelom svijetu. Shevchenko tse krinitsa z zhelelny water yak vtamovu spiritual spraga to the people.
68130. Upoznavanje sa zemljom Logika 28,5 KB
Danas se djeca liječe po nezamislivo skupoj cijeni. Djeca do škole mogu ići najkraćim putem, ali godinama mogu lutati kroz razne labirinte. Djeca oponašaju ulazak u autobus i vožnju. Osovina tvrtke jaka Djeca Borya Petryk Yurko Vira Stas Ira.
68131. Analogija. Dobrir malyunkiv po analogiji 263,5 KB
Vrsta lekcije: lekcija naučenog uma i početnika Obladacija: geometrijske figure i mali objekti Grim Photographeru; índivídualní skupovi geometrijskih figura graloto malunki z sledovnístyu. Rukama pospremam figure. Sve figure različitih boja A sada neka vam se oči dive...
68132. Putujte preko oceana logičkih zadataka 27,5 KB
Meta: Poznavati djecu s različitim shvaćanjima; razvijati misli, jezik, pamćenje, oprez; vikhovuvat smilivist, ríshuchíst. Voditelj sata Obavijestite ih i označite sat. Danas smo virushaemo na putu oko svijeta skuplje na brodu. Provjeravaju nas za puno dobrih stvari. Lyudina je promišljeni idiot. Misli se izražavaju riječima.
68133. Sumísní i nezumísní razumiju. Zahtjev za ponavljanje 84,5 KB
Meta: usustaviti znanje učenja o razumijevanju zbrojeva i nedosljednosti razumijevanja, temeljito razumjeti znanje o logičkom redu razvoja logičkih misli, poštivanje pamćenja uma; probuditi ljubav prema stvorenjima, probuditi svjesno zanimanje za sva živa bića, oblikovati samoosvjetljenje...
68136. MODERNIZACIJA SVEGA ZA RAZUMIJEVANJE UKRAJINE: MEHANIZMI INSTITUCIONALNE REGULACIJE 188 KB
Djelotvornost i učinkovitost funkcioniranja sustava zdravstvenog obrazovanja u Ukrajini na početku XXI stoljeća može biti siguran samo na jesen, ako ne zvuči kao oživljavanje Timchasovih ciljeva, generiranih gospodarskom i političkom nestabilnošću , demografija, demografija.

T. pallidum subspecies pallidum - spiralna bakterija veličine 6-14x0,2-0,3 mikrona; u kulturama može biti velik. Kovrče spirale su jednake, ali po visini može ih biti do 14. Mogu oblikovati L-oblik.

Osnovni, temeljni kako se sifilis širi- poprečna podjela. Uzročnik sifilisa nije stabilan u vanjskoj sredini i umire kada se osuši, ali na hladnom ostaje do 50 dana. Grijanje na temperaturi od 40 ° C tijekom jednog sata dovodi do gubitka patogenih svojstava; na 48 °C bakterije umiru unutar 10 min.

Uzročnik sifilisa slabo obojen anilinskim bojama (odatle naziv "blijeda spiroheta"). bakterije sifilisa reducirajte srebrni nitrat u metalno srebro, što tkaninama daje crnu ili tamnosmeđu boju.

U domaćoj praksi široko je rasprostranjena metoda posrebrivanja prema Morozovu. Prema Romanovsky-Giemsa postaje ružičasta, a nepatogena treponema- u ljubičastoj ili plavoj boji. Također se koristi Burri negativno bojenje.

Kulturna svojstva sifilisa. Kultura uzročnika sifilisa

Blijeda spiroheta zahtjevan za uvjete uzgoja, slabo raste na umjetnim medijima; metode za stabilnu proizvodnju kultura još nisu dostupne.

Kod nas najveći broj sojevi sifilisa identificirali su kazanski mikrobiolozi V.M. Aristovski i P.P. Geltzer.

Ovi "Kazani" sojevi sifilisa zajedno sa sojem Reiter, koriste se za proizvodnju Ag za serodijagnostiku. Uz dugogodišnji uzgoj bakterije sifilisa prilagođavaju se jednostavnijim okruženjima (primjerice Kitta-Tarozzi) i gube svoja patogena svojstva.

Kolonije sifilisa mali, pojavljuju se 3-5. dana uzgoja.

