हेल्मिन्थोलॉजिकल तरीके। एंटरोबियासिस और टेनिइडोसिस पर शोध

कीड़े के टुकड़ों का पता लगाने के लिए, मल को नग्न देखा जाता है, फिर पानी के साथ मिलाया जाता है और एक गहरे रंग की पृष्ठभूमि के खिलाफ पेट्री डिश में छोटे भागों में जांच की जाती है। सभी संदिग्ध कणों को पानी की एक बूंद में कांच की स्लाइड पर रखा जाता है और एक आवर्धक कांच के नीचे जांच की जाती है। आप दैनिक भाग को पानी की मात्रा का 5-10 गुना मिला कर एक सिलेंडर में रख सकते हैं। सरगर्मी के बाद, बर्तन को निलंबित कणों के पूर्ण अवसादन तक छोड़ दिया जाता है। तरल की सतह परत निकल जाती है और साफ पानी डाला जाता है। धुले हुए अवक्षेप को छोटे भागों में नग्न आंखों से या आवर्धक कांच के नीचे देखा जाता है। अंडों का पता लगाने के लिए सूक्ष्म जांच विधियों का उपयोग किया जाता है।

देशी स्मीयर विधि। परीक्षण भाग के विभिन्न स्थानों से मल की एक छोटी मात्रा को 50% ग्लिसरॉल घोल, आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड घोल या पानी की एक बूंद में कांच की स्लाइड पर ट्रिट्यूरेट किया जाता है। मिश्रण को एक कवरस्लिप के साथ कवर किया जाता है और एक माइक्रोस्कोप के नीचे देखा जाता है।

फुलबॉर्न की फ्लोटिंग विधि। मल के एक भाग को 20 भागों में संतृप्त सोडियम क्लोराइड घोल (विशिष्ट गुरुत्व 1.18) के साथ मिलाया जाता है, छोटे भागों में मिलाया जाता है। सतह पर तैरने वाले बड़े कण तुरंत हटा दिए जाते हैं, और मिश्रण को 45 मिनट के लिए छोड़ दिया जाता है। इस समय के दौरान, हेल्मिंथ अंडे, सोडियम क्लोराइड के घोल की तुलना में कम विशिष्ट गुरुत्व वाले होते हैं, सतह पर तैरते हैं। सतह की फिल्म को लगभग 1 सेमी व्यास के तार के लूप से हटा दिया जाता है और माइक्रोस्कोप के तहत जांच के लिए कांच की स्लाइड में स्थानांतरित कर दिया जाता है।

कलंतरायण विधि। सोडियम क्लोराइड को सोडियम नाइट्रेट के संतृप्त घोल से बदलकर तैरने की विधि की दक्षता बढ़ जाती है। ऐसे में मिश्रण को 10-15 मिनट के लिए रख दें।

सोडियम क्लोराइड या सोडियम नाइट्रेट के घोल के साथ मल के मिश्रण को जमने के बाद बनने वाली सतह की फिल्म को कांच की स्लाइड से भी हटाया जा सकता है। इस प्रयोजन के लिए, नमक के घोल के साथ मल के मिश्रण से भरे जार को कांच की स्लाइड से ढक दिया जाता है ताकि इसकी निचली सतह तरल के संपर्क में रहे। बसने के बाद, कांच हटा दिया जाता है और, जिस सतह पर फिल्म स्थित है, उसे जल्दी से एक माइक्रोस्कोप के नीचे देखा जाता है।

शौचालय बनाने से पहले सुबह के समय स्पेरिएनल फोल्ड (पिनवॉर्म के अंडे और गोजातीय टैपवार्म के ओंकोस्फीयर की पहचान करने के लिए) को स्क्रैप किया जाता है। एक लकड़ी के स्पैटुला को पानी में डुबोया जाता है या 50% ग्लिसरीन के घोल का उपयोग गुदा के चारों ओर खुरचने के लिए किया जाता है। परिणामी सामग्री को पानी की एक बूंद या 50% ग्लिसरॉल घोल में कांच की स्लाइड में स्थानांतरित किया जाता है और माइक्रोस्कोप के नीचे देखा जाता है। स्पैटुला को एक नम कपास झाड़ू से बदला जा सकता है, जिसका उपयोग पेरिअनल क्षेत्र को पोंछने के लिए किया जाता है, फिर पानी में अच्छी तरह से कुल्ला करें। पानी को सेंट्रीफ्यूज किया जाता है और एक माइक्रोस्कोप के तहत अवक्षेप की जांच की जाती है।

बर्मन की विधि (लार्वा का पता लगाने के लिए)। एक स्टैंड में डाली गई ग्लास फ़नल पर 5-6 ग्राम मल के साथ लेपित धातु की जाली लगाई जाती है। कीप के निचले सिरे पर एक क्लैंप के साथ एक रबर ट्यूब लगाई जाती है। फ़नल को t ° 50 ° तक गर्म पानी से भर दिया जाता है, ताकि मल के साथ जाल का निचला हिस्सा पानी के संपर्क में आ जाए। लार्वा सक्रिय रूप से पानी में चले जाते हैं और रबर ट्यूब के निचले हिस्से में जमा हो जाते हैं। 4 घंटे के बाद, तरल को अपकेंद्रित्र ट्यूबों में उतारा जाता है, सेंट्रीफ्यूज किया जाता है, और एक माइक्रोस्कोप के तहत अवक्षेप की जांच की जाती है।

फेफड़े के फ्लूक पैरागोनिमस, एस्केरिस और हुकवर्म लार्वा, पिनवॉर्म अंडे, इचिनोकोकल मूत्राशय के टुकड़ों के अंडों का पता लगाने के लिए थूक, नाक के बलगम और योनि स्राव का विश्लेषण। बलगम (स्राव) के जांचे गए हिस्से को कांच पर लिप्त किया जाता है और एक काले और सफेद पृष्ठभूमि पर मैक्रोस्कोपिक रूप से देखा जाता है, और फिर एक माइक्रोस्कोप के नीचे देखा जाता है। आप परीक्षण सामग्री में एंटीफॉर्मिन का 25% घोल मिला सकते हैं, अच्छी तरह से हिला सकते हैं और बलगम को भंग करने के लिए 1-1.5 घंटे तक पकड़ सकते हैं। मिश्रण को सेंट्रीफ्यूज किया जाता है और एक माइक्रोस्कोप के तहत अवक्षेप की जांच की जाती है।

लीवर फ्लूक अंडे, हुकवर्म, स्ट्रांगाइलोइड्स लार्वा का पता लगाने के लिए ग्रहणी और गैस्ट्रिक रस का विश्लेषण। ग्रहणी की सामग्री के सभी तीन भागों को सेंट्रीफ्यूज किया जाता है और एक माइक्रोस्कोप के तहत तलछट की जांच की जाती है। साथ ही अन्वेषण करें और।

ऊतकों का अध्ययन। ट्रिचिनेला लार्वा की पहचान करने के लिए, बायोप्सीड पेशी के टुकड़ों को सावधानी से तंतुओं में विभाजित किया जाता है, कंप्रेसर ग्लास (शिकंजा के साथ मोटा चश्मा) के बीच निचोड़ा जाता है और छायांकित प्रकाश के साथ एक माइक्रोस्कोप के तहत जांच की जाती है। सिस्टिकेरसी की पहचान करने के लिए, मांसपेशियों को विदारक सुइयों से स्तरीकृत किया जाता है, पृथक पुटिका को आसपास के ऊतक से साफ किया जाता है, दो कांच की स्लाइडों के बीच निचोड़ा जाता है और एक आवर्धक कांच के नीचे जांच की जाती है।

रक्त परीक्षण (फाइलेरिया लार्वा का पता लगाने के लिए)। वैसलीन के किनारे वाली कवर स्लिप पर लटकती हुई बूंद की जांच की जाती है। आप 3% घोल की मात्रा के 10 गुना के साथ 0.3 मिली रक्त मिला सकते हैं। मिश्रण को सेंट्रीफ्यूज किया जाता है और एक माइक्रोस्कोप के तहत अवक्षेप की जांच की जाती है। तैयारी को समृद्ध करने के लिए, 2% फॉर्मेलिन समाधान के 3 मिलीलीटर या 5% फॉर्मेलिन समाधान के 95 मिलीलीटर, एसिटिक एसिड के 5 मिलीलीटर और हेमेटोक्सिलिन के केंद्रित अल्कोहल समाधान के 2 मिलीलीटर युक्त तरल की 5 गुना मात्रा को जोड़ा जाता है। शिरापरक रक्त के 1 मिलीलीटर तक। मिश्रण को सेंट्रीफ्यूज किया जाता है, अवक्षेप को आसुत जल से धोया जाता है और एक माइक्रोस्कोप के तहत जांच की जाती है। विभिन्न प्रकार के फाइलेरिया में अंतर करने के लिए, गिमेसा-रोमानोव्स्की पद्धति के अनुसार दाग वाले स्मीयर की जांच की जाती है।

इम्यूनोलॉजिकल डायग्नोस्टिक्स के तरीके। लागू करें (एग्लूटिनेशन, पूरक निर्धारण) और एलर्जी निदान परीक्षण (देखें) इसी प्रकार के हेलमिन्थ से।

हेल्मिन्थोलॉजिकल अनुसंधान के तरीके। चावल। हेल्मिंथ अंडे। 1-10 - राउंडवॉर्म के अंडे (नेमाटोड): 1 - 3 - राउंडवॉर्म (1 - एक निषेचित अंडा, 2 - एक प्रोटीन कोट के बिना एक निषेचित अंडा, 3 - एक अनफर्टिलाइज्ड अंडा); 4 - बिल्ली के समान राउंडवॉर्म; 5 - राउंडवॉर्म मांसाहारी; 5 - पिनवर्म; 7 - व्हिपलैश; 8 - टोमिनक्स; 9 - हुकवर्म; 10 - ट्राइको-स्ट्रॉन्गिलिड। 11-15 - टैपवार्म के अंडे (सेस्टोड): 11 - गोजातीय टैपवार्म; 12 - टैपवार्म बौना; 13 - चूहा टैपवार्म; 14 - लौकी टैपवार्म; 15 - चौड़ा रिबन। 16 - 24 - फ्लुक्स के अंडे (कंपकंपी): 16 - कंपकंपी (स्किस्टोसोम) जापानी; 17 - कंपकंपी (स्किस्टोसोम) मूत्र - यौन; 18 - कंपकंपी (शिस्टोसोम) मुनसन; 19 - कंपकंपी (पैरोगोनिमस) फुफ्फुसीय; 20 - कंपकंपी (opisthorchis) साइबेरियाई (बिल्ली के समान); 21 - कंपकंपी (क्लोनोर्चिस) चीनी; 22 - आंतों का कांपना (मेटागोनिमस); 23 - जिगर के कंपकंपी (फासीओलास); 24 - कंपकंपी (डाइक्रोसेलियम) लांसोलेट।

