علائم میکوز پا. تشخیص آزمایشگاهی بیماری های قارچی پوست در تشخیص قارچ های سطحی استفاده نمی شود

فلس ها یا موها روی یک لام شیشه ای قرار می گیرند (لیوان باید چربی زدایی شود) و با یک، دو یا سه قطره از محلول 30 درصد پتاسیم سوز آور یا سود سوزآور پر می شود و با یک ورقه پوششی پوشانده می شود. به مدت 2 تا 3 دقیقه با حرارت ملایم روی شعله مشعل الکلی، آماده سازی را با لیوان درپوش کمی فشار دهید تا
ابر خاکستری هنگام بررسی ترازو. موها نباید از بین بروند، فقط با چنین حرارتی متورم می شوند. معاینه میکروسکوپی (بزرگنمایی 100-200 برابر) با دیافراگم تیره شده عناصر قارچی - هاگ یا رشته های میسلیوم را نشان می دهد. شرط لازم برای موفقیت در معاینه میکروسکوپی، دقیق به دست آوردن فلس و مو است که باید با موچین مخصوص (موچین مژه) از نواحی آسیب دیده برداشته شود. توجه نه تنها به موها، پوسته ها و پوسته های به وضوح قابل مشاهده است، بلکه باید به بقایای موها (به اصطلاح استامپ) و جوش های سرسیاه که با یک اسکالپل یا سوزن بافت شناسی برداشته می شوند نیز توجه کرد. هرگز نباید به اشاره به نواحی آسیب دیده بیمار بسنده کنید، خود پزشک باید تمام پوست سر را به دقت بررسی کند.

در موهای مبتلا به تریکوفیتوز، هاگ های قارچ به صورت زنجیره ای قرار گرفته اند. در میکروسپوریا، هاگ ها بسیار کوچکتر از کرم حلقوی هستند، زنجیره تشکیل نمی دهند و در قسمت بیرونی مو قرار دارند. طناب هایی از میسلیوم سپتات در داخل مو وجود دارد. مو گویی پوشیده و مشاجره است. با دلمه، هاگ های چندشکلی، نخ های درشت، متنوع و معمولاً حباب های هوا مشاهده می شود (شکل 48).

در این حالت، قارچ ها به طور کامل بر کل مو تأثیر نمی گذارند، اما مناطق سالم باقی می مانند.
برای به دست آوردن مواد از پوست صاف، فلس ها را می تراشند. نواحی محیطی ضایعه با قاشق یا چاقوی جراحی تیز. تراشیدن ناخن ها با یک چاقوی طبی تیز (چاقوی جراحی)، برداشتن بخش های کوچک اما عمیق از سطح داخلی صفحه ناخن یا خراشیدن پودر پیتریازیس از صفحات شاخی ناخن راحت تر است.
مواد اولیه را در یک لوله آزمایش با مواد قلیایی می جوشانند و سپس به مدت 12-20 ساعت در این لوله آزمایش می گذارند.
پس از این، محتویات سانتریفیوژ شده و رسوبات زیر میکروسکوپ بررسی می‌شوند (روش N.A. Chernogubov).
قارچ ها روی محیط های مغذی مصنوعی حاوی کربوهیدرات ها و مواد پروتئینی به خوبی رشد می کنند. مخصوصاً به اصطلاح رسانه اصلی Sabouraud، مخمر آبجو، آگار و سبزیجات رایج هستند.

2. بررسی آزمایشگاهی مواد پاتولوژیک

2.1. مطالعات میکروسکوپی

برای شناسایی عناصر مورفولوژیکی قارچ - سلول های مخمر، سودومایسیلیوم، میسلیوم، کونیدیوفورها، کندی ها، اشکال بافتی قارچ های عمیق - مواد پاتولوژیک در آماده سازی های بومی و رنگ آمیزی مورد بررسی قرار می گیرند.

مواد پاتولوژیک مایع در حالت بدون رنگ در مایعات شفاف زیر بررسی می شوند: مخلوط الکل با گلیسیرین (اتیل الکل 1 قسمت، گلیسیرین 2 قسمت، آب مقطر 2 قسمت)، محلول لوگول (1 گرم ید کریستالی، 2 گرم یدید پتاسیم، 150 میلی لیتر آب) و همچنین در آب یا نمک. برای تهیه فرآورده‌های بومی، یک قطره از مواد را با استفاده از حلقه یا پیپت روی یک لام شیشه‌ای قرار می‌دهند، سپس 1-2 قطره مایع شفاف را روی آن می‌ریزند، با یک شیشه پوششی می‌پوشانند و با بزرگ‌نمایی کم 1:80 (چشمی 10 برابری) میکروسکوپ می‌کنند. و 8 برابر هدف)، که در آن می توانید خوشه هایی از سلول های مخمر و کاذب، میسلیوم و سایر عناصر قارچ را مشاهده کنید. در بزرگنمایی بالای 1:400، سلول های منفرد را می توان مشخص کرد.

مواد پاتولوژیک متراکم (پوست، پوسته های ناخن) در قطره ای از محلول 10-20٪ KOH قرار داده می شود، کمی روی شعله مشعل حرارت داده می شود (برای خیساندن بهتر) تا زمانی که کریستال های قلیایی در اطراف قطره ظاهر شوند. سپس قطره را با یک لغز پوششی می‌پوشانند، کمی روی آن فشار می‌دهند و به صورت میکروسکوپی بررسی می‌کنند، ابتدا با بزرگنمایی کم برای یافتن مقیاس، سپس با بزرگ‌نمایی بالا.

در مواد مو، گوشته هاگ احاطه کننده مو (اکتوتریکس) یا درون مو (اندوتریکس) عناصر قارچی معمولاً به وضوح قابل مشاهده است. ضایعات مو و همچنین اندازه هاگ ها مختص انواع درماتوفیت ها است. تشخیص افتراقی بین ساختارهای قارچی و مصنوعات ضروری است. منابع احتمالی نتایج مثبت کاذب شامل قطرات چربی، حباب های هوا، الیاف نساجی و به اصطلاح "قارچ موزاییکی" است. قطرات لیپید ممکن است شبیه سلول های مخمر باشد، یافته ای که در موادی که به خوبی پاک نشده اند رایج است. الیاف نساجی معمولا جدا از مواد اپیدرم، مو یا ناخن قرار دارند. آنها بزرگتر از هیفهای قارچی هستند، ضخامت ناهمواری دارند و حاوی سپتوم نیستند. "قارچ موزاییکی" مصنوع است که در طی تبلور KOH به دلیل حرارت دادن بیش از حد مواد آماده سازی به دست می آید. بر خلاف قارچ ها، هیچ تقسیم واضحی به سلول ها وجود ندارد.

یک مرحله مهم در تشخیص عفونت های قارچی تهیه فرآورده های رنگی است. هر ماده پاتولوژیک (آماده سازی اسمیر، چاپ اندام، سانتریفیوژها و البته بخش های بافت شناسی) باید تحت سه نوع پردازش اصلی قرار گیرد: 1) رنگ آمیزی با استفاده از روش PAS برای شناسایی قارچ های واقعی - یومیست ها. 2) رنگ آمیزی بر اساس روش گرم یا در اصلاحات مطابق با گرام وایگرت، به گفته بوگولپوف، طبق براون-برنا - برای شناسایی میکروبیوتای باکتریایی همراه، برای شناسایی اکتینومیست ها و نوکاردیا. 3) رنگ آمیزی طبق روش Ziehl-Nielson یا اصلاح بر اساس روش Kinyon - برای شناسایی میکروارگانیسم های مقاوم به اسید، در درجه اول برای نشانه و تمایز با مایکوباکتریوم توبرکلوزیس، برای شناسایی عوامل ایجاد کننده جذام، نوکاردیا و مخمرهای تشکیل دهنده هاگ.

روش PAS (Piodic Acid Schiff) شامل شناسایی پلی ساکاریدهای خنثی در دیواره میکروارگانیسم ها است. در دیواره بیشتر یومیست ها یک مجتمع گلوکان-مانان در غلظت های مختلف وجود دارد که به دلیل آن رنگ آمیزی رخ می دهد.

