Helmintološke metode. Testiranje na enterobiazu i taeniazu

Da bi se otkrili fragmenti helminta, izmet se ispituje golim okom, zatim se pomiješa s vodom i ispituje u malim obrocima u Petrijevoj zdjelici na tamnoj pozadini. Sve sumnjive čestice stavljaju se na predmetno staklo u kap vode i ispituju pod povećalom. Dnevnu porciju možete staviti u cilindar uz dodatak 5-10 puta veće količine vode. Posuda se nakon miješanja ostavi dok se suspendirane čestice potpuno ne slegnu. Površinski sloj Tekućine se ocijede i ulije čista voda. Isprani sediment ispituje se u malim obrocima golim okom ili pod povećalom. Za otkrivanje jajašca koriste se mikroskopske metode ispitivanja.

Metoda nativnog razmaza. Ne veliki broj izmet iz različita mjesta Ispitivani dio se samelje na predmetnom staklu u kapi 50% otopine glicerola, izotonične otopine natrijeva klorida ili vode. Smjesa se pokrije pokrovnim stakalcem i pregleda pod mikroskopom.

Fulleborn plutajuća metoda. Jedan dio izmeta pomiješa se s 20 dijelova zasićene otopine natrijeva klorida ( specifična težina 1.18), dodano u malim obrocima. Velike čestice koje isplivaju na površinu odmah se uklone, a smjesa se ostavi 45 minuta. Tijekom tog vremena, jajašca helminta, koja imaju nižu specifičnu težinu od otopine natrijevog klorida, plutaju na površini. Površinski film se ukloni žičanom omčom promjera oko 1 cm i prenese na predmetno stakalce za ispitivanje pod mikroskopom.

Kalantaryan metoda. Učinkovitost plutajuće metode povećava se zamjenom natrijevog klorida zasićenom otopinom natrijevog nitrata. U tom slučaju smjesa se drži 10-15 minuta.

Površinski film nastao nakon taloženja mješavine izmeta s otopinom natrijevog klorida ili natrijevog nitrata također se može ukloniti predmetnim staklom. U tu svrhu se staklenka do vrha napunjena mješavinom izmeta i otopine soli pokrije predmetnim staklom tako da njegova donja površina bude u dodiru s tekućinom. Nakon taloženja, staklo se uklanja i, brzo okrećući prema gore s površinom na kojoj se nalazi film, ispituje se pod mikroskopom.

Struganje sperianalnih nabora (za identifikaciju jaja i onkosfera pinworma goveđa trakavica) učiniti ujutro prije odlaska na WC. Koristeći drvenu lopaticu namočenu u vodu ili 50% otopinu glicerina, stružite oko anusa. Dobiveni materijal se prenese na predmetno staklo u kapi vode ili 50% otopine glicerola i pregleda pod mikroskopom. Lopatica se može zamijeniti vlažnom vatom, kojom se briše perianalno područje, a potom dobro ispere u vodi. Voda se centrifugira, a sediment se pregleda pod mikroskopom.

Behrmannova metoda (za identifikaciju ličinki). Metalna mrežica na koju se nanese 5-6 g izmeta učvrsti se na stakleni lijevak umetnut u tronožac. Na donji kraj lijevka postavljena je gumena cijev sa stezaljkom. Lijevak se napuni vodom zagrijanom na t° 50°, tako da se donji dio mrežica koja je sadržavala izmet došla je u kontakt s vodom. Larve se aktivno kreću u vodu i nakupljaju u donjem dijelu gumene cijevi. Nakon 4 sata tekućina se odlije u epruvete za centrifugiranje, centrifugira, a sediment pregleda pod mikroskopom.

Analiza sputuma, nosne sluzi i iscjedak iz rodnice za identifikaciju jajašca plućnog trematoda paragonimusa, ličinki valjkastih glista i ankilostoma, jajašca pinworma i fragmenata ehinokoknog mjehura. Ispitni dio sluzi (iscjedak) razmaže se na staklo i pregleda makroskopski na crno-bijeloj pozadini, a zatim pod mikroskopom. U materijal za ispitivanje možete dodati 25% otopinu antiformina, dobro protresti i ostaviti 1-1,5 sati da se sluz otopi. Smjesa se centrifugira, a talog se pregleda pod mikroskopom.

Analiza duodenalnog i želučanog soka za otkrivanje jaja jetrenih metilja, ankilostoma i ličinki Strongyloides. Sva tri dijela duodenalnog sadržaja dobivena s centrifugiraju se i sediment pregleda pod mikroskopom. Oni također istražuju.

Istraživanje tkiva. Da bi se identificirale ličinke trihinele, komadići biopsiranog mišića pažljivo se razdvoje u vlakna, stisnu između kompresorskih stakala (debela stakla s vijcima) i pregledaju pod mikroskopom na zatamnjenom svjetlu. Da bi se identificirali cisticeri, mišići se seciraju iglama za seciranje, izolirana vezikula se očisti od okolnog tkiva, stisne između dva stakalca i pregleda pod povećalom.

Test krvi (za otkrivanje ličinki filarije). Pregledajte viseću kap na pokrovnom staklu obrubljenom vazelinom. Možete pomiješati 0,3 ml krvi s 10 puta većom količinom 3% otopine. Smjesa se centrifugira, a talog se pregleda pod mikroskopom. Za obogaćivanje lijekova do 1 ml venske krvi dodati 3 ml 2% otopine formalina ili 5 puta veću količinu tekućine koja se sastoji od 95 ml 5% otopine formalina, 5 ml octena kiselina i 2 ml koncentrirane alkoholne otopine hematoksilina. Smjesa se centrifugira, talog se ispere destiliranom vodom i pregleda pod mikroskopom. Za razlikovanje različite vrste filarije se ispituju razmazima obojenim metodom Giemsa-Romanovsky.

Metode imunološka dijagnostika. Također se koriste alergijski dijagnostički testovi (vidi) s odgovarajućom vrstom helminta (aglutinacija, fiksacija komplementa).

Helmintološke metode istraživanje. Riža. Jaja helminta. 1-10 - jaja valjkasti crvi(nematode): 1 - 3 - valjkasti crvi (1 - oplođeno jaje, 2 - oplođeno jaje bez bjelanjka, 3 - neoplođeno jaje); 4 - mačji okrugli crvi; 5 - okrugli crvi mesožderi; 5 - pinworms; 7 - bičaš; 8 - tominx; 9 - ankilostoma; 10 - triho-strongilid. 11-15 - jaja trakavice(cestodi): 11 - goveđa trakavica; 12 - patuljasta trakavica; 13 - štakorska trakavica; 14 - bundeva trakavica; 15 široka traka. 16 - 24 - jaja metilja (trematoda): 16 - trematoda (šistosoma) japanska; 17 - trematode (shistosomi) urin - spolni; 18 - trematode (shistosomi) Munson; 19 - trematode (parogonymus) plućne; 20 - trematode (opisthorchis) Sibirski (mačji); 21 - trematode (clonorchis) chinensis; 22 - crijevne trematode (metagonimus); 23 - trematode (fasciole) jetre; 24 - trematode (dicrocelium) lancetaste.

