تاکسونومی، پنوموکوک، روش های آزمایشگاهی برای آنفولانزا

وزارت بهداشت فدراسیون روسیه دانشکده پزشکی دولتی کازان گروه میکروبیولوژی

پنوموکوکوس

کازان 1999

UDC 576.851.21 (07)

با تصمیم شورای هماهنگی و متدولوژی مرکزی دانشگاه پزشکی دولتی کازان منتشر شد.

گردآوری شده توسط:

(رئیس گروه میکروبیولوژی، دکترای علوم پزشکی، پروفسور O.K. Pozdeev، دستیار گروه میکروبیولوژی، کاندیدای علوم پزشکی، E.R. Fedorova.

داوران:

رئیس گروه اپیدمیولوژی دانشگاه پزشکی دولتی کازان، دکترای علوم پزشکی، دانشیار M.Sh. شافیف، رئیس گروه اپیدمیولوژی آکادمی پزشکی دولتی کازان، دکترای علوم پزشکی، پروفسور V.E. گریگوریف.

پنوموکوک /O.K. پوزدیف، E.R. فدوروف - کازان: KSMU، 1999. - 14 ثانیه

با کپی کردن، توزیع، انتشار متن یا بخشی از آن در منابع خود، مسئولیت خود را مطابق با قوانین جاری می پذیرید.

منحصراً برای استفاده از اثر برای اهداف شخصی (ماده 18، ماده 26 قانون فدراسیون روسیه "در مورد حق چاپ و حقوق وابسته"). تکثیر تجاری ممنوع است.

دانشگاه پزشکی دولتی کازان، 1999

پنوموکوک (Streptococcus pneumoniae) اولین بار توسط پاستور (1881) در حین کار بر روی یک واکسن ضد هاری جدا شد و در ابتدا عامل بیماری هاری در نظر گرفته شد. نقش اتیولوژیکی میکروارگانیسم در ایجاد ذات الریه در انسان توسط Frenkel و Weichselbaum (1884) به اثبات رسید. این باکتری موجودات انسانی و حیوانی را مستعمره می کند و به گروه استرپتوکوک های دهانی تعلق دارد. آنها عوامل اصلی ایجاد ذات الریه هستند و همچنین می توانند باعث پلوریت، مننژیت، زخم قرنیه خزنده، التهاب چرکی گوش میانی، شرایط سپتیک و سایر بیماری ها شوند. در ویرایش نهم راهنمای Bergey برای باکتری ها (1994)، پنوموکوک ها در گروه 17، "کوکسی های گرم مثبت" گنجانده شده اند.

اپیدمیولوژی ضایعات. پنوموکوک یکی از عوامل اصلی ایجاد پنومونی باکتریایی است که در خارج از بیمارستان ها ثبت شده است (4-2 مورد در هر 1000 نفر). سالانه حداقل 500000 مورد پنومونی پنوموکوکی در جهان مشاهده می شود (مقدار واقعی بسیار بالاتر است). کودکان و افراد مسن بیشتر مستعد ابتلا به عفونت هستند. مخزن عفونت بیماران و ناقلین (20-50٪ کودکان پیش دبستانی و 20-25٪ از بزرگسالان) هستند. مسیر اصلی انتقال تماس است. در هنگام شیوع بیماری نیز از طریق هوا منتقل می شود. اوج بروز در فصل سرد رخ می دهد. در اکثریت قریب به اتفاق موارد، اشکال بالینی عفونت زمانی ایجاد می شود که مقاومت بدن مختل شود (از جمله به دلیل استرس سرما)، و همچنین در مقابل پس زمینه سایر آسیب شناسی ها (کم خونی داسی شکل، بیماری هوچکین، عفونت HIV، میلوما، دیابت ملیتوس). ، شرایط پس از برداشتن طحال و غیره) یا با اعتیاد به الکل. گزینه های 1، 2 و 3 بیشترین اهمیت اپیدمیولوژیک را در آسیب شناسی در بزرگسالان دارند. برای کودکان - گزینه های 1، 2، 3 و 14. حدت سرووارها به ترتیب نزولی انواع 3، 1، 2، 5، 7 و 8 است. موش های سفید (در صورت آلوده شدن، در عرض 24 ساعت به دلیل سپتی سمی می میرند)، گوساله، بره، خوک، سگ و میمون به پنوموکوک حساس هستند.

مورفولوژی. پنوموکوک ها بی حرکت هستند، هاگ تشکیل نمی دهند و شکل کمی دراز دارند که یادآور خطوط شعله شمع است. در اسمیرهای مواد بالینی، آنها به صورت جفت قرار می گیرند که هر یک توسط یک کپسول ضخیم احاطه شده است. در اسمیر از محیط های کشت، ممکن است در زنجیره های کوتاه قرار گرفته و گردتر باشند. در رسانه های ساده آنها یک کپسول نازک را تشکیل می دهند. رشد آن با تزریق خون، سرم یا مایع آسیت تحریک می شود. تشکیل کپسول در باکتری های نوع III بارزتر است. هنگامی که به صورت زنجیره ای قرار می گیرند، کپسول ممکن است رایج باشد.

املاک فرهنگی پنوموکوک ها هوازی یا بی هوازی اختیاری هستند. هنگام کشت، شرایط کپنوفیلیک (5-10٪ CO2) ترجیح داده می شود. آنها شیمی‌ارگانگروف هستند و روی محیط خون یا سرم حاوی 0.1% گلوکز به خوبی رشد می‌کنند. آنها می توانند در محدوده دمایی 28-42 درجه سانتیگراد، بهینه - 37 درجه سانتیگراد رشد کنند. pH بهینه -7.6-7.8. در محیط های متراکم، آنها کلنی های ظریف، شفاف و کاملاً مشخص با قطر حدود 1 میلی متر را تشکیل می دهند. گاهی اوقات آنها می توانند صاف با افسردگی مرکزی باشند. مانند سایر استرپتوکوک ها، کلنی ها هرگز با هم ترکیب نمی شوند

بین خودشان روی آگار خون آنها کلونی های کوچک نیمه شفاف خاکستری مایل به سبز را تشکیل می دهند. مرکز مستعمرات تیره تر است، محیط اطراف روشن تر است. در زیر کلنی و در امتداد حاشیه آن، ناحیه ای از همولیز به شکل یک ناحیه بی رنگ مایل به سبز (که به دلیل انتقال هموگلوبین به متهموگلوبین است) قابل مشاهده است. کلنی های پنوموکوک نوع III اغلب قوام مخاطی دارند و اندازه آنها تا 2 میلی متر می رسد. آنها کمی ابری هستند و می توانند با یکدیگر ادغام شوند. آنها فرم های S و R از مستعمرات را تشکیل می دهند. هنگام انتقال از فرم S به R، توانایی سنتز کپسول را از دست می دهند. در محیط های مایع با سرم و گلوکز 0.2 درصد کدورت یکنواخت و رسوب لخته کوچکی ایجاد می کنند. با کشت طولانی مدت، رسوب افزایش می یابد.

پایداری. پنوموکوک ها از گروه میکروارگانیسم های ناپایدار هستند. آنها در خلط خشک تا دو ماه باقی می مانند. قابلیت نگهداری برای مدت طولانی در دماهای پایین؛ در دمای 60 درجه سانتیگراد در عرض 3-5 دقیقه می میرند. محلول 3٪ اسید کربولیک آنها را در 1-2 دقیقه از بین می برد. اپتوکین (با غلظت 1:100000) و صفرا بر پنوموکوک ها اثر مخربی دارند که برای شناسایی باکتری ها استفاده می شود.

پنوموکوک ها از نظر تعدادی ویژگی با سایر میکروارگانیسم ها متفاوت هستند (جدول 1).

جدول 1 خواص بیوشیمیایی پنوموکوک

بستر تست	نتیجه	بستر تست	نتیجه
رشد در 100 درجه سانتیگراد
		رافینوز
چهارشنبه با 6.5 درصد ناد
a-همولیز
B-همولیز		ترهالوز
		فسفاتاز
هیپورات		β-گالاکتوزیداز
گلیسرول
عناوین: "+" - 90٪ یا بیشتر سویه ها مثبت هستند. (+) - 80-89 درصد سویه ها مثبت هستند. د - 79-21 درصد سویه ها مثبت هستند. (-) - 11-20 درصد سویه ها مثبت هستند. "- - 90٪ یا بیشتر از سویه ها منفی هستند.

ساختار آنتی ژنیک چندین نوع آنتی ژن در پنوموکوک ها یافت شده است: پلی ساکارید، آنتی ژن 0-سوماتیک، واقع در دیواره سلولی. آنتی ژن های K کپسولی پلی ساکارید و پروتئین M. آنتی ژن سوماتیک پلی ساکارید شبیه به ماده C سایر استرپتوکوک ها است. این رابطه شباهت در ساختار شیمیایی اسیدهای ریبیتیکوئیک مرتبط با کولین فسفات را تعیین می کند. آنتی ژن های کپسولی نیز ماهیت پلی ساکاریدی دارند که شامل مونوساکاریدهایی است که در ترکیبات مختلف تکرار می شوند: D-گلوکز، D-گالاکتوز و L-rhamnose. بر اساس ساختار آنتی ژن های کپسولی، پنوموکوک ها به 84 سرووار تقسیم می شوند. باید به خاطر داشت که آنتی ژن های کپسولی با آنتی سرم به آنتی ژن های استرپتوکوک های گروه A و B و همچنین با سرم های آنتی ژن های کلبسیلا و اشریشیا واکنش متقابل دارند. در طی انتقال از فرم S به R، آنتی ژن های کپسولی از بین می روند. برای سروتیپ پنوموکوک ها، سرم های گروهی تولید می شوند که با حروف لاتین (A، B، C، D و غیره) و سرم های سرواریانت با اعداد رومی مشخص می شوند. سرم آگلوتینه کننده III در مخلوط های سرمی گنجانده نشده است. به طور جداگانه منتشر می شود و قابل پرورش نیست. در انسان، پنوموکوک های سرواریانت های I، II و III اغلب جدا می شوند. آنها برای انسان خطرناک ترین هستند، بنابراین آزمایش آگلوتیناسیون در ابتدا با استفاده از آنتی سرم های این گونه ها انجام می شود. اگر نتیجه منفی باشد، واکنش آگلوتیناسیون با مخلوطی از سرم های A، B، C و غیره انجام می شود. (تا حصول نتیجه مثبت) و سپس با آنتی سرم جداگانه. برای شناسایی سریعتر سرووارها از واکنش نوفلد (تورم کپسول ایمنی) استفاده می شود. این روش مبتنی بر توانایی کپسول های پنوموکوکی برای افزایش حجم در حضور آنتی سرم همولوگ است که با میکروسکوپ نوری نوری ثبت می شود. پلی ساکاریدهای کپسولی دارای خواص حساس کننده هستند که در ایجاد یک واکنش ازدیاد حساسیت نوع تاخیری آشکار می شود که با استفاده از تست های پوستی شناسایی می شود.

عوامل بیماری زایی عامل اصلی کپسول است که باکتری ها را از پتانسیل میکروب کش فاگوسیت ها محافظت می کند و آنها را از عمل اپسونین ها منحرف می کند. سویه های غیر کپسوله عملاً غیر ویروسی هستند و نادر هستند.

اکثریت مجموعه ای از ATهای ضد پنوموکوک از کپسول های AT تا Ag تشکیل شده است. عملکرد مهم کپسول و پروتئین M نیز اطمینان از چسبندگی به مخاط است. ماده C ضروری است، زیرا به طور خاص با پروتئین C-reactive تعامل دارد. نتیجه چنین واکنشی فعال شدن آبشار مکمل و آزاد شدن واسطه های مرحله حاد التهاب است. تجمع آنها در بافت ریه باعث تحریک مهاجرت فاگوسیت های پلی مورفونکلئر می شود. تشکیل ارتشاح های التهابی قدرتمند با اختلال در هموستاز بافت ریه و کبدی شدن آن همراه است. پنوموکوک ها اندوتوکسین، آ و بتا همولیزین ها (پنومولیزین ها) و لوکوسیدین تولید می کنند. α-پنومولیزین یک پروتئین گرمازا است که قادر به خنثی کردن O-streptolysin است.

ماده اریتروژنیک، نورآمینیداز. پنوموکوک ها همچنین تعدادی آنزیم را سنتز می کنند که به پاتوژنز ضایعات کمک می کنند - مورامیداز، هیالورونیداز (تشویق میکروارگانیسم ها در بافت ها)، پپتیداز (IgA را تجزیه می کند).

تظاهرات بالینی پنومونی پنوموکوکی کلاسیک به طور ناگهانی شروع می شود. آنها متوجه افزایش دمای بدن، سرفه مولد و درد قفسه سینه می شوند. در افراد ضعیف و افراد مسن، بیماری به آرامی همراه با تب خفیف، اختلال هوشیاری و علائم نارسایی قلبی ریوی ایجاد می شود.

مننژیت استرپتوکوکی در تمام گروه های سنی ثبت شده است. آنها با شروع شدید با افزایش دمای بدن، سفتی عضلات گردن، سردرد، تهوع و استفراغ مشخص می شوند. ضایعات عروق مننژ اغلب با از دست دادن هوشیاری همراه است. در میان کودکان و سالمندان، مرگ و میر می تواند به 80٪ برسد. اغلب، ضایعات پنوموکوکی هماتوژن، و همچنین سینوزیت، ماستوئیدیت، اوتیت میانی، اندوکاردیت و پریتونیت در افراد مبتلا به نقص ایمنی (به عنوان مثال، آلوده به HIV) یا بیماران مبتلا به طحال برداشته می شود. پس از یک بیماری، ایمنی ناپایدار ایجاد می شود که نوع خاصی است و به دلیل ظهور آنتی بادی هایی علیه پلی ساکارید کپسولی معمولی ایجاد می شود.

درمان. اساس درمان عفونت پنوموکوکی آنتی بیوتیک ها - پنی سیلین، تتراسایکلین، کلرامفنیکل، وانکومایسین، ریفامپیسین، سفتریاکسون است.

پیشگیری.

