हेलमनिथेसिस का प्रयोगशाला निदान। पैथोलॉजिकल ऊतकों को स्क्रैप करके प्राप्त लीशमैनिया की शुद्ध संस्कृति को अलग करने की विधि

सरल तरीके

मैक्रोस्कोपिक विधि। मल की जांच करते समय, कोई भी कृमि, उनके सिर, खंड, स्ट्रोबिली के टुकड़े का पता लगा सकता है, जो अपने आप या डीवर्मिंग के बाद बाहर खड़े होते हैं। इस विधि को विशेष रूप से एंटरोबियासिस, टेनिआसिस और टेनियारिन्कोसिस का पता लगाने के लिए अनुशंसित किया जाता है।

मल के छोटे हिस्से को एक फ्लैट स्नान या पेट्री डिश में पानी के साथ मिलाया जाता है और, एक अंधेरे पृष्ठभूमि के खिलाफ अच्छी रोशनी में देखकर, यदि आवश्यक हो तो एक आवर्धक कांच का उपयोग करके, चिमटी या पिपेट के साथ सभी संदिग्ध सफेद संरचनाओं को हटा दें। एकत्रित सामग्री को पानी के साथ दूसरे कप में या आगे के अध्ययन के लिए पतला ग्लिसरीन या आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड समाधान की एक बूंद में कांच की स्लाइड पर स्थानांतरित किया जाता है।

निपटान विधि के साथ, मल के पूरे परीक्षण भाग को एक गिलास सिलेंडर में पानी के साथ मिश्रित किया जाना चाहिए, फिर पानी की ऊपरी परत को सावधानी से निकालना चाहिए। यह कई बार दोहराया जाता है। जब तरल पारदर्शी हो जाता है, तो इसे निकाल दिया जाता है, और अवक्षेप को कांच के स्नान या पेट्री डिश में छोटे भागों में देखा जाता है, जैसा कि ऊपर बताया गया है।

अंडे या हेल्मिन्थ लार्वा का पता लगाने के लिए मल की जांच करने के लिए माइक्रोस्कोपिक विधियां मुख्य विधि हैं। विभिन्न शोध विधियों का वर्णन नीचे किया गया है। परीक्षा की विश्वसनीयता बढ़ाने के लिए, विश्लेषणों को प्रतिदिन कई बार या 1-3 दिनों के अंतराल के साथ दोहराया जा सकता है।

देशी स्मीयर विधि। मल की जांच के लिए नेटिव स्मीयर सबसे आम और तकनीकी रूप से उपलब्ध तरीका है। एक देशी स्मीयर में, सभी प्रकार के कृमि के अंडे और लार्वा पाए जा सकते हैं। हालांकि, मल में अंडे की एक छोटी संख्या के साथ, वे हमेशा नहीं पाए जाते हैं। इसलिए, केवल देशी स्मीयर की मदद से मल का अध्ययन पूरा नहीं होता है और इसे संवर्धन विधियों द्वारा पूरक किया जाना चाहिए। देशी स्मीयर परीक्षा की दक्षता में स्पष्ट रूप से सुधार होता है जब एक फेकल नमूने से तैयार की गई चार तैयारी को कवर स्लिप के बिना दो ग्लास स्लाइड पर देखा जाता है, जो काटो विधि (नीचे देखें) के साथ लगभग समान मात्रा में मल की जांच करने की अनुमति देता है।

हलचल वाले मल की एक छोटी मात्रा (माचिस के सिर के आकार) को 50% ग्लिसरीन के घोल की एक बूंद में कांच की स्लाइड की सतह पर लकड़ी की छड़ी से पतला किया जाता है। आमतौर पर एक गिलास पर दो स्मीयर तैयार किए जाते हैं। स्मीयर को कम आवर्धन माइक्रोस्कोप (ओब। 8, ऐप। 7) के तहत देखा जाता है। संदिग्ध मामलों में, इसे एक कवर पर्ची के साथ कवर किया जाता है और उच्च आवर्धन (ओब। 40) के तहत जांच की जाती है।

एक बड़ा देशी स्मीयर तैयार करने के लिए, ग्लिसरॉल के 50% जलीय घोल की 15-20 बूंदों में 6x9 सेमी के गिलास पर 200-300 मिलीग्राम मल (एक बड़े मटर के आकार का) डाला जाता है। एक दूरबीन स्टीरियोस्कोपिक माइक्रोस्कोप (वॉल्यूम 4, लगभग 12.5 या वॉल्यूम 2, लगभग 17) के तहत बिना कवर स्लिप के ट्रांसमिटेड लाइट में देखा गया। संदिग्ध मामलों में, आप लेंस को उच्च आवर्धन में अनुवाद कर सकते हैं। इस तरह के स्मीयर में, रंगीन बड़े हेल्मिन्थ अंडे स्पष्ट रूप से दिखाई देते हैं, और पिग्मी टैपवार्म के पारदर्शी अंडे कुछ हद तक खराब होते हैं। यह विधि छोटे अंडों का पता लगाने के लिए उपयुक्त नहीं है। साथ ही, अध्ययन की गई सामग्री की एक बड़ी मात्रा और क्षेत्र की उच्च गहराई के साथ देखने का एक बड़ा क्षेत्र पारंपरिक देशी धुंध की तुलना में इस संशोधन की एक महत्वपूर्ण दक्षता प्रदान करता है।

मोटी सिलोफ़न स्मीयर (काटो विधि) देशी स्मीयर परीक्षण की तुलना में अधिक प्रभावी है, लेकिन इसे संवर्धन विधियों के साथ भी जोड़ा जाना चाहिए। सभी प्रकार के कृमि के अंडों का पता लगाया जाता है, हालांकि, पिग्मी टैपवार्म (पारदर्शी अंडे) या ओपिसथोर्चिस (छोटे अंडे) के अंडों का पता लगाने के लिए, प्रयोगशाला सहायक को विशेष रूप से सावधान रहना चाहिए कि उन्हें याद न करें (चित्र 21)।

यह विधि मल के एक मोटे स्मीयर में हेल्मिन्थ अंडे का पता लगाने पर आधारित है, जिसे ग्लिसरीन से साफ किया जाता है और मैलाकाइट हरे रंग से रंगा जाता है। हाइड्रोफिलिक सिलोफ़न को पहले 20 x 40 मिमी प्लेटों में काट दिया जाता है और काटो मिश्रण (मैलाकाइट ग्रीन के 3% जलीय घोल के 6 मिलीलीटर, ग्लिसरॉल के 500 मिलीलीटर, 6% फिनोल समाधान के 500 मिलीलीटर) में डुबोया जाता है। मिश्रण का 3-5 मिलीलीटर 100 प्लेटों के लिए पर्याप्त है, जो एक दिन में उपयोग के लिए तैयार हैं और 6 महीने के लिए कमरे के तापमान पर एक अच्छी तरह से बंद कंटेनर में उसी मिश्रण में संग्रहीत किया जा सकता है। मैलाकाइट ग्रीन (प्रयोगशाला सहायक की आंखों की थकान को कम करने के लिए अनुशंसित) और फिनोल (कीटाणुनाशक) की अनुपस्थिति में, ग्लिसरीन के केवल 50% जलीय घोल का उपयोग किया जा सकता है, अध्ययन की प्रभावशीलता कम नहीं होती है।

चावल। 20. काटो के अनुसार सिलोफ़न से मल का गाढ़ा घोल तैयार करने की विधि

100 मिलीग्राम मलमूत्र एक कांच की स्लाइड पर लगाया जाता है, ऊपर के रूप में इलाज की गई सिलोफ़न प्लेट के साथ कवर किया जाता है, और एक रबर स्टॉपर के साथ दबाया जाता है ताकि मलमूत्र सिलोफ़न के नीचे से न फैले। स्मीयर की तैयारी के बाद माइक्रोस्कोप के कम या उच्च आवर्धन पर माइक्रोस्कोपी को 1 घंटे (गर्म मौसम में - 30-40 मिनट) के बाद नहीं किया जाता है। तैयारी की अस्पष्टता का कारण मल की एक मोटी परत, काटो मिश्रण में प्लेट की खराब प्रसंस्करण, सिलोफ़न के तहत तैयारी का अपर्याप्त जोखिम समय हो सकता है। ग्लिसरीन के साथ लंबे समय तक समाशोधन और तैयारी के अत्यधिक सुखाने से भी अंडों का पता लगाना मुश्किल हो जाता है।

घुमा विधि के अनुसार एस.एस. शुलमैन। मल में हेल्मिन्थ लार्वा का पता लगाने के लिए विधि प्रस्तावित की गई थी, मुख्य रूप से स्ट्रॉन्गिलॉइड। केवल ताजा उत्सर्जित मल की जांच की जाती है, जिनमें से 2-3 ग्राम को कांच के जार में स्थानांतरित किया जाता है, एक कांच की छड़ के साथ एक गोलाकार गति में 3-5 गुना खारा के साथ, बर्तन की दीवारों को छुए बिना हिलाया जाता है। केंद्र में हेलमिन्थ के अंडे और लार्वा जमा होते हैं। मिश्रण के बाद, छड़ी के अंत में बूंद को जल्दी से एक कांच की स्लाइड में स्थानांतरित कर दिया जाता है, एक कवरस्लिप के साथ कवर किया जाता है, और एक माइक्रोस्कोप के तहत जांच की जाती है।

संवर्धन के तरीके। संवर्धन विधियां अंडों के विशिष्ट गुरुत्व और उपयोग किए गए नमक के घोल में अंतर पर आधारित होती हैं, जिससे उनमें से थोड़ी मात्रा का पता लगाना संभव हो जाता है। यदि अंडों का विशिष्ट गुरुत्व द्रव के विशिष्ट गुरुत्व से अधिक है, तो अंडे तलछट में केंद्रित होते हैं, जिसकी जांच एक माइक्रोस्कोप के तहत की जाती है। इस अवसादन विधि का उपयोग कंपकंपी अंडे के लिए किया जाता है। समाधान के उच्च विशिष्ट गुरुत्व के साथ, अंडे तरल की सतह पर तैरते हैं, और फिर फिल्म की जांच की जाती है। ये प्लवनशीलता (फ्लोटिंग) विधियाँ हैं, ये हुकवर्म, व्हिपवर्म और पिग्मी टैपवार्म अंडे का पता लगाने के लिए सबसे प्रभावी हैं।

तैरने की विधि। फुलबॉर्न विधि सोडियम क्लोराइड के संतृप्त घोल में हेल्मिन्थ अंडे के तैरने पर आधारित है, जिसमें उच्च सापेक्ष घनत्व (1.2) होता है, जिससे अंडे का पता लगाना संभव हो जाता है। देशी स्मीयर का अध्ययन करने की तुलना में यह विधि अधिक प्रभावी है, हालांकि यह अधिक कठिन है। विधि के फायदे सस्तेपन और उपलब्धता हैं। देशी स्मीयर और फुलबॉर्न पद्धति के अध्ययन को संयोजित करने की अनुशंसा की जाती है।

उबलते समय 400 ग्राम सोडियम क्लोराइड को 1 लीटर पानी में घोलकर एक संतृप्त घोल तैयार किया जाता है। विलयन का आपेक्षिक घनत्व 1.18-1.22 है। घोल को एक बंद बोतल में रखा जाता है। विश्लेषण के लिए, 2-3 ग्राम मल को 30-50 मिलीलीटर की मात्रा के साथ एक जार में रखा जाता है और, एक छड़ी के साथ हिलाते हुए, सोडियम क्लोराइड का एक संतृप्त समाधान लगभग शीर्ष पर जोड़ा जाता है। कागज की एक पट्टी तैरते हुए बड़े कणों को जल्दी से हटा देती है। 45-60 मिनट के बाद। एक तार लूप के साथ बसने, सतह फिल्म को हटा दें और इसे 50% जलीय ग्लिसरॉल समाधान की एक बूंद में कांच की स्लाइड में स्थानांतरित करें। एक लूप के साथ फिल्म को हटाने के बजाय, आप जार में शीर्ष पर समाधान जोड़ सकते हैं, एक गिलास स्लाइड के साथ कवर कर सकते हैं, जिस सतह पर तैरते अंडे चिपकते हैं। कई तैयारियां की जा रही हैं। इसके अतिरिक्त, 2-4 तैयारी को तलछट से देखा जाता है, इसे 2 ग्लास स्लाइड्स पर एक आंख पिपेट के साथ उठाकर देखा जाता है। सतही फिल्म के अलावा, तलछट की जांच करना भी आवश्यक है, क्योंकि इस घोल में कंपकंपी के अंडे, टैनिएड्स, अनफर्टिलाइज्ड अंडे एस्केरिस नहीं तैरते हैं। कई कृमि के अंडे खारे घोल में तुरंत तैरते नहीं हैं। इसलिए, यदि पिग्मी टैपवार्म के अंडों की अधिकतम संख्या 15-20 मिनट के बाद तैरती है, तो एस्केरिस - 1.5-2 घंटे के बाद, व्हिपवर्म - 2-3 घंटे के बाद।

इस प्रकार, इस पद्धति के फायदों में इसकी सस्तीता और उपलब्धता शामिल है, नुकसान सतह फिल्म और तलछट पर तैयारी देखने की आवश्यकता है, साथ ही साथ बसने की अवधि भी है।

E. V. Kalantaryan की विधि भी एक संवर्धन विधि है, लेकिन यह Fülleborn विधि की तुलना में अधिक कुशल और सरल है। 1.38 के सापेक्ष घनत्व वाले सोडियम नाइट्रेट के संतृप्त घोल का उपयोग किया जाता है। इसलिए, अधिकांश कृमि के अंडे ऊपर तैरते हैं और सतह की फिल्म में पाए जाते हैं, तलछट परीक्षा की आवश्यकता नहीं होती है।

सोडियम नाइट्रेट का संतृप्त घोल तैयार करने के लिए, 1 किलो सोडियम नाइट्रेट नमक (सोडियम नाइट्रेट) को 1 लीटर पानी में घोलकर पूरी तरह से घुलने तक उबाला जाता है और सतह पर एक फिल्म बन जाती है। छानने के बिना, एक सूखी बोतल में डालें। सोडियम नाइट्रेट की अनुपस्थिति में, इसे अमोनियम नाइट्रेट (अमोनियम नाइट्रेट) से बदला जा सकता है, जो 1.7 किलोग्राम प्रति 1 लीटर पानी में घोलता है। परिणामी विलयन का आपेक्षिक घनत्व 1.3 है, जो सोडियम नाइट्रेट विलयन की तुलना में दक्षता को कुछ हद तक कम कर देता है।

विधि के लाभ: अधिकांश कृमि के अंडे जल्दी से निकलते हैं और सतह की फिल्म में पाए जाते हैं, जिससे तलछट का अध्ययन करने की आवश्यकता समाप्त हो जाती है। विधि का नुकसान सोडियम नाइट्रेट की कमी है, साथ ही यह तथ्य भी है कि कंपकंपी अंडे, ताइनिड ऑन्कोस्फीयर तैरते नहीं हैं और तलछट में रहते हैं। यह ध्यान में रखा जाना चाहिए कि एक समाधान में मल के लंबे समय तक (1-2 घंटे से अधिक) जोखिम के साथ, कुछ हेलमन्थ्स के अंडे सतह की फिल्म से गायब होकर सूजने और बसने लगते हैं।

अवसादन के तरीके

पी. पी. गोरीचेव की विधि अंडे के निपटान के सिद्धांत पर आधारित है। इस मामले में स्मीयर हल्का होता है, बिना मोटे अशुद्धियों के, जो कंपकंपी (opisthorchia, आदि) के छोटे अंडों का पता लगाने की सुविधा देता है। opisthorch अंडे का विशिष्ट गुरुत्व अधिक होता है, इसलिए वे खारे घोल में तैरते नहीं हैं।

एक संतृप्त सोडियम क्लोराइड समाधान के 70-100 मिलीलीटर को 2-3 सेमी के व्यास के साथ एक सिलेंडर में डाला जाता है। अलग से, 20-25 मिलीलीटर पानी में 0.5 ग्राम मल को अच्छी तरह मिलाएं और ध्यान से एक फ़नल के माध्यम से धुंध की दो परतों के साथ खारा पर एक सिलेंडर में फ़िल्टर करें, मिश्रण से बचें (ताकि दो स्पष्ट रूप से सीमांकित परतें बन जाएं)। 2-3 घंटों के बाद, मल के साथ ऊपरी परत को एक पिपेट के साथ चूसा जाता है, और शेष नमकीन घोल को 12-20 घंटे तक खड़े रहने या सेंट्रीफ्यूज करने के लिए छोड़ दिया जाता है। अवक्षेप को एक कांच की स्लाइड पर पिपेट किया जाता है, एक कवरस्लिप के साथ कवर किया जाता है और सूक्ष्मदर्शी किया जाता है।

गोरीचेव की विधि को ओपिस्टोरच अंडों का पता लगाने के लिए प्रस्तावित किया गया था और यह देशी स्मीयर परीक्षा और फुलबॉर्न विधि की तुलना में अधिक प्रभावी साबित हुई। वर्तमान में, opisthorchiasis (क्लोनोर्कियासिस) के निदान के लिए, काटो और Kalantaryan के तरीकों को काफी प्रभावी और तकनीकी रूप से सरल के रूप में अनुशंसित किया जाता है।

कसीसिलनिकोव विधि। डिटर्जेंट (डिटर्जेंट) का हिस्सा सर्फेक्टेंट की कार्रवाई के तहत, हेल्मिंथ अंडे मल से मुक्त होते हैं और तलछट में केंद्रित होते हैं।

