मल की सूक्ष्म जांच। हेल्मिन्थेसिस का इंट्राविटल निदान

प्रत्यक्ष तरीके: स्वयं हेल्मिन्थ्स का पता लगाना, उनके टुकड़े, अंडे, मल में लार्वा, मूत्र, ग्रहणी स्राव, थूक, नाक और योनि बलगम, सबंगुअल रिक्त स्थान की सामग्री, बायोप्सीड ऊतक के टुकड़े।

निदान करते समय, किसी भी एक विधि द्वारा मानव पाचन तंत्र में रहने वाले सभी प्रकार के कृमि के अंडे या लार्वा की पहचान करना असंभव है। इस प्रकार, प्लवनशीलता विधि का उपयोग करते समय, कंपकंपी अंडे और, कुछ मामलों में, असंक्रमित राउंडवॉर्म अंडे सतह की फिल्म (उच्च विशिष्ट गुरुत्व के कारण) में नहीं तैरते हैं। मल में, पिनवॉर्म अंडे, टेनिड ऑन्कोस्फीयर मिलना बहुत दुर्लभ है, जो विशेष शोध विधियों द्वारा पता लगाया जाता है: पिनवॉर्म और टेनिड्स के लिए पेरिअनल सिलवटों से स्क्रैपिंग, कंपकंपी के लिए अवसादन विधियाँ (ऑपिस्टोर अंडे, आदि)। इसलिए, हेलमनिथेसिस के लिए रोगी की लक्षित परीक्षा के लिए, रेफरल में डॉक्टर को संकेत देना चाहिए कि किस हेल्मिन्थ को मुख्य ध्यान (निदान) दिया जाना चाहिए, जो प्रयोगशाला सहायक को इस प्रकार के हेल्मिन्थ की पहचान करने के लिए उपयुक्त तकनीक चुनने की अनुमति देगा। एक साफ कांच के बर्तन में कम से कम 50 ग्राम (चम्मच) की मात्रा में मल के विभिन्न स्थानों से लिए गए मल को शौच के एक दिन बाद प्रयोगशाला में भेजा जाना चाहिए और प्राप्ति के दिन जांच की जानी चाहिए।

यदि अगले दिन तक मल को रखना आवश्यक है, तो इसे ठंडे स्थान (0-4 डिग्री सेल्सियस) में रखा जाता है या किसी एक संरक्षक से भर दिया जाता है।

अध्ययन से पहले, मल को एक छड़ी के साथ मिलाया जाता है ताकि कृमि के अंडे कुल द्रव्यमान में समान रूप से वितरित हो जाएं।

यदि तैयारी में कोई भी हेल्मिंथ अंडे पाए जाते हैं, तो देखना बंद नहीं होता है, क्योंकि। दोहरा या तिहरा आक्रमण हो सकता है।

हेल्मिंथियासिस के उपचार की प्रभावशीलता की निगरानी 2-3 सप्ताह या 2-3 महीने में उपचार के बाद हेल्मिन्थ अंडे के लिए मल की जांच करके की जाती है, जो कि पता चला हेलमिन्थ पर निर्भर करता है।

मैक्रोस्कोपिक विधियों का उपयोग नग्न आंखों या हाथ से पकड़े हुए आवर्धक कांच के साथ पूरे यौन परिपक्व कृमि या मल में उनके टुकड़ों का पता लगाने के लिए किया जाता है।

अक्सर शौच के बाद मल की सतह पर, आप सक्रिय रूप से रेंगने वाले पिनवॉर्म देख सकते हैं; राउंडवॉर्म मल के साथ उत्सर्जित; कभी-कभी लोग खुद हेलमन्थ्स के निर्वहन को नोटिस करते हैं। डिपाइलोबोथ्रियासिस वाले रोगियों में, टैपवार्म के स्ट्रोबिलस के टुकड़े ("नूडल्स" के रूप में) बाहर खड़े हो सकते हैं, और टेनिड्स (सूअर का मांस या गोजातीय टैपवार्म) से संक्रमित लोगों में, हेल्मिन्थ्स के खंड ("सफेद कटौती" के रूप में) ) अक्सर मल छोड़ देते हैं ("सफेद कटौती" के रूप में) या वे सक्रिय रूप से गुदा से बाहर निकलते हैं।

टेनियाडोसिस और टेनियारिन्कोसिस (एक सर्वेक्षण के साथ संयोजन में) के विभेदक निदान के लिए मैक्रोस्कोपिक विधि मुख्य है।

विशेष मैक्रोस्कोपिक विधियों में से, मल की क्रमिक धुलाई की विधि का उपयोग किया जाता है।

एक समान निलंबन प्राप्त करने के लिए मल को पानी में मिलाया जाता है, जिसके बाद, अच्छी रोशनी के तहत, उन्हें अलग-अलग छोटे भागों में काले फोटोग्राफिक क्यूवेट्स में या पेट्री डिश में एक गहरे रंग की पृष्ठभूमि पर सावधानीपूर्वक जांचा जाता है। चिमटी या एक विदारक सुई के साथ, सभी संदिग्ध सफेद कण, हेलमिन्थ के टुकड़ों के संदिग्ध बड़े गठन को हटा दिया जाता है और दो ग्लास स्लाइड के बीच एक आवर्धक कांच के नीचे जांच की जाती है। ग्लिसरीन की एक बूंद में या एक माइक्रोस्कोप के तहत एक आवर्धक कांच के नीचे छोटे कीड़े या सेस्टोड के सिर की जांच की जाती है।

सूअर का मांस, गोजातीय टैपवार्म, विस्तृत टैपवार्म के खंडों के निदान के लिए इस पद्धति का उपयोग करते समय, धुले हुए खंडों को दो गिलास के बीच रखा जाता है और, एक आवर्धक कांच के नीचे प्रकाश को देखते हुए या सूक्ष्मदर्शी के कम आवर्धन द्वारा, प्रजातियों द्वारा निर्धारित किया जाता है गर्भाशय की संरचना (सूअर का मांस टैपवार्म के एक परिपक्व खंड में, 8- 12 पार्श्व शाखाएं, और एक बैल टैपवार्म में 18-32, अधिक बार 28-32, एक विस्तृत टैपवार्म में, खंड व्यापक होते हैं और गर्भाशय अंदर होता है "रोसेट" के रूप में केंद्र)। यदि गर्भाशय खराब दिखाई देता है, तो इसे पहले कुछ समय के लिए 50% ग्लिसरीन के घोल में रखा जा सकता है, जिसके बाद गर्भाशय की सूंड भी स्पष्ट रूप से दिखाई देती है।

अलग किए गए सिर की संरचना द्वारा इन सेस्टोड का निर्धारण करते समय, उन्हें कांच की स्लाइड (या एक कवरस्लिप के साथ कवर) के बीच ग्लिसरॉल की एक बूंद में गर्दन के साथ सावधानी से रखा जाता है और, बिना निचोड़ के, कम आवर्धन पर एक माइक्रोस्कोप के तहत जांच की जाती है।

सूक्ष्म तरीकेसरल, जटिल और विशेष में विभाजित।

सरल तरीकों में देशी स्मीयर, लुगोल के घोल के साथ देशी स्मीयर, काटो के अनुसार सिलोफ़न के नीचे गाढ़ा धब्बा, घुमा (शुलमैन के अनुसार) और पेरिअनल स्क्रैपिंग शामिल हैं।

जटिल विधियाँ अधिक कुशल होती हैं और तैयारियों में अंडों की सांद्रता पर आधारित होती हैं। इनमें तरल अभिकर्मकों के साथ मल का पूर्व-उपचार शामिल है, जिसके परिणामस्वरूप हेल्मिंथ अंडे या तो तरल की सतह पर अवक्षेपित या तैरते हैं।

जटिल विधियों में संवर्धन विधियाँ शामिल हैं:

ए) प्लवनशीलता (जब अंडों का विशिष्ट गुरुत्व खारा घोल के विशिष्ट गुरुत्व से कम होता है और अंडे सतह की फिल्म में तैरते हैं);

बी) अवसादन (जब अंडों का विशिष्ट गुरुत्व नमक के घोल के विशिष्ट गुरुत्व से अधिक होता है और अंडे तलछट में बस जाते हैं)।

प्रोटोजोआ के कृमि, सिस्ट और वानस्पतिक रूपों के अंडे और लार्वा का पता लगाने के लिए विशेष तरीके स्क्रैपिंग, प्लवनशीलता, अवसादन, लार्वोस्कोपी, प्रोटोजोस्कोपी, पित्त का अध्ययन और मल, थूक, आदि के स्मीयरों को धुंधला करने के तरीके हैं।

मल की जांच के लिए सरल तरीके

देशी धब्बा. मलमूत्र का एक छोटा कण वितरित हिस्से के विभिन्न हिस्सों से लकड़ी की छड़ी के साथ लिया जाता है, 50% ग्लिसरीन के घोल की एक बूंद में कांच की स्लाइड पर अच्छी तरह से रगड़ा जाता है और 2-3 कांच की स्लाइड पर एक पतला धब्बा बनाया जाता है। माइक्रोस्कोप के तहत कम से कम 3 तैयारियों की जांच की जाती है। विधि का नुकसान: सामग्री की एक छोटी मात्रा देखी जाती है, इसलिए इसे एक स्वतंत्र विधि के रूप में उपयोग नहीं किया जाता है।

घुमा विधि(शुलमैन)। 2.0-3.0 ग्राम मल को एक गिलास में रखा जाता है, एक कांच की छड़ के साथ 5 गुना मात्रा में खारा या आसुत जल के साथ अच्छी तरह से हिलाया जाता है, 2-3 मिनट के लिए त्वरित गति करता है, और मिश्रण से छड़ी को जल्दी से हटा देता है। छड़ी के अंत में मिश्रण की एक बूंद को कांच की स्लाइड में स्थानांतरित किया जाता है और सूक्ष्मदर्शी किया जाता है। केन्द्रापसारक बल का सिद्धांत एक छड़ी पर अंडे और लार्वा के संचय का कारण बनता है।

सिलोफ़न के साथ काटो थिक स्मीयर विधि. रासायनिक अभिकर्मक: 100% ग्लिसरॉल, 6% फिनोल समाधान (100 मिलीलीटर पानी + 6 ग्राम फिनोल), 3% मैलाकाइट हरा समाधान (2.5 मिलीलीटर आसुत जल + 75 मिलीलीटर मैलाकाइट हरा)।

काम करने वाले घोल की तैयारी: 100 मिली 6% फिनोल घोल + 100 मिली शुद्ध ग्लिसरीन + 1.2 मिली 3% मैलाकाइट ग्रीन घोल।

सिलोफ़न स्ट्रिप्स की तैयारी: सिलोफ़न स्ट्रिप्स को काटा जाता है, जिसका आकार ग्लास स्लाइड से मेल खाता है। सिलोफ़न हाइड्रोफिलिक होना चाहिए (सिलोफ़न जो जलता है वह उपयुक्त है; यदि यह पिघलता है, तो यह अनुपयुक्त है)। कार्यशील समाधान में 5 हजार स्ट्रिप्स तक संसाधित किया जा सकता है। काम करने वाले घोल में उपयोग के लिए तैयार होने तक सिलोफ़न स्ट्रिप्स का एक्सपोज़र समय कम से कम 24 घंटे है।

अनुसंधान प्रगति। 50 मिलीग्राम मल (एक बड़े मटर के आकार का) एक कांच की स्लाइड पर लगाया जाता है, एक व्यक्तिगत छड़ी (कांच, लकड़ी) से रगड़ा जाता है, एक सिलोफ़न पट्टी से ढका होता है और एक समान मोटी धब्बा प्राप्त होने तक रबर स्टॉपर के साथ शीर्ष पर रगड़ा जाता है। . दवा को कमरे के तापमान पर एक घंटे के लिए या थर्मोस्टैट में 40 डिग्री सेल्सियस पर 20-30 मिनट के लिए सुखाया जाता है और सूक्ष्म रूप से (कमरे के तापमान पर जोखिम का समय 5-6 घंटे या उससे अधिक तक बढ़ाया जा सकता है)।

दक्षता के संदर्भ में, यह विधि प्लवनशीलता विधि तक पहुँचती है, लेकिन तीव्र और मध्यम तीव्रता के आक्रमण को प्रकट करती है।

इसका उपयोग एक स्वतंत्र निदान पद्धति के रूप में किया जाता है और जनसंख्या के बड़े पैमाने पर परीक्षण के लिए अनुशंसित किया जाता है।

नैदानिक ​​​​नैदानिक ​​​​प्रयोगशालाओं में, डॉक्टरों के निर्देशों में विशिष्ट निदान की अनुपस्थिति में कृमि के निदान के लिए एक एकीकृत विधि के रूप में इसका उपयोग किया जाता है।

लुगोल के घोल के साथ पेरिअनल स्क्रैपिंग और देशी स्मीयर के तरीके विशेष तरीकों पर अनुभाग में वर्णित हैं।

परिष्कृत मल संवर्धन विधियां

संवर्धन विधियां हेल्मिंथ अंडे के विशिष्ट गुरुत्व और उपयोग किए गए नमक के घोल में अंतर पर आधारित होती हैं।

प्लवनशीलता विधि को लागू करते समय, निम्नलिखित नमक के घोल का उपयोग किया जा सकता है:

1. 1.5 के घनत्व के साथ लेड नाइट्रेट PbNO3 (लेड नाइट्रेट) का घोल। पदार्थ के 650 ग्राम प्रति 1 लीटर पानी की दर से तैयार किया जाता है। नमक एक तामचीनी कटोरे में गर्म पानी में भागों में भंग कर दिया जाता है, स्टोव पर गरम किया जाता है और पूरी तरह से भंग होने तक लगातार हिलाता रहता है। घोल को छानना आवश्यक नहीं है। अध्ययन के दिन घोल तैयार किया जाता है, क्योंकि समय के साथ यह एक अवक्षेप देता है, और इसका घनत्व 24 घंटे के बाद कम होने लगता है। यदि घोल बड़ी मात्रा में तैयार किया जाता है, तो अध्ययन से पहले के दिनों में इसे गर्म किया जाता है, अवक्षेप को हिलाते हुए। घोल की तैयारी एक धूआं हुड में की जाती है, क्योंकि लेड नाइट्रेट एक भारी धातु नमक है।

2. 1.3 के घनत्व के साथ अमोनियम नाइट्रेट NH4NO3 (दानेदार या साधारण अमोनियम नाइट्रेट) का घोल पिछले वाले की तरह ही तैयार किया जाता है, लेकिन प्रति लीटर गर्म पानी में 1500 ग्राम पदार्थ की दर से।

3. 1.38-1.4 के घनत्व के साथ सोडियम नाइट्रेट NaNO3 या सोडियम नाइट्रेट का घोल 1000 ग्राम पदार्थ प्रति 1 लीटर गर्म पानी की दर से तैयार किया जाता है।

4. 1.4 के घनत्व के साथ सोडियम थायोसल्फेट Na2S2O3×5H2O (सोडियम हाइपोसल्फाइट) का घोल प्रति 1 लीटर गर्म पानी में पदार्थ के 1750 ग्राम की दर से तैयार किया जाता है।

5. 1.26-1.28 के घनत्व के साथ सोडियम सल्फेट Na2SO4 (इप्सॉम नमक) का घोल 920 ग्राम पदार्थ प्रति 1 लीटर गर्म पानी की दर से तैयार किया जाता है।

6. 1.82 के घनत्व के साथ जिंक क्लोराइड ZnCl2 (जिंक क्लोराइड) का घोल 2000 ग्राम पदार्थ प्रति 1 लीटर गर्म पानी की दर से तैयार किया जाता है। ठंडा घोल क्रिस्टलीकृत नहीं होता है।

