Analiza za sifilis ELISA - dekodiranje analize. Norma i odstupanja

U vezi s razvojem staničnih tehnologija, molekularne biologije, genetike, fizike, kemije i niza drugih visokotehnoloških disciplina, nove visokoprecizne i visokotehnološke metode uvode se u svakodnevnu praksu. Ovi interdisciplinarni trendovi utječu kako na područje medicinskog znanja tako i na srodna područja bioloških i biokemijskih problema. Tijekom posljednjih deset godina, metoda kliničke laboratorijske dijagnostike pod nazivom enzimski imunotest postala je široko rasprostranjena i uvedena u masovnu praksu.

Općenito, tehnologije imunoloških enzimskih i radioloških reakcija naširoko su korištene u tipizaciji stanica, staničnih kultura i raznih tkiva od ranih 1980-ih. Međutim, te su metode bile vrlo naporne, neunificirane, nestandardizirane, što je onemogućilo njihovu masovnu upotrebu u medicinske i dijagnostičke svrhe. Takve su metode koristili samo uski, visoko specijalizirani laboratoriji koji zahtijevaju veliko znanje.

Međutim, razvojem tehnologije, mikrotehnologije i proizvodnje različitih biopolimernih materijala, postalo je moguće proizvoditi gotove komplete za enzimske imunotestove koji mogu koristiti laboratoriji općih medicinskih ustanova. ELISA se široko koristi za dijagnosticiranje svih vrsta infekcija (klamidija, sifilis, citomegalovirus, toksoplazmoza, herpes itd.), kako akutnih tako i kroničnih, kao i latentnih oblika koji se javljaju bez kliničkih simptoma.Ova se metoda također koristi za kontrolu kroničnih bolesti . Pokušajmo shvatiti kakva je to metoda i koja su načela u pozadini?

Komponente enzimskog imunološkog testa - imunološka reakcija i enzimska reakcija

Enzimski imunološki test, kao što naziv implicira, sastoji se od dvije različite komponente - imunološkog odgovora i enzimske reakcije. Imunološka reakcija proizvodi vezanje bioloških molekula, elemenata stanice ili mikroorganizma, koji zapravo pokušavaju detektirati, a enzimska reakcija omogućuje vidjeti i izmjeriti rezultat imunološke reakcije. Odnosno, imunološki odgovor je dio složene tehnike koja zapravo otkriva željeni mikrob. A enzimska reakcija dio je složene tehnike koja vam omogućuje prevođenje rezultata imunološke reakcije u oblik koji je vidljiv oku i dostupan za mjerenje rutinskim kemijskim metodama. Na temelju ove strukture metode enzimskog imunološkog testa analizirat ćemo oba njezina dijela zasebno.

Imunološka reakcija, što je to? Što je antitijelo ili antigen?

Što je imunološki odgovor? Što je antigen?
Prije svega, pogledajmo što su imunološke reakcije. imunološke reakcije- To su specifične reakcije vezanja antigena na antitijelo uz stvaranje imunološkog kompleksa. Što to znači? Na površini svake stanice bilo kojeg organizma postoje posebne strukture tzv antigeni. Antigeni su općenito molekule koje nose informaciju o stanici (slično informaciji na bedžu osobe koja označava osnovne podatke te osobe).

Individualni i specijski antigeni - što je to? Zašto su ti antigeni potrebni?

Dostupno antigeni individualni, odnosno svojstveno samo ovom organizmu. Ovi pojedinačni antigeni su različiti za sve ljude, neki su slični jedni drugima, ali ipak različiti. U prirodi ne postoje dvije identične kopije pojedinih antigena!

Druga glavna vrsta antigena je antigeni vrste, odnosno svojstveno bilo kojoj određenoj vrsti živih bića. Na primjer, ljudi imaju svoj vlastiti antigen vrste zajednički svim ljudima, miševi imaju svoj vlastiti antigen vrste miša, i tako dalje. Na površini svake stanice nužno je prisutan specifičan i individualan antigen.

Antigen vrste koriste stanice imunološkog sustava za identifikaciju "prijatelja ili neprijatelja".

Kako dolazi do prepoznavanja antigena?