लोटस वाशिंग पाउडर का 1% घोल पहले से तैयार किया जाता है। ऐसा करने के लिए, 1 लीटर नल के पानी में 10 ग्राम पाउडर घोलें। कमल की अनुपस्थिति में, अन्य वाशिंग पाउडर का भी उपयोग किया जा सकता है, लेकिन उनमें से प्रत्येक को उतना ही लेना चाहिए जितना कि 1 लीटर नल के पानी में वर्षा के बिना घुल जाता है। 30-50 मिलीलीटर की क्षमता वाले कांच के बर्तन में 20-30 मिलीलीटर डिटर्जेंट घोल डाला जाता है, मलमूत्र का एक छोटा हिस्सा वहां रखा जाता है और अच्छी तरह मिलाया जाता है। मल और घोल का अनुपात लगभग 1:20 होना चाहिए। मल कम से कम एक दिन के लिए घोल में होना चाहिए। इस दौरान तल पर 2-3 परतों का तलछट बनता है। निचली परत में मोटे भारी कण होते हैं, बीच की परत में हेल्मिन्थ अंडे एकत्र होते हैं, शीर्ष परत सफेद-भूरे रंग के गुच्छे होते हैं। फिर, एक पिपेट के साथ, तरल की 2-3 बूंदों को बीच की परत से एकत्र किया जाता है और एक ग्लास स्लाइड में स्थानांतरित किया जाता है। एक गिलास पर 2 तैयारियां तैयार की जाती हैं, जिन्हें कवरस्लिप से ढका जाता है और सूक्ष्मदर्शी किया जाता है।

कसीसिलनिकोव विधि आपको मल के साथ उत्सर्जित सभी प्रकार के कृमि के अंडों का पता लगाने की अनुमति देती है।

अवसादन की ईथर-औपचारिक विधि और रासायनिक-अवसादन विधि बहुत श्रमसाध्य है, उच्च दक्षता के साथ, विशेष रूप से सामूहिक परीक्षाओं में; इसलिए, ईथर-एसिटिक विधि का उपयोग करना अधिक समीचीन है। यह रासायनिक अभिकर्मकों के साथ तलछट के अतिरिक्त प्रसंस्करण के बाद, व्यावहारिक रूप से केवल हेल्मिन्थ अंडे प्राप्त करने की अनुमति देता है, जो छोटे कंपकंपी अंडे की पहचान की सुविधा प्रदान करता है। यह विधि सार्वभौमिक निकली, सभी आंतों के कृमि के अंडे, आंतों के प्रोटोजोआ के अल्सर का खुलासा करते हुए, इसका उपयोग आक्रमण की तीव्रता को निर्धारित करने के लिए भी किया जा सकता है।

अपकेंद्रित्र स्नातक परीक्षण ट्यूबों में एसिटिक एसिड के 10% समाधान के 7 मिलीलीटर डालो और 8 मिलीलीटर के निशान में 1 ग्राम मल जोड़ें। एक सजातीय मिश्रण बनने तक मल को एक छड़ी के साथ अच्छी तरह मिलाया जाता है, और फिर धुंध की दो परतों के माध्यम से एक और अपकेंद्रित्र ट्यूब में फ़िल्टर किया जाता है (ताकि फ़िल्टर किए गए समाधान की नई ट्यूब में फिर से 8 मिलीलीटर हो, यदि कम हो, तो आप अतिरिक्त रूप से कुल्ला कर सकते हैं एसिटिक एसिड के 10% समाधान के साथ एक पट्टी के साथ फ़नल, जिसके माध्यम से मल समाधान को फ़िल्टर किया जाता है)। इस नली में 2 मिली ईथर (10 मिली के निशान तक), स्टॉपर डालें और 30 सेकंड के लिए जोर से हिलाएं। मिश्रण को 3000 आरपीएम पर 1 मिनट (या 1500 आरपीएम पर 2 मिनट) के लिए सेंट्रीफ्यूज किया जाता है। कौयगुलांट परत (ट्यूब के ऊपरी भाग में एक कॉर्क के रूप में) को एक छड़ी के साथ ट्यूब की दीवारों से अलग किया जाता है और सतह पर तैरनेवाला के साथ सावधानी से निकाला जाता है। अवक्षेप (आमतौर पर छोटा, रंगहीन) एक पिपेट के साथ कांच की स्लाइड्स पर लगाया जाता है, एक कवरस्लिप और सूक्ष्मदर्शी के साथ कवर किया जाता है।

सबसे सरल को 4 वर्गों में विभाजित किया गया है:

जब इन्सिस्टेड किया जाता है, तो सूक्ष्मजीव एक गोल आकार प्राप्त कर लेता है और एक सुरक्षात्मक खोल से ढक जाता है। एक पुटी के रूप में, प्रोटोजोआ प्रतिकूल पर्यावरणीय कारकों के प्रति कम संवेदनशील हो जाते हैं।

अनुसंधान में शामिल हो सकते हैं:

टिप्पणी:निदान की कई किस्में हैं, हम उन प्रकारों पर विचार करेंगे जो नैदानिक ​​प्रयोगशाला अभ्यास में सबसे आम हैं।

निजी प्रकार के निदान

प्रत्येक विशिष्ट मामले में, प्रयोगशाला सहायक को एक विशिष्ट रोगज़नक़ खोजने का काम सौंपा जाता है, कभी-कभी अन्य मुख्य के साथ पाए जाते हैं।

मानव आंत में रहने में सक्षम इस सूक्ष्मजीव की 6 प्रजातियां हैं। केवल पेचिश अमीबा, जो वानस्पतिक रूप में और अल्सर के रूप में होता है, नैदानिक ​​महत्व का है।

इसके अतिरिक्त, प्रतिरक्षाविज्ञानी विधियों का उपयोग किया जाता है:

• अप्रत्यक्ष इम्यूनोफ्लोरेसेंस;
• अप्रत्यक्ष समूहन (पीएचए);
• रेडियल इम्यूनोडिफ्यूजन।

टिप्पणी: सीरोलॉजिकल तरीके सूचनात्मक नहीं हैं और केवल संदिग्ध मामलों में मुख्य के अतिरिक्त के रूप में उपयोग किए जाते हैं।

सिलिअरी का निदान (सिलियेट्स)

इस जीनस के सूक्ष्मजीवों का रोगजनक रूप बैलेंटीडिया है। यह एक सूक्ष्म जीव है जो बैलेंटिडायसिस का कारण बनता है - एक बीमारी जिसमें बड़ी आंत की अल्सरेटिव प्रक्रिया होती है। प्रेरक एजेंट एक देशी स्मीयर में एक वनस्पति रूप और एक पुटी के रूप में पाया जाता है। स्मीयर (मल और बलगम) के लिए सामग्री को सिग्मोइडोस्कोपी परीक्षा के दौरान लिया जाता है और विशेष मीडिया पर बोया जाता है।

फ्लैगेलेट्स का निदान (लीशमैनिया, जिआर्डिया, ट्रिपैनोसोम, ट्राइकोमोनैड्स)

लीशमैनिया, ट्रिपैनोसोमा, जिआर्डिया, ट्राइकोमोनैड इंसानों के लिए खतरनाक हैं।

लीशमैनिया- लीशमैनियासिस का कारण बनने वाले रोगाणुओं की जांच रक्त स्मीयर, अस्थि मज्जा सामग्री, त्वचा की घुसपैठ से स्क्रैपिंग में की जाती है। कुछ मामलों में, लीशमैनिया के निदान में, पोषक माध्यम पर बुवाई का उपयोग किया जाता है।

ट्रिपैनोसोम- नींद की बीमारी के कारक एजेंट (अमेरिकी / अफ्रीकी ट्रिपैनोसोमियासिस, या चागास रोग)।

परिधीय रक्त के अध्ययन में प्रारंभिक अवधि में अफ्रीकी संस्करण निर्धारित किया जाता है। रोग की प्रगति के दौरान पैथोलॉजिकल रोगाणु लिम्फ नोड्स के पंचर की सामग्री में पाए जाते हैं, उन्नत चरणों में - मस्तिष्कमेरु द्रव में।

संदिग्ध चगास रोग के मामले में ट्रिपैनोसोम का निदान करने के लिए, कम आवर्धन पर एक माइक्रोस्कोप के तहत परीक्षण सामग्री की जांच की जाती है। इस मामले में, स्मीयर और एक मोटी बूंद पूर्व-दागदार होती है।

ट्रायकॉमोनास(आंतों, मौखिक,) प्रभावित श्लेष्मा झिल्ली से ली गई सामग्री की माइक्रोस्कोपी द्वारा पता लगाया जाता है।

स्पोरोज़ोअन्स (मलेरिया प्लास्मोडियम, कोकिडोसिस का प्रेरक एजेंट, आदि) की पहचान

मनुष्यों के लिए सबसे आम और खतरनाक प्रजाति मलेरिया प्लास्मोडियम है, जिसमें रोगज़नक़ों की 4 मुख्य किस्में हैं: तीन दिवसीय मलेरिया, चार दिवसीय मलेरिया, उष्णकटिबंधीय मलेरिया और अंडाकार मलेरिया का प्रेरक एजेंट।

प्लाज्मोडियम (स्पोरोगनी) का यौन विकास एनोफिलीज मच्छरों में होता है। अलैंगिक (ऊतक और एरिथ्रोसाइट सिज़ोगोनी) - यकृत ऊतक और मानव एरिथ्रोसाइट्स में। मलेरिया प्लास्मोडियम का निदान करते समय जीवन चक्र की इन विशेषताओं को ध्यान में रखा जाना चाहिए।

तो, एक नए बीमार रोगी के रक्त में, स्पोरोगनी चक्र की रोगाणु कोशिकाएं पाई जा सकती हैं। लेकिन जब मलेरिया का हमला चरम पर होता है, तब रक्त में बड़ी संख्या में स्किज़ोंट दिखाई देते हैं।

इसके अलावा, मलेरिया बुखार के विभिन्न चरणों में, प्लास्मोडियम के विभिन्न रूप दिखाई देते हैं:

• ठंड की अवधि के दौरान, रक्त मेरोजोइट्स से भर जाता है, एक प्रकार का विक्षिप्तता;
• तापमान की ऊंचाई पर, अंगूठी के आकार के ट्रोफोज़ोइट्स एरिथ्रोसाइट्स में जमा होते हैं;
• तापमान में कमी अमीबिड ट्रोफोज़ोइट्स की प्रबलता की विशेषता है;
• सामान्य स्थिति की अवधि के दौरान, रक्त में स्किज़ोंट्स के वयस्क रूप होते हैं।

मलेरिया के प्रेरक कारक (मलेरिया प्लास्मोडियम) का अध्ययन एक स्मीयर और एक मोटी बूंद में किया जाता है।

टिप्पणी:स्मीयर और थिक ब्लड ड्रॉप्स के अध्ययन में मलेरिया का निदान कभी-कभी गलत होता है। कुछ मामलों में रक्त प्लेटलेट्स को गलती से मलेरिया रोगज़नक़ के रूप में वर्गीकृत किया जा सकता है। इसके अलावा, ल्यूकोसाइट्स और अन्य कोशिकाओं के टुकड़े कभी-कभी प्लास्मोडियम का अनुकरण करते हैं।

प्रोटोजोआ के लिए बुनियादी शोध विधियां

आइए प्रोटोजोआ की उपस्थिति के लिए सबसे आम शोध विधियों पर एक संक्षिप्त नज़र डालें।

देशी स्मीयर और लुगोल के घोल (मल में) से सना हुआ स्मीयर का उपयोग करके प्रोटोजोआ का निदान

दवा एक आइसोटोनिक समाधान में मल के पायस से तैयार की जाती है। सोडियम क्लोराइड और लुगोल के घोल की दो बूंदों को कांच की स्लाइड पर लगाया जाता है। परीक्षण सामग्री को लकड़ी की छड़ी के साथ दोनों रचनाओं में जोड़ा जाता है और कांच से ढकने के बाद, माइक्रोस्कोप के विभिन्न प्रस्तावों पर देखा जाता है।

कुछ संकेतों के अनुसार, पाए गए प्रोटोजोआ पंजीकृत हैं। सटीकता के लिए, एक सामग्री से 2-3 तैयारी तैयार की जाती है। संदिग्ध मामलों में, विश्लेषण 2-3 सप्ताह में कई बार दोहराया जाता है।

विधि वनस्पति और सिस्टिक रूपों का पता लगा सकती है:

• लैम्ब्लिया;
• बैलेंटीडिया;
• पेचिश अमीबा।

रोगजनक रूपों के साथ, गैर-रोगजनक प्रोटोजोआ भी निर्धारित किए जाते हैं। स्वस्थ वाहकों में ल्यूमिनल और सिस्टिक रूप भी होते हैं।

महत्वपूर्ण:अशुद्धियों और त्रुटियों से बचने के लिए अनुसंधान बार-बार किया जाना चाहिए।

देशी और दागदार स्मीयर की विधि द्वारा प्रोटोजोआ के निदान के परिणाम में रोगज़नक़ (पारभासी, पुटी, ऊतक) के रूप का विवरण होना चाहिए।

अनुसंधान आवश्यकताएँ:

• विश्लेषण के लिए ली गई सामग्री (तरल मल) की जांच शौच के 30 मिनट बाद नहीं की जाती है;
• शौच के 2 घंटे के भीतर गठित मल का निदान किया जाना चाहिए;
• सामग्री में अशुद्धियाँ (कीटाणुनाशक, पानी, मूत्र) नहीं होनी चाहिए;
• सामग्री के साथ काम करने के लिए केवल लकड़ी की छड़ियों का उपयोग किया जाता है, बलगम के फिसलने के कारण कांच उपयुक्त नहीं होते हैं;
• उपयोग के तुरंत बाद लाठी को जला देना चाहिए।

प्रोटोजोआ के निदान में संरक्षण विधि (मल की जांच)

एक परिरक्षक के साथ प्रोटोजोआ को ठीक करके अध्ययन किया जाता है। इस विधि और पिछली विधि के बीच का अंतर यह है कि परिरक्षक आपको लंबे समय तक दवा को बचाने की अनुमति देते हैं।

प्रयुक्त संरक्षक:

• बैरो। परिरक्षक तत्व शामिल हैं: 0.7 मिली सोडियम क्लोराइड, 5 मिली फॉर्मेलिन, 12.5 मिली 96% अल्कोहल, 2 ग्राम फिनोल और 100 मिली डिस्टिल्ड वॉटर। रंग संरचना: थियोनीन (नीला) का 0.01% समाधान।
• Safarliev का समाधान। रचना: 1.65 ग्राम जिंक सल्फेट, 10 मिली फॉर्मेलिन, 2.5 ग्राम क्रिस्टलीय फिनोल, 5 मिली एसिटिक एसिड, 0.2 ग्राम मेथिलीन ब्लू, 100 मिली पानी। इस परिरक्षक का उपयोग उन मामलों में किया जाता है जहां सामग्री को एक महीने से अधिक समय तक संग्रहीत किया जाना चाहिए।

खाली बोतलों को एक परिरक्षक से भर दिया जाता है, सामग्री को उनमें स्थानांतरित कर दिया जाता है, 3: 1 के अनुपात में, यदि आवश्यक हो, तो एक डाई जोड़ा जाता है। परिणामों का मूल्यांकन 2-3 दवाओं के अध्ययन में किया जाता है।

औपचारिक-ईथर संवर्धन विधि (मल में प्रोटोजोआ की उपस्थिति के लिए विश्लेषण)

यह निदान पद्धति आपको प्रोटोजोअन सिस्ट को अलग करने और ध्यान केंद्रित करने की अनुमति देती है। विश्लेषण के लिए निम्नलिखित अवयवों की आवश्यकता होती है: फॉर्मेलिन (10 मिली), आइसोटोनिक घोल का 0.85 ग्राम, आसुत जल, सल्फ्यूरिक ईथर, लुगोल का घोल।

सूचीबद्ध तरल पदार्थों के साथ बायोमटेरियल का मिश्रण मिश्रित और सेंट्रीफ्यूज किया जाता है। ट्यूब के तल पर प्राप्त अवक्षेप को लुगोल के घोल से दाग दिया जाता है और अल्सर और वनस्पति रूपों की उपस्थिति के लिए जांच की जाती है।

लीशमैनिया डिटेक्शन मेथड (बोन मैरो स्मीयर)

लीशमैनियासिस के निदान के लिए, अभिकर्मकों का उपयोग किया जाता है: रोमनोवस्की के अनुसार निकिफोरोव (सल्फ्यूरिक ईथर और एथिल अल्कोहल), फॉस्फेट बफर, अज़ूर-एओसिन का मिश्रण।

अस्थि मज्जा पदार्थ को विशेष तैयारी के बाद कांच की स्लाइड पर बहुत सावधानी से रखा जाता है। एक विसर्जन प्रणाली के साथ एक माइक्रोस्कोप का उपयोग किया जाता है।

रोग की तीव्र अवधि में, पंचर में बड़ी संख्या में लीशमैनिया पाए जाते हैं।

टिप्पणी:कभी-कभी रक्त कोशिकाएं उपचारित लीशमैनिया से मिलती-जुलती हो सकती हैं, इसलिए प्रयोगशाला तकनीशियन के लिए चौकस रहना और स्वतंत्र रूप से अध्ययन करने के लिए पर्याप्त अनुभव होना बहुत महत्वपूर्ण है।

एक त्वचा घुसपैठ से एक धब्बा में लीशमैनिया का पता लगाने की विधि

आवश्यक अभिकर्मक पिछले परख के समान हैं।

परीक्षण सामग्री मौजूदा ट्यूबरकल या अल्सरेटिव सामग्री से प्राप्त की जाती है। लीशमैनियासिस के संदेह के साथ स्क्रैपिंग रक्त के बिना, एक स्केलपेल के साथ बहुत सावधानी से किया जाता है। फिर कांच पर तैयारी तैयार की जाती है। प्राप्त परिणामों की सटीकता के लिए, कई तैयारियों की एक साथ जांच की जाती है।

एक रोग की उपस्थिति में, परीक्षण सामग्री में मौजूद मैक्रोफेज, फाइब्रोब्लास्ट और लिम्फोइड कोशिकाओं के बीच, लीशमैनिया भी निर्धारित किया जाता है।

पैथोलॉजिकल ऊतकों को स्क्रैप करके प्राप्त लीशमैनिया की शुद्ध संस्कृति को अलग करने की विधि