Učinkovita i prikladna metoda helmintološkog istraživanja je studija debelog razmaza prema Katou, čija je suština otkrivanje jaja helminta u debelom razmazu izmeta, očišćenom glicerinom i obojenom malahitno zelenom bojom. Sastav Kato mješavine - 6 ml 3% vodena otopina malahitno zeleno, 500 ml glicerina, 500 ml 6% otopine fenola. Otopina je stabilna i može se čuvati na sobnoj temperaturi. Za pripremu pripravaka komadići izmeta veličine zrna graška nanose se na predmetno staklo, prekrivaju filmom od hidrofilnog celofana i drže u smjesi Kato 24 sata te pritisnu na staklo da se jednolika raspodjela materijal. Razmazi očišćeni 40-60 minuta pregledavaju se pod mikroskopom. Otkrivena jaja helminta se broje i morfološke karakteristike odrediti njihovu vrstu. Metoda vam omogućuje prepoznavanje jaja okruglih crva, bičaša, cestoda, trematoda i, u manjoj mjeri, ankilostoma i patuljaste trakavice.

Također naširoko korišten metode obogaćivanja. Princip metode flotacije je suspendiranje fecesa u slanoj otopini, koja ima veću relativnu gustoću u odnosu na jaja helminta, zbog čega oni isplivaju na površinu. Sadržaj površinskog filma ispituje se pod mikroskopom. Kao obogaćujuće smjese koriste se sljedeće otopine: kuhinjska sol - 400 g u 1 litri vode (relativna gustoća po Fullebornu -1,18); natrijev nitrat - 1 kg u 1 litri vode (relativna gustoća prema "Kalantaryan-1,38); natrijev nitrat - 900 g i kalijev nitrat - 400 g u 1 litri vode (relativna gustoća prema Brudastovu i Krasnonosu - 1,48). Pripremljeno otopine se prokuhaju i ohlade.
Za istraživanje dodajte 5-10 g fecesa u čašu ili zemljanu čašu, dodajte 100-200 ml fiziološka otopina i temeljito promiješajte. Zatim se plutajuće velike čestice uklone drvenom lopaticom ili lopaticom od papira ili kartona i odmah se široko stakalce nanese na površinski film tako da fiziološka otopina i stakalce budu u potpunom kontaktu. Nakon što je smjesa ostavljena 30-40 minuta, predmetno staklo se izvadi, stavi pod mikroskop s filmom okrenutim prema gore i pažljivo se pregleda cijela površina. Kako biste izbjegli isušivanje, možete dodati 2-3 kapi 50% otopine glicerina. Površinski film također se može ukloniti žičanom omčom. Učinkovitost metoda flotacije raste kako se povećava relativna gustoća slane otopine. Ovim metodama moguće je otkriti jaja nematoda, cestoda i trematoda.

Za otkrivanje jaja u izmetu koristi se metoda sedimentacije Krasilnikov. Izmet se miješa s 1% otopinom deterdženta ( prašak za pranje“Lotus” itd.) u omjeru 1:10 do stvaranja suspenzije. Pod utjecajem deterdženta otapaju se različite komponente izmeta (proteini, masti, elementi tkiva). Nakon 30 minuta sadržaj epruvete se mućka 1-2 minute, nakon čega se centrifugira 5 minuta. Iz sedimenta se pripremaju preparati koji se ispituju pod mikroskopom.
U uvjeti na terenu, kao i tijekom masovnih pregleda stanovništva za infestaciju helmintima, prikladno je koristiti Kato metodu debelog razmaza. U stacionarnim uvjetima Pri pregledu pacijenata poželjno je koristiti najučinkovitije metode flotacije. Kod korištenja ovih metoda tijekom mikroskopiranja, preporučljivo je prebrojati jajašca koja se nalaze u preparatu. Ako je uzorak ili volumen uzet za proučavanje izmeta standardiziran (na primjer, 1 žličica ili žlica) i konstantan jednoličan volumen slanih otopina, može se grubo procijeniti intenzitet invazije. Ovo kvantitativno računovodstvo može biti korisno u opravdavanju propisanog liječenja i procjeni učinkovitosti dehelmintizacije. Osim toga, za utvrđivanje intenziteta infekcije mogu se koristiti i druge preciznije kvantitativne metode, posebice Stollova metoda.

Za dijagnozu teniarhinhoze i enterobiaze Koristi se metoda proučavanja perianalno-rektalnih strugotina. Drvenom lopaticom namočenom u 50% otopinu glicerina sastružite perianalne nabore ujutro prije defekacije po obodu. anus I donji odjeljci rektum. Dobiveni materijal, očišćen od lopatice s rubom pokrovnog stakalca, stavi se na predmetno stakalce u kap 50%-tne otopine glicerola, prekrije pokrovnim stakalcem i pregleda pod mikroskopom. Također možete pregledati traku celulozne trake koja se najprije ljepljivom stranom pritisne na perinanalne nabore, zatim se stavi na predmetno staklo i mikroskopski pregleda.

Detekcija ličinki nematoda u fecesu Bermanovom metodom. Metoda se temelji na termotropnom svojstvu ličinki. Za istraživanje uzmite 1 žlicu izmeta i stavite je u metalnu mrežicu ili mrežicu od nekoliko slojeva gaze na žičanom okviru. Mreža je ugrađena u lijevak postavljen na tronožac. Na lijevak je pričvršćena gumena cijev sa stezaljkom. Nakon podizanja mrežice, lijevak se puni vodom (temperatura +40°...+50°C) tako da je donji dio mrežice uronjen u vodu. Larve iz izmeta aktivno migriraju u tople vode i taložeći se nakupljaju u donjem dijelu lijevka. Nakon 2-4 sata stezaljka se otvori, voda se ispusti u epruvetu za centrifugu i centrifugira 2-3 minute. Zatim se tekućina iz supernatanta isuši, sediment se prenese na predmetno staklo i pregleda pod mikroskopom, gdje se pronađu pokretne ličinke uzročnika strongiloidijaze.

Harada metoda i Mori omogućuje razlikovanje ličinki ankilostoma i nekatora. Ličinke ankilostoma se uzgajaju na filtar papiru. U tu svrhu se 0,5 g svježeg izmeta, uzetog od bolesnika najkasnije 1 sat nakon defekacije, nanese na trake filtar papira veličine 12X1,5 cm, s tim da oba kraja trake budu čista. Jedan kraj trake se uroni u epruvetu od koje se četvrtina napuni vodom, a drugi se stegne čepom. Epruvete se stavljaju u termostat na temperaturu od +26... + 28°C. Ličinke koje se razvijaju iz jajašca spuštaju se kroz filter papir i talože na dno epruvete. Nakon 5-6 dana trakica papira se izvadi, a zaostala tekućina u epruveti ispita se pod povećalom ili centrifugira. Talog nastao centrifugiranjem ispituje se pod svjetlosnim mikroskopom. Kada se umjesto epruveta koriste tetraedarske staklene posude (veličine 15xxx7 cm) s 4 papirnate trake pričvršćene na stijenke, povećava se učinkovitost analiza (G.M. Maruashvili i sur., 1966.).