هدف از پیشگیری غیر اختصاصی عفونت های پنوموکوکی شناسایی بیماران و ناقلین با درمان بعدی است. برای پیشگیری خاص از عفونت، کودکان بالای دو سال، بزرگسالان در معرض خطر و همچنین افراد سالم در طول شیوع بیماری با واکسن پلی ساکارید چند ظرفیتی "Pneumovex 23" واکسینه می شوند. این دارو حاوی 23 آنتی ژن پلی ساکارید کپسولی پنوموکوک (1، 2، 3، 4، 5، 6B 7F، 8، 9N، 9V، 10A، 11A، 12F، 14، 15B، 17F، 18C، 1-9F، 19A. ، 22F، 23F، 33F). آنتی ژن ها

تشخیص آزمایشگاهی. "استاندارد طلایی" جداسازی پاتوژن است. لازم به یادآوری است که مواد باید به سرعت بررسی شوند، زیرا باکتری ها به دلیل فعالیت آنزیم های درون سلولی مستعد اتولیز سریع هستند. مواد مورد مطالعه عبارتند از: خلط، پلورال افیوژن و سایر ترشحات، مایع مغزی نخاعی، خون، مخاط بینی و حلق، ترشحات ناشی از زخم چشم، ترشحات از گوش، ادرار، قطعات اندام (در صورت مرگ بیمار) . هنگامی که نوتروفیل ها و دیپلوکوک های نیزه ای گرم مثبت (حداقل 10 عدد در هر میدان دید) در اسمیر خلط شناسایی شوند، می توان پاسخ سیگنالی به عفونت پنوموکوکی صادر کرد. در غیر این صورت، آنها به جداسازی عامل بیماری زا متوسل می شوند.

مرحله اول مطالعه.مواد پاتولوژیک تحت باکتریوسکوپی اولیه (به جز خون) قرار می گیرند. خلط در یک ظرف پتری استریل قرار داده می شود، شسته می شود، یک توده مخاطی چرکی با یک حلقه گرفته می شود، روی یک لام شیشه ای آسیاب می شود، خشک می شود و با رنگ آمیزی گرم رنگ آمیزی می شود. اسمیر کوکسی های لانست یا بیضی شکل گرم مثبت را نشان می دهد که توسط یک کپسول احاطه شده اند (تشکیل کپسول فقط در پنوموکوک های جدا شده از حیوانات بیمار و آلوده مشاهده می شود). تشخیص کپسول های پنوموکوکی را می توان با استفاده از روش Burri-Gins انجام داد. تلقیح مواد پاتولوژیک بر روی 5-10% آگار خون یا سرم و بر روی محیط غنی کننده (8-10% آب پنیر براث) انجام می شود. در صورت مشکوک شدن به سپسیس با ماهیت پنوموکوکی، 10-5 میلی لیتر خون بیمار به 90-45 میلی لیتر آب پنیر تلقیح می شود. مایع مغزی نخاعی در صورت شفاف بودن سانتریفیوژ می شود و چند قطره از رسوب به محیط های غذایی تلقیح می شود. آب پنیر نیمه جامد آگار به عنوان یک محیط غنی کننده استفاده می شود. محصولات در دمای 37 درجه سانتیگراد به مدت 24 ساعت انکوبه می شوند. بهترین روش برای جداسازی کشت خالص پنوموکوک، آلوده کردن موش های سفید با مواد پاتولوژیک است. خلط را که در ظرف پتری با نمک استریل شسته می شود، در هاون استریل با یک دسته استریل یا شیشه شکسته آسیاب می شود در حالی که نمک را به نسبت 1:2-1:5 اضافه می کند. سوسپانسیون ته نشین می شود، مایع رویی به مقدار 0.5-1 میلی لیتر به صورت داخل صفاقی به موش های سفید تزریق می شود. اگر پنوموکوک در ماده وجود داشته باشد، موش ها در عرض 72 ساعت می میرند. پنوموکوک های معمولی در اسمیر از اندام ها و خون یافت می شوند. اندام ها و خون نیز روی آب پنیر آب پنیر و ظروف پتری با خون یا سرم آگار کشت داده می شوند.

مرحله دوم مطالعه.الگوی رشد در محیط های غذایی مورد مطالعه قرار گرفته است. روی آگار خون، کلنی های پنوموکوک کوچک، گرد و صاف هستند

لبه ها، حساس، احاطه شده توسط یک ناحیه سبز از محیط (که بسیار یادآور رشد استرپتوکوک های viridans است). روی آگار سرم، کلنی ها ظریف، شفاف و شفاف هستند. در طول باکتریوسکوپی اسمیرهای رنگ آمیزی گرم. دیپلوکوک های گرم مثبت بدون کپسول شناسایی می شوند. پس از باکتریوسکوپی، کلنی های مشکوک به پنوموکوک روی سرم کج یا آگار خون یا داخل آب پنیر کشت داده می شوند. هنگام میکروسکوپی اسمیر از محیط غنی‌کننده، همراه با میکروفلورهای مختلف، می‌توان کوکسی‌های گرم مثبت را که به صورت جفت یا زنجیره کوتاه مرتب شده‌اند، شناسایی کرد. مواد حاصل از محیط غنی‌سازی به محیط جامد مواد مغذی منتقل می‌شوند. محصولات در دمای 37 درجه سانتیگراد به مدت 24 ساعت انکوبه می شوند.

مرحله سوم مطالعه.روی شیب‌های آگار خون، پنوموکوک‌ها پوششی ظریف، نازک و شفاف را تشکیل می‌دهند. در آب پنیر براث پنوموکوک باعث کدورت و کمی رسوب می شود. در اسمیر از محیط های کشت جامد، پنوموکوک ها می توانند ظاهر متفاوتی داشته باشند. همراه با دیپلوکوک هایی به شکل دراز با انتهای بیرونی برجسته، که یادآور شعله شمع است، سلول هایی به شکل بیضی و گرد منظم وجود دارد. در کشت آبگوشت، پنوموکوک ها اغلب به صورت زنجیره ای قرار می گیرند. بر اساس ویژگی های مورفولوژیکی و فرهنگی پنوموکوک ها، تشخیص از استرپتوکوک های ویریدانس دشوار است، بنابراین مجموعه ای از آزمایشات ویژه برای تمایز آنها پیشنهاد شده است:

حلالیت در صفرا (تست دی اکسی کولات)؛

توانایی تجزیه اینولین؛

حساسیت به اپتوچین؛

واکنش آگلوتیناسیون با سرم های ضد پنوموکوک خاص.

توانایی تجزیه گلوکز، مالتوز، ساکارز، لاکتوز، مانیتول، سوربیتول و سالیسین.

در دسترس ترین روش برای افتراق پنوموکوک ها از سایر استرپتوکوک ها آزمایش با اپتوکین است (رشد آنها را مهار می کند). آنها از استرپتوکوک ویریدانس با توانایی تخمیر اینولین و همچنین حساسیت به صفرا متمایز می شوند.

تست دئوکسی کولات پس از باکتریوسکوپی اولیه، 10 قطره از کشت خالص جدا شده (ترجیحاً آبگوشت) به یک لوله آزمایش با 5 قطره صفرای استریل گاوی اضافه می شود. شاهد یک کشت است که به یک لوله آزمایش با 5 قطره محلول نمک اضافه می شود. پس از 30-60 دقیقه انکوباسیون در دمای 37 درجه سانتیگراد، لیز کامل کشت به صورت پاکسازی در لوله آزمایش با صفرا مشاهده می شود. لازم به یادآوری است که کشت های پنوموکوکی بدون بیماری در برابر صفرا مقاوم هستند.

مقاومت صفرا را می توان با کشت در آبگوشت صفراوی 10 درصد نیز آزمایش کرد. مواد آزمایش به محیط اضافه می شود و آبگوشت کدر می شود. پس از 24 ساعت انکوباسیون در دمای 37 درجه سانتیگراد، وجود پنوموکوک با پاکسازی آبگوشت در نتیجه لیز باکتری مشخص می شود.

همچنین می توانید از دیسک های خیس شده در محلول 20 درصد صفرا استفاده کنید. دیسک ها روی کشت رشد یافته در یک ظرف قرار داده می شوند و به مدت 1-2 ساعت در دمای 37 درجه سانتی گراد انکوبه می شوند. در حضور پنوموکوک، کلنی ها در اطراف دیسک در فاصله 1-2 میلی متر لیز می شوند.

تست اینولین کشت پنوموکوک روی محیطی با اینولین تلقیح می شود. برای این کار، 200 میلی لیتر آب مقطر استریل، 18 میلی لیتر تنتور لیتموس و 3 گرم اینولین را به 100 میلی لیتر سرم گاوی که در دمای 56 درجه سانتیگراد به مدت 30 دقیقه گرم شده است، اضافه کرده و با بخار آب جاری به مدت 30 دقیقه استریل کنید. محصولات در دمای 37 درجه سانتیگراد به مدت 24 ساعت انکوبه می شوند. پنوموکوک اینولین را تجزیه می کند و باعث قرمز شدن محیط می شود. استرپتوکوک ویریدانس باعث قرمزی محیط نمی شود.

تست با اپتوچین کشت پنوموکوک آزمایشی بر روی آب پنیر براث با اپتوچین در رقت 1:100000 یا 1:200000 تلقیح می شود. پنوموکوک در چنین محیطی رشد نمی کند. همچنین می توانید حساسیت به اپتوچین را با قرار دادن روی آگار خون 10 درصد حاوی اپتوچین با رقت 1:50000 تعیین کنید. کنترل، تلقیح کشت بر روی آگار خون است. پنوموکوک ها روی محیط کشت با اپتوچین رشد نمی کنند. می توانید از دیسک های آغشته به 6 میکروگرم اپتوشین استفاده کنید که پس از تلقیح روی سطح محیط اعمال می شود. در پنوموکوک ها یک ناحیه بازدارنده رشد به قطر حداقل 18 میلی متر در اطراف دیسک ایجاد می شود.

تست بیماری زایی کشت روزانه پنوموکوک رشد شده در آب پنیر با 1٪ آب پپتون استریل (pH - 7.6) یا آبگوشت کمی قلیایی تا 1:10 رقیق می شود. کشت رقیق شده به صورت داخل صفاقی به موش های سفید با وزن 16-20 گرم در حجم 0.5 میلی لیتر داده شد و به مدت 72 ساعت مشاهده شد. اندام‌های موش مرده روی محیط‌های غذایی تلقیح می‌شوند و اسمیر اثر انگشت به صورت میکروسکوپی بررسی می‌شود. کشت‌های بسیار بدخیم شامل پنوموکوک‌ها هستند که پس از معرفی کشت در رقت 1:10 باعث مرگ موش‌ها می‌شوند. کشت های بدخیم باعث مرگ موش نمی شود.

سروتیپ پنوموکوک. کشت 18 ساعته در واکنش میکروآگلوتیناسیون سابین آزمایش می شود. 4 قطره از کشت پنوموکوک روی یک اسلاید شیشه ای ریخته می شود. به 1 قطره یک قطره سرم ضد پنوموکوک نوع 1، به سرم دوم - نوع II، به 3 - سرم - 111، به چهارم - یک قطره سرم معمولی اضافه کنید. مخلوط های روی شیشه با یک حلقه مخلوط می شوند و زیر ذره بین یا میکروسکوپ با بزرگنمایی کم بررسی می شوند. در یک مورد مثبت، آگلوتیناسیون در یکی از سه قطره اول مشاهده می شود. نوع پنوموکوک با واکنش آگلوتیناسیون با سرم های آگلوتینه کننده خاص از سه نوع ثابت اول تعیین می شود. کشت هایی که توسط این نوع سرم ها آگلوتینه نشده اند به عنوان گروه X طبقه بندی می شوند. واکنش به صورت زیر تنظیم می شود. 0.5 میلی لیتر از کشت آبگوشت 18 ساعته را در لوله های آزمایش بریزید. سپس حجم مساوی سرم اضافه می شود که با سالین به نسبت 1:5 رقیق شده است. کنترل ها 2 لوله آزمایش هستند که یکی از آنها حاوی کشت آزمایش مخلوط شده با آن است

سرم خرگوش طبیعی، و از سوی دیگر - فقط کشت آزمون. محتویات لوله ها کاملاً تکان داده می شود و به مدت 2 ساعت در ترموستات 37 درجه سانتیگراد قرار می گیرد و پس از آن محاسبه اولیه واکنش انجام می شود. نتایج نهایی پس از نگهداری اضافی در دمای اتاق به مدت 20 ساعت مشخص می شود. اگر محتویات لوله ها به طور کامل پاک شود و کشت آگلوتیناسیون یک لایه متراکم باشد که هنگام تکان دادن نمی شکند، آگلوتیناسیون به عنوان چهار پلاس ارزیابی می شود. اگر وقتی محتویات لوله کاملاً پاک می شود، فرهنگ آگلوتیناسیون به راحتی به قطعات تقسیم می شود، سه امتیاز. دو مثبت - اگر پاکسازی رخ ندهد، ذرات کشت آگلوتینه شده به وضوح در محتویات کدر لوله آزمایش با چشم غیر مسلح قابل مشاهده است. با آگلوتیناسیون برای یک پلاس، مخلوط ریزدانه ای از پنوموکوک های چسبانده شده در لوله آزمایش یافت می شود. در صورت مشاهده یک واکنش منفی با چشم، آگلوتیناسیون مشاهده نمی شود.

محتویات لوله های آزمایش پس از تکان دادن به طور یکنواخت کدر است.

تایپ پنوموکوک های گروه X با استفاده از گروه انجام می شود

سرم های حاوی مخلوطی از سرم های آگلوتینه کننده معمولی گرفته شده است

در حجم های مساوی سرم های گروه زیر را توسط

مخلوط کردن حجم مساوی از تشخیص استاندارد رقیق نشده

سرم (Lund, I960):

سرووارهای A -1، II، IV، V، XVIII.

B - سرووارهای VI، VIII، XIX.

ج - VII، XX. سروارهای XXIV، XXXI، XL;

د - IX، XI، XVI، XXXVI. سرووارهای XXXVII;

E - X، XXI. سرووارهای XXXIII، XXXIX;

F - XII. XVII. سرووارهای XXII، XXXVII، XXXII، XLI.

G - XIII، XXV. سرووارهای XXIX، XXXIV، XXXV، XXXVIII، XLII، XLVII.

J - XLIII. سروارهای XLIV، XLV، XLVI.