निदान की इस पद्धति के साथ सबसे सरल ऊतक स्क्रैपिंग को एक विशेष पोषक माध्यम में रखा जाता है जिसमें लीशमैनिया सक्रिय रूप से प्रजनन करता है।

स्क्रैपिंग लेने से पहले, त्वचा को अल्कोहल से सावधानीपूर्वक उपचारित किया जाता है, फिर ट्यूबरकल में एक चीरा लगाया जाता है, जिसके नीचे से सामग्री को हटाकर माध्यम के साथ एक टेस्ट ट्यूब में रखा जाता है। सामग्री को कई बार लिया जाता है, जिसके बाद इसे अलग-अलग टेस्ट ट्यूब में रखा जाता है। फिर थर्मोस्टेट में 22-24 डिग्री के तापमान पर खेती होती है। परिणामों का मूल्यांकन एक माइक्रोस्कोप के तहत किया जाता है। इस पद्धति का उपयोग तब किया जाता है जब प्रोटोजोआ के निदान के अन्य, सस्ते और तेज तरीके अप्रभावी होते हैं।

आप एक वीडियो समीक्षा देखकर देख सकते हैं कि रक्त की एक बूंद से प्रोटोजोआ की उपस्थिति के परीक्षण को व्यवहार में कैसे समझा जाता है:

लोटिन अलेक्जेंडर, चिकित्सा स्तंभकार

हेल्मिन्थोलॉजिकल अनुसंधान के तरीकों को प्रत्यक्ष और अप्रत्यक्ष में विभाजित किया गया है। प्रत्यक्ष तरीके: स्वयं हेल्मिन्थ्स का पता लगाना, उनके टुकड़े, अंडे, मल में लार्वा, मूत्र, ग्रहणी स्राव, थूक, नाक और योनि बलगम, सबंगुअल रिक्त स्थान की सामग्री, बायोप्सीड ऊतक के टुकड़े। अप्रत्यक्ष तरीके: परजीवी की महत्वपूर्ण गतिविधि, सीरोलॉजिकल प्रतिक्रियाओं, सामान्य रक्त और मूत्र परीक्षणों के परिणामस्वरूप मानव शरीर में होने वाले माध्यमिक परिवर्तनों का पता लगाना। मल की जांच के लिए सबसे आम तरीके हेल्मिन्थूवोस्कोपिक और प्रोटोज़ूस्कोपिक हैं। निदान करते समय, किसी भी एक विधि द्वारा मानव पाचन तंत्र में रहने वाले सभी प्रकार के कृमि के अंडे या लार्वा की पहचान करना असंभव है। इस प्रकार, प्लवनशीलता विधि का उपयोग करते समय, कंपकंपी अंडे और, कुछ मामलों में, असंक्रमित राउंडवॉर्म अंडे सतह की फिल्म (उच्च विशिष्ट गुरुत्व के कारण) में नहीं तैरते हैं। मल में, पिनवॉर्म अंडे, टेनिड ऑन्कोस्फीयर मिलना बहुत दुर्लभ है, जो विशेष शोध विधियों द्वारा पता लगाया जाता है: पिनवॉर्म और टेनिड्स के लिए पेरिअनल सिलवटों से स्क्रैपिंग, कंपकंपी के लिए अवसादन विधियाँ (ऑपिस्टोर अंडे, आदि)। इसलिए, हेलमनिथेसिस के लिए रोगी की लक्षित परीक्षा के लिए, रेफरल में डॉक्टर को संकेत देना चाहिए कि किस हेल्मिन्थ को मुख्य ध्यान (निदान) दिया जाना चाहिए, जो प्रयोगशाला सहायक को इस प्रकार के हेल्मिन्थ की पहचान करने के लिए उपयुक्त तकनीक चुनने की अनुमति देगा। एक साफ कांच के बर्तन में कम से कम 50 ग्राम (चम्मच) की मात्रा में मल के विभिन्न स्थानों से लिए गए मल को शौच के एक दिन बाद प्रयोगशाला में भेजा जाना चाहिए और प्राप्ति के दिन जांच की जानी चाहिए। यदि अगले दिन तक मल को रखना आवश्यक है, तो इसे ठंडे स्थान (0-4 डिग्री सेल्सियस) में रखा जाता है या किसी एक संरक्षक से भर दिया जाता है। अध्ययन से पहले, मल को एक छड़ी के साथ मिलाया जाता है ताकि कृमि के अंडे कुल द्रव्यमान में समान रूप से वितरित हो जाएं। यदि तैयारी में कोई भी हेल्मिंथ अंडे पाए जाते हैं, तो देखना बंद नहीं होता है, क्योंकि। दोहरा या तिहरा आक्रमण हो सकता है। हेल्मिंथियासिस के उपचार की प्रभावशीलता की निगरानी 2-3 सप्ताह या 2-3 महीने में उपचार के बाद हेल्मिन्थ अंडे के लिए मल की जांच करके की जाती है, जो कि पता चला हेलमिन्थ पर निर्भर करता है। मैक्रोस्कोपिक विधियों का उपयोग नग्न आंखों या हाथ से पकड़े हुए आवर्धक कांच के साथ पूरे यौन परिपक्व कृमि या मल में उनके टुकड़ों का पता लगाने के लिए किया जाता है। अक्सर शौच के बाद मल की सतह पर, आप सक्रिय रूप से रेंगने वाले पिनवॉर्म देख सकते हैं; राउंडवॉर्म मल के साथ उत्सर्जित; कभी-कभी लोग खुद हेलमन्थ्स के निर्वहन को नोटिस करते हैं। डिपाइलोबोथ्रियासिस वाले रोगियों में, टैपवार्म के स्ट्रोबिलस के टुकड़े ("नूडल्स" के रूप में) बाहर खड़े हो सकते हैं, और टेनिड्स (सूअर का मांस या गोजातीय टैपवार्म) से संक्रमित लोगों में, हेल्मिन्थ्स के खंड ("सफेद कटौती" के रूप में) ) अक्सर मल छोड़ देते हैं ("सफेद कटौती" के रूप में) या वे सक्रिय रूप से गुदा से बाहर निकलते हैं। टेनियाडोसिस और टेनियारिन्कोसिस (एक सर्वेक्षण के साथ संयोजन में) के विभेदक निदान के लिए मैक्रोस्कोपिक विधि मुख्य है। विशेष मैक्रोस्कोपिक विधियों में से, मल की क्रमिक धुलाई की विधि का उपयोग किया जाता है। एक समान निलंबन प्राप्त करने के लिए मल को पानी में मिलाया जाता है, जिसके बाद, अच्छी रोशनी के तहत, उन्हें अलग-अलग छोटे भागों में काले फोटोग्राफिक क्यूवेट्स में या पेट्री डिश में एक गहरे रंग की पृष्ठभूमि पर सावधानीपूर्वक जांचा जाता है। चिमटी या एक विदारक सुई के साथ, सभी संदिग्ध सफेद कण, हेलमिन्थ के टुकड़ों के संदिग्ध बड़े गठन को हटा दिया जाता है और दो ग्लास स्लाइड के बीच एक आवर्धक कांच के नीचे जांच की जाती है। ग्लिसरीन की एक बूंद में या एक माइक्रोस्कोप के तहत एक आवर्धक कांच के नीचे छोटे कीड़े या सेस्टोड के सिर की जांच की जाती है। सूअर का मांस, गोजातीय टैपवार्म, विस्तृत टैपवार्म के खंडों के निदान के लिए इस पद्धति का उपयोग करते समय, धुले हुए खंडों को दो गिलास के बीच रखा जाता है और, एक आवर्धक कांच के नीचे प्रकाश को देखते हुए या सूक्ष्मदर्शी के कम आवर्धन द्वारा, प्रजातियों द्वारा निर्धारित किया जाता है गर्भाशय की संरचना (सूअर का मांस टैपवार्म के एक परिपक्व खंड में, 8- 12 पार्श्व शाखाएं, और एक बैल टैपवार्म में 18-32, अधिक बार 28-32, एक विस्तृत टैपवार्म में, खंड व्यापक होते हैं और गर्भाशय अंदर होता है "रोसेट" के रूप में केंद्र)। यदि गर्भाशय खराब दिखाई देता है, तो इसे पहले कुछ समय के लिए 50% ग्लिसरीन के घोल में रखा जा सकता है, जिसके बाद गर्भाशय की सूंड भी स्पष्ट रूप से दिखाई देती है। अलग किए गए सिर की संरचना द्वारा इन सेस्टोड का निर्धारण करते समय, उन्हें कांच की स्लाइड (या एक कवरस्लिप के साथ कवर) के बीच ग्लिसरॉल की एक बूंद में गर्दन के साथ सावधानी से रखा जाता है और, बिना निचोड़ के, कम आवर्धन पर एक माइक्रोस्कोप के तहत जांच की जाती है।

सूक्ष्म विधियों को सरल, जटिल और विशेष में विभाजित किया गया है।

सरल तरीकों में देशी स्मीयर, लुगोल के घोल के साथ देशी स्मीयर, काटो के अनुसार सिलोफ़न के नीचे गाढ़ा धब्बा, घुमा (शुलमैन के अनुसार) और पेरिअनल स्क्रैपिंग शामिल हैं।

जटिल विधियाँ अधिक कुशल होती हैं और तैयारियों में अंडों की सांद्रता पर आधारित होती हैं। इनमें तरल अभिकर्मकों के साथ मल का पूर्व-उपचार शामिल है, जिसके परिणामस्वरूप हेल्मिंथ अंडे या तो तरल की सतह पर अवक्षेपित या तैरते हैं।

जटिल विधियों में संवर्धन विधियाँ शामिल हैं:

ए) प्लवनशीलता (जब अंडों का विशिष्ट गुरुत्व खारा घोल के विशिष्ट गुरुत्व से कम होता है और अंडे सतह की फिल्म में तैरते हैं);

बी) अवसादन (जब अंडों का विशिष्ट गुरुत्व नमक के घोल के विशिष्ट गुरुत्व से अधिक होता है और अंडे तलछट में बस जाते हैं)।

प्रोटोजोआ के कृमि, सिस्ट और वानस्पतिक रूपों के अंडे और लार्वा का पता लगाने के लिए विशेष तरीके स्क्रैपिंग, प्लवनशीलता, अवसादन, लार्वोस्कोपी, प्रोटोजोस्कोपी, पित्त का अध्ययन और मल, थूक, आदि के स्मीयरों को धुंधला करने के तरीके हैं।

नमूनाकरण और संरक्षण

शोध के लिए अलग-अलग जगहों से 50 ग्राम के हिस्से में मल लिया जाता है और एक साफ कांच या प्लास्टिक के कंटेनर में कसकर ढक्कन के साथ प्रयोगशाला में भेजा जाता है। शौच के तुरंत बाद ताजा मल की जांच की जाती है (एक दिन से अधिक पुराना नहीं), और कुछ मामलों में (स्ट्रॉन्गिलोडायसिस के अध्ययन में)। कृमि के अंडों वाले मल के लिए कई परिरक्षकों का प्रस्ताव किया गया है: 4-10% फॉर्मेलिन घोल, जिसे हुकवर्म के अंडों के विकास को रोकने के लिए t° 50-60° तक गर्म किया जाना चाहिए; सोडियम नाइट्रेट के 0.2% जलीय घोल (1900 मिली), लुगोल के घोल (5 ग्राम आयोडीन, 10 ग्राम पोटेशियम आयोडाइड, 250 मिली पानी), फॉर्मेलिन (300 मिली) और ग्लिसरीन (25 मिली) का मिश्रण, जिसमें हेल्मिंथ अंडे 6-8 महीने संग्रहीत किए जाते हैं; ग्लिसरीन (5 मिली), फॉर्मेलिन (5 मिली) और पानी (100 मिली) का मिश्रण; 1-1.5% डिटर्जेंट "लोटस", "अतिरिक्त", "बर्फ", "टाइड", आदि के समाधान (मल और डिटर्जेंट समाधान 1: 5 के वजन अनुपात में); मेरथिओलेट 1: 1000 (200 मिली), फॉर्मेलिन (25 मिली), ग्लिसरीन (5 मिली), आसुत जल (250 मिली) का मिश्रण 0.6 मिली लुगोल के घोल के साथ (1 ग्राम मल प्रति 10 मिली पर आधारित) मिश्रण)।

हेल्मिन्थेसिस के निदान के लिए, मल की जांच के लिए मैक्रो- और माइक्रोहेल्मिन्थोस्कोपिक विधियों का उपयोग किया जाता है।

मैक्रोहेल्मिन्थोस्कोपी अध्ययन

निपटान विधि

मल के दैनिक भाग को अच्छी तरह से 5-10 गुना पानी के साथ मिलाया जाता है, उच्च कांच के सिलेंडर (जार, बाल्टी) में डाला जाता है और तब तक छोड़ दिया जाता है जब तक कि निलंबित कण पूरी तरह से व्यवस्थित न हो जाएं। बादलों की ऊपरी परत को सावधानी से निकाला जाता है और ऊपर से साफ पानी डाला जाता है (कई बार दोहराएं जब तक कि तलछट के ऊपर का पानी पारदर्शी न हो जाए)। ऊपर की परत को सूखाने के बाद, अवक्षेप को एक क्युवेट या पेट्री डिश में स्थानांतरित करें और इसे (एक गहरे रंग की पृष्ठभूमि पर) एक आवर्धक कांच के नीचे या नग्न आंखों से देखें।

स्क्रीनिंग विधि

पानी के साथ मिश्रित मल को उपकरण की ऊपरी छलनी पर रखा जाता है, जिसमें घटते व्यास के छेद वाले छलनी की एक प्रणाली होती है, उपकरण पानी की आपूर्ति नेटवर्क से जुड़ा होता है और पानी के नल को खोलकर धोया जाता है, और बहता हुआ तरल सीवर में छोड़ा जाता है। बड़े हेलमन्थ ऊपरी छलनी पर रहते हैं, जबकि छोटे हेलमन्थ निचले वाले पर रहते हैं। छलनी को पलट दिया जाता है और सामग्री को गहरे रंग के क्युवेट में धोकर, उन्हें नग्न आंखों से या एक आवर्धक कांच के नीचे देखा जाता है।

माइक्रोहेल्मिन्थोस्कोपी अध्ययन

यह अंडे का पता लगाने के लिए किया जाता है (हेल्मिन्थो-ओवोस्कोपिक तरीके - रंग। अंजीर। 1) या हेल्मिन्थ लार्वा (हेल्मिन्थो-लार्वोस्कोपिक तरीके)।

हेल्मिंटोवोस्कोपिक तरीके

संवर्धन के बिना गुणात्मक तरीके

देशी धब्बा. 50% ग्लिसरॉल घोल या उबले हुए पानी की एक बूंद में कांच की स्लाइड पर मल की थोड़ी मात्रा को ट्रिट्यूरेट किया जाता है। बड़े कणों को सावधानीपूर्वक हटा दिया जाता है, मिश्रण को एक कवरस्लिप के साथ कवर किया जाता है और एक माइक्रोस्कोप के तहत जांच की जाती है (दो स्मीयर देखे जाते हैं)। दो काँच की स्लाइडों के बीच लंबी स्मीयर तैयार करना अधिक सुविधाजनक और आसान है। देशी स्मीयर का उपयोग केवल संवर्धन विधियों के अतिरिक्त किया जाता है, क्योंकि यह पर्याप्त प्रभावी नहीं है, खासकर कमजोर आक्रमणों के साथ।

काटो के अनुसार सिलोफ़न के साथ गाढ़ा धब्बा(के. काटो, 1954) एक बहुत ही प्रभावी शोध पद्धति है। हाइड्रोफिलिक सिलोफ़न के टुकड़े (आकार में 4x2 सेमी) ग्लिसरॉल (50 मिली), 6% फिनोल घोल (500 मिली) और 3% जलीय घोल (6 मिली) ग्रीन मैलाकाइट (बाद वाला वैकल्पिक है) के मिश्रण में 24 घंटे के लिए भिगोया जाता है। ) ठीक है। 100 मिलीग्राम मल को एक कांच की स्लाइड पर लिप्त किया जाता है और गीले सिलोफ़न के एक टुकड़े के साथ कवर किया जाता है, एक रबर स्टॉपर नंबर 5 के साथ दबाया जाता है। 30-60 मिनट के बाद दवा की जांच की जाती है, जब यह थोड़ा सूख जाता है और साफ हो जाता है, जैसे कि जिसके परिणामस्वरूप कम आवर्धन माइक्रोस्कोप के तहत हेल्मिंथ अंडे का पता लगाना आसान होता है।

संवर्धन के साथ गुणात्मक तरीके (अस्थायी और बसने के तरीके)

पहले विभिन्न रसायनों के संतृप्त समाधानों के उपयोग पर आधारित हैं। पदार्थ जिनमें विशिष्ट गुरुत्व में अंतर के कारण अंडे तैरते हैं।