कृमिविज्ञान अनुसंधान का एक प्रभावी और सुविधाजनक तरीका है काटो के अनुसार एक मोटी धुंध का अध्ययन, जिसका सार मल की एक मोटी धुंध में हेल्मिंथ अंडे का पता लगाना है, ग्लिसरीन के साथ स्पष्ट किया गया है और मैलाकाइट हरे रंग से रंगा हुआ है। काटो मिश्रण की संरचना मैलाकाइट ग्रीन के 3% जलीय घोल का 6 मिली, ग्लिसरीन का 500 मिली, 6% फिनोल घोल का 500 मिली। समाधान स्थिर है और कमरे के तापमान पर संग्रहीत किया जा सकता है। तैयारी तैयार करने के लिए, मटर के आकार के मल के टुकड़ों को एक कांच की स्लाइड पर लगाया जाता है, जिसे काटो मिश्रण में 24 घंटे के लिए हाइड्रोफिलिक सिलोफ़न की एक फिल्म के साथ कवर किया जाता है, और सामग्री को समान रूप से वितरित करने के लिए कांच के खिलाफ दबाया जाता है। 40-60 मिनट के लिए स्पष्ट किए गए स्मीयर की सूक्ष्म जांच की जाती है। खोजे गए कृमि के अंडों की गिनती की जाती है और उनकी प्रजातियों की संबद्धता रूपात्मक विशेषताओं द्वारा निर्धारित की जाती है। विधि एस्केरिस, व्हिपवर्म, सेस्टोड, कंपकंपी के अंडों को कुछ हद तक प्रकट करने की अनुमति देती है - हुकवर्म और पाइग्मी टैपवार्म।

इसके अलावा व्यापक रूप से उपयोग किया जाता है संवर्धन के तरीके. प्लवनशीलता विधियों का सिद्धांत एक खारा समाधान में मल को निलंबित करना है, जिसमें हेल्मिन्थ अंडे की तुलना में उच्च सापेक्ष घनत्व होता है, जिसके परिणामस्वरूप वे सतह पर तैरते हैं। सतह फिल्म की सामग्री की जांच एक माइक्रोस्कोप के तहत की जाती है। समृद्ध मिश्रण के रूप में, समाधान का उपयोग किया जाता है: टेबल नमक - 1 लीटर पानी में 400 ग्राम (फुलेबोर्न -1.18 के अनुसार सापेक्ष घनत्व); सोडियम नाइट्रेट - 1 लीटर पानी में 1 किलो (कलंतरीयन-1.38) के अनुसार सापेक्ष घनत्व; सोडियम नाइट्रेट - 900 ग्राम और पोटेशियम नाइट्रेट - 1 लीटर पानी में 400 ग्राम (ब्रुदास्तोव और क्रास्नोनोस -1.48 के अनुसार सापेक्ष घनत्व)। समाधान हैं उबला हुआ और ठंडा।
शोध के लिए, एक गिलास या फ़ाइनेस ग्लास में 5-10 ग्राम मल मिलाया जाता है, इसमें 100-200 मिलीलीटर खारा घोल डाला जाता है और अच्छी तरह मिलाया जाता है। फिर, जो बड़े कण सामने आए हैं, उन्हें लकड़ी के स्पैटुला या कागज या कार्डबोर्ड से बने स्कूप से हटा दिया जाता है, और एक चौड़ी कांच की स्लाइड को तुरंत सतह फिल्म पर लगाया जाता है ताकि खारा घोल और कांच की स्लाइड पूरी तरह से संपर्क में रहे। मिश्रण को जमने के 30-40 मिनट के बाद, कांच की स्लाइड को हटा दिया जाता है, फिल्म के साथ माइक्रोस्कोप के नीचे रखा जाता है और पूरी सतह की सावधानीपूर्वक जांच की जाती है। सूखने से बचाने के लिए, आप 50% ग्लिसरीन के घोल की 2-3 बूंदें मिला सकते हैं। सतह की फिल्म को वायर लूप से भी हटाया जा सकता है। नमक के घोल का आपेक्षिक घनत्व बढ़ने पर प्लवनशीलता विधियों की दक्षता बढ़ जाती है। इन विधियों का उपयोग करके सूत्रकृमि, सेस्टोड और थरमाटोड के अंडों का पता लगाना संभव है।

मल में अंडे का पता लगाने के लिए, कसीसिलनिकोव अवसादन विधि का उपयोग किया जाता है।. एक निलंबन बनने तक मल को 1:10 के अनुपात में 1% डिटर्जेंट घोल (लोटोस वाशिंग पाउडर, आदि) के साथ मिलाया जाता है। डिटर्जेंट के प्रभाव में, मल के विभिन्न घटक (प्रोटीन, वसा, ऊतक तत्व) भंग हो जाते हैं। 30 मिनट के बाद, ट्यूब की सामग्री को 1-2 मिनट के लिए हिलाया जाता है, जिसके बाद उन्हें 5 मिनट के लिए सेंट्रीफ्यूज किया जाता है। तलछट से तैयारियां तैयार की जाती हैं और माइक्रोस्कोप के नीचे देखी जाती हैं।
खेत की स्थितियों में, साथ ही कृमि संक्रमण के लिए आबादी के बड़े पैमाने पर सर्वेक्षण के दौरान, काटो मोटी स्मीयर विधि का उपयोग करना सुविधाजनक होता है। स्थिर स्थितियों में, रोगियों की जांच करते समय, सबसे प्रभावी प्लवनशीलता विधियों का उपयोग करना बेहतर होता है। माइक्रोस्कोपी के दौरान इन विधियों का उपयोग करते समय, तैयारी में पाए जाने वाले अंडों को गिनने की सलाह दी जाती है। मल के अध्ययन के लिए लिए गए मानक वजन या मात्रा (उदाहरण के लिए, 1 चम्मच या बड़ा चम्मच), और खारा समाधान की एक निरंतर एकल मात्रा के अधीन, कोई मोटे तौर पर आक्रमण की तीव्रता का न्याय कर सकता है। यह मात्रात्मक रिकॉर्ड निर्धारित उपचार को प्रमाणित करने और डीवर्मिंग की प्रभावशीलता का मूल्यांकन करने में उपयोगी हो सकता है। इसके अलावा, संक्रमण की तीव्रता को स्थापित करने के लिए अन्य अधिक सटीक मात्रात्मक तरीकों, विशेष रूप से स्टोल विधि का उपयोग किया जा सकता है।

टेनियारिन्कोसिस और एंटरोबियासिस के निदान के लिएपेरिअनल-रेक्टल स्क्रैपिंग के शोध के तरीके को लागू करें। 50% ग्लिसरॉल के घोल में भिगोए हुए लकड़ी के स्पैटुला का उपयोग गुदा और निचले मलाशय के आसपास शौच करने से पहले सुबह के समय पेरिअनल सिलवटों को खुरचने के लिए किया जाता है। परिणामी सामग्री, कवर स्लिप के किनारे से एक स्पैटुला से साफ की जाती है, 50% ग्लिसरॉल घोल की एक बूंद में कांच की स्लाइड पर रखी जाती है, एक कवर स्लिप से ढकी होती है और एक माइक्रोस्कोप के तहत जांच की जाती है। आप सेल्यूलोज टेप की एक पट्टी की भी जांच कर सकते हैं, जिसे पहले एक चिपकने वाले पक्ष के साथ pernanal सिलवटों से दबाया जाता है, फिर एक कांच की स्लाइड पर रखा जाता है और सूक्ष्मदर्शी किया जाता है।

बर्मन विधि द्वारा मल में निमेटोड लार्वा का पता लगाना. विधि लार्वा की थर्मोट्रोपिक संपत्ति पर आधारित है। शोध के लिए, 1 बड़ा चम्मच मल लिया जाता है, एक धातु की जाली में रखा जाता है या एक तार के फ्रेम पर धुंध की कई परतों की जाली लगाई जाती है। ग्रिड एक तिपाई में तय कीप में स्थापित है। क्लैंप के साथ एक रबर ट्यूब फ़नल से जुड़ती है। जाल को ऊपर उठाकर कीप को पानी (तापमान +40°...+50°C) से भर दिया जाता है ताकि जाली का निचला हिस्सा पानी में डूब जाए। मल से लार्वा सक्रिय रूप से गर्म पानी में चले जाते हैं और फ़नल के निचले हिस्से में जमा हो जाते हैं। 2-4 घंटों के बाद, क्लैंप खोला जाता है, पानी को एक अपकेंद्रित्र ट्यूब में उतारा जाता है और 2-3 मिनट के लिए अपकेंद्रित्र किया जाता है। फिर सतह पर तैरनेवाला निकाला जाता है, तलछट को एक कांच की स्लाइड में स्थानांतरित किया जाता है और एक माइक्रोस्कोप के नीचे देखा जाता है, जहां स्ट्रॉन्गिलोडायसिस रोगज़नक़ के मोबाइल लार्वा पाए जाते हैं।