سرم آگلوتینه کننده نوع III به خودی خود (بدون اختلاط با سایر سرم های استاندارد) به دلیل دشواری بدست آوردن آن در تیتر به اندازه کافی بالا استفاده می شود. تایپ در دو مرحله انجام می شود: ابتدا با کمک سرم های گروهی و سپس با سرم های فردی گروهی که با آنها واکنش مثبت حاصل شد. سروتیپ پنوموکوک ها عمدتاً برای مطالعات اپیدمیولوژیک نتایج سروتراپی اختصاصی و سروپروفیلاکسی استفاده می شود.

میکرواگلوتیناسیون پنوموکوک ها به روش سابین را می توان با مخلوط کردن سرم های ضد پنوموکوک با ترشحات حفره شکمی موش آلوده به خلط بیمار به دست آورد. در حال حاضر چهار ساعت پس از عفونت، کشت خالص پنوموکوک در اگزودا تشخیص داده می شود که باعث آگلوتیناسیون سابین مثبت می شود.

روش های تسریع شده برای تشخیص و تایپ پنوموکوک. 1. روش نوفلد یا پدیده تورم کپسول پنوموکوک. یک توده از خلط تازه ترشح شده از بیمار به سه مورد استفاده می شود

به هر یک از آنها یک قطره سرم ضد پنوموکوک اختصاصی رقیق نشده (نوع 1، II، III) و یک قطره لوفلر آبی اضافه کنید. قطره ها کاملا مخلوط شده و با یک اسلاید شیشه ای که اطراف لبه های آن با وازلین آغشته شده است، پوشانده می شوند. پس از دو دقیقه، قطره های آویزان در زیر میکروسکوپ با سیستم غوطه وری بررسی می شوند. در یک مورد مثبت، افزایش شدید کپسول های پنوموکوکی قابل مشاهده است. اگر نتیجه منفی باشد، کپسول ها به سختی ارزش گذاری می شوند. واکنش تورم خاص است و با سایر باکتری های کپسولی نتیجه مثبتی نمی دهد. من از آن برای بررسی خلط بیماران تحت درمان با سولفونامیدها و آنتی بیوتیک ها استفاده نمی کنم، زیرا در این حالت می توان پنوموکوک غیر کپسولی را جدا کرد.

2. روش بارش. 10-5 میلی لیتر خلط را در حمام آب می جوشانند تا لخته غلیظ به دست آید. لخته را آسیاب می کنند و مقدار کمی نمک به آن اضافه می کنند و دوباره برای چند دقیقه می جوشانند تا پلی ساکارید خاص از پنوموکوک استخراج شود. سوسپانسیون سانتریفیوژ می شود و یک واکنش رسوب حلقه ای با مایع شفاف به دست آمده و سرم های استاندارد خاص در لوله های رسوب انجام می شود. ظاهر یک حلقه در سطح مشترک بین مایعات نشان دهنده یک نتیجه مثبت است.

3. تعیین کپسول پنوموکوکی بر اساس Burri. یک قطره از مواد آزمایش و یک قطره جوهر به انتهای اسلاید اعمال می شود. مخلوط مخلوط می شود و یک اسمیر ساخته می شود، در هوا خشک می شود و بدون تثبیت، زیر میکروسکوپ بررسی می شود. پس‌زمینه این دارو بدنه‌های میکروبی تیره است و کپسول‌های آنها رنگ‌آمیزی ندارد. آماده سازی ساخته شده بر اساس Burri را می توان با مخلوط نیکیفوروف ثابت کرد، با آب شستشو داد و با Ziehl fuchsin رقیق شده 1:3 به مدت 3-5 دقیقه رنگ آمیزی کرد. در برابر پس زمینه تیره اسمیر، کپسول های رنگ نشده خودنمایی می کنند که در داخل آنها باکتری هایی با رنگ زرشکی روشن وجود دارد (روش هینس).

مخملکباعث ایجاد سروتیپ های مختلفی از استرپتوکوک های بتا همولیتیک می شود که دارای آنتی ژن M هستند و اریتروژنین تولید می کنند (استرپتوکوک های سمی از سروگروه A) - (استرپتوکوک پیوژنز). در غیاب ایمنی ضد سمی، مخملک رخ می دهد و در صورت وجود گلودرد.

تصویر بالینی

 مسمومیت - تب، ضعف عمومی، سردرد.

 بثورات مخملک نقطه ای است، با فشار متوسط ​​با کاردک شیشه ای، لکه ها واضح تر دیده می شوند. با فشار بیشتر، بثورات جای خود را به رنگ زرد مایل به طلایی روی پوست می دهند. این بیماری در روزهای 1-3 بیماری ظاهر می شود و عمدتاً در گونه ها، کشاله ران و طرفین بدن موضعی دارد. پوست مثلث نازولبیال رنگ پریده و عاری از بثورات باقی می ماند. بثورات معمولاً 3-7 روز طول می کشد، سپس محو می شود و هیچ رنگدانه ای باقی نمی ماند. بثورات روی خم های اندام ها - زیر بغل، آرنج، نواحی پوپلیتئال ضخیم می شود.

زبان مایل به قرمز - در روز 2-4 بیماری، زبان بیمار به طور مشخص دانه دانه، به رنگ قرمز روشن، به اصطلاح زبان "تمشک" می شود.

 گلودرد از علائم ثابت مخملک است. ممکن است شدیدتر از گلودرد معمولی باشد.

لایه برداری پوست - بعد از ناپدید شدن بثورات (14 روز از شروع بیماری) رخ می دهد: در ناحیه کف دست ها و پاها صفحه بزرگی است که از نوک انگشتان شروع می شود. لایه برداری شبیه پیتریازیس در بدن، گردن و گوش وجود دارد.

پنوموکوک، طبقه بندی. خواص. گروه های سرولوژیکی ویژگی های متمایز از سایر استرپتوکوک ها. باعث بیماری شد. اصول و روشهای تشخیص آزمایشگاهی.

مورفولوژی و خواص بیولوژیکی. پنوموکوک ها (Streptococcus pneumoniae) کوکسی های بیضی شکل، کمی دراز و نیزه ای شکل هستند که به صورت جفت قرار گرفته اند و شبیه شعله شمع هستند. آنها همچنین می توانند در زنجیره های کوتاه، شبیه استرپتوکوک قرار گیرند. متحرک، اسپور تشکیل نمی دهد، گرم مثبت است.
آنها روی محیط هایی با پروتئین اضافه شده رشد می کنند: خون، سرم و مایع آسیت. روی آگار خون، کلنی‌های پنوموکوک‌ها کوچک، شبیه قطرات شبنم، شفاف در نور عبوری، با مرکز فرورفته، احاطه‌شده توسط ناحیه‌ای از همولیز ناقص، به رنگ سبز، شبیه به مستعمرات استرپتوکوک ویریدانس هستند. در محیط های مایع، آنها کمی ابری ایجاد می کنند، گاهی اوقات یک رسوب تشکیل می دهند. از نظر بیوشیمیایی آنها کاملاً فعال هستند: آنها گلوکز، لاکتوز، مالتوز، اینولین و سایر کربوهیدرات ها را تجزیه می کنند و اسید تشکیل می دهند، ژلاتین را مایع نمی کنند و ایندول را تشکیل نمی دهند. تجزیه اینولین یک ویژگی تشخیصی افتراقی است که به تشخیص پنوموکوک از استرپتوکوک کمک می کند که اینولین را تجزیه نمی کند.

یک ویژگی متمایز مهم توانایی پنوموکوک ها برای حل شدن در صفرا است، در حالی که استرپتوکوک ها به خوبی در آن حفظ می شوند.

پاتوژنز و کلینیک. پنوموکوک ها عوامل ایجاد کننده پنومونی لوبار در انسان هستند. آنها همچنین می توانند باعث زخم قرنیه خزنده، آب مروارید دستگاه تنفسی فوقانی، مننژیت، اندوکاردیت، آسیب مفاصل و سایر بیماری ها شوند.
پس از یک بیماری، ایمنی کم فشار، کوتاه مدت و نوع خاص است.

تشخیص میکروبیولوژیکی مواد مورد مطالعه عبارتند از: خلط، خون، سواب گلو و مایع مغزی نخاعی. با توجه به اینکه پنوموکوک به سرعت می میرد، مواد پاتولوژیک باید در اسرع وقت برای بررسی به آزمایشگاه تحویل داده شود.

مننگوکوک. طبقه بندی، خواص. ساختار آنتی ژنی مننگوکوک ها، طبقه بندی. پاتوژنز عفونت مننگوکوک، تظاهرات بالینی. اصول و روشهای تشخیص میکروبیولوژیکی. تمایز عامل عفونت مننگوکوک و سایر مننگوکوک ها. پیشگیری خاص

N.meningitidis (مننگوکوک). مننگوکوک عامل عفونت مننگوکوک است - آنتروپونوز شدید با انتقال قطرات هوا از پاتوژن. منبع اصلی رسانه است. مخزن طبیعی نازوفارنکس انسان است. خواص مورفولوژیکی، فرهنگی و بیوشیمیایی مشابه گونوکوک است.تفاوت ها - آنها نه تنها گلوکز، بلکه مالتوز را نیز تخمیر می کنند و همولیزین تولید می کنند.

آنها کپسولی دارند که اندازه آن بزرگتر است و ساختار متفاوتی نسبت به گونوکوک دارد.ترکیب آنتی ژنیک

آنها چهار سیستم آنتی ژنی اصلی دارند.

1. آنتی ژن های پلی ساکارید مخصوص گروه کپسولی. سویه های سروگروپ A اغلب باعث شیوع همه گیر می شوند.

3. آنتی ژن های خاص جنس و گونه.

4. آنتی ژن های لیپوپلی ساکارید (8 نوع). سمیت بالایی دارند و اثرات تب زایی دارند.

عوامل بیماری زاییعوامل چسبندگی و کلونیزاسیون - پیلی و پروتئین های غشای خارجی. عوامل تهاجمی هیالورونیداز و سایر آنزیم های تولید شده (نورآمینیداز، پروتئازها، فیبرینولیزین) هستند. آنتی ژن های پلی ساکارید کپسولی که از میکروارگانیسم ها در برابر فاگوسیتوز محافظت می کنند از اهمیت بالایی برخوردار هستند.

مصونیتبادوام، ضد میکروبی

تشخیص آزمایشگاهیبر اساس باکتریوسکوپی، جداسازی کشت و شناسایی بیوشیمیایی آن، روش های تشخیصی سرولوژیکی. این ماده بر روی محیط های غذایی جامد و نیمه مایع حاوی خون، مایع آسیتی و سرم خون تلقیح می شود.

کشت های اکسیداز مثبت متعلق به جنس نایسریا در نظر گرفته می شود. مننگوکوک با تخمیر گلوکز و مالتوز مشخص می شود. تعلق به یک سروگروپ با آزمایش آگلوتیناسیون (RA) مشخص می شود.

گونوکوک. طبقه بندی، خواص. پاتوژنز عفونت گنوکوکی، ویژگی های ایمنی. اصول و روش های تشخیص آزمایشگاهی سوزاک حاد و مزمن، بلنوره. RSK Bordet-Gengou، هدف، مکانیسم، حسابداری واکنش. پیشگیری از بلنوره در نوزادان پیشگیری و درمان سوزاک. درمان اختصاصی

N.gonorrheae (گنوکوک).

گونوکوک عامل بیماری سوزاک، یک بیماری مقاربتی با تظاهرات التهابی در دستگاه تناسلی ادراری است. بستر برای کلونیزاسیون اپیتلیوم مجرای ادرار، راست روده، ملتحمه چشم، حلق، دهانه رحم، لوله های فالوپ و تخمدان است.

دیپلوکوک ها که به راحتی با متیلن بلو و سایر رنگ های آنیلین رنگ آمیزی می شوند، پلئومورفیک (پلی مورفیسم) هستند. آنها در مورد شرایط کشت و محیط های غذایی بسیار حساس هستند. از کربوهیدرات ها فقط گلوکز تخمیر می شود.

ساختار آنتی ژنیکبسیار متغیر - با تغییرات فازی (ناپدید شدن عوامل آنتی ژنیک) و تغییرات آنتی ژنی (تغییر در عوامل تعیین کننده آنتی ژن) مشخص می شود.

عوامل بیماری زاییعوامل اصلی هستند نوشیدندکه با کمک آن گنوکوک ها چسبندگی و کلونیزاسیون سلول های اپیتلیال غشای مخاطی دستگاه ادراری تناسلی را انجام می دهند و لیپوپلی ساکارید(هنگامی که گنوکوک ها از بین می روند اندوتوکسین آزاد می شود). گونوکوک ها پروتئاز IgAI را سنتز می کنند که IgA را تجزیه می کند.

تشخیص آزمایشگاهی.تشخیص باکتریوسکوپی شامل رنگ آمیزی گرم و متیلن بلو است. نشانه‌های معمول گنوکوک عبارتند از رنگ‌آمیزی گرم منفی، دیپلوکوک‌های لوبیایی شکل، محلی‌سازی داخل سلولی.

تلقیح بر روی محیط های مخصوص (KDS-MPA از گوشت خرگوش یا قلب گاو با سرم، آسیت-آگار، آگار خون) انجام می شود.

عوامل ایجاد کننده عفونت بی هوازی گازی. طبقه بندی. خواص. ویژگی های سموم پاتوژنز، اشکال بالینی. اصول و روش های تشخیص آزمایشگاهی، داروهایی برای پیشگیری و درمان خاص.

گانگرن گازی یک عفونت بی هوازی پلی کلستریدیایی (یعنی ناشی از انواع مختلف کلستریدیا) زخم (تروماتیک) است. اهمیت اصلی C.perfringens، کمتر - C.novyi، و همچنین سایر انواع کلستریدیا در ارتباط مداوم با یکدیگر، کوکسی های پیوژنیک هوازی و باکتری های بی هوازی پوسیده است.

C.perfringens ساکن عادی روده انسان و حیوانات است که با مدفوع وارد خاک می شود. این یک عامل ایجاد کننده عفونت زخم است - زمانی که عامل بیماری زا در شرایط بی هوازی وارد زخم می شود باعث بیماری می شود. بسیار تهاجمی و سم زا است. تهاجمی با تولید هیالورونیداز و سایر آنزیم هایی که اثر مخربی بر عضله و بافت همبند دارند، مرتبط است. اصلی عامل بیماری زایی - اگزوتوکسینکه دارای اثرات همو، نکرو، عصبی، لوکوتوکسیک و کشنده است. مطابق با ویژگی آنتی ژنی اگزوتوکسین ها، آنها جدا می شوند سروتیپ هاپاتوژن همراه با گانگرن گازی، C. perfringens باعث عفونت های سمی ناشی از مواد غذایی می شود (آنها بر اساس عملکرد انتروتوکسین ها و نکروتوکسین ها هستند).