Metode ispitivanja šistosomijaze . Pregled fecesa - dio fecesa se pomiješa sa 250 ml vode, filtrira kroz 3 sloja gaze u konusnu posudu, koja se do vrha napuni vodom. Nakon 30 minuta tekući sloj se iscijedi, a talogu se doda svježi dio vode. Talog se ispire sve dok se ne dobije bistri supernatant i pregleda pod mikroskopom.

Larvoskopska metoda - 20-25 g fecesa stavi se u Erlenmeyerovu tikvicu sa zalemljenom staklenom cijevi sa strane, okrenutom prema gore, i opere voda iz slavine. Zatim se tikvica prekrije tamnim papirom, ostavljajući zalemljenu staklenu cijev na svjetlu na temperaturi od +25...+30°C. Izleženi miracidije koncentriraju se na meniskusu u lateralnoj cijevi, gdje se mogu vidjeti povećalom ili golim okom. Pregled urina - 100 ml urina sakupljenog između 10 i 14 sati, ili dnevni dio, taloži se i potom centrifugira na 1500 okretaja u minuti. Dobiveni sediment nanese se* na predmetno staklo i pregleda pod mikroskopom. WHO preporučuje metodu filtriranja cijelog uzorka urina. Nakon filtracije, filtri se tretiraju formaldehidom ili zagrijavaju (kako bi se ubila jajašca), a zatim se navlaže vodenom otopinom ninhidrina. U osušenim pripravcima zameci jaja dobivaju ljubičastu boju.

Primjena imunoloških metode istraživanja za dijagnosticiranje shistosomijaze povezane su s poteškoćama, budući da odrasli shistosomi i njihova jajašca sadrže velik broj antigena koji uzrokuju imunološke reakcije, koji nisu specifični za određenu vrstu (D. Bradley, 1979).

Kod nas se proizvodi za postavljanje imunoloških reakcija kod helmintijaze cijela serija standardna dijagnostika. Praktična primjena imati alergije test kože za ehinokokozu i alveokokozu, RLA s ehinokoknim antigenom, RSC na hladnom, precipitacijska reakcija na hladnom u raznim modifikacijama (prstenasta precipitacija, precipitacija u epruvetama ili kapilarama, koje se stavljaju s antigenima trihineloze, cisticerkoze i migroaskariaze). Standardne dijagnostičke setove za izvođenje gore navedenih seroloških reakcija proizvode poduzeća koja proizvode bakterijske pripravke. Proizvođač uključuje proizvedene dijagnostičke setove detaljne upute o pravilima čuvanja, roku valjanosti lijeka i uputama o uporabi relevantnih antigena s tehnikom određivanja stupnja reakcije.

U posljednjih godina Popis seroloških reakcija koje se koriste za dijagnosticiranje helmintijaze značajno je proširen. U te svrhe koriste se sljedeće reakcije: RIGA, neizravna imunofluorescencija (RIF), imunodifuzija u gelu (RID), kontra imunoelektroforeza (CIEF), CEMA. Ove reakcije mogu se koristiti za ascariasis, toxocariasis, trichinosis, ankilostomidozu, filarijazu, ehinokokozu i alveokokozu, opisthorchiasis, shistosomiasis, paragonimiasis. Međutim, za ove reakcije u našoj zemlji se ne izdaju standardni dijagnostički testovi niti je regulirana tehnika njihove dijagnostike. Pojedinačni laboratoriji, uglavnom znanstveni, samostalno pripremaju specifične antigene i koriste ih u različitim modifikacijama. Opis ovih metoda široko je predstavljen u literaturi i nije striktno unificiran. Tumačenje podataka imunološke analize treba se temeljiti na proučavanju dinamike imunološkog odgovora, uzimajući u obzir razinu specifičnosti i osjetljivosti svake korištene metode. serološka reakcija. Stoga je prilikom postavljanja dijagnoze, kao i tijekom seroepidemioloških istraživanja stanovništva, preporučljivo koristiti nekoliko najosjetljivijih reakcija. S ove točke gledišta, reakcije VIEF-a i REMA-e, koje se razlikuju, dobro su se pokazale visoka osjetljivost i dosta visoka specifičnost (P. Ambroise-Thomas, 1978; I. E. Ballad, 1979; G. M. Negreanu, 1980; A. M. Ponomareva, 1981; A. Ya. Lysenko, 1978, itd.). Djelotvornost REMA ispitana je kod amebijaze, lišmanioze, tripanosomijaze i toksoplazmoze (G. A. Ermolin, 1980.).

poglavlje III. Dijagnostika helmintijaze i metode helmintološkog istraživanja

Potrebno je pregledati sve pacijente koji se prijavljuju na helmintiju medicinska njega, a posebno pacijenata koji se obraćaju pedijatru, terapeutu i neurologu s pritužbama na nuspojave gastrointestinalni trakt, živčani sustav i kod anemije. Ako liječnik nije uvijek u mogućnosti koristiti laboratorijske metode istraživanja, tada je svaki medicinski radnik koji pruža njegu u poliklinici ili bolnici dužan ispitati pacijenta o izolaciji helminta.

Ako postoje kliničke indikacije dane u relevantnim poglavljima, dijagnoza bi se trebala razjasniti korištenjem laboratorijske metode studije za helmintijaze.

Zbog prevlasti crijevne helmintijaze najveći praktični značaj ima pregled stolice.

Metode ispitivanja stolice na helmintioze

Stolica se dostavlja u laboratorij u čistoj staklenoj posudi (oko četvrtine šalice stolice uzete s različitih mjesta u jednom dijelu); Tijekom rutinskog pregleda dopušteno je dostaviti stolicu u laboratorij u kutijama za šibice ili udlagama.

Za kontrolu dehelmintizacije isporučuje se cjelokupni dio izmeta prikupljen nakon primjene (kako je propisao liječnik). antihelmintik i laksativ (u velikim zatvorenim staklenim posudama, kantama).

Mikroskopski pregled stolice temeljan je u dijagnostici crijevnih helmintijaza; uvijek mu treba prethoditi opći makroskopski pregled izmeta kako bi se otkrili segmenti velikih cestoda, pinworma, valjkastih crva itd.

Stolica treba biti svježa ili konzervirana (u 5% otopini formaldehida), budući da sušenje dramatično mijenja strukturu jaja. Osim toga, kada izmet stoji, brz razvoj jaja nekih helminta (na primjer, ankilostoma), što otežava dijagnozu.