हरड़ विधि और मोरी हुकवर्म और नेकेटर्स के लार्वा में अंतर करने की अनुमति देता है। हुकवर्म के लार्वा फिल्टर पेपर पर सुसंस्कृत होते हैं। इस प्रयोजन के लिए, रोगी से लिए गए ताजा मल के 0.5 ग्राम को शौच के 1 घंटे के बाद नहीं, 12X1.5 सेमी आकार के फिल्टर पेपर स्ट्रिप्स पर लगाया जाता है, जिससे पट्टी के दोनों सिरे साफ हो जाते हैं। पट्टी का एक सिरा एक परखनली में डुबोया जाता है, जिसका चौथा भाग पानी से भरा होता है, और दूसरा भाग कॉर्क से जकड़ा होता है। ट्यूबों को थर्मोस्टैट में +26 ... + 28 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर रखा जाता है। अंडों से विकसित होने वाले लार्वा फिल्टर पेपर के साथ उतरते हैं और टेस्ट ट्यूब के नीचे बस जाते हैं। 5-6 दिनों के बाद, कागज की पट्टी को हटा दिया जाता है, और परखनली में शेष तरल की जांच एक आवर्धक कांच या सेंट्रीफ्यूज के तहत की जाती है। सेंट्रीफ्यूजेशन के दौरान बनने वाले अवक्षेप की जांच एक प्रकाश सूक्ष्मदर्शी से की जाती है। टेस्ट ट्यूब टेट्राहेड्रल ग्लास जार (आकार 15XYX7 सेमी) के बजाय उपयोग करते समय, जिसकी दीवारों पर 4 पेपर स्ट्रिप्स जुड़े होते हैं, विश्लेषण की दक्षता बढ़ जाती है (जीएम मारुशविली एट अल।, 1966)।

शिस्टोसोमियासिस के लिए अनुसंधान के तरीके . मल की जांच - मल के एक हिस्से को 250 मिली पानी में मिलाया जाता है, धुंध की 3 परतों के माध्यम से एक शंक्वाकार बर्तन में फ़िल्टर किया जाता है, जिसे ऊपर से पानी से भर दिया जाता है। 30 मिनट के बाद, तरल परत को हटा दिया जाता है, पानी का एक ताजा हिस्सा अवक्षेप में जोड़ा जाता है। एक स्पष्ट सतह पर तैरनेवाला प्राप्त होने तक और सूक्ष्म रूप से जांच किए जाने तक अवक्षेप को धोया जाता है।

लार्वोस्कोपी की विधि - 20-25 ग्राम मल को एर्लेनमेयर फ्लास्क में रखा जाता है, जिसके किनारे पर एक कांच की ट्यूब होती है और नल के पानी से धोया जाता है। फिर फ्लास्क को काले कागज से ढक दिया जाता है, सोल्डरेड ग्लास ट्यूब को +25...+30°C के तापमान पर प्रकाश में छोड़ दिया जाता है। हैटेड मिरासिडिया पार्श्व ट्यूब में मेनिस्कस पर केंद्रित होते हैं, जहां उन्हें एक आवर्धक कांच या नग्न आंखों से देखा जा सकता है। मूत्र परीक्षण - सुबह 10 बजे से दोपहर 2 बजे के बीच 100 मिली मूत्र एकत्र किया जाता है, या दैनिक भाग का निपटान किया जाता है, और फिर 1500 आरपीएम पर सेंट्रीफ्यूज किया जाता है। परिणामी अवक्षेप * को कांच की स्लाइड पर लगाया जाता है और सूक्ष्मदर्शी किया जाता है। डब्ल्यूएचओ मूत्र के पूरे हिस्से को छानने के लिए एक विधि की सिफारिश करता है। निस्पंदन के बाद, फिल्टर को फॉर्मेलिन या गर्म (अंडे को मारने के लिए) के साथ इलाज किया जाता है और फिर निनहाइड्रिन के जलीय घोल से सिक्त किया जाता है। सूखे तैयारियों में, अंडे के भ्रूण बैंगनी रंग का हो जाता है।

इम्यूनोलॉजिकल का उपयोग शिस्टोसोमियासिस के निदान के लिए अनुसंधान विधियां कठिन हैं, क्योंकि वयस्क शिस्टोसोम और उनके अंडों में बड़ी संख्या में एंटीजन होते हैं जो प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया का कारण बनते हैं जो प्रजाति-विशिष्ट नहीं हैं (डी। ब्रैडली, 1979)।

हमारे देश में, हेल्मिंथियासिस में प्रतिरक्षाविज्ञानी प्रतिक्रियाओं के निर्माण के लिए, कई मानक निदान तैयार किए जाते हैं। इचिनोकोकोसिस और एल्वोकॉकोसिस के लिए एलर्जी त्वचा परीक्षण, इचिनोकोकोसिस एंटीजन के साथ आरएलए, ठंड में आरएसके, विभिन्न संशोधनों में ठंड में वर्षा प्रतिक्रिया (रिंग वर्षा, टेस्ट ट्यूब या केशिकाओं में वर्षा, जो ट्राइकिनोसिस, सिस्टिसरकोसिस और माइग्रोस्कारियासिस एंटीजन के साथ रखी जाती है) व्यावहारिक है। अनुप्रयोग। उपरोक्त सीरोलॉजिकल प्रतिक्रियाओं को स्थापित करने के लिए मानक निदान बैक्टीरिया की तैयारी करने वाले उद्यमों द्वारा किए जाते हैं। निर्माता ने भंडारण के नियमों, दवा की समाप्ति तिथि और उत्पादित डायग्नोस्टिक्स के लिए प्रतिक्रिया तकनीक के साथ उपयुक्त एंटीजन के उपयोग पर निर्देशों पर विस्तृत निर्देश संलग्न किए हैं।

हाल के वर्षों में, हेल्मिंथियासिस के निदान के लिए उपयोग किए जाने वाले सीरोलॉजिकल परीक्षणों की सूची में काफी विस्तार हुआ है। इस प्रयोजन के लिए, निम्नलिखित प्रतिक्रियाओं का उपयोग किया जाता है: रीगा, अप्रत्यक्ष इम्यूनोफ्लोरेसेंस (आरआईएफ), जेल इम्यूनोडिफ्यूजन (आरआईडी), काउंटर इम्यूनोइलेक्ट्रोफोरेसिस (वीआईईएफ), रीमा। इन प्रतिक्रियाओं का उपयोग एस्कारियासिस, टोक्सोकेरियासिस, ट्राइकिनोसिस, हुकवर्म संक्रमण, फाइलेरिया, इचिनोकोकोसिस और एल्वोकॉकोसिस, ओपिसथोरियासिस, शिस्टोसोमियासिस, पैरागोनिमियासिस के लिए किया जा सकता है। हालांकि, हमारे देश में इन प्रतिक्रियाओं के लिए, मानक निदान जारी नहीं किए जाते हैं और उनकी सेटिंग की तकनीक को विनियमित नहीं किया जाता है। अलग-अलग प्रयोगशालाएं, ज्यादातर वैज्ञानिक, अपने स्वयं के विशिष्ट एंटीजन तैयार करती हैं और विभिन्न संशोधनों में उनका उपयोग करती हैं। इन विधियों का विवरण साहित्य में व्यापक रूप से प्रस्तुत किया गया है और कड़ाई से एकीकृत नहीं है। प्रतिरक्षाविज्ञानी डेटा की व्याख्या प्रत्येक लागू सीरोलॉजिकल परीक्षण की विशिष्टता और संवेदनशीलता के स्तर को ध्यान में रखते हुए, प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया की गतिशीलता के अध्ययन पर आधारित होनी चाहिए। इसलिए, निदान करते समय, साथ ही आबादी के सेरोएपिडेमियोलॉजिकल सर्वेक्षणों के दौरान, कई सबसे संवेदनशील प्रतिक्रियाओं का उपयोग करने की सलाह दी जाती है। इन पदों से, VIEF और REMA प्रतिक्रियाओं ने खुद को अच्छी तरह से साबित कर दिया है, जो उच्च संवेदनशीलता और काफी उच्च विशिष्टता (पी। एम्ब्रोइज़-थॉमस, 1978; आई। हां। लिसेंको, 1978, आदि)। रीमा की प्रभावशीलता का परीक्षण अमीबियासिस, लीशमैनियासिस, ट्रिपैनोसोमियासिस और टोक्सोप्लाज्मोसिस (जीए एर्मोलिन, 1980) में किया गया है।

अध्याय III। कृमि रोग का निदान और कृमिविज्ञानी अनुसंधान के तरीके

चिकित्सा सहायता प्राप्त करने वाले सभी रोगियों, और विशेष रूप से ऐसे रोगियों की जांच करना आवश्यक है, जो जठरांत्र संबंधी मार्ग, तंत्रिका तंत्र और एनीमिया के साथ घटना की शिकायतों के साथ बाल रोग विशेषज्ञ, इंटर्निस्ट और न्यूरोपैथोलॉजिस्ट की ओर रुख करते हैं। यदि डॉक्टर हमेशा प्रयोगशाला अनुसंधान विधियों को लागू नहीं कर सकता है, तो आउट पेशेंट क्लिनिक या अस्पताल में सहायता प्रदान करने वाला प्रत्येक चिकित्सा कर्मचारी रोगी से हेलमिन्थ्स की रिहाई के बारे में साक्षात्कार करने के लिए बाध्य है।

यदि प्रासंगिक अध्यायों में नैदानिक ​​​​संकेत दिए गए हैं, तो हेलमनिथेसिस के अध्ययन के लिए प्रयोगशाला विधियों का उपयोग करके निदान को स्पष्ट किया जाना चाहिए।

आंतों के हेलमनिथेसिस की प्रबलता के संबंध में, मल का अध्ययन सबसे बड़ा व्यावहारिक महत्व है।

कृमिनाशक मल के अध्ययन के तरीके

मल को साफ कांच के बने पदार्थ में प्रयोगशाला में पहुंचाया जाता है (एक सर्विंग में विभिन्न स्थानों से लिया गया लगभग एक चौथाई कप मल); एक नियमित परीक्षा के दौरान, माचिस या लोकप्रिय प्रिंट में प्रयोगशाला में मल की डिलीवरी की अनुमति है।

डीवर्मिंग को नियंत्रित करने के लिए, एक एंटीहेल्मिन्थिक और रेचक (बड़े बंद कांच के जार, बाल्टी में) लेने के बाद एकत्र किए गए मल के पूरे हिस्से को वितरित किया जाता है (जैसा कि एक डॉक्टर द्वारा निर्धारित किया गया है)।

आंतों के हेलमनिथेसिस के निदान में मल की सूक्ष्म जांच मुख्य है; बड़े सेस्टोड, पिनवॉर्म, राउंडवॉर्म आदि के खंडों का पता लगाने के लिए इसे हमेशा मल की एक सामान्य मैक्रोस्कोपिक परीक्षा से पहले किया जाना चाहिए।

