Simptomi mikoze stopala. Laboratorijska dijagnostika gljivičnih oboljenja kože Ne koristi se u dijagnostici površinskih mikoza

Ljuskice ili dlake stave se na predmetno staklo (staklo mora biti odmašćeno) i napune jednom, dvije ili tri kapi 30%-tne otopine kaustičnog kalija ili kaustične sode i pokriju pokrovnim stakalcem. 2-3 minute, uz lagano zagrijavanje na plamenu alkoholnog plamenika, pokrovnim staklom lagano pritisnuti pripravak dok
sivi oblak pri ispitivanju ljuski. Dlaka se ne smije uništiti, takvim zagrijavanjem samo nabubri. Mikroskopski pregled (povećanje 100-200 puta) sa zatamnjenom dijafragmom otkriva gljivične elemente - spore ili niti micelija. Neophodan uvjet za uspjeh mikroskopskog pregleda je temeljitost dobivanja ljuskica i dlačica koje se sa zahvaćenih područja moraju uzeti posebnim pincetama (pinceta za trepavice). Potrebno je obratiti pažnju ne samo na jasno vidljive dlake, kruste i ljuskice, već i na jedva primjetne ostatke dlake (tzv. batrljke) i mitesere koji se uklanjaju skalpelom ili histološkom iglom. Nikada se ne smijete zadovoljiti upućivanjem pacijenta na zahvaćena područja; liječnik mora pažljivo pregledati cijelo vlasište.

U kosi zahvaćenoj trihofitozom spore gljivica raspoređene su u lanac. S mikrosporijom, spore su mnogo manje nego kod lišajeva, ne tvore lance i nalaze se na vanjskoj strani dlake. Unutar vlasi nalaze se vrpce septiranog micelija. Kosa je kao da je obučena u pokrivač i spor. Kod kraste se uočavaju polimorfne spore, grube, raznolike niti i obično mjehurići zraka (slika 48).

U ovom slučaju, gljivice ne utječu u potpunosti na cijelu kosu, ali ostaju nezahvaćena područja.
Da bi se dobio materijal iz glatke kože, ljuske se stružu. periferna područja lezije oštrom žlicom ili skalpelom. Pogodnije je strugati nokte oštrim medicinskim nožem (skalpelom), uklanjajući male, ali duboke dijelove s unutarnje površine ploče nokta ili struganjem praha pitirijaze s rožnatih ploča nokta.
Početni materijal se kuha u epruveti s lužinom i zatim se ostavi da stoji u ovoj epruveti 12-20 sati.
Nakon toga se sadržaj centrifugira i sediment pregleda pod mikroskopom (metoda N.A. Chernogubova).
Gljive dobro rastu na umjetnim hranjivim podlogama koje sadrže ugljikohidrate i proteinske tvari. Osobito su česti tzv. izvorni Sabouraud medij, pivska sladovina, agar i povrće.

2. Laboratorijska pretraga patološkog materijala

2.1. Mikroskopske studije

Za otkrivanje morfoloških elemenata gljive - stanica kvasca, pseudomicelija, micelija, konidiofora, konidija, tkivnih oblika dubokih mikoza - ispituje se patološki materijal u nativnim i obojenim preparatima.

Tekući patološki materijal ispituje se u neobojanom stanju u sljedećim tekućinama za bistrenje: smjesa alkohola s glicerinom (etil alkohol 1 dio, glicerin 2 dijela, destilirana voda 2 dijela), Lugolova otopina (1 g kristalnog joda, 2 g kalijevog jodida, 150 ml vode), kao i u vodi ili fiziološkoj otopini. Za pripremu nativnih preparata, kap materijala se nanese na predmetno stakalce pomoću petlje ili pipete, zatim se nakapaju 1-2 kapi tekućine za bistrenje, pokriju pokrovnim staklom i mikroskopiraju pri malom povećanju od 1:80 (10x okular i 8x objektiv), na kojem možete vidjeti nakupine stanica kvasca i pseudomicelija, micelija i drugih elemenata gljiva. Pri velikom povećanju od 1:400 mogu se karakterizirati pojedinačne stanice.

Gusti patološki materijal (koža, ljuskice noktiju) stavlja se u kap 10-20% otopine KOH, lagano zagrijava na plamenu plamenika (radi bolje maceracije) dok se po obodu kapi ne pojave kristali lužine. Zatim se kap pokrije pokrovnim stakalcem, lagano pritisne na nju i pregleda mikroskopski, prvo pod malim povećanjem da se pronađe ljuska, a zatim pod velikim povećanjem.

U materijalu dlake, omotač spora koji okružuje dlaku (ectothrix) ili unutar dlake (endothrix) gljivični elementi obično su vrlo jasno vidljivi. Oštećenja dlake, kao i veličina spora, specifični su za različite vrste dermatofita. Neophodna je diferencijalna dijagnoza između gljivičnih struktura i artefakata. Mogući izvori lažno pozitivnih rezultata uključuju kapljice lipida, mjehuriće zraka, tekstilna vlakna i takozvanu "mozaičnu gljivu". Kapljice lipida mogu nalikovati stanicama kvasca, što je najčešći nalaz u loše očišćenom materijalu. Tekstilna vlakna obično leže odvojeno od materijala epiderme, kose ili nokta. Veće su od hifa gljiva, nejednake su debljine i ne sadrže pregrade. “Mozaična gljiva” je artefakt dobiven tijekom kristalizacije KOH-a zbog pretjeranog zagrijavanja preparata. Za razliku od gljiva, nema jasne podjele na stanice.

Važan korak u dijagnosticiranju gljivičnih infekcija je pripremanje obojenih pripravaka. Bilo koji patološki materijal (preparati razmaza, otisci organa, centrifugati i, naravno, histološki isječci) moraju proći tri glavne vrste obrade: 1) bojenje PAS metodom za identifikaciju pravih gljivica - eumiceta; 2) bojenje po metodi Gram ili u modifikacijama po Gram-Weigertu, po Bogolepovu, po Brown-Brenni - za identifikaciju popratne bakterijske mikrobiote, za identifikaciju aktinomiceta i nokardija; 3) bojanje po Ziehl-Nielsonovoj metodi ili modifikacija po Kinyonovoj metodi - za identifikaciju kiselootpornih mikroorganizama, prvenstveno za indikaciju i diferencijaciju s Mycobacterium tuberculosis, za otkrivanje uzročnika lepre, nokardije i gljivica koje stvaraju spore.

PAS metoda (Piodic Acid Schiff) uključuje identifikaciju neutralnih polisaharida u stjenkama mikroorganizama. U stjenkama većine eumiceta nalazi se kompleks glukan-manan u različitim koncentracijama, zbog čega dolazi do bojanja.

Pokazalo se da su prokarioti (bakterije) PAS-negativni, uključujući aktinomicete i nokardije od interesa za mikologa. Međutim, tijekom stvaranja aktinomikotskih druza stvara se takozvani “cement” koji lijepi vegetativni aktinomikotični micelij u granulu, što također daje PAS-pozitivnu mrlju. S tim u vezi, ova metoda je također primjenjiva u dijagnostici aktinomikoze.

PAS reakcija (i njezina modifikacija) najvažnija je metoda za dijagnosticiranje tkivnih oblika gljivične infekcije. Metoda se temelji na oksidaciji glikolnih skupina ugljikohidrata periodnom ili kromnom kiselinom. Periodna kiselina oksidira 1,2 i 1,4 glikole u aldehide i razbija veze između ugljikovih atoma koji nose hidroksilne skupine. Aldehidne skupine također se mogu detektirati korištenjem aldehidnog Schiffovog reagensa. In situ, u stijenkama gljive, heteropolisaharidni kompleks postaje intenzivno obojen purpurnocrveno (metodologija - vidi priloge).

Za suzbijanje boje okolnih tkiva koristi se tretman ("protuboja") svijetlozelenom, metanil žutom itd. U tom slučaju otkrivaju se samo gljivične stanice, što je vrlo korisno u fazi indikacije patogena u tkivima ili u preparatima razmaza. Istodobno, nije moguće procijeniti odgovor tijela i promjenu tkiva na takve lijekove. Uvijek je potrebno imati paralelne preparate obojene PAS metodom uz dodatno bojenje hematoksilinom.

U praksi se koristi ne samo PAS metoda u klasičnoj verziji, već i njezine različite modifikacije: oksidacija s kromnom kiselinom (umjesto jodnom kiselinom) - to je Bauerova reakcija, Gridley bojanje, impregnacija s metenamin srebrom pomoću Gomory-Grocott metoda. Sve se one uspješno koriste za detekciju tkivnih oblika gljivica, a temelje se na istom principu (tehnika - vidi Dodatak). Tablica 3.

Tablica 3

Tinktorijalna svojstva tkivnih oblika gljiva

(u patološkom materijalu, u histološkim rezovima)

Oportunističke mikoze	Metode detekcije
Kandidijaza	PAS ili Gridley bojanje
Aspergiloza	Hematoksilin i eozin, Gomori-Grocott impregnacija
Zigomikoza	Hematoksilin i eozin
Kriptokokoza	Alcian blue (prema Mowry metodi) + PAS reakcija + hematoksilin
Pneumocista	Bojenje po Bauerovoj metodi, impregnacija po Gomory-Grocottu, bojenje tioninom
Fusarium	Bojanje prema metodi Romanovsky-Giemsa, prema Wright metodi
Scedosporiasis
Trihosporoza	Hematoksilin i eozin, bojanje po Romanowsky-Giemsi
Feohifomikoza i kromomikoza	Hematoksilin i eozin
Primarne patogene mikoze:	Metode detekcije
Kokcidioidoza	PAS reakcija + hematoksilin
Histoplazmoza	impregnacija po Gomory-Grocottu, bojenje po Bauerovoj metodi, bojenje po metodi Romanovsky-Giemsa
Sjevernoamerička blastomikoza
Parakokcidioza	PAS reakcija, impregnacija po Gomory-Grocottu
Adiaspiromikoza	Hematoksilin i eozin, RAS reakcija
Pseudomikoze:	Metode detekcije
Aktinomikoza	Hematoksilin i eozin, Gram-Weigertova boja
Nokardioza	bojenje po Ziehl-Neelsen metodi, po Kinyon metodi, po Gram metodi.