Sadržaj članka

Blijeda treponema

Morfologija i fiziologija

T.pallidum ima spiralni oblik, protoplastični cilindar, koji je uvijen u 8-12 vijuga. Iz krajeva stanice izlaze 3 periplazmatske bičeve. Blijeda treponema ne percipira dobro anilinske boje, pa se boji bojom Romanovsky-Giemsa. Međutim, najučinkovitija metoda je proučavanje u tamnom polju ili fazno-kontrastnom mikroskopu. Mikroaerofil. Ne raste na umjetnim hranjivim podlogama. T. pallidum se uzgaja u tkivu testisa kunića, gdje se dobro razmnožava i u potpunosti zadržava svoja svojstva, uzrokujući orhitis kod životinje. Antigeni. Antigenska struktura T. pallidum je složena. Povezan je s proteinima vanjske membrane, lipoproteinima. Potonji su unakrsno reaktivni antigeni zajednički ljudima i govedu. Koriste se kao antigen u Wassermannovom testu za serodijagnostiku sifilisa.

Patogenost i patogeneza

Čimbenici virulencije Treponema pallidum uključuju proteine ​​vanjske membrane i LPS, koji pokazuju svoja toksična svojstva nakon otpuštanja iz stanice. U isto vrijeme, očito, sposobnost treponema da formira zasebne fragmente tijekom podjele, prodirući duboko u tkiva, također se može pripisati faktorima virulencije. Postoje tri faze u patogenezi sifilisa. U primarnom sifilisu uočava se formiranje primarnog žarišta - tvrdog šankra na mjestu ulaznih vrata infekcije, s naknadnim prodorom u regionalne limfne čvorove, gdje se patogen umnožava i nakuplja. Primarni sifilis traje oko 6 tjedana. Drugi stupanj karakterizira generalizacija infekcije, popraćena prodorom i cirkulacijom uzročnika u krvi, što je popraćeno osipom na koži. Trajanje sekundarnog sifilisa u neliječenih bolesnika kreće se od 1-2 godine. U trećoj fazi nalaze se infektivni granulomi (desni sklone karijesu), lokalizirani u unutarnjim organima i tkivima. To razdoblje u neliječenih bolesnika traje nekoliko godina i završava oštećenjem središnjeg živčanog sustava (progresivna paraliza) ili leđne moždine (tasca dorsalis).

Imunitet

Kod sifilisa postoji humoralni i stanični imunološki odgovor. Dobivena antitijela nemaju zaštitna svojstva. Stanični imunološki odgovor povezan je s fiksacijom patogena i stvaranjem granuloma. Međutim, ne dolazi do uklanjanja treponema iz tijela. Istodobno, nepovoljni okolišni uvjeti potiču stvaranje cista treponemama, koje su lokalizirane u stijenci krvnih žila. Vjeruje se da to ukazuje na prijelaz bolesti u fazu remisije. Zajedno s cistama, treponeme formiraju L-oblike. Kod sifilisa nastaje HRT, koji se može otkriti kožno-alergijskim testom s suspenzijom mrtvih treponema. Vjeruje se da je manifestacija tercijarnog razdoblja sifilisa povezana s HNL-om.

Ekologija i epidemiologija

Sifilis je tipična antroponozna infekcija. Obolijevaju samo ljudi koji su u prirodi rezervoar zaraze. Prijenos infekcije događa se spolnim putem i mnogo rjeđe - kroz donje rublje i druge predmete. U vanjskom okruženju (zrak), treponema brzo umire.

Sifilis i druge treponematoze

Sifilis je kronična zarazna spolna bolest osobe, ima ciklički progresivni tijek, utječe na kožu, sluznice, unutarnje organe i živčani sustav. Uzročnik bolesti je Treponema pallidum.Postoje tri glavna razdoblja u razvoju sifilisa, čije laboratorijske dijagnostičke metode imaju svoje karakteristike. U ranom razdoblju bolesti, materijal za laboratorijsku dijagnozu je izolacija iz tvrdog šankra, punktata iz limfnih čvorova, strugotina iz roseole, sifilisa i slično. U sekundarnom i tercijarnom razdoblju ispituje se krvni serum i cerebrospinalna tekućina.Budući da je izolacija čistih kultura treponema u konvencionalnim bakteriološkim laboratorijima nemoguća, u primarnom razdoblju bolesti (rjeđe kasnije), bakterioskopska dijagnostička metoda. se izvodi. Počevši od sekundarnog razdoblja koriste se uglavnom serološke metode.

