تجزیه و تحلیل برای سیفلیس ELISA - رمزگشایی تجزیه و تحلیل. هنجار و انحرافات

در ارتباط با توسعه فن آوری های سلولی، زیست شناسی مولکولی، ژنتیک، فیزیک، شیمی و تعدادی دیگر از رشته های با تکنولوژی بالا، روش های جدید با دقت بالا و با تکنولوژی بالا در عمل روزمره معرفی می شوند. این روندهای بین رشته ای هم بر حوزه دانش پزشکی و هم حوزه های مرتبط با مشکلات بیولوژیکی و بیوشیمیایی تأثیر می گذارد. در طول ده سال گذشته، روشی برای تشخیص آزمایشگاهی بالینی به نام ایمونواسی آنزیمی رایج شده و در عمل انبوه معرفی شده است.

به طور کلی، از اوایل دهه 1980، فناوری‌های واکنش‌های آنزیمی و رادیولوژیک ایمونولوژیک به طور گسترده در تایپ کردن سلول‌ها، کشت سلولی و بافت‌های مختلف استفاده شده است. با این حال، این روش ها بسیار پرزحمت بودند، یکپارچه نبودند، استاندارد نبودند، که مانع استفاده از آنها برای اهداف پزشکی و تشخیصی در مقیاس گسترده شد. فقط آزمایشگاه های باریک، دانش بر و بسیار تخصصی از چنین روش هایی استفاده می کردند.

اما با پیشرفت تکنولوژی، میکروفناوری و تولید انواع مواد بیوپلیمری، امکان تولید کیت های آماده ایمونواسی آنزیمی قابل استفاده در آزمایشگاه های موسسات پزشکی عمومی فراهم شده است. الایزا به طور گسترده برای تشخیص انواع عفونت ها (کلامیدیا، سیفلیس، سیتومگالوویروس، توکسوپلاسموز، تبخال و غیره) اعم از حاد و مزمن و همچنین اشکال نهفته که بدون علائم بالینی رخ می دهد استفاده می شود.این روش برای کنترل بیماری های مزمن نیز کاربرد دارد. . بیایید سعی کنیم بفهمیم که چه نوع روشی است و چه اصولی زیربنای آن است؟

اجزای آنزیمی ایمونواسی - واکنش ایمنی و واکنش آنزیمی

ایمونواسی آنزیمی، همانطور که از نام آن پیداست، از دو جزء مختلف تشکیل شده است - یک پاسخ ایمنی و یک واکنش آنزیمی. واکنش ایمنی، اتصال مولکول‌های بیولوژیکی، عناصر سلول یا میکروارگانیسم‌ها را تولید می‌کند که در واقع در تلاش برای شناسایی هستند و واکنش آنزیمی به شما اجازه می‌دهد تا نتیجه واکنش ایمنی را ببینید و اندازه‌گیری کنید. یعنی پاسخ ایمنی بخشی از یک تکنیک پیچیده است که در واقع میکروب مورد نظر را شناسایی می کند. و واکنش آنزیمی بخشی از یک تکنیک پیچیده است که به شما امکان می دهد نتیجه یک واکنش ایمنی را به شکلی ترجمه کنید که برای چشم قابل مشاهده است و برای اندازه گیری با روش های معمول شیمیایی قابل دسترسی است. بر اساس این ساختار روش ایمونواسی آنزیمی، هر دو قسمت آن را به طور جداگانه تجزیه و تحلیل خواهیم کرد.

واکنش ایمنی، چیست؟ آنتی بادی یا آنتی ژن چیست؟

پاسخ ایمنی چیست؟ آنتی ژن چیست؟
اول از همه، بیایید ببینیم که واکنش های ایمنی چیست. واکنش های ایمنی- اینها واکنش های خاص اتصال یک آنتی ژن به یک آنتی بادی با تشکیل یک کمپلکس ایمنی هستند. چه مفهومی داره؟ در سطح هر سلول از هر موجودی ساختارهای خاصی وجود دارد که به آنها می گویند آنتی ژن ها. آنتی ژن ها به طور کلی مولکول هایی هستند که اطلاعات یک سلول را حمل می کنند (مشابه اطلاعات روی نشان یک شخص که اطلاعات اولیه این شخص را نشان می دهد).

آنتی ژن های فردی و گونه ای - چیست؟ چرا این آنتی ژن ها مورد نیاز است؟

در دسترس آنتی ژن های فردی، یعنی فقط ذاتی این ارگانیسم خاص است. این آنتی ژن های فردی برای همه افراد متفاوت است، برخی شبیه به یکدیگر هستند، اما هنوز متفاوت هستند. هیچ دو نسخه یکسان از آنتی ژن های فردی در طبیعت وجود ندارد!

دومین نوع آنتی ژن اصلی است آنتی ژن های گونه، یعنی ذاتی هر گونه خاصی از موجودات زنده. به عنوان مثال، انسان آنتی ژن گونه خود را دارد که در همه انسان ها مشترک است، موش ها آنتی ژن گونه موش خود را دارند و غیره. در سطح هر سلول، یک آنتی ژن خاص و منفرد لزوما وجود دارد.

آنتی ژن گونه توسط سلول های سیستم ایمنی برای شناسایی "دوست یا دشمن" استفاده می شود.