ویژگی های پاتوژنز.برخلاف بیماری های چرکی ناشی از هوازی، در عفونت بی هوازی، التهاب غالب نیست، بلکه نکروز، ادم، تشکیل گاز در بافت ها، مسمومیت با سموم و محصولات تجزیه بافتی.

مصونیت- عمدتاً آنتی سمی است.

تشخیص آزمایشگاهیشامل باکتریوسکوپی ترشحات زخم، جداسازی و شناسایی پاتوژن، تشخیص و شناسایی سم در نمونه های بیولوژیکی با استفاده از واکنش خنثی سازی با آنتی بادی های آنتی سمی خاص است.

پیشگیری و درمان.اساس پیشگیری از گانگرن گازی، درمان جراحی به موقع و صحیح زخم ها است. در صورت زخم های شدید، سرم های آنتی سمی بر علیه انواع اصلی کلستریدیا، 10 هزار واحد بین المللی، برای اهداف دارویی - 50 هزار واحد بین المللی، تجویز می شود.

کلستریدیا کزاز. طبقه بندی. خواص، ویژگی های سموم. پاتوژنز بیماری. کزاز نزولی. کلینیک. اصول و روشهای تشخیص آزمایشگاهی. هدف از تحقیقات باکتریولوژیک، داروهایی برای پیشگیری و درمان خاص.

کزاز یک عفونت حاد زخم است که با ضایعات مشخص می شود نوروتوکسینسلول های حرکتی نخاع و مغز که خود را به شکل تشنج ماهیچه های مخطط نشان می دهد. مردم و حیوانات مزرعه بیمار می شوند. خاک، به ویژه آلوده به فضولات انسان و حیوان، منبع دائمی عفونت کزاز است.

عامل بیماری C.tetani است - یک میله گرم مثبت بزرگ تشکیل دهنده هاگ. هاگ ها در انتهایی قرار دارند (نوع چوب طبل) و به دلیل تاژک - پریتریش متحرک هستند. بی هوازی اجباری هاگ ها بسیار مقاوم هستند.

خواص آنتی ژنیکپاتوژن دارای آنتی ژن های O و H است.

عوامل بیماری زاییعامل اصلی قوی ترین اگزوتوکسین است. دو بخش اصلی از آن وجود دارد: تتانوسپاسمین (نوروتوکسین) و تتانولیزین (همولیزین). نوروتوکسین وارد سیستم عصبی مرکزی به نواحی سیناپس‌های میونورال می‌شود، از نورون به نورون در ناحیه سیناپس‌ها منتقل می‌شود، در نواحی حرکتی نخاع و مغز تجمع می‌یابد و انتقال سیناپسی را مسدود می‌کند. مرگ در اثر فلج مرکز تنفسی، خفگی (آسیب به ماهیچه های حنجره، دیافراگم، عضلات بین دنده ای) یا فلج قلب رخ می دهد.

تشخیص آزمایشگاهی.تشخیص میکروبیولوژیکی شامل باکتریوسکوپی مواد اولیه، کشت برای جداسازی پاتوژن و شناسایی آن و تشخیص سم کزاز است.

جداسازی پاتوژن بر اساس طرح استاندارد برای بی هوازی ها، با استفاده از محیط های جامد و مایع مختلف (محیط کیت تاروزی)، شناسایی بر اساس ویژگی های مورفولوژیکی، فرهنگی، بیوشیمیایی و سم زایی انجام می شود.

ساده ترین و موثرترین روش تشخیص میکروبیولوژیکی، سنجش زیستی روی موش سفید است. یک گروه با مواد آزمایش آلوده می شود، گروه دوم (شاهد) - پس از مخلوط کردن نمونه ها با سرم کزاز ضد سمی. در حضور سم کزاز، گروه آزمایشی موش ها می میرند، در حالی که گروه کنترل زنده می مانند.

درمان و پیشگیری اضطراری.ایمونوگلوبولین کزاز دهنده (آنتی توکسین)، سرم آنتی توکسیک (IU/kg 350)، آنتی بیوتیک ها (پنی سیلین ها، سفالوسپورین ها) استفاده می شود. برای ایجاد ایمنی واکسن، توکسوئید کزاز اغلب به عنوان بخشی از واکسن‌های DTP (سموم کزاز، دیفتری و باسیل‌های سیاه سرفه) استفاده می‌شود.

بوتولیسم کلستریدیوم طبقه بندی. خواص. ویژگی های سموم، تفاوت با اگزوتوکسین های پاتوژن های سایر عفونت های غذایی. اصول و روشهای تشخیص آزمایشگاهی. داروهایی برای پیشگیری و درمان خاص.

بوتولیسم یک بیماری شدید ناشی از غذا است که با مصرف محصولات آلوده به C.botulinum همراه است و با آسیب خاصی به سیستم عصبی مرکزی مشخص می شود. نام خود را از لات گرفته است. بوتولوس - سوسیس.

خواص پاتوژنمیله‌های گرم مثبت چندشکلی بزرگ، متحرک، دارای تاژک‌های پری‌تریک هستند. هاگ ها بیضی شکل هستند و در زیر ترمینال قرار دارند (راکت تنیس). آنها هشت نوع سم تولید می کنند که از نظر ویژگی آنتی ژنی متفاوت است و بر این اساس، 8 نوع پاتوژن متمایز می شود. از جمله مهمترین خصوصیات وجود یا عدم وجود خواص پروتئولیتیک (هیدرولیز کازئین، تولید سولفید هیدروژن) است.

این سم دارای اثر عصبی است. این سم با غذا وارد بدن می شود، اگرچه احتمالاً زمانی که عامل بیماری زا در بافت های بدن تکثیر می شود، تجمع می یابد. این سم حساس به حرارت است، اگرچه جوشاندن تا 20 دقیقه برای غیرفعال شدن کامل ضروری است. این سم به سرعت در دستگاه گوارش جذب می شود، به خون نفوذ می کند، به طور انتخابی بر روی هسته های بصل النخاع و سلول های گانگلیونی نخاع عمل می کند. پدیده های عصبی فلج کننده ایجاد می شوند - اختلالات بلع، آفونیا، دیسفاژی، سندرم افتالموپلژیک (استرابیسم، دوبینی، افتادگی پلک)، فلج و فلج عضلات حلق و حنجره، توقف تنفس و فعالیت قلبی.

تشخیص آزمایشگاهی.این اصول برای کلستریدیا مشترک است.

درمان و پیشگیری.این بر اساس استفاده اولیه از سرم های آنتی توکسیک (چند ظرفیتی یا در صورت مشخص شدن نوع، همولوگ) است. پیشگیری بر اساس یک رژیم بهداشتی و بهداشتی هنگام پردازش محصولات غذایی است. قارچ های کنسرو شده خانگی و سایر محصولاتی که در شرایط بی هوازی نگهداری می شوند به ویژه خطرناک هستند.

11. سودوموناس آئروژینوزا. طبقه بندی. خواص. باعث بیماری شد.
نقش در عفونت های بیمارستانی اصول و روشهای تشخیص آزمایشگاهی.

جنس سودوموناس، P. aeruginosa (Pseudomonas aeruginosa) یکی از عوامل اصلی ایجاد فرآیندهای التهابی چرکی موضعی و سیستمیک در بیمارستان‌های پزشکی است.

پاتوژن در همه جا پراکنده است (آب، خاک، گیاهان، حیوانات) و به طور معمول در انسان (اغلب در روده ها، روی پوست و غشاهای مخاطی) یافت می شود. مورفولوژی- میله گرم منفی مستقیم یا کمی خمیده، متحرک، به صورت تکی، جفت یا زنجیره ای کوتاه در اسمیر قرار دارد. مخاط (ماده کپسولی)، به ویژه سویه های مخاطی خطرناک تر را سنتز می کند.

املاک فرهنگیاین یک هوازی است و دارای مجموعه ای از آنزیم های مربوط به نوع تنفس است (سیتوکروم ها، سیتوکروم اکسیداز، دهیدرازها. در محیط های مایع یک لایه نقره ای مایل به خاکستری تشکیل می دهد. در محیط جامد اغلب پدیده لیز رنگین کمان مشاهده می شود. در پایان. روز به دلیل سنتز رنگدانه پیوسیانینرنگ سبز آبی در فرهنگ ظاهر می شود.

خواص بیوشیمیاییسودوموناس آئروژینوزا با فعالیت ساکارولیتیک کم (فقط گلوکز را اکسید می کند)، فعالیت پروتئولیتیک بالا و تشکیل ناحیه بتا همولیز در آگار خون مشخص می شود. تری متیل آمین را سنتز می کند که بوی خوش گل یاس را به محصولات می دهد. تولید باکتریوسین را تولید می کند - پیوسین ها.

خواص آنتی ژنی و بیماری زایی.آنتی ژن های اصلی سودوموناس آئروژینوزا آنتی ژن O سوماتیک مخصوص گروه و آنتی ژن H تاژک خاص نوع خاص است. کمپلکس O-آنتی ژنیک - مجموعه ای از LPS با پروتئین ها و لیپیدهای دیواره سلولی، دارای خواص اندوتوکسین است و یکی از عوامل اصلی بیماری زایی است. سودوموناس آئروژینوزا دارای مجموعه زیادی از عوامل بیماری زایی است - اندوتوکسین (LPS، مشابه سایر باکتری های گرم منفی)، تعدادی اگزوتوکسین - سیتوتوکسین، اگزوآنزیم S، همولیزین ها، اگزوتوکسین A (مهم ترین، یادآور اگزوتوکسین دیفتری)، آنزیم ها ( کلاژناز، نورآمینیداز، پروتئازها).

تشخیص آزمایشگاهی. P. aeruginisa نام خود را به دلیل رنگ سبز مایل به آبی ترشحات زخم و مواد پانسمان دریافت کرد. روش اصلی تشخیصی باکتریولوژیک است. تشخیص رنگدانه پیوسیانین مهم است. درمان و پیشگیری خاص.پیشگیری خاصی وجود ندارد. برای عفونت های سمی غذایی و دیس بیوز روده ای ناشی از سودوموناس آئروژینوزا، یک روده-باکتریوفاژ پیچیده که شامل فاژ سودوموناس است، موثر است. در بین داروهای ضد باکتری، آمینوگلیکوزیدها، سفالوسپورین ها و کینولون ها بیشتر مورد استفاده قرار می گیرند.

باکتری های گرم منفی فرصت طلب - عوامل ایجاد کننده فرآیندهای چرکی و التهابی (Proteus، Klebsiella، miraculus و غیره)، طبقه بندی. مشخصات کلی انتروباکتری ها اصول و روشهای تشخیص آزمایشگاهی.

جنس کلبسیلا.

جنس کلبسیلا از خانواده انتروباکتریاسه است. یکی از ویژگی های نمایندگان این جنس توانایی تشکیل یک کپسول است. گونه اصلی K. pneumoniae است. آنها باعث ایجاد ضایعات فرصت طلب - پنومونی اکتسابی در بیمارستان، عفونت های دستگاه ادراری، اسهال در نوزادان می شوند. کلبسیلا باعث ورم پستان، سپتی سمی و ذات الریه در حیوانات می شود و به طور مداوم بر روی پوست و مخاط انسان و حیوانات یافت می شود. کلبسیلا میله های مستقیم و بی حرکت در اندازه های مختلف هستند. بی هوازی اختیاری اکسیداز - منفی، کاتالاز - مثبت.

عوامل بیماری زاییاینها شامل یک کپسول پلی ساکارید (آنتی ژن K)، اندوتوکسین، فیمبریا، سیستم سیدروفور (یون‌های آهن را متصل می‌کند و محتوای آنها را در بافت‌ها کاهش می‌دهد)، اگزوتوکسین‌های حساس به حرارت و پایدار در برابر حرارت.

تظاهرات بالینی K. pneumoniae (subsp. pneumoniae) با برونشیت بیمارستانی و برونکوپنومونی، پنومونی لوبار، عفونت های دستگاه ادراری، آسیب به مننژها، مفاصل، ستون فقرات، چشم ها و همچنین باکتریمی و سپتیکوپمی مشخص می شود. زیرگونه ozaenae باعث شکل خاصی از رینیت آتروفیک مزمن می شود - اوزن.

تشخیص آزمایشگاهی.روش اصلی باکتریولوژیک است. درمان.یکی از ویژگی های کلبسیلا مقاومت چند دارویی آنها و ایجاد ضایعات در پس زمینه کاهش مقاومت بدن است. آنتی بیوتیک ها برای اشکال مزمن عمومی و کند کلبسیلا، معمولاً در ترکیب با داروهایی که سیستم ایمنی را تحریک می کنند، استفاده می شود.

جنس پروتئوس.

جنس پروتئوس از خانواده انتروباکتریاسه است. این جنس به نام پسر پوزیدون پروتئوس نامگذاری شد که توانست ظاهر خود را تغییر دهد. نمایندگان این جنس قادر به تغییر تظاهرات خارجی رشد در محیط های غذایی جامد هستند و همچنین با بیشترین پلئومورفیسم (تغییر مورفولوژی) در مقایسه با سایر انتروباکتری ها متمایز می شوند.

پروتئین ها تیروزین را تجزیه می کنند، نیترات ها را کاهش می دهند، اکسیداز منفی، کاتالاز مثبت است. آنها در روده بسیاری از گونه های جانوران مهره داران و بی مهرگان، خاک، فاضلاب و مواد آلی در حال پوسیدگی زندگی می کنند. می تواند باعث عفونت دستگاه ادراری در انسان و همچنین ضایعات سپتیک در بیماران سوختگی و بعد از جراحی شود. اغلب آنها همچنین باعث مسمومیت غذایی می شوند. P.vulgaris و P.mirabilis اغلب در آسیب شناسی نقش دارند.