پروکاریوت‌ها (باکتری‌ها) PAS منفی هستند، از جمله اکتینومیست‌ها و نوکاردیای مورد علاقه قارچ‌شناس. با این حال، در طول تشکیل دروسن اکتینومایکوتیک، به اصطلاح "سیمان" تشکیل می شود که میسلیوم اکتینومایکوتیک رویشی را به یک گرانول می چسباند، که همچنین یک لکه PAS مثبت ایجاد می کند. در این رابطه، این روش در تشخیص اکتینومیکوز نیز قابل استفاده است.

واکنش PAS (و اصلاح آن) مهمترین روش برای تشخیص اشکال بافتی عفونت قارچی است. این روش مبتنی بر اکسیداسیون گروه های گلیکولیک کربوهیدرات ها با اسید دوره ای یا کرومیک است. اسید پریودیک 1،2 و 1،4 گلیکول را به آلدئید اکسید می کند و پیوندهای بین اتم های کربن دارای گروه های هیدروکسیل را می شکند. گروه های آلدهیدی را نیز می توان با استفاده از معرف آلدهید شیف تشخیص داد. در محل، در دیواره های قارچ، مجموعه هتروپلی ساکارید به شدت به رنگ قرمز بنفش رنگ می شود (روش شناسی - به ضمائم مراجعه کنید).

برای سرکوب رنگ بافت های اطراف از درمان ("ضد رنگ") با سبز روشن، زرد متانیل و غیره استفاده می شود. در این حالت فقط سلول های قارچی شناسایی می شوند که در مرحله نشان دادن پاتوژن در بافت ها یا در آماده سازی اسمیر بسیار مفید است. در عین حال، نمی توان در مورد واکنش بدن و تغییر بافت به چنین داروهایی قضاوت کرد. همیشه لازم است که آماده سازی موازی با استفاده از روش PAS با رنگ آمیزی اضافی با هماتوکسیلین رنگ آمیزی شود.

در عمل، نه تنها از روش PAS در نسخه کلاسیک استفاده می شود، بلکه از اصلاحات مختلف آن نیز استفاده می شود: اکسیداسیون با اسید کرومیک (به جای اسید یدیک) - این واکنش بائر است، رنگ آمیزی گریدلی، اشباع با متنامین نقره با توجه به Gomory- روش گروکوت همه آنها با موفقیت برای تشخیص اشکال بافتی قارچ ها استفاده می شوند و بر اساس همان اصل هستند (تکنیک - به ضمیمه مراجعه کنید). جدول 3.

جدول 3

خواص رنگی اشکال بافتی قارچ

(در مواد پاتولوژیک، در مقاطع بافت شناسی)

قارچ های فرصت طلب	روش های تشخیص
کاندیدیازیس	رنگ آمیزی PAS یا Gridley
آسپرژیلوزیس	هماتوکسیلین و ائوزین، اشباع Gomori-Grocott
زیگومایکوزیس	هماتوکسیلین و ائوزین
کریپتوکوکوزیس	آلسین آبی (طبق روش مووری) + واکنش PAS + هماتوکسیلین
پنوموسیستیس	رنگ آمیزی به روش بائر، اشباع بر اساس گوموری گروکوت، رنگ آمیزی با تیونین
فوزاریوم	رنگ آمیزی به روش رومانوفسکی-گیمسا، بر اساس روش رایت
اسکدوسپوریازیس
تریکوسپروز	هماتوکسیلین و ائوزین، رنگ آمیزی رومانوفسکی-گیمسا
فئوهیفومیکوز و کرومومایکوز	هماتوکسیلین و ائوزین
مایکوزهای بیماری زا اولیه:	روش های تشخیص
کوکسیدیوئیدوز	واکنش PAS + هماتوکسیلین
هیستوپلاسموز	اشباع بر اساس گوموری گروکوت، رنگ آمیزی به روش بائر، رنگ آمیزی به روش رومانوفسکی-گیمسا
بلاستومایکوز آمریکای شمالی
پاراکوکسیدیوز	واکنش PAS، اشباع با توجه به Gomory-Grocott
آدیاسپیرومیکوزیس	هماتوکسیلین و ائوزین، واکنش RAS
سودومایکوز:	روش های تشخیص
اکتینومیکوز	هماتوکسیلین و ائوزین، رنگ آمیزی گرم وایگرت
نوکاردیوز	رنگ آمیزی به روش زیهل نیلسن، بر اساس روش کینیون، بر اساس روش گرم.

اگر تشخیص کریپتوکوکوز فرض می شود، توصیه می شود از روش هایی برای تشخیص خاص مواد کپسولی استفاده شود. Cr.neoformansحاوی گلیکوزامینوگلیکان (پلی ساکاریدهای اسیدی). برای این منظور از رنگ آمیزی با آلسیان آبی (طبق روش مووری)، قهوه ای پایه (به روش شوبیچ) و رنگ آمیزی موسیکارمین استفاده می شود. رنگ آمیزی سه گانه بسیار مفید است: واکنش PAS، سپس درمان با آلسین بلو، سپس هماتوکسیلین. در این صورت، تمایز بین کریپتوکوک ها و اشکال بافتی سایر قارچ ها با مورفولوژی مشابه امکان پذیر می شود.

شرح مواد پاتولوژیک (آماده سازی بافت شناسی) شامل داده هایی در مورد مورفولوژی و اندازه اشکال بافت قارچ ها، ویژگی های رنگی آنها، ارتباط با بافت میزبان، وجود فاگوسیتوز و تعیین میکروبیوتای همراه است.

2.2. کاشت مواد پاتولوژیک و شمارش کمی سلول ها در مایکوزهای ناشی از قارچ های مخمری

تهیه کشت قارچ ها برای شناسایی و تعیین حساسیت آنها به داروهای ضد قارچ ضروری است.

قبل از معاینه، خلط به مدت 10-5 دقیقه با تکان دادن با مهره های استریل همگن می شود. اگر خلط حاوی مقدار زیادی مخاط باشد و به خوبی همگن نشده باشد، می توان 1-2 میلی لیتر محلول نمکی استریل به آن اضافه کرد. خلط به صورت میکروسکوپی در آماده سازی بومی یا رنگ آمیزی بررسی می شود. اگر میکروسکوپ خلط با بزرگنمایی زیاد، عناصر قارچی را در میدان دید نشان دهد، باید در رقت های 1:10، 1:100، 1:1000 کاشته شود و اگر عناصر قارچی تشخیص داده نشد، خلط رقیق نشده کاشته می شود. رقت ها در یک محیط مغذی مایع (ترش، Sabouraud، 1٪ پپتون آب) یا در سالین استریل تهیه می شوند. از هر رقت، 0.1 میلی لیتر با استفاده از یک کاردک روی 2 فنجان ورت آگار، سابورو آگار یا MPA با افزودن آنتی بیوتیک های ضد باکتری - پنی سیلین و استرپتومایسین، بیومایسین (100-200 واحد در میلی لیتر محیط) تلقیح می شود. محیط مغذی در ترموستات +37 درجه سانتیگراد از قبل خشک می شود، زیرا در حضور میعانات، رشد کلنی ها ممکن است به هم پیوسته باشد. محصولات به مدت 48 ساعت در ترموستات در دمای 37+ درجه سانتیگراد انکوبه می شوند سپس در صورت رشد از همان نوع کلنی های مخمر به صورت کمی شمارش می شوند. محاسبه تعداد سلول‌های مخمر (n) در 1 میلی‌لیتر یا 1 گرم از ماده آزمایشی طبق فرمول n = авс انجام می‌شود که a میانگین تعداد کلنی‌ها در یک ظرف پتری است، b = 10 با حجم. از تلقیح 0.1 میلی لیتر، c درجه رقت فضولات است (101001000).

مثال محاسبه: در ظروف با رقت 1:1000، به طور متوسط ​​60 کلنی رشد کرد، در حالی که 1 میلی لیتر از فضولات مورد مطالعه حاوی 60 x 10 x 1000 = 600000 سلول مخمر است.