تشخیص آنتی ژن چگونه اتفاق می افتد؟

یک سلول ایمنی به یک سلول مشکوک متصل می شود و دقیقاً توسط یک آنتی ژن فردی شناسایی می شود. در حافظه سلول ایمنی، «ثبت می‌شود» که «آنتی ژن» آن چگونه است. بنابراین، اگر آنتی ژن یک سلول مشکوک با توصیف "آنتی ژن خود" مطابقت داشته باشد، این سلول بدن خود خطری ندارد. سپس سلول ایمنی "گره می زند" و می رود. و اگر آنتی ژن با توصیف "خود" مطابقت نداشته باشد، سلول ایمنی این سلول را به عنوان "خارجی" شناسایی می کند و بنابراین برای کل ارگانیسم خطرناک است. در این مورد، سلول ایمنی "از شر" خلاص نمی شود، بلکه شروع به از بین بردن جسم خطرناک می کند. دقت چنین تشخیص ایمنی شگفت انگیز است - 99.97٪. تقریبا هیچ اشتباهی وجود ندارد!

آنتی بادی، کمپلکس ایمنی چیست؟
آنتی بادی چیست؟

آنتی بادی یک مولکول ویژه است که بر روی سطح یک سلول ایمنی قرار دارد. این آنتی بادی است که به آنتی ژن های سلول مشکوک متصل می شود. علاوه بر این، آنتی بادی اطلاعات را در داخل سلول، جایی که شناسایی انجام می‌شود، منتقل می‌کند و سیگنال بازگشتی از دو نوع "خود" یا "بیگانه" را دریافت می‌کند. در سیگنال "خود"، آنتی بادی پیوند با آنتی ژن را از بین می برد و سلول را آزاد می کند.

کمپلکس ایمنی چیست؟
با سیگنال "بیگانه"، وضعیت به گونه ای دیگر آشکار می شود. آنتی بادی ارتباط با آنتی ژن را قطع نمی کند، بلکه برعکس با ارسال سیگنال های خاص باعث "تقویت" می شود. از نظر بیولوژیکی، این بدان معنی است که سایر آنتی بادی های واقع در قسمت دیگری از سلول شروع به حرکت به ناحیه ای می کنند که سیگنال خطر از آنجا می آید و همچنین بین خود و آنتی ژن گرفته شده پیوند ایجاد می کند. در نهایت معلوم می شود که آنتی ژن از همه طرف احاطه شده و محکم به آن متصل است. چنین مجموعه آنتی ژن + آنتی بادی نامیده می شود. کمپلکس ایمنی. از این لحظه استفاده از آنتی ژن شروع می شود. اما اکنون ما به جزئیات فرآیند خنثی سازی آنتی ژن علاقه ای نداریم.

انواع آنتی بادی ها (IgA, IgM, IgG, IgD, IgE)
آنتی بادی ها ساختارهای پروتئینی هستند که بر این اساس دارای یک نام شیمیایی هستند که به عنوان مترادف کلمه آنتی بادی استفاده می شود. بنابراین، آنتی بادی = ایمونوگلوبولین.

5 نوع ایمونوگلوبولین (Ig) وجود دارد.که به انواع مختلف آنتی ژن در نقاط مختلف بدن انسان (مثلاً روی پوست، روی غشاهای مخاطی، در خون و غیره) متصل می شوند. یعنی آنتی بادی ها تقسیم کار دارند. این ایمونوگلوبولین ها حروف الفبای لاتین - A، M، G، D، E نامیده می شوند و به صورت زیر تعیین می شوند - IgA، IgM، IgG، IgD، IgE.

در تشخیص، تنها از یک نوع آنتی بادی استفاده می شود که برای میکروبی که مشخص می شود، اختصاصی ترین است. یعنی اتصال این نوع آنتی بادی به آنتی ژن در حال تعیین همیشه اتفاق می افتد. رایج ترین آنها IgG و IgM هستند.

این اصل از پاسخ ایمنی (دقت و ویژگی منحصر به فرد تشخیص شی بیولوژیکی در حال تعیین) است که زمینه ایمونواسی آنزیمی را تشکیل می دهد.به دلیل دقت بالای آنتی بادی ها در تشخیص آنتی ژن ها، دقت کل روش ایمونواسی آنزیمی نیز می باشد. بالاترین

واکنش آنزیمی

واکنش آنزیمی چیست؟ میل ترکیبی، بستر و محصول واکنش چیست؟
اجازه دهید به بررسی واکنش آنزیمی در کار روش ایمونواسی آنزیمی بپردازیم.

واکنش آنزیمی چیست؟

واکنش آنزیمی یک واکنش شیمیایی است که در آن یک ماده با عمل یک آنزیم به ماده دیگر تبدیل می شود. ماده ای که یک آنزیم روی آن اثر می کند نامیده می شود لایه. ماده ای که در نتیجه عمل یک آنزیم به دست می آید، نامیده می شود محصول واکنش. علاوه بر این، ویژگی واکنش آنزیمی به گونه ای است که یک آنزیم خاص فقط روی یک بستر خاص عمل می کند. این خاصیت آنزیم برای تشخیص سوبسترای "خود" نامیده می شود قرابت.

بنابراین، هر آنزیم تنها یک واکنش خاص را انجام می دهد. آنزیم های زیادی در دنیای بیولوژیکی و همچنین واکنش های آنزیمی وجود دارد. در ایمونواسی آنزیمی، فقط چند واکنش آنزیمی استفاده می شود - بیش از 10. در این مورد، چنین واکنش های آنزیمی انتخاب شدند که محصولات آن مواد رنگی هستند. چرا محصولات یک واکنش آنزیمی باید رنگی باشند؟ زیرا یک روش شیمیایی ساده برای محاسبه غلظت یک ماده از محلول رنگی وجود دارد - رنگ سنجی.