املاک فرهنگیپروتئاها در محیط های ساده در محدوده دمایی وسیعی رشد می کنند. pH مطلوب 7.2-7.4، دما از +35 تا 37 درجه سانتیگراد است. مستعمرات پروتئاها در فرم O گرد، نیمه دیجیتالی و محدب هستند، در حالی که فرم های H رشد مداومی دارند. رشد پروتئاها با بوی گندیده همراه است. پدیده ازدحام مشخصه است. هنگام کاشت بر اساس روش شوشکویچ در رطوبت تراکم MPA تازه بریده شده، کشت به تدریج به شکل پرده از سطح آگار بالا می رود. در MPB، کدورت منتشر محیط با یک رسوب سفید غلیظ در پایین ذکر شده است.

عوامل بیماری زاییاینها عبارتند از LPS دیواره سلولی، توانایی "ازدحام"، فیمبریا، پروتئازها و اوره آز، همولیزین ها و هماگلوتینین ها.

تشخیص آزمایشگاهی.روش اصلی باکتریولوژیک است. از رسانه های تشخیص افتراقی (Ploskirev)، رسانه های غنی کننده و MPA طبق روش شوشکویچ استفاده می شود. درمان. برای دیس باکتریوز روده مرتبط با پروتئاس (کولیت)، می توانید از پروتئوس فاژ و داروهای حاوی آن (روده، باکتریوفاژ کولیپروتئوس) استفاده کنید.

"چوب شگفت انگیز" (Serratia marcescens)، نوعی باکتری از میان میکروارگانیسم های رنگدانه ای. میله های متحرک گرم منفی (پریتریک) غیر اسپور. بر اساس نوع متابولیسم - بی هوازی اختیاری. روی سطح آگار کلنی های صاف یا دانه ای قرمز تیره و روشن با درخشندگی فلزی تشکیل می دهد. در خاک، آب و غذا زندگی می کند. رشد روی نان (در رطوبت بالا) و در شیر، آنها را قرمز می کند. چنین محصولاتی برای فروش مجاز نیستند. به طور مشروط برای حیوانات و انسان بیماری زا است. ممکن است باعث خفگی شود.

13. اشرشیا. طبقه بندی. بیماری های ناشی از اشریشیا کلی. انواع بیماری زا اشریشیای اسهالی. ساختار آنتی ژنی، طبقه بندی. ویژگی های تشخیص میکروبیولوژیکی تمایز اشرشیای اسهالی از موارد فرصت طلب.

اشریشیا شایع ترین باکتری هوازی روده ای است که تحت شرایط خاصی می تواند باعث ایجاد گروه وسیعی از بیماری های انسانی اعم از روده ای (اسهال) و خارج روده ای (باکتریمی، عفونت های ادراری و غیره) شود. گونه اصلی E. coli (Escherichia coli) است - شایع ترین عامل بیماری های عفونی ناشی از انتروباکتری ها. این پاتوژن نشانگر آلودگی مدفوع به خصوص در آب است.

املاک فرهنگیدر محیط های مایع، E. coli کدورت منتشر را در محیط جامد ایجاد می کند، کلنی های S و R را تشکیل می دهد. در اندو، محیط اصلی برای E. coli، مستعمرات تخمیرکننده لاکتوز با درخشندگی فلزی، مستعمرات صورتی کم رنگ یا بی رنگ با مرکز تیره تر تشکیل می دهند. در محیط لوین آنها آبی تیره با درخشندگی فلزی هستند.

خواص بیوشیمیاییدر بیشتر موارد، E. coli کربوهیدرات ها (گلوکز، لاکتوز، مانیتول، آرابینوز، گالاکتوز و غیره) را با تشکیل اسید و گاز تخمیر می کند، ایندول تولید می کند، اما سولفید هیدروژن را تشکیل نمی دهد و ژلاتین را مایع نمی کند.

عوامل اصلی بیماری زایی اشریشیاکلی اسهالی.

1. عوامل چسبندگی، کلونیزاسیون و تهاجم مرتبط با پیلی، ساختارهای فیمبریال و پروتئین های غشای خارجی. آنها توسط ژن های پلاسمید کدگذاری می شوند و باعث ایجاد کلونیزاسیون در قسمت تحتانی روده کوچک می شوند.

2. اگزوتوکسین ها: سیتوتونین ها (تحریک بیش از حد مایع توسط سلول های روده، متابولیسم آب-نمک را مختل می کنند و باعث ایجاد اسهال می شوند) و انتروسیتوتوکسین ها (روی سلول های دیواره روده و اندوتلیوم مویرگی عمل می کنند).

3. اندوتوکسین (لیپوپلی ساکارید).

بسته به وجود عوامل بیماری زایی مختلف، E. coli اسهالی به پنج نوع اصلی تقسیم می شود: انتروتوکسیژنیک، انترو تهاجمی، انتروپاتوژن، انتروهموراژیک، انترو چسبنده.

4. E. coli بیماری زا با تولید باکتریوسین (کولیسین) مشخص می شود.

E.coli انتروتوکسیژنیکدارای یک سم حساس به حرارت با مولکولی بالا، شبیه به وبا، که باعث اسهال وبا مانند (گاستروانتریت در کودکان خردسال، اسهال مسافرتی، و غیره) می شود.

اشریشیا کلی تهاجمیقادر به نفوذ و تکثیر در سلول های اپیتلیال روده است. آنها باعث اسهال شدید مخلوط با خون و تعداد زیادی لکوسیت (شاخص یک فرآیند تهاجمی) در مدفوع می شوند. از نظر بالینی شبیه اسهال خونی است. این سویه ها شباهت هایی با شیگلا دارند ( ساکن هستند، لاکتوز را تخمیر نمی کنند و خاصیت تهاجمی بالایی دارند).

انتروپاتوژن E.coli- عوامل اصلی اسهال در کودکان. ضایعات بر اساس چسبندگی باکتری ها به اپیتلیوم روده با آسیب به میکروویلی است. با اسهال آبکی و کم آبی شدید مشخص می شود.

اشرشیاکلی انتروهموراژیکباعث اسهال مخلوط با خون (کولیت هموراژیک)، سندرم همولیتیک-اورمیک (کم خونی همولیتیک همراه با نارسایی کلیه). شایع ترین سروتیپ اشریشیاکلی انتروهموراژیک O157:H7 است.

انتروچسب E. coliسیتوتوکسین ها را تشکیل نمی دهند، که مطالعه ضعیفی دارند.

تشخیص آزمایشگاهی.رویکرد اصلی جداسازی یک کشت خالص بر روی محیط‌های تشخیصی افتراقی و شناسایی آن توسط خواص آنتی ژنی است. RA با مجموعه ای از سرم های OK چند ظرفیتی (به آنتی ژن های O و K) تشخیص داده می شود.

در بین استرپتوکوک های بیماری زا، S.pneumoniae (پنوموکوک) جایگاه ویژه ای را به خود اختصاص داده است. نقش بسیار مهمی در آسیب شناسی عفونی انسان دارد. این گونه یکی از عوامل ایجاد کننده اصلی پنومونی لوبار است. بر اساس اطلاعات دور از کامل، هر ساله در جهان بیش از 500 هزار ذات الریه ناشی از پنوموکوک، به ویژه اغلب در کودکان و افراد مسن، وجود دارد. این میکروب علاوه بر ذات الریه باعث مننژیت، اندوکاردیت، پریتونیت، اوتیت میانی، رینیت، سینوزیت، سپسیس، زخم قرنیه خزنده و تعدادی بیماری دیگر می شود. برای انجام تشخیص های آزمایشگاهی از روش های باکتریوسکوپی، باکتریولوژیکی و بیولوژیکی استفاده می شود. مواد مورد بررسی عبارتند از: خلط، چرک، خون، مایع مغزی نخاعی، مخاط دهان و حلق، ترشحات سینوس فک بالا، چشم و گوش. بسیار مهم است که بلافاصله مواد را به آزمایشگاه ارسال کنید و آن را خیلی سریع بررسی کنید، زیرا پنوموکوک ها مستعد اتولیز هستند.

معاینه باکتریوسکوپی

بررسی باکتریوسکوپی مواد (به جز خون) به ساخت دو اسمیر منجر می شود. یکی از آنها با گرم و دومی با Burri-Gins رنگ آمیزی شده است که امکان شناسایی کپسول را فراهم می کند. پنوموکوک ها به شکل دیپلوکوک های نیزه ای هستند که توسط یک کپسول معمولی احاطه شده اند. اگر 10 یا بیشتر دیپلوکوک معمولی در میدان دید شناسایی شود، به احتمال زیاد می توان نتیجه گرفت که S.pneumoniae وجود دارد. با این حال، میکروسکوپ اولیه حق تشخیص نهایی را نمی دهد، زیرا اسمیر ممکن است حاوی دیپلوکوک های غیر بیماری زا کپسولی باشد - نمایندگان میکرو فلور طبیعی. بنابراین، تلقیح مواد بالینی و جداسازی یک کشت خالص ضروری است.

تحقیقات باکتریولوژیک

برای سپسیس در بالین بیمار، 10 میلی‌لیتر خون را در ویال حاوی 100 میلی‌لیتر آب پنیر یا آب‌پنیر تلقیح کرده، به مدت 18 تا 20 ساعت در دمای 37 درجه سانتی‌گراد تلقیح کنید، سپس بر روی آگار خون تلقیح کنید، جداسازی کنید و کشت خالص را شناسایی کنید. برای مننژیت، مایع مغزی نخاعی سانتریفیوژ می شود و رسوب به خون آگار تلقیح می شود. روی آن، پنوموکوک ها به شکل مستعمرات گرد کوچکی رشد می کنند که توسط یک منطقه سبز احاطه شده است، یک فرورفتگی مشخص در مرکز مستعمره قابل مشاهده است. کشت خلط یا چرک روی محیط های غذایی توصیه نمی شود، زیرا وجود میکرو فلور ساپروفیت رشد S.pneumoniae را سرکوب می کند. بهتر است مواد مورد آزمایش را به داخل حفره شکمی موش سفید وارد کنید. سنجش زیستی یک روش سریع، قابل اعتماد و دقیق برای جداسازی کشت خالص پنوموکوک است. موش های سفید به این باکتری ها بسیار حساس هستند و در عرض 12-10 ساعت پس از عفونت، پنوموکوک ها به خون و اندام های پارانشیمی نفوذ کرده و باعث سپسیس می شوند. کشت خون از قلب یا قطعاتی از اندام‌های داخلی در حین کالبد شکافی حیوانات به فرد اجازه می‌دهد تا یک کشت خالص از پاتوژن را جدا کند. برای شناسایی پنوموکوک ها از خواص آنها استفاده می شود. بر خلاف سایر انواع استرپتوکوک، S.pneumoniae روی محیطی با اپتوکین رشد نمی کند، اینولین تخمیر می شود و به عمل صفرا بسیار حساس است (تست دی اکسی کولات). اگر 0.5 میلی لیتر صفرا به 1 میلی لیتر کشت براث اضافه شود، لیز سریع پنوموکوک توسط صفرا قابل تشخیص است. پس از 15-20 دقیقه در ترموستات، لیز کامل سلول های باکتریایی رخ می دهد. برای تعیین سرووارهای پنوموکوکی (در حال حاضر 85 عدد از آنها وجود دارد)، از واکنش آگلوتیناسیون شیشه با سرم های استاندارد یا پدیده "تورم کپسول" استفاده می شود. در حضور سرم همولوگ، کپسول پنوموکوک به شدت متورم می شود. حتی بهتر است سروتیپ با استفاده از معرف های تجاری در واکنش های آگلوتیناسیون لاتکس یا کوآگلوتیناسیون انجام شود که از طریق آن آنتی ژن های کپسولی آشکار می شود. در بین استرپتوکوک ها جنس انتروکوک نیز مهم است که از شاخص ترین گونه های آن می توان به E.faecalis، E.faecium و E.durans اشاره کرد. آنها در طبیعت کاملاً گسترده هستند. طاقچه اصلی اکولوژیکی آنها روده انسان و حیوانات است، اما آنها همچنین به عنوان بخشی از میکرو فلور طبیعی پوست پرینه، اندام های ادراری تناسلی، دهان و نازوفارنکس یافت می شوند. آنها می توانند باعث خفگی زخم ها، باکتریمی، آسیب به سیستم ادراری تناسلی، به ویژه در بیماران مبتلا به کاتترهای طولانی مدت، عفونت های سمی ناشی از غذا، دیس باکتریوز دستگاه روده و به طور معمول، اندوکاردیت شوند. در اسمیر از مواد آزمایش، انتروکوک ها به صورت جفت، زنجیره ای کوتاه یا به شکل خوشه، گرم مثبت قرار دارند. تشخیص باکتریولوژیک عفونت های انتروکوکی بدون هیچ مشکلی انجام می شود، زیرا این باکتری ها در محیط های ساده به خوبی رشد می کنند. Agar dif-3 برای آنها انتخابی است (تا 600 میلی لیتر MPA 3٪، 400 میلی لیتر صفرا 40٪ اضافه کنید). پس از 24 ساعت انکوباسیون، کلنی هایی که رشد کرده اند دارای اندازه 0.4-1.0 میلی متر و رنگ مایل به خاکستری هستند. در آگار خون، همولیز ناقص یا کامل در اطراف کلنی ها رخ می دهد. برخلاف استرپتوکوک های ویریدانس، انتروکوک ها می توانند روی MPA با 6.5٪ NaCl رشد کنند و شیر را با متیلن بلو در دمای 37 درجه سانتیگراد پس از 4-6 ساعت کاهش دهند. شناسایی محصولات جدا شده با توجه به ویژگی های مورفولوژیکی، فرهنگی و بیوشیمیایی انجام می شود.

صفحه 40 از 91

عامل ایجاد کننده پنومونی لوبار (پنومونیا) پنوموکوک - دیپلوکوکوس پنومونیه است که اولین بار توسط پاستور در بزاق فردی که بر اثر هاری مرده بود (1881) کشف شد.
مورفولوژی و خواص رنگی. پنوموکوک ها (شکل 67 و 68 در قسمت داخلی) کوکسی های جفتی با شکل لانست دراز هستند. بنابراین، آنها را در غیر این صورت دیپلوکوک نیزه ای می نامند. با تشکیل زنجیره های کوتاه، پنوموکوک ها شبیه استرپتوکوک ها و بنابراین II می شوند. F. Gamaleya آنها را Streptococcus lanceolatus نامید. اندازه سلول از 0.5X0.75 تا 1X1.5 میکرومتر متغیر است. آنها هاگ یا تاژک ندارند. یکی از ویژگی های متمایز پنوموکوک تشکیل یک کپسول است که می تواند به وضوح در مواد پاتولوژیک (خلط، خون و غیره) بیان شود. وقتی روی محیط های غذایی کشت می شود، کپسول از بین می رود. پنوموکوک ها به راحتی رنگ های آنیلین را می پذیرند و روی گرم رنگ مثبت می گیرند.
خواص فرهنگی و بیوشیمیایی

برنج. 68. پنوموکوک در اسمیر خلط.