Ako se pretpostavi dijagnoza kriptokokoze, preporučljivo je koristiti metode za specifično otkrivanje kapsularnog materijala Cr.neoformans koji sadrže glikozaminoglikane (kisele polisaharide). U tu svrhu koristi se bojanje alcian plavim (prema Mowry metodi), bazično smeđim (prema Shubich metodi) i bojenje mucikarminom. Trostruko bojenje je vrlo korisno: PAS reakcija, zatim tretman Alcian blue, zatim hematoksilin. U tom slučaju postaje moguće razlikovati kriptokoke od tkivnih oblika drugih gljiva slične morfologije.

Opis patološkog materijala (histoloških preparata) uključuje podatke o morfologiji i veličini tkivnih formi gljiva, njihovim tinktorijalnim karakteristikama, odnosu prema tkivima domaćina, prisutnosti fagocitoze i utvrđivanje prateće mikrobiote.

2.2. Sjetva patološkog materijala i kvantitativno brojanje stanica kod mikoza uzrokovanih kvasnim gljivicama

Uzimanje kultura gljivica potrebno je za njihovu identifikaciju i određivanje osjetljivosti na antifungalne lijekove.

Prije pregleda sputum se homogenizira 5-10 minuta mućkanjem sa sterilnim kuglicama. Ako ispljuvak sadrži puno sluzi i slabo je homogeniziran, može mu se dodati 1-2 ml sterilne fiziološke otopine. Ispljuvak se mikroskopski pregledava u nativnim ili obojenim preparatima. Ako mikroskopija sputuma s velikim povećanjem pokazuje gljivične elemente u vidnom polju, tada ga treba posijati u razrjeđenjima 1:10, 1:100, 1:1000; ako se ne otkriju gljivični elementi, sputum se posije nerazrijeđen. Razrjeđenja se pripremaju u tekućem hranjivom mediju (sladina, Sabouraud, 1% peptonska voda) ili u sterilnoj fiziološkoj otopini. Od svakog razrjeđenja, 0,1 ml inokulira se pomoću lopatice na 2 šalice sladovinog agara, Sabouraud agara ili MPA uz dodatak antibakterijskih antibiotika - penicilina i streptomicina, biomicina (100-200 jedinica/ml medija). Hranjivi medij se prethodno suši u termostatu na +37 C, jer u prisutnosti kondenzata, rast kolonija može biti konfluentan. Usjevi se inkubiraju 48 sati u termostatu na + 37 o C. Zatim, ako postoji rast iste vrste kolonija kvasca, one se kvantitativno broje. Izračunavanje broja stanica kvasca (n) u 1 ml ili 1 g ispitivanog materijala provodi se prema formuli n = avs, gdje je a prosječan broj kolonija na jednoj Petrijevoj zdjelici, b = 10 s volumenom inokuluma od 0,1 ml, c je stupanj razrjeđenja ekskreta (10,100,1000).

Primjer izračuna: na posudama s razrjeđenjem 1:1000 prosječno je raslo 60 kolonija, dok 1 ml ispitivanog izlučevina sadrži 60 x 10 x 1000 = 600 000 stanica kvasca.

BAL, ISPIRNA tekućina bronha, maksilarnih šupljina, žuč (porcije A, B, C), želučani sok, duodenalni sadržaj, urin pretoče se u epruvete za centrifugiranje i centrifugiraju 10-15 minuta, nakon čega se supernatant brzo iscijedi. Iz sedimenta se pripremaju nativni preparati za mikroskopiranje. Ako se mikroskopiranjem otkriju stanice kvasca u svakom vidnom polju, tada se sijanje provodi u razrjeđenjima 1:100 i 1:1000, po 0,1 ml, na čvrste hranjive podloge i inkubira se 48 sati na 37 C. Ako mikroskopiranje sedimenta ne otkrivaju stanice kvasca, sediment se sije bez razrjeđivanja. Količina flore kvasca izračunava se po 1 ml patološkog materijala.

FEKALI se uzimaju mjericom u količini od 0,2 g, stavljaju se u 1,8 ml tekuće sladovine i dobro promiješaju staklenim štapićem. Dobiveno razrjeđenje (1:10) ostavi se stajati 5-10 minuta, pripreme se razrjeđenja 1:100, 1:1000 i inokuliraju u volumenu od 0,1 ml na 2 Petrijeve zdjelice s agar medijem. Količina gljivične flore bilježi se po 1 g izmeta.

CEREBROSpinalna tekućina. Okarakterizirajte njegov izgled (proziran ili mutan, bezbojan ili obojen, prisutnost krvi, sediment). Mikroskopski razmazi iz sedimenta cerebrospinalne tekućine nakon centrifugiranja. Pripremaju se tri preparata: nativni - u kapi sterilne fiziološke otopine; nativni - u kapi tinte i razmazu za bojenje PAS metodom, Gram i Alcian blue po Mowryju.

Mikroskopija cerebrospinalna tekućina u nativnim i obojenim pripravcima omogućuje određivanje prisutnosti pupajućih stanica kvasca i fragmenata micelija gljiva, odnosno bakterija uzročnika gnojnog meningitisa (meningokok, pneumokok, Haemophilus influenzae i dr.). U pripravku tinte može se otkriti kapsularna gljivica. Cryptococcus neoformans. Istodobno su na sivoj pozadini tinte vidljive pupajuće stanice kvasca okružene svijetlim aureolom kapsule. Pripravci tinte također mogu sadržavati oblike kvasca Candida albicans koji nemaju svijetlu aureolu kapsule oko stanice.

Kr. neoformansi također se može otkriti bojanjem Alcian blue (Mowry). Do bojenja dolazi zbog selektivne detekcije kapsularnog heteropolisaharida karakterističnog za Cr.neoformans. Ako se u preparatu obojenom po Gramu otkrije bakterijska flora, daljnji pregled cerebrospinalne tekućine provodi se odgovarajućim bakteriološkim metodama. Nakon mikroskopiranja sedimenta, tekućina se inokulira na 3 šalice svježe pripremljene, osušene sladovine ili Sabouraud agara, kao i na tekuću sladovinu ili tekući Sabouraud medij. Nanesite 2-3 kapi tekućeg sedimenta na površinu hranjivog agara čaša 1 i 2 i temeljito ga istrljajte lopaticom, te inokulirajte 1 kap na tri točke na površini agara čaše 3 kako biste otkrili filamentozne gljive. Preostala tekućina se prenese u 5 ml tekuće sladovine ili Sabouraud agara. Usjevi se inkubiraju pri dva temperaturna uvjeta: čašica 1 - na +37 o C, te čašice 2 i 3 i sjetva u tekuću podlogu - na +28 o C - +30 o C. Posjevi se gledaju na temperaturi od +37 o C na 2. i 5. dan, a na 28 - 30 o C - na 4., 7., 10. dan rasta. Ako 5. dan na temperaturi od +37 o C i 10. dan na temperaturi od 28-30 o C nema rasta, sijati iz tekuće hranjive podloge na pločice sa sladovinom ili Sabouraud agarom. Ako nema rasta flore kvasca, rezultat inokulacije tekućine se bilježi kao negativan.

ISPUŠTANJE fistula. Studija započinje mikroskopiranjem materijala u nativnim ili obojenim preparatima. Zatim se materijal inokulira na podlogu agara (sladina ili Sabouraud), za što se 2-3 kapi iscjetka nanesu na čašicu i lopaticom rasporede po površini agara. Usjevi se inkubiraju 48 sati na +37 o C.

ISCJEDAK sluznice.

1. Tampon se stavi u epruvetu s 2 ml tekućeg medija (sladina, Sabouraudova podloga ili MPB) i mućka 5-7 minuta bez namakanja čepa. Pripremite razrjeđenja od 1:10, 1:100 i inokulirajte 0,1 ml svakog razrjeđenja u dvije šalice sladovinog agara, Sabouraud agara ili MPA. Inokulacije na čvrste podloge i epruveta s tekućom podlogom s tupferom (za obogaćivanje) inkubiraju se na temperaturi od +37 C. Nakon 48 sati broji se kolonija i brisom uzima broj stanica kvasca. približno određen. Da biste to učinili, broj uzgojenih kolonija kvasca pomnoži se s 20 i razrijedi. Ako nema rasta kolonija na pločicama, uzeta razrjeđenja ponovno se nasiju iz medija za obogaćivanje na jednu pločicu s sladovinim agarom.

2. Sjetva se može obaviti rotirajućim pomicanjem štapića po površini hranjive podloge. U ovom slučaju ne uzima se u obzir broj kolonija kvasca, već se bilježi samo prisutnost i intenzitet rasta: pojedinačne kolonije, značajan ili kontinuirani rast, nedostatak rasta mikrobiote.

KRV. Uzorci venske krvi za hemokulturu moraju se razrijediti s medijem za obogaćivanje najmanje 1:5 tako da baktericidna svojstva krvi ne inhibiraju rast gljivica. Inokulirajte 5-10 ml svježe uzete krvi u 50-100 ml hranjive podloge (tekući Sabouraud s 2% glukoze ili Kitt-Tarozzi medij nakon njegove regeneracije). Za kulturu možete uzeti krv s antikoagulansom (1:10 5% otopina natrijevog citrata). Usjevi se uzgajaju 10 dana na +37 o C s kontrolnom sjetvom 5. i 10. dana. Sterilnom pipetom uzmite sediment od kojeg se 3 kapi bakteriološkom petljom rasprše po površini sladovinog agara u Petrijeve zdjelice. Zasađene čašice stavljaju se u termostat s temperaturom od +37 o C 2-5 dana. U slučaju porasta flore kvasca daje se preliminarni odgovor o prisutnosti gljive u krvi, te se kultura utvrđuje na rod i vrstu.

Opisana je još jedna metoda hemokulture na mikofloru (H. Rieth). U tom slučaju u kapima se inokulira 5-10 ml krvi. Na površinu guste hranjive podloge u Petrijevoj zdjelici sterilnom pipetom nanijeti 40-50 kapi krvi na razmak od 0,5 cm između kapi. Inokulacija se provodi na dvije Petrijeve zdjelice, pri čemu se u jednoj zdjelici inkubira na temperaturi od +37 o C, a u drugoj na sobnoj temperaturi 2-5 dana.