روش رنگ سنجی - ذات و اصل

رنگ سنجیاز اندازه گیری چگالی رنگ محلول استفاده می کند و غلظت ماده از چگالی رنگ محاسبه می شود.در این مورد، یک دستگاه مخصوص - رنگ سنج، چگالی رنگ محلول را اندازه می گیرد. در رنگ سنجی، دو نوع وابستگی چگالی رنگ به غلظت یک ماده امکان پذیر است - این یک وابستگی مستقیم یا یک وابستگی با نسبت معکوس است. با یک رابطه مستقیم، هر چه غلظت ماده بیشتر باشد، چگالی رنگ محلول شدیدتر است. در یک رابطه معکوس نسبت، هر چه غلظت یک ماده بیشتر باشد، چگالی رنگ محلول کمتر می شود. از نظر فنی، این اتفاق می افتد: چندین محلول با غلظت مشخص از یک ماده گرفته می شود، چگالی این محلول ها اندازه گیری می شود و نموداری از وابستگی غلظت به چگالی رنگ رسم می شود. نمودار کالیبراسیون).

سپس چگالی رنگ محلول اندازه گیری می شود که غلظت آن در حال تعیین است و با توجه به نمودار کالیبراسیون مقدار غلظت مربوط به سطح چگالی رنگ اندازه گیری شده محلول به طور خودکار اتفاق می افتد.

در ایمونواسی آنزیمی، آنزیم های زیر بیشتر مورد استفاده قرار می گیرند: پراکسیداز، آلکالین فسفاتاز، آویدین.

واکنش های ایمونولوژیک و آنزیمی چگونه در ایمونواسی آنزیمی ترکیب می شوند؟ اکنون به بررسی خود سنجش ایمونوسوربنت مرتبط با آنزیم می پردازیم. شامل چه مراحلی می شود و در طی این واکنش ها چه اتفاقی می افتد؟ ایمونواسی آنزیمی است مستقیم و غیر مستقیم.

ایمونواسی مستقیم آنزیمی - مراحل اجرا

در روش ایمونواسی مستقیم آنزیمی، آنتی بادی های آنتی ژن شناسایی شده، همراه با یک برچسب خاص، استفاده می شود. این برچسب خاص، بستر واکنش آنزیمی است.

اتصال آنتی ژن ها به سطح چاه و اتصال آنتی ژن به آنتی بادی

روش ایمونواسی مستقیم آنزیمی چگونه انجام می شود؟ مواد بیولوژیکی (خون، خراشیدن غشاهای مخاطی، اسمیر) گرفته می شود و در چاه های مخصوص قرار می گیرد. مواد بیولوژیکی به مدت 30-15 دقیقه در چاهک ها باقی می مانند تا آنتی ژن ها بتوانند به سطح چاهک ها بچسبند. علاوه بر این، آنتی‌بادی‌هایی برای آنتی‌ژن شناسایی‌شده به این چاه‌ها اضافه می‌شوند. این بدان معنی است که هنگام تشخیص آنتی ژن ها، به عنوان مثال، سیفلیس، آنتی بادی هایی علیه آنتی ژن های سیفلیس اضافه می شود. این آنتی‌بادی‌ها به صورت صنعتی تولید می‌شوند و آزمایشگاه‌ها کیت‌های آماده را خریداری می‌کنند، این مخلوط از مواد آزمایشی و آنتی‌بادی‌ها برای مدتی (از 30 دقیقه تا 5-4 ساعت) باقی می‌ماند تا آنتی‌بادی‌ها بتوانند آنتی‌ژن «خود» را پیدا کنند و به آن متصل شوند. آنتی ژن های نمونه، آنتی بادی های بیشتری به آنها متصل می شوند.

حذف آنتی بادی های "اضافی".

همانطور که نشان داده شد، آنتی بادی ها نیز با یک برچسب خاص همراه هستند. از آنجایی که آنتی بادی ها بیش از حد اضافه می شوند، همه آنها به آنتی ژن ها متصل نمی شوند و اگر اصلاً آنتی ژنی در نمونه وجود نداشته باشد، بر این اساس، یک آنتی بادی واحد نیز متصل نمی شود. به آنتی ژن مورد نظر. به منظور حذف آنتی بادی های "اضافی"، محتویات چاه ها به سادگی ریخته می شود. در نتیجه، تمام آنتی‌بادی‌های «اضافی» حذف می‌شوند و آنهایی که با آنتی‌ژن‌ها تماس داشته‌اند، باقی می‌مانند، زیرا آنتی‌ژن‌ها به سطح چاهک‌ها «چسبانده شده‌اند». چاه ها چندین بار با یک محلول ویژه شسته می شوند که به شما امکان می دهد تمام آنتی بادی های "اضافی" را بشویید.

سپس مرحله دوم آغاز می شود - واکنش آنزیمی. محلول با آنزیم به چاه های شسته شده اضافه می شود و 30-60 دقیقه باقی می ماند. این آنزیم میل ترکیبی با ماده ای (برچسب اختصاصی) که آنتی بادی ها به آن متصل هستند، دارد. آنزیم واکنشی را انجام می دهد که در نتیجه این برچسب خاص (سوبسترا) به یک ماده (محصول) رنگی تبدیل می شود. سپس غلظت این ماده رنگی با رنگ سنجی مشخص می شود. از آنجایی که این برچسب خاص با آنتی بادی ها همراه است، به این معنی است که غلظت محصول واکنش رنگی برابر با غلظت آنتی بادی ها است. و غلظت آنتی بادی ها برابر با غلظت آنتی ژن ها است. بنابراین، در نتیجه تجزیه و تحلیل، به این پاسخ می رسیم که غلظت میکروب یا هورمون شناسایی شده چقدر است.