कोफॉइड-नाई विधि(Ch.A. Kofoid, M. A. Barber) फुलबॉर्न द्वारा संशोधित (F. Fulleborn, 1920)। ठीक है। एक लंबे और संकीर्ण जार (मात्रा 100 मिलीलीटर) में 5 ग्राम मल को टेबल नमक के संतृप्त घोल के 100 मिलीलीटर में लकड़ी की छड़ी से हिलाया जाता है। वजन से रोगो 1,18 (400 ग्राम नमक 1 लीटर पानी में उबालने पर घुल जाता है)। सतह पर तैरने वाले बड़े कणों को छड़ी या कागज के टुकड़े से जल्दी से हटा दिया जाता है। मिश्रण को 45-90 मिनट तक जमने के बाद। एक वायर लूप (0.8-1 सेमी व्यास) पूरी सतह फिल्म को हटा देता है, इसे एक ग्लास स्लाइड में स्थानांतरित करता है। हुकवर्म के अंडों का परीक्षण करते समय, मिश्रण को 10-15 मिनट के लिए खड़े रहने के लिए छोड़ दिया जाता है। आप कांच की स्लाइड से फिल्म को सीधे हटा सकते हैं, जो जार को ढक देती है ताकि वह तरल के संपर्क में आ जाए (जार के किनारों पर एक संतृप्त नमक घोल डाला जाता है)। बसने के बाद, स्लाइड को हटा दिया जाता है, जल्दी से पलट दिया जाता है और एक माइक्रोस्कोप (बिना कवर स्लिप के) की जांच की जाती है, जिसमें हेल्मिन्थ अंडे का पालन होता है। यह विधि सभी सूत्रकृमियों और बौने टैपवार्म के अंडों को अच्छी तरह से प्रकट करती है। भारी कंपकंपी अंडे; अधिकांश सेस्टोड और अनफर्टिलाइज्ड राउंडवॉर्म खराब तरीके से तैरते हैं, इसलिए तलछट की भी जांच की जाती है। ऐसा करने के लिए, फिल्म को हटाने के बाद, जार से तरल जल्दी से निकल जाता है और तलछट से कुछ बूंदों को एक लूप या पिपेट के साथ लिया जाता है, एक गिलास स्लाइड में स्थानांतरित किया जाता है, ग्लिसरीन की एक बूंद स्पष्टीकरण के लिए जोड़ा जाता है और एक के तहत जांच की जाती है सूक्ष्मदर्शी

विधि ई. वी. कलंतरायण(1938) फुलबॉर्न पद्धति का अधिक कुशल संशोधन है। इसमें, सोडियम क्लोराइड के घोल को सोडियम नाइट्रेट, sp के संतृप्त घोल से बदल दिया जाता है। वजन से रोगो 1.39 (उबलते समय सोडियम नाइट्रेट की एक मात्रा पानी की समान मात्रा में घुल जाती है), फिल्म को 20-30 मिनट के बाद हटा दिया जाता है।

फॉस्ट के तरीके भी लागू होते हैं (ई.एस. फॉस्ट, 1939), ब्रुडास्तोव एट अल। (1970) और अन्य।

कृमि के अंडों के निक्षेपण के लिए एक रसायन का प्रयोग किया जाता है। पदार्थ जो मल में वसा और प्रोटीन को घोलते हैं।

मियागावा (वाई। मियागावा, 1913) द्वारा संशोधित टेलीमैन की विधि (डब्ल्यू। टेलीमैन, 1908). ठीक है। 5 ग्राम मल को मोर्टार या जार में डाला जाता है, जिसमें 5 मिली एथिल ईथर और 50% हाइड्रोक्लोरिक एसिड घोल मिलाया जाता है; मिश्रण को एक तार या बालों की छलनी के माध्यम से एक परखनली में फ़िल्टर किया जाता है और अपकेंद्रित्र किया जाता है। टेस्ट ट्यूब में तीन परतें बनती हैं: शीर्ष पर - भंग वसा के साथ ईथर, नीचे - हाइड्रोक्लोरिक एसिड भंग प्रोटीन पदार्थों के साथ, तलछट में - मल और हेल्मिन्थ अंडे के अघुलनशील हिस्से। ऊपरी परतों को सूखा दिया जाता है, और तलछट में पानी डाला जाता है और सेंट्रीफ्यूज किया जाता है। अवक्षेप की कुछ बूंदों को एक कांच की स्लाइड में स्थानांतरित किया जाता है और एक माइक्रोस्कोप के तहत जांच की जाती है। यह विधि सभी प्रकार के कृमि के अंडों का पता लगा सकती है, लेकिन कभी-कभी वे विकृत हो जाते हैं।

रिची विधि (एल. एस. किची, 1948)।वसा और प्रोटीन को घोलने के लिए फॉर्मेलिन और ईथर का उपयोग किया जाता है।

हेल्मिंथ अंडे के निक्षेपण के लिए विभिन्न अपमार्जकों का उपयोग किया जा सकता है। विदेशों में, विशेष बेल उपकरणों में निस्पंदन विधि व्यापक हो गई है, जिसका उपयोग न केवल मल, बल्कि मूत्र, रक्त आदि का भी अध्ययन करने के लिए किया जाता है।

ऐसी कई विधियाँ हैं जो प्लवनशीलता और अंडे के बसने के सिद्धांतों को जोड़ती हैं। इनमें लेन (C. A. Lane), Rivas (D. Rivas), Gorkina, Darling (S. T. Darling) के तरीके शामिल हैं। इन प्लवनशीलता-अवसादन विधियों में से एक, साथ ही साथ क्रमिक निर्वहन की विधि, एन.वी. डेमिडोव (1963, 1965) द्वारा फैसीओलियासिस और डाइक्रोसेलियोसिस पर शोध के लिए प्रस्तावित की गई थी।

मात्रात्मक विधियां

स्टॉल विधि(एन. आर. स्टोल, 1926)। एक स्नातक की हुई चौड़ी परखनली या फ्लास्क (दो अंकों के साथ: 56 और 60 मिली) में, डिसीनॉर्मल सोडियम हाइड्रॉक्साइड घोल को पहले निशान तक डाला जाता है, मल को तब तक मिलाया जाता है जब तक कि तरल स्तर दूसरे निशान तक नहीं पहुंच जाता, पूरी तरह से कांच की छड़ के साथ मिलाया जाता है और , 10 कांच के मनके या छोटे कंकड़, डाट रखकर 1 मिनट के लिए हिलाएं। जल्दी से, ताकि निलंबन व्यवस्थित न हो, मिश्रण का 0.075 मिलीलीटर (मल का 0.005 ग्राम) एक स्नातक पिपेट के साथ एकत्र किया जाता है, उस पर लागू ग्रिड के साथ एक ग्लास स्लाइड में स्थानांतरित किया जाता है, एक कवर पर्ची और हेल्मिन्थ अंडे के साथ कवर किया जाता है। तैयारी एक माइक्रोस्कोप के तहत गिना जाता है; परिणामी संख्या को 200 से गुणा करके, 1 ग्राम मल में अंडों की संख्या प्राप्त करें। अधिक सटीक परिणाम के लिए, अंडों को दो या दो से अधिक तैयारियों में गिना जाता है और एक औसत लिया जाता है। स्टोल विधि कमजोर आक्रमणों के लिए असंवेदनशील है। इसलिए, विभिन्न प्लवनशीलता या अवसादन विधियों द्वारा तैयार की गई तैयारियों में अंडों की संख्या की गणना करने की सिफारिश की जाती है, बशर्ते कि समान मात्रा के मल और व्यंजनों का समान वजन लगातार उपयोग किया जाए। मोटे काटो स्मीयर का भी उपयोग किया जाता है।

बीवर विधि(आर.सी. बीवर, 1950)। एक मानक स्मीयर तैयार किया जाता है, जिसका घनत्व इलेक्ट्रोफोटोमीटर का उपयोग करके निर्धारित किया जाता है, और फिर इसमें सभी हेल्मिन्थ अंडे गिने जाते हैं।

हेल्मिंटोलरवोस्कोपिक तरीके

बर्मन विधि(जी. बर्मन, 1917)। 5-10 ग्राम ताजा उत्सर्जित मल को कांच की कीप में धातु की जाली पर रखा जाता है, जिसके संकीर्ण सिरे पर एक क्लैंप के साथ एक रबर ट्यूब लगाई जाती है। मल के कणों के साथ तलछट के संदूषण से बचने के लिए, कागज को (जाल पर) रखने या मल में पशु चारकोल या कॉर्नमील मिलाने की सिफारिश की जाती है। फ़नल को गर्म पानी (t ° 45-50 °) से तब तक भरा जाता है जब तक कि यह मल के संपर्क में न आ जाए। थर्मोट्रोपिज्म के कारण, लार्वा सक्रिय रूप से गर्म पानी में चले जाते हैं और धीरे-धीरे कीप के निचले हिस्से में क्लैंप के ऊपर जमा हो जाते हैं। 3-4 घंटों के बाद, क्लैंप खोला जाता है, तरल को 1-2 टेस्ट ट्यूबों में उतारा जाता है, 2-3 मिनट के लिए सेंट्रीफ्यूज किया जाता है, शीर्ष परत को सूखा दिया जाता है, और एक माइक्रोस्कोप के तहत कांच की स्लाइड पर अवक्षेप की जांच की जाती है।

मिरासिडिया शिस्टोसोम का पता लगाने की विधि। अंधेरे में मल को t° 8-10° पर धोया जाता है, तलछट को 45 मिनट तक रखा जाता है। t ° 28 ° पर तेज रोशनी में, फिर किनारे पर एक ट्यूब के साथ एक अंधेरे फ्लास्क में डालें। मिरेसिडिया एक पारदर्शी साइड ट्यूब में केंद्रित होते हैं जहां से उन्हें निकाला जा सकता है।

फुलबॉर्न और अन्य विधियों का उपयोग हुकवर्म लार्वा का पता लगाने के लिए भी किया जाता है।

अन्य स्रावों, साथ ही ऊतकों और अंगों के अध्ययन के तरीके

ठीक है। परीक्षण मूत्र के 100 मिलीलीटर 30 मिनट के लिए खड़े रहते हैं। एक सिलेंडर में और, ऊपरी परत को हटाकर, एक परखनली में 10-15 मिलीलीटर तलछट डालें, 1-2 मिनट के लिए 1500 आरपीएम पर अपकेंद्रित्र करें; तलछट की जांच की जाती है। मूत्र के पूरे दैनिक हिस्से को इकट्ठा करने की सलाह दी जाती है।

मिरेसिडिया की पहचान करके यूरोजेनिकल शिस्टोसोमियासिस का निदान किया जाता है। ताजा मूत्र के एक हिस्से को 5 मिनट के लिए सेंट्रीफ्यूज किया जाता है, तलछट को काले रंग के फ्लास्क में डाला जाता है, एक पारदर्शी कांच की ट्यूब को कट के ऊपरी हिस्से में मिलाया जाता है। पानी को 1:5, 1:10 के अनुपात में जोड़ा जाता है और 2 घंटे के लिए थर्मोस्टैट में t ° 25-30 ° पर रखा जाता है। अंडों से निकलने वाले मिरेसिडिया एक पारदर्शी ट्यूब के माध्यम से नग्न आंखों के साथ तेजी से बढ़ते बिंदुओं के रूप में दिखाई देते हैं। ह्रोन में, पेशाब के अंत तक रोगियों में शिस्टोसोमियासिस का रूप आवंटित किया जाता है, लेकिन मूत्र में अंडे शायद ही कभी मिलते हैं इसलिए मूत्राशय की बायोप्सी का सहारा लेने की सिफारिश की जाती है।

थूक की जांच।थूक में पैरागोनिमस, शिस्टोसोम, टोमिनक्स, माइग्रेटिंग नेमाटोड के लार्वा, इचिनोकोकल मूत्राशय के टुकड़े हो सकते हैं। थूक के पूरे वितरित हिस्से की नग्न आंखों से या एक आवर्धक कांच के नीचे सावधानीपूर्वक जांच की जाती है, ऊतक के सभी दिखाई देने वाले स्क्रैप, जंग के रंग के गुच्छों आदि का चयन किया जाता है और उनकी जांच की जाती है; फिर पूरे हिस्से को स्ट्रोक के साथ देखें। पुरुलेंट थूक को समान मात्रा में 0.5% कास्टिक क्षार घोल के साथ डाला जाता है, सेंट्रीफ्यूज किया जाता है और तलछट की जांच की जाती है।

कुछ हेल्मिन्थियसिस के साथ, थूक में विशिष्ट परिवर्तन देखे जाते हैं। पैरागोनिमियासिस के साथ, उदाहरण के लिए, थूक में, पीले रंग की गांठ के रूप में अंडे के समूह पाए जा सकते हैं, साथ ही बड़ी मात्रा में बलगम, ल्यूकोसाइट्स, एरिथ्रोसाइट्स, वायुकोशीय कोशिकाएं, कुर्शमैन के सर्पिल, लोचदार फाइबर, चारकोट-लीडेन क्रिस्टल। नुकीले सिरों वाले विशेषता समचतुर्भुज क्रिस्टल भी प्रकट होते हैं। बड़ी संख्या में ईोसिनोफिल्स की उपस्थिति से पैरागोनिमियासिस को तपेदिक से अलग करना संभव हो जाता है।

फोड़े और पंचर की सामग्री की जांच. फोड़े के शुद्ध स्राव में, साथ ही सर्जरी के दौरान हटाए गए ट्यूमर और सिस्ट में, हेल्मिन्थ्स, उनके टुकड़े, लार्वा और अंडे (इचिनोकोकस, एल्वोकोकस, स्पार्गनम, सिस्टिसर्कस, डायरोफिलारिया, राउंडवॉर्म, टोक्सोकारा, पैरागोनिमस, आदि) पाए जा सकते हैं। अनुसंधान तकनीक आम है; कुछ मामलों में, ट्यूमर के ऊतकों से ऊतकीय खंड तैयार किए जाते हैं। पुरुलेंट सामग्री को टेलीमैन विधि द्वारा संसाधित किया जा सकता है; स्पष्ट तरल की जांच उसी तरह की जाती है जैसे कि सल्फ्यूरिक ईथर जोड़कर ग्रहणी की सामग्री। इचिनोकोकल द्रव को सेंट्रीफ्यूज किया जाता है और तलछट की जांच स्कोलेक्स और हुक की उपस्थिति के लिए की जाती है; ज़िहल-नेल्सन के अनुसार तैयारी कार्बोफुचिन के साथ दागी जाती है।

रक्त अध्ययन।रक्त में माइक्रोफाइलेरिया और प्रवासी सूत्रकृमि के लार्वा पाए जाते हैं। रक्त की एक बूंद उंगली से या कान के लोब से ली जाती है और ताजा जांच की जाती है या उससे तैयारी की जाती है।

रक्त की एक बूंद को कांच की स्लाइड पर वैसलीन के एक वर्ग के साथ रखा जाता है और एक कवर पर्ची के साथ हल्के से दबाया जाता है। माइक्रोस्कोप के तहत, माइक्रोफिलारिया रक्त कोशिकाओं के बीच चलते हुए दिखाई देते हैं। रक्त को चिपकने वाले सेल्युलोज टेप की दो परतों के बीच रखा जा सकता है; माइक्रोफाइलेरिया 6 घंटे तक गतिशील रहता है; पूरी तरह से सूखे हुए उत्पाद में, उन्हें 30 दिनों के भीतर एक माइक्रोस्कोप के तहत पहचाना जा सकता है। माइक्रोफिलेरिया प्रजातियों की पहचान केवल दाग वाले स्मीयर या मोटी बूंदों में की जा सकती है। तैयार की गई तैयारी रोमानोव्स्की - गिमेसा, राइट, ज़ीहल-नेल्सन, लीशमैन, पापनिकोलाउ (राइट स्टेनिंग विधि, रोमानोव्स्की-गिमेसा विधि, ज़ीहल-नेल्सन विधि देखें) के अनुसार सूखे, हेमोलाइज्ड और दागदार हैं। रोमानोव्स्की-गिमेसा के अनुसार दागे गए रक्त की एक बूंद में माइक्रोफिलारिया पाए जाने के बाद, तैयारी अतिरिक्त रूप से हैनसेन के हेमटॉक्सिलिन से सना हुआ है; 15-60 मिनट के बाद। 2 मिनट धोया बहते पानी में। पुनर्निर्मित तैयारी 0.2% हाइड्रोक्लोरिक एसिड समाधान में विभेदित है; माइक्रोफाइलेरिया की टोपी हल्के बैंगनी रंग की हो जाती है, और शरीर का परमाणु पदार्थ गहरे बैंगनी रंग का हो जाता है।

हल्के संक्रमण के लिए, निम्न विधियों में से किसी एक का उपयोग करके 2-10 रक्त बर्फ की जांच एक एंटी-कौयगुलांट (उदाहरण के लिए, 5% सोडियम साइट्रेट समाधान) के साथ की जानी चाहिए।

नॉट्स मेथड (जे. नॉट, 1939), मार्केल और फोगे द्वारा संशोधित (ई. के. मार्केल, एम. वोगे, 1965)। 2 मिलीलीटर रक्त को सेंट्रीफ्यूज ट्यूब में 1% एसिटिक एसिड के 10 मामलों के साथ मिलाया जाता है, 2 मिनट के लिए सेंट्रीफ्यूज किया जाता है। 1500 आरपीएम पर; सतह की परत को सूखा दिया जाता है, अवक्षेप को कई कांच की स्लाइडों पर वितरित किया जाता है और एक माइक्रोस्कोप के तहत जांच की जाती है। तैयारी को रोमानोव्स्की-गिमेसा या अन्य तरीकों के अनुसार दाग दिया जा सकता है।

बेल फिल्ट्रेशन मेथड (डी. आर. बेल, 1967)। एक स्टेनलेस स्टील कीप से युक्त एक उपकरण में एक आयताकार छेद और एक ही आकार के झिल्ली फिल्टर, आकार में 19 x 42 मिमी, 0.8 से 5 माइक्रोन के छिद्र आकार के साथ, रक्त को टेस्ट ट्यूबों में फ़िल्टर किया जाता है, मिश्रण में हेमोलाइज्ड टिपोल डिटर्जेंट का 1 मिलीलीटर और फ़िज़ियोल का 9 मिलीलीटर, समाधान (निस्पंदन को तेज करने के लिए, उपकरण एक वैक्यूम पंप से जुड़ा हुआ है)। फ़िल्टर उबलते आसुत जल में तय किया जाता है और रोमानोव्स्की-गिमेसा या गर्म एर्लिच हेमटॉक्सिलिन के अनुसार दाग दिया जाता है। रंगीन फिल्टर को डेसीकेटर या आइसोप्रोपिल अल्कोहल (क्रमशः 3 कप में) में सुखाया जाता है, विसर्जन तेल के साथ कांच पर स्पष्ट किया जाता है और एक कवरस्लिप के तहत जांच की जाती है। चित्रित तैयारी कई हफ्तों तक संग्रहीत की जाती है। रक्त में माइक्रोफाइलेरिया की मात्रात्मक गणना के लिए बेल विधि सबसे प्रभावी है।