Prema uputama Ministarstva zdravstva SSSR-a potrebno je istodobno pregledati stolicu metodom po Fullebornu i nativnim razmazom.

Nativni bris

Nativni bris: komadić fecesa (veličine zrna graška), uzet šibicom, staklenim ili drvenim štapićem s različitih mjesta u isporučenoj porciji, temeljito se izmrvi na stakalcu u kapi 50% otopine glicerola ili u slanoj otopini ili u vodi. Pokrijte pokrovnim stakalcem i lagano ga pritisnite (iglom za disekciju). Razmaz mora biti tanak, proziran i ujednačen. Koristi se samo kao dodatak drugim metodama koje osiguravaju obogaćivanje lijeka. Treba pregledati najmanje dva lijeka.

Za otkrivanje ličinki helminta (kao i njihovih jajašaca) radi se nativni bris na sljedeći način (po Shulmanu): 2-3 g fecesa dobro se promiješa "uvrtanjem" staklenog štapića u emulziju s pet puta više čiste vode ili fiziološke otopine. Tijekom miješanja dolazi do nakupljanja ličinki u blizini staklenog štapića, pa se odmah nakon završetka miješanja kap emulzije staklenim štapićem brzo prenese na predmetno stakalce, pokrije pokrovnim stakalcem i pregleda. S. D. Lyubchenko (1936) dokazao je da je metoda uvijanja učinkovitija od metode razmaza, posebno u pogledu jajašaca glista. Na temelju rada S. D. Lyubchenka, smatramo da je preporučljivo zamijeniti metodu razmaza metodom uvijanja.

Fullebornova metoda

Fulleborn metoda: 5-10 g izmeta uzetog s različitih mjesta stavi se u staklenku zapremine 50-100 ml i temeljito utrlja staklenim ili drvenim štapićem u zasićenu otopinu. kuhinjska sol(400 g ove soli otopi se u 1 litri vode, zagrije do vrenja i filtrira kroz sloj vate ili gaze; otopina se koristi hladna: specifična težina 1,2). Otopina se dodaje postupno dok se ne dobije jednolična suspenzija, a ukupna količina dodane otopine trebala bi biti otprilike 20 puta više količine izmet. Za miješanje izmeta Fulleborn je preporučio korištenje čaša za čaj, ali je prikladnije pripremiti suspenziju u posudama za mast kapaciteta 50-100 ml, koristeći dvije posude za svaku analizu (ili u čašama kapaciteta 100 ml).

Odmah nakon pripreme suspenzije, krupnije čestice koje su isplivale na površinu uklanjaju se s površine špatulom, metalnom lopaticom ili komadom čistog papira ( biljne formacije, neprobavljeni ostaci hrane i sl.), nakon čega se smjesa ostavi stajati 1-1,5 sat. Nakon tog vremena, cijeli film se uklanja s površine smjese dodirivanjem žice ili platinaste petlje (ravne) promjera ne većeg od 1 cm, savijene pod pravim kutom; Film se istrese na predmetno stakalce i prekrije pokrovnim stakalcem. Stavite 3-4 kapi ispod svakog pokrovnog stakalca (18x18 mm). Ukupno treba pripremiti najmanje 4 pripravka (za svaki pripravak jedno pokrovno staklo). Petlja se zagrijava na vatri i nakon svake analize ispere vodom.

Fullebornovom metodom brzo se i lako otkrivaju jajašca svih nematoda (osim neoplođenih jajašaca valjkastih glista) i jajašca patuljaste trakavice.

Bermanova metoda se koristi za ispitivanje fecesa na larve helminta (za strongiloidijazu). Ova metoda je sljedeća: 5 g izmeta na metalnoj mrežici (za ovu svrhu je prikladno cjedilo za mlijeko) stavi se na stakleni lijevak pričvršćen na tronožac. Na donji kraj lijevka postavljena je gumena cijev sa stezaljkom.

Mrežica s izmetom se podigne i u lijevak se ulije voda zagrijana na otprilike 50° tako da donji dio mrežice s izmetom bude uronjen u vodu. Larve se aktivno kreću u vodu i nakupljaju u donjem dijelu gumene cijevi. Nakon 2-4 sata stezaljka se otvori i tekućina se ispusti u jednu ili dvije centrifugalne epruvete.

Nakon centrifugiranja 1-2 minute gornji dio tekućina se brzo ocijedi, a sediment se u kapima nanosi na stakalce i pregleda pod pokrovnim stakalcem ili namaže tanki sloj na 2-3 velika stakla i zatim pregledati bez pokrovnih stakala.

Bermanova metoda također se koristi za ispitivanje tla na prisutnost ličinki ankilostoma.

Stollova metoda

Za određivanje intenziteta invazije koristi se Stollova metoda. Decinormalna otopina kaustične sode ulijeva se u posebnu staklenu tikvicu do oznake od 56 cm 3, a zatim se dodaju izmet dok razina tekućine ne dosegne 60 cm 3, odnosno 4 cm 3. Nakon mućkanja sa staklenim kuglicama uzima se 0,075 ml smjese za ispitivanje i ispituje pod jednim ili dva obična pokrovna stakalca. Dobiveni iznos se množi s 200 kako bi se dobio broj jajašaca sadržanih u 1 cm 3 izmeta.

Studija duodenalnog sadržaja

Duodenalni sok i žuč iz mokraćnog mjehura, dobiveni na uobičajeni način sondiranjem (i žuč iz mokraćnog mjehura i nakon refleksa iz žučnog mjehura), temeljito se miješaju s jednakim volumenom etil eter; smjesa se centrifugira, nakon čega se sediment pregleda pod mikroskopom. Osim sedimenta, mikroskopski pregled pahuljice koje plutaju u tekućini, koje mogu sadržavati jaja helminta, nužno su izložene. Prilikom testiranja želučanog soka i povraćanja na jaja helminta, možete koristiti istu tehniku.

Ako postoji sumnja na, potrebno je napraviti pretragu duodenalnog soka i želučanog sadržaja helmintičke bolesti jetre, žučnog mjehura (opistorhijaza, fasciolioza, dikrocelioza) i duodenum(strongiloidijaza).

Ispitivanje sputuma

Iskašljaj se samelje na staklenoj ploči, čvrsto prekrije drugom staklenom pločom i pregleda golim okom na svijetloj i crnoj pozadini, kao i pod povećalom u propusnom svjetlu. Pojedinačni komadići sputuma ("hrđave" nakupine, ostaci tkiva itd.) nanose se u tankom sloju na predmetno stakalce, čvrsto pokrivaju pokrovnim stakalcem i ispituju na niskim i veliko povećanje mikroskop

a) Za dijagnosticiranje kožne cisticerkoze, potkožno tkivo ili mišić, aseptično izrezan komad odgovarajućeg tkiva prvo se pregledava golim okom. Područja tkiva se odmiču iglama za seciranje kako bi se otkrilo vidljivo golim okom vezikula - cisticerk (fotografija A); duljina mu je 6-20 mm, širina 5-10 mm. Kad se otkrije vezikula sumnjiva na cisticerk, zgnječi se između dva stakalca i pregleda pod mikroskopom. Cisticerkus (Cistycercus cellulosae) određen je prisutnošću skoleksa s četiri odoka i vjenčićem kukica (slika B).