روش ایمونواسی مستقیم آنزیمی به این صورت است. اما امروزه از روش ایمونواسی آنزیمی غیرمستقیم بیشتر استفاده می شود زیرا حساسیت و دقت غیرمستقیم بیشتر از مستقیم است. بنابراین، اجازه دهید به روش ایمونواسی غیرمستقیم آنزیمی برویم.

ایمونواسی غیرمستقیم آنزیمی - مراحل

در ایمونواسی غیرمستقیم آنزیمی دو مرحله وجود دارد. در مرحله اول، از آنتی بادی های نشاندار نشده برای آنتی ژن های شناسایی شده استفاده می شود و در مرحله دوم، آنتی بادی های نشاندار شده علیه اولین آنتی بادی های بدون برچسب استفاده می شود. یعنی اتصال مستقیم آنتی بادی به آنتی ژن به دست نمی آید، بلکه یک کنترل مضاعف است: اتصال آنتی بادی ها به آنتی ژن، پس از آن اتصال آنتی بادی دوم به مجموعه آنتی بادی + آنتی ژن. به عنوان یک قاعده، آنتی بادی برای مرحله اول موش و برای مرحله دوم بز است.

تثبیت آنتی ژن ها روی سطح چاه و اتصال آنتی ژن به آنتی بادی بدون برچسب
و همچنین برای ایمونواسی مستقیم آنزیمی، مواد بیولوژیکی گرفته می شود - خون، خراش دادن، اسمیر. مواد بیولوژیکی مورد مطالعه وارد چاهک ها شده و به مدت 30-15 دقیقه باقی می ماند تا آنتی ژن ها به سطح چاهک ها بچسبند. سپس، آنتی‌بادی‌های بدون برچسب آنتی‌ژن‌ها به چاهک‌ها اضافه می‌شوند و برای مدتی (۱ تا ۵ ساعت) باقی می‌مانند تا آنتی‌بادی‌ها به آنتی‌ژن‌های «خود» متصل شوند و یک کمپلکس ایمنی تشکیل دهند. مرحله اول). پس از آن، آنتی بادی های "اضافی" غیر متصل با ریختن محتویات چاه ها حذف می شوند. شستشو با یک محلول ویژه انجام می شود تا تمام آنتی بادی های غیر متصل به طور کامل حذف شود.

اتصال آنتی بادی نشاندار شده به آنتی ژن + کمپلکس آنتی بادی نشاندار نشده
پس از آن، آنتی بادی های دوم گرفته می شوند - برچسب گذاری می شوند، به چاه ها اضافه می شوند و دوباره برای مدتی باقی می مانند - 15-30 دقیقه ( فاز دوم). در این مدت، آنتی بادی های نشاندار شده به اولین - نشاندار نشده متصل می شوند و یک آنتی بادی + آنتی بادی + آنتی ژن پیچیده تشکیل می دهند. با این حال، هم آنتی‌بادی‌های نشاندار و هم آنتی‌بادی‌های بدون برچسب بیش از حد به چاهک‌ها اضافه می‌شوند. بنابراین، لازم است دوباره آنتی بادی های "اضافی" برچسب گذاری شده را که به آنتی بادی های بدون برچسب متصل نشده اند، حذف کنیم. برای انجام این کار، روش ریختن محتویات چاه ها و شستشو با محلول مخصوص را تکرار کنید.

واکنش آنزیمی - تشکیل یک ترکیب رنگی
پس از آن، آنزیمی معرفی می شود که واکنش تبدیل "برچسب" را به یک ماده رنگی انجام می دهد. رنگ در عرض 5-30 دقیقه ایجاد می شود. سپس رنگ سنجی انجام می شود و غلظت ماده رنگی محاسبه می شود. از آنجایی که غلظت ماده رنگی برابر با غلظت آنتی بادی های نشاندار شده است و غلظت نشاندار شده برابر با غلظت آنتی بادی های نشاندار نشده است که به نوبه خود برابر با غلظت آنتی ژن است. بنابراین، غلظت آنتی ژن شناسایی شده را بدست می آوریم.
چنین کنترل مضاعفی در قالب استفاده از دو نوع آنتی بادی باعث افزایش حساسیت و ویژگی روش ایمونواسی آنزیمی شد. با وجود طولانی شدن زمان تجزیه و تحلیل و گنجاندن مراحل اضافی، این تلفات با دقت نتیجه جبران می شود. به همین دلیل است که در حال حاضر اکثریت قریب به اتفاق روش های ایمونواسی آنزیمی، ایمونواسی آنزیمی غیرمستقیم هستند.

چه بیماری هایی با روش ایمونواسی آنزیمی شناسایی می شوند؟

بیایید به بررسی اینکه چه بیماری‌ها و چه مواد فعال بیولوژیکی توسط ایمونواسی آنزیمی شناسایی می‌شوند، برویم. مواد شناسایی شده توسط ایمونواسی آنزیمی در جدول ارائه شده است.

هورمون ها و نشانگرهای بیماری تیروئید	تیروپراکسیداز (TPO)
	تیروگلوبولین (TG)
	هورمون محرک تیروئید (TSH)
	تیروکسین (T4)
	تری یدوتیرونین (T3)
	تیروکسین آزاد (T4)
	تری یدوتیرونین رایگان (T3)
تشخیص عملکرد تولید مثل	هورمون لوتئینه کننده (LH)
	هورمون محرک فولیکول (FSH)
	پرولاکتین
	پروژسترون
	استرادیول
	تستوسترون
	کورتیزول
	گلوبولین اتصال استروئیدی (SHB)
	آلفافتوپروتئین (AFP)
تومور مارکرها	گنادوتروپین کوریونی (CG)
	آنتی ژن اختصاصی پروستات (PSA)
	SA - 125
	SA - 19.9
	CYFRA-21-1
	M - 12 (SA - 15.3)
	MUC-1 (M-22)
	MUC1 (M–20)
	آلوئوموسین
	K - زنجیر
	L - زنجیر
	فاکتور نکروز تومور (TNFα)
	γ - اینترفرون
	آنتی ژن سرطانی جنینی (CEA)
تشخیص بیماری های عفونی

ELISA یک مطالعه آزمایشگاهی مدرن است که طی آن آنتی‌بادی‌های خاص خون (یا آنتی‌ژن‌ها) برای بیماری‌های خاص جستجو می‌شوند تا نه تنها علت، بلکه مرحله بیماری نیز شناسایی شود.