KOMADIĆI tkiva organa. Ispitnim komadićem tkiva napravi se otisak na površini gustog hranjivog medija u Petrijevoj zdjelici, zatim se izvrši prosijavanje omčom. Isti komad tkiva stavi se u 50 ml tekuće hranjive podloge (sladina, Sabouraud podloga). Usjevi se inkubiraju u termostatu na temperaturi od +37 o C tijekom 5 dana.

KOŽA i ljuskice za nokte. Sjetva ljuskica provodi se bez obzira na rezultate mikroskopije. Da biste to učinili, pomoću sterilne mikološke lopatice navlažene u kondenzatu medija, ljuske se prenose u epruvetu na nakošeni sladovini agar u 2-3 točke, pritiskajući ih na površinu medija. Ovisno o količini materijala primljenog za istraživanje, inokulacija se vrši u 2-3 epruvete. Usjevi se inkubiraju u termostatu na temperaturi od 28-37 o C do 5 dana.

Metode brze identifikacije naširoko se koriste C.albicans. Ova vrsta je sposobna formirati klicine cjevčice i kratke filamente pseudomicelija unutar nekoliko sati (2-4 sata na 37 o C) na krvnom serumu, bjelanjku jajeta, Eagle-ovoj podlozi, 199 podlozi itd. U praksi se u laboratorijima koristi humani serum (rezidue iz seroloških reakcija), gdje se na 37 o C stvaraju klicine cjevčice, a nakon 24 sata stvaraju se spletovi pseudomicelija. Radi izgleda C.albicans ova pojava je tipična u 90% slučajeva. Klice se rjeđe stvaraju C. tropicalis.

2.3. Mikroskopski pregled i kultura patološkog materijala na suspektne mikoze uzrokovane plijesnima

Patološki materijal se može pregledati u nativnim i obojenim preparatima. Predmetna stakla i pokrovna stakla namijenjena za pripremu mikrostikala treba čuvati u mješavini alkohola i etera (1:1) kako bi se izbjegla kontaminacija zraka mikobiotom. Prije upotrebe stakalca i pokrovna stakalca steriliziraju se na plamenu plamenika.

Mikroskopiranje materijala

MIKROSKOPIJA sputuma. Za pripremu nativnih pripravaka, ispljuvak se prenosi u sterilnu Petrijevu zdjelicu i ispituje na crnoj pozadini kako bi se otkrile male čestice (grudice). Kvržice mogu biti gnojne, gnojno-sluzave, gnojno-krvave. Veličina grudica varira u veličini unutar 0,3-3 mm u promjeru, njihova boja može biti siva, žućkasta, zelenkasta. Za pripremu nativnih stakalaca pojedinačne se grudice disekcijskim iglama ili bakteriološkom petljom prenesu u kap alkohola s glicerinom ili u kap 10% otopine KOH. Pokrijte pokrovnim staklom, lagano pritisnite iglom za disekciju i mikroskopom pri malom (1:80, 10x okular i 8x objektiv) i velikom (1:400, 10x okular i 40x objektiv) mikroskopskom povećanju.

Pripravci od voda za ispiranje, eksudata, kao i žuči, urina, želučanog soka i likvora pripremaju se iz nativnog sedimenta ili iz sedimenta dobivenog centrifugiranjem (na 1500 o/min 5 minuta). Sediment se petljom ili Pasteur-ovom pipetom prenese u kap 10%-tne otopine KOH na predmetno stakalce, pokrije pokrovnim stakalcem i pregleda pod malim i velikim povećanjem mikroskopa.

Za pripremu obojenih preparata, grudice ili kapljice sedimenta koje treba ispitati ravnomjerno se rasporede iglama za disekciju ili manjim stakalcem po površini sterilnog stakalca dok se ne dobije tanak razmaz. Dobiveni razmaz se suši na zraku, fiksira metilnim alkoholom ili Nikiforovljevom smjesom (jednaki dijelovi 96% etilnog alkohola i etera) 3-5 minuta ili tri puta žareći na plamenu plamenika. Fiksirani razmaz boji se metodom po Gramu, PAS metodom i kalkofluor bijelim. Obojeni uzorak se mikroskopira pomoću sustava uronjenog mikroskopa (1:900, 10x okular, 90x objektiv).

Sjetveni materijal

Kod pretrage bilo kojeg patološkog materijala na filamentozne gljive inokulira se na krutu Sabouraud podlogu ili sladovinu uz dodatak penicilina i streptomicina (100-200 jedinica/ml podloge). Sjetva se provodi u dva ponavljanja, uzimajući u obzir različite temperaturne uvjete za uzgoj nitastih gljiva (+37 o C i +28 o C), uvijek na 3 točke u središtu čašice. Vrijeme inkubacije je 4-5 dana.

Sputum (odabrane grudice) prenosi se bakteriološkom petljom ili Pasteur-ovom pipetom na površinu Sabouraudovog medija ili sladovine. Mjesto zasijavanja označeno je olovkom na stražnjoj strani dna Petrijeve zdjelice. Zasađene Petrijeve zdjelice stavljaju se u termostat s poklopcem okrenutim prema gore.

Nakon određenog razdoblja inkubacije ispituju se posude sa sjemenkama i ako se otkrije sporulacija, utvrđuje se kultura gljivica. Ako nema sporulacije, gljiva se subkulturira na Czapekovu diferencijalnu podlogu za daljnju identifikaciju.

Sediment vode od ispiranja bronha, maksilarnih šupljina, eksudata, urina, želučanog soka (nativnog ili nakon centrifugiranja) uzima se pipetom i inokulira u volumenu od 0,1 ml. Izmet se razrijedi 1:10 (1 g izmeta i 9 ml tekućine) u tekućem Sabouraudovom mediju ili tekućoj sterilnoj izotoničnoj otopini natrijevog klorida, emulgira se, ostavi se 10 minuta da se taloži kako bi se velike čestice taložile, a supernatant se inokulira u volumen od 0,1 ml. Iscjedak iz vanjskog zvukovoda i ždrijela uzet tupferom inokulira se tako da se tupferom sa svake strane pažljivo prijeđe preko površine hranjive podloge. Brisevi iz briseva mogu se inokulirati. Da bi se to postiglo, tamponi se stave u 10 ml tekućeg medija Sabouraud ili tekuće sladovine sa staklenim kuglicama i emulgiraju 10 minuta, inokuliraju s 0,1 ml ispiranja brisa s travnjakom (prema Leshchenko V.M., 1973), ili na tri točke.

Ljuskice kože i noktiju stavljaju se na površinu hranjivog medija, pažljivo ih pritiskajući.

Sediment cerebrospinalne tekućine (centrifuga na 1500 okretaja u minuti tijekom 5 minuta) inokulira se u dvije čaše medija od 0,1 ml, a ostatak se inokulira u medij za obogaćivanje (Sabouraud tekući medij ili tekuća sladovina), izliven u epruvete od 5 ml. Inokulirane posude se inkubiraju kao i obično, a epruvete inokulirane na medij za obogaćivanje inkubiraju se na + 28 C 10 dana.

Ako postoji rast filamentozne gljive na čvrstim podlogama, njezina kultura se određuje iz ove inokulacije; ako nema rasta na Sabouraud agaru ili sladovinom agaru, gljiva se proučava iz podloge za obogaćivanje. Da bi se to postiglo, gljivična kultura se ponovno uzgaja na Czapekovom diferencijalnom gustom mediju i zatim identificira.

Od komadića tkiva organa (biopsija, obdukcija) napravi se otisak na površini čvrste podloge pri čemu se prerezana strana komadića pregledava na tri točke. Istodobno se komadići tkiva stave u 50 ml tekućeg hranjivog medija (Saburo, sladovina).

Ako se sumnja na fungemiju, krv se ispituje u dva do tri ponavljanja. Inokulirajte 5 odnosno 10 ml krvi u 50 odnosno 100 ml Sabouraudovog tekućeg medija s 2% glukoze. Usjevi se uzgajaju na +37 C i +28 C 10 dana. Prvi pregled usjeva provodi se nakon 5 dana, drugi - nakon 10 dana. Petog dana možete promatrati rast filamentne gljive u obliku filca na dnu i površinskog filma. Micelij se subkulturira na Czapekovu diferencijalnu podlogu radi utvrđivanja roda i tipa gljive. Ako se 5. dan ne primijeti rast gljivica, usjevi se čuvaju do 10 dana, a ako nema rasta, rezultati testa se bilježe kao negativni.

Kod sjetve na tri točke, rast gljivice na dvije i tri točke definiran je kao dijagnostički značajan, u jednom trenutku - slučajan. Ako je potrebno, moguća je ponovna sjetva.

Identifikacija izoliranih kultura plijesni

Nakon izolacije kulture, filamentozne gljive se subkulturiraju na Czapekovu diferencijalnu podlogu za generičko i, ako je moguće, određivanje vrste.

U praksi dijagnostičkih laboratorija, u pravilu, koriste kriterije kulture i morfološke identifikacije: procjenjuju obrazac rasta gljivične kulture na agarskom mediju (kulturna dijagnostika, makromorfologija) i mikromorfologiju gljive.

U teškim slučajevima koriste se dodatne dijagnostičke metode (proučavanje enzimske aktivnosti, temperaturne karakteristike rasta nekih plijesni).

Pojam makromorfologije (kulturne karakteristike) uključuje strukturu kolonije (pahuljasta, pustena, baršunasta, paučinasta, vunasta, raščupana, brašnasta, itd.), površinu (ravna, naborana, kvrgava, kupolasta, jezgrasta, zonalna , itd.), pigmentacija gljivične kolonije i supstrata (razne nijanse zelene, plave, ljubičaste, crne, sive itd.), prisutnost eksudata na površini kolonije.