Imunološka stanica veže se za sumnjivu stanicu i provodi identifikaciju upravo po pojedinom antigenu. U memoriji imunološke stanice “zapisano” je kako izgleda “njezin antigen”. Dakle, ako antigen sumnjive stanice odgovara opisu "vlastitog antigena", tada ta stanica vlastitog tijela ne predstavlja opasnost. Tada se imunološka stanica "odvezuje" i odlazi. A ako antigen ne odgovara opisu "sopstva", tada imunološka stanica identificira tu stanicu kao "stranu", a time i potencijalno opasnu za cijeli organizam. U ovom slučaju, imunološka stanica se ne "riješi", već počinje uništavati opasni objekt. Točnost takvog imunološkog prepoznavanja je nevjerojatna - 99,97%. Greške gotovo da nema!

Što je antitijelo, imunološki kompleks?
Što je antitijelo?

Antitijelo je posebna molekula koja se nalazi na površini imunološke stanice. To je antitijelo koje se veže na antigene sumnjive stanice. Nadalje, antitijelo prenosi informacije unutar stanice, gdje se odvija identifikacija, i prima povratni signal dvije vrste, "svoj" ili "tuđinac". Na signal "svoj", antitijelo uništava vezu s antigenom i oslobađa stanicu.

Što je imunološki kompleks?
Sa signalom "vanzemaljac" situacija se odvija drugačije. Antitijelo ne prekida vezu s antigenom, već naprotiv, slanjem specifičnih signala izaziva “pojačanje”. Biološki, to znači da se druga antitijela koja se nalaze u drugom dijelu stanice počinju kretati prema području odakle dolazi signal opasnosti, te također stvaraju vezu između sebe i uhvaćenog antigena. Na kraju se ispostavi da je antigen sa svih strana okružen i čvrsto vezan.Takav kompleks antigen + antitijelo naziva se imunološki kompleks. Od tog trenutka počinje iskorištavanje antigena. Ali sada nas ne zanimaju detalji procesa neutralizacije antigena.

Vrste antitijela (IgA, IgM, IgG, IG d, IgE)
Antitijela su proteinske strukture, koje prema tome imaju kemijski naziv, koji se koristi kao sinonim za riječ antitijelo. Tako, antitijela = imunoglobulini.

Postoji 5 vrsta imunoglobulina (Ig), koji se vežu za različite vrste antigena na različitim mjestima u ljudskom tijelu (primjerice, na koži, na sluznicama, u krvi itd.). Odnosno, antitijela imaju podjelu poslova. Ovi imunoglobulini nazivaju se slovima latinične abecede - A, M, G, D, E i označavaju se na sljedeći način - IgA, IgM, IgG, IgD, IgE.

U dijagnostici se koristi samo jedna vrsta antitijela, koja je najspecifičnija za mikrob koji se određuje. To jest, uvijek se događa vezanje ove vrste antitijela na antigen koji se određuje. Najčešće se koriste IgG i IgM.

Upravo je to načelo imunološkog odgovora (jedinstvena točnost i specifičnost prepoznavanja biološkog objekta koji se utvrđuje) u osnovi enzimskog imunološkog testa.Zbog visoke točnosti antitijela u prepoznavanju antigena, točnost cjelokupne metode enzimskog imunotestiranja je također najviše.

enzimska reakcija

Što je enzimska reakcija? Što je afinitet, supstrat i produkt reakcije?
Osvrnimo se na razmatranje enzimske reakcije u radu metode enzimske imunološke analize.

Što je enzimska reakcija?

Enzimska reakcija je kemijska reakcija u kojoj se jedna tvar pretvara u drugu djelovanjem enzima. Tvar na koju enzim djeluje naziva se supstrat. Tvar koja se dobiva kao rezultat djelovanja enzima naziva se proizvod reakcije. Štoviše, osobitost enzimske reakcije je takva da određeni enzim djeluje samo na određeni supstrat. Ovo svojstvo enzima da prepoznaje "vlastiti" supstrat naziva se afinitet.

Dakle, svaki enzim provodi samo jednu za njega specifičnu reakciju. U biološkom svijetu postoji jako puno enzima, kao i enzimskih reakcija. U imunoenzimskoj analizi koristi se samo nekoliko enzimskih reakcija - ne više od 10. U ovom slučaju odabrane su takve enzimske reakcije, čiji su proizvodi obojene tvari. Zašto bi produkti enzimske reakcije trebali biti obojeni? Budući da postoji jednostavna kemijska metoda za izračunavanje koncentracije tvari iz obojene otopine - kolorimetrija.