1. جستجو برای آنتی بادی های خاص برای هر بیماری عفونی؛
2. جستجو برای آنتی ژن هر بیماری عفونی؛
3. بررسی وضعیت هورمونی بیمار؛
4. بررسی وجود بیماری های خود ایمنی

مانند هر روش تشخیص آزمایشگاهی، ELISA دارای مزایا و معایب خود است. مزایای روش عبارتند از:

1. ویژگی و حساسیت بالای روش (بیش از 90٪)؛
2. توانایی تعیین بیماری و ردیابی پویایی فرآیند، یعنی مقایسه مقدار آنتی بادی ها در فواصل زمانی مختلف.
3. در دسترس بودن و سرعت این مطالعه؛
4. روش غیر تهاجمی نمونه برداری مواد یک مطالعه نیست.

نقطه ضعف روش این واقعیت است که در طول تجزیه و تحلیل می توان نه عامل بیماری، بلکه فقط پاسخ ایمنی به آن (آنتی بادی ها) را شناسایی کرد.

ماهیت روش الایزا

چندین نوع ELISA وجود دارد: مستقیم، غیر مستقیم، روش مسدود کردن، رقابتی. با این حال، در عمل، ایمونواسی فاز جامد ناهمگن یا الایزا بیشتر مورد استفاده قرار می گیرد.

اساس سنجش ایمونوسوربنت متصل به آنزیم، واکنش ایمنی یک آنتی ژن و یک آنتی بادی با تشکیل کمپلکس ایمنی است که منجر به تغییر در فعالیت آنزیمی برچسب های خاص روی سطح آنتی بادی ها می شود.

در واقع این فرآیند را می توان به چند مرحله تقسیم کرد:

1. در سطح چاه های سیستم آزمایش، یک آنتی ژن خالص از یک پاتوژن خاص وجود دارد. هنگامی که سرم خون حیوان اضافه می شود، یک واکنش خاص بین این آنتی ژن و آنتی بادی مورد نظر رخ می دهد.
2. علاوه بر این، یک کروموژن خاص (مجموعه نشاندار شده با پراکسیداز) به چاه اضافه می شود. یک واکنش آنزیمی رخ می دهد و در نتیجه یک ماده رنگی در چاه قرص تشکیل می شود. شدت رنگ آن به مقدار ایمونوگلوبولین (آنتی بادی) موجود در سرم حیوان بستگی دارد.
3. بعد ارزیابی نتیجه می آید. با کمک یک اسپکتروفتومتر چند کاناله، چگالی نوری ماده آزمایش با چگالی نوری نمونه های کنترل مقایسه شده و نتایج به صورت ریاضی پردازش می شوند. مقدار آنتی بادی ها در یک بیمار به طور مستقیم به ارتفاع چگالی نوری یک چاه مشخص بستگی دارد.

باید به خاطر داشت: برای هر سیستم آزمون، شاخص های فردی برای در نظر گرفتن نتایج، شاخص های هنجار و آسیب شناسی ("مقادیر مرجع") ایجاد می شود. این باید هنگام ارزیابی نتایج هر مطالعه خاص در نظر گرفته شود.

تفسیر نتایج یک آزمایشگاه از «مقادیر مرجع» آزمایشگاه دیگر صحیح نیست. همچنین مقایسه نتایج آزمایشگاه های مختلف با یکدیگر نادرست است.

هنگام ارزیابی نتایج برای عفونت های خاص، کلاس آنتی بادی های شناسایی شده و تعداد آنها مهم است. نه تنها سؤال از علت عفونت به این بستگی دارد، بلکه مرحله مورد انتظار بیماری (حاد، مزمن) و همچنین وجود عفونت فعال (حاد یا تشدید مزمن) در زمان معاینه بستگی دارد. .

زمان تقریبی ظهور آنتی بادی ها چقدر است؟

اولین آنتی بادی ها IgM هستند. آنها را می توان 1-3 هفته پس از عفونت احتمالی، که مشخصه فاز حاد فرآیند عفونی است، شناسایی کرد. وضعیت دوم ظهور آنتی بادی های IgM تشدید یک روند مزمن است. IgM به طور متوسط ​​حدود 3 ماه در گردش است، سپس تعداد آنها به تدریج از بین می رود. با این حال، در برخی از بیماران، مقادیر کمی از IgM ممکن است طی 1-2 سال پس از عفونت شناسایی شود.

از هفته چهارم پس از عفونت، آنتی بادی های IgG ظاهر می شوند. در اکثر عفونت ها، تیتر آنها به تدریج با حداکثر در زمان های مختلف افزایش می یابد (به طور متوسط ​​بعد از 1.5-2 ماه)، سپس تیتر در سطح پایین باقی می ماند و نشان دهنده ایمنی است. در برخی بیماری ها سطح IgG بالا نیست.