7. 1.18-1.2 के घनत्व के साथ सोडियम क्लोराइड NaCl (सामान्य नमक) का संतृप्त घोल। पर! एल पानी, उबलते पानी की एक तामचीनी बाल्टी में भागों में 400-420 ग्राम नमक डालें, पूरी तरह से भंग होने तक लगातार हिलाते रहें। जैसे ही घोल ठंडा होता है, सोडियम क्लोराइड के क्रिस्टल अवक्षेपित हो जाते हैं।

प्लवनशीलता विलयनों के विशिष्ट गुरुत्व को वायुमापी से तभी मापा जाता है जब विलयन कमरे के तापमान पर पूरी तरह से ठंडा हो जाता है।

पिग्मी टैपवार्म, व्हिपवर्म, हुकवर्म, एस्केरिस और ब्रॉड टैपवार्म के अंडों का पता लगाने के लिए प्लवनशीलता विधियाँ सबसे प्रभावी हैं।

सतह की फिल्म को वायर लूप या ग्लास स्लाइड से हटाया जा सकता है।

एक संतृप्त सोडियम क्लोराइड समाधान में, फिल्म की जांच 30-40 मिनट के बाद, अमोनियम नाइट्रेट समाधान में - 10-20-30 मिनट के बाद बसने के बाद की जा सकती है।

वायर लूप के साथ फिल्म को हटाते समय, कम से कम 8 बूंदों की जांच की जाती है।

स्लाइड्स वायर लूप्स की तुलना में फिल्म से अधिक अंडे निकालती हैं। कांच प्लवनशीलता समाधान तरल के संपर्क में होना चाहिए, जिसे एक पिपेट के साथ बीकर में जोड़ा जाता है। जमने के बाद, कांच को हटा दिया जाता है, गीली सतह को एक बड़े गिलास पर रखा जाता है और एक माइक्रोस्कोप के तहत जांच की जाती है। उपयोग करने से पहले स्लाइड्स को degreased किया जाना चाहिए।

शोध के लिए, आपके पास होना चाहिए: कांच की स्लाइड, रासायनिक कप, वायर लूप, क्युवेट, पेट्री डिश, पिपेट, नाशपाती, कांच या लकड़ी की छड़ें।

अनुसंधान प्रगति। 5 ग्राम मल को प्लवनशीलता समाधान की मात्रा के 10 गुना (अधिमानतः 1.38-1.40 के विशिष्ट गुरुत्व के साथ) के साथ डाला जाता है, अच्छी तरह से हिलाया जाता है, ऊपर से गैर-विघटित बड़े कणों को हटा दिया जाता है और निलंबन को 10-15 मिनट के लिए छोड़ दिया जाता है। फिर फिल्म को या तो कांच की स्लाइड पर लूप के साथ या कांच की स्लाइड से हटा दिया जाता है। मल को पतला करने के लिए, 30-50 मिलीलीटर की क्षमता वाले कप लेना बेहतर होता है, किनारों के साथ फ्लश समाधान डालें (या 2-3 मिमी से कम भरें) और मिश्रण को एक स्लाइड के साथ कवर करें, और फिर एक के साथ प्लवनशीलता समाधान जोड़ें पिपेट जब तक यह स्लाइड के संपर्क में नहीं आता। 10-20 मिनट के बाद, कांच को जल्दी से हटा दिया जाता है और उस पर बची हुई फिल्म को बिना कवर ग्लास के सूक्ष्म रूप से स्कैन किया जाता है।

बसने-अवसादन के तरीके

सेडिमेंटेशन विधियों का उपयोग भूहेल्मिन्थ के अंडे, मल में बायोहेल्मिन्थ का पता लगाने के लिए और opisthorchiasis के लिए विशेष शोध विधियों के रूप में किया जाता है।

गोरीचेव-ज़ोलोटुखिन विधि(गोरीचेव की सरलीकृत विधि)। लगभग 1.5 ग्राम मल को एक रासायनिक गिलास में 3-4 मिली पानी में घोला जाता है। परिणामी निलंबन को धुंध की दो परतों के माध्यम से एक अपकेंद्रित्र ट्यूब में फ़िल्टर किया जाता है, इसमें मौजूद संतृप्त सोडियम क्लोराइड समाधान के 4-5 मिलीलीटर के ऊपर सावधानी से बिछाया जाता है। टेस्ट ट्यूब को 15-20 घंटे के लिए रैक में रखा जाता है। इस दौरान भारी कंपकंपी वाले अंडे जम जाते हैं। दो स्पष्ट रूप से सीमांकित परतें प्राप्त करें। तलछट की सूक्ष्म जांच की जाती है।

ईथर-औपचारिक विधि।इसका उपयोग सभी आंतों के आक्रमणों का निदान करने के लिए और प्रोटोजोआ और ओपिसथोरिया अंडे के लिए एक विशेष विधि के रूप में किया जाता है।

उपकरण: 3000 आरपीएम पर अपकेंद्रित्र; अपकेंद्रित्र स्नातक ट्यूब, फ़नल; धातु की छलनी (चाय) या दो-परत पट्टी; ग्लास स्लाइड और कवरस्लिप; लकड़ी (या कांच) की छड़ें; कपास, पट्टी।

रासायनिक अभिकर्मक: 10% फॉर्मेलिन घोल (1 भाग फार्मास्युटिकल फॉर्मेलिन घोल और 4 भाग आसुत जल); एथिल ईथर (चिकित्सा)।

10% फॉर्मेलिन घोल के 7 मिलीलीटर को अपकेंद्रित्र ट्यूबों में डाला जाता है और 1 ग्राम मल रखा जाता है (मल की इतनी मात्रा कि परखनली में घोल 8 मिलीलीटर तक बढ़ जाता है)। एक सजातीय मिश्रण बनने तक मल को फॉर्मेलिन के साथ मिलाया जाता है, और फिर एक धातु की छलनी (या दो-परत धुंध, पट्टी) के माध्यम से एक और अपकेंद्रित्र ट्यूब में डाला जाता है (यदि मल छलनी पर रहता है, तो छलनी को फॉर्मेलिन से धोया जाना चाहिए)। इस अपकेंद्रित्र ट्यूब, डाट में 2 मिलीलीटर ईथर डालें और 30 सेकंड के लिए जोर से हिलाएं।

मिश्रण को एक मिनट के लिए 3000 आरपीएम पर सेंट्रीफ्यूज किया जाता है (1500 आरपीएम पर दो मिनट के लिए संभव)। ईथर-फॉर्मेलिन की प्रतिक्रिया के कारण, टेस्ट ट्यूब के शीर्ष पर एक कॉर्क के रूप में प्रोटीन का जमावट होता है, और हेल्मिन्थ अंडे अवक्षेपित होते हैं। कौयगुलांट परत को हटा दिया जाता है, सतह पर तैरनेवाला निकाला जाता है, अवक्षेप को सीधे टेस्ट ट्यूब से या एक पाश्चर पिपेट के साथ कांच की स्लाइड पर लगाया जाता है, एक कवर पर्ची के साथ कवर किया जाता है और एक माइक्रोस्कोप के नीचे देखा जाता है।

ईथर-एसिटिक अवक्षेपण विधि. हेल्मिंथ अंडे के ईथर-एसिटिक वर्षा का सिद्धांत एसिटिक एसिड और ईथर के 10% जलीय घोल के साथ फेकल नमूनों का अनुक्रमिक उपचार है। एसिटिक एसिड अन्य रासायनिक यौगिकों की तुलना में मल के नमूने का बेहतर उत्सर्जन करता है। यह अपचित कणों में प्रवेश करता है, जिसमें मुख्य रूप से फाइबर होता है, जो सामग्री में उच्च होने पर, शोध में हस्तक्षेप करता है, सेंट्रीफ्यूजेशन के बाद अवक्षेपित होता है। ट्यूब में ईथर के बाद के जोड़ और सरगर्मी से ट्यूब की सामग्री से एसिटिक एसिड की निकासी होती है, साथ ही इसमें फेकल कण भी होते हैं। चूंकि ईथर और एसिटिक एसिड के मिश्रण का विशिष्ट गुरुत्व पानी के विशिष्ट गुरुत्व से कम होता है, इसलिए इन पदार्थों से उपचारित मल के नमूने ऊपर तैरते हैं, और हेल्मिन्थ अंडे, जिनमें एक बड़ा विशिष्ट गुरुत्व होता है, बस जाते हैं।

ईथर-एसिटिक वर्षा के बाद प्राप्त अवक्षेप की मात्रा ईथर-औपचारिक वर्षा के बाद की तुलना में 3-4 गुना कम है। यह इसमें हेल्मिंथ अंडे का पता लगाने में बहुत सुविधा प्रदान करता है और आपको 0.5-1 ग्राम के नमूने के साथ तलछट का अध्ययन करने की अनुमति देता है। ईथर-एसिटिक विधि की विषाक्तता 5 गुना कम है।

अनुसंधान प्रगति। एसिटिक एसिड के 10% समाधान के 7 मिलीलीटर को एक स्नातक अपकेंद्रित्र ट्यूब में डाला जाता है और मल का 1 ग्राम नमूना जोड़ा जाता है (यानी, मल की इतनी मात्रा जिस पर एसिटिक एसिड समाधान 8 मिलीलीटर तक बढ़ जाता है)। कांच या लकड़ी के डंडे से अच्छी तरह हिलाएं। एक अन्य अपकेंद्रित्र ट्यूब में धुंध की दो परतों के साथ एक फ़नल के माध्यम से तनाव। इमल्सेट में 2 मिली एथिल ईथर (यानी 10 मिली तक) मिलाया जाता है। परखनली को रबर स्टॉपर से बंद कर दिया जाता है (यह एक पेनिसिलिन की शीशी से संभव है) और 15 सेकंड के लिए हिलाया जाता है। डाट को हटाने के बाद, ट्यूबों को एक मिनट के लिए 3000 आरपीएम पर 2 मिनट के लिए सेंट्रीफ्यूज किया जाता है। सतह पर तैरनेवाला ट्यूब से त्याग दिया जाता है। कुछ मामलों में, गठित फेकल प्लग सतह पर तैरनेवाला के निर्वहन में हस्तक्षेप करता है। इस मामले में, कॉर्क को कांच या लकड़ी की छड़ से परखनली की दीवारों से अलग किया जाता है। पूरे अवक्षेप को कांच की स्लाइड पर पिपेट किया जाता है और कम आवर्धन पर एक कवरस्लिप के नीचे सूक्ष्मदर्शी किया जाता है। अवक्षेप आमतौर पर छोटा और रंगहीन होता है। हेल्मिंथ अंडे, विशेष रूप से छोटे अस्थायी अंडे, अच्छी तरह से पहचाने जाते हैं।

रासायनिक अवसादन विधि. अध्ययन का सिद्धांत 1.15 के विशिष्ट गुरुत्व के साथ खारे घोल में मल के नमूने से अंडों के अवसादन पर आधारित है। विधि का सार एक परखनली के प्रत्यक्ष केंद्रापसारक में निहित है जिसमें एसिटिक एसिड के 1% घोल में पायसीकारी मल प्लग को सोडियम नाइट्रेट (एसपी वजन 1.16) के घोल पर रखा जाता है। खारा समाधान के उच्च विशिष्ट गुरुत्व और रासायनिक प्रतिक्रिया द्वारा जारी बुलबुले, समरूप मल की परत को भेदते हुए, इसके अवसादन को रोकते हैं। हेल्मिंथ अंडे थोड़ी मात्रा में फाइबर के साथ अवक्षेपित होते हैं। तलछट को 10% एसिटिक एसिड और ईथर के साथ उपचार करके शेष डिट्रिटस को साफ किया जा सकता है। इस मामले में, केवल एक हेल्मिन्थ अंडा रहता है, जो उनकी पहचान को बहुत सुविधाजनक बनाता है।

अनुसंधान प्रगति। 1.15 के विशिष्ट गुरुत्व के साथ 6 मिली सोडियम नाइट्रेट घोल को एक स्नातक अपकेंद्रित्र ट्यूब में डाला जाता है। एक अन्य परखनली में 1% एसिटिक अम्ल का 7 मिलीलीटर घोल डालें। मल का एक नमूना पेश किया जाता है (0.5 ग्राम के नमूने के लिए 7.5 मिलीलीटर के निशान तक और 1.0 ग्राम के नमूने के लिए 8 मिलीलीटर तक)। कांच की छड़ से नमूने को अच्छी तरह मिला लें। धुंध की एक परत के साथ एक फ़नल के माध्यम से तनाव, सोडियम नाइट्रेट के समाधान पर लेयरिंग। लेयर्ड फिल्ट्रेट वाली ट्यूब को 1500-2000 आरपीएम पर 5 मिनट के लिए सेंट्रीफ्यूज किया जाता है। तेजी से ट्यूब को उलट कर सतह पर तैरनेवाला त्यागें। एसिटिक एसिड के 10% घोल के 3-4 मिली और ईथर के 0.5 मिली को एक अवक्षेप के साथ एक परखनली में डालें, रबर स्टॉपर के साथ बंद करें और हिलाएं। 1 मिनट के लिए केंद्रापसारक दोहराएं । सतह पर तैरनेवाला त्यागें। अवक्षेप को एक कांच की स्लाइड में स्थानांतरित किया जाता है, एक कवरस्लिप के साथ कवर किया जाता है और एक माइक्रोस्कोप के तहत जांच की जाती है।

बिल, डुओडेनल सामग्री, थूक, रक्त, मूत्र और मांसपेशियों के हेल्मिन्थोलॉजिकल अध्ययन

ग्रहणी सामग्री और पित्त में अंडे और कृमि के लार्वा का पता लगाना। पित्त और ग्रहणी संबंधी सामग्री का अध्ययन जिगर और पित्ताशय की थैली (opisthorchiasis, clonorchiasis, dicroceliasis) और ग्रहणी (strongyloidiasis) के हेलमनिथेसिस के संदेह के साथ किया जाता है।

अनुसंधान प्रगति। डुओडेनल सामग्री और पित्त (भाग ए, बी, सी) सामान्य तरीके से जांच का उपयोग करके प्राप्त किया जाता है। भाग बी के लिए, यह अनुशंसा की जाती है कि एक जांच के माध्यम से मैग्नीशियम सल्फेट के 33% समाधान को पेश करके पित्ताशय की थैली का पलटा प्राप्त किया जाए। जांच किए गए तरल से, इसमें तैरते हुए गुच्छे का चयन किया जाता है और एक माइक्रोस्कोप के तहत देखा जाता है, और फिर इसे समान मात्रा में सल्फ्यूरिक ईथर के साथ मिलाया जाता है। मिश्रण को अच्छी तरह से हिलाया जाता है और सेंट्रीफ्यूज किया जाता है। सतह पर तैरनेवाला त्याग दिया जाता है और एक माइक्रोस्कोप के तहत पूरे अवक्षेप की जांच की जाती है।

मवाद और बलगम की अनुपस्थिति में, पित्त और ग्रहणी की सामग्री को ईथर के साथ मिलाए बिना सेंट्रीफ्यूज किया जाता है।

थूक की जांच। हेल्मिन्थोलॉजिकल अभ्यास में, पैरागोनिमियासिस के प्रयोगशाला निदान के उद्देश्य से थूक की जांच की जाती है। कभी-कभी, शिस्टोसोम अंडे, एस्केरिस लार्वा, इचिनोकोकल मूत्राशय के तत्वों का पता लगाया जाता है।

एक कांच की स्लाइड पर थूक से एक देशी स्मीयर तैयार किया जाता है, जिसकी जांच एक माइक्रोस्कोप के तहत की जाती है।

थूक में मवाद की प्रचुर मात्रा के साथ, इसे कास्टिक सोडा या कास्टिक पोटेशियम के 0.5% घोल के साथ मिलाया जाता है, 5 मिनट के लिए हिलाया जाता है और सेंट्रीफ्यूज किया जाता है। तलछट की सूक्ष्म जांच की जाती है।