Kolorimetrijska metoda - suština i načelo

kolorimetrija koristi mjerenje gustoće boje otopine, a koncentracija tvari izračunava se iz gustoće boje.U tom slučaju posebnim uređajem – kolorimetrom mjeri se gustoća boje otopine. U kolorimetriji su moguće dvije varijante ovisnosti gustoće boje o koncentraciji tvari - to je izravno proporcionalna ovisnost ili obrnuto proporcionalna ovisnost. S izravno proporcionalnim odnosom, što je veća koncentracija tvari, to je intenzivnija gustoća boje otopine. U obrnuto proporcionalnom odnosu, što je veća koncentracija tvari, manja je gustoća boje otopine. Tehnički, to se događa ovako: uzme se nekoliko otopina s poznatom koncentracijom tvari, izmjeri se gustoća tih otopina i iscrta se graf ovisnosti koncentracije o gustoći boje ( kalibracijski grafikon).

Zatim se mjeri gustoća boje otopine čija se koncentracija utvrđuje, te se prema kalibracijskom grafu automatski pronalazi vrijednost koncentracije koja odgovara razini izmjerene gustoće boje otopine.

U imunoenzimskom ispitivanju najčešće se koriste sljedeći enzimi: peroksidaza, alkalna fosfataza, avidin.

Kako se imunološke i enzimske reakcije kombiniraju u enzimskom imunološkom testu? Sada prelazimo na razmatranje samog enzimskog imunološkog testa. Koje korake uključuje i što se događa tijekom tih reakcija? Enzimski imunološki test je izravni i neizravni.

Izravni imunoenzimski test - faze provedbe

U izravnoj enzimskoj imunološkoj analizi koriste se protutijela na otkriveni antigen u kombinaciji sa specifičnom oznakom. Ova specifična oznaka je supstrat enzimske reakcije.

Pričvršćivanje antigena na površinu jažice i vezanje antigena na antitijelo

Kako se izvodi direktni enzimski imunološki test? Uzima se biološki materijal (krv, strugotine sa sluznice, razmazi) i stavlja u posebne jažice. Biološki materijal se ostavi u jažicama 15-30 minuta kako bi se antigeni mogli zalijepiti za površinu jažica. Nadalje, antitijela na detektirani antigen dodaju se u ove jažice. To znači da se pri otkrivanju antigena, na primjer, sifilisa, dodaju antitijela protiv antigena sifilisa. Ta se antitijela proizvode industrijski, a laboratoriji kupuju gotove kitove.Ta mješavina materijala za ispitivanje i antitijela odstoji neko vrijeme (od 30 minuta do 4-5 sati) kako bi antitijela pronašla i vezala se za “svoj” antigen. uzoraka antigena, to će se više antitijela vezati na njih.

Uklanjanje "ekstra" antitijela

Kao što je navedeno, antitijela su također povezana sa specifičnom oznakom. Budući da se antitijela dodaju u suvišku, neće se sva vezati na antigene, a ako uopće nema antigena u uzorku, tada se, sukladno tome, neće vezati ni jedno antitijelo na željeni antigen. Kako bi se uklonila "ekstra" antitijela, sadržaj jažica se jednostavno izlije. Kao rezultat, uklanjaju se sva "viška" antitijela, a ostaju ona koja su kontaktirala antigene, jer su antigeni "zalijepljeni" na površinu jažica. Jažice se ispiru nekoliko puta posebnom otopinom koja vam omogućuje da isperete sva "ekstra" antitijela.

Tada počinje druga faza – enzimska reakcija. Otopina s enzimom doda se u isprane jažice i ostavi 30-60 minuta. Ovaj enzim ima afinitet za tvar (specifična oznaka) na koju su antitijela vezana. Enzim provodi reakciju, uslijed koje se ova specifična oznaka (supstrat) pretvara u obojenu tvar (proizvod). Zatim se kolorimetrijom odredi koncentracija te obojene tvari. Budući da je ova specifična oznaka povezana s protutijelima, to znači da je koncentracija produkta obojene reakcije jednaka koncentraciji protutijela. A koncentracija antitijela je jednaka koncentraciji antigena. Dakle, kao rezultat analize dobivamo odgovor, koja je koncentracija otkrivenog mikroba ili hormona.

Ovako radi direktni enzimski imunološki test. Međutim, neizravna enzimska imunološka analiza danas se češće koristi jer je osjetljivost i točnost neizravne veće od izravne. Dakle, prijeđimo na neizravnu enzimsku imunološku analizu.