मल ताजा या डिब्बाबंद होना चाहिए (5% फॉर्मेलिन घोल में), क्योंकि सुखाने से अंडों की संरचना में नाटकीय रूप से परिवर्तन होता है। इसके अलावा, मल खड़े होने पर, कुछ कीड़े (उदाहरण के लिए, हुकवर्म) के अंडे तेजी से विकसित होते हैं, जिससे निदान मुश्किल हो जाता है।

यूएसएसआर के स्वास्थ्य मंत्रालय के निर्देशों के अनुसार, फुलबॉर्न विधि और देशी स्मीयर का उपयोग करके एक साथ मल की जांच करना आवश्यक है।

देशी धब्बा

नेटिव स्मीयर: डिलीवर किए गए हिस्से के विभिन्न स्थानों से माचिस, कांच या लकड़ी की छड़ी के साथ लिया गया मल का एक छोटा टुकड़ा (मटर के आकार का) 50% ग्लिसरॉल घोल की एक बूंद में कांच की स्लाइड पर सावधानी से ट्रिट्यूरेट किया जाता है या खारा में, या पानी में। एक कवरस्लिप के साथ कवर करें, बाद वाले को थोड़ा दबाएं (एक विदारक सुई के साथ)। स्मीयर पतला, पारदर्शी और एक समान होना चाहिए। इसका उपयोग केवल अन्य विधियों के अतिरिक्त के रूप में किया जाता है जो दवा को समृद्ध करते हैं। कम से कम दो तैयारियों को देखा जाना चाहिए।

हेल्मिंथ लार्वा (साथ ही उनके अंडे) का पता लगाने के लिए, एक देशी स्मीयर निम्नानुसार किया जाता है (शुलमैन के अनुसार): 2-3 ग्राम मल को एक ग्लास रॉड के साथ पांच बार इमल्शन में "घुमा" करके अच्छी तरह मिलाया जाता है। शुद्ध पानी या खारा की मात्रा। सरगर्मी के दौरान, लार्वा कांच की छड़ पर जमा हो जाते हैं, इसलिए, सरगर्मी के अंत के तुरंत बाद, इमल्शन की एक बूंद को कांच की छड़ के साथ जल्दी से एक कांच की स्लाइड में स्थानांतरित कर दिया जाता है, एक कवरस्लिप के साथ कवर किया जाता है और जांच की जाती है। S. D. Lyubchenko (1936) ने साबित किया कि स्मीयर विधि की तुलना में घुमा विधि अधिक प्रभावी है, विशेष रूप से एस्केरिस अंडे के संबंध में। S. D. Lyubchenko के काम के आधार पर, हम स्मीयर विधि को ट्विस्ट विधि से बदलना उचित समझते हैं।

फुलबोर्न विधि

फुलबॉर्न विधि: विभिन्न स्थानों से लिए गए 5-10 ग्राम मल को 50-100 मिलीलीटर की क्षमता वाले जार में रखा जाता है और सोडियम क्लोराइड के संतृप्त घोल में कांच या लकड़ी की छड़ से अच्छी तरह से ट्रिट्यूरेट किया जाता है (इस नमक का 400 ग्राम घुल जाता है) 1 लीटर पानी में, उबालने के लिए गरम किया जाता है और कपास ऊन या धुंध की एक परत के माध्यम से फ़िल्टर किया जाता है; समाधान ठंडा होता है: विशिष्ट गुरुत्व 1.2)। एक समान निलंबन प्राप्त होने तक घोल को धीरे-धीरे डाला जाता है, और डाले गए घोल की कुल मात्रा मल की मात्रा का लगभग 20 गुना होनी चाहिए। फुलबॉर्न ने मल के मिश्रण के लिए चाय के गिलास के उपयोग की सिफारिश की, लेकिन प्रत्येक विश्लेषण के लिए दो जार (या 100 मिलीलीटर कप में) का उपयोग करके 50-100 मिलीलीटर मरहम जार में निलंबन तैयार करना अधिक सुविधाजनक है।

निलंबन की तैयारी के तुरंत बाद, इसे सतह से एक स्पैटुला, एक धातु स्कूप या साफ कागज के एक टुकड़े के साथ हटा दिया जाता है, बड़े कण जो सतह पर तैरते हैं (पौधे के गठन, अपचित खाद्य अवशेष, आदि), जिसके बाद मिश्रण को 1-1.5 घंटे के लिए खड़े रहने के लिए छोड़ दिया जाता है। इस समय के बाद, पूरी फिल्म को एक तार या प्लैटिनम लूप (फ्लैट) को छूकर मिश्रण की सतह से हटा दिया जाता है, जिसका व्यास 1 सेमी से अधिक नहीं होता है, एक समकोण पर मुड़ा हुआ होता है; फिल्म को कांच की स्लाइड पर हिलाया जाता है और कवरस्लिप से ढक दिया जाता है। प्रत्येक कवरस्लिप (18x18 मिमी) के नीचे 3-4 बूंदें रखें। कुल मिलाकर, कम से कम 4 तैयारी तैयार की जानी चाहिए (प्रत्येक तैयारी के लिए एक कवरस्लिप)। लूप को आग पर शांत किया जाता है और प्रत्येक विश्लेषण के बाद पानी से धोया जाता है।

फुलबॉर्न विधि के अनुसार, सभी नेमाटोड के अंडे (अनफर्टिलाइज्ड राउंडवॉर्म अंडे के अपवाद के साथ) और बौने टैपवार्म अंडे जल्दी और आसानी से पहचाने जाते हैं।

बर्मन विधि का उपयोग हेल्मिंथ लार्वा (स्ट्रांगिलोइडियासिस के साथ) के मल का अध्ययन करने के लिए किया जाता है। यह विधि इस प्रकार है: धातु की जाली पर 5 ग्राम मल (इस उद्देश्य के लिए एक दूध की छलनी सुविधाजनक है) एक तिपाई से जुड़ी कांच की फ़नल पर रखी जाती है। कीप के निचले सिरे पर एक क्लैंप के साथ एक रबर ट्यूब लगाई जाती है।

मल के साथ जाल को ऊपर उठाया जाता है और पानी को लगभग 50 ° तक गर्म करके कीप में डाला जाता है ताकि मल के साथ जाल का निचला हिस्सा पानी में डूब जाए। लार्वा सक्रिय रूप से पानी में चले जाते हैं और रबर ट्यूब के निचले हिस्से में जमा हो जाते हैं। 2-4 घंटों के बाद, क्लैंप खोला जाता है और तरल को एक या दो अपकेंद्रित्र ट्यूबों में उतारा जाता है।

1-2 मिनट के लिए सेंट्रीफ्यूजेशन के बाद, तरल का ऊपरी हिस्सा जल्दी से निकल जाता है, और अवक्षेप को कांच की स्लाइड्स पर बूंदों में लगाया जाता है और कवरस्लिप के नीचे जांचा जाता है या 2-3 बड़ी स्लाइड्स पर एक पतली परत में वितरित किया जाता है और फिर बिना कवरस्लिप के जांच की जाती है।

हुकवर्म लार्वा की उपस्थिति के लिए मिट्टी की जांच के लिए बर्मन विधि का भी उपयोग किया जाता है।

स्टॉल विधि

स्टोल विधि का उपयोग आक्रमण की तीव्रता को निर्धारित करने के लिए किया जाता है। एक डिसीनॉर्मल सोडियम हाइड्रॉक्साइड घोल को एक विशेष ग्लास फ्लास्क में 56 सेमी 3 के निशान तक डाला जाता है, और फिर मल को तब तक जोड़ा जाता है जब तक कि तरल स्तर 60 सेमी 3, यानी 4 सेमी 3 तक न पहुंच जाए। कांच के मोतियों से मिलाने के बाद, मिश्रण के 0.075 मिलीलीटर को जांच के लिए लिया जाता है और एक या दो साधारण कवरस्लिप के तहत जांच की जाती है। मल के 1 सेमी 3 में निहित अंडों की संख्या प्राप्त करने के लिए परिणामी राशि को 200 से गुणा किया जाता है।

ग्रहणी सामग्री का अध्ययन

जांच (और सिस्टिक पित्त और पित्ताशय की थैली से एक पलटा के बाद) द्वारा सामान्य तरीके से प्राप्त डुओडेनल रस और सिस्टिक पित्त, एथिल ईथर की बराबर मात्रा के साथ अच्छी तरह मिश्रित होते हैं; मिश्रण को सेंट्रीफ्यूज किया जाता है, जिसके बाद एक माइक्रोस्कोप के तहत अवक्षेप की जांच की जाती है। तलछट के अलावा, तरल में तैरते हुए गुच्छे, जिनमें कृमि के अंडे हो सकते हैं, को सूक्ष्म परीक्षा के अधीन किया जाना चाहिए। गैस्ट्रिक जूस और उल्टी के हेल्मिन्थ्स के अंडों की जांच करते समय, आप उसी तकनीक का उपयोग कर सकते हैं।

यदि जिगर, पित्ताशय की थैली (opisthorchiasis, fascioliasis, dicroceliasis) और ग्रहणी (स्ट्रॉन्गिलोडायसिस) के हेल्मिंथिक रोगों का संदेह है, तो ग्रहणी के रस और पेट की सामग्री की जांच की जानी चाहिए।

थूक परीक्षा

थूक को एक कांच की प्लेट पर रगड़ा जाता है, एक अन्य कांच की प्लेट से कसकर कवर किया जाता है और एक हल्के और काले रंग की पृष्ठभूमि पर नग्न आंखों से जांच की जाती है, साथ ही संचरित प्रकाश में एक आवर्धक कांच के नीचे। थूक के अलग-अलग टुकड़े ("जंग खाए" संचय, ऊतक के स्क्रैप, आदि) एक कांच की स्लाइड पर एक पतली परत में लगाए जाते हैं, कसकर कवरस्लिप के साथ कवर किया जाता है और निम्न और उच्च आवर्धन माइक्रोस्कोप पर जांच की जाती है।