गोल्डस्मिड के पॉलीविडोन के साथ विधि का भी उपयोग किया जाता है।

त्वचा अनुसंधान।त्वचा में एक ओन्चो-चर्च के माइक्रोफ़िलेरिया और जानवरों के हेलमिन्थ्स के लार्वा पाए जा सकते हैं, जिससे लार्वा माइग्रन्स का त्वचा रूप बनता है (देखें)। स्कारिकरण द्वारा प्राप्त त्वचा के वर्गों या सामग्री को जांघ, बछड़े, नितंबों या डेल्टोइड मांसपेशी के स्तर पर लिया जाता है। एपिडर्मिस का एक शंकु के आकार का टुकड़ा एक कीटविज्ञान पिन के साथ उठाया जाता है और, एक रेजर से काट दिया जाता है, फ़िज़ियोल समाधान की एक बूंद में कांच पर जांच की जाती है। यदि परिणाम नकारात्मक है, तो 10 मिनट के बाद ताजा तैयारी की फिर से जांच की जाती है; लार्वा आमतौर पर तैयारी के किनारों के साथ स्थानीयकृत होते हैं। प्राप्त सामग्री को 2 मिली फिजियोल, घोल में 1-2 घंटे के भीतर रखा जा सकता है। और तलछट की जांच करें। रोगी से त्वचा के 5 खंड लेने की सलाह दी जाती है।

वर्गों के एक मजबूत संपीड़न के बाद जारी रक्त और ऊतक द्रव से तैयारी तैयार करना संभव है। मेयर, रोमानोव्स्की-गिमेसा या डेलाफिल्ड के हेमटॉक्सिलिन के अनुसार बूंदों को दाग दिया जाता है।

आक्रमण को मापने के लिए मानक विधि। त्वचा दीया का बायोप्सीड क्षेत्र। 3-5 मिमी और वजन कम से कम 1-4 मिलीग्राम वजन, छोटे टुकड़ों में काट लें और फ़िज़ियोल में एक माइक्रोस्कोप के तहत लार्वा की गणना करें। कांच की स्लाइड पर घोल; देखने के क्षेत्र में 1-4 लार्वा को + चिन्ह, 5-9 लार्वा - ++ चिन्ह के साथ, 10-19 - +++ चिन्ह के साथ, 20 या अधिक - + + + + चिह्न के साथ चिह्नित किया जाता है। दागदार तैयारियों को अंजाम देने के लिए मात्रात्मक लेखांकन अधिक सुविधाजनक है।

ट्राइकिनोसिस, सिस्टीसर्कोसिस और सिस्टोसोमियासिस के लिए परीक्षण

त्रिचिनेला लार्वा की पहचान

संपीड़न विधि।बाइसेप्स या गैस्ट्रोकेनमियस मांसपेशी (कण्डरा के पास) का एक टुकड़ा, जो सड़न रोकनेवाला के साथ शल्य चिकित्सा से लिया जाता है, विदारक सुइयों के साथ अलग-अलग पतले तंतुओं में विभाजित किया जाता है, ग्लिसरीन की एक बूंद में दो कांच की स्लाइड के बीच निचोड़ा जाता है ताकि तैयारी पतली और पारदर्शी हो। त्रिचिनेला लार्वा एक सूक्ष्मदर्शी के नीचे एक अंधेरे क्षेत्र के दृश्य के साथ स्पष्ट रूप से दिखाई दे रहे हैं। पशु चिकित्सा-सान में उपयोग किए जाने वाले कंप्रेशियम में मांसपेशियों के कई टुकड़ों का शोध प्रभावी है। अभ्यास, विशेष रूप से विशेष ट्राइचिनेलोस्कोप में।

बेचमैन पाचन विधि(जी. डब्ल्यू. बच्चन, 1928)। 1 और कुचली हुई मांसपेशियों को 60 मिली कृत्रिम गैस्ट्रिक जूस (0.5 ग्राम पेप्सिन; 0.7 मिली केंद्रित हाइड्रोक्लोरिक एसिड; 100 मिली पानी) के साथ डाला जाता है और 18 घंटे के लिए इनक्यूबेट किया जाता है। थर्मोस्टेट में t° 37° पर; तरल की ऊपरी परत को निकाला जाता है, गर्म पानी (t° 37-45°) को अवक्षेप में मिलाया जाता है और बर्मन तंत्र में डाला जाता है। एक घंटे बाद, तरल को एक परखनली में उतारा जाता है, सेंट्रीफ्यूज किया जाता है और तलछट की जांच की जाती है। यदि लार्वा को कैल्सीफाइड कैप्सूल में संलग्न किया जाता है, तो उन्हें हाइड्रोक्लोरिक, नाइट्रोजन, या सल्फ्यूरिक एसिड के घोल में प्रारंभिक रूप से डीकैल्सीफाइड किया जाता है।

जैव परख. अध्ययन की गई मांसपेशियों के टुकड़े सफेद चूहों या चूहों को खिलाए जाते हैं। 2-3 दिनों के बाद, यौन परिपक्व त्रिचिनेला ग्रहणी सामग्री में पाया जा सकता है, और 2-3 सप्ताह के बाद, डायाफ्राम और जीभ की मांसपेशियों में लार्वा।

हिस्टोलॉजिकल सेक्शन।मांसपेशियों के टुकड़े Bouin's, Zenker's या अन्य तरल पदार्थों में स्थिर होते हैं; वर्गों को सामान्य तरीके से एक माइक्रोटोम पर तैयार किया जाता है और डेलाफिल्ड के हेमटॉक्सिलिन के साथ दाग दिया जाता है।

सिस्टीसर्सी की पहचान

विलुप्त मांसपेशियों, संयोजी ऊतक, आदि के एक टुकड़े की नग्न आंखों से जांच की जाती है, एक सिस्टीसर्कस को सावधानीपूर्वक अलग किया जाता है - एक सफेद पारभासी पुटिका 1-2 सेमी आकार में, ग्लिसरीन की एक बूंद में दो कांच की स्लाइड के बीच कुचल दिया जाता है और एक के तहत जांच की जाती है सूक्ष्मदर्शी ऊतकों से पृथक सिस्टीसर्की की व्यवहार्यता का निर्धारण करने के लिए, उन्हें फिजिओल के लिए पित्त के 50% घोल में रखा जाता है। t° 37° पर थर्मोस्टैट में विलयन; 10-60 मिनट के बाद। व्यवहार्य सिस्टीसर्कस का सिर बाहर की ओर मुड़ जाता है। कैल्सीफाइड सिस्टिकेरसी को पहले एक घंटे के लिए नाइट्रिक एसिड के 4% घोल से डीकैल्सीफाइड किया जाता है।

शिस्टोसोम अंडे का पता लगाना

ह्रोन में, शिस्टोसोमेटोसिस के रूप, जब ग्रेन्युलोमा का गठन ऊतकों से आंतों के लुमेन में या मूत्र पथ में अंडे की रिहाई को रोकता है, रेक्टल म्यूकोसा की बायोप्सी का उपयोग किया जाता है, जो एक रेक्टोस्कोप का उपयोग करके एक विशेष चम्मच के साथ किया जाता है, एक दृश्य घाव वाली साइट चुनना। बायोप्सी के टुकड़े को दो कांच की स्लाइडों के बीच कुचल दिया जाता है और एक माइक्रोस्कोप के तहत जांच की जाती है। यदि परिणाम नकारात्मक है, तो कास्टिक क्षार के 4% घोल में टुकड़ों को साफ किया जाता है और उनसे गिस्टोल तैयार किया जाता है। स्लाइस। जेजुनम ​​​​के म्यूकोसा की बायोप्सी मौखिक रूप से की जाती है और परिणामी सामग्री की जांच संपीड़न विधि या जिस्टॉल द्वारा की जाती है, इससे अनुभाग तैयार किए जाते हैं। मूत्रजननांगी शिस्टोसोमियासिस के कुछ मामलों में, निदान केवल एक एंडोवेसिकल बायोप्सी के आधार पर किया जा सकता है। शिस्टोसोमियासिस के हेपेटोलियनल रूप के साथ, यकृत की एक पंचर बायोप्सी की जाती है; जिस्टॉल, प्राप्त सामग्री से अनुभाग तैयार किए जाते हैं और एक फ्लोरोसेंट माइक्रोस्कोप के तहत जांच की जाती है। उपयोग के एक अंधेरे क्षेत्र के साथ एक फ्लोरोसेंट माइक्रोस्कोप और शिस्टोसोम अंडे के लिए यकृत ऊतक की जांच के लिए। जब शिस्टोसोम महिला जननांग पथ को प्रभावित करते हैं, तो योनि दर्पण का उपयोग करके निर्वहन एकत्र किया जाता है या गर्भाशय ग्रीवा के श्लेष्म झिल्ली के टुकड़ों को एक तेज चम्मच से लिया जाता है; प्राप्त सामग्री की जांच एक माइक्रोस्कोप के तहत कांच पर एक बूंद फ़िज़ियोल, घोल में की जाती है।

एंटरोबियासिस और टेनिइडोसिस पर शोध

पेरिअनल स्क्रैपिंग (शाम को लेने की सलाह दी जाती है, रोगी के बिस्तर पर जाने के 1 - 1.5 घंटे बाद, या सुबह शौचालय जाने से पहले)। माचिस की तीली काटकर और तरल (फ़िज़ियोल, घोल, उबला हुआ पानी या बाइकार्बोनेट सोडा का 2% घोल) की एक बूंद में गीला करके, कांच की स्लाइड पर लगाया जाता है, क्या मैं इसे सावधानी से करता हूँ? गुदा की श्लेष्मा झिल्ली और उसके चारों ओर की सिलवटों (केंद्र से बाहर की ओर) से खुरचना। मैच के अंत में एकत्र किए गए बलगम को कवर स्लिप के किनारे से स्लाइड पर तरल की एक बूंद में निकाल दिया जाता है और उसी कवर स्लिप के साथ कवर किया जाता है, इसकी जांच की जाती है। सामूहिक परीक्षाओं के दौरान, जब बच्चों या अन्य संस्थानों में स्क्रैपिंग ली जाती है, तो इस्तेमाल की गई माचिस को एक स्लाइड पर तरल की एक बूंद में रखा जाता है, सूखने के बाद, बूंदों को दूसरी स्लाइड से ढक दिया जाता है और प्रयोगशाला में पहुंचाया जाता है, कागज में लपेटा जाता है और सुरक्षित किया जाता है एक इलास्टिक बैंड। मलाशय बलगम के अध्ययन के लिए, एक विशेष उपकरण का उपयोग किया जाता है - एक शाखमातोव या ज़िमैन ट्यूब, जिसके साथ मलाशय से बलगम लिया जाता है और एक माइक्रोस्कोप के तहत स्मीयर की जांच की जाती है।

कपास झाड़ू विधि। मरीजों को घर पर एक कांच या लकड़ी की छड़ी पर एक कपास झाड़ू के साथ एक परखनली दी जाती है; सुबह में, रोगी पेरिअनल सिलवटों को उबले हुए पानी से सिक्त एक झाड़ू से पोंछता है और इसे एक परखनली में थोड़ी मात्रा में पानी के साथ रखता है। प्रयोगशाला में, पानी के एक नए हिस्से के साथ एक ही ट्यूब में स्वैब को धोया जाता है, और सेंट्रीफ्यूजेशन के बाद तलछट की जांच की जाती है।

हॉल की सिलोफ़न विधि (एम.सी. हॉल, 1937)। सिलोफ़न का एक चौकोर टुकड़ा कांच की छड़ पर रबर बैंड के साथ प्रबलित होता है। स्क्रैपिंग को सूखे सिलोफ़न से किया जाता है और एक परखनली में रखा जाता है। प्रयोगशाला में, सिलोफ़न को छड़ी से थोड़ा स्थानांतरित किया जाता है और, कैंची से इसकी नोक काटकर, इसे कांच की स्लाइड पर सीधा कर दिया जाता है; एक सामान्य सोडियम हाइड्रॉक्साइड समाधान के साथ सिक्त, एक कवरस्लिप के साथ कवर किया गया और एक माइक्रोस्कोप के तहत जांच की गई।

ग्राहम की सेल्युलोज टेप विधि (सी. एफ. ग्राहम, 1941)। सेल्यूलोज टेप की एक पट्टी को इसके चिपकने वाले पक्ष के साथ विषय के पेरिअनल सिलवटों में दबाया जाता है, फिर उसी तरफ स्लाइड के साथ और बिना कवर स्लिप के जांच की जाती है; आप टोल्यूनि की एक बूंद जोड़ सकते हैं। वीवी कलेडिन (1972) ने इन उद्देश्यों के लिए उपयोग करने का प्रस्ताव रखा सेल्युलाइड डिस्क को धुली हुई एक्स-रे फिल्म से काटा गया और ग्लिसरीन से सिक्त किया गया; सिलिकेट गोंद की एक बूंद में कांच की स्लाइड पर डिस्क की जांच की जाती है। सेल्युलोज टेप विधि का उपयोग बच्चों के अंडरवियर की जांच के लिए भी किया जा सकता है।

सबंगुअल स्क्रैपिंग। नाखून के किनारों, नेल बेड, सबंगुअल स्पेस को कास्टिक क्षार के 0.5-1% घोल से सिक्त किया जाता है और गीले रुई से पोंछा जाता है। स्वैब को एक ही समाधान के साथ अपकेंद्रित्र ट्यूबों में रखा जाता है, अपकेंद्रित्र किया जाता है और तलछट की जांच की जाती है।

अंडे और हेलमिन्थ के लार्वा के लिए पर्यावरणीय वस्तुओं का अध्ययन करने के तरीके (स्वच्छता और कृमि विज्ञान संबंधी अध्ययन)

अंडे और लार्वा के लार्वा के साथ पर्यावरणीय वस्तुओं के संदूषण की डिग्री निर्धारित करने के लिए अनुसंधान किया जाता है। प्राप्त डेटा एक मूल्यांकन के लिए एक गरिमा का उपयोग करता है। संस्थानों और उद्यमों की स्थिति और हेल्मिंथियासिस से निपटने के लिए चल रहे उपायों की प्रभावशीलता।

हेल्मिंथ अंडे और लार्वा के साथ विभिन्न पर्यावरणीय वस्तुओं के प्रदूषण की डिग्री का अध्ययन करते समय और हेल्मिंथियासिस की महामारी विज्ञान में उनकी भूमिका का आकलन करते समय, न केवल पाए गए अंडों की संख्या, बल्कि उनकी व्यवहार्यता और आक्रमण भी स्थापित करना महत्वपूर्ण है, जो निर्धारित किए जाते हैं: ए ) सूक्ष्मदर्शी के नीचे उपस्थिति से; बी) विभिन्न रंगों के साथ धुंधला हो जाना, जिसमें ल्यूमिनसेंट वाले भी शामिल हैं; एक नियम के रूप में, जीवित अंडे और लार्वा दाग नहीं करते हैं; ग) आक्रामक अवस्था में अनुकूलतम परिस्थितियों में खेती; डी) प्रयोगशाला जानवरों (बायोसे) का संक्रमण।

पानी और सीवेज का अध्ययन। एक अध्ययन के लिए 10-25 लीटर पानी (नदियां, समुद्र, तालाब, स्विमिंग पूल, पानी के पाइप) और 1-2-5 लीटर सीवेज का उपयोग किया जाता है।

विधि 3. जी। वासिलकोवा (1941)। पानी या सीवेज को गोल्डमैन उपकरण में झिल्ली अल्ट्राफिल्टर के माध्यम से फ़िल्टर किया जाता है, जिसमें एक ग्लास या धातु कीप होती है जिसमें एक नोजल रिंग द्वारा बुन्सेन फ्लास्क से जुड़े फिल्टर होते हैं। निस्पंदन प्रक्रिया को तेज करने के लिए, एक वैक्यूम पंप उपकरण से जुड़ा होता है। निस्पंदन के बाद, एक माइक्रोस्कोप के तहत झिल्ली फिल्टर की जांच की जाती है, जिसे 50% ग्लिसरॉल घोल से साफ किया जाता है; संचित तलछट को साफ किया जाता है और स्मीयरों के रूप में अलग से देखा जाता है। निस्पंदन उपकरणों और अन्य डिजाइनों का उपयोग किया जाता है।

सीवेज तरल पदार्थ के अध्ययन के लिए जी. श्री. गुडज़ाबिद्ज़े और जी.ए. युडिन (1963) की विधि। लिसेंको सिलेंडर में 1 लीटर तरल 2 घंटे के लिए बसा हुआ है; परिणामी तलछट (5-9 मिली) को मिट्टी के अध्ययन के रूप में माना जाता है (नीचे देखें)।

विधि एन। ए। रोमनेंको (1967)। 1200-1500 मिलीलीटर की क्षमता वाले ग्लास सिलेंडर में रखे गए 1 लीटर अपशिष्ट तरल में, 0.4-0.6 ग्राम एल्यूमीनियम सल्फेट या फेरिक क्लोराइड (जमावट के उद्देश्य से, जो निलंबित कणों के अवसादन की प्रक्रिया को तेज करता है) और उसके बाद जोड़ें 40 मिनट। मिश्रण 3 मिनट के लिए centrifuged है। 1000 आरपीएम पर; शीर्ष परत सूखा जाता है, और गुच्छे को भंग करने के लिए, हाइड्रोक्लोरिक एसिड के 3% समाधान के 1-2 मिलीलीटर, फिर सोडियम नाइट्रेट के संतृप्त समाधान के 150 मिलीलीटर जोड़ें। तलछट की मिट्टी की तरह जांच की जाती है।

मृदा अनुसंधान

हेल्मिंथ अंडे के साथ मिट्टी के संदूषण को हेल्मिन्थियस के फॉसी की पहचान करने और उनके पुनर्वास की प्रभावशीलता का आकलन करने के लिए निर्धारित किया जाता है।