Fotografija. A - cisticeri sa skoleksom okrenutim prema van; B - Glava svinjske trakavice.

b) Za dijagnosticiranje trihineloze aseptički izrezani komad mišića (biceps ili gastrocnemius) pažljivo se usitnjava u 50% otopini glicerina iglama za disekciju u najfinija vlakna. Zgnječeni mišići se stisnu između dva stakalca i pregledaju pod mikroskopom male snage u zamračenom vidnom polju. Preporuča se testiranje mišića na trihinelozu najranije 8. dana bolesti. Ličinke trihinele nalaze se u mišićima u smotanom položaju: zatvorene su u kapsulama u obliku limuna.

Fotografija. A - Ličinke trihinele u mišićima; B — Kalcificirane kapsule trihinele.

X-zraka

Najčešće se fluoroskopijom dijagnosticira ehinokokoza i rjeđe cisticerkoza. Cisticerci se otkrivaju fluoroskopijom tek nakon kalcifikacije (u slučajevima dugotrajna bolest). Posljednjih godina, fluoroskopija se također koristi za dijagnosticiranje ascariasis u ranom stadiju ličinke i djelomično u intestinalnom stadiju.

Tijekom razdoblja migracije ličinki okruglih crva (i ankilostoma), u plućima se otkrivaju nestabilni, ponekad višestruki upalni žarići; istovremeno se u krvi javlja značajna eozinofilija.

Spolno zrele valjkaste gliste jasno su vidljive na fluoroskopiji crijeva oboljelih jedinki. Ova metoda, unatoč svojoj složenosti i nezgrapnosti, treba se koristiti kao dodatna metoda za dijagnosticiranje ascariasis u slučajevima s negativnom skatološkom analizom. Prema E. S. Geselevichu, od 180 bolesnika s ascariasisom identificiranim fluoroskopijom, 54 nisu imala jaja ascarisa u stolici (vidi).

Helmintološke metode istraživanja. Metode za dijagnosticiranje helmintoza dijele se na izravne, koje se temelje na izravnom otkrivanju samih helminta ili njihovih fragmenata, kao i ličinki i jajašca helminta (metode ispitivanja izmeta, urina, žuči i duodenalnog sadržaja, sputuma, krvi i tkiva, materijala dobivene struganjem s perianalnog područja i subunguvalnih prostora), i neizravne, uz pomoć kojih otkrivaju sekundarne promjene, koji nastaju u ljudskom tijelu kao rezultat vitalne aktivnosti helminta (istraživanja morfološkog sastava krvi, imunološke metode dijagnostika helmintijaza, rendgenski pregledi itd.). Od izravnih metoda najčešće su skatološke, koje se dijele na makro- i mikrohelmintoskopske. U nekim slučajevima koriste se posebne metode.

Makrohelmitoskopske metode istraživanja usmjeren na traženje helminta ili njihovih fragmenata (skoleks, segmenti, dijelovi strobila cestoda). Koriste se za dijagnosticiranje onih helmintija u kojima se jajašca ne izlučuju u izlučevine pacijenta ili se izlučuju u malim količinama, a ne uvijek (na primjer, kod enterobiaze, pinwormi se nalaze u izmetu, kod taeniasis - segmenti).

Da bi se otkrili pinwormi ili segmenti cestoda u izmetu, izmet se ispituje golim okom. Za diferencijalna dijagnoza Taeniasis, preporuča se promatrati izmet razrijeđen vodom u odvojenim malim obrocima u crnim fotografskim kivetama ili u Petrijevim zdjelicama na tamnoj pozadini. Velike formacije sumnjive na fragmente helminta ispituju se pod povećalom između dva stakalca. Ako prema kliničke indikacije sugeriraju otkrivanje malih helminta ili glavica cestoda nakon tretmana, zatim se sumnjive čestice ispituju pod povećalom u kapi glicerina, a po potrebi i pod mikroskopom.

Mikrohelmintoskopske metode istraživanja(kvalitativni) usmjereni su na identifikaciju jaja i ličinki helminta. Koristi se metoda debelog razmaza s celofanskom pokrovnom pločom po Katu. Kato mješavina sastoji se od 6 ml 3% vodena otopina malahitnog zelenila, 500 ml glicerin i 500 ml 6% otopina fenola. Kato ploče (hidrofilni celofan se reže na komade dimenzija 20´ 40 mm) uronjena 24 h u smjesu Kato tako da budu jedna uz drugu (3-5 ml Kato otopina na 100 ploča). 100 mg izmet se nanese na predmetno stakalce, pokrije celofanskom pokrovnom pločom prema Katu i pritisne tako da se izmet razmaže po stakalcu unutar granica celofanske ploče. Bris se ostavi na sobnoj temperaturi da posvijetli za 40-50 min, a zatim ispitati pod mikroskopom. U vrućoj sezoni, kako biste spriječili isušivanje pripravka, stavite vlažnu spužvu na tanjur pripremljenog pripravka.

Za potpunu detekciju helminta svih vrsta potrebno je koristiti Kato metodu debelog razmaza s celofanskom pokrovnom pločom u kombinaciji s jednom od metoda obogaćivanja. Najčešće od njih su Kalantaryan metoda i Fulleborn metoda.

Kalantaryan metoda: u bocama sa širokim grlom zapremine 100 ml dobro promiješajte staklenim štapićem 5 G izmet, postupnim dodavanjem zasićene otopine natrijeva nitrata (1 kg natrijev nitrat po 1 l voda kad proključa) do ruba čaše. Velike čestice koje isplivaju na površinu uklanjaju se papirnatom lopaticom. Staklo se nanosi na površinu fiziološke otopine (fiziološka otopina se dodaje sve dok smjesa ne dođe u potpuni dodir s predmetnim stakalcem). U 20-30 min predmetno staklo se ukloni i film se pregleda pod mikroskopom. U nedostatku ove soli, možete koristiti zasićenu otopinu kuhinjske soli prema Fhollebornu (400 G sol u 1 l kipuće vode).

S obzirom da jajašca velike specifične težine (neoplođena jajašca valjkastih glista, jajašca trematoda i velikih cestoda) ne plutaju, uz ispitivanje površinskog sloja tekućine, primjenom Fulleborn metode potrebno je ispitati 2-4 preparata iz sedimenta pod mikroskopom.

Posebne laboratorijske metode za ispitivanje raznih helmintijaza.

7.7. Metode za određivanje održivosti jaja i ličinki helminta

Održivost jaja helminta određena je izgled, bojenjem vitalnim bojama, uzgoj u optimalni uvjeti i postavljanje biološkog uzorka.