ए) त्वचा, चमड़े के नीचे के ऊतक या मांसपेशियों के सिस्टीसर्कोसिस के निदान के लिए, पहले नग्न आंखों से संबंधित ऊतक के एक असमान रूप से कटे हुए टुकड़े की जांच की जाती है। नग्न आंखों को दिखाई देने वाले पुटिका का पता लगाने के लिए ऊतक वर्गों को विदारक सुइयों की मदद से अलग किया जाता है - एक सिस्टीसर्कस (फोटो ए); इसकी लंबाई 6-20 मिमी, चौड़ाई 5-10 मिमी है। जब एक बुलबुला पाया जाता है जिसमें सिस्टीसर्कस का संदेह होता है, तो इसे दो कांच की स्लाइडों के बीच कुचल दिया जाता है और एक माइक्रोस्कोप के तहत जांच की जाती है। Cysticercus (Cistycercus cellulosae) चार चूसने वाले और हुक के एक प्रभामंडल (फोटो B) के साथ एक स्कोलेक्स की उपस्थिति से निर्धारित होता है।

एक छवि।ए - स्कोलेक्स के साथ सिस्टिकिक बाहर की ओर निकला; बी - सूअर का मांस टैपवार्म का सिर।

बी) ट्राइकिनोसिस का निदान करने के लिए, मांसपेशियों के एक असमान रूप से कटे हुए टुकड़े (बाइसेप्स या गैस्ट्रोकेनमियस) को 50% ग्लिसरॉल घोल में सावधानीपूर्वक कुचल दिया जाता है ताकि विदारक सुइयों का उपयोग करके सबसे पतले तंतुओं में जा सकें। कुचली हुई मांसपेशियों को दो कांच की स्लाइडों के बीच निचोड़ा जाता है और देखने के अंधेरे क्षेत्र में माइक्रोस्कोप के कम आवर्धन पर जांच की जाती है। ट्राइकिनोसिस के लिए मांसपेशियों की जांच बीमारी के 8 वें दिन से पहले नहीं करने की सलाह दी जाती है। त्रिचिनेला लार्वा मांसपेशियों में एक कुंडलित स्थिति में होते हैं: वे नींबू के आकार के कैप्सूल में संलग्न होते हैं।

एक छवि।ए - मांसपेशियों में त्रिचिनेला लार्वा; बी - त्रिचिनेला के कैल्सीफाइड कैप्सूल।

प्रतिदीप्तिदर्शन

सबसे अधिक बार, फ्लोरोस्कोपी का उपयोग इचिनोकोकोसिस के निदान के लिए किया जाता है और, कम अक्सर, सिस्टिकिकोसिस। कैल्सीफिकेशन (लंबी बीमारी के मामलों में) के बाद ही फ्लोरोस्कोपी पर सिस्टिकेरसी पाए जाते हैं। हाल के वर्षों में, फ्लोरोस्कोपी का उपयोग प्रारंभिक लार्वा चरण में और आंशिक रूप से आंतों के चरण में एस्कारियासिस के निदान के लिए भी किया गया है।

फेफड़ों में एस्केरिस लार्वा (और हुकवर्म) के प्रवास की अवधि के दौरान, अस्थिर, कभी-कभी कई भड़काऊ फॉसी पाए जाते हैं; उसी समय, रक्त में महत्वपूर्ण ईोसिनोफिलिया प्रकट होता है।

प्रभावित व्यक्तियों की आंतों की फ्लोरोस्कोपी पर यौन रूप से परिपक्व राउंडवॉर्म स्पष्ट रूप से दिखाई देते हैं। यह विधि, इसकी जटिलता और बोझिलता के बावजूद, नकारात्मक स्कैटोलॉजिकल विश्लेषण वाले मामलों में एस्कारियासिस के निदान के लिए एक अतिरिक्त विधि के रूप में उपयोग की जानी चाहिए। ईएस गेसेलेविच के अनुसार, फ्लोरोस्कोपी द्वारा पहचाने गए एस्कारियासिस वाले 180 रोगियों में से 54 एस्केरिस अंडे मल में नहीं पाए गए (देखें)।

हेल्मिन्थोलॉजिकल अनुसंधान के तरीके. हेल्मिन्थेसिस के निदान के तरीकों को प्रत्यक्ष रूप से विभाजित किया जाता है, जो स्वयं या उनके टुकड़ों के साथ-साथ लार्वा और हेलमन्थ्स के अंडे (मल, मूत्र, पित्त और ग्रहणी सामग्री, थूक, रक्त और ऊतकों की जांच करने के तरीके) के प्रत्यक्ष पता लगाने के आधार पर होते हैं। पेरिअनल क्षेत्र और उपनगरीय रिक्त स्थान से स्क्रैपिंग द्वारा प्राप्त सामग्री), और अप्रत्यक्ष, जो मानव शरीर में होने वाले माध्यमिक परिवर्तनों को प्रकट करता है जो कि हेलमिन्थ्स की गतिविधि के परिणामस्वरूप होता है (रक्त की रूपात्मक संरचना का अध्ययन, हेल्मिंथियासिस के निदान के लिए प्रतिरक्षाविज्ञानी तरीके, एक्स-रे अध्ययन, आदि)। प्रत्यक्ष तरीकों में से, सबसे आम कॉप्रोलॉजिकल हैं, जिन्हें मैक्रो- और माइक्रोहेल्मिन्थोस्कोपी में विभाजित किया गया है। कुछ मामलों में, विशेष तरीकों का उपयोग किया जाता है।

मैक्रोजेल्मिटोस्कोपी अनुसंधान के तरीकेहेलमिन्थ्स या उनके टुकड़ों (स्कोलेक्स, सेगमेंट, सेस्टोड के स्ट्रोबिला के कुछ हिस्सों) की खोज के उद्देश्य से। उनका उपयोग उन हेलमनिथेसिस का निदान करने के लिए किया जाता है जिसमें अंडे रोगी के मलमूत्र के साथ उत्सर्जित नहीं होते हैं या थोड़ी मात्रा में उत्सर्जित होते हैं और हमेशा नहीं (उदाहरण के लिए, एंटरोबियासिस के साथ, पिनवॉर्म मल में पाए जाते हैं, टेनिडोज़, सेगमेंट के साथ)।

मल में पिनवॉर्म या सेस्टोड के खंडों का पता लगाने के लिए, मल को नग्न आंखों से देखा जाता है। टेनिडोज के विभेदक निदान के लिए, काले फोटोग्राफिक क्यूवेट्स में या पेट्री डिश में एक गहरे रंग की पृष्ठभूमि के खिलाफ अलग-अलग छोटे भागों में पानी से पतला मल देखने की सिफारिश की जाती है। दो कांच की स्लाइडों के बीच एक आवर्धक कांच के नीचे हेलमिन्थ के टुकड़ों की संदिग्ध बड़ी संरचनाओं की जांच की जाती है। यदि, नैदानिक ​​​​संकेतों के अनुसार, उपचार के बाद छोटे कृमि या सेस्टोड सिर का पता लगाने का सुझाव दिया जाता है, तो संदिग्ध कणों की जांच एक आवर्धक कांच के नीचे ग्लिसरॉल की एक बूंद में की जाती है, और यदि आवश्यक हो, तो एक माइक्रोस्कोप के तहत की जाती है।

माइक्रोहेल्मिन्थोस्कोपी अनुसंधान के तरीके(गुणात्मक) का उद्देश्य हेल्मिन्थ के अंडे और लार्वा की पहचान करना है। काटो के अनुसार सिलोफ़न कवर प्लेट के साथ थिक स्मीयर विधि लागू करें। काटो मिश्रण में 6 . होते हैं एमएलमैलाकाइट ग्रीन का 3% जलीय घोल, 500 एमएलग्लिसरीन और 500 एमएल 6% फिनोल समाधान। काटो प्लेट्स (हाइड्रोफिलिक सिलोफ़न 20´ 40 . टुकड़ों में कटा हुआ) मिमी) 24 . पर डूबे हुए हैं एचकाटो मिश्रण में डालें ताकि वे एक दूसरे के निकट हों (3-5 .) एमएल 100 प्लेटों के लिए काटो का घोल)। 100 मिलीग्राममल को कांच की स्लाइड पर लगाया जाता है, काटो के अनुसार सिलोफ़न कवर प्लेट के साथ कवर किया जाता है और नीचे दबाया जाता है ताकि सिलोफ़न प्लेट के भीतर कांच की स्लाइड पर मल को लिप्त किया जाए। स्मीयर को कमरे के तापमान पर 40-50 . तक स्पष्टीकरण के लिए छोड़ दिया जाता है मिनट,और फिर माइक्रोस्कोप के नीचे देखा। गर्म मौसम में, तैयारी को सूखने से बचाने के लिए, तैयार तैयारी की प्लेट पर एक नम स्पंज रखा जाता है।

सभी प्रकार के कृमि का पूर्ण रूप से पता लगाने के लिए, काटो सिलोफ़न कवर प्लेट थिक स्मीयर विधि का उपयोग संवर्धन विधियों में से एक के साथ संयोजन में किया जाना चाहिए। इनमें से सबसे आम हैं कलंतरीयन विधि और फुलबॉर्न विधि।

कलंतरीयन विधि: 100 . की चौड़ी गर्दन वाले फ्लास्क में एमएलकांच की छड़ से अच्छी तरह हिलाएं 5 जीमल, धीरे-धीरे सोडियम नाइट्रेट का एक संतृप्त समाधान जोड़ना (1 किलोग्रामसोडियम नाइट्रेट प्रति 1 मैंपानी उबालते समय) गिलास के रिम तक। सतह पर तैरने वाले बड़े कणों को पेपर स्कूप से हटा दिया जाता है। खारा घोल की सतह पर एक कांच की स्लाइड लगाई जाती है (खारा घोल तब तक मिलाया जाता है जब तक कि मिश्रण कांच की स्लाइड के पूर्ण संपर्क में न हो जाए)। 20-30 . के बाद मिनटकांच की स्लाइड को हटा दिया जाता है और फिल्म को माइक्रोस्कोप के नीचे देखा जाता है। इस नमक की अनुपस्थिति में, आप फोलेबॉर्न (400 .) के अनुसार टेबल नमक के संतृप्त घोल का उपयोग कर सकते हैं जी 1 . में नमक मैंउबलता पानी)।

इस तथ्य के कारण कि एक बड़े विशिष्ट गुरुत्व वाले अंडे (एस्केरिड्स के निषेचित अंडे, कंपकंपी के अंडे और बड़े सेस्टोड) तैरते नहीं हैं, तरल की सतह परत की जांच करने के अलावा, फुलबॉर्न विधि का उपयोग करते समय, यह देखना आवश्यक है माइक्रोस्कोप के तहत तलछट से 2-4 तैयारी।