BAL، مایع شستشوی برونش ها، حفره های فک بالا، صفرا (قسمت های A، B، C)، شیره معده، محتویات اثنی عشر، ادرار به لوله های سانتریفیوژ منتقل می شوند و به مدت 10-15 دقیقه سانتریفیوژ می شوند و پس از آن مایع رویی به سرعت تخلیه می شود. آماده سازی بومی برای میکروسکوپ از رسوب تهیه می شود. اگر میکروسکوپ سلول‌های مخمر را در هر میدان دید نشان داد، کاشت در رقت‌های 1:100 و 1:1000 هر کدام 0.1 میلی‌لیتر روی محیط‌های غذایی جامد انجام می‌شود و در دمای 37 درجه سانتی‌گراد به مدت 48 ساعت انکوبه می‌شود. نشان نمی دهد سلول های مخمر، رسوب کاشته شده بدون رقت. مقدار فلور مخمر به ازای 1 میلی لیتر ماده پاتولوژیک محاسبه می شود.

مدفوع با یک قاشق اندازه گیری به مقدار 0.2 گرم گرفته می شود، در 1.8 میلی لیتر مخمر مایع قرار می گیرد و با یک میله شیشه ای کاملاً هم زده می شود. رقت حاصل (1:10) به مدت 5-10 دقیقه باقی می ماند، رقت های 1:100، 1:1000 تهیه می شود و در حجم 0.1 میلی لیتر در 2 دیش پتری با محیط آگار تلقیح می شود. مقدار فلور مخمر در هر 1 گرم مدفوع ثبت می شود.

مایع مغزی نخاعی. ظاهر آن را مشخص کنید (شفاف یا کدر، بی رنگ یا رنگی، وجود خون، رسوب). اسمیر میکروسکوپی از رسوب مایع مغزی نخاعی پس از سانتریفیوژ. سه آماده سازی تهیه می شود: بومی - در یک قطره سالین استریل؛ بومی - در یک قطره جوهر و اسمیر برای رنگ آمیزی به روش PAS، گرم و آلسیان بلو طبق مووری.

میکروسکوپ مایع مغزی نخاعیدر آماده سازی های بومی و رنگی، به ما امکان می دهد وجود سلول های مخمر جوانه زده و قطعات میسلیوم قارچی یا باکتری هایی را که باعث مننژیت چرکی می شوند (مننگوکوک، پنوموکوک، هموفیلوس آنفولانزا و غیره) تعیین کنیم. یک قارچ کپسولی ممکن است در آماده سازی جوهر شناسایی شود. Cryptococcus neoformans.در همان زمان، سلول های مخمر در حال جوانه زدن در پس زمینه خاکستری جوهر، که توسط هاله ای روشن از کپسول احاطه شده است، قابل مشاهده است. آماده سازی جوهر ممکن است حاوی اشکال مخمر نیز باشد کاندیدا آلبیکنسکه هاله سبک کپسول در اطراف سلول ندارند.

Cr. نئوفرمان هاهمچنین با استفاده از رنگ آمیزی آبی Alcian (Mowry) قابل تشخیص است. رنگ آمیزی به دلیل تشخیص انتخابی مشخصه هتروپلی ساکارید کپسولی رخ می دهد Cr.neoformans. اگر فلور باکتریایی در یک آماده سازی با رنگ آمیزی گرم تشخیص داده شود، بررسی بیشتر مایع مغزی نخاعی با استفاده از روش های باکتریولوژیکی مناسب انجام می شود. پس از میکروسکوپ رسوب، مایع روی 3 فنجان ورت آگار تازه تهیه شده و خشک شده یا سابورو آگار و همچنین روی مخمر مایع یا محیط سابورو مایع تلقیح می شود. 2-3 قطره رسوب مایع را روی سطح مواد مغذی آگار فنجان های 1 و 2 ریخته و با کاردک آن را کاملا بمالید و 1 قطره را در سه نقطه از سطح آگار فنجان 3 تلقیح کنید تا قارچ های رشته ای شناسایی شوند. مایع باقی مانده به 5 میلی لیتر مخمر مایع یا آگار سابورو منتقل می شود. محصولات زراعی در دو شرایط دمایی انکوبه می شوند: فنجان 1 - در +37 درجه سانتیگراد و فنجانهای 2 و 3 و کاشت در محیط مایع - در دمای +30 + 28 درجه سانتیگراد. محصولات در دمای +37 درجه سانتیگراد مشاهده می شوند. در روز 2 و 5 و در 28 - 30 درجه سانتیگراد - در روزهای 4، 7، 10 رشد. اگر در روز پنجم در دمای +37 درجه سانتیگراد و در روز دهم در دمای 30-28 درجه سانتیگراد رشد نکرد، از یک محیط غذایی مایع روی صفحات با خار مریم یا سابورو آگار بکارید. در صورت عدم رشد فلور مخمر، نتیجه تلقیح مایع منفی ثبت می شود.

تخلیه فیستول. مطالعه با میکروسکوپ مواد در آماده سازی بومی یا رنگ آمیزی آغاز می شود. سپس مواد را روی یک محیط آگار (خاراق یا سابورو) تلقیح می کنند که برای آن 2 تا 3 قطره از ترشحات را روی فنجان ریخته و با کاردک روی سطح آگار پخش می شود. محصولات به مدت 48 ساعت در دمای +37 درجه سانتیگراد انکوبه می شوند.

تخلیه غشاهای مخاطی.

1. تامپون را در یک لوله آزمایش با 2 میلی لیتر محیط مایع (مخمر، محیط Sabouraud یا MPB) قرار داده و بدون خیساندن درب به مدت 5-7 دقیقه تکان دهید. رقت های 1:10، 1:100 را آماده کرده و 0.1 میلی لیتر از هر رقت را روی دو فنجان ورت آگار، سابورو آگار یا MPA تلقیح کنید. تلقیح بر روی محیط جامد و لوله آزمایش با محیط مایع همراه با سواب (برای غنی سازی) در دمای +37 درجه سانتیگراد انکوبه می شود. تقریبا تعیین شده است. برای انجام این کار، تعداد کلنی های مخمر رشد کرده در 20 و رقت ضرب می شود. در صورت عدم رشد کلنی ها روی پلیت ها، رقت های گرفته شده مجدداً از محیط غنی کننده روی یک صفحه با ورت آگار کاشته می شوند.

2. کاشت را می توان با حرکت یک سواب با چرخش روی سطح محیط غذایی انجام داد. در این مورد، تعداد کلنی های مخمر در نظر گرفته نمی شود، بلکه تنها به حضور و شدت رشد توجه می شود: کلنی های منفرد، رشد قابل توجه یا مداوم، عدم رشد میکروبیوتا.

خون نمونه‌های خون وریدی برای کشت خون باید با محیط غنی‌کننده حداقل 1:5 رقیق شوند تا خاصیت باکتری‌کشی خون مانع رشد قارچ نشود. 5-10 میلی لیتر خون تازه گرفته شده را به ترتیب به 50-100 میلی لیتر محیط غذایی (مایع Sabouraud با گلوکز 2٪ یا محیط کیت تاروزی پس از بازسازی آن) تلقیح کنید. برای کشت، می توانید خون را با یک ضد انعقاد (محلول سیترات سدیم 5% 1:10) مصرف کنید. گیاهان به مدت 10 روز در دمای +37 درجه سانتیگراد با کاشت شاهد در روزهای 5 و 10 کشت می شوند. با استفاده از یک پیپت استریل، رسوب را بردارید که 3 قطره از آن با یک حلقه باکتریولوژیک روی سطح ورت آگار در ظروف پتری پراکنده می شود. فنجان های بذر را به مدت 2 تا 5 روز در ترموستات با دمای +37 درجه سانتیگراد قرار می دهند. در صورت رشد فلور مخمر، پاسخ اولیه در مورد وجود قارچ در خون داده می شود و کشت به جنس و گونه تعیین می شود.

روش دیگری برای کشت خون برای مایکوفلور شرح داده شده است (H. Rieth). در این حالت 5-10 میلی لیتر خون به صورت قطره ای تلقیح می شود. 40-50 قطره خون را روی سطح یک ماده مغذی متراکم در یک ظرف پتری با یک پیپت استریل، در فاصله 0.5 سانتی متری بین قطره ها بمالید. تلقیح در دو ظرف پتری انجام می شود که در یک ظرف در دمای +37 درجه سانتیگراد و در دیگری در دمای اتاق به مدت 2-5 روز انکوبه می شود.