7.7.1. Određivanje održivosti jaja ili ličinki helminta po izgledu

Jaja helminta se mikroskopiraju prvo pri malom, a zatim pri velikom povećanju. U deformiranim i mrtvim jajima helminta, ljuska je poderana ili savijena prema unutra, plazma je mutna i olabavljena. Segmentirana jaja imaju kuglice za drobljenje (blastomere) nejednake veličine, nepravilnog oblika, često pomaknut na jedan pol. Ponekad postoje abnormalna jaja koja se, unatoč vanjskim deformacijama, normalno razvijaju. U živim ličinkama okruglih crva fina zrnatost prisutna je samo u središnjem dijelu tijela; kako umiru, ona se širi po cijelom tijelu, pojavljuju se velike sjajne hijaline vakuole, takozvane "niske bisera".

Da biste odredili održivost zrelih jajašaca valjkastih crva, bičaša i pinworma, trebate nazvati aktivni pokreti ličinke laganim zagrijavanjem pripravka (na temperaturu ne veću od 37 °C). Pogodnije je promatrati vitalnost ličinki valjkastih glista i bičaša nakon što su izolirane iz ljuske jajeta pritiskom na pokrovno staklo preparata iglom za seciranje ili pincetom.

Kod ličinki invazivnih valjkastih glista često se vidi ljuštenje ovojnice na kraju glave, a kod ličinki bičaša koje su završile razvoj u jajetu, stilet se nalazi na tom mjestu pri velikom povećanju. U mrtvim ličinkama helminta, bez obzira na njihovu lokaciju (u jajetu ili izvan njega), primjećuje se propadanje tijela. U tom slučaju unutarnja struktura ličinke postaje blokovita ili zrnasta, a tijelo postaje mutno i neprozirno. Vakuole se nalaze u tijelu, a prijelomi se nalaze na kutikuli.

Preživljavanje taeniidnih onkosfera (goveđa, svinjska trakavica, itd.) određena je kretanjem embrija kada su im izloženi probavni enzimi. Jaja se stavljaju na satno staklo sa želučanim sokom psa ili umjetnim duodenalnim sokom. Sastav potonjeg: pankreatin - 0,5 g, natrijev bikarbonat - 0,09 g, destilirana voda - 5 ml. Satna stakla s jajima stavljaju se u termostat na 36 - 38 °C 4 sata. U ovom slučaju, živi embriji se oslobađaju svojih membrana. Ljuske živih onkosfera također se otapaju u zakiseljenom pepsinu i u alkalna otopina tripsina nakon 6 - 8 sati u termostatu na 38°C.

Ako jaja teniida stavite u 1% otopinu natrijevog sulfida ili 20% otopinu natrijevog hipoklorida ili u 1% otopinu klorirane vode na 36 - 38°C, zreli i živi embriji se oslobađaju membrana i ne promjena tijekom 1 dana. Nezrele i mrtve onkosfere se smanjuju ili nabubre i naglo se povećavaju, a zatim se "otapaju" unutar 10 minuta do 2 sata. Živi embriji taeniida također se aktivno kreću u mješavini 1% otopine natrijevog klorida, 0,5% otopine natrijevog bikarbonata i žuči na 36 - 38 °C.

Preživljavanje Adolescaria fascioli sakupljenih na biljkama i drugim objektima vodenih tijela provjerava se ispitivanjem na predmetnom stakalcu u fiziološkoj otopini pod mikroskopom s postoljem za zagrijavanje. Kada se ličinke trematoda zagriju, počinju se kretati.

Za određivanje održivosti jaja patuljaste trakavice, najjednostavnija je metoda N.S. Ionina: kod živih jaja, srednji par embrionalnih kukica je ili paralelan s bočnima, ili potonji tvore kut s medijanom na dnu manji od 45°. U mrtvim jajima, bočni parovi tvore kut s srednjim parom na bazi veći od 45°, ili su kuke nasumično razbacane (njihov raspored parova je izgubljen); Ponekad se embrij smanji i formiraju se granule. Točnija metoda temelji se na pojavi kretanja onkosfere tijekom oštre promjene temperature: od 5 - 10 ° do 38 - 40 ° C.

Određivanje održivosti nezrelih jaja nematoda treba proučavati u vlažnoj komori (Petrijeve zdjelice), stavljajući jajašca glista u 3% otopinu formaldehida pripremljenu u izotoničnoj otopini natrijevog klorida na temperaturi od 24 - 30 °C, jajašca glista u 3% otopina solna kiselina na temperaturi od 30 - 35 °C; jajašaca pinworma u izotoničnoj otopini natrijeva klorida na temperaturi od 37 °C. Petrijeve zdjelice treba otvoriti 1 - 2 puta tjedno radi boljeg prozračivanja, a filter papir treba ponovno navlažiti čista voda.

Promatranja razvoja jaja helminta provode se najmanje 2 puta tjedno. Odsutnost znakova razvoja unutar 2 - 3 mjeseca ukazuje na njihovu nesposobnost za život. Znakovi razvoja jaja helminta su prve faze drobljenja, dijeljenje sadržaja jaja u zasebne blastomere. Tijekom prvih dana razvija se do 16 blastomera koji prelaze u drugi stadij - morula itd.

Jaja ankilostoma se uzgajaju u staklenom cilindru (50 cm visine i 7 cm u promjeru) zatvorenom čepom. Mješavina jednakih volumena sterilni pijesak, drveni ugljen a izmet s jajima glista, razrijeđen vodom do polutekuće konzistencije, pažljivo se izlije na dno cilindra pomoću staklene cijevi. Tijekom 1 - 2 dana taloženja u mraku na temperaturi od 25 - 30 °C iz jaja se izlegu rabditiformne ličinke, koje nakon 5 - 7 dana postaju filariformne: ličinke pužu uz stijenke cilindra, gdje se nalaze vidljiv čak i golim okom.

Jaja trematoda koje se prirodno razvijaju u vodi, primjerice opisthorchis, diphyllobothriidae, fasciolae i druge, stave se na satno staklo, Petrijevu zdjelicu ili drugu posudu, te se prelije malim slojem obične vode. Pri uzgoju jaja Fasciola treba voditi računa da se ona brže razvijaju u mraku, dok se u živim jajima na temperaturi od 22 - 24 °C miracidij stvara za 9 - 12 dana. Pri mikroskopiranju jajašaca trematoda u razvoju jasno su vidljivi pokreti miracidija. Miracidium fasciola izlazi iz ljuske jajeta samo na svjetlu.

Fullebornova metoda. Ličinke ankilostoma i strongilida uzgajaju se na agaru u Petrijevoj zdjelici sa životinjskim ugljenom. Nakon držanja u termostatu na temperaturi od 25 - 30 °C tijekom 5 - 6 sati, ličinke pužu po agaru, ostavljajući iza sebe stazu bakterija.