विधि 3. जी। वासिलकोवा और वी। ए। गेफ्टर (1948)। 12.5 ग्राम मिट्टी को स्टेनलेस स्टील या पीतल से बनी परखनली (100 मिली) में 20 मिली 5% कास्टिक क्षार घोल में मिलाकर 10 कांच के मोती या छोटे कंकड़ मिलाए जाते हैं। ट्यूबों को रबर स्टॉपर्स के साथ बंद कर दिया जाता है और 20 मिनट के लिए हिलाया जाता है। एक प्रकार के बरतन में या हाथ से। प्लग को हटाने के बाद, टेस्ट ट्यूब को 3-5 मिनट के लिए सेंट्रीफ्यूज किया जाता है, सतह के तरल को निकाला जाता है, सोडियम नाइट्रेट के संतृप्त घोल के 60-80 मिलीलीटर को तलछट में जोड़ा जाता है और अच्छी तरह से मिश्रित होने पर, 3-5 के लिए फिर से सेंट्रीफ्यूज किया जाता है। मिनट। इस सतह में तैरते हुए अंडों के साथ फिल्म को मिश्रण की सतह को एक जटिल लूप (एक सामान्य छड़ से जुड़े 5-6 छोरों) से छूकर हटा दिया जाता है, और एक गिलास पानी में स्थानांतरित कर दिया जाता है; एक ही समाधान के साथ मिश्रित, अपकेंद्रित्र; पूरी प्रक्रिया कम से कम 3 बार दोहराई जाती है। कांच की सामग्री, जहां फिल्म को स्थानांतरित किया जाता है, पानी से पतला होता है और झिल्ली फिल्टर के माध्यम से फ़िल्टर किया जाता है, जिसे ग्लिसरॉल की एक बूंद में एक माइक्रोस्कोप के तहत जांच की जाती है।

विधि 3. जी। वासिलकोवा और वी। ए। ए। ए। नामिटोकोव (1961) द्वारा संशोधित गेफ्टर मुख्य विधि से भिन्न है कि फिल्म की तैयारी का अध्ययन करने के बजाय, ट्यूब की आधी सामग्री का उपयोग किया जाता है (हर बार सोडियम के संतृप्त घोल का एक नया भाग मिलाते हुए) नाइट्रेट), फ़िल्टर्ड और फ़िल्टर की जांच करें।

N. A. Romanenko (1968) ने G. Sh. Gudzhabidze द्वारा प्रस्तावित उपकरण का उपयोग करके हेल्मिन्थ अंडे के लिए मिट्टी के नमूनों और सीवेज कीचड़ की जांच करने की सिफारिश की। 1 मिनट के लिए 50 ग्राम मिट्टी को अच्छी तरह मिलाया जाता है। विशेष ब्लेड के साथ अपकेंद्रित्र ट्यूब (क्षमता 250 मिलीलीटर) में 150 मिलीलीटर पानी में, जो एक इलेक्ट्रिक मोटर द्वारा संचालित होते हैं। मिश्रण को 3 मिनट के लिए सेंट्रीफ्यूज किया जाता है। 1000 आरपीएम पर, पानी निकल जाता है और, सोडियम नाइट्रेट के संतृप्त घोल के 150 मिलीलीटर को मिलाकर, 3 मिनट के लिए फिर से मिलाएं और अपकेंद्रित्र करें। नमूनों के साथ टेस्ट ट्यूब को एक स्टैंड में रखा जाता है, एक उत्तल मेनिस्कस बनने तक सोडियम नाइट्रेट का घोल डाला जाता है, कांच की स्लाइड्स (10 x 6 सेमी) से ढका जाता है और 10-15 मिनट के लिए अलग रखा जाता है, फिर चश्मा हटा दिया जाता है और जांच की जाती है; प्रक्रिया को कम से कम 4 बार दोहराया जाता है।

बर्मन (1917) की विधि के अनुसार कृमि के लार्वा पर शोध। 200-400 ग्राम मिट्टी को धातु की जाली (1-2 मिमी के छेद के व्यास के साथ) पर धुंध के एक टुकड़े में रखा जाता है, एक तिपाई में तय की गई कांच की फ़नल के चौड़े हिस्से पर रखा जाता है। एक रबर की नली जिसमें एक क्लैंप लगा होता है, फ़नल के संकरे सिरे पर फैला होता है। कीप को गर्म (t°50°) पानी से भर दिया जाता है ताकि मिट्टी के साथ जाली का निचला हिस्सा पानी के संपर्क में आ जाए। थर्मोट्रॉपी के कारण, लार्वा सक्रिय रूप से गर्म पानी में रेंगते हैं और, क्लैंप के ऊपर रबर ट्यूब के निचले हिस्से में जमा हो जाते हैं। 3-4 घंटों के बाद, 50 मिलीलीटर सामग्री को फ़नल से एक टेस्ट ट्यूब में छोड़ दिया जाता है, सेंट्रीफ्यूज किया जाता है और तलछट की जांच की जाती है।

सब्जियों, फलों और जामुनों का अनुसंधान

मुख्य रूप से बिना गर्मी उपचार के खाए गए सब्जियों, जामुनों और फलों की जांच करें। विधि 3. जी। वासिलकोवा (1948)। सब्जियों या फलों के 5-10 टुकड़े (लगभग 0.5 किग्रा) या 100-200 ग्राम साग (सलाद, हरी प्याज) को कई घंटों के लिए पानी के साथ चौड़े मुंह वाले कांच के जार में ग्राउंड स्टॉपर्स के साथ डाला जाता है और 10-20 मिनट के लिए हिलाया जाता है। . एक प्रकार के बरतन में या हाथ से। पानी निकाला जाता है, अध्ययन की गई वस्तुओं को साफ पानी से धोया जाता है और सभी धोने के पानी को गोल्डमैन उपकरण में फ़िल्टर किया जाता है; ग्लिसरीन से साफ करके फिल्टर की जांच की जाती है। आप ग्लिसरीन में 25% लुगोल के घोल से फिल्टर को टिंट कर सकते हैं; उसी समय, हेल्मिंथ अंडे भूरे रंग के हो जाते हैं और नीले रंग के स्टार्च अनाज के बीच पहचानना आसान होता है। बड़े तलछट को मिट्टी की तरह माना जाता है।

घरेलू सामान और हाथों से स्वैब का अध्ययन। सोडा के बाइकार्बोनेट के 2% घोल में डूबा हुआ एक गोंद ब्रश (या नायलॉन के कपड़े के टुकड़े में लिपटे एक कपास झाड़ू) को बार-बार वस्तु या हाथों की जांच की जाती है, जिसके बाद इसे उसी घोल में डाला जाता है। परखनली। प्रयोगशाला में, ब्रश और स्वाब को साफ पानी से धोया जाता है; सभी धोने के पानी को सेंट्रीफ्यूज किया जाता है और तलछट की जांच की जाती है।

विधि वी.ए. गेफ्टर (1960)। फ़नल से जुड़े वैक्यूम क्लीनर के साथ सॉफ्ट इन्वेंट्री से धूल इकट्ठा करना अधिक कुशल है, जिसमें 2 वियोज्य भाग होते हैं: एक झिल्ली फिल्टर को धातु या प्लास्टिक की जाली से ढके निचले हिस्से की सतह पर रखा जाता है और इसे लगाकर मजबूत किया जाता है फ़नल का शीर्ष। इकट्ठे कीप एक रबर ट्यूब के साथ वैक्यूम क्लीनर नली से जुड़ी होती है। वस्तु से 3 मिनट के लिए धूल एकत्र की जाती है, जिसके बाद फिल्टर को हटा दिया जाता है और एक नए के साथ बदल दिया जाता है। प्रयोगशाला में, फिल्टर को एक माइक्रोस्कोप के तहत देखा जाता है, जिसे ग्लिसरीन से साफ किया जाता है। यदि फिल्टर पर धूल की परत बड़ी है, तो इसे हटा दिया जाता है और इसे स्मीयर के रूप में देखा जाता है या मिट्टी की तरह माना जाता है।

इम्यूनोलॉजिकल डायग्नोस्टिक तरीके

इम्यूनोल के उपयोग की संभावना। हेल्मिंथियस के निदान के तरीके हेल्मिन्थ्स की सक्रिय एंटीजन का उत्पादन करने की क्षमता के कारण होते हैं जो मेजबान की प्रतिरक्षा कोशिकाओं को प्रभावित करते हैं और एंटीबॉडी के उत्पादन को उत्तेजित करते हैं। आंतों के हेलमनिथेसिस के लिए सबसे प्रभावी इम्यूनोडायग्नोस्टिक तरीके, जब एंटीजेनिक गतिविधि के साथ हेलमिन्थ्स के रहस्य और उत्सर्जन सीधे मेजबान के रक्त में प्रवेश करते हैं। इम्यूनोल, प्रतिक्रियाओं का उपयोग एस्कारियासिस, ट्राइकिनोसिस, फाइलेरिया, शिस्टोसोमेटोसिस, इचिनोकोकोसिस और एल्वोकॉकोसिस, सिस्टिसरकोसिस, पैरागोनिमियासिस, लक्षण जटिल लार्वा माइग्रेन- (टॉक्सोकेरियासिस, एंजियोस्ट्रॉन्गिलोसिस), आदि) और इंट्राडर्मल एलर्जी परीक्षणों के निदान के लिए किया जाता है। एंटीजन लार्वा और परिपक्व हेल्मिन्थ्स से ताजा जमे हुए या लियोफिलिज्ड ऊतकों के होमोजेनेट्स के खारा अर्क के साथ-साथ विभिन्न जैविक रूप से सक्रिय तरल पदार्थ (इचिनोकोकल फफोले से तरल पदार्थ, एस्केरिस गुहा द्रव, आदि) का उपयोग करके तैयार किए जाते हैं। इस तथ्य के कारण कि हेल्मिन्थ्स में एक बहुत ही जटिल एंटीजेनिक संरचना होती है और उनके एंटीजेनिक मोज़ेक में ऐसे घटक और व्यक्तिगत निर्धारक होते हैं जो अन्य प्रकार के हेल्मिन्थ्स, बैक्टीरिया और मेजबान एंटीजन के साथ क्रॉस-रिएक्शन करते हैं, उन्हें गैर-विशिष्ट घटकों से शुद्ध करने के तरीके विकसित किए जा रहे हैं। फ्रैक्शनेशन विभिन्न तरीकों से किया जाता है: सेफैडेक्स के साथ कॉलम में जेल निस्पंदन, डीईएई-सेफैडेक्स पर आयन-एक्सचेंज क्रोमैटोग्राफी, एसिड के साथ उपचार आदि। भिन्नात्मक एंटीजन में आमतौर पर पूरे अर्क की तुलना में उच्च विशिष्टता होती है, जबकि उनकी गतिविधि लगभग समान होती है। इम्यूनोडायग्नोस्टिक विधियों का तेजी से उपयोग किया जा रहा है। प्रतिक्रियाओं का उपयोग न केवल रोगियों के सबसे पूर्ण और प्रारंभिक पता लगाने के लिए किया जाता है, बल्कि foci के अध्ययन और हेलमनिथेसिस की महामारी विज्ञान के अध्ययन के लिए भी किया जाता है।

सीरोलॉजिकल प्रतिक्रियाएं।जीवित लार्वा पर सूक्ष्म अवक्षेपण की प्रतिक्रिया का उपयोग नेमाटोड के निदान के लिए किया जाता है - एस्कारियासिस, एंकिलोस्टोमिडोसिस, ट्राइकिनोसिस का प्रारंभिक चरण। संक्रमण (एस्कारियासिस, एंकिलोस्टोमिडोसिस) के 5-10 दिनों के बाद प्रतिक्रिया सकारात्मक हो जाती है और 90-100 दिनों तक बनी रहती है। प्रतिजन प्रायोगिक रूप से संक्रमित प्रयोगशाला जानवरों के ऊतकों से पृथक जीवित सूत्रकृमि लार्वा है। चयनित लार्वा को मेजबान प्रोटीन से बाँझ फ़िज़ियोल, घोल और आसुत जल से अच्छी तरह से धोया जाता है और प्रत्येक की 10-15 प्रतियां। एक कुएं के साथ एक बाँझ कांच की स्लाइड पर पाश्चर पिपेट के साथ रखा गया। टेस्ट सीरम की 2-3 बूंदें डालें, एक स्टेराइल कवर स्लिप के साथ कवर करें, एक नम कक्ष में रखें (पेट्री डिश को सिक्त फिल्टर पेपर के साथ पंक्तिबद्ध करें) और 24-48 घंटों के लिए इनक्यूबेट करें। थर्मोस्टेट में t° 37° पर। सूक्ष्मदर्शी के कम आवर्धन के तहत एक सकारात्मक प्रतिक्रिया के साथ, लार्वा के मुंह और गुदा के चारों ओर गोलाकार या ज़िगज़ैग आकार के अवक्षेपों के भूरे-सफेद, थोड़े ओपेलेसेंट द्रव्यमान दिखाई देते हैं। प्रतिक्रिया दक्षता 85-95% तक पहुंच जाती है।

ट्रिचिनोसिस के निदान के लिए वलय वर्षा प्रतिक्रिया को वी. पी. पाशुक (1957) द्वारा विकसित किया गया था। बीमारी के 2-3वें सप्ताह में प्रतिक्रिया सकारात्मक हो जाती है। इसकी दक्षता 80-90% तक पहुंच जाती है। प्रतिजन संक्रमित जानवरों की मांसपेशियों से पृथक t° 35° पर सूखे लार्वा से एक पाउडर अर्क है। टेस्ट ट्यूब डायम में। 0.5 सेमी प्रतिजन के प्रत्येक कमजोर पड़ने के 0.1 मिलीलीटर डालें और ध्यान से उस पर (या इसे नीचे तक कम करें) परीक्षण सीरम की एक समान मात्रा में डालें ताकि तरल मिश्रण न हो। ट्यूब 30 मिनट के लिए आयोजित की जाती हैं। थर्मोस्टेट में t ° 37 ° और फिर 30-60 मिनट पर। कमरे के तापमान पर। सकारात्मक प्रतिक्रिया के साथ, एंटीजन और सीरम के बीच संपर्क की सीमा पर एक सफेद नाजुक अंगूठी दिखाई देती है, जो हिलने पर आसानी से विघटित हो जाती है।

एआई गुसेव और वी.एस. त्सेत्कोव के माइक्रोमॉडिफिकेशन में औचटरलोनी (ओ। ऑचटरलोनी, 1949) के अनुसार जेल में वर्षा की प्रतिक्रिया आई। ए। गिनोवकर, ई। ए। ज़ाबोज़लाएवा, ए। वी। डोरोनिन (1970) द्वारा ओपिसथोरियासिस के शुरुआती चरणों के निदान के लिए प्रस्तावित की गई थी। प्रारंभिक आंकड़ों के अनुसार, इसकी दक्षता 87% है। प्रतिजन बिल्लियों के जिगर से पृथक ताजा जमे हुए यौन परिपक्व opisthorchis के एक समरूप का एक अर्क है।

डायग्नोस्टिकम के साथ अप्रत्यक्ष रक्तगुल्म (देखें) की प्रतिक्रिया - इचिनोकोकल द्रव द्वारा संवेदीकृत औपचारिक और तनीकृत राम एरिथ्रोसाइट्स का निलंबन - विकसित

एलएन स्टेपानकोवस्काया (1972) इचिनोकोकोसिस और एल्वोकॉकोसिस के निदान के लिए।

RNHA औपचारिक रूप से भेड़ एरिथ्रोसाइट्स के निदान के साथ सुग्राही पोरसीन टैपवार्म के ताजा-जमे हुए सिस्टिकेरसी के एक होमोजेनेट के एक अर्क के साथ मस्तिष्क के सिस्टीसर्कोसिस के निदान के लिए एल.एम. कोनोवालोवा (1973) द्वारा प्रस्तावित किया गया था; यह 85% मामलों में प्रभावी है।

एस्केरिस डायग्नोस्टिकम के साथ RNHA को एस्कारियासिस के पूर्व-कल्पना चरण के निदान के लिए प्रस्तावित किया गया है।

पूरक निर्धारण प्रतिक्रिया (देखें) को सामान्य विधि के अनुसार रखा जाता है और इसका उपयोग ट्राइकिनोसिस और सिस्टीसर्कोसिस के निदान के लिए किया जाता है।

ल्यूमिनसेंट एंटीबॉडी की विधि (अप्रत्यक्ष विधि)। कांच की स्लाइड पर तय एंटीजन के रूप में पोर्सिन टैपवार्म सिस्टिसरसी के सूखे होमोजेनेट के साथ इस विधि को जेआई द्वारा विकसित किया गया था। एम। कोनोवालोवा (1973) मानव सिस्टिकिकोसिस के निदान के लिए। ट्राइचिनोसिस के निदान के लिए जिस्टॉल के साथ एक ही प्रतिक्रिया, एक एंटीजन के रूप में ट्रिचिनेला लार्वा के वर्गों को विकसित किया गया था।

ई। एस। लेकिना, वी। ए। गेफ्टर।

जब विभिन्न पर्यावरणीय वस्तुओं (मिट्टी, पानी, सब्जियां, आदि) पर हेलमिन्थ अंडे पाए जाते हैं, तो उनकी व्यवहार्यता का निर्धारण करना हमेशा आवश्यक होता है, महत्वपूर्ण रंगों के साथ धुंधला हो जाना, इष्टतम परिस्थितियों में खेती करना और एक जैविक नमूना स्थापित करना, अर्थात।

प्रयोगशाला जानवरों को खिलाना।

दिखने में अंडे या कृमि के लार्वा की व्यवहार्यता का निर्धारण। हेल्मिंथ के अंडों को पहले कम आवर्धन पर, फिर उच्च आवर्धन पर सूक्ष्मदर्शी किया जाता है। हेल्मिन्थ के विकृत और मृत अंडों में, खोल फटा हुआ या अंदर की ओर मुड़ा हुआ होता है, प्लाज्मा बादलदार, ढीला होता है। खंडित अंडों में, दरार वाली गेंदें (ब्लास्टोमेरेस) आकार में असमान होती हैं, आकार में अनियमित होती हैं, और अक्सर एक ध्रुव पर स्थानांतरित हो जाती हैं। कभी-कभी असामान्य अंडे होते हैं, जो बाहरी विकृति होने पर सामान्य रूप से विकसित होते हैं। एस्केरिड्स के जीवित लार्वा में, ठीक दानेदारता केवल शरीर के मध्य भाग में मौजूद होती है, जैसे ही वे मर जाते हैं, ग्रैन्युलैरिटी पूरे शरीर में फैल जाती है, बड़े चमकदार हाइलिन रिक्तिकाएं दिखाई देती हैं - मोती के तथाकथित तार।