Bakterioskopsko istraživanje

Prije uzimanja patološkog materijala, najprije obrišite sifilitički ulkus vatom kako biste uklonili masni plak i kontaminirajuću mikrofloru. Zatim se dno tvrdog šankra iritira skalpelom ili metalnom lopaticom ili se ulkus snažno stisne sa strane prstima u gumenoj rukavici da iscuri eksudat iz rane. Uz malu količinu bistre tekućine, može se dodati kapi 0,85% otopine natrijevog klorida. Ako je nemoguće uzeti materijal s dna šankra (fimoza, ožiljci od ulkusa i sl.) punktiraju se regionalni limfni čvorovi.tamno vidno polje (bolje!), ili faznokontrastnim ili anoptralnim mikroskopom. Blijeda treponema u tamnom vidnom polju izgleda kao blago sjajna tanka nježna spirala sa strmim jednoličnim zaobljenim primarnim kovrčama. Pokreti su glatki, pa se savija pod kutom. Ali oscilacije poput njihala, koje su posebno karakteristične za njega. Uzročnika sifilisa potrebno je razlikovati od Treponema refringens (kolonizira vanjske spolne organe), koja je deblja, grublja, nepravilnih velikih uvojaka i ima aktivne nestalne pokrete, ali se ne savija. Treponeme fusosp-irohetozne simbioze odlikuju se tankim šarama, blagim uvojcima i neredovitim kretanjem.Pri dijagnosticiranju oralnog sifilisa blijede treponeme treba razlikovati i od dentalnih treponema, osobito T. dentium, a također i od T. buccalis. Prvi od njih općenito je teško razlikovati od sifilitičkog. Istina, kraći je, ima 4-8 oštrih kovrča, nema kretanja njihala. T. buccalis je deblja, ima grube početne uvojke i nepravilno kretanje.U slučaju sumnje treba imati na umu da se sve saprofitne treponeme, za razliku od blijedih, dobro boje anilinskim bojama. Oni ne prodiru u limfne čvorove, pa je proučavanje punkcija od velike dijagnostičke vrijednosti. Otkrivanje tipičnih treponema u punktatu limfnih čvorova nedvojbeno potvrđuje dijagnozu sifilisa. Njegove prednosti su u tome što se materijal brzo pregledava, a morfologija treponema u živom stanju je najkarakterističnija. Brisevi tinte prema metodi Burri više se ne koriste.Ako nije moguće provesti studiju u tamnom vidnom polju, mogu se koristiti različite metode bojenja. Blijeda treponema ne percipira dobro anilinske boje. Od mnogih predloženih metoda bojenja, najbolji rezultati se postižu uporabom boje Romanovkim-Giemsa. Napravljeni razmazi se fiksiraju metilnim alkoholom ili Nikiforovljevom smjesom. Rezultati bistrine se postižu kada se Romanovsky-Giemsa boja ulije u preparat. Da bi se to postiglo, komadići šibica stavljaju se u Petrijevu zdjelicu, na njih se stavlja predmetno staklo s mrljom prema dolje i boja se ulijeva dok ne smoči mrlju. Vrijeme bojenja se udvostručuje. Pod mikroskopom, blijede treponeme imaju blijedo ružičastu boju, dok druge vrste treponema postaju plave ili plavo-ljubičaste.Može se koristiti i Morozovljeva metoda posrebrenja. Treponeme u potpunosti zadržavaju svoje morfološke značajke i pod mikroskopom izgledaju smeđe ili gotovo crne. Ali posrebreni pripravci ne čuvaju se dugo. Nedavno se metode bojenja treponema rijetko koriste.Ako se sifilis liječi kemoterapijskim lijekovima, gotovo je nemoguće identificirati uzročnika u patološkim materijalima čak i uz pomoć tamnog vidnog polja. Nakon primitka negativne analize, mora se ponoviti.