Mikromorfologija gljive iz kulture proučava se preparatima koji se, ovisno o rodu gljive, pripremaju na sljedeći način: kap tekućine za pripremu preparata (jednaki dijelovi alkohola, glicerina i vode) stavi se na čašu. tobogan; u njega se stavi komadić micelija koji se mikološkom lopaticom odsiječe od kolonije u obliku trokuta, zahvati središnji i periferni dio, te se odrezani komad ispravi s dvije igle za seciranje pazeći da se izbjegne stvaranje mjehurića zraka. . U nekim slučajevima (mucor i rhizopus) pri pripremi lijeka micelij se raširi na suho stakalce, na njega se nanese kap tekućine i prekrije pokrovnim stakalcem. Preparati se promatraju pod mikroskopom pri malom i velikom povećanju. Proučavaju se supstrat i zračni micelij, bilježi se prisutnost ili odsutnost pregrada (pregrada) te se obraća pozornost na prirodu sporulacije: konidiofore s konidijama i sporangije sa sporangijesporama.

Konidiofori se razlikuju po strukturi: od jednostavnih pojedinačnih hifa koje nose spore do razgranatih stablolikih formacija. Konidiofori su smješteni pojedinačno ili u skupinama; značajno se razlikuju od vegetativnih hifa micelija, bezbojni ili obojeni, uzlazni, uspravni, kaskadni, puzavi. Mogu se sastojati od jedne stanice i od velikog broja stanica različitih oblika i veličina, od kojih svaka ima svoje ime. Na primjer, u rodu Aspergillus, konidiofor se sastoji od sljedećih stanica: stabljika, vezikularna oteklina, sterigmata, lanci konidija. U rodu Penicillium, konidiofor ima oblik jednostavnih ili složenih četkica, koje se također sastoje od različitih stanica: grana ramije, metula, fialida, lanaca konidija.

Plijesni Mucor i Rhizopus sporuliraju u obliku sporangija s endosporangiosporama. Sporangij se nalazi na kraju sporangiofora. Sporangiji su kuglastog ili kruškolikog oblika, većina s posebnim stupićem, koji je nastavak sporangiofora unutar sporangija. Sporangiospore su okrugle, bezbojne ili obojene.

Konidije (spore) plijesni su polimorfne (cilindrične, kuglaste, ovalne, elipsoidne, jajolike, kruškolike, batičaste), jednoćelijske i višestanične, različite veličine i boje, pojedinačne, lančane ili skupljene u glavice i raspoređene u grozdovima. Površina konidija može biti glatka, hrapava, trnasta, bradavičasta, čekinjasta itd.

Mikroskopski pregled i kultura patološkog materijala na mikoze uzrokovane dimorfnim gljivama

Kod ovih mikoza potrebno je voditi računa o dimorfizmu uzročnika.

Patološki materijal za primarne patogene mikotične infekcije (kokcidioidoza, histoplazmoza, parakokcidioidoza, sjevernoamerička blastomikoza), kao i kromomikoza, sporotrihoza i micetomi mogu biti gnoj, sputum, strugotine ulcerativnih lezija na koži i sluznicama, cerebrospinalna tekućina, krv, biopsirani komadi iz lezija poraza.

Teškoća u identifikaciji uzročnika ovih mikoza je u tome što će se zbog njihovog dimorfizma mikroskopiranjem patološkog materijala otkriti tkivni oblici gljive, najčešće stanice kvasca različite morfologije ili kuglice s endosporama, potpuno različite od elemenata iste. gljiva ekstrahirana iz svoje kulture uzgojene na temperaturi od +28 - +30 o C na običnoj Sabouraud agavi, s pH vrijednošću bližom kiseloj. Međutim, mora se imati na umu da je kod nekih dimorfnih gljiva moguće u kulturi dobiti kvasnu fazu rasta gljive, koja često podsjeća na tkivni oblik, ali kada se uzgaja u medijima bogatim proteinima s blago alkalnom reakcijom (pH = 7,6 - 7,8 ), na temperaturi od 37 o C.

Gore navedeno vrijedi za gljive: Histoplasma capsulatum, Blastomyces dermatitidis, Paracoccidioides brasiliensis, Coccidioides immitis I Sporothrix schenckii.

Laboratorijska dijagnoza mikoza uzrokovanih ovdje navedenim gljivicama temelji se na mikroskopskom otkrivanju tkivnih oblika u patološkom materijalu, izdvajanju kulture uzročnika i njegovoj identifikaciji kulturološkim i morfološkim karakteristikama.

Mikroskopski pregled provodi se u neobojanim preparatima na stakalcu u kapi 10% otopine kaustične lužine ili mješavine alkohola i glicerina u jednakim volumenima ili u obojenim razmazima (tablica 3).

Inokulacija patološkog materijala provodi se na gore navedene hranjive podloge u Petrijeve zdjelice bakteriološkom lopaticom prema općeprihvaćenoj metodi.

2.5. Mikroskopski pregled i kultura patološkog materijala na dermatomikoze (keratomikoza i dermatofitoza).

Predmet istraživanja su površinske mikoze, koje zahvaćaju samo keratinski sloj epidermisa, i dermatofiti, koji zahvaćaju kožu i njezine dodatke (kosa, nokti), čiji su uzročnici gljive srodne rodu Trichophyton, Microsporum i Epidermophyton.

Laboratorijska mikološka istraživanja uključuju iste korake kao i kod drugih mikoza: mikroskopiranje materijala i dobivanje čiste kulture prilikom sjetve. Ispravno uzimanje materijala uvelike utječe na uspjeh mikroskopije i uzimanja kulture.

Patološki materijal se pregledava što je prije moguće nakon uzimanja. Prvo se dijeli na tri dijela: za mikroskopiranje, uzgoj i ponovno ispitivanje. Mikroskopiranje patološkog materijala najjednostavniji je i najbrži način utvrđivanja prisutnosti gljivica u tkivima. Usitnjeni materijal stavi se u sredinu predmetnog stakla u kap 10-20% otopine KOH i lagano zagrije na plamenu alkoholne lampe dok se uz rub kapi ne dobije bjelkasti rub, pokrije pokrovnim staklom. i ostaviti 5-10 minuta (kosa, ljuskice kože) i 30 - 40 minuta (nokat) za maceraciju i bistrenje; materijal se može obrađivati ​​bez zagrijavanja, za to se preparat ostavi u 20% otopini KOH 30-60 minuta.

Mikroskopirajte prvo pod mikroskopom s malim, a zatim s velikim povećanjem.

Kultura je neophodna za izolaciju i identifikaciju patogena. Inokulirani materijal se usitnjava što je više moguće i u minimalnim količinama inokulira na kosi agar u epruvetama na 2-3 točke na razmaku od 1-2 cm Najmanje 2-3 epruvete (kosa) i 4-5 epruveta. (ljuskice kože i noktiju) inokuliraju se materijalom jednog uzorka. Za primarnu izolaciju dermatofita najbolje je koristiti standardni Sabouraud agar medij s 2-4% glukoze ili sladovini agar koji sadrži antibakterijske antibiotike (penicilin 50 μg/ml + streptomicin 50 μg/ml ili biomicin 200 jedinica/ml) i anti- antibiotik plijesni aktidion (cikloheksimid) 0,1 - 0,5 mg/ml. Actidione ne utječe na rast dermatofita i inhibira mnoge plijesni, kao i vrste Candida i Cryptococcus.

Usjevi se inkubiraju na 22-30 o C (najbolje 28 o C). Pojava rasta dermatofita uočava se od 4. do 12. dana inkubacije na mjestima sjetve uz rubove apliciranog materijala. Ako nema rasta unutar 30 dana, rezultati kulture se smatraju negativnima. U optimalnim uvjetima, primarne kulture mnogih dermatofita mogu se identificirati 7-10 dana nakon sjetve, ali usjeve treba pratiti 20-30 dana. Primarne kulture rastu relativno sporo i kada se koriste podloge bez antibiotika, dermatofite mogu potisnuti brže rastuće bakterije ili plijesni. Kada se pojavi rast u primarnom nasađivanju, potrebno je prosijati s ruba kolonije na svježu diferencijalnu podlogu kako bi se dobila čista kultura, koja će poslužiti kao materijal za identifikaciju izoliranog dermatofita.

2.6. Serološke metode dijagnostike mikoza

Značenje seroloških metoda sastoji se uglavnom u sljedećem: identifikacija bolesnika s vjerojatnim invazivnim mikozama; potvrda mikotične prirode alergijskih bolesti; probirni pregled rizičnih skupina za razvoj mikoza.

Lažno pozitivni rezultati seroloških testova mogući su s mikokarijom i kod zdravih ljudi senzibiliziranih gljivičnim antigenima; negativni testovi mogu se pojaviti u imunodeficijenciji čak i na pozadini tekuće invazivne mikoze.

Rutinske općeprihvaćene metode serološke dijagnostike mikoza
opisano dovoljno detaljno / P.N. Kashkin, V.V. Lisin. „Praktično
vodič za medicinsku mikologiju", Medicina, 1983/. Međutim, u novije vrijeme
desetljeća došlo je do primjetnih pomaka u metodološkim pristupima /Elinov N.P.,
2001/. Predloženi su originalni postupci za otkrivanje antigena i protutijela
neki metaboliti gljivičnih stanica; stvoreni su posebni dijagnostički testovi
setovi („kitovi”), na primjer Pastorex ® Candida, za određivanje u
reakcije "lateks aglutinacije" ponavljajućih oligomanoznih epitopa antigenskih
strukture/izražene na velikom broju makromolekula
gljiva; za određivanje Candida mannan antigena, npr.
seruma bolesnika s kandidemijom, možete koristiti Platelia ® Candida kit.
Korištenjem prvog skupa, prag za određivanje antigenskih struktura je 2,5 ng/ml, korištenjem drugog u kombinaciji s _____________ metodom, prag za određivanje - 0,5 ng/ml.

Uzročnici mikoza najčešće se identificiraju tijekom laboratorijskih ispitivanja različitih kliničkih materijala

Krv

• Candida
• Cryptococcus
• Uzročnici micelija rijetko se otkrivaju krvnim pretragama osim Fusarium

Cerebrospinalna tekućina

• Candida
• Cryptococcus

Gnojni iscjedak iz apscesa, čira itd.