گزینه های تشخیص آنتی بادی

• تشخیص جدا شده آنتی بادی های IgM نشان دهنده عفونت اولیه است.
• تشخیص همزمان IgM و IgG در خون برای عفونت اولیه در 2-3 ماه گذشته و همچنین در هنگام تشدید یک بیماری مزمن معمول است.
• تشخیص IgG به صورت مجزا ممکن است هم مصونیت نسبت به بیماری و هم عفونت مزمن را نشان دهد. در حالت دوم، هم مقدار آنتی بادی (تیتر) و هم تغییر این تیتر در طول زمان اهمیت دارد. به طور معمول، مطالعات در فواصل 2-4-6 هفته انجام می شود.

آنالیز ELISA یک تکنیک مدرن برای تشخیص آزمایشگاهی تعداد قابل توجهی از بیماری‌های مختلف است. مخفف آنزیم ایمونواسی است. ماهیت این تکنیک تعیین تیتر (فعالیت) آنتی بادی ها است.

تکنیک الایزا امروزه محبوبیت قابل توجهی پیدا کرده است. در پزشکی بالینی برای تشخیص پاتولوژی های مختلف و همچنین در مطالعات تجربی که نیاز به تعیین دقیق غلظت ترکیبات مختلف در محیط مورد مطالعه دارد استفاده می شود.

اصل تکنیک الایزا

الایزا یک واکنش ایمونولوژیک است. این بر اساس افزودن آنتی بادی های خاص است
یا آنتی ژن ها در محیط آزمایش (اغلب خون آزمایش) با تعیین آنزیمی بعدی غلظت کمپلکس های آنتی ژن-آنتی بادی حاصل. با توجه به غلظت کمپلکس، می توان سطح یا فعالیت آنالیت را در محیط آزمایش قضاوت کرد.

تعیین غلظت کمپلکس های آنتی ژن-آنتی بادی معمولاً با استفاده از تجهیزات ویژه با روش کروماتوگرافی انجام می شود.

نشانه هایی برای انجام

تجزیه و تحلیل ELISA برای نشانه های مختلف انجام می شود، موارد اصلی در پزشکی بالینی عبارتند از:

• تشخیص آسیب شناسی عفونی با یک انتقال عمدتا جنسی (STI)، که شامل کلامیدیا، مایکوپلاسموز، اوره پلاسموز، تریکومونیازیس است، در حالی که آنتی بادی های خاص برای عامل عفونی شناسایی می شود.
• تشخیص بیماری های عفونی محلی سازی های مختلف برای تعیین مرحله فرآیند پاتولوژیک، در درجه اول در فرآیند تشخیص هپاتیت ویروسی تزریقی و HIV.
• تعیین غلظت هورمون ها برای تشخیص آسیب شناسی های مختلف اندام های سیستم غدد درون ریز (غدد درون ریز).
• تعیین ترکیبات مختلف برای تشخیص علت مسمومیت بدن در صورت مسمومیت، نیش حشرات یا مار.

با این نشانه های پزشکی، آزمایش خون ELISA انجام می شود. همچنین، این تکنیک به طور فعال در پزشکی تجربی در طول مطالعات بالینی مختلف در طول توسعه داروهای جدید، واکسن‌هایی برای ایمونوپروفیلاکسی استفاده می‌شود.

مطالعه چگونه انجام می شود

آزمایش خون الایزا در یک آزمایشگاه تخصصی انجام می شود. قبلاً برای اجرای آن، خون وریدی معمولاً از ورید کوبیتال در حجم 5-10 میلی لیتر گرفته می شود که سپس به آزمایشگاه ارسال می شود. به طور متوسط، نتیجه تجزیه و تحلیل را می توان در همان روز بعد به دست آورد، که نکته مهمی برای انتصاب سریع درمان پس از تشخیص بیماری است.

نحوه آماده شدن برای الایزا

برای به دست آوردن نتایج قابل اعتماد از مطالعه با روش ایمونواسی آنزیمی، باید چند توصیه آماده سازی ساده را دنبال کنید که عبارتند از:

• یک روز قبل از آزمایش، باید مصرف غذاهای چرب (گوشت، گوشت دودی) و الکل را متوقف کنید.
• مواد لازم برای تحقیق باید صبح ها با معده خالی مصرف شود.
• در روز مطالعه، اجتناب از استرس های جسمی و روانی- عاطفی مطلوب است.
• قبل از مطالعه، باید سعی کنید سیگار نکشید.

اکثر نتایج مثبت کاذب به دست آمده از ایمونواسی آنزیمی به دلیل اجرای نادرست توصیه های آماده سازی است. این در بیشتر موارد با خوردن غذاهای چرب همراه است که منجر به افزایش غلظت تری گلیسیرید (چربی) در پلاسمای خون می شود که ویژگی ELISA را کاهش می دهد.

رمزگشایی نتایج

آزمایش خون برای آنتی بادی ها با استفاده از ELISA دارای 2 تغییر است - تعیین کیفی و کمی. در
با تعیین کیفی آنتی بادی ها، نتیجه می تواند مثبت باشد (آنتی بادی ها شناسایی می شوند، که نشان دهنده وجود احتمالی یک فرآیند پاتولوژیک ناشی از عامل عفونی است) یا منفی (هیچ آنتی بادی وجود ندارد، که نشان دهنده عدم وجود یک فرآیند عفونی است).

فقدان آنتی بادی همیشه نشانگر 100٪ عدم وجود یک فرآیند عفونی نیست. این به این دلیل است که پس از عفونت، آنتی بادی ها بلافاصله تشکیل نمی شوند، بلکه در یک دوره زمانی خاص (حداقل حدود 2 هفته) ایجاد می شوند. بنابراین، برای تایید عدم وجود عفونت، ممکن است ELISA پس از مدتی تکرار شود.