Indirektni imunoenzimski test - koraci

Postoje dvije faze u neizravnom enzimskom imunološkom testu. U prvoj fazi koriste se neobilježena antitijela na detektirane antigene, au drugoj fazi se koriste obilježena antitijela protiv prvih neobilježenih antitijela. Odnosno, ne dobiva se direktno vezanje antitijela na antigen, već dvostruka kontrola: vezanje antitijela na antigen, nakon čega slijedi vezanje drugog antitijela na kompleks antitijelo + antigen. Antitijela za prvi stadij su u pravilu mišja, a za drugi stadij kozja.

Fiksacija antigena na površini jažice i vezanje antigena na neobilježeno antitijelo
Kao i za izravni imunoenzimski test, uzima se biološki materijal - krv, strugotine, razmazi. Proučavani biološki materijal se unosi u jažice i ostavlja 15-30 minuta da antigeni prianjaju na površinu jažica. Zatim se u jažice dodaju neobilježena antitijela na antigene i ostave određeno vrijeme (1-5 sati) da se antitijela vežu za “svoje” antigene i formiraju imunološki kompleks ( prva razina). Nakon toga, “ekstra”, nevezana antitijela uklanjaju se izlijevanjem sadržaja jažica. Ispiranje se provodi posebnom otopinom za potpuno uklanjanje svih nevezanih protutijela.

Vezanje obilježenog antitijela na kompleks antigen + neobilježeno antitijelo
Nakon toga, druga antitijela se uzimaju - obilježavaju, dodaju u jažice i ponovno ostavljaju neko vrijeme - 15-30 minuta ( druga faza). Za to vrijeme obilježena antitijela vežu se na prva – neobilježena i tvore kompleks – antitijelo + antitijelo + antigen. Međutim, i obilježena i neobilježena antitijela dodaju se u jažice u suvišku. Stoga je potrebno ponovno ukloniti “višak”, već obilježena protutijela koja se nisu vezala na neobilježena protutijela. Da biste to učinili, ponovite postupak izlijevanja sadržaja jažica i ispiranja posebnom otopinom.

Enzimska reakcija – stvaranje obojenog spoja
Nakon toga se uvodi enzim koji provodi reakciju pretvaranja "etikete" u obojenu tvar. Boja se razvija unutar 5-30 minuta. Zatim se provodi kolorimetrija i izračunava koncentracija obojene tvari. Budući da je koncentracija obojene tvari jednaka koncentraciji obilježenih protutijela, a koncentracija obilježenih jednaka je koncentraciji neobilježenih protutijela, koja je pak jednaka koncentraciji antigena. Tako dobivamo koncentraciju detektiranog antigena.
Takva dvostruka kontrola u obliku upotrebe dvije vrste antitijela omogućila je povećanje osjetljivosti i specifičnosti metode enzimske imunološke analize. Unatoč produljenju vremena analize i uključivanju dodatnih faza, ti se gubici nadoknađuju točnošću rezultata. Zbog toga su trenutno velika većina metoda enzimskih imunotestova neizravni enzimski imunotestovi.

Koje se bolesti otkrivaju enzimskim imunološkim testom?

Prijeđimo na razmatranje koje bolesti i koje biološki aktivne tvari otkrivaju enzimski imunološki test. Tvari otkrivene enzimskim imunotestom prikazane su u tablici.

Hormoni i markeri bolesti štitnjače	tireoperoksidaza (TPO)
	tireoglobulin (TG)
	Hormon koji stimulira štitnjaču (TSH)
	Tiroksin (T4)
	trijodtironin (T3)
	Slobodni tiroksin (T4)
	Slobodni trijodtironin (T3)
Dijagnostika reproduktivne funkcije	luteinizirajući hormon (LH)
	Folikulostimulirajući hormon (FSH)
	Prolaktin
	progesteron
	Estradiol
	Testosteron
	Kortizol
	Globulin koji veže steroide (SHB)
	alfafetoprotein (AFP)
tumorski markeri	korionski gonadotropin (CG)
	Prostata specifični antigen (PSA)
	SA - 125
	SA - 19.9
	CYFRA-21-1
	M - 12 (SA - 15.3)
	MUC-1 (M-22)
	MUC1 (M–20)
	Alveomucin
	K - lanac
	L - lanac
	Čimbenik nekroze tumora (TNFα)
	γ - interferon
	Embrionalni antigen raka (CEA)
Dijagnostika zaraznih bolesti

ELISA je moderna laboratorijska studija, tijekom koje se traže specifična krvna protutijela (ili antigeni) za određene bolesti kako bi se identificirala ne samo etiologija, već i stadij bolesti.

1. tražiti specifična protutijela na bilo koju zaraznu bolest;
2. traženje antigena bilo koje zarazne bolesti;
3. proučavanje hormonskog statusa pacijenta;
4. pregled prisutnosti autoimunih bolesti.