تکه های بافت اندام با قطعه آزمایشی بافت روی سطح یک ماده مغذی متراکم در ظرف پتری اثری ایجاد می‌شود، سپس الک با یک حلقه انجام می‌شود. همان تکه بافت در 50 میلی‌لیتر ماده مغذی مایع (مخمر، محیط Sabouraud) قرار می‌گیرد. محصولات در ترموستات در دمای +37 درجه سانتیگراد به مدت 5 روز انکوبه می شوند.

فلس های پوست و ناخن. کاشت فلس بدون توجه به نتایج میکروسکوپ انجام می شود. برای انجام این کار، با استفاده از یک کاردک قارچ شناسی استریل که در میعانات محیط مرطوب شده است، فلس ها را در یک لوله آزمایش در 2 تا 3 نقطه بر روی آگار مایل دار منتقل می کنند و آنها را به سطح محیط فشار می دهند. بسته به مقدار مواد دریافتی برای تحقیق، تلقیح در 2-3 لوله آزمایش انجام می شود. محصولات در ترموستات در دمای 28-37 درجه سانتیگراد تا 5 روز انکوباتور می شوند.

روش های شناسایی سریع به طور گسترده استفاده می شود سی آلبیکنس. این گونه قادر است در عرض چند ساعت (4-2 ساعت در دمای 37 درجه سانتیگراد) لوله های جوانه و رشته های کوتاه کاذب را روی سرم خون، سفیده تخم مرغ، محیط ایگل، محیط 199 و غیره تشکیل دهد. در عمل، آزمایشگاه ها از سرم انسانی (باقی مانده از واکنش های سرولوژیکی) استفاده می کنند که در آن لوله های جوانه در دمای 37 درجه سانتیگراد تشکیل می شوند و پس از 24 ساعت درهم پیچیده های سودومایسلیوم ایجاد می شود. به خاطر ظاهر سی آلبیکنساین پدیده در 90٪ موارد معمول است. جوانه ها کمتر تشکیل می شوند C. tropicalis.

2.3. بررسی میکروسکوپی و کشت مواد پاتولوژیک برای مایکوزهای مشکوک ناشی از کپک

مواد پاتولوژیک را می توان در آماده سازی بومی و رنگ آمیزی بررسی کرد. اسلایدها و شیشه های پوششی در نظر گرفته شده برای تهیه میکرو اسلایدها باید در مخلوطی از الکل و اتر (1:1) نگهداری شوند تا از آلودگی هوا به مایکوبیوتا جلوگیری شود. قبل از استفاده، اسلایدها و روکش ها روی شعله مشعل استریل می شوند.

میکروسکوپ مواد

میکروسکوپ خلط. برای تهیه فرآورده های بومی، خلط را به یک ظرف پتری استریل منتقل می کنند و در یک زمینه سیاه برای تشخیص ذرات ریز (توده ها) بررسی می شود. توده ها می توانند چرکی، چرکی-مخاطی، چرکی-خونی باشند. اندازه توده ها در اندازه 0.3-3 میلی متر در قطر متفاوت است، رنگ آنها می تواند خاکستری، زرد، مایل به سبز باشد. برای تهیه ریز اسلایدهای بومی، توده های منفرد با سوزن های تشریح کننده یا یک حلقه باکتریولوژیک به یک قطره الکل با گلیسیرین یا به یک قطره محلول 10٪ KOH منتقل می شوند. با یک شیشه پوششی بپوشانید، با سوزن کالبد شکافی و میکروسکوپ در بزرگنمایی میکروسکوپ کم (1:80، چشمی 10 برابر و شیئی 8 برابر) و زیاد (1:400، چشمی 10 برابر و شیئی 40 برابر) فشار کمی وارد کنید.

آماده سازی از آب های شستشو، اگزودا، و همچنین صفرا، ادرار، شیره معده و مشروب از رسوبات بومی یا از رسوب به دست آمده از سانتریفیوژ (در 1500 دور در دقیقه به مدت 5 دقیقه) تهیه می شود. رسوب با حلقه یا پیپت پاستور به قطره ای از محلول KOH 10% روی یک لام شیشه ای منتقل می شود، با یک ورقه پوششی پوشانده می شود و در بزرگنمایی کم و زیاد میکروسکوپ بررسی می شود.

برای تهیه آماده‌سازی‌های رنگ‌آمیزی، توده‌ها یا قطره‌های رسوبی که باید بررسی شوند به طور مساوی با سوزن‌های تشریح کننده یا یک لام کوچکتر روی سطح یک لام استریل پخش می‌شوند تا زمانی که یک اسمیر نازک به دست آید. اسمیر به دست آمده در هوا خشک می شود، با متیل الکل یا مخلوط نیکیفوروف (قسمت های مساوی اتیل الکل و اتر 96 درصد) به مدت 3 تا 5 دقیقه ثابت می شود یا با شعله زدن سه بار روی شعله مشعل. اسمیر ثابت با استفاده از روش گرم، روش PAS و کالکوفلور سفید رنگ آمیزی می شود. نمونه رنگ‌آمیزی شده با استفاده از سیستم میکروسکوپ غوطه‌وری (1:900، چشمی 10 برابر، شیئی 90 برابر) میکروسکوپ می‌شود.

مواد کاشت

هنگام بررسی هر گونه ماده پاتولوژیک برای قارچ های رشته ای، آن را با افزودن پنی سیلین و استرپتومایسین (محیط 200-100 واحد در میلی لیتر) روی محیط جامد Sabouraud یا خار مریم تلقیح می کنند. کاشت در دو تکرار با در نظر گرفتن شرایط دمایی مختلف برای رشد قارچ های رشته ای (37+ و 28+ درجه سانتیگراد)، همیشه در 3 نقطه در مرکز فنجان انجام می شود. زمان جوجه کشی 4-5 روز است.

خلط (توده های انتخاب شده) با یک حلقه باکتریولوژیکی یا پیپت پاستور به سطح محیط یا مخمر Sabouraud's منتقل می شود. محل کاشت با مداد در پشت ته ظرف پتری مشخص شده است. ظروف پتری بذر شده در یک ترموستات با درب آن رو به بالا قرار می گیرند.

پس از مدت معینی از جوجه کشی، ظروف بذری بررسی شده و در صورت تشخیص هاگ، کشت قارچ مشخص می شود. در صورت عدم وجود هاگ، قارچ برای شناسایی بیشتر در محیط دیفرانسیل Czapek زیر کشت می شود.

رسوب آب شستشوی برونش ها، حفره های فک بالا، اگزودا، ادرار، شیره معده (بومی یا پس از سانتریفیوژ) با پیپت گرفته شده و در حجم 0.1 میلی لیتر تلقیح می شود. مدفوع 1:10 (1 گرم مدفوع و 9 میلی لیتر مایع) در محیط مایع یا محلول کلرید سدیم ایزوتونیک مایع استریل Sabouraud رقیق می شود، امولسیون شده، به مدت 10 دقیقه ته نشین می شود تا ذرات بزرگ رسوب کند، و مایع رویی در یک حجم تلقیح می شود. 0.1 میلی لیتر ترشحات مجرای شنوایی خارجی و حلق که با سواب گرفته می شود، با عبور دقیق هر طرف سواب روی سطح ماده غذایی تلقیح می شود. سواب های سواب را می توان تلقیح کرد. برای انجام این کار، تامپون ها را در 10 میلی لیتر مایع سابورو یا خار مریم مایع با دانه های شیشه ای قرار می دهند و به مدت 10 دقیقه امولسیون می شوند، با 0.1 میلی لیتر سواب شستشو با چمن (طبق گفته Leshchenko V.M.، 1973)، یا در سه نقطه تلقیح می شوند.

فلس های پوست و ناخن روی سطح ماده مغذی قرار می گیرند و با دقت آنها را فشار می دهند.

رسوب مایع مغزی نخاعی (سانتریفیوژ در 1500 دور در دقیقه به مدت 5 دقیقه) به دو فنجان 0.1 میلی لیتری محیط تلقیح می شود و باقیمانده در یک محیط غنی کننده (محیط مایع Sabouraud یا مخمر مایع) تلقیح می شود و در لوله های 5 میلی لیتری ریخته می شود. ظروف تلقیح شده طبق معمول انکوبه می شوند و لوله های تلقیح شده روی محیط غنی کننده در دمای 28+ درجه سانتی گراد به مدت 10 روز انکوبه می شوند.