रक्त अध्ययन। यदि किसी मरीज को फाइलेरिया होने का संदेह होता है तो रक्त की जांच की जाती है।

इस तथ्य के कारण कि कुछ प्रकार के फाइलेरिया (लोओसिस, वुचेरेरियोसिस एक सबपरियोडिक स्ट्रेन के कारण होता है), लार्वा (माइक्रोफिलारिया) केवल दिन के दौरान परिधीय रक्त में होते हैं, और कुछ के साथ (ब्रुगियासिस, एक आवधिक तनाव के कारण वुचेरियोसिस) - केवल रात में, क्रमशः, इस समय विश्लेषण के लिए रक्त लें।

रक्त के नमूने लेने की तकनीक, तैयारी की तैयारी (पतली धब्बा और मोटी बूंद), उनका धुंधलापन (रोमानोव्स्की के अनुसार) और अध्ययन मलेरिया के प्रयोगशाला निदान के समान हैं।

विभिन्न प्रजातियों के माइक्रोफिलारिया लंबाई, चौड़ाई, शरीर की वक्रता, टोपी की उपस्थिति या अनुपस्थिति, दुम के अंत के आकार, शरीर में परमाणु पदार्थ के स्थान और लार्वा के दुम क्षेत्र द्वारा प्रतिष्ठित होते हैं।

अनुसंधान प्रगति। मूत्र को कम से कम 30 मिनट के लिए व्यवस्थित किया जाता है, फिर शीर्ष परत को सूखा जाता है, जिससे 10-15 मिलीलीटर तलछट निकल जाती है, जिसे अपकेंद्रित्र ट्यूबों में डाला जाता है और 1-2 मिनट के लिए अपकेंद्रित्र किया जाता है। सतह पर तैरनेवाला निकालने के बाद, अवक्षेप को एक कांच की स्लाइड में स्थानांतरित किया जाता है और एक माइक्रोस्कोप के तहत जांच की जाती है।

स्नायु बायोप्सी अध्ययन

त्रिचिनोस्कोपी विधि. ट्राइकिनोसिस का संदेह होने पर रोगी की मांसपेशियों के बायोप्सी नमूनों के अध्ययन की आवश्यकता उत्पन्न होती है।

बायोप्सी सामान्य नियमों के अनुसार की जाती है। डेल्टोइड मांसपेशी आमतौर पर बायोप्सी की जाती है। पैथोएनाटोमिकल परीक्षा के दौरान, डायाफ्राम, एसोफैगस, जीभ, मैस्टिक और इंटरकोस्टल मांसपेशियों, अंग फ्लेक्सर्स, आंखों की मांसपेशियों की मांसपेशियों की बायोप्सी करना संभव है, क्योंकि वे त्रिचिनेला लार्वा से सबसे अधिक प्रभावित होते हैं।

प्रयोगशाला में, पेशी के एक बायोप्सी किए गए टुकड़े को बहुत छोटे टुकड़ों (माइक्रोटोम) में काट दिया जाता है, जिसे दो गिलासों के बीच रखा जाता है, मांसपेशी फाइबर को कुचल दिया जाता है, और एक माइक्रोस्कोप के तहत जांच की जाती है। वर्तमान में, विशेष सूक्ष्मदर्शी, ट्राइचिनेलोस्कोप, इस उद्देश्य के लिए व्यापक रूप से उपयोग किए जाते हैं।

ट्राइकिनोसिस के मामले में, मांसपेशी फाइबर के साथ ट्राइकिनोस्कोपी तेजी से प्रमुख अंडाकार आकार (नींबू की तरह) ट्राइकिनोसिस कैप्सूल प्रकट करता है। मानव कैप्सूल का औसत आकार 0.4 x 0.26 मिमी है। कैप्सूल, एक नियम के रूप में, एक त्रिचिनेला होता है जो सर्पिल रूप से 2.5 मोड़ में मुड़ा होता है। आक्रमण की उच्च तीव्रता के साथ, एक कैप्सूल में 2 या 3 लार्वा हो सकते हैं। कैप्सूल से सटे स्नायु तंतु अपनी अनुप्रस्थ पट्टी खो देते हैं और एक सजातीय रूप धारण कर लेते हैं।

उसी तरह, संक्रमण का कारण बनने वाले मांस या मांस उत्पादों की जांच की जाती है।

स्नायु पाचन विधि. विधि अधिक कुशल है।

अनुसंधान प्रगति। अध्ययन की गई मांसपेशियों को 1:15-20 के अनुपात में बारीक कटा हुआ और कृत्रिम गैस्ट्रिक जूस से भरा जाता है। परिणामी मिश्रण को थर्मोस्टेट में 37 डिग्री सेल्सियस पर 12-16 घंटों के लिए रखा जाता है। इस अवधि के बाद, तलछट को सूक्ष्मदर्शी किया जाता है, जिसमें मुक्त त्रिचिनेला लार्वा पचे हुए मांसपेशी फाइबर के अवशेषों के द्रव्यमान के बीच पाए जाते हैं।

कृत्रिम गैस्ट्रिक जूस किसी फार्मेसी में खरीदा जा सकता है या प्रयोगशाला में तैयार किया जा सकता है। ऐसा करने के लिए, 1 लीटर आसुत जल में 10 मिलीलीटर केंद्रित हाइड्रोक्लोरिक एसिड मिलाएं; उपयोग करने से पहले, 1 लीटर पतला एसिड में 30 ग्राम पेप्सिन मिलाया जाता है।

मात्रात्मक अनुसंधान के तरीके

मात्रात्मक अनुसंधान विधियों का उपयोग आक्रमण की तीव्रता को निर्धारित करने, विभिन्न कृमिनाशक दवाओं की प्रभावशीलता का मूल्यांकन करने, डीवर्मिंग की गुणवत्ता का निर्धारण करने, चल रहे बड़े पैमाने पर चिकित्सीय और निवारक उपायों की निगरानी आदि में किया जाता है।

हेल्मिंथ अंडे का मात्रात्मक निर्धारण दो तरीकों से किया जाता है: स्टॉल विधि और कसीसिलनिकोव और वोल्कोवा (1974) की विधि।

स्टॉल विधि. अध्ययन करने के लिए, आपके पास एक माइक्रोस्कोप, 56 और 60 मिलीलीटर के निशान के साथ एक कांच का फ्लास्क, एक मापने वाला सिलेंडर, कांच के मोती, फ्लास्क के लिए एक रबर स्टॉपर, स्नातक किए गए पिपेट, कांच की स्लाइड और 0.4% सोडियम हाइड्रॉक्साइड समाधान होना चाहिए।

अनुसंधान प्रगति। 56 मिली के निशान के मापने वाले सिलेंडर के साथ फ्लास्क में डेसीनॉर्मल सोडियम हाइड्रॉक्साइड घोल (लगभग 0.4% सांद्रता) डालें और तब तक मल डालें जब तक कि तरल स्तर 60 मिली (यानी 4 मिली मल) तक न पहुँच जाए। मिश्रण को 1 मिनट के लिए कांच के मोतियों से अच्छी तरह हिलाया जाता है, बर्तन को रबर स्टॉपर से बंद कर दिया जाता है (आप एक छड़ी के साथ भी मिला सकते हैं)। मिलाने के तुरंत बाद, मिश्रण के 0.075 मिलीलीटर को एक स्नातक पिपेट (इसमें 0.005 मिलीलीटर मल होता है) के साथ एकत्र किया जाता है, एक ग्लास स्लाइड में स्थानांतरित किया जाता है और तैयारी में अंडों की संख्या एक माइक्रोस्कोप के तहत गिना जाता है। 1 ग्राम मल में अंडों की संख्या निर्धारित करने के लिए, मिली संख्या को 200 से गुणा किया जाता है।

उपचार से पहले और बाद में रोगी में पाए जाने वाले तैयारी में अंडों की संख्या की तुलना, हमें कृमिनाशक की प्रभावशीलता का न्याय करने की अनुमति देती है।

स्टोल की विधि सरल है, सभी हेलमनिथेसिस में तुलनीय परिणाम देती है, जिसके रोगजनक रोगी की आंतों में व्यवस्थित रूप से अंडे का स्राव करते हैं। हालांकि, विधि का नुकसान इसकी अपेक्षाकृत कम संवेदनशीलता है, खासकर आक्रमण की कम तीव्रता पर।

कसीसिलनिकोव-वोल्कोवा विधि. इस विधि की जांच करते समय, कम से कम 1 ग्राम मल को कांच के फ्लास्क या एक बड़ी परखनली में 1:10 के अनुपात में 1% लोटस घोल (या 1.5% अतिरिक्त घोल) के साथ मिलाया जाता है। एक सजातीय निलंबन बनने तक निलंबन को अच्छी तरह से हिलाया जाता है, फिर निलंबन का 0.1 मिलीलीटर (0.01 ग्राम मल के बराबर) जल्दी से एक स्नातक पिपेट के साथ एकत्र किया जाता है और एक ग्लास स्लाइड में स्थानांतरित किया जाता है। तैयारी एक कवर ग्लास या सिलोफ़न प्लेट (20 x 30 मिमी) के साथ कवर की जाती है, ग्लिसरॉल के 50% जलीय घोल में कम से कम एक दिन के लिए वृद्ध।

पूरी तैयारी में अंडों की संख्या गिनें। 1 ग्राम मल में अंडों की संख्या की गणना करने के लिए, परिणामी संख्या को 100 से गुणा किया जाना चाहिए।

स्टोल विधि की तुलना में इस विधि के कई फायदे हैं। सबसे पहले, यह अधिक संवेदनशील है और कम आक्रमण के साथ कृमि का पता लगाने की अनुमति देता है। दूसरे, यह बड़े पैमाने पर परीक्षाओं के लिए बहुत सुविधाजनक है, क्योंकि डिटर्जेंट समाधान, हेल्मिंथ अंडे के लिए संरक्षक होने के कारण, पूरी तरह से ताजा सामग्री का अध्ययन करना संभव नहीं बनाते हैं। हालांकि, इसके लिए एक शर्त सीधे डिटर्जेंट के घोल में मल का संग्रह है।

मात्रात्मक अनुसंधान के लिए, तैरते अंडे के सिद्धांत पर आधारित वर्णित एकीकृत गुणात्मक विधियों में से किसी का भी उपयोग किया जा सकता है। लेकिन इस मामले में, विश्लेषण के लिए समान मात्रा में मल, प्लवनशीलता समाधान की समान मात्रा ली जानी चाहिए। नीचे दी गई तालिका के अनुसार, 1 ग्राम मल में अंडों की संख्या जानकर, आक्रमण की डिग्री की गणना की जा सकती है।

हेलमिन्थ अंडे की संख्या के आधार पर आक्रमण की तीव्रता

1 ग्राम मल में

सीरोलॉजिकल डायग्नोसिस

रक्त सीरम में विशिष्ट एंटीबॉडी का पता लगाने के आधार पर इन विधियों का उपयोग नैदानिक ​​​​और स्क्रीनिंग उद्देश्यों के लिए किया जाता है।

सीरोलॉजिकल तरीकों में शामिल हैं:

रिंग वर्षा प्रतिक्रिया (आरसीपी) (ट्राइचिनोसिस, सिस्टिकिकोसिस);

ठंड में टेस्ट ट्यूबों में रिंग वर्षा प्रतिक्रिया (ट्राइकिनोसिस, सिस्टिकिकोसिस);

जीवित लार्वा (ट्राइकिनोसिस, एस्कारियासिस) पर माइक्रोप्रेजर्वेशन प्रतिक्रिया;

अप्रत्यक्ष रक्तगुल्म (RIHA) की प्रतिक्रिया (trichinosis, echinococcosis, alveococcosis, cysticercosis, आदि);

लेटेक्स एग्लूटीनेशन रिएक्शन (आरएएल) (इचिनोकोकोसिस, एल्वोकॉकोसिस, ट्राइकिनोसिस, टेनियारिनहोज, आदि);

पूरक निर्धारण प्रतिक्रिया (आरसीसी) (ट्रिचिनोसिस, इचिनोकोकोसिस, सिस्टिकिकोसिस);

एंजाइम-लेबल एंटीबॉडी (आरईएमए) की प्रतिक्रिया (इचिनोकोकोसिस, ओंकोकेरिएसिस, शिस्टोसोमियासिस, ट्राइकिनोसिस, टोक्सोकेरियासिस);

एलिसा (ट्राइकिनोसिस, ओपिसथोरियासिस, टोक्सोकेरियासिस, टोक्सोप्लाज़मोसिज़, आदि)।

सीरोलॉजिकल प्रतिक्रियाओं को स्थापित करने के लिए, मानक एंटीजन का उत्पादन किया जाता है या उन्हें स्वतंत्र रूप से तैयार किया जाता है (उदाहरण के लिए, भेड़ के इचिनोकोकल ब्लैडर से), एलिसा के लिए विशेष परीक्षण प्रणाली का उत्पादन किया जाता है।

एंटरोबियासिस, टेनियारिनहोज, टेनियासिस के लिए विशेष शोध विधियां

पेरिअनल फोल्ड से स्क्रैपिंग. पेरिअनल सिलवटों से स्क्रैपिंग प्राप्त करने के लिए, आप एक लकड़ी के स्पैटुला, सिलोफ़न स्ट्रिप, सेलूलोज़ पेपर या टेप का उपयोग कर सकते हैं, एक विशेष चिपकने वाली परत के साथ आई स्टिक:

ए) एक लकड़ी के रंग के साथ स्क्रैपिंग (एक स्पुतुला एक चपटा मैच या छड़ी है) ग्लिसरीन के 1% समाधान (या बेकिंग सोडा का 0.5% समाधान) के साथ सिक्त किया जाता है, पूरे पेरिअनल फोल्ड की सतह से हल्के स्क्रैपिंग द्वारा किया जाता है गुदा की परिधि। परिणामी स्क्रैपिंग को स्पैटुला के अंत से कवरस्लिप के किनारे से 50% ग्लिसरॉल समाधान की एक बूंद में एक ग्लास स्लाइड में स्थानांतरित किया जाता है, उसी कवरस्लिप के साथ कवर किया जाता है और माइक्रोस्कोप किया जाता है। विधि का नुकसान अंडे का पता लगाने और परेशान करने वाले प्रभाव की कमी है;

बी) टॉरगुशिन विधि के अनुसार, ग्लिसरीन के 50% घोल से सिक्त लकड़ी या अन्य स्पैटुला पर कपास झाड़ू से धुलाई की जाती है, और ग्लिसरीन की एक बूंद में कांच की स्लाइड पर एक धब्बा तैयार किया जाता है;

ग) केवोरकोवा विधि के अनुसार, लगभग 5 मिलीलीटर उबला हुआ पानी एक अपकेंद्रित्र ट्यूब में डाला जाता है, इसमें एक कपास झाड़ू के साथ एक स्पैटुला (छड़ी) रखा जाता है। सामग्री लेने से पहले, टेस्ट ट्यूब की भीतरी दीवार के खिलाफ स्वाब को थोड़ा निचोड़ा जाता है, इसके साथ पेरिअनल सिलवटों को मिटा दिया जाता है, और स्वैब के साथ स्पैटुला को टेस्ट ट्यूब में डाला जाता है। टेस्ट ट्यूब में टैम्पोन को अच्छी तरह से हिलाया जाता है, वॉश को 3 मिनट के लिए सेंट्रीफ्यूज किया जाता है, और परिणामी अवक्षेप की एक माइक्रोस्कोप के तहत जांच की जाती है;