एस्केरिड्स, व्हिपवर्म, पिनवॉर्म के परिपक्व अंडों की व्यवहार्यता निर्धारित करने के लिए, लार्वा के सक्रिय आंदोलनों को तैयारी को थोड़ा गर्म करने (37 डिग्री सेल्सियस से अधिक नहीं के तापमान पर) के कारण होना चाहिए। एक विदारक सुई या चिमटी के साथ तैयारी के कवर ग्लास पर दबाकर अंडे के खोल से अलग होने के बाद एस्केरिस और व्हिपवर्म लार्वा की व्यवहार्यता का निरीक्षण करना अधिक सुविधाजनक होता है।

एस्केरिड्स के आक्रामक लार्वा में, एक टोपी अक्सर देखी जाती है जो सिर के अंत में छूट जाती है, और अंडे में विकास पूरा करने वाले व्हिपवर्म के लार्वा में, इस जगह पर उच्च आवर्धन पर एक स्टाइललेट पाया जाता है। हेल्मिंथ के मृत लार्वा में, उनके स्थान (अंडे में या उसके बाहर) की परवाह किए बिना, शरीर का क्षय देखा जाता है। इस मामले में, लार्वा की आंतरिक संरचना ढेलेदार या दानेदार हो जाती है, और शरीर बादल और अपारदर्शी हो जाता है। शरीर में रिक्तिकाएँ पाई जाती हैं, और छल्ली पर विराम पाए जाते हैं।

टेनिड ओंकोस्फीयर (गोजातीय, पोर्सिन टैपवार्म, आदि) की व्यवहार्यता भ्रूण की गति से निर्धारित होती है जब वे पाचन एंजाइमों के संपर्क में आते हैं। अंडों को कुत्ते के गैस्ट्रिक जूस या कृत्रिम ग्रहणी के रस के साथ वॉच ग्लास पर रखा जाता है। उत्तरार्द्ध की संरचना: पैनक्रिएटिन 0.5 ग्राम, सोडियम बाइकार्बोनेट 0.09 ग्राम, आसुत जल 5 मिली। अंडों के साथ घड़ी के चश्मे को थर्मोस्टैट में 4 घंटे के लिए 36-38 डिग्री सेल्सियस पर रखा जाता है। इस मामले में, जीवित भ्रूणों को खोल से मुक्त किया जाता है। जीवित ओंकोस्फीयर के गोले भी अम्लीकृत पेप्सिन में और ट्रिप्सिन के एक क्षारीय घोल में 6-8 घंटे के बाद थर्मोस्टैट में 38 ° C पर घुल जाते हैं।

यदि टेनीड अंडे को सोडियम सल्फाइड के 1% घोल में, या सोडियम हाइपोक्लोराइड के 20% घोल में, या क्लोरीन पानी के 1% घोल में 36-38 ° C पर रखा जाता है, तो परिपक्व और जीवित भ्रूण झिल्लियों से मुक्त हो जाते हैं और करते हैं 1 दिन के लिए नहीं बदला। अपरिपक्व और मृत ओंकोस्फीयर सिकुड़ते या सूजते हैं और तेजी से बढ़ते हैं, और फिर 10 मिनट - 2 घंटे के भीतर "विघटित" हो जाते हैं। टेनिड्स के लाइव भ्रूण भी सक्रिय रूप से 1% सोडियम क्लोराइड समाधान, 0.5% सोडियम बाइकार्बोनेट समाधान और पित्त के मिश्रण में 36- पर चलते हैं। 38 डिग्री सेल्सियस

स्कोलेक्स इचिनोकॉसी की व्यवहार्यता कम हीटिंग के साथ निर्धारित की जाती है। ऐसा करने के लिए, पानी में धोए गए स्कोलेक्स या ब्रूड कैप्सूल को एक गिलास स्लाइड पर पानी की एक बूंद में एक छेद के साथ रखा जाता है, एक कवरस्लिप के साथ कवर किया जाता है और एक माइक्रोस्कोप के तहत 38-39 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर एक हीटिंग चरण के साथ जांच की जाती है। यदि कोई हीटिंग टेबल नहीं है, तो किसी भी ताप स्रोत का उपयोग करके तैयारी को गर्म किया जाता है। उसी समय, व्यवहार्य स्कोलेक्स सक्रिय रूप से आगे बढ़ते हैं, चूसने वालों को कम करते हैं या आराम करते हैं, सूंड को लंबा और छोटा करते हैं। यदि स्कोलेक्स को कमरे के तापमान पर 0.5-1% फ़िलिसिलीन के जलीय घोल में रखा जाता है, तो सभी व्यवहार्य स्कोलेक्स जल्दी से निकल जाएंगे और मर जाएंगे। गैर-व्यवहार्य स्कोलेक्स नहीं निकलते हैं।

पौधों और जल निकायों की अन्य वस्तुओं से एकत्र किए गए प्रावरणी एडोल्सेरिया की व्यवहार्यता की जाँच एक माइक्रोस्कोप के तहत एक हीटिंग चरण के साथ खारा में कांच की स्लाइड पर उनकी जांच करके की जाती है। गर्म होने पर, सिस्ट में ट्रेमेटोड लार्वा हिलने लगता है।

बौने टैपवार्म के अंडों की व्यवहार्यता भ्रूण पर हुक के स्थान से निर्धारित होती है।

पिग्मी टैपवार्म के जीवित अंडों में, प्रोटोप्लाज्म की सुस्त पेंडुलम जैसी हरकतें और लगभग अगोचर विस्तार और हुक के पार्श्व जोड़े के नुकीले सिरों की शिफ्ट मध्य जोड़ी से दूर होती है।

भ्रूण के प्रोटोप्लाज्म और जर्मिनल हुक के संकुचन से भ्रूण को पहले ओंकोस्फीयर के गोले से, और फिर अंडे के बाहरी आवरण से खुद को मुक्त करने में मदद मिलती है।

एक जीवित अंडे में, मध्य जोड़ी और हुक के पार्श्व जोड़े समानांतर में व्यवस्थित होते हैं; कुछ अंडों में, पार्श्व जोड़े के ब्लेड को एक साथ लाया जाता है और हुक के मध्य जोड़े के सापेक्ष 45 ° से कम के कोण पर स्थित होता है।

मरने वाला भ्रूण ऐंठन से सिकुड़ता है और धीरे से हुक को अलग करता है। मृत भ्रूण में, हुक की गति रुक ​​जाती है, और वे एक विकार में व्यवस्थित हो जाते हैं, कभी-कभी पड़ोसी जोड़े के पार्श्व हुक को दाएं, अधिक या तीव्र कोण पर अलग कर दिया जाता है।

कभी-कभी भ्रूण के झुर्रीदार होने, दानेदारता का गठन देखा जाता है। तापमान में तेज बदलाव के दौरान ऑन्कोस्फीयर के आंदोलनों की उपस्थिति पर एक अधिक सटीक विधि आधारित है: 5-10 से 38-40 डिग्री सेल्सियस तक।

अपरिपक्व नेमाटोड की व्यवहार्यता का निर्धारण एक आर्द्र कक्ष (पेट्री डिश) में किया जाना चाहिए, एस्केरिस अंडे को 3% फॉर्मेलिन समाधान में एक आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड समाधान में 24-30 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर, व्हिपवर्म अंडे को 3% में रखकर अध्ययन किया जाना चाहिए। 30-35 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर हाइड्रोक्लोरिक एसिड समाधान, 37 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड समाधान में पिनवॉर्म अंडे। बेहतर वातन के लिए पेट्री डिश को सप्ताह में 1-3 बार खोलना चाहिए और फिल्टर पेपर को फिर से साफ पानी से गीला करना चाहिए।

सप्ताह में कम से कम 2 बार हेल्मिंथ अंडे के विकास का अवलोकन किया जाता है। 2-3 महीनों के भीतर विकास के संकेतों की अनुपस्थिति उनकी गैर-व्यवहार्यता को इंगित करती है। हेल्मिंथ अंडे के विकास के संकेत पहले कुचलने के चरण हैं, अंडे की सामग्री को अलग-अलग ब्लास्टोमेरेस में विभाजित करना। पहले दिन के दौरान, 16 ब्लास्टोमेरेस विकसित होते हैं, जो दूसरे चरण में गुजरते हैं - मोरुला, आदि।

हुकवर्म के अंडों को एक डाट से बंद कांच के सिलेंडर (50 सेमी ऊंचे और 7 सेमी व्यास) में सुसंस्कृत किया जाता है। एक अर्ध-तरल स्थिरता के लिए पानी से पतला हुकवर्म अंडे के साथ बाँझ रेत, लकड़ी का कोयला और मल के बराबर मात्रा का मिश्रण, एक ग्लास ट्यूब का उपयोग करके सिलेंडर के नीचे सावधानी से डाला जाता है। 25-30 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर अंधेरे में बसने के 1-2 दिनों के दौरान, अंडों से रबडिटॉइड लार्वा निकलता है, और 5-7 दिनों के बाद वे पहले से ही फाइलेरिफॉर्म बन जाते हैं: लार्वा सिलेंडर की दीवारों को रेंगते हैं, जहां वे नग्न आंखों से भी दिखाई दे रहे हैं। पानी में प्राकृतिक रूप से विकसित होने वाले ट्रेमेटोड अंडे, जैसे कि ओपिसथोर्चिस, डिपाइलोबोट्रिड, फासिओल, आदि को वॉच ग्लास, पेट्री डिश या किसी अन्य बर्तन में रखा जाता है, साधारण पानी की एक छोटी परत डाली जाती है। फासीओला अंडे की खेती करते समय, यह ध्यान में रखा जाना चाहिए कि वे अंधेरे में तेजी से विकसित होते हैं, जबकि मिरेसिडियम 9-12 दिनों में 22-24 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर जीवित अंडों में बनता है। जब कंपकंपी के अंडे विकसित करने की माइक्रोस्कोपी की जाती है, तो मिरासिडियम मूवमेंट स्पष्ट रूप से दिखाई देते हैं। फासिओला मिरासिडियम अंडे के छिलकों से केवल प्रकाश में ही निकलता है। खेती करते समय, 2-3 दिनों के बाद पानी बदल दिया जाता है।

पशु चारकोल के साथ पेट्री डिश में अगर पर हुकवर्म लार्वा और स्ट्रॉन्ग्लॉइड की खेती की जाती है। 5-6 दिनों के लिए 26-30 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर थर्मोस्टैट में रहने के बाद, लार्वा बैक्टीरिया (फुलबॉर्न विधि) के रास्ते को पीछे छोड़ते हुए, अगर पर फैल गया।

हरदा और मोरी की विधि (1955)। एक रैक में रखी परखनलियों में 7 मिली आसुत जल मिलाया जाता है। एक लकड़ी की छड़ी के साथ 0.5 ग्राम मल लें और बाएं किनारे से फिल्टर पेपर (15X150 मिमी) 5 सेमी पर एक धब्बा बनाएं (यह ऑपरेशन प्रयोगशाला की मेज की सतह की रक्षा के लिए कागज की एक शीट पर किया जाता है)। फिर स्मीयर वाली पट्टी को ट्यूब में डाला जाता है ताकि स्मीयर से मुक्त बायां सिरा ट्यूब के नीचे तक पहुंच जाए। ऊपरी सिरे को सिलोफ़न के एक टुकड़े से ढका जाता है और एक लोचदार बैंड के साथ कसकर लपेटा जाता है। टेस्ट ट्यूब पर विषय की संख्या और उपनाम लिखें। इस अवस्था में, ट्यूबों को 28 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर 8-10 दिनों के लिए संग्रहीत किया जाता है। संस्कृति का अध्ययन करने के लिए, सिलोफ़न कवर को हटा दें और हटा दें और चिमटी के साथ फिल्टर पेपर की एक पट्टी हटा दें। इस मामले में सावधानी बरती जानी चाहिए, क्योंकि कम संख्या में संक्रमित लार्वा फिल्टर पेपर के ऊपरी सिरे या परखनली की दीवार तक जा सकते हैं और सिलोफ़न की सतह के नीचे घुस सकते हैं।

ट्यूबों को 50 डिग्री सेल्सियस पर 15 मिनट के लिए गर्म पानी के स्नान में रखा जाता है, जिसके बाद सामग्री को हिलाया जाता है और जल्दी से लार्वा को निकालने के लिए 15-एमएल ट्यूब में डाला जाता है। सेंट्रीफ्यूजेशन के बाद, सतह पर तैरनेवाला हटा दिया जाता है, और अवक्षेप को एक कांच की स्लाइड में स्थानांतरित कर दिया जाता है, एक कवरस्लिप के साथ कवर किया जाता है और कम आवर्धन के तहत सूक्ष्मदर्शी किया जाता है।

फाइलेरिफॉर्म लार्वा के विभेदक निदान के लिए तालिका में प्रस्तुत आंकड़ों का उपयोग करना आवश्यक है। 13.

अंडे और हेलमन्थ्स के लार्वा को धुंधला करने के तरीके। ज्यादातर मामलों में मृत ऊतक जीवित लोगों की तुलना में रंगों को तेजी से समझते हैं। इन विशेषताओं का उपयोग हेल्मिन्थोलॉजी में अंडे की व्यवहार्यता और हेलमिन्थ के लार्वा को निर्धारित करने के लिए किया जाता है। हालांकि, कुछ मामलों में, कुछ पेंट को मृत ऊतकों की तुलना में जीवित ऊतकों द्वारा बेहतर माना जाता है।

तालिका 13. ए.डुओडेनेल, एन.अमेरिकनस, स्ट्रांगाइलोइड्स स्टेरकोरेलिस, ट्राइकोस्ट्रॉन्गिलस एसपीपी के फिलामेंटस लार्वा का विभेदक निदान।

जीवित और मृत अंडों और लार्वा की विभेदक पहचान के लिए, निम्नलिखित पेंट और विधियों का उपयोग किया जाता है।

मेथिलीन ब्लू ल्यूकोबेस का उपयोग जीवित और मृत ऊतकों को दागने के लिए किया जाता है। एक जीवित कोशिका या ऊतक मेथिलीन ब्लू को एक रंगहीन ल्यूकोबेस में कम कर देता है; मृत ऊतक में यह क्षमता नहीं होती है, और इसलिए एक रंग प्राप्त करता है।

एस्केरिस अंडे को रंगने के लिए, आप कास्टिक क्षार (मिथाइलीन ब्लू 0.05 ग्राम, कास्टिक सोडा 0.5 ग्राम, लैक्टिक एसिड 15 मिली) के साथ लैक्टिक एसिड के घोल में मेथिलीन ब्लू का उपयोग कर सकते हैं। जीवित अंडे रंग नहीं समझते हैं, मृत अंडों के भ्रूण नीले हो जाते हैं।

धुंधला करने की विधि अपरिपक्व राउंडवॉर्म और व्हिपवर्म अंडों पर लागू नहीं होती है; रंगद्रव्य खोल दाग, और इसलिए यह दिखाई नहीं दे रहा है कि अंडे के अंदर रोगाणु कोशिका दाग गई है या नहीं।

एस्केरिस लार्वा को 1:10 000 की सांद्रता में शानदार-क्रेसिल ब्लू पेंट के मूल समाधान के साथ दाग दिया जाता है: एस्केरिस अंडे के साथ तरल की एक बूंद और मूल पेंट समाधान की एक बूंद कांच की स्लाइड पर लागू होती है। तैयारी को एक कवरस्लिप के साथ कवर किया गया है, जिसे एक विदारक सुई के साथ हल्के टैपिंग के साथ वस्तु पर कसकर दबाया जाता है। एक माइक्रोस्कोप के तहत, रचे हुए लार्वा की संख्या और उनके धुंधला होने की डिग्री देखी जाती है, जिसके बाद 2-3 घंटों के बाद फिर से उसी तैयारी की समीक्षा की जाती है। केवल विकृत लार्वा जो 2 घंटे तक दाग नहीं करते हैं उन्हें जीवित माना जाता है। मृत लार्वा दाग जब खोल टूट जाता है (आंशिक रूप से या पूरी तरह से)।

एस्केरिडिया पक्षियों के अंडों की व्यवहार्यता का निर्धारण करने में आयोडीन के घोल से तैयारियों को धुंधला करने की संभावना का संकेत दिया गया है। इस मामले में, आयोडीन के 5% अल्कोहल घोल का उपयोग डाई के रूप में किया जाता है। जब इसे दवा पर लगाया जाता है, तो मृत एस्केरिड अंडे के भ्रूण 1-3 सेकंड के भीतर नारंगी हो जाते हैं। opisthorchis के मृत अंडे और गोजातीय टैपवार्म के ओंकोस्फीयर को टोल्यूडीन ब्लू (1:1000) के घोल से दाग दिया जाता है, और गोजातीय टैपवार्म के मृत ओंकोस्फीयर को ब्रिलियंट-क्रेसिल ब्लू (1:10,000) के घोल से दाग दिया जाता है। इसी समय, मृत और जीवित दोनों अंडों के भ्रूण और गोले रंग प्राप्त कर लेते हैं। इसलिए, धुंधला होने के बाद, अंडे और ओंकोस्फीयर को शुद्ध पानी में धोया जाता है और अतिरिक्त रूप से सफ़्रानिन (10% अल्कोहल समाधान के साथ पतला 1:10,000) के साथ दाग दिया जाता है। अल्कोहल गोले से डाई को हटा देता है, और सेफ़रिन उन्हें लाल रंग देता है। नतीजतन, जीवित अंडे लाल रंग के होते हैं, मृत अंडों का भ्रूण नीला होता है, और खोल लाल रहता है। गोजातीय टैपवार्म के ओंकोस्फीयर के मृत भ्रूण जल्दी से, कुछ ही मिनटों में, 1: 4000 के कमजोर पड़ने पर हीरा-क्रेसिल नीले रंग के साथ सफ्रानिन या नीले रंग के साथ चमकीले लाल या गुलाबी रंग के होते हैं या 1: 1000-1 के कमजोर पड़ने पर इंडिगो कारमाइन के साथ: 2000.