Kao i svaka metoda laboratorijske dijagnostike, ELISA ima svoje prednosti i nedostatke. Prednosti metode uključuju:

1. visoka specifičnost i osjetljivost metode (više od 90%);
2. sposobnost određivanja bolesti i praćenja dinamike procesa, odnosno usporedbe količine antitijela u različitim vremenskim intervalima;
3. dostupnost i brzina ovog studija;
4. neinvazivna metoda uzorkovanja materijala nije studija;

Nedostatak metode je činjenica da je tijekom analize moguće identificirati ne uzročnika bolesti, već samo imunološki odgovor na njega (protutijela).

Bit ELISA metode

Postoji nekoliko vrsta ELISA: izravna, neizravna, metoda blokiranja, konkurentna. Međutim, u praksi se najčešće koristi heterogeni imunotest na čvrstoj fazi ili ELISA.

Osnova imunoenzimske analize je imunološka reakcija antigena i protutijela uz stvaranje imunološkog kompleksa, što rezultira promjenom enzimske aktivnosti specifičnih oznaka na površini protutijela.

Zapravo, ovaj se proces može podijeliti u nekoliko faza:

1. na površini jažica test sustava nalazi se pročišćeni antigen određenog patogena. Kada se doda životinjski krvni serum, dolazi do specifične reakcije između ovog antigena i željenog antitijela;
2. nadalje, u jažicu se dodaje poseban kromogen (konjugat obilježen peroksidazom). Dolazi do enzimske reakcije koja rezultira stvaranjem obojene tvari u jažici tablete. Intenzitet njegove boje ovisi o količini imunoglobulina (protutijela) sadržanih u serumu životinje;
3. Slijedi procjena rezultata. Uz pomoć višekanalnog spektrofotometra uspoređuje se optička gustoća ispitivanog materijala s optičkom gustoćom kontrolnih uzoraka te se rezultati matematički obrađuju. Količina antitijela u pacijenta izravno ovisi o visini optičke gustoće dane jažice.

Mora se zapamtiti: za svaki testni sustav razvijeni su pojedinačni pokazatelji koji uzimaju u obzir rezultate, pokazatelje norme i patologije ("referentne vrijednosti"). To treba uzeti u obzir pri ocjeni rezultata svake pojedinačne studije.

Nije ispravno interpretirati rezultate jednog laboratorija iz "referentnih vrijednosti" drugog laboratorija. Također je netočno međusobno uspoređivati ​​rezultate različitih laboratorija.

Pri procjeni rezultata za specifične infekcije važna je klasa otkrivenih protutijela i njihov broj. O tome ne ovisi samo pitanje etiologije infekcije, već i očekivani stadij bolesti (akutna, kronična), kao i prisutnost aktivne infekcije (akutne ili egzacerbacije kronične) u vrijeme pregleda. .

Koje je približno vrijeme pojave antitijela?

Najranija antitijela su IgM. Mogu se otkriti 1-3 tjedna nakon moguće infekcije, što karakterizira akutnu fazu infektivnog procesa. Druga situacija pojave IgM protutijela je pogoršanje kroničnog procesa. IgM cirkuliraju u prosjeku oko 3 mjeseca, a zatim njihov broj postupno nestaje. Međutim, u nekih bolesnika IgM u tragovima može se otkriti unutar 1-2 godine od infekcije.

Od 4. tjedna nakon infekcije počinju se javljati IgG protutijela. U većini infekcija, njihov titar postupno raste s maksimumom u različitim vremenima (u prosjeku, nakon 1,5-2 mjeseca), zatim titar ostaje na niskoj razini i ukazuje na imunitet. U nekim bolestima razina IgG nije visoka.

Mogućnosti otkrivanja antitijela

• Izolirana detekcija IgM protutijela upućuje na primarnu infekciju.
• Istodobno otkrivanje IgM i IgG u krvi tipično je za primarnu infekciju u prethodna 2-3 mjeseca, kao i tijekom pogoršanja kronične bolesti.
• Otkrivanje IgG u izolaciji može ukazivati ​​i na imunitet na bolest i na kroničnu infekciju. U drugoj situaciji bitni su i količina protutijela (titar) i promjena u tom titru tijekom vremena. Obično se istraživanja provode u intervalima od 2-4-6 tjedana.

ELISA analiza je suvremena tehnika za laboratorijsku dijagnostiku značajnog broja različitih bolesti. Skraćenica označava enzimski imunološki test. Suština tehnike je određivanje titra (aktivnosti) antitijela.