विभिन्न हेलमनिथेसिस के लिए विशेष प्रयोगशाला अनुसंधान विधियां।

7.7. कृमि के अंडों और लार्वा की व्यवहार्यता का निर्धारण करने के तरीके

हेल्मिंथ अंडे की व्यवहार्यता उनकी उपस्थिति से, महत्वपूर्ण रंगों के साथ धुंधला होकर, इष्टतम परिस्थितियों में खेती करके और एक जैविक नमूना स्थापित करके निर्धारित की जाती है।

7.7.1. उपस्थिति से अंडे या हेलमिन्थ के लार्वा की व्यवहार्यता का निर्धारण

हेल्मिंथ के अंडों को पहले कम आवर्धन पर, फिर उच्च आवर्धन पर सूक्ष्मदर्शी किया जाता है। हेल्मिन्थ के विकृत और मृत अंडों में, खोल फटा हुआ या अंदर की ओर मुड़ा हुआ होता है, प्लाज्मा बादलदार, ढीला होता है। खंडित अंडों में, दरार वाली गेंदें (ब्लास्टोमेरेस) आकार में असमान होती हैं, आकार में अनियमित होती हैं, और अक्सर एक ध्रुव पर स्थानांतरित हो जाती हैं। कभी-कभी असामान्य अंडे होते हैं, जो बाहरी विकृति होने पर सामान्य रूप से विकसित होते हैं। राउंडवॉर्म के जीवित लार्वा में, बारीक दानेदारता केवल शरीर के मध्य भाग में मौजूद होती है, जैसे ही वे मरते हैं, यह पूरे शरीर में फैल जाती है, बड़े चमकदार हाइलिन रिक्तिकाएं दिखाई देती हैं, तथाकथित "मोती के तार"।

एस्केरिड्स, व्हिपवर्म, पिनवॉर्म के परिपक्व अंडों की व्यवहार्यता निर्धारित करने के लिए, लार्वा के सक्रिय आंदोलनों को तैयारी को थोड़ा गर्म करने (37 डिग्री सेल्सियस से अधिक नहीं के तापमान पर) के कारण होना चाहिए। एक विदारक सुई या चिमटी के साथ तैयारी के कवर ग्लास पर दबाकर अंडे के खोल से अलग होने के बाद एस्केरिस और व्हिपवर्म लार्वा की व्यवहार्यता का निरीक्षण करना अधिक सुविधाजनक होता है।

एस्केरिड्स के आक्रामक लार्वा में, एक टोपी अक्सर देखी जाती है जो सिर के अंत में छूट जाती है, और अंडे में विकास पूरा करने वाले व्हिपवर्म के लार्वा में, इस जगह पर उच्च आवर्धन पर एक स्टाइललेट पाया जाता है। हेल्मिंथ के मृत लार्वा, उनके स्थान की परवाह किए बिना (अंडे में या उसके बाहर), शरीर के क्षय को नोटिस करते हैं। इस मामले में, लार्वा की आंतरिक संरचना ढेलेदार या दानेदार हो जाती है, और शरीर बादल और अपारदर्शी हो जाता है। शरीर में रिक्तिकाएँ पाई जाती हैं, और छल्ली पर विराम पाए जाते हैं।

टेनिड ओंकोस्फीयर (गोजातीय, पोर्सिन टैपवार्म, आदि) की व्यवहार्यता भ्रूण की गति से निर्धारित होती है जब वे पाचन एंजाइमों के संपर्क में आते हैं। अंडों को कुत्ते के गैस्ट्रिक जूस या कृत्रिम ग्रहणी के रस के साथ वॉच ग्लास पर रखा जाता है। उत्तरार्द्ध की संरचना: अग्नाशय - 0.5 ग्राम, सोडियम बाइकार्बोनेट - 0.09 ग्राम, आसुत जल - 5 मिली। अंडे के साथ घड़ी के चश्मे को थर्मोस्टैट में 36 - 38 डिग्री सेल्सियस पर 4 घंटे के लिए रखा जाता है। इस मामले में, जीवित भ्रूण झिल्लियों से मुक्त हो जाते हैं। जीवित ओंकोस्फीयर के गोले भी अम्लीकृत पेप्सिन में और ट्रिप्सिन के एक क्षारीय घोल में 6-8 घंटे के बाद थर्मोस्टैट में 38 डिग्री सेल्सियस पर घुल जाते हैं।

यदि टेनिड अंडे को सोडियम सल्फाइड के 1% घोल या सोडियम हाइपोक्लोराइट के 20% घोल में, या क्लोरीन पानी के 1% घोल में 36 - 38 ° C पर रखा जाता है, तो परिपक्व और जीवित भ्रूण को खोल से मुक्त किया जाता है और नहीं 1 दिन के दौरान बदलें। अपरिपक्व और मृत ओंकोस्फीयर सिकुड़ते या सूज जाते हैं और नाटकीय रूप से बढ़ जाते हैं और फिर 10 मिनट से 2 घंटे के भीतर "विघटित" हो जाते हैं। टेनिड्स के जीवित भ्रूण भी सक्रिय रूप से 1% सोडियम क्लोराइड घोल, 0.5% सोडियम बाइकार्बोनेट घोल और पित्त के मिश्रण में 36 - 38 ° C पर सक्रिय रूप से चलते हैं।

पौधों और जल निकायों की अन्य वस्तुओं से एकत्र किए गए प्रावरणी एडोल्सेरिया की व्यवहार्यता की जाँच एक माइक्रोस्कोप के तहत एक हीटिंग चरण के साथ खारा में कांच की स्लाइड पर उनकी जांच करके की जाती है। गर्म होने पर, सिस्ट में ट्रेमेटोड लार्वा हिलने लगता है।

पिग्मी टैपवार्म के अंडों की व्यवहार्यता निर्धारित करने के लिए, आयोनिना एनएस की विधि सबसे सरल है: जीवित अंडों में, भ्रूण के हुक की औसत जोड़ी या तो पार्श्व वाले के समानांतर होती है, या बाद वाले कम के आधार पर एक कोण बनाते हैं। माध्यिका के साथ 45 ° से अधिक। मृत अंडों में, पार्श्व जोड़े 45 ° से अधिक की औसत जोड़ी के साथ आधार पर एक कोण बनाते हैं, या हुक बेतरतीब ढंग से बिखरे हुए होते हैं (उनकी युग्मित व्यवस्था खो जाती है); कभी-कभी भ्रूण की झुर्रियां होती हैं, ग्रैन्युलैरिटी का निर्माण होता है। तापमान में तेज बदलाव के दौरान ऑन्कोस्फीयर के आंदोलनों की उपस्थिति पर एक अधिक सटीक विधि आधारित है: 5 - 10 ° से 38 - 40 ° C तक।

अपरिपक्व निमेटोड अंडों की व्यवहार्यता का निर्धारण एक आर्द्र कक्ष (पेट्री डिश) में किया जाना चाहिए, एस्केरिस अंडे को 3% फॉर्मेलिन घोल में एक आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड घोल में 24-30 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर तैयार किया जाना चाहिए, व्हिपवर्म अंडे को 3 में रखा जाना चाहिए। 30% - 35 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर% हाइड्रोक्लोरिक एसिड समाधान; 37 डिग्री सेल्सियस पर आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड समाधान में पिनवॉर्म अंडे। बेहतर वातन के लिए पेट्री डिश को सप्ताह में 1 से 2 बार खोलना चाहिए और फिल्टर पेपर को फिर से साफ पानी से गीला करना चाहिए।

सप्ताह में कम से कम 2 बार हेल्मिंथ अंडे के विकास का अवलोकन किया जाता है। 2-3 महीनों के भीतर विकास के संकेतों की अनुपस्थिति उनकी गैर-व्यवहार्यता को इंगित करती है। हेल्मिंथ अंडे के विकास के संकेत पहले कुचलने के चरण हैं, अंडे की सामग्री को अलग-अलग ब्लास्टोमेरेस में विभाजित करना। पहले दिनों के दौरान, 16 ब्लास्टोमेरेस विकसित होते हैं, जो दूसरे चरण में गुजरते हैं - मोरुला, आदि।

हुकवर्म के अंडों को एक डाट से बंद कांच के सिलेंडर (50 सेमी ऊंचे और 7 सेमी व्यास) में सुसंस्कृत किया जाता है। एक अर्ध-तरल स्थिरता के लिए पानी से पतला हुकवर्म अंडे के साथ बाँझ रेत, लकड़ी का कोयला और मल के बराबर मात्रा का मिश्रण, एक ग्लास ट्यूब का उपयोग करके सिलेंडर के नीचे सावधानी से डाला जाता है। 25 - 30 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर अंधेरे में बसने के 1 - 2 दिनों के दौरान, अंडों से रेबडिटॉइड लार्वा निकलता है, और 5-7 दिनों के बाद वे पहले से ही फाइलेरिफॉर्म बन जाते हैं: लार्वा सिलेंडर की दीवारों को रेंगते हैं, जहां वे नग्न आंखों से भी दिखाई दे रहे हैं।

ट्रेमेटोड अंडे जो स्वाभाविक रूप से पानी में विकसित होते हैं, जैसे कि ओपिसथोर्चिस, डिपाइलोबोथ्रिड्स, फासिओल्स, और अन्य, वॉच ग्लास, पेट्री डिश या किसी अन्य बर्तन में रखे जाते हैं, और साधारण पानी की एक छोटी परत डाली जाती है। फासीओला अंडे की खेती करते समय, यह ध्यान में रखा जाना चाहिए कि वे अंधेरे में तेजी से विकसित होते हैं, जबकि मिरेसिडियम 9-12 दिनों के बाद 22-24 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर जीवित अंडों में बनता है। जब कंपकंपी के अंडे विकसित करने की माइक्रोस्कोपी की जाती है, तो मिरासिडियम मूवमेंट स्पष्ट रूप से दिखाई देते हैं। फासिओला मिरासिडियम अंडे के छिलकों से केवल प्रकाश में ही निकलता है।

फुलबॉर्न विधि। पशु चारकोल के साथ पेट्री डिश में अगर पर हुकवर्म और स्ट्रॉन्गिलिड लार्वा की खेती की जाती है। थर्मोस्टेट में 25 - 30 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर 5-6 घंटे तक रखने के बाद, लार्वा बैक्टीरिया के रास्ते को पीछे छोड़ते हुए अगर पर फैल गया।