• Candida
• Cryptococcus
• Fusarium
• Aspergillus
• Sporotrix

Respiratorni sekret (sputum, BAL tekućina, biopsija bronhalne četke, transtrahealni aspirat)

• Aspergillus
• Candida
• Cryptococcus
• Mucor
• Scedosporium
• Rhizopus
• Sporotrix

Iscjedak, biopsijski materijal iz rana

• Aspergillus
• Candida
• Fusarium
• Rhizopus

Ostali biosupstrati

• Candida
• Cryptococcus

Materijal iz prsne i trbušne šupljine; sinovijalna tekućina

• Aspergillus
• Candida
• Fusarium

Staklasto tijelo

• Candida
• Aspergillus

IV. Kriteriji za dijagnozu sistemskih mikoza: klinički i laboratorijski parametri konačne dijagnoze

Ezofagitis

• prisutnost karakterističnih promjena tijekom esophagoscopy
• identifikacija gljivica tijekom uzgoja biopsijskog materijala
• prisutnost pseudomicelija u obojenim razmazima ili znakovi invazivnog rasta gljivica u biopsijskom materijalu

Upala pluća

Upala pluća zbog Candida spp.

• akutne infiltrativne promjene na rendgenskoj snimci prsnog koša koje koincidiraju s kliničkim manifestacijama gljivične pneumonije
• identifikacija Candida spp. Pri kulturi materijala iz donjeg respiratornog trakta dobivenog transtorakalnom biopsijom, transbronhijalnom biopsijom, nalazima biopsije pluća ili torakoskopski vođenom biopsijom
• identifikacija pseudomicelija u adekvatno obojenom biopsijskom materijalu

Upala pluća zbog Aspergillus spp., Fusarium spp., Scedosporium apiospermum

• identifikacija gljivičnih elemenata u tkivima i pozitivna kultura
• perzistentni ili progresivni infiltrati u plućima, otporni na antibiotsku terapiju
• otkrivanje jednog od ovih patogena kulturom sputuma ili BAL
• klinički znakovi upale pluća (kašalj, otežano disanje, "pleuralna" bol, zviždanje, šum pleuralnog trenja)
• karakteristične promjene na RTG ili CT snimci pluća:

Subpleuralne infiltrativne, nodularne, oštrokutne ili kavernozne promjene

Simptom "halo" na CT snimci pluća

Napredovanje infiltracijskih promjena s stvaranjem šupljina i pojavom simptoma "srp".

• nepostojanje drugih uzročnika pri kultivaciji BAL tekućine koji bi mogli izazvati prikazane promjene u plućima

Upala sinusa

• klinički i radiološki znakovi akutnog sinusitisa
• mikroskopski i kulturalni znakovi mikoze pri pregledu aspirata ili biopsijskog materijala

Infekcija mokraćnih puteva

• otkrivanje >1x10 CFU/ml s ponovljenim kulturama pravilno prikupljenog urina

Fungemija

• Jednokratna detekcija gljivica hemokulturom u razdoblju porasta tjelesne temperature > 38 o C

Akutna diseminirana mikoza

• Fungemija u kombinaciji s kulturalnim ili histološkim znakovima oštećenja dubokih tkiva (uključujući potkožno tkivo) ili identifikacija patogena iz dva normalno sterilna biosupstrata

Endoftalmitis

• oftalmološki znakovi endoftalmitisa
• identifikacija uzročnika iz oka, krvi ili drugih žarišta diseminacije

Apsces ili osteomijelitis

• radiografski/CT/MRI znakovi osteomijelitisa
• identifikacija uzročnika u aspiratu ili biopsijskom materijalu

Meningitis

• određivanje promjena u likvoru koje potvrđuju prisutnost upale, te otkrivanje gljivica mikroskopijom likvora
• detekcija gljivica kulturom likvora ili određivanjem antigena Cr.neoformans, Candida i Aspergillus u CSF

Kronična diseminirana (hepatolienalna) kandidijaza

moguće

• trajna ili povremena vrućica nakon završetka razdoblja neutropenije u kombinaciji s karakterističnim znakovima oštećenja jetre, slezene ili bubrega

dokazano

• navedeno u kombinaciji sa sjetvom Candida spp. iz krvi prije pojave znakova oštećenja jetre, slezene ili bubrega ili uz kulturološke, histološke znakove kandidijaze u biopsijskom materijalu iz lezija

V. UZROČNICI GLJIVIČNIH INFEKCIJA

Postoje različiti principi klasifikacije gljivičnih infekcija i njihovih uzročnika. Čini nam se da je praktički najjednostavnije i najsvrsishodnije patogene gljive podijeliti u 5 glavnih skupina:

1. Uzročnici površinskih mikoza;

2. Uzročnici dermatomikoze;

3. Uzročnici potkožnih mikoza;

4. Uzročnici dubokih mikoza (primarni patogeni mikromiceti, uzročnici oportunističkih infekcija).

5. Uzročnici pseudomikoze.

* Treba naglasiti da uzročnici prve tri skupine u imunosuprimiranih bolesnika mogu izazvati fungemiju i višestruke lezije organa.

U sljedećim odjeljcima dajemo opis uzročnika mikoza prema jedinstvenoj shemi: njegov naziv prema prihvaćenoj nomenklaturi, popis sinonima, makroskopske karakteristike kolonija na hranjivim podlogama i mikroskopske karakteristike gljivičnih elemenata vidljivih pod mikroskop u nativnim preparatima i iz kolonija. Daju se i podaci o rasprostranjenosti gljiva u prirodi te su navedene bolesti koje uzrokuju.

Laboratorijska dijagnostika gljivičnih bolesti temelji se na otkrivanju gljivice i određivanju njezina roda i vrste. Sastoji se od dvije glavne faze: mikroskopske i kulturalne studije.

Mikroskopski pregled

Mikroskopski pregled je prva i važna karika u potvrdi preliminarne dijagnoze.

Uspjeh mikroskopskog pregleda uvelike ovisi o pravilnom prikupljanju patološkog materijala. Za mikroskopski pregled potrebno je odabrati dlaku koja ima vidljive znakove gljivičnog oštećenja (tupa, slomljena, zadebljana). Dlačice koje su promijenile izgled uklanjaju se epilacijskom pincetom. Da biste otkrili pojedinačne zahvaćene dlake s mikrosporijom, možete koristiti fluorescentnu svjetiljku s Wood filtrom (zelenkasto-plavi sjaj).

Pri odabiru zahvaćene kose mogu se koristiti brojne dodatne karakteristike. Dlaka zahvaćena mikrosporumima ima sivi omotač spora smještenih izvana pri dnu. U slučaju kronične trihofitoze, kratke sijede oboljele dlake, zakrivljene u obliku "zareza" i "upitnika", kao i "crne točkice" (zadebljane crne oboljele dlake odlomljene na ušću folikula) nalaze se u debljina ljuski. U slučaju infiltrativno-gnojne trihofitoze, za mikroskopski pregled, osim zahvaćene kose, možete koristiti gnoj i kore iz lezije.

S kožnih lezija s mikrosporijom, trihofitozom i mikozom ingvinalnih nabora potrebno je ostrugati ljuske s periferne zone lezije, gdje se gljivica nalazi u većim količinama. Velus dlaka se sastruže zajedno s ljuskicama kože.

Prilikom pregleda zahvaćene kose mikrosporijom i trihofitozom, pozornost se posvećuje položaju spora (unutar ili izvan kose) i njihovoj veličini. Ovi podaci omogućuju u nekim slučajevima razjašnjenje dijagnoze, kliničkog oblika mikoze i epidemiologije.

Kod interdigitalnog oblika mikoze stopala za mikroskopski pregled koriste se ljuskice kože i ostaci maceriranog rožnatog sloja. Područje nokta koje je potrebno uzeti za mikroskopski pregled ovisi o obliku onihomikoze. S površinskim oblikom potrebno je ostrugati površinu ploče nokta.

U najčešćem distalno-lateralnom obliku koristi se struganje s ležišta nokta, ispod ploče (subungvalna hiperkeratoza) s dijelom odsječenog promijenjenog lista nokta. Za proksimalni subungualni oblik koriste se posebne metode prikupljanja materijala (bušenje prozora bušilicom, biopsija nokta).

Kod skvamozno-hiperkeratotičnog oblika mikoze stopala, ljuskice se stružu s površine tabana. U dishidrotičnom obliku mikoze stopala, poklopci mjehurića su odrezani za pregled.

Tehnika pripreme materijala za mikroskopsko ispitivanje kose . Mala kap od 30% KOH nanese se na predmetno staklo i u njega se stavi zahvaćena dlaka iglom za disekciju. Kapljica s kosom lagano se zagrijava na plamenu alkoholne svjetiljke sve dok se para ne pojavi iznad površine tekućine ili rub kristala ne ispadne duž ruba kapi lužine. Nakon prekrivanja pokrovnim stakalcem, višak lužine se ukloni filter papirom. Lijek se ispituje prvo pod malim, a zatim pod velikim (x 400) povećanjem mikroskopa.

Ljuskice kože i noktiju . Tanke ljuskice nokta za mikroskopski pregled stavljaju se na predmetno staklo u kap 30% KOH i zagrijavaju, dodajući lužinu kako isparava. Ohlađeni, neobojeni uzorak se pokrije pokrovnim stakalcem i pregleda pod mikroskopom.

Debele ljuskice kože i noktiju stave se u epruvetu za centrifugu i napune s nekoliko kapi 30% KOH. Epruveta se zagrije do vrenja i ostavi 20-30 minuta. Dio omekšanog materijala se staklenim štapićem prenosi na predmetno staklo, pritišće šibicom dok se ne pojavi “oblak”, nakon čega se ispituje pod mikroskopom.

Gnoj . Kap gnoja se pomiješa s kapi alkohola i pola-pola glicerina i pregleda u nativnom preparatu.

Kulturološka dijagnostika

Kulturalna dijagnostika provodi se radi definitivnog razjašnjenja dijagnoze i razjašnjenja epidemiologije. Uključuje dobivanje kulture gljivice nakon čega slijedi mikroskopski pregled.

Zahvaćena kosa, ljuskice (koža i nokat), mjehurići ili gnoj se cijepe na umjetnu hranjivu podlogu. Po izgledu divovskih kolonija na Petrijevim zdjelicama može se steći predodžba o rodu uzročnika (Microsporum, Trichophyton, Epidermophyton), njegovom tipu (L. canis ili ferrugineum, T. violaceum, verrucosum ili gypseum). Konačno razjašnjenje roda i vrste gljive moguće je samo na temelju mikroskopskog pregleda dobivene kulture.