پنوموکوک ها هوازی و بی هوازی اختیاری هستند. دمای مطلوب حدود 37 درجه است. آنها روی محیط های حاوی پروتئین حیوانی (آگار خون یا سرم، آسیتاگار) رشد می کنند.
پس از 24 ساعت، کلنی های کوچکی بر روی سطح آگار تشکیل می شود که یادآور کلنی های استرپتوکوک است، اما کوچکتر و شفاف تر.
روی آگار کج، با تلقیح فراوان، یک پوشش شفاف بسیار ظریف، متشکل از مستعمرات ریز و بدون ادغام بر روی آبگوشت، کدورت جزئی و یک رسوب پوسته پوسته کوچک به دست می آید.
سویه های تازه جدا شده روی ژلاتین رشد نمی کنند. سویه‌های آزمایشگاهی قدیمی پنوموکوک می‌توانند کلنی‌های کوچک سفید رنگی را در دمای 18 تا 22 درجه ایجاد کنند. ژلاتین مایع نیست.
آنها به خوبی در شیر رشد می کنند و آن را خمیر می کنند تا اسید تشکیل شود.
در آگار خون، ناحیه ای از همولیز ناقص با رنگ سبز مایل به قهوه ای محیط اطراف کلنی ها تشکیل می شود.

برنج. 67. پنوموکوک در کشت خالص از آبگوشت.

پنوموکوک ها ساکارز، رافینوز و لاکتوز را تجزیه می کنند. مهمترین ویژگی تجزیه اینولین است. اکثر استرپتوکوک ها این خاصیت را ندارند. پنوموکوک های خطرناک در صفرا محلول هستند.
ساختار آنتی ژنی و انواع سرولوژیک پنوموکوک ها. سیتوپلاسم پنوموکوک حاوی یک آنتی ژن پروتئینی است که در همه پنوموکوک ها مشترک است. این آنتی ژن ویژگی گونه آنها را تعیین می کند. کپسول حاوی آنتی ژن های پلی ساکارید خاص (هپتن) است که در ترکیب شیمیایی آنها در پنوموکوک های مختلف (آنتی ژن های نوع) متفاوت است. بر اساس این آنتی ژن های معمولی، با استفاده از واکنش آگلوتیناسیون و رسوب، همه پنوموکوک ها به سه گروه اصلی (I، II، III) و گروه چهارم (گروه X) تقسیم می شوند. گروه X شامل بیش از 70 نوع است.
مقاومت. در محیط های مغذی مصنوعی، پنوموکوک ها به سرعت می میرند (4-7 روز). در زیر لایه ای از ژله نفتی در محیط های مایع و نیمه مایع حاوی پروتئین، آنها برای 3-12 ماه زنده می مانند.
پنوموکوک ها خشک شدن را به خوبی تحمل می کنند: آنها در خلط خشک در نور منتشر تا 2 ماه باقی می مانند. هنگامی که به 52-55 درجه حرارت داده می شود در 10 دقیقه می میرند، در 60 درجه حتی سریع تر می میرند. در محلول اسید کربولیک (3٪)، پنوموکوک ها در عرض 1-2 دقیقه می میرند.
پنوموکوک ها به ویژه به اپتوچین حساس هستند. تحت تأثیر دومی، آنها با غلظت 1: 1،000،000 می میرند.
تشکیل سم و بیماری زایی برای حیوانات. زهر پنوموکوک یک اندوتوکسین است. در بین حیوانات آزمایشگاهی، موش سفید و خرگوش حساسیت بیشتری به پنوموکوک دارند. تجویز تزریقی پنوموکوک های بدخیم پس از 24-48 ساعت باعث مرگ حیوانات با علائم سپسیس می شود. پس از کالبد شکافی، اگزودای فیبرینی در محل تزریق یافت می شود.
پاتوژنز و بیماری ها در انسان. محل ورود عفونت معمولاً غشای مخاطی حلق است. ورود پنوموکوک ها به بدن و نفوذ آنها به بافت ریه ظاهراً می تواند هم از طریق سیستم لنفاوی و گردش خون و هم مستقیماً از طریق شاخه های برونش رخ دهد. شایع ترین بیماری پنومونی لوبار است که با شروع ناگهانی، تب بالا، گاهی با لرز، درد در پهلو هنگام تنفس، سردرد، گاهی از دست دادن هوشیاری، هذیان و بی قراری شدید مشخص می شود. متعاقباً، سرفه با خلط قرمز زنگ زده مشخص ظاهر می شود. در ریه‌ها، فرآیندی مشاهده می‌شود که اغلب شامل یک یا کمتر دو یا سه لوب می‌شود.
منبع عفونت فرد بیمار و ناقل باکتری است. عفونت از بیرون هم به صورت هوازا - توسط قطرات ناقل و هم از طریق عفونت گرد و غبار اتفاق می افتد. پنوموکوک ها می توانند برای مدت طولانی (حدود 2 ماه) در خلط خشک شده باقی بمانند و با گرد و غبار وارد هوا شوند.
هنگام معاینه افراد سالم، پنوموکوک های بیماری زا اغلب در نازوفارنکس یافت می شوند، بنابراین امکان خود عفونت را نمی توان رد کرد و عواملی که مقاومت بدن را تضعیف می کنند، مانند هیپوترمی، نقش بسزایی دارند.
علاوه بر ذات الریه لوبار، پنوموکوک ها باعث التهاب گوش میانی، مننژها (مننژیت) و همچنین غشای مخاطی بینی و سینوس های هوایی، التهاب لوزه ها، زخم های خزنده قرنیه و التهاب کیسه اشکی می شوند.
مصونیت. ابتلا به ذات الریه ایمنی ایجاد نمی کند. این بیماری می تواند چندین بار عود کند. این با وجود بسیاری از انواع پنوموکوک و این واقعیت توضیح داده می شود که ذات الریه گذشته حساسیت بدن را به پنوموکوک افزایش می دهد.
سرم کسانی که بهبود یافته اند حاوی آنتی بادی (آگلوتینین و غیره) است.
در زمان بحران با پنومونی، غلظت آنتی بادی ها در خون به تیتر قابل توجهی می رسد و فاگوسیتوز به شدت افزایش می یابد (I. Ya. Chistovich). بر اساس این داده ها، ایمنی در ذات الریه باید در درجه اول به عنوان فاگوسیتوز در نظر گرفته شود، که در آن آنتی بادی ها (باکتریوتروپین ها) نقش اصلی را ایفا می کنند.
تشخیص میکروبیولوژیکی مواد لازم برای تحقیق در بیماری های پنوموکوکی خلط، خون و چرک گرفته شده از ضایعات مختلف و کمتر مایع مغزی نخاعی است.
مواد پاتولوژیک (به استثنای خون) از نظر باکتریوسکوپی، باکتریولوژیکی و با آلوده کردن موش های سفید بررسی می شود. باید به روش دوم متوسل شد زیرا ماده منبع، به ویژه خلط، معمولاً حاوی میکرو فلور خارجی فراوانی است که وقتی مستقیماً روی محیط های غذایی تلقیح شود، جداسازی پنوموکوک را دشوار می کند.
اسمیرهای خلط، چرک و غیره رنگ آمیزی گرم دارند. در زیر میکروسکوپ، دیپلوکوک های نیزه ای که توسط یک کپسول احاطه شده اند، با رنگ آمیزی گرم مثبت یافت می شوند.
برای جداسازی کشت ها، آنها را روی بلاد آگار یا آسیگ آگار تلقیح کنید. پس از 24-48 ساعت رشد در دمای 37 درجه سانتیگراد، در حضور پنوموکوک، کلونی های مشخص ظاهر می شوند. کلنی ها بر روی مایل های آب پنیر یا آسیت آگار کاشته می شوند و کشت جدا شده از نظر حلالیت در صفرا و توانایی تجزیه اینولین آزمایش می شود.
آلوده کردن موش سفید مطمئن ترین راه برای جداسازی کشت پنوموکوکی است. مواد حاصل از بیمار یا جسد (خلط، چرک، یک تکه عضو و غیره) را در یک فنجان استریل قرار داده، سپس در یک هاون استریل آسیاب شده، با 1-2 میلی لیتر آبگوشت استریل و 0.5 میلی لیتر از این سوسپانسیون به صورت داخل صفاقی تزریق می شود. به یک موش سفید پس از مرگ موش که در عرض 48-12 ساعت اتفاق می افتد، کشت خون از قلب گرفته می شود و تقریباً در همه موارد کشت خالص پنوموکوک به دست می آید.
در صورت مشکوک شدن به سپسیس، 20-10 میلی لیتر خون به براث آسیت یا سرم تلقیح می شود. پس از غنی سازی، براث بر روی آگار خون تلقیح می شود و کشت خالص جدا شده با ویژگی های مورفولوژیکی و بیوشیمیایی شناسایی می شود.
درمان اختصاصی و شیمی درمانی در حال حاضر داروهای سولفونامید و آنتی بیوتیک ها (پنی سیلین، بیومایسین، تتراسایکلین و غیره) با موفقیت زیادی برای درمان پنومونی لوبار استفاده می شود.

جنس استرپتوکوک شامل: استرپتوکوک پیوژنز (همولیتیک) و استرپتوکوک پنومونیه (پنوموکوک) است. استرپتوکوک ها اولین بار توسط Billroth (1874) و L. Pasteur (1879) کشف شدند. آنها توسط E. Rosenbach (1884) مورد مطالعه قرار گرفتند.

استرپتوکوک پیوژنز (همولیتیک)

مورفولوژی. استرپتوکوک ها کوکسی هایی هستند که شکل کروی دارند. قطر هر کوکوس به طور متوسط ​​0.6-1 میکرون است، اما آنها با پلی مورفیسم مشخص می شوند: کوکسی های کوچک و بزرگ، به شدت کروی و بیضی شکل وجود دارد. استرپتوکوک ها در یک زنجیره قرار دارند که نتیجه تقسیم آنها در یک صفحه است. طول زنجیر متفاوت است. در یک محیط غذایی جامد زنجیره ها معمولا کوتاه و در یک محیط مایع طولانی هستند. استرپتوکوک ها بی حرکت هستند و هاگ ندارند (شکل 4 را ببینید). در مقاطع فوق نازک، یک میکروکپسول قابل مشاهده است که زیر آن یک دیواره سلولی سه لایه و یک غشای سیتوپلاسمی سه لایه وجود دارد. گرم مثبت

کشت. استرپتوکوک ها بی هوازی اختیاری هستند. آنها در دمای 37 درجه سانتیگراد و pH 7.6-7.8 رشد می کنند. محیط های بهینه برای رشد آنها محیط های حاوی خون یا سرم خون است. در محیط های غذایی جامد، کلنی های استرپتوکوک ها کوچک، مسطح، کدر و به رنگ خاکستری هستند. برخی از گونه‌های استرپتوکوک‌ها روی خون آگار همولیز می‌کنند. استرپتوکوکهای β-همولیتیک یک ناحیه شفاف همولیز را تشکیل می دهند، استرپتوکوکهای α-همولیتیک یک منطقه کوچک مایل به سبز را تشکیل می دهند (نتیجه انتقال هموگلوبین به متهموگلوبین). استرپتوکوک هایی وجود دارند که همولیز تولید نمی کنند.

در آبگوشت قند، استرپتوکوک ها با تشکیل رسوبات ریزدانه نزدیک دیواره و پایین رشد می کنند، در حالی که آبگوشت شفاف باقی می ماند.

خواص آنزیمی. استرپتوکوک ها خاصیت ساکارولیتیک دارند. آنها گلوکز، لاکتوز، ساکارز، مانیتول (نه همیشه) و مالتوز را تجزیه کرده و اسید تشکیل می دهند. خواص پروتئولیتیک آنها ضعیف بیان می شود. آنها شیر را خمیر می کنند، اما ژلاتین را مایع نمی کنند.

تشکیل سم. استرپتوکوک ها تعدادی اگزوتوکسین تولید می کنند: 1) استرپتولیزین ها - گلبول های قرمز را از بین می برند (O-streptolysin دارای اثر قلبی سمی است). 2) لوکوسیدین - لکوسیت ها (تشکیل شده توسط سویه های بسیار خطرناک) را از بین می برد. 3) سم اریتروژنیک (تب مخملک) - تصویر بالینی مخملک را تعیین می کند - مسمومیت، واکنش های عروقی، بثورات، و غیره. سنتز سم اریتروژنیک توسط پروفاژ تعیین می شود. 4) سیتوتوکسین ها - توانایی ایجاد گلومرولونفریت را دارند.

آنتی ژن های مختلفی در استرپتوکوک ها یافت شده است. سیتوپلاسم سلول حاوی یک آنتی ژن خاص از طبیعت نوکلئوپروتئین است - برای همه استرپتوکوک ها یکسان است. آنتی ژن های نوع پروتئین در سطح دیواره سلولی قرار دارند. یک آنتی ژن گروه پلی ساکارید در دیواره سلولی استرپتوکوک یافت شد.

بر اساس ترکیب کسر آنتی ژن مخصوص گروه پلی ساکارید، تمام استرپتوکوک ها به گروه هایی تقسیم می شوند که با حروف بزرگ A، B، C، D و غیره به S تعیین می شوند. علاوه بر گروه ها، استرپتوکوک ها به انواع سرولوژیکی نیز تقسیم می شوند. که با اعداد عربی مشخص می شوند.