डी) ग्राहम के अनुसार चिपकने वाली टेप के साथ स्क्रैपिंग। चिपकने वाली टेप का एक टुकड़ा (बच्चों की रचनात्मकता के लिए एक चिपकने वाली परत के साथ एक पारदर्शी पॉलीइथाइलीन टेप, लेकिन एक ऑपरेटिंग फिल्म एलपीओ -1, एलपीओ -2) का उपयोग करना बेहतर है) 8-10 सेमी लंबा पेरिअनल सिलवटों के लिए एक चिपचिपी परत के साथ चिपका हुआ है त्वचा की, इसे सिरों से पकड़कर, और फिर एक चिपचिपी परत के साथ विषय ग्लास में स्थानांतरित कर दिया जाता है (टेप के सिरों को कांच के किनारों से आगे काटा जाता है), चश्मे को क्रमांकित किया जाता है, और रोगी का डेटा और कांच की संख्या जर्नल में दर्ज की जाती है। प्रयोगशाला में, टेप को एक छोर पर लंबी दूरी पर छील दिया जाता है, इसके नीचे वैसलीन तेल या ग्लिसरीन की 1-2 बूंदें टपकती हैं (ऑप्टिकल दोषों को खत्म करने के लिए) और सूक्ष्मदर्शी;

ई) कांच की आंखों की छड़ें, जिसकी सतह को एक विशेष चिपकने वाली संरचना के साथ लेपित किया जाता है। एक विशेष तिपाई में आंखों की छड़ें लगाई जाती हैं। सामग्री को स्पैटुला के सपाट हिस्से को पेरिअनल ओपनिंग की त्वचा से संपर्क करके लिया जाता है। फिर छड़ी को परिवहन के लिए एक तिपाई में फिर से तय किया जाता है। माइक्रोस्कोपी को कम आवर्धन (आईपीस x 10, ऑब्जेक्टिव x 8) पर कैसेट में प्रारंभिक बन्धन के साथ दोनों तरफ (स्लाइड और कवरस्लिप के बिना) सीधे स्पैटुला पर किया जाता है। काम के अंत में, लाठी को साबुन के घोल में उबालकर कीटाणुरहित किया जाता है, और तिपाई और कैसेट को शराब से उपचारित किया जाता है और साबुन सोडा के घोल से धोया जाता है। गोंद संरचना: क्लियोल - 10 ग्राम, अरंडी का तेल - 2.5 ग्राम, एथिल ईथर - 5 ग्राम, एथिल अल्कोहल 96% - 2.5 ग्राम।

स्पैटुला को गोंद के घोल में डुबोया जाता है, फिर कमरे के तापमान पर हवा में सुखाया जाता है। सतह पर बनने वाली चिपकने वाली फिल्म कई दिनों तक बनी रहती है।

एंटरोबायोसिस के लिए बच्चे की आबादी और टेनिडोज के लिए वयस्क आबादी की सामूहिक जांच के लिए यह विधि सुविधाजनक है।

टेनियारिन्कोसिस और टेनिआसिस के लिए स्क्रैपिंग विधि के अलावा, सर्वेक्षण विधि और ऊपर वर्णित मैक्रोस्कोपिक विधि (जब खंडों का पता लगाया जाता है) का भी उपयोग किया जाता है।

स्ट्रांगाइलोइडियासिस के लिए विशेष शोध विधियां

ईथर-एसिटिक विधि का उपयोग अंडों का पता लगाने के लिए किया जाता है (ऊपर देखें) और बर्मन विधि का उपयोग मल में लार्वा का पता लगाने के लिए किया जाता है।

बर्मन विधि. रेचक लेने के बाद बेहतर होगा कि ताजा मल की जांच करें। एक तिपाई में तय कांच कीप में 5 ग्राम मल का नमूना धातु की छलनी (जाल को धुंध की दो परतों के साथ अंदर पंक्तिबद्ध किया जाता है) पर रखा जाता है। कीप (बर्मन के उपकरण) के निचले सिरे पर एक क्लैंप के साथ एक रबर ट्यूब लगाई जाती है।

मल के साथ जाल को उठा लिया जाता है और 40-50 डिग्री सेल्सियस तक गर्म पानी को कीप में डाला जाता है ताकि जाल का निचला हिस्सा पानी में डूब जाए और मल पूरी तरह से पानी से ढक जाए। 2-4 घंटों के बाद, रबर ट्यूब पर क्लैंप जल्दी से खुल जाता है, और तरल अपकेंद्रित्र ट्यूब में उतर जाता है। सेंट्रीफ्यूजेशन (1-2 मिनट) के बाद, तरल का ऊपरी हिस्सा जल्दी से निकल जाता है, और 1 मिली की मात्रा में अवक्षेप को एक कांच की स्लाइड पर एक पतली परत में और सूक्ष्मदर्शी के कम आवर्धन के तहत सूक्ष्म रूप से लगाया जाता है।

छोटा सा भूत और टीएम विधि. एक अखरोट के आकार के मल के एक हिस्से को एक रासायनिक बीकर में रखा जाता है, गर्म 40 डिग्री सेल्सियस खारा के साथ डाला जाता है ताकि मल एक समाधान के साथ कवर हो, 20 मिनट के लिए छोड़ दिया जाए। 20 मिनट के बाद, तरल को पेट्री डिश में डाला जाता है और एमबीएस दूरबीन माइक्रोस्कोप के तहत देखा जाता है।

स्ट्रॉन्गिलोडायसिस के निदान के लिए, विशेष रूप से उपचार की प्रभावशीलता की निगरानी के लिए, ग्रहणी सामग्री के अध्ययन के साथ बर्मन विधि को संयोजित करने की सिफारिश की जाती है।

नेमाटोडोसिस के लिए विशेष शोध विधियां

सूत्रकृमि

एस्कारियासिस

इतिहास में बागवानी, बागवानी के प्रति दृष्टिकोण की ओर ध्यान आकर्षित किया जाता है। कच्ची सब्जियां खाना, इन सब्जियों से बना सलाद।

एस्कारियासिस के प्रारंभिक चरण की नैदानिक ​​अभिव्यक्तियाँ शरीर में एलर्जी परिवर्तन के कारण होती हैं। एस्कारियासिस का प्रारंभिक या प्रवासी लार्वा चरण अक्सर बुखार की उपस्थिति में 38 ° और उससे अधिक के शरीर के तापमान के साथ होता है, जिसमें फेफड़े की क्षति के लक्षण जटिल होते हैं, और गंभीर रक्त ईोसिनोफिलिया की उपस्थिति होती है। ज्यादातर मामलों में, बच्चों में बीमारी के पहले लक्षण अस्वस्थता, कमजोरी, बार-बार होने वाले सिरदर्द, पसीना और कभी-कभी मांसपेशियों और जोड़ों में दर्द होते हैं। अक्सर गंभीर या मध्यम खुजली के साथ एक विपुल पित्ती-प्रकार के दाने होते हैं। प्रारंभिक चरण के निदान की पुष्टि फेफड़ों में वाष्पशील ईोसिनोफिलिक लेफ़लर घुसपैठ की उपस्थिति के लिए एक्स-रे अध्ययनों द्वारा की जाती है। ताजा थूक स्मीयर में अक्सर ईोसिनोफिलिक कोशिकाएं, लाल रक्त कोशिकाएं, चारकोट-लीडेन क्रिस्टल और एस्केरिस लार्वा दिखाई देते हैं।

एस्कारियासिस के आंतों के काल्पनिक चरण में, गैस्ट्रोइंटेस्टाइनल और एस्थेनिक सिंड्रोम, एंटरोकोलिटिक दर्द के लक्षणों से अभिव्यक्तियों का एक संयोजन होता है। बच्चों में, अक्सर वजन में कमी होती है, कभी-कभी काफी महत्वपूर्ण होती है। मतली, बढ़ी हुई लार, चिड़चिड़ापन, मनोदैहिक विकास में देरी, बुद्धि में कमी।

आंतों के एसटी के प्रयोगशाला निदान के लिए

सबसे सरल को 4 वर्गों में विभाजित किया गया है:

जब इन्सिस्टेड किया जाता है, तो सूक्ष्मजीव एक गोल आकार प्राप्त कर लेता है और एक सुरक्षात्मक खोल से ढक जाता है। एक पुटी के रूप में, प्रोटोजोआ प्रतिकूल पर्यावरणीय कारकों के प्रति कम संवेदनशील हो जाते हैं।

अनुसंधान में शामिल हो सकते हैं:

टिप्पणी:निदान की कई किस्में हैं, हम उन प्रकारों पर विचार करेंगे जो नैदानिक ​​प्रयोगशाला अभ्यास में सबसे आम हैं।

निजी प्रकार के निदान

प्रत्येक विशिष्ट मामले में, प्रयोगशाला सहायक को एक विशिष्ट रोगज़नक़ खोजने का काम सौंपा जाता है, कभी-कभी अन्य मुख्य के साथ पाए जाते हैं।

मानव आंत में रहने में सक्षम इस सूक्ष्मजीव की 6 प्रजातियां हैं। केवल पेचिश अमीबा, जो वानस्पतिक रूप में और अल्सर के रूप में होता है, नैदानिक ​​महत्व का है।

इसके अतिरिक्त, प्रतिरक्षाविज्ञानी विधियों का उपयोग किया जाता है:

• अप्रत्यक्ष इम्यूनोफ्लोरेसेंस;
• अप्रत्यक्ष समूहन (पीएचए);
• रेडियल इम्यूनोडिफ्यूजन।

टिप्पणी: सीरोलॉजिकल तरीके सूचनात्मक नहीं हैं और केवल संदिग्ध मामलों में मुख्य के अतिरिक्त के रूप में उपयोग किए जाते हैं।

सिलिअरी का निदान (सिलियेट्स)

इस जीनस के सूक्ष्मजीवों का रोगजनक रूप बैलेंटीडिया है। यह एक सूक्ष्म जीव है जो बैलेंटिडायसिस का कारण बनता है - एक बीमारी जिसमें बड़ी आंत की अल्सरेटिव प्रक्रिया होती है। प्रेरक एजेंट एक देशी स्मीयर में एक वनस्पति रूप और एक पुटी के रूप में पाया जाता है। स्मीयर (मल और बलगम) के लिए सामग्री को सिग्मोइडोस्कोपी परीक्षा के दौरान लिया जाता है और विशेष मीडिया पर बोया जाता है।

फ्लैगेलेट्स का निदान (लीशमैनिया, जिआर्डिया, ट्रिपैनोसोम, ट्राइकोमोनैड्स)

लीशमैनिया, ट्रिपैनोसोमा, जिआर्डिया, ट्राइकोमोनैड इंसानों के लिए खतरनाक हैं।

लीशमैनिया- लीशमैनियासिस का कारण बनने वाले रोगाणुओं की जांच रक्त स्मीयर, अस्थि मज्जा सामग्री, त्वचा की घुसपैठ से स्क्रैपिंग में की जाती है। कुछ मामलों में, लीशमैनिया के निदान में, पोषक माध्यम पर बुवाई का उपयोग किया जाता है।

ट्रिपैनोसोम- नींद की बीमारी के कारक एजेंट (अमेरिकी / अफ्रीकी ट्रिपैनोसोमियासिस, या चागास रोग)।

परिधीय रक्त के अध्ययन में प्रारंभिक अवधि में अफ्रीकी संस्करण निर्धारित किया जाता है। रोग की प्रगति के दौरान पैथोलॉजिकल रोगाणु लिम्फ नोड्स के पंचर की सामग्री में पाए जाते हैं, उन्नत चरणों में - मस्तिष्कमेरु द्रव में।

संदिग्ध चगास रोग के मामले में ट्रिपैनोसोम का निदान करने के लिए, कम आवर्धन पर एक माइक्रोस्कोप के तहत परीक्षण सामग्री की जांच की जाती है। इस मामले में, स्मीयर और एक मोटी बूंद पूर्व-दागदार होती है।

ट्रायकॉमोनास(आंतों, मौखिक,) प्रभावित श्लेष्मा झिल्ली से ली गई सामग्री की माइक्रोस्कोपी द्वारा पता लगाया जाता है।

स्पोरोज़ोअन्स (मलेरिया प्लास्मोडियम, कोकिडोसिस का प्रेरक एजेंट, आदि) की पहचान

मनुष्यों के लिए सबसे आम और खतरनाक प्रजाति मलेरिया प्लास्मोडियम है, जिसमें रोगज़नक़ों की 4 मुख्य किस्में हैं: तीन दिवसीय मलेरिया, चार दिवसीय मलेरिया, उष्णकटिबंधीय मलेरिया और अंडाकार मलेरिया का प्रेरक एजेंट।

प्लाज्मोडियम (स्पोरोगनी) का यौन विकास एनोफिलीज मच्छरों में होता है। अलैंगिक (ऊतक और एरिथ्रोसाइट सिज़ोगोनी) - यकृत ऊतक और मानव एरिथ्रोसाइट्स में। मलेरिया प्लास्मोडियम का निदान करते समय जीवन चक्र की इन विशेषताओं को ध्यान में रखा जाना चाहिए।

तो, एक नए बीमार रोगी के रक्त में, स्पोरोगनी चक्र की रोगाणु कोशिकाएं पाई जा सकती हैं। लेकिन जब मलेरिया का हमला चरम पर होता है, तब रक्त में बड़ी संख्या में स्किज़ोंट दिखाई देते हैं।

इसके अलावा, मलेरिया बुखार के विभिन्न चरणों में, प्लास्मोडियम के विभिन्न रूप दिखाई देते हैं:

• ठंड की अवधि के दौरान, रक्त मेरोजोइट्स से भर जाता है, एक प्रकार का विक्षिप्तता;
• तापमान की ऊंचाई पर, अंगूठी के आकार के ट्रोफोज़ोइट्स एरिथ्रोसाइट्स में जमा होते हैं;
• तापमान में कमी अमीबिड ट्रोफोज़ोइट्स की प्रबलता की विशेषता है;
• सामान्य स्थिति की अवधि के दौरान, रक्त में स्किज़ोंट्स के वयस्क रूप होते हैं।

मलेरिया के प्रेरक कारक (मलेरिया प्लास्मोडियम) का अध्ययन एक स्मीयर और एक मोटी बूंद में किया जाता है।

टिप्पणी:स्मीयर और थिक ब्लड ड्रॉप्स के अध्ययन में मलेरिया का निदान कभी-कभी गलत होता है। कुछ मामलों में रक्त प्लेटलेट्स को गलती से मलेरिया रोगज़नक़ के रूप में वर्गीकृत किया जा सकता है। इसके अलावा, ल्यूकोसाइट्स और अन्य कोशिकाओं के टुकड़े कभी-कभी प्लास्मोडियम का अनुकरण करते हैं।

प्रोटोजोआ के लिए बुनियादी शोध विधियां

आइए प्रोटोजोआ की उपस्थिति के लिए सबसे आम शोध विधियों पर एक संक्षिप्त नज़र डालें।

देशी स्मीयर और लुगोल के घोल (मल में) से सना हुआ स्मीयर का उपयोग करके प्रोटोजोआ का निदान

दवा एक आइसोटोनिक समाधान में मल के पायस से तैयार की जाती है। सोडियम क्लोराइड और लुगोल के घोल की दो बूंदों को कांच की स्लाइड पर लगाया जाता है। परीक्षण सामग्री को लकड़ी की छड़ी के साथ दोनों रचनाओं में जोड़ा जाता है और कांच से ढकने के बाद, माइक्रोस्कोप के विभिन्न प्रस्तावों पर देखा जाता है।

कुछ संकेतों के अनुसार, पाए गए प्रोटोजोआ पंजीकृत हैं। सटीकता के लिए, एक सामग्री से 2-3 तैयारी तैयार की जाती है। संदिग्ध मामलों में, विश्लेषण 2-3 सप्ताह में कई बार दोहराया जाता है।

विधि वनस्पति और सिस्टिक रूपों का पता लगा सकती है:

• लैम्ब्लिया;
• बैलेंटीडिया;
• पेचिश अमीबा।

रोगजनक रूपों के साथ, गैर-रोगजनक प्रोटोजोआ भी निर्धारित किए जाते हैं। स्वस्थ वाहकों में ल्यूमिनल और सिस्टिक रूप भी होते हैं।

महत्वपूर्ण:अशुद्धियों और त्रुटियों से बचने के लिए अनुसंधान बार-बार किया जाना चाहिए।

देशी और दागदार स्मीयर की विधि द्वारा प्रोटोजोआ के निदान के परिणाम में रोगज़नक़ (पारभासी, पुटी, ऊतक) के रूप का विवरण होना चाहिए।

अनुसंधान आवश्यकताएँ:

• विश्लेषण के लिए ली गई सामग्री (तरल मल) की जांच शौच के 30 मिनट बाद नहीं की जाती है;
• शौच के 2 घंटे के भीतर गठित मल का निदान किया जाना चाहिए;
• सामग्री में अशुद्धियाँ (कीटाणुनाशक, पानी, मूत्र) नहीं होनी चाहिए;
• सामग्री के साथ काम करने के लिए केवल लकड़ी की छड़ियों का उपयोग किया जाता है, बलगम के फिसलने के कारण कांच उपयुक्त नहीं होते हैं;
• उपयोग के तुरंत बाद लाठी को जला देना चाहिए।

प्रोटोजोआ के निदान में संरक्षण विधि (मल की जांच)

एक परिरक्षक के साथ प्रोटोजोआ को ठीक करके अध्ययन किया जाता है। इस विधि और पिछली विधि के बीच का अंतर यह है कि परिरक्षक आपको लंबे समय तक दवा को बचाने की अनुमति देते हैं।

प्रयुक्त संरक्षक:

• बैरो। परिरक्षक तत्व शामिल हैं: 0.7 मिली सोडियम क्लोराइड, 5 मिली फॉर्मेलिन, 12.5 मिली 96% अल्कोहल, 2 ग्राम फिनोल और 100 मिली डिस्टिल्ड वॉटर। रंग संरचना: थियोनीन (नीला) का 0.01% समाधान।
• Safarliev का समाधान। रचना: 1.65 ग्राम जिंक सल्फेट, 10 मिली फॉर्मेलिन, 2.5 ग्राम क्रिस्टलीय फिनोल, 5 मिली एसिटिक एसिड, 0.2 ग्राम मेथिलीन ब्लू, 100 मिली पानी। इस परिरक्षक का उपयोग उन मामलों में किया जाता है जहां सामग्री को एक महीने से अधिक समय तक संग्रहीत किया जाना चाहिए।

खाली बोतलों को एक परिरक्षक से भर दिया जाता है, सामग्री को उनमें स्थानांतरित कर दिया जाता है, 3: 1 के अनुपात में, यदि आवश्यक हो, तो एक डाई जोड़ा जाता है। परिणामों का मूल्यांकन 2-3 दवाओं के अध्ययन में किया जाता है।

औपचारिक-ईथर संवर्धन विधि (मल में प्रोटोजोआ की उपस्थिति के लिए विश्लेषण)

यह निदान पद्धति आपको प्रोटोजोअन सिस्ट को अलग करने और ध्यान केंद्रित करने की अनुमति देती है। विश्लेषण के लिए निम्नलिखित अवयवों की आवश्यकता होती है: फॉर्मेलिन (10 मिली), आइसोटोनिक घोल का 0.85 ग्राम, आसुत जल, सल्फ्यूरिक ईथर, लुगोल का घोल।

सूचीबद्ध तरल पदार्थों के साथ बायोमटेरियल का मिश्रण मिश्रित और सेंट्रीफ्यूज किया जाता है। ट्यूब के तल पर प्राप्त अवक्षेप को लुगोल के घोल से दाग दिया जाता है और अल्सर और वनस्पति रूपों की उपस्थिति के लिए जांच की जाती है।

लीशमैनिया डिटेक्शन मेथड (बोन मैरो स्मीयर)

लीशमैनियासिस के निदान के लिए, अभिकर्मकों का उपयोग किया जाता है: रोमनोवस्की के अनुसार निकिफोरोव (सल्फ्यूरिक ईथर और एथिल अल्कोहल), फॉस्फेट बफर, अज़ूर-एओसिन का मिश्रण।

अस्थि मज्जा पदार्थ को विशेष तैयारी के बाद कांच की स्लाइड पर बहुत सावधानी से रखा जाता है। एक विसर्जन प्रणाली के साथ एक माइक्रोस्कोप का उपयोग किया जाता है।

रोग की तीव्र अवधि में, पंचर में बड़ी संख्या में लीशमैनिया पाए जाते हैं।

टिप्पणी:कभी-कभी रक्त कोशिकाएं उपचारित लीशमैनिया से मिलती-जुलती हो सकती हैं, इसलिए प्रयोगशाला तकनीशियन के लिए चौकस रहना और स्वतंत्र रूप से अध्ययन करने के लिए पर्याप्त अनुभव होना बहुत महत्वपूर्ण है।

एक त्वचा घुसपैठ से एक धब्बा में लीशमैनिया का पता लगाने की विधि

आवश्यक अभिकर्मक पिछले परख के समान हैं।

परीक्षण सामग्री मौजूदा ट्यूबरकल या अल्सरेटिव सामग्री से प्राप्त की जाती है। लीशमैनियासिस के संदेह के साथ स्क्रैपिंग रक्त के बिना, एक स्केलपेल के साथ बहुत सावधानी से किया जाता है। फिर कांच पर तैयारी तैयार की जाती है। प्राप्त परिणामों की सटीकता के लिए, कई तैयारियों की एक साथ जांच की जाती है।

एक रोग की उपस्थिति में, परीक्षण सामग्री में मौजूद मैक्रोफेज, फाइब्रोब्लास्ट और लिम्फोइड कोशिकाओं के बीच, लीशमैनिया भी निर्धारित किया जाता है।

पैथोलॉजिकल ऊतकों को स्क्रैप करके प्राप्त लीशमैनिया की शुद्ध संस्कृति को अलग करने की विधि

निदान की इस पद्धति के साथ सबसे सरल ऊतक स्क्रैपिंग को एक विशेष पोषक माध्यम में रखा जाता है जिसमें लीशमैनिया सक्रिय रूप से प्रजनन करता है।

स्क्रैपिंग लेने से पहले, त्वचा को अल्कोहल से सावधानीपूर्वक उपचारित किया जाता है, फिर ट्यूबरकल में एक चीरा लगाया जाता है, जिसके नीचे से सामग्री को हटाकर माध्यम के साथ एक टेस्ट ट्यूब में रखा जाता है। सामग्री को कई बार लिया जाता है, जिसके बाद इसे अलग-अलग टेस्ट ट्यूब में रखा जाता है। फिर थर्मोस्टेट में 22-24 डिग्री के तापमान पर खेती होती है। परिणामों का मूल्यांकन एक माइक्रोस्कोप के तहत किया जाता है। इस पद्धति का उपयोग तब किया जाता है जब प्रोटोजोआ के निदान के अन्य, सस्ते और तेज तरीके अप्रभावी होते हैं।

आप एक वीडियो समीक्षा देखकर देख सकते हैं कि रक्त की एक बूंद से प्रोटोजोआ की उपस्थिति के परीक्षण को व्यवहार में कैसे समझा जाता है:

लोटिन अलेक्जेंडर, चिकित्सा स्तंभकार

मल की दो तरह से जांच की जाती है:

1. मैक्रोस्कोपिक - हेल्मिंथ, उनके सिर, खंड, स्ट्रोबिली के स्क्रैप खोजें। मल के छोटे हिस्से को एक फ्लैट स्नान या पेट्री डिश में पानी के साथ मिलाया जाता है और यदि आवश्यक हो तो एक आवर्धक कांच का उपयोग करके एक अंधेरे पृष्ठभूमि के खिलाफ अच्छी रोशनी में देखा जाता है। सभी संदिग्ध संरचनाओं को चिमटी के साथ दूसरे कप पानी में या एक गिलास स्लाइड पर पतला ग्लिसरीन की एक बूंद में स्थानांतरित किया जाता है।

विधि के साथ कायम रखनेमल के जांचे गए हिस्से को एक गिलास सिलेंडर में पानी से हिलाया जाता है, जमने के बाद पानी की ऊपरी परत निकल जाती है। यह कई बार दोहराया जाता है। जब तरल पारदर्शी हो जाता है, तो इसे निकाल दिया जाता है, और तलछट को पेट्री डिश में देखा जाता है।

2. माइक्रोस्कोपिक - हेल्मिंथ के अंडे और लार्वा का पता लगाने के लिए। कई शोध विधियां हैं।

एक)। देशी धब्बा - सबसे आम और तकनीकी रूप से उपलब्ध शोध पद्धति। आप सभी कृमि के अंडे और लार्वा पा सकते हैं। हालांकि, अंडे की एक छोटी संख्या के साथ, वे हमेशा नहीं पाए जाते हैं। इसलिए, संवर्धन विधि का उपयोग किया जाता है।

एक)। फुलबॉर्ग विधि - यह संवर्धन की एक विधि है, जो NaCl (1.2 - घनत्व; 400 ग्राम NaCl प्रति 1 लीटर पानी; 40% NaCl घोल) के संतृप्त घोल में हेल्मिंथियासिस अंडे के उद्भव पर आधारित है। देशी स्मीयर की तुलना में विधि अधिक प्रभावी है। 2-5 ग्राम मल को कांच के जार में रखा जाता है और NaCl घोल से भर दिया जाता है, हिलाया जाता है, और 45 मिनट के बाद गठित फिल्म को धातु के लूप से हटा दिया जाता है, ग्लिसरीन की एक बूंद को कांच की स्लाइड पर रखा जाता है। माइक्रोस्कोप के तहत जांच करें। विधि का नुकसान विभिन्न कृमि, बौना टैपवार्म के अंडों की देरी से उभरना है - 15-20 मिनट के बाद, राउंडवॉर्म - 1.5 घंटे, व्हिपवर्म - 2-3 घंटे।

2) कलंतरायण विधि - एक संवर्धन विधि भी है, लेकिन NaNO 3 (1.38 घनत्व) के संतृप्त घोल का उपयोग किया जाता है। अधिकांश अंडे तैरते हैं, तलछट की जांच की आवश्यकता नहीं होती है। नुकसान यह है कि अंडों को लंबे समय तक घोल में रखा जाता है, जिससे यह तथ्य सामने आता है कि कुछ अंडे सतह की फिल्म से गायब होकर नीचे की ओर सूजने और जमने लगते हैं।

3. गोरीचेव की विधि - अंडे के जमाव के सिद्धांत पर आधारित, छोटे कंपकंपी वाले अंडों का पता लगाना। NaCl के एक संतृप्त विलयन को घोल के रूप में प्रयोग किया जाता है और 3-4 मिली मल के घोल को सावधानी से शीर्ष पर रखा जाता है। 15-20 घंटों के बाद, कंपकंपी के अंडे नीचे की ओर बैठ जाते हैं। तरल निकाला जाता है, एक कांच की स्लाइड पर और एक माइक्रोस्कोप के नीचे तलछट।

4. शुलमैन घुमा विधि – मल में कृमि लार्वा का पता लगाने के लिए। केवल ताजा पृथक मल की जांच करें। 2-3 ग्राम को कांच के जार में रखा जाता है और 5 गुना पानी डाला जाता है, जल्दी से एक छड़ी से हिलाया जाता है, जार की दीवारों को छुए बिना - 20-30 मिनट, फिर छड़ी को जल्दी से हटा दिया जाता है, और एक बूंद अंत में तरल को कांच की स्लाइड में स्थानांतरित किया जाता है और सूक्ष्मदर्शी किया जाता है।

5. बर्मन विधि - हेल्मिंथ लार्वा की गर्मी की ओर पलायन करने की क्षमता के आधार पर, और मल में उनकी पहचान करने का कार्य करता है।

6. हरदा और मोरी की विधि (लार्वा उगाने की विधि) और एंकिलोस्टोमियासिस के परीक्षण के लिए सिफारिश की जाती है। विधि इस तथ्य पर आधारित है कि गर्मी में और नम फ़िल्टर्ड पेपर पर, हुकवर्म अंडे फाइलेरिफॉर्म लार्वा में विकसित होते हैं, जिन्हें आसानी से पहचाना जा सकता है। फ़िल्टर्ड पेपर की एक पट्टी के बीच में 15 ग्राम मल लगाया जाता है, मल के साथ कागज को एक जार में रखा जाता है, ताकि निचला सिरा पानी में डूब जाए, और ऊपरी छोर एक कॉर्क के साथ तय हो। जार को थर्मोस्टैट में 28 0 C पर 5-6 दिनों के लिए रखा जाता है। इस दौरान फाइलेरिफॉर्म लार्वा विकसित होते हैं और पानी में उतर जाते हैं। एक आवर्धक कांच के नीचे तरल की जांच की जाती है। यदि यह पता लगाना मुश्किल है, तो तरल को अपकेंद्रित किया जाता है, लार्वा को 60 0 तक गर्म करके मार दिया जाता है। प्रयोगशाला तकनीशियन को दस्ताने पहनना चाहिए।

7. एंटरोबियासिस के लिए तरीके - पिनवॉर्म अंडे और गोजातीय टैपवार्म की पहचान।

ए) पेरिअनल फोल्ड से स्क्रैपिंग - एक कपास झाड़ू के साथ लकड़ी की छड़ी पर कसकर घाव करें और 50% ग्लिसरीन के घोल से सिक्त करें। प्रयोगशाला में, ग्लिसरॉल के 50% जलीय घोल की 1-2 बूंदों से स्वाब को धोया जाता है।

b) स्टिकी माइट मेथड (ग्राहम मेथड)

चिपकने वाला टेप पेरिअनल सिलवटों पर लगाया जाता है, फिर कांच की स्लाइड पर एक चिपचिपी परत के साथ और सूक्ष्मदर्शी किया जाता है।

सी) आई स्टिक (राबिनोविच की विधि) की मदद से स्क्रैप करना। पेरिअनल स्क्रैपिंग के लिए, कांच की आई स्टिक का उपयोग किया जाता है, जिसका सबसे चौड़ा हिस्सा एक विशेष गोंद से ढका होता है, जिससे पिनवॉर्म अंडे रखना संभव हो जाता है।

रक्त, पित्त, थूक और मांसपेशियों की जांच

रक्त माइक्रोस्कोपी - फाइलेरिया लार्वा का पता लगाया जाता है।

थूक की जांच - पैरागनिम अंडे, राउंडवॉर्म लार्वा, नेकेटर, स्ट्रॉन्ग्लॉइड, इचिनोकोकल ब्लैडर के तत्व।

मांसपेशियों की जांच - यदि ट्राइकिनोसिस का संदेह है, तो रोगी या लाश की मांसपेशियों के साथ-साथ उस मांस की भी जांच की जाती है जो कथित तौर पर व्यक्ति के संक्रमण का कारण बनता है। ट्राइचिनोस्कोपी के प्रयोजन के लिए, मांसपेशियों को छोटे टुकड़ों में काटकर कंप्रेशर्स में रखा जाता है, ये दो चौड़े, मोटे ग्लास होते हैं जो मांसपेशियों को कुचलते हैं और त्रिचिनेला लार्वा कैप्सूल के रूप में पाए जाते हैं - संपीड़न विधि।

पाचन विधि - मांसपेशियों को कृत्रिम गैस्ट्रिक जूस (हाइड्रोक्लोरिक एसिड घोल और पेप्सिन) के साथ डाला जाता है। मांसपेशियां पच जाती हैं और लार्वा आसानी से पहचाने जाते हैं। आक्रमण की तीव्रता का निर्धारण: लार्वा की संख्या 200 प्रति 1 ग्राम मांसपेशी ऊतक - आक्रमण की मध्यम तीव्रता; 500 तक - गहन; 500 से अधिक - अति गहन आक्रमण।