Laboratorijska dijagnostika površinske kandidijaze

Za laboratorijsko ispitivanje gljivica sličnih kvascima potreban je svjež materijal. Za mikroskopski pregled, ovisno o kliničkim manifestacijama i lokalizaciji lezija, ljuskice kože, strugotine s noktiju, kapljica gnoja ispod nokta, bjelkaste naslage sa zahvaćenih područja sluznice usne šupljine i vanjskog spolovila, stijenki rodnice, mogu se uzeti strugotine sa sluznice membrane uretre, kao i ispiranje s crvenog ruba usana, zahvaćena područja kože velikih i malih nabora.

Ovisno o mjestu lezije i prirodi kliničkih manifestacija, materijal za istraživanje uzima se pamučnim štapićem, skalpelom, petljom itd. Ljuskice kože i noktiju, ostaci epidermisa i strugotine sluznice su pre- tretiran sa 30% KOH. Patološki materijal se ispituje u neobojenim ili obojenim preparatima.

U prvom slučaju, materijal se pomiješa s jednakom količinom alkohola i glicerina. Kada se boje po Gramu, stanice kvasca i pseudomicelij izgledaju tamnoljubičasto, po Ziehl-Neelsenu - plavo, a po Romanovsky-Giemsa - ružičasto-ljubičasto. U ovom slučaju, posebnost stanice kvasca je pupanje - otkrivanje figure "pješčanog sata". Uzimanje materijala sa sluznice usne šupljine, genitalija, s kože crvenog ruba usana, iz kutova usta, s kože velikih i malih nabora provodi se sterilnim tupferom. Nakon uzimanja materijala, bris se stavlja u drugu sterilnu epruvetu s tekućom sladovinom. Epruveta s brisom šalje se u mikrobiološki laboratorij. Izolacija čiste kulture gljivica sličnih kvascima iz roda Candida provodi se prema općeprihvaćenim mikrobiološkim metodama.

Prema znanstvenicima, 70% svjetske populacije ima simptome mikoze stopala. Ova bolest zahvaća interdigitalne nabore i kožu na tabanima. Uzročnik bolesti je gljiva koja je isprva pronađena samo u ograničenim područjima jugoistočne Azije i Afrike. Prvi svjetski rat, uzrokujući masovnu migraciju ljudi i pogoršanje sanitarnih uvjeta, doveo je do širenja bolesti po cijelom svijetu.

Što uzrokuje mikozu stopala

Glavni uzročnik bolesti je Trichophyton rubrum. Infekciju mogu uzrokovati T. mentagrophytes i Epidermophyton floccosum. Gljivice roda Candida i mikroorganizmi plijesni mnogo rjeđe mogu postati patogeni mikrobi.

Najznačajniji čimbenici rizika za nastanak bolesti:

• dijabetes;
• stanje imunodeficijencije (AIDS);
• ravna stopala;
• ateroskleroza perifernih arterija;
• proširene vene donjih ekstremiteta.

Vanjski uvjeti koji pogoduju razvoju infekcije:

• zatvorene neupijajuće cipele;
• ozljede stopala (žuljevi, abrazije);
• bavljenje sportom.

Simptomi atletskog stopala najčešće se javljaju kod odraslih muškaraca. Djeca rijetko obolijevaju.

Simptomi mikoze stopala

Kako se bolest razvija, pojavljuje se ljuštenje i suha koža, svrbež i peckanje, osobito u međuprostorima između prstiju, te pojava bolnih pukotina ispod prstiju. Ponekad su prvi simptomi mikoze stopala mjehurići koji pucaju s stvaranjem erozija. Često se bolest javlja u izbrisanom obliku, očituje se samo blagim ljuštenjem, koje podsjeća na brašno, u naborima između prstiju.

Postoje 4 klinička oblika bolesti.

Interdigitalna ili intertriginozna varijanta je najčešća. Koža između prstiju pocrveni, puca, površinski sloj se vlaži i ljušti. Ovi se znakovi protežu do tabana i praćeni su jakim svrbežom i pečenjem. Često je pridružena bakterijska upala.

Skvamozno-hiperkeratozna varijanta povezana je s jakim zadebljanjem i pucanjem kože. Potplat pocrveni i ljušti se. U predjelu pete pojavljuju se duboke, bolne pukotine, svrbež je obično nekarakterističan. Ovo je često bilateralna lezija i također se naziva "mokasinovo stopalo".

Dishidrotična varijanta popraćena je pojavom više malih, svrbežnih, bolnih mjehurića. Oni se spajaju jedni s drugima, tvoreći velike mjehuriće. Poklopci mjehurića pucaju, otkrivajući sjajnu, ranjivu, bolnu površinu - eroziju. Vanjske manifestacije nalikuju ekcemu.

Mikrobna upala često je povezana s povećanjem ingvinalnih limfnih čvorova, vrućicom, bolovima u nozi, mučninom, glavoboljom i drugim znakovima intoksikacije. Kod dishidrotičnog oblika često se javlja alergija na gljivice - mikotični ekcem. Prati ga osip na područjima tijela koja nisu zaražena gljivicama, na primjer, na rukama.

Izbrisana verzija obično prolazi nezapaženo. Prati ga lagano ljuštenje kože između velikog i kažiprsta i/ili domalog i malog prsta na stopalu. Nema svrbeža.

Znakovi mikoze stopala

Različite vrste mikoza stopala mogu biti neovisne bolesti ili se javljaju kao dio opće gljivične infekcije tijela. Ponekad se znak "dvije noge - jedna ruka" javlja s uključenošću ovih organa. Može se pojaviti onihomikoza, gljivična destrukcija nokta. Ponekad su istovremeno zahvaćeni i ingvinalni nabori.

Glavni simptomi i liječenje mikoze stopala prikazani su na fotografiji:

Ljuštenje kože

Suha i ispucala koža

Mjehurići i erozije

Dijagnostika

Iskusni dermatolog već pri prvom pregledu može prepoznati različite vrste mikoza stopala. Međutim, za potvrdu dijagnoze potreban je mikroskopski pregled. Za to se koriste ljuske iz lezije, ostrugane lopaticom i tretirane otopinom lužine. Dobiveni materijal se ispituje pod mikroskopom i otkrivaju se patogeni.

Izravna mikroskopija je brza, jeftina i jednostavna za izvođenje, ali ne može odrediti koja vrsta gljivica uzrokuje bolest. Stoga se materijal inokulira na hranjivu podlogu, nakon čega slijedi kulturalni pregled dobivenog materijala. Međutim, moguće je dobiti kulturu gljivice nakon otkrivanja pod mikroskopom samo u 20-6% slučajeva.

Vrste liječenja mikoze stopala

Lijekove za liječenje gljivičnih bolesti treba propisati dermatolog. Obično se liječenje mikoze stopala provodi vanjskim sredstvima.

Jedan od učinkovitih lijekova za ovu bolest je klotrimazol. U našoj trgovini možete ga kupiti po niskoj cijeni. Lijek u obliku losiona Klotrimazol za nokte i kožu suzbija razmnožavanje gljivica u debljini stratum corneuma epitela. Ako su zahvaćeni interdigitalni nabori, losion se nanosi svakodnevno na čistu, suhu kožu stopala tjedan dana, po potrebi i duže.

U slučaju jakog orožnjavanja i pucanja kože potrebno je najprije ukloniti mrtve naslage kože. To zahtijeva korištenje lijekova za piling. Na primjer, propisana je salicilna mast, kreme s mliječnom kiselinom ili ureom. Nakon uklanjanja rožnatih naslaga losion se koristi 1 – 2 puta dnevno.

U dishidrotičnoj varijanti, prvi korak je smanjiti plač. Za to se koriste losioni s taninom ili bornom kiselinom. U teškim slučajevima liječenju se dodaju glukokortikoidi. Zatim nanesite Clotrimazole losion prema uobičajenom režimu.

Ako je stopalo istrošeno, tretirajte ga losionom jednom dnevno tijekom 7-10 dana, ali trajanje tečaja je individualno i određuje ga liječnik.

Sustavna terapija

Dugotrajno ili rekurentno atletsko stopalo može zahtijevati oralne antifungalne lijekove. Iz probavnog trakta prelaze u krvotok, a zatim u kožu, gdje uništavaju gljivice. Koriste se tri glavna lijeka:

• flukonazol;
• itrakonazol;
• terbinafin

Trajanje uzimanja ovih lijekova je najmanje mjesec dana. Cijena im je prilično visoka. Stoga je spriječiti mikozu stopala uvijek lakše i isplativije nego liječiti.

Sustavni lijekovi se posebno često propisuju ako je gljiva zahvatila ne samo kožu, već i nokte. U tom slučaju, lijekovi se nakupljaju u rastućem dijelu ploče nokta, a zdravi nokat postupno izrasta. Kako bi se poboljšao učinak, nokat se može potpuno ukloniti kirurški, nakon čega se obnavlja bez gljivica.

U starijih bolesnika često je potrebna kombinacija uklanjanja nokta te sistemske i lokalne antifungalne terapije. U ovoj skupini bolesnika nokti često sporo rastu, prokrvljenost stopala je poremećena, pa je za postizanje učinka potrebna velika doza lijekova i dugotrajno liječenje.

Liječenje narodnim lijekovima

Korištenje samo recepata tradicionalne medicine neće pomoći da se riješite gljivica. Međutim, takav dodatak konvencionalnoj terapiji skraćuje tijek liječenja i ubrzava oporavak.

Korisno je svake večeri napraviti tople kupke za stopala u trajanju od 10 minuta, zatim stopala temeljito potapkati ručnikom, posebno između prstiju, te namazati ljekovitim losionom za nokte i kožu Clotrimazole. Korisni sastojci za kupku koji ublažavaju upalu i smanjuju svrbež:

• biljka celandin i gospina trava;
• korijenje čička;
• trava pelina;
• lišće eukaliptusa;
• iglice jele;
• svježi talog od kuhane mljevene kave;
• sol;
• mješavina ribanog sapuna za pranje rublja, sode bikarbone, kalijevog permanganata i senfa u prahu.

Zahvaćena područja mogu se mazati brezovim katranom ili samostalno pripremljenom mašću od 100 grama maslaca pomiješanog sa zgnječenom glavicom češnjaka. Koristan je i propolis kojim se mogu priviti bolni nokti.