Harada i Mori metoda. Dodajte 7 ml destilirane vode u epruvete postavljene u stalak. Drvenim štapićem uzeti 0,5 g izmeta i napraviti razmaz na filtar papiru (15 x 150 mm) 5 cm od lijevog ruba (ovo se radi na listu papira radi zaštite površine laboratorijskog stola). Zatim se traka s razmazom umetne u epruvetu tako da lijevi kraj bez razmaza dospije do dna epruvete. Gornji kraj prekrijte komadom celofana i čvrsto omotajte elastičnom trakom. Na epruvetu se upisuje broj i prezime osobe koja se ispituje. U tom stanju epruvete se čuvaju 8 - 10 dana na temperaturi od 28 °C. Za proučavanje ličinki uklonite celofanski omotač i pincetom uklonite traku filter papira. Pri tome treba biti oprezan jer se mali broj infektivnih ličinki može pomaknuti na gornji kraj filter papira ili na stranu cijevi i prodrijeti ispod površine celofana.

Epruvete se stavljaju u vruće vodena kupelj na temperaturi od 50 °C 15 minuta, nakon čega se njihov sadržaj promućka i brzo prelije u epruvetu od 15 ml da se ličinke talože. Nakon centrifugiranja, supernatant se ukloni, a sediment prenese na predmetno stakalce, prekrije pokrovnim stakalcem i mikroskopski pregleda pod malim povećanjem.

Za diferencijalna dijagnoza filariformne ličinke, morate koristiti podatke u tablici 3.

Tablica 3

DIFERENCIJALNA DIJAGNOSTIKA FILARIOIDNIH LARVI A. DUODENALE, N. AMERICANUS, S. STERCORALIS, TRICHOStrONGYLUS SP.

Larve	Dimenzije	Karakteristični znakovi
A. duodenale	Duljina tijela oko 660 µm, duljina omotača - 720 nm	Ispruganost klobuka je manje izražena, oralna izbočina je manje uočljiva, prednji kraj tijela (ali ne i klobuka) je tup, promjer crijevne cijevi je manji od bulbusa jednjaka, kaudalni kraj je tup
N. americanus	Duljina tijela oko 590 mikrona, duljina omotača - 660 nm	Klobuk je primjetno izbrazan, osobito u kaudalnom dijelu tijela, oralna izbočina djeluje tamno, prednji kraj tijela (ali ne i klobuk) je zaobljen poput uskog kraja kokošje jaje, prednji dio crijevne cijevi ima isti promjer kao lukovica jednjaka, repni kraj je oštro zašiljen
S. stercoralis	Duljina tijela oko 500 mikrona	Ličinka je bez ovoja, jednjak je oko polovine dužine tijela, rep je tup ili razgranat
Trichostrongylus sp.	Duljina tijela oko 750 µm	Intestinalni lumen nije ravan, već cik-cak, rep je zaobljen i ima oblik gumba

7.7.2. Metode bojenja jaja i ličinki helminta

Mrtva tkiva u većini slučajeva percipiraju boje brže od živih. Ove se značajke koriste u helmintologiji za određivanje održivosti jaja i ličinki helminta. Međutim, u nekim slučajevima, neke boje bolje percipiraju živa tkiva nego mrtva.

Za razlikovanje živih i mrtvih jaja i ličinki koriste se sljedeće boje i metode.

Leukobaza metilensko modrilo često se koristi za bojenje živih i mrtvih tkiva. Živa stanica ili tkivo reducira metilensko modrilo u bezbojnu leukobazu, mrtvo tkivo nema tu sposobnost pa dobiva boju.

Kriterij za stanje jajeta je bojanje embrija, ali ne i ljuske. Ta je sposobnost povezana s uvjetima pod kojima jajašce umire. U slučajevima kada vlaknasta membrana u mrtvom jajetu ne izgubi svoja polupropusna svojstva, neće dopustiti da boje prođu kroz nju, stoga mrtvi embrij neće biti obojen. Obojeni embrij uvijek ukazuje na smrt jajeta.

Za bojanje jaja okruglih crva možete koristiti metilensko plavo u otopini mliječne kiseline s kaustičnim alkalijama (0,05 g metilenskog plavog, 0,5 g natrijevog hidroksida, 15 ml mliječne kiseline). Živa jaja ne percipiraju boju; obojeni su plava embriji mrtvih jajašaca. Bojanje ličinki glista baznom otopinom briljantno kresil plave boje u koncentraciji 1:10000 provodi se na sljedeći način: kap tekućine s jajima glista i kap osnovne otopine boje nanese se na predmetno staklo. Preparat se prekrije pokrovnim stakalcem koje se uz lagano lupkanje disekcijskom iglom čvrsto pritisne na predmetno stakalce. Broj ličinki u nastajanju i stupanj njihove obojenosti promatraju se pod mikroskopom; nakon čega se nakon 2 - 3 sata ponovo ispituje isti lijek. Živima se smatraju samo nedeformirane ličinke koje nisu obojane 2 sata. Mrtve ličinke ili ne izlaze iz jaja, ili postaju obojene kada se ljuska pukne (djelomično ili potpuno).

Pri određivanju održivosti jajašaca ptičjih glista moguće je preparate obojiti s 5% otopina alkohola Yoda. Kada se nanese na pripravak, klice mrtvih jaja Ascaridia javljaju se unutar 1 - 3 sekunde. obojeni su narančastom bojom.

Mrtva jajašca opistorhisa i onkosfere goveđe trakavice boje se otopinom toluidin modrila (1:1000), a mrtve onkosfere goveđe trakavice otopinom briljantnog krezil modrila (1:10000). U isto vrijeme zameci i ljuske i mrtvih i živih jaja dobivaju boju. Stoga se nakon bojenja ispiru jaja i onkosfere čista voda te ih dodatno obojati safraninom (razrijeđen 1:10000 u alkoholu 10 °C). Alkohol skida boju s ljuske, a šafranin ju pocrveni. Zbog toga živa jaja postaju crvena; jaja s mrtvim embrijima postaju plava, ali ljuska ostaje crvena. Mrtvi embriji onkosfera goveđe trakavice brzo, unutar nekoliko minuta, poprime jarkocrvenu ili ružičasta safranin ili modro briljantno krezil plavo u razrjeđenju 1:4000, ili indigo karmin u razrjeđenju 1:1000 - 1:2000. Živi embriji ne mijenjaju se pod utjecajem ovih boja ni nakon 2 - 7 sati.

Za određivanje održivosti jaja patuljaste trakavice preporučuje se korištenje sljedećih boja:

1. Brilliantcreazyl blue (1:8000) - nakon 1 sata, onkosfera mrtvih jajašaca postaje posebno svijetle boje, koja se oštro ističe na blijedoj ili bezbojnoj pozadini ostatka jajašca.

2. Safranin (1:8000 pri izlaganju 2 sata i 1:5000 3 - 5 sati).

3. 50% otopina pirogalne kiseline u razrjeđenju 1: 2 - kada je izložena 1 sat na temperaturi od 29 - 30 ° C (što je niža temperatura, to je duži proces bojenja).