اگر قارچ رشته ای روی محیط جامد رشد کند، کشت آن از این تلقیح مشخص می شود و اگر روی سابورو آگار یا ورت آگار رشد نکرد، قارچ از محیط غنی کننده بررسی می شود. برای انجام این کار، کشت قارچ دوباره بر روی محیط چگال دیفرانسیل Czapek زیر کشت می شود و متعاقبا شناسایی می شود.

از یک تکه بافت عضو (بیوپسی، کالبد شکافی)، اثری بر روی سطح یک محیط جامد ایجاد می شود که قسمت بریده شده قطعه در سه نقطه بررسی می شود. در همان زمان، تکه‌های بافت در 50 میلی‌لیتر ماده مغذی مایع (Saburo، wort) قرار می‌گیرند.

در صورت مشکوک بودن به قارچ، خون در دو تا سه تکرار بررسی می شود. 5 یا 10 میلی لیتر خون را به ترتیب در 50 یا 100 میلی لیتر از محیط مایع Sabouraud با گلوکز 2 درصد تلقیح کنید. محصولات زراعی در دمای 37+ و 28+ درجه سانتیگراد به مدت 10 روز رشد می کنند. اولین بازرسی محصولات پس از 5 روز انجام می شود، دومین بازرسی پس از 10 روز انجام می شود. در روز پنجم، می توانید رشد قارچ رشته ای را به صورت یک توده نمدی در پایین و یک لایه سطحی مشاهده کنید. میسلیوم در محیط دیفرانسیل Czapek برای تعیین جنس و نوع قارچ زیر کشت می شود. در صورت عدم رشد قارچ در روز پنجم، محصولات تا 10 روز نگهداری می شوند و در صورت عدم رشد، نتایج آزمایش منفی ثبت می شود.

هنگام کاشت در سه نقطه، رشد قارچ در دو و سه نقطه از نظر تشخیصی قابل توجه است، در یک نقطه - تصادفی. در صورت لزوم، کاشت مجدد امکان پذیر است.

شناسایی کشت های کپک جدا شده

پس از جداسازی کشت، قارچ‌های رشته‌ای در محیط دیفرانسیل Czapek برای تعیین ژنریک و در صورت امکان، زیر کشت می‌شوند.

در عمل آزمایشگاه های تشخیصی، به عنوان یک قاعده، آنها از معیارهای شناسایی فرهنگی و مورفولوژیکی استفاده می کنند: آنها الگوی رشد یک کشت قارچی را در محیط آگار (تشخیص فرهنگی، ماکرومورفولوژی) و میکرومورفولوژی قارچ ارزیابی می کنند.

در موارد دشوار، از روش های تشخیصی اضافی استفاده می شود (مطالعه فعالیت آنزیمی، ویژگی های دمایی رشد برخی از قالب ها).

مفهوم ماکرومورفولوژی (ویژگی های فرهنگی) شامل ساختار کلنی (کرکی، نمدی، مخملی، تار عنکبوتی، پشمی، ژنده پوش، آرد آلود و غیره)، سطح (مسطح، چین خورده، ناهموار، گنبدی شکل، هسته ای شکل، ناحیه ای است. و غیره)، رنگدانه شدن کلنی قارچ و بستر (سایه های مختلف سبز، آبی، بنفش، سیاه، خاکستری و غیره)، وجود اگزودا در سطح کلنی.

میکرومورفولوژی قارچ از یک فرهنگ با استفاده از آماده سازی مورد مطالعه قرار می گیرد، که بسته به جنس قارچ، به شرح زیر تهیه می شود: یک قطره مایع برای تهیه آماده سازی (قسمت های مساوی الکل، گلیسیرین و آب) روی یک لیوان قرار می گیرد. اسلاید؛ تکه ای از میسلیوم در آن قرار می گیرد و با کاردک قارچ شناسی از کلنی به شکل مثلث بریده می شود و قسمت های مرکزی و محیطی را می گیرد و قطعه بریده شده با دو سوزن تشریح با احتیاط صاف می شود تا از تشکیل حباب های هوا جلوگیری شود. . در برخی موارد (موکور و ریزوپوس)، هنگام تهیه دارو، میسلیوم را روی یک لام شیشه ای خشک پخش می کنند، یک قطره مایع روی آن می ریزند و با یک ورقه پوششی می پوشانند. آماده سازی در زیر میکروسکوپ در بزرگنمایی کم و زیاد مشاهده می شود. سوبسترا و میسلیوم هوایی مورد مطالعه قرار می گیرند، وجود یا عدم وجود سپتا (سپتا) ذکر می شود و به ماهیت هاگ سازی توجه می شود: کونیدیوفورها با کنیدیوم ها و اسپورانژی ها با اسپورنگی اسپور.

کنیدیوفورها از نظر ساختار متفاوت هستند: از هیف های ساده تک هاگدار تا تشکیلات درخت مانند شاخه دار. کنیدیوفورها به صورت منفرد یا گروهی قرار دارند؛ آنها به طور قابل توجهی با هیف های رویشی میسلیوم، بی رنگ یا رنگی، صعودی، ایستاده، آبشاری، خزنده متفاوت هستند. آنها می توانند از یک سلول و تعداد زیادی سلول با اشکال و اندازه های مختلف تشکیل شوند که هر کدام نام خاص خود را دارند. به عنوان مثال، در جنس Aspergillus، کنیدیوفور از سلول های زیر تشکیل شده است: ساقه، تورم تاولی، استریگمات، زنجیره های کنیدیوم. در جنس Penicillium، کندیوفور به شکل برس های ساده یا پیچیده است، همچنین از سلول های مختلفی تشکیل شده است: شاخه های رامی، متولاها، فیالیدها، زنجیره های کنیدیا.

قارچ های کپک مانند Mucor و Rhizopus به شکل اسپورانژیوم همراه با اندوسپورانژیوسپورها تشکیل می شوند. اسپورانژیوم در انتهای اسپورانژیوفور قرار دارد. اسپورانژیا کروی یا گلابی شکل هستند که اکثرا دارای ستون خاصی هستند که ادامه اسپورانژیوفور داخل اسپورانژیوم است. اسپورانژیوسپورها گرد، بی رنگ یا رنگی هستند.

کنیدی ها (اسپور) قارچ های کپک چندشکلی (اسوانه ای، کروی، بیضی، بیضی، بیضی، گلابی شکل، چمبی شکل)، تک و چند سلولی، از نظر اندازه و رنگ متفاوت، تک، به صورت زنجیره ای یا جمع آوری شده در سر و مرتب می باشند. در خوشه ها سطح کندی ها می تواند صاف، خشن، خاردار، زگیل دار، پرزدار و غیره باشد.

بررسی میکروسکوپی و کشت مواد پاتولوژیک برای مایکوزهای ناشی از قارچ های دیمورفیک

با این قارچ ها، لازم است که دوشکلی پاتوژن ها را در نظر بگیریم.

مواد پاتولوژیک برای عفونت‌های قارچی بیماری‌زا اولیه (کوکسیدیوئیدوز، هیستوپلاسموز، پاراکوکسیدیوئیدوز، بلاستومایکوز آمریکای شمالی)، و همچنین کرومومایکوز، اسپوروتریکوز و میستوم می‌تواند چرک، خلط، خراش‌های ناشی از ضایعات اولسراتیو روی پوست و غشاهای مخاطی، غشاهای مخاطی، غشاهای مخاطی و نخاعی باشد. قطعات بیوپسی شده از شکست ضایعات

مشکل در شناسایی عوامل ایجاد کننده این قارچ ها این است که به دلیل دوشکلی آنها، میکروسکوپی مواد پاتولوژیک اشکال بافتی قارچ را نشان می دهد که اغلب سلول های مخمری با مورفولوژی های مختلف یا کروی هایی با اندوسپورها کاملاً متفاوت از عناصر مشابه هستند. قارچ استخراج شده از کشت آن در دمای 30+28+ درجه سانتیگراد روی آگاو معمولی Sabouraud با pH نزدیک به اسیدی رشد کرد. با این حال، باید در نظر داشت که در برخی از قارچ‌های دوشکلی، می‌توان مرحله‌ای از رشد قارچ را در کشت به دست آورد که اغلب یادآور شکل بافتی آن است، اما زمانی که در محیط‌های غنی از پروتئین با واکنش کمی قلیایی (pH) رشد می‌کند. = 7.6 - 7.8)، در دمای 37 درجه سانتیگراد.