Serološka dijagnostika sifilisa

Pri provođenju seroloških reakcija sada se koriste sljedeće metode istraživanja objedinjene u Ukrajini: reakcija fiksacije komplementa (RCC), imunofluorescencija (RIF), imobilizacija treponema (PIT), mikroreakcija precipitacije (MPR) i enzimski imunotest (ELISA). Dugi niz godina, glavnom i najčešćom reakcijom smatrala se reakcija vezanja komplementa ili Wassermanova reakcija (RV, RW). Za njezino postavljanje koristi se krvni serum bolesnika sa sifilisom i cerebrospinalna tekućina u slučaju oštećenja živčanog sustava.Metoda postavljanja Wassermanove reakcije ne razlikuje se od tehnike provođenja RSC. Jedina je razlika u tome što se za RO koristi ne samo specifični treponem, već i nespecifični kardiolipinski antigen.Uzme se 5-10 ml krvi iz kubitalne vene na prazan želudac ili ne prije 6 sati nakon obroka. Krv se ne može uzimati od pacijenata s povišenom tjelesnom temperaturom, nakon konzumiranja alkohola i masne hrane, od trudnica 10 dana prije porođaja i trudnica. Serum ekstrahiran iz krvi zagrijava se na temperaturi od 56 °C 30 minuta kako bi se inaktivirao vlastiti komplement. RO se obavezno postavlja s dva antigena: specifičnim i nespecifičnim Specifični ultrazvučni treponemski antigen priprema se iz kultura blijedih treponema (Reiterov soj) uzgojenih u epruvetama i izloženih ultrazvuku. Proizvodi se u obliku liofiliziranog praha. Nespecifični kardiolipinski antigen priprema se alkoholnom ekstrakcijom lipida iz goveđeg srca i pročišćavanjem od balastnih smjesa, pakiranih u ampule od 2 ml. Za uvođenje antigena u RO, on se titrira prema ovim uputama. Neposredno prije postavljanja RV provodi se titracija komplementa i hemolitičkog seruma prema istoj shemi kao u RSK. Wassermanova reakcija se postavlja i kvalitativno i kvantitativno. Kvalitativna reakcija provodi se u tri epruvete s dva antigena prema uobičajenoj shemi.Rezultati reakcije ocjenjuju se prema sustavu 4 plus: pozitivna reakcija - kada postoji potpuna ili značajna odgoda hemolize (4 +, 3 +); slabo pozitivna reakcija - djelomična odgoda hemolize (2 +); dvojbena reakcija - blago kašnjenje hemolize (1 +). U slučaju potpune hemolize RO se smatra negativnim.Svaki serum koji je dao pozitivnu kvalitativnu reakciju također se mora istražiti kvantitativnom metodom sa svojim sekvencijalnim razrjeđenjem od 1:10 do 1:640.koji dolazi kompletan (4+) ili bedž. (3 +) odgoda hemolize. Kvantitativna metoda postavljanja RO važna je za procjenu učinkovitosti liječenja sifilisa. Brzo smanjenje titra reagina ukazuje na uspješnu terapiju. Ako se titar seruma ne smanjuje dulje vrijeme, to ukazuje na nedostatak učinkovitosti korištenih lijekova i potrebu za promjenom taktike liječenja.S pylori za seronegativni primarni sifilis ili latentni, tercijarni ili kongenitalni, preporuča se staviti Wassermanova reakcija na hladnom prema istoj shemi. Kod sumnje na neurosifilis izvodi se RO s cerebrospinalnom tekućinom koja je inaktivirana jer ne sadrži vlastiti komplement. U reakciju se uvodi nerazrijeđena cerebrospinalna tekućina i u razrjeđenjima od 1: 2 i 1: 5. Wassermanova reakcija postaje pozitivna 2-3 tjedna nakon pojave tvrdog šankra. U sekundarnom sifilisu, pozitivan je u 100% slučajeva, u tercijarnom - u 75%.Osim toga, u kompleksu seroloških reakcija (CSR), reakcija mikroprecipitacije s krvnom plazmom ili inaktiviranim serumom koristi se kao test probira.