با الایزا کمی، تیتر (فعالیت) آنتی بادی ها و همچنین کلاس های آنها تعیین می شود. در بیشتر موارد، برای تشخیص بیماری‌های عفونی، آنتی‌بادی‌های کلاس IgG (ایمونوگلوبولین‌های G) و IgM (ایمونوگلوبولین‌های M) تعیین می‌شوند که در فواصل زمانی مختلف پس از عفونت در بدن تشکیل می‌شوند، بنابراین رمزگشایی نتیجه آنالیز می‌تواند انجام شود. چند معنی:

• افزایش فعالیت IgM و عدم وجود IgG شواهدی از عفونت اخیر و یک دوره حاد فرآیند عفونی است.
• افزایش فعالیت IgM و IgG تشدید روند عفونی در دوره مزمن و عفونت طولانی مدت آن است.
• فعالیت زیاد IgG و عدم وجود IgM یک دوره مزمن فرآیند عفونی در پس زمینه یک عفونت طولانی مدت است که پس از آن بیش از شش ماه (زمان لازم برای تشکیل آنتی بادی های کلاس IgG) می گذرد.

به طور کلی، تفسیر نتایج ELISA برای هر فرآیند عفونی دارای ویژگی های خاصی است. تعیین دقیق تر وجود یک بیماری عفونی و همچنین مرحله سیر آن توسط پزشک انجام می شود.

الایزا در حال حاضر روش انتخابی برای تشخیص بیشتر بیماری های عفونی است. بر اساس نتایج چنین مطالعه ای، پزشک این فرصت را دارد که تشخیص دقیق و مرحله روند روند پاتولوژیک را تعیین کند تا درمان کافی و مؤثر بعدی را تجویز کند.

روش‌های تشخیصی مدرن تشخیص یک بیماری خاص را با کمک آزمایش‌های ویژه در آزمایشگاه ممکن می‌سازد. یکی از این موارد باید شامل ایمونواسی آنزیمی باشد که از طریق آن می توانید تشخیص اولیه را تأیید کنید.

الایزا یکی از موثرترین و مدرن ترین روش ها برای تشخیص اختلالات مرتبط با نارسایی های ایمنی و هورمونی و همچنین فرآیندهای سرطانی است. در طول تجزیه و تحلیل در خون، می توان آنتی بادی هایی را شناسایی کرد که در صورت وجود عفونت در بدن تولید می شوند. با توجه به این تفاوت، تشخیص بیماری حتی در مراحل اولیه توسعه آن امکان پذیر است.

اساس روش شناسی چیست

نتایج تجزیه و تحلیل ELISA بر اساس دریافت واکنش های شیمیایی به آنزیم هایی است که به عنوان علائم شناسایی ویژه برای شناسایی آنتی بادی ها عمل می کنند. بنابراین، در طی واکنش های ایمونوشیمیایی، آنتی بادی ها شروع به تعامل با برخی از آنتی ژن ها می کنند. همه اینها دلیلی برای ادعای این است که نتایج نادرست هنگام اهدای خون برای ELISA حداقل است.

این مطالعه به شما امکان می دهد تعداد سلول های ایمنی، خواص آنها و همچنین وجود آنتی بادی های لازم را تعیین کنید.

هنگامی که رنگ محلول تشخیص داده شود، نتیجه مثبت در نظر گرفته می شود. رنگ نشان می دهد که آنتی ژن ها با آنتی بادی تعامل دارند. در صورتی که چنین اتفاقی نیفتد، نتیجه منفی است.

سنجش ایمونوسوربنت مرتبط با آنزیم (ELISA) برای ارزیابی جامع عملکردهای محافظتی بدن انجام می شود. در طول مطالعه، تعداد و خواص سلول های ایمنی، وجود آنتی بادی های لازم مشخص می شود. آزمایش خون الایزا برای تشخیص بیماری های عفونی، هماتولوژیک، خودایمنی، نقص ایمنی اولیه و ثانویه انجام می شود. در نظر بگیرید که آزمایش خون توسط الایزا چیست و چه نشانه هایی برای این مطالعه وجود دارد.

آنچه هست

آزمایش خون ELISA یک روش آزمایشگاهی است که آنتی بادی ها یا آنتی ژن ها را در نمونه خون تشخیص می دهد. این مطالعه برای تشخیص سطح ایمونوگلوبولین ها، کمپلکس های ایمونولوژیک، هورمون ها استفاده می شود.

نشانه هایی برای تجزیه و تحلیل

برای تعیین آزمایش خون ELISA، موارد زیر وجود دارد:

• تشخیص عفونت های مقاربتی - اورهاپلاسما، مایکوپلاسما، کلامیدیا، تریکوموناس، سیفلیس.
• تشخیص بیماری های ویروسی - سیتومگالوویروس، تبخال، هپاتیت، ویروس اپشتین بار؛
• تعیین سطح هورمون ها؛
• تشخیص بیماری های انکولوژیک؛
• تعیین نقص ایمنی؛
• تشخیص آلرژی؛
• معاینه جامع قبل از عمل قبل از پیوند عضو؛
• ارزیابی اثربخشی درمان

اصل روش

اصل عملکرد روش ایمونواسی آنزیمی مبتنی بر تعیین پروتئین-آنتی بادی های خاص در خون - ایمونوگلوبولین ها است. زمانی که آنتی ژن ها (میکرو ارگانیسم های خارجی) وارد بدن می شوند، ایمونوگلوبولین ها توسط سیستم ایمنی انسان تولید می شوند. این مولکول های ایمنی به انواع عوامل عفونی در بدن متصل می شوند و آنها را خنثی می کنند.