گروه A شامل 70 نوع است. این گروه شامل اکثر استرپتوکوک هایی است که باعث بیماری های مختلف در انسان می شود. گروه B عمدتاً شامل استرپتوکوک هایی است که برای انسان فرصت طلب هستند. گروه C شامل استرپتوکوک های بیماری زا برای انسان و حیوانات است. گروه D شامل استرپتوکوک هایی است که برای انسان بیماری زا نیستند، اما این گروه شامل انتروکوک ها نیز می شود که ساکنان دستگاه روده انسان و حیوانات هستند. وارد شدن به اندام های دیگر، آنها باعث فرآیندهای التهابی می شوند: کوله سیستیت، پیلیت، و غیره. بنابراین، آنها را می توان به عنوان میکروب های فرصت طلب طبقه بندی کرد.

تعلق کشت های جدا شده به یکی از گروه های سرولوژیکی با استفاده از واکنش رسوبی با سرم های گروه تعیین می شود. برای تعیین انواع سرولوژیکی، از واکنش آگلوتیناسیون با سرم های نوع خاص استفاده می شود.

استرپتوکوک ها در محیط کاملاً پایدار هستند. در دمای 60 درجه سانتیگراد پس از 30 دقیقه می میرند.

ماه ها در چرک و خلط خشک شده باقی می مانند. غلظت معمولی مواد ضدعفونی کننده آنها را در 15-20 دقیقه از بین می برد. محلول های ضد عفونی کننده انتروکوک ها بسیار مقاوم تر هستند.

حساسیت حیوانات. گاو، اسب، سگ و پرندگان به استرپتوکوک های بیماری زا حساس هستند. در بین حیوانات آزمایشگاهی، خرگوش و موش سفید حساس هستند. با این حال، استرپتوکوک هایی که برای انسان بیماری زا هستند، همیشه برای حیوانات آزمایشگاهی بیماری زا نیستند.

منابع عفونت. افراد (بیماران و ناقلین)، کمتر حیوانات یا محصولات آلوده.

مسیرهای انتقال. گرد و غبار موجود در هوا و هوا، گاهی اوقات مواد غذایی، احتمالا تماس خانگی.

بیماری ها می توانند در نتیجه عفونت اگزوژن و همچنین به صورت درون زا رخ دهند - با فعال شدن استرپتوکوک های فرصت طلب که بر روی غشاهای مخاطی حلق، نازوفارنکس و واژن زندگی می کنند. کاهش مقاومت بدن (خنک شدن، روزه داری، کار زیاد و غیره) می تواند منجر به خود عفونت شود.

پیش حساسیت در پاتوژنز عفونت های استرپتوکوک - به عنوان یک نتیجه از یک بیماری قبلی با علت استرپتوکوکی - از اهمیت زیادی برخوردار است.

هنگامی که استرپتوکوک ها به جریان خون نفوذ می کنند، باعث ایجاد یک فرآیند سپتیک شدید می شوند.

بیماری ها در انساناغلب توسط استرپتوکوکهای بتا همولیتیک از گروه سرولوژیکی A ایجاد می شود. آنها آنزیم های بیماریزایی تولید می کنند: هیالورونیداز، فیبرینولیزین (استرپتوکیناز)، دئوکسی ریبونوکلئاز، و غیره.

استرپتوکوک ها باعث ایجاد عفونت های حاد و مزمن مختلف در انسان می شوند، چه با تشکیل چرک و چه غیر چرکی، که در تصویر بالینی و پاتوژنز متفاوت است. چرکی - بلغم، آبسه، عفونت زخم، عفونت غیر چرکی - حاد دستگاه تنفسی فوقانی، اریسیپل، مخملک، روماتیسم و ​​غیره.

استرپتوکوک ها اغلب باعث عفونت های ثانویه در آنفولانزا، سرخک، سیاه سرفه و سایر بیماری ها می شوند و اغلب عفونت های زخم را پیچیده می کنند.

مصونیت. ماهیت ایمنی ضد سمی و ضد باکتری است. ایمنی ضد میکروبی پس از عفونی کم استحکام است. این با ایمنی زایی ضعیف استرپتوکوک ها و تعداد زیادی سرووار که ایمنی متقاطع ایجاد نمی کنند توضیح داده می شود. علاوه بر این، با بیماری های استرپتوکوک، آلرژی بدن مشاهده می شود که تمایل به عود را توضیح می دهد.

پیشگیری. این به اقدامات بهداشتی و بهداشتی می رسد و مقاومت کلی بدن را تقویت می کند. پیشگیری خاصی ایجاد نشده است.

درمان. آنتی بیوتیک استفاده می شود. پنی سیلین، که استرپتوکوک ها به آن مقاوم نشده اند، اغلب استفاده می شود، و همچنین اریترومایسین و تتراسایکلین.

اهمیت استرپتوکوک در اتیولوژی کاردیت روماتیسمی. پاتوژنز کاردیت روماتیسمی به اندازه کافی مورد مطالعه قرار نگرفته است. اما تعدادی از حقایق به نفع نقش استرپتوکوک در ایجاد این بیماری است:

1. در بیماران مبتلا به کاردیت روماتیسمی، استرپتوکوک B-همولیتیک از گلو کشت می شود.

2. روماتیسم اغلب پس از ابتلا به ورم لوزه، التهاب لوزه، فارنژیت، که بدن را حساس می کند، رخ می دهد.

3. در سرم خون بیماران، آنتی استرپتولیزین و آنتی استرپتو هیالورونیداز شناسایی می شود - آنتی بادی برای آنزیم های استرپتوکوک و سموم.

4. تایید غیر مستقیم نقش استرپتوکوک، درمان موفقیت آمیز با پنی سیلین است.

اخیراً به اشکال L استرپتوکوک در بروز اشکال مزمن کاردیت روماتیسمی اهمیت داده شده است.

پیشگیری از تشدید کاردیت روماتیسمی به پیشگیری از بیماری های استرپتوکوک می انجامد (به عنوان مثال، در بهار و پاییز، یک دوره پیشگیرانه پنی سیلین تجویز می شود). درمان به استفاده از داروهای ضد باکتری - پنی سیلین خلاصه می شود.

اهمیت استرپتوکوک در علت شناسی مخملک. G.N. Gabrichevsky (1902) برای اولین بار پیشنهاد کرد که استرپتوکوک همولیتیک عامل ایجاد کننده مخملک است. اما از آنجایی که استرپتوکوک های جدا شده در سایر بیماری ها با عوامل ایجاد کننده مخملک تفاوتی نداشتند، این نظر توسط همه مشترک نبود. اکنون مشخص شده است که مخملک توسط استرپتوکوک های گروه A ایجاد می شود که یک سم اریتروژنیک تولید می کند.

کسانی که از این بیماری بهبود یافته اند، ایمنی ایجاد می کنند - پایدار، ضد سم. تنش آن با مرحله بندی واکنش دیک - تزریق داخل پوستی یک سم اریتروژنیک تعیین می شود. در افرادی که بیمار نیستند، پرخونی و تورم در اطراف محل تزریق ایجاد می شود که به عنوان یک واکنش مثبت (عدم وجود آنتی توکسین در سرم خون) مشخص می شود. در کسانی که از بیماری بهبود یافته اند، چنین واکنشی وجود ندارد، زیرا آنتی توکسینی که آنها تشکیل داده اند، سم اریتروژنیک را خنثی می کند.

پیشگیری. انزوا، بستری شدن در بیمارستان. گاما گلوبولین برای کودکان تماسی و ضعیف تجویز می شود. پیشگیری خاصی ایجاد نشده است.

درمان. پنی سیلین و تتراسایکلین استفاده می شود. در موارد شدید، سرم آنتی توکسیک تجویز می شود.

هدف از مطالعه: شناسایی استرپتوکوک و تعیین سرووار آن.

مواد برای تحقیق

1. مخاط از گلو (گلودرد، مخملک).

2. خراشیدن از ناحیه آسیب دیده پوست (اریسیپل، استرپتودرما).

3. چرک (آبسه).

4. ادرار (نفریت).

5. خون (شک به سپسیس؛ اندوکاردیت).

روشهای اساسی تحقیق

1. باکتریولوژیک.

2. میکروسکوپی.

پیشرفت مطالعه

روز دوم مطالعه

فنجان ها را از ترموستات خارج کرده و بررسی کنید. در صورت وجود کلنی های مشکوک، از برخی از آنها اسمیر تهیه می شود، با گرم رنگ آمیزی شده و زیر میکروسکوپ بررسی می شود. اگر استرپتوکوک‌ها در اسمیر شناسایی شوند، بخشی از کلنی باقی‌مانده در لوله‌های آزمایش روی آگار با سرم برای جداسازی یک کشت خالص و بر روی آبگوشت با خون در لوله‌های آزمایش کشت داده می‌شود. در پایان روز، یک کشت 5-6 ساعته از براث یا آگار در مارتین براث با 0.25 درصد گلوکز برای تعیین گروه سرولوژیکی در واکنش بارش لنزفیلد زیر کشت می‌شود. لوله های آزمایش و بطری ها در یک ترموستات قرار می گیرند و تا روز بعد باقی می مانند.

روز سوم مطالعه

آنها محصولات را از ترموستات خارج می کنند، خلوص کشت را روی یک آگار کج بررسی می کنند، اسمیر، رنگ آمیزی گرم و میکروسکوپ درست می کنند. در صورت وجود کشت خالص استرپتوکوک روی محیط های هیس (لاکتوز، گلوکز، مالتوز، ساکارز و مانیتول)، شیر، ژلاتین، صفرا 40 درصد تلقیح و در ترموستات قرار دهید.

نگاهی به آبگوشت مارتین. در حضور رشد خاص، یک واکنش بارش لنزفیلد برای تعیین گروه سرولوژیکی انجام می شود.

تنظیم واکنش بارش بر اساس لنزفیلد. کشت روزانه کشت شده در آبگوشت مارتین در چندین لوله سانتریفیوژ ریخته شده و به مدت 10-15 دقیقه (3000 دور در دقیقه) سانتریفیوژ می شود.

مایع رویی در شیشه ای با محلول ضدعفونی کننده ریخته می شود و رسوب با محلول کلرید سدیم ایزوتونیک استریل پر می شود و دوباره سانتریفیوژ می شود. 0.4 میلی لیتر اسید هیدروکلریک 0.2 درصد به رسوب جمع آوری شده از تمام لوله های سانتریفیوژ اضافه می شود. سپس لوله آزمایش را در یک حمام آب قرار داده و به مدت 15 دقیقه جوشانده و گهگاه تکان دهید. پس از جوشاندن، سوسپانسیون حاصل دوباره سانتریفیوژ می شود. آنتی ژن در مایع رویی استخراج می شود که در یک لوله آزمایش تمیز ریخته می شود و با محلول هیدروکسید سدیم 0.2 درصد خنثی می شود تا pH 7.0-7.2 باشد. بروموتیمول بلو (0.01 میلی لیتر محلول 0.04٪) به عنوان شاخص اضافه می شود. با این واکنش رنگ از زرد نی به آبی تغییر می کند.

سپس 0.5 میلی لیتر از سرم های گروه آنتی استرپتوکوک در 5 لوله رسوبی ریخته می شود که با ایمن سازی خرگوش ها تهیه می شوند (به فصل 19 مراجعه کنید). سرم A به لوله اول، سرم B به لوله دوم، سرم C به سوم، سرم D به لوله چهارم، محلول ایزوتونیک کلرید سدیم (شاهد) به لوله پنجم اضافه می شود. پس از این، با استفاده از پیپت پاستور، عصاره به دست آمده (آنتی ژن) را به دقت در تمام لوله های آزمایش در امتداد دیواره قرار دهید.

اگر واکنش در یک لوله آزمایش با سرم همولوگ مثبت باشد، یک حلقه نازک شیری مایل به سفید در مرز عصاره با سرم تشکیل می شود (شکل 38).

روز چهارم تحقیق

نتایج ثبت شده است (جدول 25).

در حال حاضر، دئوکسی ریبونوکلئاز، و همچنین آنتی استرپتو هیالورونیداز و آنتی استرپتولیزین-O تعیین شده است.

سوالات امنیتی

1. چه روش های اولیه تحقیقات آزمایشگاهی برای شناسایی استرپتوکوک ها را می شناسید؟

2. چرا از واکنش بارش لنزفیلد استفاده کنیم؟

3. چرا باید آنتی ژن هنگام انجام این واکنش شفاف باشد؟ تکنیک انجام این واکنش را شرح دهید.

سرم های آنتی استرپتوکوک A، B، C، D و محلول ایزوتونیک کلرید سدیم را از معلم دریافت کنید. واکنش بارش را تنظیم کنید، نتایج را به معلم نشان دهید و آنها را ترسیم کنید.

رسانه فرهنگ

آگار خون(به فصل 7 مراجعه کنید).

آگار سرم(به فصل 7 مراجعه کنید).

رسانه هیس(خشک).

ژلاتین پپتون گوشت (MPG). به 100 میلی لیتر MPB 10-15 گرم ژلاتین ریز خرد شده اضافه کنید. هنگامی که ژلاتین به آرامی در حمام آب گرم می شود (در دمای 40-50 درجه سانتیگراد) باید متورم شود. محلول کربنات سدیم 10% (جوش شیرین) به ژلاتین ذوب شده اضافه می شود و pH روی 7.0 تنظیم می شود. سپس بلافاصله از طریق فیلتر پلیسه دار فیلتر کنید. فیلتراسیون کند است. برای تسریع فرآیند، فیلتراسیون را می توان در اتوکلاو داغ انجام داد. محیط صاف شده در لوله های 6-8 میلی لیتری ریخته شده و استریل می شود. استریلیزاسیون به صورت کسری در دمای 100 درجه سانتیگراد به مدت 3 روز متوالی یا به طور همزمان در دمای 110 درجه سانتیگراد به مدت 20 دقیقه در اتوکلاو انجام می شود. خنک سازی محیط در لوله های آزمایشی که به صورت عمودی قرار گرفته اند انجام می شود.

تهیه شیر. شیر تازه را به جوش می آورند، یک روز در جای خنک قرار می دهند، از خامه خارج می کنند و دوباره می جوشانند. بگذارید یک روز بماند و لایه بالایی را بردارید. شیر بدون چربی از طریق لایه ای از پشم پنبه فیلتر می شود، سپس با محلول کربنات سدیم 10 درصد قلیایی می شود تا pH 7.2 شود و در لوله های آزمایش 5-6 میلی لیتری ریخته می شود.