Mikroreakcija taloženja

Precipitacijska mikroreakcija stavljena s kardiolipinskim antigenom. Princip reakcije je da kada se krvnoj plazmi ili serumu oboljelog od sifilisa doda emulzija kardiolipinskog antigena, nastaje precipitat (kompleks antigen-antitijelo) koji se taloži u obliku bijelih ljuskica. Oni koriste ovu tehniku: tri kapi plazme (ili inaktiviranog seruma) pipetiraju se u jažicu ploče, zatim se doda jedna kap emulzije standardnog kardiolipinskog antigena. Reakcijske komponente se miješaju mućkanjem ploče 5 minuta, nakon čega se dodaju tri kapi 0,9% otopine natrijevog klorida i ostavi na sobnoj temperaturi još 5 minuta. Obavezna kontrola sa slabo pozitivnim krvnim serumom. Rezultati se procjenjuju golim okom preko umjetnog izvora svjetlosti. Kada se u jažici pojave velike pahuljice, reakcija se smatra pozitivnom (4 +, 3 +), srednje i male - kao slabo pozitivne (2 +, 1 +). Ako je nalaz negativan, ne dolazi do stvaranja precipitata.Mikroreakcija precipitacije može se provesti i kvantitativnom metodom za određivanje titra precipitirajućih protutijela i na temelju toga procijeniti učinkovitost liječenja. Viši MRP titri se postižu s plazmom nego sa serumom. U inozemstvu, analog MRP-a sa serumom bolesnika je VDRL (Veneral disease research laboratoiy), a s plazmom - RPR (Rapid plasma reagin).

Reakcija imunofluorescencije (RIF)

Skupina specifičnih reakcija koje se široko koriste za serološku dijagnostiku sifilisa uključuje reakciju neizravne imunofluorescencije. Kao antigen koristi suspenziju patogene blijede treponeme soja Nichols iz parenhima testisa kunića 7. dana nakon infekcije. Reakcija se postavlja u dvije modifikacije: RIF-ABS i RIF-200. U prvoj varijanti koristi se sorbent antitijela (sonicat) - ultrazvučni treponemalni antigen za CSC. Proizvodi ga Kaunas poduzeće za proizvodnju bakterijskih pripravaka (Litva). Kod opcije RIF-200 pacijentov serum se razrijedi 200 puta kako bi se uklonio učinak grupnih antitreponemalnih antitijela.RIF-ABS se postavlja na tanka, dobro odmašćena stakalca. Na stražnjoj strani naočala staklorezačem je označeno 10 krugova promjera 0,7 cm.U krugu se na staklo nanosi antigen - suspenzija blijedih treponema - u tolikoj količini da ima 50- Njih 60 u vidnom polju. Razmazi se suše na zraku, fiksiraju na plamenu i 10 min u acetonu. U posebnu epruvetu dodajte 0,2 ml sorbenta (sonikata) i 0,5 ml krvnog seruma pacijenta, dobro promiješajte. Smjesa se nanosi na razmaz (antigen) tako da ga ravnomjerno prekrije, inkubira 30 minuta u vlažnoj komori na 3-7 °C (faza II reakcije). Nakon toga razmaz se ispere fosfatnim puferom, osuši i na njega se nanese antišobulinski fluorescentni serum 30 minuta, stavi u vlažnu komoru na 37°C (faza II). Lijek se ponovno ispere fosfatnim puferom, osuši i pregleda pod fluorescentnim mikroskopom.Pri pozitivnoj reakciji blijede treponeme emitiraju zlatnozelenu svjetlost, kod negativne ne svijetle.200 puta fosfatnim puferom. Pri provođenju reakcije imunofluorescencije s cerebrospinalnom tekućinom bolesnika sa sifilisom živčanog sustava koriste se RIF-c i RIF-10, tj. tekućina se uvodi u reakciju neinaktivirana i razrijeđena ili razrijeđena 1:10.

Test imobilizacije treponeme pallidum (PIT)