ELISA tehnika danas postaje sve popularnija. Koristi se u kliničkoj medicini za dijagnozu različitih patologija, kao iu eksperimentalnim studijama koje zahtijevaju točno određivanje koncentracije različitih spojeva u proučavanom mediju.

Princip ELISA tehnike

ELISA je imunološka reakcija. Temelji se na dodatku specifičnih protutijela
ili antigena u medij za ispitivanje (najčešće krv za ispitivanje) uz naknadno enzimsko određivanje koncentracije nastalih kompleksa antigen-antitijelo. Po koncentraciji kompleksa može se prosuditi razina ili aktivnost analita u ispitnom mediju.

Određivanje koncentracije kompleksa antigen-antitijelo obično se provodi pomoću posebne opreme kromatografskom metodom.

Indikacije za provođenje

ELISA analiza se provodi za različite indikacije, a glavne u kliničkoj medicini su:

• Dijagnoza zarazne patologije s pretežno spolnim prijenosom (STI), koja uključuje klamidiju, mikoplazmozu, ureaplazmozu, trihomonijazu, dok se otkrivaju specifična protutijela na uzročnika infekcije.
• Dijagnostika zaraznih bolesti različite lokalizacije za određivanje stadija patološkog procesa, prvenstveno u procesu dijagnosticiranja parenteralnog virusnog hepatitisa i HIV-a.
• Određivanje koncentracije hormona za dijagnozu različitih patologija organa endokrinog sustava (endokrinih žlijezda).
• Određivanje različitih spojeva za dijagnosticiranje uzroka intoksikacije organizma u slučaju trovanja, ugriza insekata ili zmija.

S ovim medicinskim indikacijama provodi se ELISA test krvi. Također, ova tehnika se aktivno koristi u eksperimentalnoj medicini tijekom različitih kliničkih studija tijekom razvoja novih lijekova, cjepiva za imunoprofilaksu.

Kako se studija radi

ELISA test krvi provodi se u specijaliziranom laboratoriju. Prethodno se za njegovu provedbu uzima venska krv, obično iz kubitalne vene u volumenu od 5-10 ml, koja se zatim šalje u laboratorij. U prosjeku, rezultat analize može se dobiti već sljedeći dan, što je važna točka za brzo imenovanje liječenja nakon utvrđivanja dijagnoze bolesti.

Kako se pripremiti za ELISA test

Da biste dobili pouzdane rezultate studije enzimskim imunološkim testom, trebali biste slijediti nekoliko jednostavnih pripremnih preporuka, koje uključuju:

• Dan prije analize trebali biste prestati jesti masnu hranu (meso, dimljeno meso) i alkohol.
• Materijal za istraživanje mora se uzeti ujutro na prazan želudac.
• Na dan studije poželjno je izbjegavati fizički i psihoemocionalni stres.
• Prije studije morate pokušati ne pušiti.

Većina dobivenih lažno pozitivnih rezultata enzimskog imunološkog testa posljedica je nepravilne provedbe pripremnih preporuka. To je u većini slučajeva povezano s konzumiranjem masne hrane, što dovodi do povećanja koncentracije triglicerida (masti) u krvnoj plazmi, što smanjuje specifičnost ELISA testa.

Dešifriranje rezultata

Test krvi za antitijela pomoću ELISA ima 2 modifikacije - kvalitativno i kvantitativno određivanje. Na
kvalitativno određivanje protutijela, rezultat može biti pozitivan (otkrivaju se protutijela, što ukazuje na moguću prisutnost patološkog procesa uzrokovanog infektivnim agensom) ili negativan (nema protutijela, što ukazuje na odsutnost infektivnog procesa).

Odsutnost antitijela nije uvijek 100% pokazatelj odsutnosti infektivnog procesa. To je zbog činjenice da se nakon infekcije protutijela ne stvaraju odmah, već kroz određeno vrijeme (najmanje oko 2 tjedna). Stoga, kako bi se potvrdila odsutnost infekcije, ELISA se može ponoviti nakon nekog vremena.