हरदा और मोरी की विधि। एक रैक में रखी परखनलियों में 7 मिली आसुत जल मिलाया जाता है। एक लकड़ी की छड़ी के साथ 0.5 ग्राम मल लें और बाएं किनारे से फिल्टर पेपर (15 x 150 मिमी) 5 सेमी पर एक धब्बा बनाएं (यह ऑपरेशन प्रयोगशाला की मेज की सतह की रक्षा के लिए कागज की एक शीट पर किया जाता है)। फिर स्मीयर वाली पट्टी को ट्यूब में डाला जाता है ताकि स्मीयर से मुक्त बायां सिरा ट्यूब के नीचे तक पहुंच जाए। सिलोफ़न के एक टुकड़े के साथ ऊपरी छोर को कवर करें और इसे एक लोचदार बैंड के साथ कसकर लपेटें। टेस्ट ट्यूब पर नंबर, विषय का नाम लिखें। इस अवस्था में, परखनलियों को 28 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर 8-10 दिनों के लिए संग्रहित किया जाता है। लार्वा का अध्ययन करने के लिए, सिलोफ़न कवर को हटा दें और हटा दें और चिमटी के साथ फिल्टर पेपर की एक पट्टी हटा दें। इस मामले में सावधानी बरती जानी चाहिए, क्योंकि कम संख्या में संक्रमित लार्वा फिल्टर पेपर के ऊपरी सिरे या परखनली की दीवार तक जा सकते हैं और सिलोफ़न की सतह के नीचे घुस सकते हैं।

ट्यूबों को 15 मिनट के लिए 50 डिग्री सेल्सियस पर गर्म पानी के स्नान में रखा जाता है, जिसके बाद सामग्री हिल जाती है और जल्दी से 15 मिलीलीटर लार्वा अवसादन ट्यूब में डाल दी जाती है। सेंट्रीफ्यूजेशन के बाद, सतह पर तैरनेवाला हटा दिया जाता है, और अवक्षेप को एक कांच की स्लाइड में स्थानांतरित कर दिया जाता है, एक कवरस्लिप के साथ कवर किया जाता है और कम आवर्धन के तहत सूक्ष्मदर्शी किया जाता है।

फाइलेरिफॉर्म लार्वा के विभेदक निदान के लिए, तालिका 3 में डेटा का उपयोग करना आवश्यक है।

टेबल तीन

ए। डुओडेनेल, एन। अमेरिकन, एस। स्टेरकोरेलिस, ट्राइकोस्ट्रोंगाइलस एसपी के filariated लार्वा के विभेदक निदान।

लार्वा	आयाम	विशेषणिक विशेषताएं
ए. ग्रहणी	शरीर की लंबाई लगभग 660 माइक्रोन, टोपी - 720 एनएम	टोपी की पट्टी कम स्पष्ट होती है, मुंह का फलाव कम ध्यान देने योग्य होता है, शरीर का अग्र भाग (लेकिन टोपी नहीं) कुंद होता है, आंतों की नली का व्यास ग्रासनली के बल्ब से छोटा होता है, दुम का अंत कुंद होता है
एन. अमेरिकन	शरीर की लंबाई लगभग 590 माइक्रोन, टोपी - 660 एनएम	म्यान स्पष्ट रूप से धारीदार है, विशेष रूप से शरीर के दुम भाग में, मुंह का प्रक्षेपण अंधेरा लगता है, शरीर का पूर्वकाल अंत (लेकिन म्यान नहीं) एक मुर्गी के अंडे के संकीर्ण छोर की तरह गोल होता है, आंतों का पूर्वकाल भाग ट्यूब इस तरह के व्यास का होता है जैसे एसोफेजल बल्ब, दुम का अंत तेज होता है
एस. स्टेरकोरेलिस	शरीर की लंबाई लगभग 500 µm	म्यान के बिना लार्वा, घेघा शरीर की लगभग आधी लंबाई है, पूंछ कुंद या शाखित है
ट्राइकोस्ट्रॉन्गिलस सपा।	शरीर की लंबाई लगभग 750 माइक्रोन	आंतों का लुमेन सीधा नहीं होता है, लेकिन ज़िगज़ैग, दुम का अंत गोल होता है और इसमें एक बटन का आकार होता है

7.7.2. अंडे और हेलमन्थ्स के लार्वा को धुंधला करने के तरीके

ज्यादातर मामलों में मृत ऊतक जीवित लोगों की तुलना में रंगों को तेजी से समझते हैं। इन विशेषताओं का उपयोग हेल्मिन्थोलॉजी में अंडे की व्यवहार्यता और हेलमिन्थ के लार्वा को निर्धारित करने के लिए किया जाता है। हालांकि, कुछ मामलों में, कुछ पेंट को मृत ऊतकों की तुलना में जीवित ऊतकों द्वारा बेहतर माना जाता है।

जीवित और मृत अंडों और लार्वा के विभेदक निर्धारण के लिए, निम्नलिखित पेंट और विधियों का उपयोग किया जाता है।

मेथिलीन ब्लू ल्यूकोबेस का उपयोग अक्सर जीवित और मृत ऊतक को दागने के लिए किया जाता है। एक जीवित कोशिका या ऊतक मेथिलीन ब्लू को एक रंगहीन ल्यूकोबेस में कम कर देता है; मृत ऊतक में यह क्षमता नहीं होती है, और इसलिए एक रंग प्राप्त करता है।

अंडे की स्थिति के लिए मानदंड भ्रूण का धुंधलापन है, लेकिन खोल नहीं। यह क्षमता अंडे की मृत्यु की स्थितियों से संबंधित है। उन मामलों में जहां मृत अंडे में रेशेदार खोल अपने अर्ध-पारगम्य गुणों को नहीं खोता है, यह रंगों को पारित नहीं करेगा, इसलिए, मृत भ्रूण दाग नहीं होगा। एक रंगीन भ्रूण हमेशा अंडे की मृत्यु का संकेत देता है।

एस्केरिस अंडे को रंगने के लिए, आप कास्टिक क्षार (मिथाइलीन ब्लू 0.05 ग्राम, कास्टिक सोडा 0.5 ग्राम, लैक्टिक एसिड - 15 मिली) के साथ लैक्टिक एसिड के घोल में मेथिलीन ब्लू का उपयोग कर सकते हैं। जीवित अंडे रंग नहीं समझते हैं; मृत अंडों के भ्रूण नीले हो जाते हैं। एस्केरिस लार्वा को 1:10,000 की सांद्रता में ब्रिलियंट-क्रेसिल ब्लू पेंट के मूल समाधान के साथ दाग दिया जाता है: एस्केरिस अंडे के साथ तरल की एक बूंद और मूल पेंट समाधान की एक बूंद कांच की स्लाइड पर लागू होती है। तैयारी को एक कवरस्लिप के साथ कवर किया जाता है, जिसे एक विदारक सुई के साथ हल्के टैपिंग के साथ कांच की स्लाइड के खिलाफ कसकर दबाया जाता है। माइक्रोस्कोप के तहत, रची हुई लार्वा की संख्या और उनके धुंधला होने की डिग्री देखी जाती है; जिसके बाद 2 से 3 घंटे के बाद फिर से उसी दवा की समीक्षा की जाती है। केवल विकृत लार्वा जो 2 घंटे तक दाग नहीं करते हैं उन्हें जीवित माना जाता है। मृत लार्वा या तो अंडों से नहीं निकलते हैं, या खोल के टूटने पर (आंशिक रूप से या पूरी तरह से) दाग लग जाते हैं।

पक्षियों के एस्केरिडिया अंडे की व्यवहार्यता का निर्धारण करते समय, आयोडीन के 5% अल्कोहल समाधान के साथ तैयारी को दागना संभव है। जब यह दवा पर लगाया जाता है, तो मृत एस्केरिड अंडे के भ्रूण 1 - 3 सेकंड के लिए। नारंगी रंगे हैं।

opisthorchis के मृत अंडे और गोजातीय टैपवार्म के ओंकोस्फीयर को टोल्यूडीन ब्लू (1:1000) के घोल से दाग दिया जाता है, और गोजातीय टैपवार्म के मृत ओंकोस्फीयर को ब्रिलियंट-क्रेसिल ब्लू (1:10000) के घोल से दाग दिया जाता है। इसी समय, मृत और जीवित दोनों अंडों के भ्रूण और गोले रंग प्राप्त कर लेते हैं। इसलिए, धुंधला होने के बाद, अंडे और ओंकोस्फीयर को शुद्ध पानी में धोया जाता है और इसके अलावा सफ़्रानिन (1:10,000 अल्कोहल, 10 डिग्री सेल्सियस के कमजोर पड़ने पर) के साथ दाग दिया जाता है। अल्कोहल गोले से डाई को हटा देता है, और सेफ्रेनिन लाल हो जाता है। नतीजतन, जीवित अंडे लाल हो जाते हैं; मृत भ्रूण वाले अंडे - नीले रंग में, और खोल लाल रहता है। गोजातीय टैपवार्म के ओंकोस्फीयर के मृत भ्रूण जल्दी से, कुछ ही मिनटों के भीतर, 1: 4000 के कमजोर पड़ने पर चमकदार लाल या गुलाबी रंग के सफ्रानिन या नीले रंग के साथ चमकदार-क्रेसिल नीले रंग के होते हैं, या इंडिगो कारमाइन के साथ 1: 1000 - 1 के कमजोर पड़ने पर होते हैं। :2000. इन रंगों के प्रभाव में जीवित भ्रूण 2-7 घंटे के बाद भी नहीं बदलते हैं।

पिग्मी टैपवार्म अंडे की व्यवहार्यता निर्धारित करने के लिए, निम्नलिखित पेंट का उपयोग करने की अनुशंसा की जाती है:

1. शानदार क्रेसिल ब्लू (1:8000) - 1 घंटे के बाद, मृत अंडों का ओंकोस्फीयर विशेष रूप से चमकीले रंग का होता है, जो बाकी अंडे की पीली या रंगहीन पृष्ठभूमि के खिलाफ तेजी से खड़ा होता है।

2. सफ्रानिन (2 घंटे के लिए 1:8000 और 3 से 5 घंटे के लिए 1:5000)।

3. 1:2 कमजोर पड़ने पर पाइरोगलिक एसिड का 50% घोल - जब 29 - 30 ° C (तापमान जितना कम, धुंधला होने की प्रक्रिया) के तापमान पर 1 घंटे के लिए उजागर किया जाए।