Korisno je napraviti obloge od prirodnih lijekova. Najprije se ostave 1 do 2 sata, a ako podnose i preko noći. Koriste se sljedeći sastojci:

• pulpa bundeve;
• zgnječeno sjeme crne rotkve;
• paprena metvica, mljevena sa soli;
• lišće čička ili rowan, malo omekšano valjkom.

Učinkovito je mazanje oboljelih mjesta sokovima nekih biljaka i drugim prirodnim lijekovima:

• alkoholna otopina propolisa;
• sok od luka ili češnjaka;
• sok od celandina;
• ulje čajevca.

Sprječavanje bolesti

Kako bi se izbjegla mikoza ili spriječio njezin povratak, potrebna je jednostavna, ali stalna prevencija:

• ljeti nosite prozračne cipele od prirodnog materijala;
• kada posjećujete bazene, kupke, javne tuševe, nosite pojedinačne gumene papuče;
• nemojte nositi tuđe cipele, na primjer, u posjeti;
• koristite samo vlastitu higijensku opremu - škare, plovućac, turpiju za nokte.

Kako bi se izbjegla ponovna infekcija, uloške i unutarnje površine cipela treba redovito tretirati dezinficijensom. Poznati narodni recept je otopina octene esencije, ali ima oštar, neugodan miris.

Liječnici preporučuju korištenje lijeka Mikospray, koji ima ne samo antifungalni, već i antibakterijski učinak. Mycospray je odličan ne samo za tretiranje cipela, već i za nanošenje na stopala prije posjeta javnim mjestima za zaštitu stopala.

Stanovnici Moskve i regije mogu kupiti lijekove za liječenje mikoze stopala i za njegovu prevenciju u našoj internetskoj trgovini. Imaju dokazanu učinkovitost i sigurnost. Njihova uporaba preporuča se svima koji se ne žele zaraziti gljivicama stopala ili ih se brzo riješiti.

Precizna dijagnostika invazivnih mikoza Nije lako. To se objašnjava ne samo poteškoćama u dobivanju kulture gljiva, već iu tumačenju rezultata istraživanja, budući da gljive, i kvasce i filamentoze, mogu kolonizirati sluznice i kontaminirati proučavane uzorke. U tom smislu, dijagnoza invazivnih mikoza temelji se na integriranom pristupu, uključujući ne samo rezultate mikoloških (kulturalnih) i seroloških (određivanje gljivičnog antigena) studija, već i kliničkih simptoma gljivične infekcije, podataka iz pomoćnih istraživačkih metoda ( kompjuterska ili magnetska rezonancija, ultrazvuk).

Europsko-američka skupina za suradnju za proučavanje invazivnih mikoza Kriteriji za dijagnosticiranje invazivnih mikoza razvijeni su u imunokompromitiranih bolesnika. Predstavljeni su 2001. na Međunarodnoj konferenciji o antimikrobnim lijekovima i kemoterapiji (ICAAC, Chicago), a 2002. u tisku. Definirani su kriteriji za dokazanu, vjerojatnu i moguću invazivnu mikozu koji se preporučuju za korištenje u kliničkim i epidemiološkim studijama.

Dokazana invazivna mikoza uzrokovana filamentoznim gljivama: otkrivanje gljivičnog micelija u biopsijama ili aspiratima tijekom histološkog ili citološkog pregleda ili izolacija kulture iz uzoraka dobivenih u aseptičkim uvjetima iz normalno sterilne lezije, što je, prema rezultatima kliničkih i radioloških studija, povezano s infekcijom, s izuzetak su studije urina i sluznice.

Dokazana invazivna mikoza uzrokovana kvasnim gljivicama: otkrivanje stanica kvasca (gljivice roda Candida mogu tvoriti pseudomicelij ili pravi micelij) u biopsijama ili aspiratima, s iznimkom uzoraka sa sluznica, ili izolacija kulture iz uzoraka dobivenih u aseptičnim uvjetima iz normalno sterilne lezije, koja prema na rezultate kliničkog i radiološkog pregleda povezanog s infekcijom, s iznimkom urina, uzoraka iz sinusa i sluznice, ili otkrivanje mikroskopijom i specifičnim bojenjem (u kapi indijske tinte, mucikarminom) stanica kvasca ili pozitivan antigen Cryptococcus spp. u cerebrospinalnoj tekućini.

Fungemija uzrokovana filamentoznim gljivama: izolacija hemokulture gljivica, s izuzetkom Aspergillus spp. i Penicillium spp., uključujući Penicillium marneffei, u kombinaciji s kliničkim simptomima infektivnog procesa kompatibilnog s izoliranim patogenom.

Fungemija uzrokovana kvasnim gljivicama: izolacija iz hemokulture Candide ili drugih gljivica kvasca iz bolesnika s kliničkim znakovima infekcije povezane s ovim patogenom.

Kompleks dijagnostičkih studija za invazivne mikoze

Biomaterijal koji se proučava	Indikacije, medij koji se koristi, značenje
Krv	Indikacije: trajna groznica (4-5 dana ili više) tijekom terapije antibioticima širokog spektra; drugi "val" vrućice tijekom terapije antibioticima Prikupljanje krvi iz vene u bočice za aerobne bakterije* ili u selektivnu podlogu za gljivice, ponavljano (2-3 puta dnevno u razmaku od 1 sat) Dijagnostički značaj: izolacija kvasnih gljiva, pažljiva interpretacija kod izolacije filamentoznih gljiva, s izuzetkom Fusarium spp.
Venski kateter	Indikacije: izolacija kvasnih gljivica iz krvi Središnji ili periferni venski kateter uklanja se u svim slučajevima izolacije gljivica iz krvi Za mikološka istraživanja koristi se aseptički uklonjen distalni dio katetera duljine 5-6 cm. Studija se provodi polukvantitativno (Maki metoda) ili kvantitativno na Sabouraudovom mediju. Dijagnostički značaj: izolacija gljivica kvasca u polukvantitativnoj studiji od 15 CFU ili više, u kvantitativnoj studiji - 103 CFU/ml ili više za potvrdu dijagnoze infekcije povezane s kateterom ili infekcije katetera
Iscjedak iz gornjeg respiratornog trakta, ispljuvak, ispiranje iz dušnika, bronhija, bronhoalveolarna tekućina za ispiranje	Indikacije: sumnja na mikoze uzrokovane filamentoznim gljivama ili Cryptococcus neoformans; dugotrajna vrućica tijekom terapije antibioticima širokog spektra i neutropenija Mikroskopiranje uzoraka s calcofluor bijelim (detekcija micelija ili pseudomicelija); sjetva na Sabouraudovu podlogu; određivanje Aspergillus antigena u tekućini bronhoalveolarnog ispiranja u prisutnosti lezija u plućima karakterističnih za invazivnu aspergilozu Dijagnostički značaj: izolacija filamentoznih gljiva ili Cryptococcus neoformans
Cerebrospinalna tekućina	Indikacije: simptomi meningitisa; otkrivanje lezije(a) u mozgu korištenjem kompjutorizirane tomografije ili magnetske rezonancije; "moždani" simptomi zbog vrućice i neutropenije Mikroskopija s kalkofluor bijelim, u kapi tinte; određivanje antigena Aspergillus, Cryptococcus; sjetva na Sabouraudovu srijedu Dijagnostički značaj: detekcija gljivica, kako kvasnih tako i filamentnih; pozitivan antigen
Biopsije, aspirati, peritonealna tekućina, pleuralna tekućina	Indikacije: klinički i/ili radiološki znakovi invazivne mikoze; groznica tijekom terapije antibioticima širokog spektra. Mikroskopija s calcofluor white, kultura na Sabouraudovom mediju Dijagnostički značaj: otkrivanje gljivica, kako kvasnih tako i filamentnih

* Učestalost izolacije gljivica iz krvi bila je identična kada je početna krv uvučena u obje bočice s medijem za kulturu bakterija i sa selektivnim medijem za gljivice. Istraživanje je provedeno bakteriološkim analizatorom VASTES 9240.

Moguća invazivna mikoza dijagnosticira se na temelju kombinacije sljedećih kriterija:
jedan znak iz kategorije mikrobioloških kriterija;
jedan znak iz kategorije "značajnih" ili dva iz skupine "manje značajnih" kliničkih simptoma infektivnog procesa.

Moguća invazivna mikoza dijagnosticira se na temelju kombinacije sljedećih kriterija:
prisutnost barem jednog čimbenika rizika koji potiče razvoj invazivne mikoze;
jedan znak iz kategorije mikrobioloških kriterija ili jedan znak iz kategorije "značajnih" (dva iz skupine "manje značajnih") kliničkih simptoma infektivnog procesa.

Koncept " moguća invazivna mikoza» Ne preporučuje se za korištenje u kliničkim ispitivanjima koja proučavaju učinkovitost antifungalnih lijekova. Ovaj izraz možete koristiti kada analizirate empirijsku terapiju protiv gljivica, epidemiološke studije i proučavate farmakoekonomiju.

Na mikološka istraživanja sterilni aspirati ili biopsije uzimaju u obzir ne samo izolaciju gljivičnih kultura, već i detekciju micelija ili pseudomicelija mikroskopijom. U histološkim preparatima Aspergillus je teško razlikovati od Fusarium spp., Sceclosporium apiospermum i nekih drugih filamentoznih gljiva. Za diferencijalnu dijagnozu potrebno je provesti imunohistokemijsku studiju s protutijelima na Aspergillus.

Izolacija gljivica kvasca iz krvi u barem jednoj studiji spada u kategoriju “dokazanih” invazivnih mikoza i apsolutna je indikacija za propisivanje sistemskih antimikotika u bolesnika s neutropenijom. Učestalost otkrivanja kvasnih gljivica iz krvi je niska, čak i kod diseminirane kandidijaze iznosi 35-50%.
Izvođenje ponovljene hemokulture povećava vjerojatnost dobivanja pozitivnih rezultata.

ostalo tumačenje rezultati u slučaju otkrivanja filamentoznih gljiva u krvi. Visoka učestalost izolacije filamentoznih gljiva karakteristična je za Fusarium spp. i iznosi 40-60%. Aspergillus se otkriva iznimno rijetko, u većini slučajeva se smatra kontaminacijom, s izuzetkom Aspergillus terreusa.