Kvantitativnom ELISA testom se određuje titar (aktivnost) antitijela, kao i njihove klase. U većini slučajeva za dijagnostiku zaraznih bolesti određuju se protutijela klase IgG (imunoglobulini G) i IgM (imunoglobulini M), koja se stvaraju u organizmu u različitim vremenskim razmacima nakon infekcije, pa dešifriranje rezultata analize može imati nekoliko značenja:

• Povećana aktivnost IgM i odsutnost IgG dokaz su nedavne infekcije i akutnog tijeka zaraznog procesa.
• Povećanje aktivnosti IgM i IgG je pogoršanje infektivnog procesa u njegovom kroničnom tijeku i dugotrajnoj infekciji.
• Visoka aktivnost IgG i odsutnost IgM je kronični tijek infektivnog procesa na pozadini dugotrajne infekcije, nakon koje je prošlo više od šest mjeseci (vrijeme potrebno za stvaranje antitijela klase IgG).

Općenito, tumačenje rezultata ELISA za svaki infektivni proces ima određene značajke. Točnije određivanje prisutnosti zarazne bolesti, kao i stadija njezinog tijeka, provodi liječnik.

ELISA je trenutno metoda izbora za dijagnosticiranje većine zaraznih bolesti. Na temelju rezultata takve studije, liječnik ima priliku uspostaviti točnu dijagnozu i odrediti stupanj tijeka patološkog procesa kako bi propisao naknadni adekvatan i učinkovit tretman.

Suvremene dijagnostičke metode omogućuju laboratorijsko prepoznavanje određene bolesti uz pomoć posebnih testova. Jedan od njih trebao bi uključivati ​​enzimski imunološki test, pomoću kojeg možete potvrditi preliminarnu dijagnozu.

ELISA je jedna od najučinkovitijih i najsuvremenijih metoda za otkrivanje poremećaja povezanih s imunološkim i hormonalnim neuspjesima, kao i onkološkim procesima. Tijekom analize u krvi mogu se otkriti antitijela koja se proizvode kada postoji infekcija u tijelu. S obzirom na ovu nijansu, moguće je otkriti bolest čak iu vrlo ranoj fazi razvoja.

Što je temelj metodologije

Rezultati ELISA analize temelje se na primitku kemijskih reakcija na enzime koji služe kao posebne identifikacijske oznake za prepoznavanje protutijela. Stoga, tijekom imunokemijskih reakcija, protutijela počinju komunicirati s nekim antigenima. Sve to daje osnovu za tvrdnju da su lažni rezultati prilikom davanja krvi za ELISA minimalni.

Studija vam omogućuje da odredite broj imunoloških stanica, njihova svojstva, kao i prisutnost potrebnih antitijela

Pozitivan rezultat se smatra kada se otkrije boja otopine. Boja pokazuje da antigeni stupaju u interakciju s antitijelima. U slučaju da se ništa slično ne dogodi, rezultat je negativan.

Imunoenzimski test (ELISA) provodi se za sveobuhvatnu procjenu zaštitnih funkcija tijela. Tijekom studije utvrđuje se broj i svojstva imunoloških stanica, prisutnost potrebnih antitijela. ELISA test krvi provodi se za dijagnosticiranje zaraznih, hematoloških, autoimunih bolesti, primarnih i sekundarnih imunodeficijencija. Razmotrite što je krvni test pomoću ELISA i koje indikacije postoje za ovu studiju.

Što je

ELISA test krvi je laboratorijska metoda koja otkriva antitijela ili antigene u uzorku krvi. Ova studija se koristi za otkrivanje razine imunoglobulina, imunoloških kompleksa, hormona.

Indikacije za analizu

Za imenovanje ELISA testa krvi postoje sljedeće indikacije:

• dijagnoza spolno prenosivih infekcija - ureaplazma, mikoplazma, klamidija, trihomonas, sifilis;
• dijagnoza virusnih bolesti - citomegalovirus, herpes, hepatitis, Epstein-Barr virus;
• određivanje razine hormona;
• dijagnoza onkoloških bolesti;
• određivanje imunodeficijencije;
• dijagnosticiranje alergija;
• preoperativni sveobuhvatni pregled prije transplantacije organa;
• procjena učinkovitosti terapije.

Princip metode

Princip rada metode enzimske imunoanalize temelji se na određivanju specifičnih proteina-antitijela u krvi - imunoglobulina. Imunoglobuline proizvodi ljudski imunološki sustav kada antigeni (strani mikroorganizmi) uđu u tijelo. Te se imunološke molekule vežu za razne infektivne agense u tijelu i neutraliziraju ih.

Imunoglobulini imaju važnu karakteristiku – specifičnost. Zbog toga se mogu vezati za određeni antigen, tvoreći kompleks antigen-antitijelo. Tijekom ELISA testa krvi, ovaj kompleks se određuje kvalitativno i kvantitativno.