सीरोलॉजिकल तरीके

अध्याय III। कृमि रोग का निदान और कृमिविज्ञानी अनुसंधान के तरीके

चिकित्सा सहायता प्राप्त करने वाले सभी रोगियों, और विशेष रूप से ऐसे रोगियों की जांच करना आवश्यक है, जो जठरांत्र संबंधी मार्ग, तंत्रिका तंत्र और एनीमिया के साथ घटना की शिकायतों के साथ बाल रोग विशेषज्ञ, इंटर्निस्ट और न्यूरोपैथोलॉजिस्ट की ओर रुख करते हैं। यदि डॉक्टर हमेशा प्रयोगशाला अनुसंधान विधियों को लागू नहीं कर सकता है, तो आउट पेशेंट क्लिनिक या अस्पताल में सहायता प्रदान करने वाला प्रत्येक चिकित्सा कर्मचारी रोगी से हेलमिन्थ्स की रिहाई के बारे में साक्षात्कार करने के लिए बाध्य है।

यदि प्रासंगिक अध्यायों में नैदानिक ​​​​संकेत दिए गए हैं, तो हेलमनिथेसिस के अध्ययन के लिए प्रयोगशाला विधियों का उपयोग करके निदान को स्पष्ट किया जाना चाहिए।

आंतों के हेलमनिथेसिस की प्रबलता के संबंध में, मल का अध्ययन सबसे बड़ा व्यावहारिक महत्व है।

कृमिनाशक मल के अध्ययन के तरीके

मल को साफ कांच के बने पदार्थ में प्रयोगशाला में पहुंचाया जाता है (एक सर्विंग में विभिन्न स्थानों से लिया गया लगभग एक चौथाई कप मल); एक नियमित परीक्षा के दौरान, माचिस या लोकप्रिय प्रिंट में प्रयोगशाला में मल की डिलीवरी की अनुमति है।

डीवर्मिंग को नियंत्रित करने के लिए, एक एंटीहेल्मिन्थिक और रेचक (बड़े बंद कांच के जार, बाल्टी में) लेने के बाद एकत्र किए गए मल के पूरे हिस्से को वितरित किया जाता है (जैसा कि एक डॉक्टर द्वारा निर्धारित किया गया है)।

आंतों के हेलमनिथेसिस के निदान में मल की सूक्ष्म जांच मुख्य है; बड़े सेस्टोड, पिनवॉर्म, राउंडवॉर्म आदि के खंडों का पता लगाने के लिए इसे हमेशा मल की एक सामान्य मैक्रोस्कोपिक परीक्षा से पहले किया जाना चाहिए।

मल ताजा या डिब्बाबंद होना चाहिए (5% फॉर्मेलिन घोल में), क्योंकि सुखाने से अंडों की संरचना में नाटकीय रूप से परिवर्तन होता है। इसके अलावा, मल खड़े होने पर, कुछ कीड़े (उदाहरण के लिए, हुकवर्म) के अंडे तेजी से विकसित होते हैं, जिससे निदान मुश्किल हो जाता है।

यूएसएसआर के स्वास्थ्य मंत्रालय के निर्देशों के अनुसार, फुलबॉर्न विधि और देशी स्मीयर का उपयोग करके एक साथ मल की जांच करना आवश्यक है।

देशी धब्बा

नेटिव स्मीयर: डिलीवर किए गए हिस्से के विभिन्न स्थानों से माचिस, कांच या लकड़ी की छड़ी के साथ लिया गया मल का एक छोटा टुकड़ा (मटर के आकार का) 50% ग्लिसरॉल घोल की एक बूंद में कांच की स्लाइड पर सावधानी से ट्रिट्यूरेट किया जाता है या खारा में, या पानी में। एक कवरस्लिप के साथ कवर करें, बाद वाले को थोड़ा दबाएं (एक विदारक सुई के साथ)। स्मीयर पतला, पारदर्शी और एक समान होना चाहिए। इसका उपयोग केवल अन्य विधियों के अतिरिक्त के रूप में किया जाता है जो दवा को समृद्ध करते हैं। कम से कम दो तैयारियों को देखा जाना चाहिए।

हेल्मिंथ लार्वा (साथ ही उनके अंडे) का पता लगाने के लिए, एक देशी स्मीयर निम्नानुसार किया जाता है (शुलमैन के अनुसार): 2-3 ग्राम मल को एक ग्लास रॉड के साथ पांच बार इमल्शन में "घुमा" करके अच्छी तरह मिलाया जाता है। शुद्ध पानी या खारा की मात्रा। सरगर्मी के दौरान, लार्वा कांच की छड़ पर जमा हो जाते हैं, इसलिए, सरगर्मी के अंत के तुरंत बाद, इमल्शन की एक बूंद को कांच की छड़ के साथ जल्दी से एक कांच की स्लाइड में स्थानांतरित कर दिया जाता है, एक कवरस्लिप के साथ कवर किया जाता है और जांच की जाती है। S. D. Lyubchenko (1936) ने साबित किया कि स्मीयर विधि की तुलना में घुमा विधि अधिक प्रभावी है, विशेष रूप से एस्केरिस अंडे के संबंध में। S. D. Lyubchenko के काम के आधार पर, हम स्मीयर विधि को ट्विस्ट विधि से बदलना उचित समझते हैं।

फुलबॉर्न विधि

फुलबॉर्न विधि: विभिन्न स्थानों से लिए गए 5-10 ग्राम मल को 50-100 मिलीलीटर की क्षमता वाले जार में रखा जाता है और सोडियम क्लोराइड के संतृप्त घोल में कांच या लकड़ी की छड़ से अच्छी तरह से ट्रिट्यूरेट किया जाता है (इस नमक का 400 ग्राम घुल जाता है) 1 लीटर पानी में, उबालने के लिए गरम किया जाता है और कपास ऊन या धुंध की एक परत के माध्यम से फ़िल्टर किया जाता है; समाधान ठंडा होता है: विशिष्ट गुरुत्व 1.2)। एक समान निलंबन प्राप्त होने तक घोल को धीरे-धीरे डाला जाता है, और डाले गए घोल की कुल मात्रा मल की मात्रा का लगभग 20 गुना होनी चाहिए। फुलबॉर्न ने मल के मिश्रण के लिए चाय के गिलास के उपयोग की सिफारिश की, लेकिन प्रत्येक विश्लेषण के लिए दो जार (या 100 मिलीलीटर कप में) का उपयोग करके 50-100 मिलीलीटर मरहम जार में निलंबन तैयार करना अधिक सुविधाजनक है।

निलंबन की तैयारी के तुरंत बाद, इसे सतह से एक स्पैटुला, एक धातु स्कूप या साफ कागज के एक टुकड़े के साथ हटा दिया जाता है, बड़े कण जो सतह पर तैरते हैं (पौधे के गठन, अपचित खाद्य अवशेष, आदि), जिसके बाद मिश्रण को 1-1.5 घंटे के लिए खड़े रहने के लिए छोड़ दिया जाता है। इस समय के बाद, पूरी फिल्म को एक तार या प्लैटिनम लूप (फ्लैट) को छूकर मिश्रण की सतह से हटा दिया जाता है, जिसका व्यास 1 सेमी से अधिक नहीं होता है, एक समकोण पर मुड़ा हुआ होता है; फिल्म को कांच की स्लाइड पर हिलाया जाता है और कवरस्लिप से ढक दिया जाता है। प्रत्येक कवरस्लिप (18x18 मिमी) के नीचे 3-4 बूंदें रखें। कुल मिलाकर, कम से कम 4 तैयारी तैयार की जानी चाहिए (प्रत्येक तैयारी के लिए एक कवरस्लिप)। लूप को आग पर शांत किया जाता है और प्रत्येक विश्लेषण के बाद पानी से धोया जाता है।

फुलबॉर्न विधि के अनुसार, सभी नेमाटोड के अंडे (अनफर्टिलाइज्ड राउंडवॉर्म अंडे के अपवाद के साथ) और बौने टैपवार्म अंडे जल्दी और आसानी से पहचाने जाते हैं।

बर्मन विधि का उपयोग हेल्मिंथ लार्वा (स्ट्रांगिलोइडियासिस के साथ) के मल का अध्ययन करने के लिए किया जाता है। यह विधि इस प्रकार है: धातु की जाली पर 5 ग्राम मल (इस उद्देश्य के लिए एक दूध की छलनी सुविधाजनक है) एक तिपाई से जुड़ी कांच की फ़नल पर रखी जाती है। कीप के निचले सिरे पर एक क्लैंप के साथ एक रबर ट्यूब लगाई जाती है।

मल के साथ जाल को ऊपर उठाया जाता है और पानी को लगभग 50 ° तक गर्म करके फ़नल में डाला जाता है ताकि मल के साथ जाल का निचला हिस्सा पानी में डूब जाए। लार्वा सक्रिय रूप से पानी में चले जाते हैं और रबर ट्यूब के निचले हिस्से में जमा हो जाते हैं। 2-4 घंटों के बाद, क्लैंप खोला जाता है और तरल को एक या दो अपकेंद्रित्र ट्यूबों में उतारा जाता है।

1-2 मिनट के लिए सेंट्रीफ्यूजेशन के बाद, तरल का ऊपरी हिस्सा जल्दी से निकल जाता है, और अवक्षेप को कांच की स्लाइड्स पर बूंदों में लगाया जाता है और कवरस्लिप के नीचे जांचा जाता है या 2-3 बड़ी स्लाइड्स पर एक पतली परत में वितरित किया जाता है और फिर बिना कवरस्लिप के जांच की जाती है।

हुकवर्म लार्वा की उपस्थिति के लिए मिट्टी की जांच के लिए बर्मन विधि का भी उपयोग किया जाता है।

स्टॉल विधि

स्टोल विधि का उपयोग आक्रमण की तीव्रता को निर्धारित करने के लिए किया जाता है। एक डिसीनॉर्मल सोडियम हाइड्रॉक्साइड घोल को एक विशेष ग्लास फ्लास्क में 56 सेमी 3 के निशान तक डाला जाता है, और फिर मल को तब तक जोड़ा जाता है जब तक कि तरल स्तर 60 सेमी 3, यानी 4 सेमी 3 तक न पहुंच जाए। कांच के मोतियों से मिलाने के बाद, मिश्रण के 0.075 मिलीलीटर को जांच के लिए लिया जाता है और एक या दो साधारण कवरस्लिप के तहत जांच की जाती है। मल के 1 सेमी 3 में निहित अंडों की संख्या प्राप्त करने के लिए परिणामी राशि को 200 से गुणा किया जाता है।

ग्रहणी सामग्री का अध्ययन

जांच (और सिस्टिक पित्त और पित्ताशय की थैली से एक पलटा के बाद) द्वारा सामान्य तरीके से प्राप्त डुओडेनल रस और सिस्टिक पित्त, एथिल ईथर की बराबर मात्रा के साथ अच्छी तरह मिश्रित होते हैं; मिश्रण को सेंट्रीफ्यूज किया जाता है, जिसके बाद एक माइक्रोस्कोप के तहत अवक्षेप की जांच की जाती है। तलछट के अलावा, तरल में तैरते हुए गुच्छे, जिनमें कृमि के अंडे हो सकते हैं, को सूक्ष्म परीक्षा के अधीन किया जाना चाहिए। गैस्ट्रिक जूस और उल्टी के हेल्मिन्थ्स के अंडों की जांच करते समय, आप उसी तकनीक का उपयोग कर सकते हैं।

यदि जिगर, पित्ताशय की थैली (opisthorchiasis, fascioliasis, dicroceliasis) और ग्रहणी (स्ट्रॉन्गिलोडायसिस) के हेल्मिंथिक रोगों का संदेह है, तो ग्रहणी के रस और पेट की सामग्री की जांच की जानी चाहिए।

थूक परीक्षा

थूक को एक कांच की प्लेट पर रगड़ा जाता है, एक अन्य कांच की प्लेट से कसकर कवर किया जाता है और एक हल्के और काले रंग की पृष्ठभूमि पर नग्न आंखों से जांच की जाती है, साथ ही संचरित प्रकाश में एक आवर्धक कांच के नीचे। थूक के अलग-अलग टुकड़े ("जंग खाए" संचय, ऊतक के स्क्रैप, आदि) एक कांच की स्लाइड पर एक पतली परत में लगाए जाते हैं, कसकर कवरस्लिप के साथ कवर किया जाता है और निम्न और उच्च आवर्धन माइक्रोस्कोप पर जांच की जाती है।

ए) त्वचा, चमड़े के नीचे के ऊतक या मांसपेशियों के सिस्टीसर्कोसिस के निदान के लिए, पहले नग्न आंखों से संबंधित ऊतक के एक असमान रूप से कटे हुए टुकड़े की जांच की जाती है। नग्न आंखों को दिखाई देने वाले पुटिका का पता लगाने के लिए ऊतक वर्गों को विदारक सुइयों की मदद से अलग किया जाता है - एक सिस्टीसर्कस (फोटो ए); इसकी लंबाई 6-20 मिमी, चौड़ाई 5-10 मिमी है। जब एक बुलबुला पाया जाता है जिसमें सिस्टीसर्कस का संदेह होता है, तो इसे दो कांच की स्लाइडों के बीच कुचल दिया जाता है और एक माइक्रोस्कोप के तहत जांच की जाती है। Cysticercus (Cistycercus cellulosae) चार चूसने वाले और हुक के एक प्रभामंडल (फोटो B) के साथ एक स्कोलेक्स की उपस्थिति से निर्धारित होता है।

एक छवि।ए - स्कोलेक्स के साथ सिस्टिकिक बाहर की ओर निकला; बी - सूअर का मांस टैपवार्म का सिर।

बी) ट्राइकिनोसिस का निदान करने के लिए, मांसपेशियों के एक असमान रूप से कटे हुए टुकड़े (बाइसेप्स या गैस्ट्रोकेनमियस) को 50% ग्लिसरॉल घोल में सावधानीपूर्वक कुचल दिया जाता है ताकि विदारक सुइयों का उपयोग करके सबसे पतले तंतुओं में जा सकें। कुचली हुई मांसपेशियों को दो कांच की स्लाइडों के बीच निचोड़ा जाता है और देखने के अंधेरे क्षेत्र में माइक्रोस्कोप के कम आवर्धन पर जांच की जाती है। ट्राइकिनोसिस के लिए मांसपेशियों की जांच बीमारी के 8 वें दिन से पहले नहीं करने की सलाह दी जाती है। त्रिचिनेला लार्वा मांसपेशियों में एक कुंडलित स्थिति में होते हैं: वे नींबू के आकार के कैप्सूल में संलग्न होते हैं।

एक छवि।ए - मांसपेशियों में त्रिचिनेला लार्वा; बी - त्रिचिनेला के कैल्सीफाइड कैप्सूल।

प्रतिदीप्तिदर्शन

सबसे अधिक बार, फ्लोरोस्कोपी का उपयोग इचिनोकोकोसिस के निदान के लिए किया जाता है और, कम अक्सर, सिस्टिकिकोसिस। कैल्सीफिकेशन (लंबी बीमारी के मामलों में) के बाद ही फ्लोरोस्कोपी पर सिस्टिकेरसी पाए जाते हैं। हाल के वर्षों में, फ्लोरोस्कोपी का उपयोग प्रारंभिक लार्वा चरण में और आंशिक रूप से आंतों के चरण में एस्कारियासिस के निदान के लिए भी किया गया है।