براث مارتین. مقدار مساوی از پپتون مارتین (معده گوشت خوک چرخ کرده در معرض اسید هیدروکلریک) به آب گوشت اضافه می شود. مخلوط حاصل به مدت 10 دقیقه جوشانده می شود، با محلول هیدروکسید سدیم 10٪ قلیایی می شود تا pH 8.0، 0.5 استات سدیم اضافه می شود، دوباره جوشانده می شود و در ظروف استریل ریخته می شود. 0.25 درصد گلوکز به آبگوشت مارتین اضافه می شود.

چهارشنبه کیتا - تاروزی(به فصل 34 مراجعه کنید).

استرپتوکوک پنومونیه (پنوموکوک)

پنوموکوک اولین بار توسط R. Koch (1871) توصیف شد.

مورفولوژی. پنوموکوک ها دیپلوکوک هایی هستند که در آنها اضلاع سلول های روبروی هم صاف و اضلاع مخالف آن کشیده شده اند، بنابراین شکلی نیزه ای دارند که یادآور شعله شمع است (شکل 4 را ببینید). اندازه پنوموکوک ها 0.75-0.5 × 0.5-1 میکرون است، آنها به صورت جفت قرار دارند. در محیط های غذایی مایع اغلب زنجیره های کوتاهی را تشکیل می دهند و شبیه استرپتوکوک می شوند. پریوموکوک ها بی حرکت هستند، هاگ ندارند و در بدن کپسولی تشکیل می دهند که هر دو کوکسی را احاطه کرده است. کپسول حاوی یک ماده مقاوم در برابر حرارت آنتی فاژین (محافظ از پنوموکوک در برابر فاگوسیتوز و عملکرد آنتی بادی ها) است. هنگام رشد بر روی محیط های مغذی مصنوعی، پنوموکوک ها کپسول خود را از دست می دهند. پنوموکوک ها گرم مثبت هستند. باکتری های گرم منفی در کشت های قدیمی یافت می شوند.

کشت. پنوموکوک ها بی هوازی اختیاری هستند. آنها در دمای 36-37 درجه سانتیگراد و pH 7.2-7.4 رشد می کنند. از آنجایی که نمی‌توانند بسیاری از اسیدهای آمینه را سنتز کنند، آنها به محیط‌زیست نیاز دارند، بنابراین فقط روی محیط‌ها با افزودن پروتئین بومی (خون یا سرم) رشد می‌کنند. روی آگار سرم، کلونی‌های کوچک، ظریف و نسبتاً شفاف را تشکیل می‌دهند. روی آگار خون، کلنی های خاکستری مایل به سبز مرطوب رشد می کنند که توسط یک منطقه سبز احاطه شده اند که نتیجه تبدیل هموگلوبین به متهموگلوبین است. پنوموکوک ها در آبگوشت با افزودن 0.2 درصد گلوکز و در آبگوشت با آب پنیر به خوبی رشد می کنند. رشد در محیط مایع با کدورت منتشر و رسوب گرد و غبار در پایین مشخص می شود.

خواص آنزیمی. پنوموکوک ها فعالیت ساکارولیتیک کاملاً مشخصی دارند. آنها تجزیه می شوند: لاکتوز، گلوکز، ساکارز، مالتوز، اینولین برای تشکیل اسید. مانیتول تخمیر نمی شود. خواص پروتئولیتیک آنها ضعیف است: آنها شیر را خمیر می کنند، ژلاتین را مایع نمی کنند و ایندول را تشکیل نمی دهند. پنوموکوک ها در صفرا حل می شوند. تجزیه اینولین و انحلال در صفرا یک ویژگی تشخیصی مهم است که استرپتوکوک پنومونیه را از استرپتوکوک پیوژنز متمایز می کند.

عوامل بیماری زایی. پنوموکوک ها هیالورونیداز، فیبرینولیزین و غیره تولید می کنند.

تشکیل سم. پنوموکوک ها اندوتوکسین، همولیزین و لوکوسیدین تولید می کنند. حدت پنوموکوک نیز با وجود آنتی فاژن در کپسول همراه است.

ساختار و طبقه بندی آنتی ژنی. در سیتوپلاسم پنوموکوک ها یک آنتی ژن پروتئینی مشترک برای کل گروه و در کپسول یک آنتی ژن پلی ساکارید وجود دارد. بر اساس آنتی ژن پلی ساکارید، تمام پنوموکوک ها به 84 سرووار تقسیم می شوند. در میان آنهایی که برای انسان بیماری زا هستند، سرووارهای I، II و III شایع ترین هستند.

مقاومت در برابر عوامل محیطی. پنوموکوک ها از گروه میکروارگانیسم های ناپایدار هستند. دمای 60 درجه سانتیگراد آنها را در عرض 3-5 دقیقه از بین می برد. در برابر دمای پایین و خشک شدن کاملاً مقاوم هستند. در خلط خشک شده تا 2 ماه زنده می مانند. آنها را می توان بیش از 5-6 روز در یک محیط غذایی ذخیره کرد. بنابراین، هنگام کشت، لازم است هر 2 تا 3 روز یکبار کشت مجدد انجام شود. محلول های معمولی ضدعفونی کننده ها: فنل 3 درصد، تصعید در رقت 1:1000 آنها را در چند دقیقه از بین می برد.

پنوموکوک ها به ویژه به اپتوچین حساس هستند که با رقت 1:100000 آنها را می کشد.

حساسیت حیوانات. میزبان طبیعی پنوموکوک ها انسان است. با این حال، پنوموکوک می تواند باعث بیماری در گوساله، بره، خوک، سگ و میمون شود. از میان حیوانات آزمایشی، موش های سفید به پنوموکوک بسیار حساس هستند.

منابع عفونت. یک فرد بیمار و یک ناقل باکتری.

مسیرهای انتقال. قطرات معلق در هوا، شاید گرد و غبار موجود در هوا.

دروازه ورودی. غشای مخاطی دستگاه تنفسی فوقانی چشم و گوش.

بیماری ها در انسان. پنوموکوک ها می توانند باعث بیماری های چرکی-التهابی با مکان های مختلف شوند. مخصوص پنوموکوک ها عبارتند از:

1) پنومونی لوبار؛

2) زخم قرنیه خزنده؛

شایع ترین بیماری پنومونی لوبار است که یک یا کمتر دو یا سه لوب ریه را درگیر می کند. این بیماری حاد است و با تب بالا و سرفه همراه است. معمولاً با انتقاد تمام می شود.

مصونیت. پس از بیماری، ایمنی ناپایدار باقی می ماند، زیرا ذات الریه با عود مشخص می شود.

پیشگیری. این به اقدامات بهداشتی و پیشگیرانه می رسد. پیشگیری خاصی ایجاد نشده است.

درمان. آنتی بیوتیک ها استفاده می شود - پنی سیلین، تتراسایکلین و غیره.

سوالات امنیتی

1. مورفولوژی پنوموکوک. کشت و خواص آنزیمی.

2. چه عواملی بیماری زایی پنوموکوک ها را تعیین می کند و چه عواملی پنوموکوک ها را از فاگوسیتوز محافظت می کند؟

3. دروازه های اصلی عفونت پنوموکوکی کدامند. پنوموکوک چه بیماری هایی ایجاد می کند؟

بررسی میکروبیولوژیکی

هدف از مطالعه: شناسایی پنوموکوک.

مواد برای تحقیق

1. خلط (پنومونی).

2. مخاط از گلو (گلودرد).

3. ترشحات از زخم (زخم خزنده قرنیه).

4. ترشح از گوش (اوتیت میانی).

5. چرک (آبسه).

6. نقطه پلورال (جنب).

7. خون (شک به سپسیس).

1 (بهتر است خلط صبحگاهی مصرف شود (با ذات الریه خاص، رنگ خلط زنگ زده است).)

روشهای اساسی تحقیق

1. میکروسکوپی.

2. میکروبیولوژیک.

3. بیولوژیکی.

پیشرفت مطالعه

نمونه بیولوژیکی. مقدار کمی (3-5 میلی لیتر خلط) در یک آبگوشت استریل امولسیون می شود، 0.5 میلی لیتر از این مخلوط به صورت داخل صفاقی به موش سفید تزریق می شود. پس از 6-8 ساعت، موش علائم بیماری را نشان می دهد. در این زمان، پنوموکوک را می توان از قبل در ترشحات حفره شکمی تشخیص داد. اگزودا با یک سرنگ استریل گرفته می شود. اسمیر از آن ساخته می شود، با گرم رنگ آمیزی می شود و زیر میکروسکوپ بررسی می شود. برای جداسازی یک کشت خالص، اگزودا روی آگار سرم تلقیح می شود. اگر موش بمیرد یا بیمار شود، خون از قلب روی سرم آگار کشت داده می شود تا یک کشت خالص جدا شود. محصولات در یک ترموستات قرار می گیرند.

روش تسریع شده برای تعیین نوع پنوموکوک(واکنش میکروآگلوتیناسیون). 4 قطره اگزودا از حفره شکمی موش آلوده روی یک لام شیشه ای ریخته می شود. به اولین قطره سرم آگلوتینه کننده نوع یک، به قطره دوم سرم نوع دوم، به قطره سوم سرم نوع III و به قطره چهارم محلول کلرید سدیم ایزوتونیک (شاهد) اضافه می شود.

سرم های نوع I و II به نسبت 1:10 از قبل رقیق می شوند و سرم نوع III - 1:5. همه قطره ها هم زده، خشک، ثابت و با فوشین رقیق رنگ آمیزی می شوند. اگر نتیجه مثبت باشد، ازدحام میکروبی (آگلوتیناسیون) در یکی از قطره ها مشاهده می شود.

روز دوم مطالعه

کشت ها از ترموستات خارج می شوند، بررسی می شوند و از کلونی های مشکوک اسمیر تهیه می شود. اگر دیپلوکوک های نیزه ای گرم مثبت در اسمیر وجود داشته باشد، 2 تا 3 کلنی بر روی مایل آگار سرم جدا می شود تا کشت خالص به دست آید. محصولات در یک ترموستات قرار می گیرند. اسمیر از آبگوشت تهیه می شود، با گرم رنگ آمیزی می شود و زیر میکروسکوپ بررسی می شود.

روز سوم مطالعه

محصولات از ترموستات حذف می شوند. آنها خلوص فرهنگ را بررسی می کنند - اسمیر، رنگ آمیزی گرم و میکروسکوپ درست می کنند. اگر در کشت جدا شده دیپلوکوک های نیزه ای گرم مثبت وجود داشته باشد، کشت جدا شده با کشت شناسایی می شود:

1) در محیط های هیس (لاکتوز، گلوکز، ساکارز، مالتوز) کاشت به روش معمول - با تزریق به محیط انجام می شود.

2) روی یک محیط با اینولین.

3) روی یک محیط با اپتوچین؛

4) آزمایش صفرا انجام دهید.

تست اینولین. کشت مورد مطالعه بر روی یک محیط غذایی حاوی اینولین و تنتور لیتموس کاشته شده و در ترموستات قرار می گیرد. پس از 18-24 ساعت، محصولات از ترموستات خارج می شوند. در صورت وجود پنوموکوک، محیط قرمز رنگ می شود (استرپتوکوک ها قوام و رنگ محیط را تغییر نمی دهند).

تعیین حساسیت به اپتوچین. کشت جدا شده روی آگار خون 10 درصد حاوی اپتوچین 1:50000 تلقیح می شود. پنوموکوک ها برخلاف استرپتوکوک ها روی محیط های حاوی اپتوکین رشد نمی کنند.

آزمایش صفرا. 1 میلی لیتر از کشت براث آزمایشی در لوله های آگلوتیناسیون ریخته می شود. یک قطره صفرای خرگوش به یکی از آنها اضافه می شود، لوله دوم به عنوان کنترل عمل می کند. هر دو لوله آزمایش در یک ترموستات قرار می گیرند. پس از 18-24 ساعت، لیز پنوموکوک رخ می دهد که در پاکسازی یک آبگوشت کدر بیان می شود. در کنترل، سیستم تعلیق ابری باقی می ماند.

نمونه صفرا را می توان روی یک محیط غذایی جامد انجام داد. برای انجام این کار، یک دانه صفرا خشک به کلنی پنوموکوکی که در ظروف با آگار و سرم رشد می کند اعمال می شود - کلنی حل می شود و ناپدید می شود.

روز چهارم تحقیق

نتایج ثبت شده است (جدول 26).

توجه داشته باشید. j - تجزیه کربوهیدرات ها با تشکیل اسید.

در حال حاضر، روش های تحقیقاتی سرولوژیکی (RSK و RIGA) به طور گسترده ای برای تعیین آنتی بادی های استرپتوکوک استفاده می شود. گروه و سرووار کشت جدا شده با استفاده از آنتی بادی های فلورسنت تعیین می شود.

تعیین حدت پنوموکوکی. کشت روزانه براث پنوموکوک با 1% پپتون آب از 2-10 تا 8-10 رقیق می شود و 0.5 میلی لیتر از هر رقت به دو موش سفید داده می شود. کشت که باعث مرگ موش در رقت 10 -7 به عنوان بیماریزا در رقت 10 -4 -10 در نظر گرفته می شود متوسط. فرهنگی که باعث مرگ موش نشود، بیماری زاست.

سوالات امنیتی

1. چه روش هایی را برای جداسازی کشت خالص پنوموکوک می شناسید؟

2. کدام حیوان بیشتر به پنوموکوک حساس است؟

3. چه واکنش هایی با ترشح موش آلوده و به چه منظور انجام می شود؟

4. پنوموکوک از کدام نمایندگان کوکسی پیوژنیک و با استفاده از چه آزمایشی باید افتراق داده شود؟

5. چگونه می توان حدت پنوموکوک را تعیین کرد؟

ورزش کنید

نموداری از معاینه خلط تهیه کنید و مراحل آن را در روز مشخص کنید.

رسانه فرهنگ

آگار سرم(به فصل 7 مراجعه کنید).

آب پنیر(به فصل 7 مراجعه کنید).

آگار خون(به فصل 7 مراجعه کنید).

رسانه هیس(خشک).

نمونه محیط با اینولین. به 200 میلی لیتر آب مقطر 10 میلی لیتر سرم غیر فعال گاو، 18 میلی لیتر تنتور لیتموس و 3 گرم اینولین اضافه کنید. با بخار جاری در دمای 100 درجه سانتیگراد به مدت 3 روز متوالی استریل کنید. آبگوشت صفرا (به فصل 7 مراجعه کنید).