موارد فوق در مورد قارچ صدق می کند: هیستوپلاسما کپسولاتوم، بلاستومایسس درماتیتیدیس، پاراکوکسیدیوئیدس برازیلینسیس، کوکسیدیوئیدس ایمیتیسو Sporothrix schenckii.

تشخيص آزمايشگاهي ميكوزهاي ناشي از قارچهاي ذكر شده در اينجا بر اساس تشخيص فرمهاي بافتي در مواد پاتولوژيك با ميكروسكوپ، جداسازي كشت پاتوژن و شناسايي آن با ويژگيهاي فرهنگي و مورفولوژيكي است.

بررسی میکروسکوپی در آماده‌سازی‌های رنگ‌آمیزی روی یک لام شیشه‌ای در قطره محلول 10 درصد قلیایی سوزاننده یا مخلوطی از الکل و گلیسیرین در حجم‌های مساوی یا در اسمیرهای رنگ‌آمیزی انجام می‌شود (جدول 3).

تلقیح مواد پاتولوژیک بر روی محیط های غذایی فوق الذکر در ظروف پتری با استفاده از یک کاردک باکتریولوژیکی طبق روش پذیرفته شده انجام می شود.

2.5. بررسی میکروسکوپی و کشت مواد پاتولوژیک برای درماتومایکوزیس (کراتومیکوز و درماتوفیتوز).

هدف این مطالعه، قارچ‌های سطحی است که فقط لایه کراتین اپیدرم را تحت تأثیر قرار می‌دهند و درماتوفیت‌ها روی پوست و ضمائم آن (مو، ناخن) تأثیر می‌گذارند که عوامل ایجادکننده آن قارچ‌های مربوط به جنس هستند. Trichophyton، Microsporum و Epidermophyton.

تحقیقات قارچ شناسی آزمایشگاهی شامل مراحل مشابه سایر قارچ ها است: میکروسکوپ مواد و به دست آوردن یک کشت خالص هنگام کاشت آن. جمع آوری مناسب مواد به میزان زیادی بر موفقیت میکروسکوپ و کسب کشت تأثیر می گذارد.

مواد پاتولوژیک پس از جمع آوری در اسرع وقت بررسی می شود. ابتدا به سه بخش تقسیم می شود: برای میکروسکوپ، کشت و بررسی مجدد. میکروسکوپ مواد پاتولوژیک ساده‌ترین و سریع‌ترین روش برای تشخیص وجود قارچ در بافت‌ها است. مواد خرد شده را در وسط یک لام شیشه ای در یک قطره از محلول 10-20٪ KOH قرار می دهند و کمی روی شعله یک لامپ الکلی حرارت می دهند تا لبه ای سفید رنگ در امتداد لبه قطره به دست آید که با یک شیشه پوششی پوشانده شود. و به مدت 5-10 دقیقه (پوست مو، پوست) و 30 تا 40 دقیقه (ناخن) برای خیساندن و شفاف سازی باقی بماند. مواد را می توان بدون حرارت پردازش کرد، برای این، آماده سازی در محلول 20٪ KOH به مدت 30-60 دقیقه باقی می ماند.

میکروسکوپ ابتدا با میکروسکوپ کم و سپس بزرگنمایی بالا.

کشت برای جداسازی و شناسایی عامل بیماریزا ضروری است. مواد تلقیح شده تا حد امکان خرد شده و در لوله های آزمایش در 3-2 نقطه به فاصله 1-2 سانتی متر روی آگار اریب تلقیح می شود.حداقل 2-3 لوله آزمایش (مو) و 4-5 لوله آزمایش تلقیح می شود. (فلس های پوست و ناخن) با مواد یک نمونه تلقیح می شوند. برای جداسازی اولیه درماتوفیت ها، بهتر است از محیط آگار استاندارد Sabouraud با گلوکز 4-2 درصد یا ورت آگار حاوی آنتی بیوتیک های آنتی باکتریال (پنی سیلین 50 میکروگرم بر میلی لیتر + استرپتومایسین 50 میکروگرم در میلی لیتر یا بیومایسین 200 واحد در میلی لیتر) و آنتی بیوتیک استفاده شود. آنتی بیوتیک کپک اکتیدیون (سیکلوهگزیماید) 0.1 - 0.5 mg/ml. اکتیدیون بر رشد درماتوفیت ها تأثیر نمی گذارد و بسیاری از کپک ها و همچنین گونه های کاندیدا و کریپتوکوکوس را مهار می کند.

گیاهان در دمای 30-22 درجه سانتی گراد (بهترین دمای 28 درجه سانتی گراد) انکوبه می شوند. ظهور درماتوفیت از روز 4 تا 12 انکوباسیون در نقاط کاشت در امتداد لبه های ماده اعمال شده مشاهده می شود. در صورت عدم رشد در طی 30 روز، نتایج کشت منفی در نظر گرفته می شود. در شرایط بهینه، کشت اولیه بسیاری از درماتوفیت ها را می توان 7-10 روز پس از کاشت شناسایی کرد، اما محصولات باید به مدت 20-30 روز تحت نظارت باشند. کشت های اولیه نسبتاً آهسته رشد می کنند و هنگام استفاده از محیط های بدون آنتی بیوتیک، درماتوفیت ها ممکن است توسط باکتری ها یا کپک ها با رشد سریع تر سرکوب شوند. هنگامی که رشد در بذر اولیه ظاهر می شود، لازم است از لبه کلنی روی یک محیط دیفرانسیل تازه الک شود تا یک کشت خالص به دست آید، که به عنوان ماده ای برای شناسایی درماتوفیت جدا شده عمل می کند.

2.6. روش های سرولوژیکی برای تشخیص مایکوز

اهمیت روش‌های سرولوژیکی عمدتاً در موارد زیر است: شناسایی بیماران مبتلا به قارچ‌های مهاجم احتمالی. تایید ماهیت قارچی بیماری های آلرژیک؛ معاینه غربالگری گروه های در معرض خطر ابتلا به مایکوز.

نتایج مثبت کاذب آزمایش‌های سرولوژیکی با مایکوزیس و در افراد سالم حساس به آنتی‌ژن‌های قارچی امکان‌پذیر است؛ آزمایش‌های منفی می‌تواند در نقص ایمنی حتی در پس زمینه مایکوزیس تهاجمی در حال انجام رخ دهد.

روش های معمول پذیرفته شده برای تشخیص سرولوژیکی مایکوزها
با جزئیات کافی شرح داده شده است / P.N. Kashkin, V.V. Lisin. "کاربردی
راهنمای قارچ شناسی پزشکی، پزشکی، 1362/. اما در دوران اخیر
دهه‌ها تغییرات قابل‌توجهی در رویکردهای روش‌شناختی رخ داده است /Elinov N.P.,
2001/. روش های اصلی برای تشخیص آنتی ژن ها و آنتی بادی ها پیشنهاد شد
برخی از متابولیت های سلول های قارچی؛ تست های تشخیصی ویژه ایجاد شده است
کیت ("نهنگ")، به عنوان مثال Pastorex ® Candida، برای تعیین در
واکنش های "آگلوتیناسیون لاتکس" تکرار اپی توپ های الیگومانوز آنتی ژن
ساختارها/ بیان شده بر روی تعداد زیادی ماکرومولکول
قارچ؛ برای تعیین آنتی ژن مانان کاندیدا، به عنوان مثال.
سرم یک بیمار مبتلا به کاندیدمی، می توانید از کیت Platelia ® Candida استفاده کنید.
با استفاده از مجموعه اول، آستانه تعیین ساختارهای آنتی ژنی 2.5 نانوگرم در میلی لیتر است، با استفاده از مجموعه دوم در ارتباط با روش _____________، آستانه تعیین است. - 0.5 نانوگرم در میلی لیتر.