7.7.3. Luminescentna metoda za proučavanje jaja i ličinki helminta

Fluorescentna mikroskopija omogućuje razlikovanje živih od mrtvih tijela bez oštećenja jajašca. Ne koristi se za fluorescenciju ultraljubičaste zrake, i plavo-ljubičasti dio vidljive svjetlosti, s konvencionalnim mikroskopom i stakalcima; dodan iluminatoru OI-18 poseban set filteri u boji.

Živa i mrtva jajašca valjkastih glista, pinworma, patuljaste trakavice, goveđe trakavice, široke trakavice i drugih helminta različito fluoresciraju. Ovaj fenomen se opaža i tijekom primarne luminescencije bez upotrebe boja i kada se boje fluorokromima (akridin narančasta, korifosfin, primulin, aurolin, berlerin sulfat, tripaflavin, rivanol, akrin itd.).

Nebojana, živa, nesegmentirana jaja valjkastih crva svijetle svijetlo zeleno sa žućkastom nijansom; u mrtvim jajima ljuska zrači zeleno svjetlo mnogo svjetlije od tamnozelenog embrionalnog dijela; U jajima valjkastih glista s ličinkom pojavljuje se samo ljuska, a u mrtvim jajima i ljuska i ličinka svijetlo su žute boje.

Nepigmentirana i nesegmentirana živa jaja pinworma i patuljaste trakavice emitiraju zelenkasto-žutu svjetlost; ljuska mrtvih jaja intenzivno svijetli na pozadini tamnozelene embrionalne mase.

Uz sekundarnu luminescenciju (kada se boji akridin narančastom u razrjeđenju 1:10 000 i 1:50 000 od 30 minuta do 2 sata), ljuska živih i mrtvih nematoda, trematoda i cestoda različito svijetli.

Ljuske živih i mrtvih jaja valjkastih crva, toksokara, pinworma, patuljaste trakavice, štakorske trakavice, bikove trakavice i trakavice obojene su narančasto-crvenom bojom. Embriji živih jajašaca valjkastih crva, toxascarisa, štakorske trakavice, široke trakavice i onkosfere goveđe trakavice fluoresciraju mutno tamnozeleno ili sivozelene boje. Mrtva embrionalna jaja ovih helminta emitiraju "goruću" narančasto-crvenu boju. Žive ličinke pinworma i toxocara (oslobođene ljuske jaja) emitiraju mutno sivo-zeleno svjetlo kada uginu, boja se mijenja od "goruće" svijetlozelene, zatim žute, narančaste i konačno svijetlonarančaste.

Kada se boje fluorokromima - korifosfilom, primulinom, mrtva jaja valjkastih glista i glista pokazuju sjaj od lila-žute do bakreno-crvene. Jaja sposobna za život ne svijetle, ali su obojena tamno zelene boje.

Živa jaja trematoda (paragonimus i clonorchis) ne svijetle kada se boje akridin narančastom, ali mrtva jaja daju žućkasto-zelenu boju.

Metoda luminiscencije također se može koristiti za određivanje održivosti ličinki helminta. Dakle, ličinke strongylata i rhabditatusa fluorokromirane otopinom akridin narančaste (1: 2000) svijetle: žive - zelene (s nijansom), mrtve - jarko narančastom svjetlošću.

Žive miracidije koje izlaze iz ljuske emitiraju prigušeno plavkasto svjetlo s jedva primjetnim svijetložutim vjenčićem cilija, ali 10 - 15 minuta nakon smrti pojavljuju se sa jarkim "gorućim" svjetlozelenim, a zatim narančasto-crvenim svjetlom.

7.7.4. Metoda bioloških uzoraka

Na primjer, za određivanje održivosti jaja askarida (svinjske gliste, ljudske gliste, Toxocara, Toxascaris itd.) po životinji (zamorci, miševi) potrebno je najmanje 100 - 300 jaja s razvijenim ličinkama. Jajašca ascarisa u izotoničnoj otopini natrijevog klorida pipetiraju se kroz usta miša ili zamorca. Nakon 6-7 dana životinja se zakolje, otvore joj se jetra i pluća i zasebno pregledaju na prisutnost ličinki askaridata. Da biste to učinili, jetra i pluća se škarama isjeckaju na male komadiće i ispituju metodom Berman ili Supryaga (odjeljak 6.1.2).

Ako su životinje bile zaražene živim invazivnim jajima, tada se nakon autopsije migrirajuće ličinke askarida nalaze u jetri i plućima.

U slučaju infekcije, jajašca Fasciole u izmetu laboratorijskih životinja mogu se otkriti kod kunića nakon 2 mjeseca, u zamorci- nakon 50 dana, kod miševa - nakon 35 - 40 dana.

Radi bržeg dobivanja odgovora, laboratorijske životinje se nakon 20 - 30 dana otvore i pregleda jetra na prisutnost mladih fasciola.

Da bi se utvrdila održivost jaja patuljaste trakavice, preporuča se također dati njima prethodno neinficiranim bijelim miševima, nakon čega se životinje nakon 92-96 sati otvore i identificiraju cisticerkoidi u crijevnim resicama ili cestode u crijevnom lumenu.

Za određivanje održivosti jajašca opisthorchisa preporučuje se metoda (njemački S.M., Baer S.A., 1984.), koja se temelji na fizikalno-kemijskoj aktivaciji miracidijeve žlijezde za izleganje i stimulaciji motorna aktivnost ličinke, što dovodi do otvaranja poklopca jajeta i aktivnog oslobađanja miracidija u eksperimentalnim uvjetima.

Suspenzija jaja opisthorchisa u vodi prethodno se ohladi na 10 - 12 °C (sve naredne radnje izvode se na sobnoj temperaturi 19 - 20 °C). 1 kap suspenzije koja sadrži 100 - 150 jaja dodaje se u epruvetu centrifuge. Epruveta se stavlja u stalak 5 - 10 minuta. Za to vrijeme sva jaja uspiju potonuti na dno. Zatim se višak vode pažljivo odsisa trakom filter papira i u epruvetu se dodaju 2 kapi posebnog medija. Medij je pripremljen u 0,005 M Tris-HCl puferu; u pufer se dodaje 12 - 13% otopina etanola i boja (fuksin, safranin, eozin, metilensko modrilo itd.). Epruveta se protrese, njen sadržaj se pipetira na predmetno staklo i ostavi 10 minuta uz lagano mućkanje. Zatim dodajte 2 kapi navedenog medija. Preparat je spreman za mikroskopiranje pod konvencionalnim svjetlosnim mikroskopom pri 20x povećanju.

Tijekom tog vremena otvara se poklopac održivih ličinki, a miracidij aktivno izlazi u navedeno okruženje. Zahvaljujući prisutnosti etanola u njemu, imobiliziraju se nakon 2 - 5 minuta i zatim se boje bojom. Mogu se lako detektirati i prebrojati mikroskopom.