Reakcija imobilizacije blijedih treponema (PIT) temelji se na fenomenu gubitka njihove pokretljivosti u prisutnosti imobilizirajućih antitreponemskih protutijela pacijentovog seruma i komplementa u uvjetima anaerobioze. Kao antigen u reakciji koristi se suspenzija blijedih treponema iz tkiva testisa kunića zaraženog laboratorijskim sojem Nichols. Suspenzija se razrijedi sterilnom 0,85%-tnom otopinom natrijeva klorida tako da u vidnom polju bude 10-15 spiroheta.Za provođenje reakcije uzme se 0,05 ml krvnog seruma bolesnika, 0,35 ml antigena i 0,15 ml komplementa. pomiješano u sterilnoj epruveti. Iskustvo je popraćeno kontrolama seruma, antigena i komplementa. Epruvete se stavljaju u anaerostat, stvaraju se anaerobni uvjeti i drže u termostatu 18-20 sati na temperaturi od 35 ° C. Zatim se iz svake epruvete pripremaju kapi tlaka, izbroji se najmanje 25 treponema i koliko ih ih je pokretnih, a koliko nepokretnih. Postotak specifične imobilizacije blijedih treponema izračunava se po formuli: x = (A-B) / B * 100, gdje je X postotak imobilizacije, A je broj mobilnih treponema u kontrolnoj epruveti, B je broj pokretnih treponema. treponeme u epruveti. Reakcija se smatra pozitivnom kada je postotak imobilizacije 50 ili više, slabo pozitivan - od 30 do 50, sumnjiv - od 20 do 30 i negativan - od 0 do 20. Ovčinnikov. Anaerobni uvjeti pokusa stvaraju se stavljanjem reakcijske smjese (serum, antigen, komplement) u melanžere čija se oba kraja zatvaraju gumenim prstenom. Melangerinska tehnika omogućuje odricanje od složene opreme i aparature za stvaranje anaerobioze, ali daje rezultate koji nisu dostupni klasičnoj mikroaneurostatskoj tehnici.Reakcije imobilizacije treponema i imunofluorescencije smatraju se najspecifičnijim u serološkoj dijagnostici sifilisa. Ipak, PIT se, usprkos svojoj specifičnosti, ne preporučuje za primjenu u širokoj praksi zbog složenosti postavljanja.

Enzimski imunološki test (ELISA)

Imunoenzimski test (ELISA) provodi se s kadriolipinskim antigenom (nespecifična, selekcijska reakcija) i treponemom (specifična reakcija), čime se potvrđuje dijagnoza sifilisa. testni serum. Ako sadrži antitijela protiv treponema, stvara se kompleks antigen-antitijelo (faza II). Nakon ispiranja nevezanih nespecifičnih protutijela, u jažice se dodaje antiglobulinski serum konjugiran s enzimom (najčešće s peroksidazom hrena). Konjugat je čvrsto vezan za kompleks antigen-protutijelo (faza II).Nakon ispiranja nevezanog konjugata u jažice se dodaje supstrat za bojenje OFD - ortofenilendiamin (faza III). Reakcija peroksidaze se zaustavlja dodavanjem sumporne kiseline. Za kontrolu stavljaju iste uzorke s pozitivnim i očito negativnim serumima.Računovodstvo rezultata analize provodi se pomoću fotometra koji određuje optičku gustoću u dvovalnom načinu (492 nm i 620 nm). Osim fotometra, za postavljanje reakcije na enzimska protutijela potrebne su jednokanalne i osmokanalne automatske pipete s polipropilenskim vrhom i odgovarajući setovi dijagnostičkih test sustava.ELISA metoda ima široku primjenu u serološkoj dijagnostici sifilisa. Jednako je učinkovit za otkrivanje bolesti u razdoblju inkubacije (1-2 tjedna nakon infekcije), s kliničkim manifestacijama bolesti i njezinim latentnim oblicima. Vrlo često se ELISA koristi u probirnim pretragama stanovništva, posebice u transfuzijskim stanicama, au laboratorijskoj praksi ponekad se koriste i reakcija imunološke adhezije (RIP) i reakcija neizravne hemaglutinacije (RNHA). Prvi od njih temelji se na činjenici da patogene treponeme testisa soja Nichols, kada se pomiješaju sa serumom bolesnika u prisutnosti komplementa i ljudskih eritrocita, prianjaju na površinu crvenih krvnih stanica. RNHA se široko koristi za dijagnosticiranje sifilisa zbog svoje metodološke jednostavnosti. Postaje pozitivan već tri tjedna nakon infekcije. Pozitivan rezultat reakcije ostaje godinama nakon oporavka. Analog ove reakcije u inozemstvu je TRHA (treponema pallidum hemoagglutination).
KATEGORIJE

POPULARNI ČLANCI

2022 "kingad.ru" - ultrazvučni pregled ljudskih organa