ایمونوگلوبولین ها یک ویژگی مهم دارند - ویژگی. به همین دلیل، آنها می توانند به یک آنتی ژن خاص متصل شوند و یک مجموعه آنتی ژن-آنتی بادی تشکیل دهند. در طول آزمایش خون ELISA، این مجموعه است که به صورت کیفی و کمی تعیین می شود.

پنج دسته از ایمونوگلوبولین ها وجود دارد. اما معمولاً سه کلاس تعریف می شود - ایمونوگلوبولین های A، M، G. این آنتی بادی ها در زمان های مختلف از لحظه عفونت در بدن تجمع می یابند.

• ایمونوگلوبولین ها کلاس M (IgM)برای اولین بار در روز پنجم از لحظه عفونت در خون ظاهر می شود. آنها به مدت 5-6 هفته در بدن هستند، سپس از جریان خون ناپدید می شوند. آنتی بادی های IgM نشان دهنده یک دوره حاد بیماری یا تشدید بیماری در سیر مزمن آن است.
• تقریباً 3-4 هفته پس از عفونت، ایمونوگلوبولین ها در خون ظاهر می شوند کلاس G (IgG). آنها می توانند چندین ماه یا حتی سالها در خون انسان وجود داشته باشند. با توجه به رمزگشایی آزمایش خون ELISA، اگر در دو نمونه خونی که دو هفته بعد به طور متوالی گرفته می شود، مقدار ایمونوگلوبولین های IgG افزایش یابد، آنها از عفونت فعلی یا عفونت مجدد - عفونت مجدد با همان عفونت صحبت می کنند.
• ایمونوگلوبولین ها کلاس A (IgA)با این روش تحقیقاتی 2 تا 4 هفته پس از عفونت یا تشدید یک بیماری عفونی قابل تشخیص است. از این تعداد، تنها 20٪ در خون گردش می کند، بقیه توسط غشاهای مخاطی ترشح می شود. آنتی بادی های IgA 2-8 هفته پس از تخریب عوامل عفونی از جریان خون ناپدید می شوند. ناپدید شدن این ایمونوگلوبولین ها به معنای درمان عفونت است. اگر پس از پایان بیماری، وجود آنتی بادی IgA در خون مشخص شود، بیماری به مرحله مزمن رفته است.

آماده سازی برای تجزیه و تحلیل

خون انسان اغلب برای انجام آزمایش خون الایزا استفاده می شود. اما می توانید محتویات بدن زجاجیه، مایع مغزی نخاعی، مایع آمنیوتیک را نیز بررسی کنید.

نمونه خون برای تحقیق از بیمار از ورید کوبیتال گرفته می شود. اهدای خون با معده خالی توصیه می شود (حداقل 12 ساعت باید از لحظه آخرین وعده غذایی بگذرد). اگر بیمار دارو مصرف می کند، لازم است به پزشک اطلاع داده شود، زیرا برخی از آنها می توانند نتیجه تجزیه و تحلیل را تغییر دهند. پایایی نتایج مطالعه تحت تأثیر مصرف الکل و مواد مخدر است.

رمزگشایی

شکل نتیجه این تجزیه و تحلیل نشان دهنده یک نتیجه مثبت (+) یا منفی (-) برای هر کلاس ایمونوگلوبولین است.

تفسیر رمزگشایی احتمالی آزمایش خون ELISA را در نظر بگیرید.

• نتیجه منفی IgM، IgG، IgA - عدم ایمنی در برابر عفونت.
• IgM، IgA و نتیجه مثبت IgG - ایمنی پس از عفونت یا پس از واکسیناسیون.
• IgG، IgA منفی یا مثبت و IgM مثبت یک عفونت حاد است.
• نتیجه مثبت IgM، IgG، IgA تشدید یک بیماری عفونی مزمن است.
• یک نتیجه IgM منفی و یک نتیجه IgG، IgA منفی یا مثبت یک عفونت مزمن است.
• نتیجه IgM منفی و بدون IgG، IgA - بازیابی.

مزایای روش

آزمایش خون الایزا مزایای زیادی دارد. اصلی ترین ها را می توان متمایز کرد:

• دقت نسبتا بالا (حساسیت)؛
• امکان تشخیص زودهنگام؛
• توانایی ردیابی پویایی فرآیند عفونی؛
• سطح بالایی از یکپارچگی، که امکان بررسی های انبوه را فراهم می کند.
• مدت زمان کوتاهی که برای به دست آوردن نتیجه تجزیه و تحلیل لازم است؛
• راحتی در کار؛
• اتوماسیون تمام مراحل تجزیه و تحلیل؛
• هزینه نسبتا کم

ایرادات

عیب روش الایزا این است که گاهی اوقات نتایج منفی یا مثبت کاذب می دهد. علاوه بر خطاهای فنی در طول مطالعه، علت نتایج نادرست ممکن است فاکتور روماتوئید در بیمار، وجود بیماری های مزمن (که در آن آنتی بادی تولید می شود)، اختلالات متابولیک و مصرف برخی داروها باشد.

• آسکاریازیس؛
• تریچینوز - تجزیه و تحلیل چندین بار انجام می شود، حداکثر سطح آنتی بادی ها در 4-12 هفته پس از عفونت تعیین می شود.
• سیستیسرکوز؛
• تنیازیس؛
• فاسیولیازیس - آنتی بادی ها در مرحله حاد بیماری تعیین می شوند.
• opisthorchiasis - انجام تشخیص افتراقی بین اشکال مزمن و حاد بیماری.
• ژیاردیازیس؛
• لیشمانیوز احشایی و جلدی؛
• آمیب؛
• توکسوپلاسموز

4.2 4.20 از 5 (5 رای)