7.7.3. कृमि के अंडों और लार्वा के अध्ययन के लिए ल्यूमिनसेंट विधि

फ्लोरोसेंट माइक्रोस्कोपी से अंडे को नुकसान पहुंचाए बिना जीवित और मृत वस्तुओं में अंतर करना संभव हो जाता है। प्रतिदीप्ति के लिए, पराबैंगनी किरणों का उपयोग नहीं किया जाता है, लेकिन एक पारंपरिक माइक्रोस्कोप और कांच की स्लाइड के साथ दृश्य प्रकाश के नीले-बैंगनी भाग का उपयोग किया जाता है; रंग फिल्टर का एक विशेष सेट OI-18 प्रकाशक में जोड़ा जाता है।

राउंडवॉर्म, पिनवॉर्म, पिग्मी टैपवार्म, गोजातीय टैपवार्म, टैपवार्म और अन्य हेल्मिन्थ के जीवित और मृत अंडे अलग-अलग तरह से चमकते हैं। यह घटना रंगों के उपयोग के बिना प्राथमिक ल्यूमिनेसेंस के दौरान और फ्लोरोक्रोमेस (एक्रिडीन ऑरेंज, कोरिफोस्फीन, प्रिमुलिन, ऑरोलिन, बेरलेरिन सल्फेट, ट्रिपाफ्लेविन, रिवानोल, क्विनाक्राइन, आदि) के साथ दागने पर दोनों में देखी जाती है।

बिना दाग वाले, जीवित गैर-खंडित राउंडवॉर्म अंडे पीले रंग के रंग के साथ चमकीले हरे रंग में चमकते हैं; मृत अंडों में, खोल गहरे हरे रंग के भ्रूणीय भाग की तुलना में अधिक चमकीला हरा प्रकाश उत्सर्जित करता है; राउंडवॉर्म के अंडों में लार्वा के साथ केवल खोल दिखाई देता है, जबकि मृत में, खोल और लार्वा दोनों चमकीले पीले रंग के होते हैं।

पिनवॉर्म और बौने टैपवार्म के गैर-रंजित और गैर-खंडित जीवित अंडे एक हरे-पीले प्रकाश का उत्सर्जन करते हैं; मृत अंडों में, खोल गहरे हरे रंग के भ्रूण द्रव्यमान की पृष्ठभूमि के खिलाफ तीव्रता से चमकता है।

द्वितीयक ल्यूमिनेसेंस के साथ (जब 30 मिनट से 2 घंटे तक 1:10000 और 1:50000 के कमजोर पड़ने पर एक्रिडीन नारंगी धुंधला हो जाता है), जीवित और मृत नेमाटोड, कंपकंपी और सेस्टोड का खोल अलग तरह से चमकता है।

एस्केरिड्स, टोक्सोकार, पिनवॉर्म, पिग्मी टैपवार्म, रैट टैपवार्म, बुल टैपवार्म, टैपवार्म के जीवित और मृत अंडों का खोल नारंगी-लाल हो जाता है। एस्केरिस, टोक्सास्करिस, रैट टैपवार्म, वाइड टैपवार्म और गोजातीय टैपवार्म के ओंकोस्फीयर के जीवित अंडों के भ्रूण एक सुस्त गहरे हरे या भूरे-हरे रंग में होते हैं। इन कृमियों के अंडों के मृत भ्रूण एक "जलते हुए" नारंगी-लाल रंग का उत्सर्जन करते हैं। जीवित पिनवॉर्म लार्वा और टॉक्सोकार्स (अंडे के छिलके) एक सुस्त ग्रे-हरे रंग की रोशनी का उत्सर्जन करते हैं, जब वे मर जाते हैं, तो रंग सिर के अंत से "जलते हुए" हल्के हरे, फिर पीले, नारंगी और अंत में चमकीले नारंगी में बदल जाता है।

जब फ्लोरोक्रोमेस के साथ दाग दिया जाता है - कोरिफोस्फिलम, प्रिमुलिन, एस्केरिड्स और व्हिपवर्म के मृत अंडे बकाइन-पीले से तांबे-लाल तक एक चमक दिखाते हैं। व्यवहार्य अंडे चमकते नहीं हैं, लेकिन गहरे हरे रंग में बदल जाते हैं।

ट्रेमेटोड्स (पैरागोनिमस और क्लोनोर्चिस) के जीवित अंडे एक्रिडीन नारंगी के साथ धुंधला होने के बाद नहीं चमकते हैं, और पीले-हरे रंग का रंग मृत अंडों से आता है।

ल्यूमिनेसेंस विधि का उपयोग हेल्मिंथ लार्वा की व्यवहार्यता को निर्धारित करने के लिए भी किया जा सकता है। तो, फ्लोरोक्रोमाइज्ड एसिडिन ऑरेंज (1:2000) लार्वा ऑफ स्ट्रांगाइलेट, रबदिता ग्लो: लाइव - ग्रीन (एक टिंट के साथ), डेड - ब्राइट ऑरेंज लाइट के घोल के साथ।

जीवित मिरेसिडिया जो खोल से निकले हैं, सिलिया के हल्के पीले रंग के हल्के पीले रंग के कोरोला के साथ एक मंद नीली रोशनी का उत्सर्जन करते हैं, लेकिन मृत्यु के 10-15 मिनट बाद वे एक उज्ज्वल "जलती हुई" हल्के हरे, और फिर नारंगी-लाल रोशनी के रूप में दिखाई देते हैं।

7.7.4. जैविक परख विधि

उदाहरण के लिए, एस्केरिस अंडे (एस्करिस सूअर, मानव, टोक्सोकारा, टोक्सास्करिस, आदि) प्रति जानवर (गिनी सूअर, चूहे) की व्यवहार्यता निर्धारित करने के लिए, एक विकसित लार्वा के साथ कम से कम 100-300 अंडे की आवश्यकता होती है। आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड के घोल में एस्केरिस के अंडे को माउस या गिनी पिग के मुंह के माध्यम से पिपेट किया जाता है। 6-7 दिनों के बाद, जानवर को मार दिया जाता है, खोला जाता है और एस्केरिस लार्वा की उपस्थिति के लिए उसके जिगर और फेफड़ों की अलग-अलग जांच की जाती है। ऐसा करने के लिए लीवर और फेफड़ों को कैंची से छोटे-छोटे टुकड़ों में काट दिया जाता है और बर्मन या सुप्रयाग विधि (धारा 6.1.2) के अनुसार जांच की जाती है।

यदि जानवरों को जीवित आक्रामक अंडों से संक्रमित किया गया था, तो यकृत और फेफड़ों में शव परीक्षा में, प्रवासी एस्केरिस लार्वा पाए जाते हैं।

संक्रमण के मामले में, प्रयोगशाला जानवरों के मल में फासिओला अंडे 2 महीने के बाद खरगोशों में, गिनी सूअरों में - 50 दिनों के बाद, चूहों में - 35-40 दिनों के बाद पाए जा सकते हैं।

तेजी से प्रतिक्रिया के लिए, प्रयोगशाला जानवरों को 20-30 दिनों के बाद खोला जाता है और युवा फासिओल की उपस्थिति के लिए यकृत की जांच की जाती है।

पिग्मी टैपवार्म अंडे की व्यवहार्यता का निर्धारण करने के लिए, उन्हें पहले असंक्रमित सफेद चूहों को खिलाने की भी सिफारिश की जाती है, इसके बाद 92-96 घंटों के बाद जानवरों की शव परीक्षा और आंतों के विली या आंतों के लुमेन में सेस्टोड में सिस्टिकिकोइड्स का पता लगाया जाता है।

opisthorchis अंडे की व्यवहार्यता का निर्धारण करने के लिए, एक विधि की सिफारिश की जाती है (जर्मन S.M., Beer S.A., 1984), जो कि miracidium हैचिंग ग्रंथि के भौतिक-रासायनिक सक्रियण और लार्वा की मोटर गतिविधि की उत्तेजना पर आधारित है, जो अंडे के उद्घाटन की ओर जाता है। ढक्कन और प्रायोगिक स्थितियों में मिरासिडियम की सक्रिय रिहाई।

पानी में opisthorchis अंडे का निलंबन 10 - 12 डिग्री सेल्सियस तक ठंडा होता है (बाद के सभी ऑपरेशन कमरे के तापमान 19 - 20 डिग्री सेल्सियस पर किए जाते हैं)। एक अपकेंद्रित्र ट्यूब में 100-150 अंडे वाले निलंबन की 1 बूंद डाली जाती है। परखनली को 5-10 मिनट के लिए तिपाई में रखा जाता है। इस समय के दौरान, सभी अंडों के पास नीचे तक डूबने का समय होता है। फिर, फिल्टर पेपर की एक पट्टी के साथ, अतिरिक्त पानी को ध्यान से चूसा जाता है और परखनली में एक विशेष माध्यम की 2 बूंदें डाली जाती हैं। माध्यम 0.005 एम ट्रिस-एचसीएल बफर में तैयार किया गया है; 12 - 13% इथेनॉल समाधान और डाई (मैजेंटा, सेफ्रेनिन, ईओसिन, मेथिलीन ब्लू, आदि) बफर में जोड़े जाते हैं। परखनली को हिलाया जाता है, इसकी सामग्री को एक पिपेट के साथ कांच की स्लाइड में स्थानांतरित किया जाता है और थोड़ा हिलाते हुए 10 मिनट के लिए छोड़ दिया जाता है। फिर संकेतित माध्यम की 2 बूँदें डालें। तैयारी 20x बढ़ाई पर एक पारंपरिक प्रकाश माइक्रोस्कोप के तहत माइक्रोस्कोपी के लिए तैयार है।

इस समय के दौरान, व्यवहार्य लार्वा का ढक्कन खुलता है, और मिरासिडियम सक्रिय रूप से संकेतित माध्यम में प्रवेश करता है। इसमें एथेनॉल की मौजूदगी के कारण 2-5 मिनट के बाद इन्हें स्थिर कर दिया जाता है और फिर डाई से दाग दिया जाता है। माइक्रोस्कोपी के तहत उन्हें आसानी से पहचाना और गिना जा सकता है।