Postoji pet klasa imunoglobulina. Ali obično se definiraju tri klase - imunoglobulini A, M, G. Ta se antitijela nakupljaju u tijelu u različitim vremenima od trenutka infekcije.

• Imunoglobulini klasa M (IgM) prvi se pojavljuju u krvi petog dana od trenutka infekcije. U tijelu su 5-6 tjedana, a zatim nestaju iz krvotoka. IgM protutijela ukazuju na akutno razdoblje bolesti ili pogoršanje bolesti u kroničnom tijeku.
• Otprilike 3-4 tjedna nakon infekcije, imunoglobulini se pojavljuju u krvi klasa G (IgG). Oni mogu postojati u ljudskoj krvi nekoliko mjeseci ili čak godina. Prema dekodiranju ELISA testa krvi, ako je u dva uzorka krvi uzeta uzastopno dva tjedna kasnije, količina IgG imunoglobulina povećana, govore o trenutnoj infekciji ili reinfekciji - ponovnoj infekciji istom infekcijom.
• Imunoglobulini klasa A (IgA) mogu se otkriti ovom metodom istraživanja 2-4 tjedna nakon infekcije ili pogoršanja zarazne bolesti. Od toga samo 20% cirkulira u krvi, ostatak izlučuju sluznice. IgA protutijela nestaju iz krvotoka 2-8 tjedana nakon uništenja uzročnika infekcije. Nestanak ovih imunoglobulina znači izlječenje infekcije. Ako se nakon završetka bolesti utvrdi prisutnost IgA protutijela u krvi, tada je bolest prešla u kronični stadij.

Priprema za analizu

Za provođenje ELISA testa krvi najčešće se koristi ljudska krv. Ali također možete ispitati sadržaj staklastog tijela, cerebrospinalne tekućine, amnionske tekućine.

Uzorak krvi za istraživanje uzima se od pacijenta iz kubitalne vene. Preporuča se darivanje krvi na prazan želudac (treba proći najmanje 12 sati od trenutka posljednjeg obroka). Potrebno je obavijestiti liječnika ako pacijent uzima lijekove, jer neki od njih mogu promijeniti rezultat analize. Na pouzdanost rezultata studije utječe uporaba alkohola i droga.

Dešifriranje

Obrazac rezultata ove analize pokazuje pozitivan (+) ili negativan (-) rezultat za svaku klasu imunoglobulina.

Razmotrite tumačenje mogućeg dekodiranja ELISA testa krvi.

• Negativan rezultat IgM, IgG, IgA - nedostatak imuniteta na infekciju.
• Negativan IgM, IgA i pozitivan IgG rezultat - postinfekcijski ili postcijepni imunitet.
• Negativni ili pozitivni IgG, IgA i pozitivni IgM je akutna infekcija.
• Pozitivan rezultat IgM, IgG, IgA je egzacerbacija kronične zarazne bolesti.
• Negativan IgM rezultat i negativan ili pozitivan IgG, IgA rezultat je kronična infekcija.
• Negativan IgM nalaz i nema IgG, IgA - oporavak.

Prednosti metode

ELISA test krvi ima mnoge prednosti. Mogu se razlikovati glavni:

• relativno visoka točnost (osjetljivost);
• mogućnost rane dijagnoze;
• sposobnost praćenja dinamike zaraznog procesa;
• visoka razina unifikacije, koja omogućuje masovna istraživanja;
• kratko vrijeme potrebno za dobivanje rezultata analize;
• praktičnost u radu;
• automatizacija svih faza analize;
• relativno niske cijene.

Mane

Nedostatak ELISA metode je što ponekad daje lažno negativne ili lažno pozitivne rezultate. Uz tehničke pogreške tijekom studije, uzrok lažnih rezultata može biti reumatoidni faktor kod pacijenta, prisutnost kroničnih bolesti (kod kojih se proizvode antitijela), metabolički poremećaji i uzimanje određenih lijekova.

• ascariasis;
• trihineloza - analiza se provodi nekoliko puta, maksimalna razina antitijela se određuje 4-12 tjedana nakon infekcije;
• cisticerkoza;
• tenijaza;
• fascioliasis - protutijela se određuju u akutnoj fazi bolesti;
• opisthorchiasis - provesti diferencijalnu dijagnozu između kroničnih i akutnih oblika bolesti;
• giardijaza;
• visceralna i kožna lišmanijaza;
• amebijaza;
• toksoplazmoza.

4.2 4,20 od 5 (5 glasova)