عوامل ایجاد کننده مایکوز اغلب در طول آزمایشات آزمایشگاهی مواد بالینی مختلف شناسایی می شوند

خون

• کاندیدا
• کریپتوکوکوس
• پاتوژن های میسلیوم به ندرت در آزمایش خون شناسایی می شوند به جز فوزاریوم

مایع مغزی نخاعی

• کاندیدا
• کریپتوکوکوس

ترشحات چرک از آبسه، زخم و غیره.

• کاندیدا
• کریپتوکوکوس
• فوزاریوم
• آسپرژیلوس
• اسپوروتریکس

ترشحات تنفسی (خلط، مایع BAL، بیوپسی براشی برونش، آسپیراسیون ترانس)

• آسپرژیلوس
• کاندیدا
• کریپتوکوکوس
• موکور
• اسکدوسپوریوم
• ریزوپوس
• اسپوروتریکس

ترشحات، مواد بیوپسی از زخم ها

• آسپرژیلوس
• کاندیدا
• فوزاریوم
• ریزوپوس

سایر سوبستراهای زیستی

• کاندیدا
• کریپتوکوکوس

مواد از قفسه سینه و حفره شکم؛ مایع سینوویال

• آسپرژیلوس
• کاندیدا
• فوزاریوم

بدن زجاجیه

• کاندیدا
• آسپرژیلوس

IV. معیارهای تشخیص مایکوز سیستمیک: پارامترهای بالینی و آزمایشگاهی تشخیص نهایی

ازوفاژیت

• وجود تغییرات مشخصه در طول ازفاگوسکوپی
• شناسایی قارچ در حین کشت مواد بیوپسی
• وجود پسودومایسلیوم در اسمیرهای رنگی یا علائم رشد قارچ مهاجم در مواد بیوپسی

ذات الریه

پنومونی ناشی از Candida spp.

• تغییرات حاد نفوذی در عکس قفسه سینه، همزمان با تظاهرات بالینی پنومونی قارچی
• شناسایی Candida spp.هنگام کشت مواد از دستگاه تنفسی تحتانی که از بیوپسی ترانس قفسه سینه، بیوپسی ترانس برونش، یافته های بیوپسی ریه یا نمونه برداری با هدایت توراکوسکوپی به دست آمده است.
• شناسایی پسودومایسلیوم در مواد بیوپسی رنگ آمیزی مناسب

پنومونی ناشی از Aspergillus spp. Fusarium spp., Scedosporium apiospermum

• شناسایی عناصر قارچی در بافت ها و کشت مثبت
• نفوذ مداوم یا پیشرونده در ریه ها، مقاوم به درمان آنتی بیوتیکی
• تشخیص یکی از این پاتوژن ها با استفاده از خلط یا کشت BAL
• علائم بالینی ذات الریه (سرفه، تنگی نفس، درد پلورال، خس خس سینه، صدای اصطکاک جنب)
• تغییرات مشخصه در اشعه ایکس یا سی تی اسکن ریه:

تغییرات نفوذی ساب پلور، ندولار، حاد زاویه دار یا غار

علامت "هاله" در سی تی اسکن ریه

پیشرفت تغییرات نفوذی با ایجاد حفره ها و ظهور علامت "داس"

• عدم وجود سایر پاتوژن ها هنگام کشت مایع BAL که می تواند باعث تغییرات ارائه شده در ریه ها شود

سینوزیت

• علائم بالینی و رادیولوژیکی سینوزیت حاد
• علائم میکروسکوپی و فرهنگی مایکوز در هنگام بررسی مواد آسپیره یا بیوپسی

عفونت مجاری ادراری

• تشخیص CFU/ml 10×1 با کشت های مکرر ادرار به درستی جمع آوری شده

قارچ خونی

• شناسایی تک قارچ ها در طی کشت خون در یک دوره افزایش دمای بدن > 38 درجه سانتی گراد

میکوز حاد منتشر

• قارچی همراه با علائم فرهنگی یا بافتی آسیب به بافت های عمیق (از جمله بافت زیر جلدی) یا شناسایی پاتوژن از دو سوبسترای زیستی استریل معمولی

اندوفتالمیت

• علائم چشمی اندوفتالمیت
• شناسایی پاتوژن از چشم، خون یا سایر کانون های انتشار

آبسه یا استئومیلیت

• علائم رادیوگرافی/CT/MRI استئومیلیت
• شناسایی پاتوژن در مواد آسپیره یا بیوپسی

مننژیت

• تعیین تغییرات CSF تایید کننده وجود التهاب و تشخیص قارچ با میکروسکوپ CSF
• تشخیص قارچ با کشت CSF یا تعیین آنتی ژن Cr.neoformans، Candida و Aspergillusدر CSF

کاندیدیازیس مزمن منتشر (هپاتولیئنال).

ممکن است

• تب مداوم یا متناوب پس از پایان دوره نوتروپنی همراه با علائم مشخصه آسیب کبد، طحال یا کلیه

اثبات شده است

• موارد فوق در ترکیب با بذر Candida spp.از خون قبل از ظهور علائم آسیب به کبد، طحال یا کلیه یا با علائم بافتی فرهنگی کاندیدیاز در مواد بیوپسی از ضایعات

V. علل عفونت قارچی

اصول مختلفی برای طبقه بندی عفونت های قارچی و عوامل ایجاد کننده آنها وجود دارد. به نظر ما این است که عملا ساده ترین و مناسب ترین روش تقسیم قارچ های بیماری زا به 5 گروه اصلی است:

1. پاتوژن های قارچ های سطحی.

2. پاتوژن های درماتومایکوزیس.

3. پاتوژن های قارچ های زیر جلدی.

4. عوامل ایجاد کننده مایکوزهای عمیق (میکرومایست های بیماری زا اولیه، عوامل ایجاد کننده عفونت های فرصت طلب).

5. پاتوژن های کاذب.

* لازم به تاکید است که پاتوژن های سه گروه اول در بیماران دچار سرکوب سیستم ایمنی می توانند باعث قارچ و ضایعات چند عضوی شوند.

در بخش‌های زیر، شرحی از عوامل ایجاد کننده قارچ‌ها را بر اساس یک طرح ارائه می‌کنیم: نام آن بر اساس نام‌گذاری پذیرفته‌شده، فهرستی از مترادف‌ها، ویژگی‌های ماکروسکوپی کلنی‌ها در محیط‌های غذایی و ویژگی‌های میکروسکوپی عناصر قارچی قابل مشاهده در زیر میکروسکوپ در آماده سازی های بومی و از مستعمرات. همچنین داده هایی در مورد پراکندگی قارچ ها در طبیعت و بیماری هایی که آنها ایجاد می کنند ارائه شده است.

تشخیص آزمایشگاهی بیماری های قارچی بر اساس تشخیص قارچ و تعیین جنس و گونه آن است. این شامل دو مرحله اصلی است: مطالعات میکروسکوپی و فرهنگی.

آزمایش میکروسکوپی

معاینه میکروسکوپی اولین و مهم ترین حلقه در تایید تشخیص اولیه است.

موفقیت معاینه میکروسکوپی تا حد زیادی به جمع آوری صحیح مواد پاتولوژیک بستگی دارد. برای بررسی میکروسکوپی، لازم است موهایی انتخاب شوند که دارای علائم قابل مشاهده آسیب قارچی (کدر، شکسته، ضخیم) باشند. موهایی که از نظر ظاهری تغییر کرده اند با موچین اپیلاسیون از بین می روند. برای تشخیص تک موهای آسیب دیده با میکروسپوریا، می توانید از یک لامپ فلورسنت با فیلتر چوب (درخشش آبی مایل به سبز) استفاده کنید.

هنگام انتخاب موهای آسیب دیده، می توان از تعدادی ویژگی اضافی استفاده کرد. موهای متاثر از میکروسپورم ها دارای یک غلاف خاکستری از هاگ های بیرونی در پایه هستند. در مورد تریکوفیتوز مزمن، موهای آسیب دیده خاکستری کوتاه، خمیده به شکل "کاما" و "علامت سوال" و همچنین "نقطه های سیاه" (موهای آسیب دیده سیاه ضخیم شده که در دهان فولیکول شکسته شده اند) در این ناحیه دیده می شوند. ضخامت فلس ها در صورت تریکوفیتوز انفیلتراتیو – چرکی برای معاینه میکروسکوپی علاوه بر موهای آسیب دیده می توان از چرک و پوسته های ضایعه استفاده کرد.