इन रंगों के प्रभाव में जीवित भ्रूण 2-7 घंटे के बाद भी नहीं बदलते हैं।

पिग्मी टैपवार्म अंडे की व्यवहार्यता निर्धारित करने के लिए, निम्नलिखित पेंट्स का उपयोग करने की सिफारिश की जाती है: 1) शानदार क्रेसिल ब्लू (1: 8000) - 1 घंटे के बाद, मृत अंडों का ओंकोस्फीयर विशेष रूप से चमकीले रंग का होता है, जो एक पीले रंग के खिलाफ तेजी से खड़ा होता है या बाकी अंडे की रंगहीन पृष्ठभूमि; 2) सफारीन: 2 घंटे के लिए 1:8000 और 3-5 घंटे के लिए 1:5000 के कमजोर पड़ने पर; 3) 1: 2 के कमजोर पड़ने पर पाइरोगैलिक एसिड का 50% घोल - जब 29-30 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर 1 घंटे के लिए उजागर किया जाता है (तापमान जितना कम होगा, धुंधला होने की प्रक्रिया उतनी ही लंबी होगी)।

ब्रॉड टैपवार्म के लाइव प्लेरोसेरोइड्स 5-20 मिनट के लिए तटस्थ मुंह के जलीय घोल (1:1000) के साथ बहुत अच्छी तरह से दागे जाते हैं। लगातार गुलाबी रंग प्राप्त करने के लिए जो 5 दिनों के भीतर गायब नहीं होता है और प्लेरोसेर्कोइड्स की गतिशीलता को प्रभावित नहीं करता है, आमतौर पर 10 मिनट पर्याप्त होते हैं। शुद्ध आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड घोल में लार्वा को देखकर रंग की डिग्री को नियंत्रित किया जाता है, जिसके लिए समय-समय पर पेंट से प्लेरोसेरॉइड को हटा दिया जाता है। मृत प्लेरोसेरकोएड्स को दागने के लिए मेथिलीन ब्लू का उपयोग करने की सलाह दी जाती है।

आरई चोबानोव एट अल (1986) ने डाई के रूप में कवक पेनिसिलियम रूब्रम की खेती से प्राप्त रूब्रिन वर्णक का उपयोग करके अंडों और हेलमिन्थ के लार्वा की व्यवहार्यता का निर्धारण करने के लिए एक विधि का प्रस्ताव रखा। ऐसा करने के लिए, 3% जलीय डाई समाधान का उपयोग करें।

अंडे और लार्वा को रंगने की प्रक्रिया 1.5 घंटे के बाद पूरी होती है। पिनवॉर्म, गोजातीय और बौने टैपवार्म, एंकिलोस्टोमाइड्स, ट्राइकोस्ट्रॉन्गिलिड्स के गैर-व्यवहार्य अंडे एक तीव्र गुलाबी रंग प्राप्त करते हैं, एंकिलोस्टोमिड और ट्राइकोस्ट्रॉन्गिलिड के लार्वा लाल हो जाते हैं। एस्केरिस और व्हिपवर्म के अंडों में एक कम चमकीला रंग देखा जाता है, क्योंकि आंतों से बाहर खड़े होने पर, उनके पास पहले से ही एक गहरा भूरा रंग होता है: व्यवहार्य अंडे और लार्वा दाग नहीं करते हैं।

कंपकंपी के अंडों से मिराडिया की रिहाई को उत्तेजित करने के लिए भौतिक-रासायनिक तरीके। एसएम जर्मन और एसए बीयर (1984) द्वारा विधियों को विकसित किया गया था ताकि अंडे को प्रतिक्रिया माध्यम में उजागर करके ओपिसथोरिया और डाइक्रोसेलियम अंडे की व्यवहार्यता निर्धारित की जा सके। जिंदा होते हैं तो मिरेसिडियम निकलता है। विधियाँ मिरासिडियम हैचिंग ग्रंथि के भौतिक-रासायनिक सक्रियण और लार्वा की मोटर गतिविधि की उत्तेजना पर आधारित हैं। लगातार तरीकों के संयोजन में एक विशेष प्रतिक्रिया माध्यम में कंपकंपी अंडे को उजागर करके उत्तेजना प्राप्त की जाती है - तापमान अंतर पैदा करना, अंडों के निलंबन को सूखना, परीक्षण ड्रॉप में तरल के कमजोर प्रवाह के संपर्क में आना, जो कि मिरासिडिया के बड़े पैमाने पर रिलीज में योगदान देता है अंडे।

हरमन, बीयर की विधि द्वारा ऑपिस्टोरच अंडे की व्यवहार्यता का निर्धारण। पानी में अंडे का निलंबन (नल, बसा हुआ) 10-12 डिग्री सेल्सियस तक पूर्व-ठंडा होता है। बाद के सभी ऑपरेशन कमरे के तापमान (18-22 डिग्री सेल्सियस) पर किए जाते हैं। एक अपकेंद्रित्र ट्यूब में 100-400 अंडे वाले निलंबन की एक बूंद (लगभग 0.05 मिली) डाली जाती है। अंडे को अवक्षेपित करने के लिए टेस्ट ट्यूब को 5-10 मिनट के लिए एक रैक में रखा जाता है। फिर, फिल्टर पेपर की एक संकीर्ण पट्टी के साथ, अतिरिक्त पानी को सावधानी से तब तक चूसा जाता है जब तक कि यह पूरी तरह से हटा न जाए। माध्यम की 2 बूंदों को परखनली में मिलाया जाता है, हिलाया जाता है, सामग्री को एक पिपेट के साथ एक कांच की स्लाइड पर स्थानांतरित किया जाता है और 5-10 मिनट के लिए छोड़ दिया जाता है, थोड़ा हिलाते हुए (या हेयर ड्रायर के नीचे रखा जाता है) कमजोर तरल धाराएं बनाने के लिए अध्ययन के तहत निलंबन ड्रॉप। यह ऑपरेशन, जो मोलस्क के आंतों के क्रमाकुंचन की नकल करता है, आपको मिरासिडिया की रिहाई को सक्रिय करने की अनुमति देता है। उसके बाद, माध्यम की 2 और बूंदों को निलंबन में जोड़ा जाता है, और फिर एक पारंपरिक प्रकाश माइक्रोस्कोप (X200) का उपयोग करके तैयारी की सूक्ष्म जांच की जाती है। इस समय के दौरान, व्यवहार्य मिरेसिडिया वाले अंडों को ढक्कन खोलना चाहिए, जबकि लार्वा सक्रिय रूप से पर्यावरण में उभरता है। इसमें इथेनॉल की उपस्थिति के कारण, मिरेसिडियम 3-5 मिनट में स्थिर हो जाता है, और फिर माध्यम में एक डाई के साथ दाग दिया जाता है। नतीजतन, चमत्कार आसानी से पता लगाया और गिना जाता है।

प्रतिक्रिया माध्यम की तैयारी। माध्यम 8.0-9.5 की इष्टतम पीएच स्थितियों के तहत 0.05 एम ट्रिस-एचसीआई बफर में तैयार किया जाता है। इथेनॉल को बफर में 10-13% तक और एक डाई (सैफ्रेनिन, मेथिलीन ब्लू और पीएच रेंज के भीतर काम करने वाले अन्य) तब तक मिलाया जाता है जब तक कि तरल थोड़ा रंगीन न हो जाए (उदाहरण के लिए, सफारी के लिए इसकी अंतिम एकाग्रता 1:50,000 होगी)। आप एक अन्य बफर का उपयोग कर सकते हैं जो क्षारीय पीएच श्रेणी में काम करता है, जैसे कि 0.05 एम फॉस्फेट (पीएच 8.5)। इसलिए, माध्यम में 96% इथेनॉल होता है - 12 भाग; डाई (माँ का घोल) - 1-10 भाग; 0.05 एम ट्रिस-एचसी! बफर (पीएच 8.5-9.5) - 100 भागों तक। मध्यम उदाहरण: 96% इथेनॉल के 12 भाग, संतृप्त सफ़्रानिन घोल का 1 भाग, शेष 100 भागों तक - 0.05 एम ट्रिस-एचसीएल बफर, पीएच 9.5।

हरमन, बीयर, स्ट्रैटन की विधि द्वारा डाइक्रोसेलियम अंडे की व्यवहार्यता का निर्धारण। 100-150 ट्रेमेटोड अंडे युक्त निलंबन की एक बूंद को अंडे को व्यवस्थित करने के लिए 1-2 मिनट के लिए एक अपकेंद्रित्र ट्यूब में रखा जाता है। फिर तरल को फिल्टर पेपर की एक पट्टी से सावधानीपूर्वक सुखाया जाता है। एक पाश्चर पिपेट के साथ प्रतिक्रिया माध्यम की 1-2 बूँदें जोड़ें और 2-3 मिनट के लिए 28-30 डिग्री सेल्सियस पर पानी के स्नान में इनक्यूबेट करें। माध्यम की संरचना: ब्यूटेनॉल के 6 भाग, 0.4% सोडियम क्लोराइड घोल के 94 भाग या आसुत जल में 0.3% पोटेशियम क्लोराइड घोल। माध्यम में अंडों को एक पिपेट के साथ कांच की स्लाइड पर स्थानांतरित किया जाता है और कमरे के तापमान (18-22 डिग्री सेल्सियस) पर 1.5-2 घंटे के लिए छोड़ दिया जाता है, जबकि हर 25-30 मिनट में (जैसे ही यह सूख जाता है) 1-2 बूंदें (0.05) डालें। एमएल) आसुत जल में ब्यूटेनॉल का घोल। उसके बाद, तैयारी को 100-200-गुना आवर्धन पर सूक्ष्मदर्शी किया जाता है। जारी किए गए मिरेसिडिया के साथ खुले अंडों की संख्या से व्यवहार्यता निर्धारित होती है। ब्यूटेनॉल अंडे के खोल के छिद्रों के माध्यम से प्रवेश करता है, मिरासिडिया तक पहुंचता है और उन्हें सक्रिय करता है। एक चिह्नित तापमान पर ऊष्मायन इस प्रक्रिया को बढ़ाता है। 3-7% की सांद्रता में बुटानॉल अंडे से निकलने वाले मिरेसिडियम के लिए हानिकारक है। एक परखनली से एक गिलास स्लाइड में अंडों के निलंबन का स्थानांतरण, जब तक मिरासिडियम बाहर निकलता है (30-40 मिनट के बाद), एक सुरक्षित स्तर (1.5-0.5%) के वाष्पीकरण के कारण ब्यूटेनॉल की एकाग्रता को कम करने की अनुमति देता है। माध्यम में सोडियम क्लोराइड की उपस्थिति 0.1-0.5% (या पोटेशियम क्लोराइड 0.05-0.4%) की एकाग्रता पर जारी किए गए मिरासिडियम की गतिविधि को निर्धारित करती है। opisthorch के छोटे पारदर्शी अंडों के विपरीत, dicrocelium के अंडों में गहरे रंग का खोल होता है, उनके पास स्पष्ट रूप से दिखाई देने वाला ढक्कन होता है, जो miracidium के निकलने के बाद खुला होता है। इसलिए, डाईक्रोसेलियम अंडों की व्यवहार्यता का आकलन खुले हुए अंडों की गिनती करके किया जाता है, न कि धुंधला होने और मिरेसिडिया की गिनती के द्वारा।

हेलमिन्थ के अंडों और लार्वा के अध्ययन के लिए ल्यूमिनसेंट विधि।

हेलमिन्थोलॉजिकल अभ्यास में पहली बार 1955 में ल्यूमिनेसेंस माइक्रोस्कोपी विधियों को लागू किया गया था। यह बताया गया था कि ल्यूमिनेसिसेंस माइक्रोस्कोपी अंडे को नुकसान पहुंचाए बिना जीवित और मृत वस्तुओं को अलग करना संभव बनाता है। प्रतिदीप्ति के लिए, यूवी किरणों का उपयोग नहीं किया गया था, लेकिन एक पारंपरिक माइक्रोस्कोप और कांच की स्लाइड के साथ दृश्य प्रकाश के नीले-बैंगनी भाग का उपयोग किया गया था; OI-18 प्रदीपक के लिए रंग फिल्टर के एक विशेष सेट का उपयोग किया गया था।

यह पाया गया कि राउंडवॉर्म, पिनवॉर्म, पिग्मी टैपवार्म, गोजातीय टैपवार्म, ब्रॉड टैपवार्म और अन्य हेल्मिन्थ के जीवित और मृत अंडे अलग-अलग चमकते हैं। यह घटना रंगों के उपयोग के बिना प्राथमिक ल्यूमिनेसेंस के दौरान और फ्लोरोक्रोमेस (एक्रिडीन ऑरेंज, कोरिफोस्फीन, प्रिमुलिन, ऑरोलिन, बेरलेरिन सल्फेट, ट्रिपाफ्लेविन, रिवानोल, क्विनाक्राइन, आदि) के साथ दागने पर दोनों में देखी जाती है।

अप्रकाशित जीवित गैर-खंडित राउंडवॉर्म अंडे पीले रंग के टिंट के साथ चमकीले हरे रंग में चमकते हैं; मृत अंडों में, खोल गहरे हरे रंग के भ्रूण की तुलना में अधिक चमकीला हरा प्रकाश उत्सर्जित करता है; राउंडवॉर्म के अंडों में लार्वा के साथ केवल खोल दिखाई देता है, जबकि मृत में, खोल और लार्वा दोनों चमकीले पीले रंग के होते हैं।

पिनवॉर्म और पिग्मी टैपवार्म के अप्रकाशित और अखंडित जीवित अंडे एक हरे-पीले प्रकाश का उत्सर्जन करते हैं; मृत अंडों में, खोल गहरे हरे रंग के भ्रूण के द्रव्यमान की पृष्ठभूमि के खिलाफ तीव्रता से चमकता है। द्वितीयक ल्यूमिनेसेंस के साथ (जब 30 मिनट से 2 घंटे तक 1:10 OOO और 1:50 OOO के कमजोर पड़ने पर एक्रिडीन नारंगी के साथ दाग), जीवित और मृत नेमाटोड, कंपकंपी और सेस्टोड का खोल अलग-अलग होता है।

जीवित और मृत एस्केरिस लुम्ब्रिकोइड्स का खोल, टोक्सोकारा लियोनिना, एंटरोबियस वर्मीक्यूलिस, हाइमेनोलेपिस नाना, एच। फ्रैटरना, एच। डिमिनुटा, टी। सैगिनैटस, डी। लैटम नारंगी-लाल हो जाता है। जीवित एएससी के भ्रूण। lumbricoides, T.leonina, H.diminuta, D.latum और ओंकोस्फीयर ऑफ़ बोवाइन टैपवार्म ल्यूमिनेस एक सुस्त गहरे हरे या भूरे-हरे रंग में। इन हेल्मिंथ अंडों के मृत भ्रूण एक "जलती हुई" नारंगी-लाल रोशनी का उत्सर्जन करते हैं। जीवित पिनवॉर्म लार्वा और टॉक्सोकार्स (अंडे के छिलके) एक सुस्त ग्रे-हरे रंग की रोशनी का उत्सर्जन करते हैं, और जब वे मर जाते हैं, तो रंग सिर के अंत से "जलते हुए" हल्के हरे, फिर पीले, नारंगी और अंत में चमकीले नारंगी रंग में बदल जाता है।

जब फ्लोरोक्रोमेस के साथ दाग दिया जाता है - कोरिफोस्फिलम, प्रिमुलिन - एस्केरिड्स और व्हिपवर्म के मृत अंडों में, बकाइन-पीले से तांबे-लाल तक की चमक देखी जाती है। व्यवहार्य अंडे चमकते नहीं हैं, लेकिन गहरे हरे रंग में बदल जाते हैं। ट्रेमेटोड पैरागोनिमस वेस्टरमनी और क्लोनोर्चिस साइनेंसिस के जीवित अंडे एक्रिडीन नारंगी के साथ धुंधला होने के बाद चमकते नहीं हैं, जबकि मृत अंडे पीले हरे रंग की रोशनी का उत्सर्जन करते हैं।

ल्यूमिनेसेंस विधि का उपयोग हेल्मिंथ लार्वा की व्यवहार्यता को निर्धारित करने के लिए भी किया जा सकता है। तो, फ्लोरोक्रोमाइज्ड एसिडिन ऑरेंज (1:2000) लार्वा ऑफ स्ट्रांगाइलेट, रबदिता ग्लो: लाइव - ग्रीन (एक टिंट के साथ), डेड - ब्राइट ऑरेंज लाइट के घोल के साथ। ट्रिचिनेला के जीवित लार्वा 10 मिनट तक फ्लोरेसिन आइसोथियोसाइनेट, औरामाइन आदि के घोल से उपचारित करने पर न तो चमकते हैं और न ही कमजोर चमक देते हैं। फ्लोरोक्रोमाइज्ड डेड लार्वा (1:5000 की सांद्रता पर) एक चमकदार चमक देते हैं।

जीवित मिरेसिडिया जो खोल से निकले हैं, सिलिया के मुश्किल से ध्यान देने योग्य हल्के पीले रंग के कोरोला के साथ एक मंद नीली रोशनी का उत्सर्जन करते हैं, लेकिन मृत्यु के 10-15 मिनट बाद वे एक उज्ज्वल "जलती हुई" हल्के हरे, और फिर नारंगी-लाल प्रकाश के रूप में दिखाई देते हैं।