फेफड़ों में एस्केरिस लार्वा (और हुकवर्म) के प्रवास की अवधि के दौरान, अस्थिर, कभी-कभी कई भड़काऊ फॉसी पाए जाते हैं; उसी समय, रक्त में महत्वपूर्ण ईोसिनोफिलिया प्रकट होता है।

प्रभावित व्यक्तियों की आंतों की फ्लोरोस्कोपी पर यौन रूप से परिपक्व राउंडवॉर्म स्पष्ट रूप से दिखाई देते हैं। यह विधि, इसकी जटिलता और बोझिलता के बावजूद, नकारात्मक स्कैटोलॉजिकल विश्लेषण वाले मामलों में एस्कारियासिस के निदान के लिए एक अतिरिक्त विधि के रूप में उपयोग की जानी चाहिए। ईएस गेसेलेविच के अनुसार, फ्लोरोस्कोपी द्वारा पहचाने गए एस्कारियासिस वाले 180 रोगियों में से 54 एस्केरिस अंडे मल में नहीं पाए गए (देखें)।

7.7. कृमि के अंडों और लार्वा की व्यवहार्यता का निर्धारण करने के तरीके

हेल्मिंथ अंडे की व्यवहार्यता उनकी उपस्थिति से, महत्वपूर्ण रंगों के साथ धुंधला होकर, इष्टतम परिस्थितियों में खेती करके और एक जैविक नमूना स्थापित करके निर्धारित की जाती है।

7.7.1. उपस्थिति से अंडे या हेलमिन्थ के लार्वा की व्यवहार्यता का निर्धारण

हेल्मिंथ के अंडों को पहले कम आवर्धन पर, फिर उच्च आवर्धन पर सूक्ष्मदर्शी किया जाता है। हेल्मिन्थ के विकृत और मृत अंडों में, खोल फटा हुआ या अंदर की ओर मुड़ा हुआ होता है, प्लाज्मा बादलदार, ढीला होता है। खंडित अंडों में, दरार वाली गेंदें (ब्लास्टोमेरेस) आकार में असमान होती हैं, आकार में अनियमित होती हैं, और अक्सर एक ध्रुव पर स्थानांतरित हो जाती हैं। कभी-कभी असामान्य अंडे होते हैं, जो बाहरी विकृति होने पर सामान्य रूप से विकसित होते हैं। राउंडवॉर्म के जीवित लार्वा में, बारीक दानेदारता केवल शरीर के मध्य भाग में मौजूद होती है, जैसे ही वे मरते हैं, यह पूरे शरीर में फैल जाती है, बड़े चमकदार हाइलिन रिक्तिकाएं दिखाई देती हैं, तथाकथित "मोती के तार"।

एस्केरिड्स, व्हिपवर्म, पिनवॉर्म के परिपक्व अंडों की व्यवहार्यता निर्धारित करने के लिए, लार्वा के सक्रिय आंदोलनों को तैयारी को थोड़ा गर्म करने (37 डिग्री सेल्सियस से अधिक नहीं के तापमान पर) के कारण होना चाहिए। एक विदारक सुई या चिमटी के साथ तैयारी के कवर ग्लास पर दबाकर अंडे के खोल से अलग होने के बाद एस्केरिस और व्हिपवर्म लार्वा की व्यवहार्यता का निरीक्षण करना अधिक सुविधाजनक होता है।

एस्केरिड्स के आक्रामक लार्वा में, एक टोपी अक्सर देखी जाती है जो सिर के अंत में छूट जाती है, और अंडे में विकास पूरा करने वाले व्हिपवर्म के लार्वा में, इस जगह पर उच्च आवर्धन पर एक स्टाइललेट पाया जाता है। हेल्मिंथ के मृत लार्वा, उनके स्थान की परवाह किए बिना (अंडे में या उसके बाहर), शरीर के क्षय को नोटिस करते हैं। इस मामले में, लार्वा की आंतरिक संरचना ढेलेदार या दानेदार हो जाती है, और शरीर बादल और अपारदर्शी हो जाता है। शरीर में रिक्तिकाएँ पाई जाती हैं, और छल्ली पर विराम पाए जाते हैं।

टेनिड ओंकोस्फीयर (गोजातीय, पोर्सिन टैपवार्म, आदि) की व्यवहार्यता भ्रूण की गति से निर्धारित होती है जब वे पाचन एंजाइमों के संपर्क में आते हैं। अंडों को कुत्ते के गैस्ट्रिक जूस या कृत्रिम ग्रहणी के रस के साथ वॉच ग्लास पर रखा जाता है। उत्तरार्द्ध की संरचना: अग्नाशय - 0.5 ग्राम, सोडियम बाइकार्बोनेट - 0.09 ग्राम, आसुत जल - 5 मिली। अंडे के साथ घड़ी के चश्मे को थर्मोस्टैट में 36 - 38 डिग्री सेल्सियस पर 4 घंटे के लिए रखा जाता है। इस मामले में, जीवित भ्रूण झिल्लियों से मुक्त हो जाते हैं। जीवित ओंकोस्फीयर के गोले भी अम्लीकृत पेप्सिन में और ट्रिप्सिन के एक क्षारीय घोल में 6-8 घंटे के बाद थर्मोस्टैट में 38 डिग्री सेल्सियस पर घुल जाते हैं।

यदि टेनिड अंडे को सोडियम सल्फाइड के 1% घोल या सोडियम हाइपोक्लोराइट के 20% घोल में, या क्लोरीन पानी के 1% घोल में 36 - 38 ° C पर रखा जाता है, तो परिपक्व और जीवित भ्रूण को खोल से मुक्त किया जाता है और नहीं 1 दिन के दौरान बदलें। अपरिपक्व और मृत ओंकोस्फीयर सिकुड़ते या सूज जाते हैं और नाटकीय रूप से बढ़ जाते हैं और फिर 10 मिनट से 2 घंटे के भीतर "विघटित" हो जाते हैं। टेनिड्स के जीवित भ्रूण भी सक्रिय रूप से 1% सोडियम क्लोराइड घोल, 0.5% सोडियम बाइकार्बोनेट घोल और पित्त के मिश्रण में 36 - 38 ° C पर सक्रिय रूप से चलते हैं।

पौधों और जल निकायों की अन्य वस्तुओं से एकत्र किए गए प्रावरणी एडोल्सेरिया की व्यवहार्यता की जाँच एक माइक्रोस्कोप के तहत एक हीटिंग चरण के साथ खारा में कांच की स्लाइड पर उनकी जांच करके की जाती है। गर्म होने पर, सिस्ट में ट्रेमेटोड लार्वा हिलने लगता है।

पिग्मी टैपवार्म के अंडों की व्यवहार्यता निर्धारित करने के लिए, आयोनिना एनएस की विधि सबसे सरल है: जीवित अंडों में, भ्रूण के हुक की औसत जोड़ी या तो पार्श्व वाले के समानांतर होती है, या बाद वाले कम के आधार पर एक कोण बनाते हैं। माध्यिका के साथ 45 ° से अधिक। मृत अंडों में, पार्श्व जोड़े 45 ° से अधिक की औसत जोड़ी के साथ आधार पर एक कोण बनाते हैं, या हुक बेतरतीब ढंग से बिखरे हुए होते हैं (उनकी युग्मित व्यवस्था खो जाती है); कभी-कभी भ्रूण की झुर्रियां होती हैं, ग्रैन्युलैरिटी का निर्माण होता है। तापमान में तेज बदलाव के दौरान ऑन्कोस्फीयर के आंदोलनों की उपस्थिति पर एक अधिक सटीक विधि आधारित है: 5 - 10 ° से 38 - 40 ° C तक।

अपरिपक्व निमेटोड अंडों की व्यवहार्यता का निर्धारण एक आर्द्र कक्ष (पेट्री डिश) में किया जाना चाहिए, एस्केरिस अंडे को 3% फॉर्मेलिन घोल में एक आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड घोल में 24-30 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर तैयार किया जाना चाहिए, व्हिपवर्म अंडे को 3 में रखा जाना चाहिए। 30% - 35 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर% हाइड्रोक्लोरिक एसिड समाधान; 37 डिग्री सेल्सियस पर आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड समाधान में पिनवॉर्म अंडे। बेहतर वातन के लिए पेट्री डिश को सप्ताह में 1 से 2 बार खोलना चाहिए और फिल्टर पेपर को फिर से साफ पानी से गीला करना चाहिए।

सप्ताह में कम से कम 2 बार हेल्मिंथ अंडे के विकास का अवलोकन किया जाता है। 2-3 महीनों के भीतर विकास के संकेतों की अनुपस्थिति उनकी गैर-व्यवहार्यता को इंगित करती है। हेल्मिंथ अंडे के विकास के संकेत पहले कुचलने के चरण हैं, अंडे की सामग्री को अलग-अलग ब्लास्टोमेरेस में विभाजित करना। पहले दिनों के दौरान, 16 ब्लास्टोमेरेस विकसित होते हैं, जो दूसरे चरण में गुजरते हैं - मोरुला, आदि।

हुकवर्म के अंडों को एक डाट से बंद कांच के सिलेंडर (50 सेमी ऊंचे और 7 सेमी व्यास) में सुसंस्कृत किया जाता है। एक अर्ध-तरल स्थिरता के लिए पानी से पतला हुकवर्म अंडे के साथ बाँझ रेत, लकड़ी का कोयला और मल के बराबर मात्रा का मिश्रण, एक ग्लास ट्यूब का उपयोग करके सिलेंडर के नीचे सावधानी से डाला जाता है। 25 - 30 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर अंधेरे में बसने के 1 - 2 दिनों के दौरान, अंडों से रेबडिटॉइड लार्वा निकलता है, और 5-7 दिनों के बाद वे पहले से ही फाइलेरिफॉर्म बन जाते हैं: लार्वा सिलेंडर की दीवारों को रेंगते हैं, जहां वे नग्न आंखों से भी दिखाई दे रहे हैं।

ट्रेमेटोड अंडे जो स्वाभाविक रूप से पानी में विकसित होते हैं, जैसे कि ओपिसथोर्चिस, डिपाइलोबोथ्रिड्स, फासिओल्स, और अन्य, वॉच ग्लास, पेट्री डिश या किसी अन्य बर्तन में रखे जाते हैं, और साधारण पानी की एक छोटी परत डाली जाती है। फासीओला अंडे की खेती करते समय, यह ध्यान में रखा जाना चाहिए कि वे अंधेरे में तेजी से विकसित होते हैं, जबकि मिरेसिडियम 9-12 दिनों के बाद 22-24 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर जीवित अंडों में बनता है। जब कंपकंपी के अंडे विकसित करने की माइक्रोस्कोपी की जाती है, तो मिरासिडियम मूवमेंट स्पष्ट रूप से दिखाई देते हैं। फासिओला मिरासिडियम अंडे के छिलकों से केवल प्रकाश में ही निकलता है।

फुलबॉर्न विधि। पशु चारकोल के साथ पेट्री डिश में अगर पर हुकवर्म और स्ट्रॉन्गिलिड लार्वा की खेती की जाती है। थर्मोस्टेट में 25 - 30 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर 5-6 घंटे तक रखने के बाद, लार्वा बैक्टीरिया के रास्ते को पीछे छोड़ते हुए अगर पर फैल गया।

हरदा और मोरी की विधि। एक रैक में रखी परखनलियों में 7 मिली आसुत जल मिलाया जाता है। एक लकड़ी की छड़ी के साथ 0.5 ग्राम मल लें और बाएं किनारे से फिल्टर पेपर (15 x 150 मिमी) 5 सेमी पर एक धब्बा बनाएं (यह ऑपरेशन प्रयोगशाला की मेज की सतह की रक्षा के लिए कागज की एक शीट पर किया जाता है)। फिर स्मीयर वाली पट्टी को ट्यूब में डाला जाता है ताकि स्मीयर से मुक्त बायां सिरा ट्यूब के नीचे तक पहुंच जाए। सिलोफ़न के एक टुकड़े के साथ ऊपरी छोर को कवर करें और इसे एक लोचदार बैंड के साथ कसकर लपेटें। टेस्ट ट्यूब पर नंबर, विषय का नाम लिखें। इस अवस्था में, परखनलियों को 28 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर 8-10 दिनों के लिए संग्रहित किया जाता है। लार्वा का अध्ययन करने के लिए, सिलोफ़न कवर को हटा दें और हटा दें और चिमटी के साथ फिल्टर पेपर की एक पट्टी हटा दें। इस मामले में सावधानी बरती जानी चाहिए, क्योंकि कम संख्या में संक्रमित लार्वा फिल्टर पेपर के ऊपरी सिरे या परखनली की दीवार तक जा सकते हैं और सिलोफ़न की सतह के नीचे घुस सकते हैं।

ट्यूबों को 15 मिनट के लिए 50 डिग्री सेल्सियस पर गर्म पानी के स्नान में रखा जाता है, जिसके बाद सामग्री हिल जाती है और जल्दी से 15 मिलीलीटर लार्वा अवसादन ट्यूब में डाल दी जाती है। सेंट्रीफ्यूजेशन के बाद, सतह पर तैरनेवाला हटा दिया जाता है, और अवक्षेप को एक कांच की स्लाइड में स्थानांतरित कर दिया जाता है, एक कवरस्लिप के साथ कवर किया जाता है और कम आवर्धन के तहत सूक्ष्मदर्शी किया जाता है।

फाइलेरिफॉर्म लार्वा के विभेदक निदान के लिए, तालिका 3 में डेटा का उपयोग करना आवश्यक है।

टेबल तीन

ए। डुओडेनेल, एन। अमेरिकन, एस। स्टेरकोरेलिस, ट्राइकोस्ट्रोंगाइलस एसपी के filariated लार्वा के विभेदक निदान।

लार्वा	आयाम	विशेषणिक विशेषताएं
ए. ग्रहणी	शरीर की लंबाई लगभग 660 माइक्रोन, टोपी - 720 एनएम	टोपी की पट्टी कम स्पष्ट होती है, मुंह का फलाव कम ध्यान देने योग्य होता है, शरीर का अग्र भाग (लेकिन टोपी नहीं) कुंद होता है, आंतों की नली का व्यास ग्रासनली के बल्ब से छोटा होता है, दुम का अंत कुंद होता है
एन. अमेरिकन	शरीर की लंबाई लगभग 590 माइक्रोन, टोपी - 660 एनएम	म्यान स्पष्ट रूप से धारीदार है, विशेष रूप से शरीर के दुम भाग में, मुंह का प्रक्षेपण अंधेरा लगता है, शरीर का पूर्वकाल अंत (लेकिन म्यान नहीं) एक मुर्गी के अंडे के संकीर्ण छोर की तरह गोल होता है, आंतों का पूर्वकाल भाग ट्यूब इस तरह के व्यास का होता है जैसे एसोफेजल बल्ब, दुम का अंत तेज होता है
एस. स्टेरकोरेलिस	शरीर की लंबाई लगभग 500 µm	म्यान के बिना लार्वा, घेघा शरीर की लगभग आधी लंबाई है, पूंछ कुंद या शाखित है
ट्राइकोस्ट्रॉन्गिलस सपा।	शरीर की लंबाई लगभग 750 माइक्रोन	आंतों का लुमेन सीधा नहीं होता है, लेकिन ज़िगज़ैग, दुम का अंत गोल होता है और इसमें एक बटन का आकार होता है

7.7.2. अंडे और हेलमन्थ्स के लार्वा को धुंधला करने के तरीके

ज्यादातर मामलों में मृत ऊतक जीवित लोगों की तुलना में रंगों को तेजी से समझते हैं। इन विशेषताओं का उपयोग हेल्मिन्थोलॉजी में अंडे की व्यवहार्यता और हेलमिन्थ के लार्वा को निर्धारित करने के लिए किया जाता है। हालांकि, कुछ मामलों में, कुछ पेंट को मृत ऊतकों की तुलना में जीवित ऊतकों द्वारा बेहतर माना जाता है।