Izbor Aspergillus terreus iz krvi bolesnika s hemoblastozama može ukazivati ​​na pravu aspergilemiju, a u prisutnosti kliničkih simptoma infekcije temelj je za propisivanje antimikotika.

Kriteriji za invazivne mikoze

Indeks	Kriteriji
Čimbenici koji potiču nastanak invazivne mikoze (makroorganizam)	neutropenija (< 0,5*109/л в течение 10 дней) Perzistentna vrućica dulja od 96 sati tijekom terapije antibioticima širokog spektra Tjelesna temperatura iznad 38 °C ili ispod 36 °C i bilo koji od sljedećih predisponirajućih znakova: dugotrajna neutropenija (više od 10 dana) tijekom prethodnih 60 dana, intenzivna imunosupresivna terapija u zadnjih 30 dana, dokazana ili vjerojatna invazivna mikoza u prethodnom menstrualna neutropenija ili AIDS Prisutnost simptoma GVHD-a, prvenstveno slučajeva teškog tijeka (II stupanj) ili opsežnog tijeka kronične bolesti Dugotrajna (više od 3 tjedna) primjena glukokortikoida u zadnjih 60 dana
Mikrobiološki znakovi	Izolacija kulture filamentoznih gljiva (uključujući Aspergillus spp., Fusaruim spp., Sceclosporium spp. i zygomycetes) i Cryptococcus neqformans iz sputuma ili bronhoalveolarne tekućine za ispiranje Pozitivni rezultati kulture ili citološke pretrage (izravna mikroskopija) za otkrivanje filamentoznih gljivica iz aspirata paranazalnih sinusa Detekcija filamentoznih gljivica ili Cryptococcus neoformans citološkim/izravnim mikroskopom iz sputuma ili bronhoalveolarne tekućine za ispiranje Pozitivan Aspergillus antigen u uzorcima bronhoalveolarne lavage, cerebrospinalne tekućine i krvi (najmanje dva) Pozitivan kriptokokni antigen u uzorcima krvi Detekcija gljivičnih elemenata citološkim pregledom ili izravnom mikroskopijom u uzorcima normalno sterilnih tekućina (na primjer, Cryptococcus spp. u cerebrospinalnoj tekućini) Dva pozitivna rezultata studija o otkrivanju kultura kvasca u urinu u nedostatku urinarnog katetera Kristali kandide u urinu bez urinarnog katetera Izolacija Candide spp. iz hemokultura
Klinički znakovi Donji respiratorni trakt	Mora biti povezan s mjestom iz kojeg se uzimaju uzorci za mikrobiološka istraživanja Bilo koji od sljedećih tipova novih plućnih infiltrata prema CT-u: znak aureole, znak polumjeseca, šupljina s područjima konsolidacije* Simptomi infekcije donjih dišnih putova (kašalj, bol u prsima, hemoptiza, dispneja), trenje pleure, svaka nova infiltracija koja nije uključena u znakove visokog značaja; pleuralni izljev
Gornji respiratorni trakt Znakovi visokog značaja Znakovi manjeg značaja	Radiološki znakovi invazivne infekcije u nosnim sinusima (erozija stijenke ili širenje infekcije na susjedne strukture, opsežna destrukcija kostiju lubanje) Curenje iz nosa, nazalna kongestija, nazalna ulceracija, epistaksa, periorbitalni edem, bol u gornjoj čeljusti, crna nekrotična ulceracija ili perforacija tvrdog nepca
središnji živčani sustav Znakovi visokog značaja Znakovi manjeg značaja	Radiološki znakovi sumnje na infekciju SŽS-a (mastoiditis ili drugo parameningealno žarište, ekstraduralni empijem, višestruke lezije u supstanci mozga ili leđne moždine) Žarišni neurološki simptomi i znakovi, uključujući žarišne napadaje, hemiparezu; poremećaji svijesti, meningealni simptomi, poremećaji biokemijskog sastava cerebrospinalne tekućine i njezinog staničnog sastava (u odsutnosti drugih uzročnika, prema kulturi i mikroskopiji, u odsutnosti tumorskih stanica)

*U nedostatku infekcije uzrokovane mikroorganizmima koji mogu uzrokovati sličnu radiološku sliku, uključujući stvaranje šupljina (Mycobacterium spp., Legionella spp., Nocardia spp.).

Na otkrivanje u krvi ili drugih sterilnih biosupstrata gljivica kvasca, potrebno je izvršiti identifikaciju na vrstu i odrediti osjetljivost na antifungalne lijekove; kod izolacije filamentoznih (plijesni) gljiva samo identifikacija na vrstu, osjetljivost se ne utvrđuje.

U kliničkom praksa Osjetljivost filamentoznih gljiva nije proučavana zbog nesavršenih standarda za određivanje osjetljivosti takvih gljiva na antimikotike. Štoviše, samo je jedna studija pokazala korelaciju između osjetljivosti Aspergillus spp. te rezultati liječenja invazivne aspergiloze u bolesnika s hematološkim zloćudnim bolestima. Niti jedna od kasnijih studija nije pronašla slične rezultate.

Nedavno su se počela pojavljivati ​​izolirana izvješća o stvaranju stečene rezistencije gljivica A. fumigatus na itrakonazol i vorikonazol.

Određivanje vrsta gljiva, posebice onih dobivenih iz sterilnih lokusa, nužna je prvenstveno za izbor antimikotika i provođenje adekvatne antifungalne terapije. Dakle, Candida krusei je otporna na flukonazol i manje osjetljiva od drugih vrsta kvasca na amfotericin B; Aspergillus terreus, Scedosporium apiospermum (Pseudallescheria boydii), Trichosporon beigelii, Scopulariopsis spp. otporan na amfotericin B; Mucorales su rezistentne na itrakonazol, vorikonazol, Candida glabrata pokazuje dozno ovisnu osjetljivost na flukonazol, a kod izoliranja ove vrste gljivica, čak i osjetljivih sojeva, potrebno je povećati dozu flukonazola (odraslima se propisuje 800 mg umjesto 400 mg); Candida lusitaniae je otporna na amfotericin B.

Određivanje vrsta gljiva važno je i za provođenje epidemiološke analize u bolnici - utvrđivanje uzročnika izbijanja infekcije i, ako je moguće, izvora infekcije. Opisani su izbijanja infekcija uzrokovanih tako rijetkim gljivama kao što su C. lusitaniae, C. krusei, C. lipolytica.

Na temelju identifikacija vrsta gljiva Može se pretpostaviti invazivna mikoza ili gljivična kolonizacija sluznice. Na primjer, znatno je manja vjerojatnost da će Aspergillus niger od Aspergillus fumigatus izazvati invazivnu aspergilozu kod pacijenata s akutnom leukemijom. Izolacija Aspergillus niger iz tekućine bronhoalveolarnog lavaža najčešće se smatra kolonizacijom respiratornog trakta, a iz sputuma kontaminacijom iz zraka te zahtijeva dodatna istraživanja pri potvrdi dijagnoze invazivne aspergiloze.

Na temelju izlučevine nitastih gljiva iz sputuma, bronhoalveolarne tekućine i aspirata paranazalnih sinusa, može se samo pretpostaviti invazivna mikoza, bez uključivanja u kategoriju "dokazanih". Međutim, uvijek treba uzeti u obzir otkrivanje Aspergillus u sputumu, osobito Aspergillus fumigatus ili Aspergillus flavus, u bolesnika s neutropenijom koji primaju alogenu koštanu srž. To zahtijeva ponovni mikološki pregled i kompjutoriziranu tomografiju pluća. Dakle, s neutropenijom, vjerojatnost otkrivanja invazivne aspergiloze u slučaju pozitivne kulture Aspergillus spp. u sputumu je 80%.

Izbor Cryptococcus neoformans u imunokompromitiranih bolesnika iz respiratornog trakta (ispiranje, ispiranje) dijagnostički je značajan. Ako identifikacija kvasnih gljivica iz tekućina dobivenih iz respiratornog trakta (traheja, bronhijalni ispirci, bronhoalveolarni ispirci) imunokompromitiranih pacijenata nije potrebno istraživanje, tada je potreban probir za identifikaciju Cryptococcus neoformans iz tih uzoraka.

Otkrivanje kandide u urinu u bolesnika s neutropenijom i vrućicom obično se smatra manifestacijom diseminirane infekcije kandidom.

Pravovremeno dijagnostika invazivne uspješno koriste komercijalni test za otkrivanje cirkulacije specifičnog antigena Aspergillus spp. galactomann (polisaharidna vodotopljiva komponenta stanične stijenke gljive).

Galactomann može se odrediti dvjema metodama: metodom lateks aglutinacije (Pastorex Aspergillus, BioRAD) i metodom enzimskog imunološkog testa (Platelia Aspergillus, BioRAD).

Prednost enzimska imunološka metoda je donji prag osjetljivosti za određivanje razine galaktomana u krvi - 1 ng/ml ili manje, a lateks aglutinacijom - 15 ng/ml. Dijagnostičku vrijednost ima određivanje galaktomana u krvi (najmanje 2 uzorka), cerebrospinalnoj tekućini i bronhoalveolarnom lavažu. Osjetljivost metode enzimske imunološke analize je oko 90%, specifičnost je 90-99%, u primatelja alogene koštane srži ti su pokazatelji niži i jednaki su 60-70%, odnosno 80-90%, zbog profilaktičke uporaba antifungalnih lijekova (antimikotici smanjuju razinu praga galaktomana).

U 40% slučajeva otkrivanje galactomann u krvi ispred manifestacija invazivne aspergiloze, utvrđenih kompjutorskim pregledom pluća, a u 70% ispred kliničkih simptoma infekcije.

Dijagnostička vrijednost testa za otkrivanje antigena Aspergillus je slučaj ako se studija provodi više puta. Određivanje Aspergillus antigena u krvi treba provoditi tijekom vrućice tijekom liječenja antibioticima širokog spektra u bolesnika s neutropenijom 2 puta tjedno; za upalu pluća koja se javlja ili traje tijekom antibakterijske terapije; kada se otkriju lezije u plućnom tkivu (kompjuterizirana tomografija).