जीवित और मृत अंडों और लार्वा के विभेदक निर्धारण के लिए, निम्नलिखित पेंट और विधियों का उपयोग किया जाता है।

मेथिलीन ब्लू ल्यूकोबेस का उपयोग अक्सर जीवित और मृत ऊतकों को दागने के लिए किया जाता है। एक जीवित कोशिका या ऊतक मेथिलीन ब्लू को एक रंगहीन ल्यूकोबेस में कम कर देता है; मृत ऊतक में यह क्षमता नहीं होती है, और इसलिए एक रंग प्राप्त करता है।

अंडे की स्थिति के लिए मानदंड भ्रूण का धुंधलापन है, लेकिन खोल नहीं। यह क्षमता अंडे की मृत्यु की स्थितियों से संबंधित है। उन मामलों में जहां मृत अंडे में रेशेदार खोल अपने अर्ध-पारगम्य गुणों को नहीं खोता है, यह रंगों को पारित नहीं करेगा, इसलिए, मृत भ्रूण दाग नहीं होगा। एक रंगीन भ्रूण हमेशा अंडे की मृत्यु का संकेत देता है।

एस्केरिस अंडे को रंगने के लिए, आप कास्टिक क्षार (मिथाइलीन ब्लू 0.05 ग्राम, कास्टिक सोडा 0.5 ग्राम, लैक्टिक एसिड - 15 मिली) के साथ लैक्टिक एसिड के घोल में मेथिलीन ब्लू का उपयोग कर सकते हैं। जीवित अंडे रंग नहीं समझते हैं; मृत अंडों के भ्रूण नीले हो जाते हैं। एस्केरिस लार्वा को 1:10,000 की सांद्रता में ब्रिलियंट-क्रेसिल ब्लू पेंट के मूल समाधान के साथ दाग दिया जाता है: एस्केरिस अंडे के साथ तरल की एक बूंद और मूल पेंट समाधान की एक बूंद कांच की स्लाइड पर लागू होती है। तैयारी को एक कवरस्लिप के साथ कवर किया जाता है, जिसे एक विदारक सुई के साथ हल्के टैपिंग के साथ कांच की स्लाइड के खिलाफ कसकर दबाया जाता है। माइक्रोस्कोप के तहत, रची हुई लार्वा की संख्या और उनके धुंधला होने की डिग्री देखी जाती है; जिसके बाद 2 से 3 घंटे के बाद फिर से उसी दवा की समीक्षा की जाती है। केवल विकृत लार्वा जो 2 घंटे तक दाग नहीं करते हैं उन्हें जीवित माना जाता है। मृत लार्वा या तो अंडों से नहीं निकलते हैं, या खोल के टूटने पर (आंशिक रूप से या पूरी तरह से) दाग लग जाते हैं।

पक्षियों के एस्केरिडिया अंडे की व्यवहार्यता का निर्धारण करते समय, आयोडीन के 5% अल्कोहल समाधान के साथ तैयारी को दागना संभव है। जब यह दवा पर लगाया जाता है, तो मृत एस्केरिड अंडे के भ्रूण 1 - 3 सेकंड के लिए। नारंगी रंगे हैं।

opisthorchis के मृत अंडे और गोजातीय टैपवार्म के ओंकोस्फीयर को टोल्यूडीन ब्लू (1:1000) के घोल से दाग दिया जाता है, और गोजातीय टैपवार्म के मृत ओंकोस्फीयर को ब्रिलियंट-क्रेसिल ब्लू (1:10000) के घोल से दाग दिया जाता है। इसी समय, मृत और जीवित दोनों अंडों के भ्रूण और गोले रंग प्राप्त कर लेते हैं। इसलिए, धुंधला होने के बाद, अंडे और ओंकोस्फीयर को शुद्ध पानी में धोया जाता है और इसके अलावा सफ़्रानिन (1:10,000 अल्कोहल, 10 डिग्री सेल्सियस के कमजोर पड़ने पर) के साथ दाग दिया जाता है। अल्कोहल गोले से डाई को हटा देता है, और सेफ्रेनिन लाल हो जाता है। नतीजतन, जीवित अंडे लाल हो जाते हैं; मृत भ्रूण वाले अंडे - नीले रंग में, और खोल लाल रहता है। गोजातीय टैपवार्म के ओंकोस्फीयर के मृत भ्रूण जल्दी से, कुछ ही मिनटों के भीतर, 1: 4000 के कमजोर पड़ने पर चमकदार लाल या गुलाबी रंग के सफ्रानिन या नीले रंग के साथ चमकदार-क्रेसिल नीले रंग के होते हैं, या इंडिगो कारमाइन के साथ 1: 1000 - 1 के कमजोर पड़ने पर होते हैं। :2000. इन रंगों के प्रभाव में जीवित भ्रूण 2-7 घंटे के बाद भी नहीं बदलते हैं।

पिग्मी टैपवार्म अंडे की व्यवहार्यता निर्धारित करने के लिए, निम्नलिखित पेंट का उपयोग करने की अनुशंसा की जाती है:

1. शानदार क्रेसिल ब्लू (1:8000) - 1 घंटे के बाद, मृत अंडों का ओंकोस्फीयर विशेष रूप से चमकीले रंग का होता है, जो बाकी अंडे की पीली या रंगहीन पृष्ठभूमि के खिलाफ तेजी से खड़ा होता है।

2. सफ्रानिन (2 घंटे के लिए 1:8000 और 3 से 5 घंटे के लिए 1:5000)।

3. 1:2 कमजोर पड़ने पर पाइरोगलिक एसिड का 50% घोल - जब 29 - 30 ° C (तापमान जितना कम, धुंधला होने की प्रक्रिया) के तापमान पर 1 घंटे के लिए उजागर किया जाए।

7.7.3. कृमि के अंडों और लार्वा के अध्ययन के लिए ल्यूमिनसेंट विधि

फ्लोरोसेंट माइक्रोस्कोपी से अंडे को नुकसान पहुंचाए बिना जीवित और मृत वस्तुओं में अंतर करना संभव हो जाता है। प्रतिदीप्ति के लिए, पराबैंगनी किरणों का उपयोग नहीं किया जाता है, लेकिन एक पारंपरिक माइक्रोस्कोप और कांच की स्लाइड के साथ दृश्य प्रकाश के नीले-बैंगनी भाग का उपयोग किया जाता है; रंग फिल्टर का एक विशेष सेट OI-18 प्रकाशक में जोड़ा जाता है।

राउंडवॉर्म, पिनवॉर्म, पिग्मी टैपवार्म, गोजातीय टैपवार्म, टैपवार्म और अन्य हेल्मिन्थ के जीवित और मृत अंडे अलग-अलग तरह से चमकते हैं। यह घटना रंगों के उपयोग के बिना प्राथमिक ल्यूमिनेसेंस के दौरान और फ्लोरोक्रोमेस (एक्रिडीन ऑरेंज, कोरिफोस्फीन, प्रिमुलिन, ऑरोलिन, बेरलेरिन सल्फेट, ट्रिपाफ्लेविन, रिवानोल, क्विनाक्राइन, आदि) के साथ दागने पर दोनों में देखी जाती है।

बिना दाग वाले, जीवित गैर-खंडित राउंडवॉर्म अंडे पीले रंग के रंग के साथ चमकीले हरे रंग में चमकते हैं; मृत अंडों में, खोल गहरे हरे रंग के भ्रूणीय भाग की तुलना में अधिक चमकीला हरा प्रकाश उत्सर्जित करता है; राउंडवॉर्म के अंडों में लार्वा के साथ केवल खोल दिखाई देता है, जबकि मृत में, खोल और लार्वा दोनों चमकीले पीले रंग के होते हैं।

पिनवॉर्म और बौने टैपवार्म के गैर-रंजित और गैर-खंडित जीवित अंडे एक हरे-पीले प्रकाश का उत्सर्जन करते हैं; मृत अंडों में, खोल गहरे हरे रंग के भ्रूण द्रव्यमान की पृष्ठभूमि के खिलाफ तीव्रता से चमकता है।

द्वितीयक ल्यूमिनेसेंस के साथ (जब 30 मिनट से 2 घंटे तक 1:10000 और 1:50000 के कमजोर पड़ने पर एक्रिडीन नारंगी धुंधला हो जाता है), जीवित और मृत नेमाटोड, कंपकंपी और सेस्टोड का खोल अलग तरह से चमकता है।

एस्केरिड्स, टोक्सोकार, पिनवॉर्म, पिग्मी टैपवार्म, रैट टैपवार्म, बुल टैपवार्म, टैपवार्म के जीवित और मृत अंडों का खोल नारंगी-लाल हो जाता है। एस्केरिस, टोक्सास्करिस, रैट टैपवार्म, वाइड टैपवार्म और गोजातीय टैपवार्म के ओंकोस्फीयर के जीवित अंडों के भ्रूण एक सुस्त गहरे हरे या भूरे-हरे रंग में होते हैं। इन कृमियों के अंडों के मृत भ्रूण एक "जलते हुए" नारंगी-लाल रंग का उत्सर्जन करते हैं। जीवित पिनवॉर्म लार्वा और टॉक्सोकार्स (अंडे के छिलके) एक सुस्त ग्रे-हरे रंग की रोशनी का उत्सर्जन करते हैं, जब वे मर जाते हैं, तो रंग सिर के अंत से "जलते हुए" हल्के हरे, फिर पीले, नारंगी और अंत में चमकीले नारंगी में बदल जाता है।

जब फ्लोरोक्रोमेस के साथ दाग दिया जाता है - कोरिफोस्फिलम, प्रिमुलिन, एस्केरिड्स और व्हिपवर्म के मृत अंडे बकाइन-पीले से तांबे-लाल तक चमक दिखाते हैं। व्यवहार्य अंडे चमकते नहीं हैं, लेकिन गहरे हरे रंग में बदल जाते हैं।

ट्रेमेटोड्स (पैरागोनिमस और क्लोनोर्चिस) के जीवित अंडे एक्रिडीन नारंगी के साथ धुंधला होने के बाद नहीं चमकते हैं, और पीले-हरे रंग का रंग मृत अंडों से आता है।

हेलमिंथ लार्वा की व्यवहार्यता का निर्धारण करने के लिए ल्यूमिनेसेंस विधि का भी उपयोग किया जा सकता है। तो, फ्लोरोक्रोमाइज्ड एसिडिन ऑरेंज (1:2000) लार्वा ऑफ स्ट्रांगाइलेट, रबदिता ग्लो: लाइव - ग्रीन (एक टिंट के साथ), डेड - ब्राइट ऑरेंज लाइट के घोल के साथ।

जीवित मिरेसिडिया जो खोल से निकले हैं, सिलिया के हल्के पीले रंग के हल्के पीले रंग के कोरोला के साथ एक मंद नीली रोशनी का उत्सर्जन करते हैं, लेकिन मृत्यु के 10-15 मिनट बाद वे एक उज्ज्वल "जलती हुई" हल्के हरे, और फिर नारंगी-लाल रोशनी के रूप में दिखाई देते हैं।

7.7.4. जैविक परख विधि

उदाहरण के लिए, एस्केरिस अंडे (एस्करिस सूअर, मानव, टोक्सोकारा, टोक्सास्करिस, आदि) प्रति जानवर (गिनी सूअर, चूहे) की व्यवहार्यता निर्धारित करने के लिए, एक विकसित लार्वा के साथ कम से कम 100-300 अंडे की आवश्यकता होती है। आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड के घोल में एस्केरिस के अंडे को माउस या गिनी पिग के मुंह के माध्यम से पिपेट किया जाता है। 6-7 दिनों के बाद, जानवर को मार दिया जाता है, खोला जाता है और एस्केरिस लार्वा की उपस्थिति के लिए उसके जिगर और फेफड़ों की अलग-अलग जांच की जाती है। ऐसा करने के लिए लीवर और फेफड़ों को कैंची से छोटे-छोटे टुकड़ों में काट दिया जाता है और बर्मन या सुप्रयाग विधि (धारा 6.1.2) के अनुसार जांच की जाती है।

यदि जानवरों को जीवित आक्रामक अंडों से संक्रमित किया गया था, तो यकृत और फेफड़ों में शव परीक्षा में, प्रवासी एस्केरिस लार्वा पाए जाते हैं।

संक्रमण के मामले में, प्रयोगशाला जानवरों के मल में फासिओला अंडे 2 महीने के बाद खरगोशों में, गिनी सूअरों में - 50 दिनों के बाद, चूहों में - 35-40 दिनों के बाद पाए जा सकते हैं।

तेजी से प्रतिक्रिया के लिए, प्रयोगशाला जानवरों को 20-30 दिनों के बाद खोला जाता है और युवा फासिओल की उपस्थिति के लिए यकृत की जांच की जाती है।

पिग्मी टैपवार्म अंडों की व्यवहार्यता का निर्धारण करने के लिए, उन्हें पहले से असंक्रमित सफेद चूहों को खिलाने की भी सिफारिश की जाती है, इसके बाद 92-96 घंटों के बाद जानवरों की शव परीक्षा और आंतों के विली या आंतों के लुमेन में सेस्टोड में सिस्टिकिकोइड्स का पता लगाया जाता है।

opisthorchis अंडे की व्यवहार्यता का निर्धारण करने के लिए, एक विधि की सिफारिश की जाती है (जर्मन S.M., Beer S.A., 1984), जो कि miracidium हैचिंग ग्रंथि के भौतिक-रासायनिक सक्रियण और लार्वा की मोटर गतिविधि की उत्तेजना पर आधारित है, जो अंडे के उद्घाटन की ओर जाता है। ढक्कन और प्रायोगिक स्थितियों में मिरासिडियम की सक्रिय रिहाई।

पानी में opisthorchis अंडे का निलंबन 10 - 12 डिग्री सेल्सियस तक ठंडा होता है (बाद के सभी ऑपरेशन कमरे के तापमान 19 - 20 डिग्री सेल्सियस पर किए जाते हैं)। एक अपकेंद्रित्र ट्यूब में 100-150 अंडे वाले निलंबन की 1 बूंद डाली जाती है। परखनली को 5-10 मिनट के लिए तिपाई में रखा जाता है। इस समय के दौरान, सभी अंडों के पास नीचे तक डूबने का समय होता है। फिर, फिल्टर पेपर की एक पट्टी के साथ, अतिरिक्त पानी को ध्यान से चूसा जाता है और परखनली में एक विशेष माध्यम की 2 बूंदें डाली जाती हैं। माध्यम 0.005 एम ट्रिस-एचसीएल बफर में तैयार किया गया है; 12 - 13% इथेनॉल समाधान और डाई (मैजेंटा, सेफ्रेनिन, ईओसिन, मेथिलीन ब्लू, आदि) बफर में जोड़े जाते हैं। परखनली को हिलाया जाता है, इसकी सामग्री को एक पिपेट के साथ कांच की स्लाइड में स्थानांतरित किया जाता है और थोड़ा हिलाते हुए 10 मिनट के लिए छोड़ दिया जाता है। फिर संकेतित माध्यम की 2 बूँदें डालें। तैयारी 20x बढ़ाई पर एक पारंपरिक प्रकाश माइक्रोस्कोप के तहत माइक्रोस्कोपी के लिए तैयार है।

इस समय के दौरान, व्यवहार्य लार्वा का ढक्कन खुलता है, और मिरासिडियम सक्रिय रूप से संकेतित माध्यम में प्रवेश करता है। इसमें एथेनॉल की मौजूदगी के कारण 2-5 मिनट के बाद इन्हें स्थिर कर दिया जाता है और फिर डाई से दाग दिया जाता है। माइक्रोस्कोपी के तहत उन्हें आसानी से पहचाना और गिना जा सकता है।