از ضایعات پوستی با میکروسپوریا، تریکوفیتوز و میکوز چین های اینگوینال، پوسته ها باید از ناحیه محیطی ضایعه، جایی که قارچ در مقادیر بیشتری یافت می شود، خراشیده شود. موهای زائد همراه با پوسته های پوستی خراشیده می شوند.

هنگام بررسی موهای آسیب دیده با میکروسپوریا و تریکوفیتوز، به محل قرارگیری هاگ ها (داخل یا بیرون مو) و اندازه آنها توجه می شود. این داده ها در برخی موارد امکان روشن شدن تشخیص، شکل بالینی قارچ و اپیدمیولوژی را فراهم می کند.

در شکل بین انگشتی میکوز پا، از پوسته های پوستی و ضایعات لایه شاخی خیسانده شده برای بررسی میکروسکوپی استفاده می شود. ناحیه ای از ناخن که باید برای بررسی میکروسکوپی گرفته شود به شکل اونیکومیکوزیس بستگی دارد. با یک فرم سطحی، لازم است سطح صفحه ناخن را خراش دهید.

در رایج ترین شکل دیستال-لترال، خراش دادن از بستر ناخن، از زیر صفحه (هیپرکراتوز زیر ناخنی) با بخشی از صفحه ناخن تغییر یافته بریده شده استفاده می شود. برای فرم زیرانگویی پروگزیمال، از روش های خاصی برای جمع آوری مواد استفاده می شود (حفاری پنجره ها با استفاده از مته، بیوپسی ناخن).

در شکل سنگفرشی-هیپرکراتوز میکوز پاها، فلس ها از سطح کف پا خراشیده می شوند. در شکل دیسیدروتیک میکوز پا، پوشش تاول ها برای بررسی قطع می شود.

تکنیک تهیه مواد برای بررسی میکروسکوپی مو . یک قطره کوچک از 30٪ KOH روی یک لام شیشه ای ریخته می شود و موهای آسیب دیده با یک سوزن کالبد شکافی در آن قرار می گیرد. قطره مو کمی روی شعله یک لامپ الکلی گرم می شود تا زمانی که بخار بالای سطح مایع ظاهر شود یا لبه کریستال در امتداد لبه قطره قلیایی بیفتد. پس از پوشاندن با روکش، قلیایی اضافی با کاغذ صافی حذف می شود. دارو ابتدا با بزرگنمایی کم و سپس با بزرگنمایی میکروسکوپ بالا (400 x) بررسی می شود.

فلس های پوست و ناخن . فلس های ناخن نازک برای بررسی میکروسکوپی روی یک لام شیشه ای در قطره 30 درصد KOH قرار داده می شود و حرارت داده می شود و در حین تبخیر، قلیایی به آن اضافه می شود. نمونه خنک‌شده و رنگ‌آمیزی با یک ورقه پوششی پوشانده شده و زیر میکروسکوپ بررسی می‌شود.

پوسته های ضخیم پوست و ناخن در یک لوله سانتریفیوژ قرار داده می شوند و با چند قطره 30% KOH پر می شوند. لوله آزمایش حرارت داده می شود تا به جوش آید و 20-30 دقیقه بماند. بخشی از مواد نرم شده با یک میله شیشه ای به یک اسلاید شیشه ای منتقل می شود و با یک کبریت فشار داده می شود تا "ابر" ظاهر شود و پس از آن زیر میکروسکوپ بررسی می شود.

چرک . یک قطره چرک با یک قطره الکل و نیم و نیم گلیسیرین مخلوط می شود و در یک آماده سازی بومی بررسی می شود.

تشخیص فرهنگی

تشخیص فرهنگی برای روشن شدن قطعی تشخیص و روشن شدن اپیدمیولوژی انجام می شود. این شامل کشت قارچ و سپس بررسی میکروسکوپی است.

موهای آسیب دیده، پوسته ها (پوست و ناخن)، تاول ها یا چرک بر روی یک محیط مغذی مصنوعی تلقیح می شوند. با ظهور مستعمرات غول پیکر در ظروف پتری، می توان ایده ای از جنس پاتوژن (Microsporum، Trichophyton، Epidermophyton)، نوع آن (L. canis یا ferrugineum، T. violaceum، verrucosum یا gypseum) به دست آورد. شفاف سازی نهایی جنس و گونه قارچ تنها بر اساس بررسی میکروسکوپی کشت حاصل امکان پذیر است.

تشخیص آزمایشگاهی کاندیدیازیس سطحی

برای آزمایش های آزمایشگاهی برای قارچ های مخمر مانند، مواد تازه مورد نیاز است. برای معاینه میکروسکوپی، بسته به تظاهرات بالینی و محل ضایعات، پوسته پوسته شدن، خراشیدن ناخن، قطره چرک از زیر چین ناخن، رسوبات سفید رنگ از نواحی آسیب دیده مخاط دهان و اندام تناسلی خارجی، دیواره های واژن، می توان خراش هایی از غشای مخاطی گرفت. غشاهای مجرای ادرار، و همچنین شستشو از مرز قرمز لب، مناطق آسیب دیده پوست چین های بزرگ و کوچک.

بسته به محل ضایعه و ماهیت تظاهرات بالینی، مواد لازم برای تحقیق با سواب پنبه، چاقوی جراحی، حلقه و غیره گرفته می شود. تحت درمان با 30٪ KOH. مواد پاتولوژیک در آماده سازی بدون رنگ یا لکه دار بررسی می شود.

در حالت اول، مواد با مقدار مساوی الکل و گلیسیرین مخلوط می شود. هنگامی که توسط گرم رنگ آمیزی می شود، سلول های مخمر و سودومایسلیوم به رنگ بنفش تیره، توسط Ziehl-Neelsen - آبی و توسط Romanovsky-Giemsa - صورتی-بنفش به نظر می رسند. در این مورد، یک ویژگی متمایز سلول مخمر جوانه زدن است - کشف یک شکل "ساعت شنی". گرفتن مواد از غشای مخاطی حفره دهان، اندام تناسلی، از پوست مرز قرمز لب، از گوشه های دهان، از پوست چین های بزرگ و کوچک با یک سواب استریل انجام می شود. پس از گرفتن مواد، سواب در لوله استریل دیگری با مخمر مایع قرار می گیرد. لوله آزمایش با سواب به آزمایشگاه میکروبیولوژی فرستاده می شود. جداسازی یک کشت خالص از قارچ های مخمر مانند جنس کاندیدا طبق روش های میکروبیولوژیکی پذیرفته شده انجام می شود.

به گفته دانشمندان، 70 درصد از جمعیت جهان علائم بیماری قارچی پا را دارند. این بیماری چین های بین انگشتی و پوست کف پا را درگیر می کند. علت بیماری قارچی است که در ابتدا فقط در مناطق محدودی از جنوب شرقی آسیا و آفریقا یافت می شد. جنگ جهانی اول که باعث مهاجرت دسته جمعی مردم و بدتر شدن شرایط بهداشتی شد، باعث شیوع این بیماری در سراسر جهان شد.

چه چیزی باعث میکوز پا می شود

عامل اصلی بیماری Trichophyton rubrum است. عفونت می تواند توسط T. mentagrophytes و Epidermophyton floccosum ایجاد شود. قارچ های جنس کاندیدا و میکروارگانیسم های کپک می توانند بسیار کمتر به میکروب های بیماری زا تبدیل شوند.

مهمترین عوامل خطر بیماری:

• دیابت؛
• وضعیت نقص ایمنی (ایدز)؛
• کف پای صاف؛
• آترواسکلروز شریان های محیطی؛
• وریدهای واریسی اندام تحتانی.

شرایط خارجی مساعد برای ایجاد عفونت:

• کفش غیر جاذب بسته؛
• صدمات پا (پینه، ساییدگی)؛
• ورزش کردن

علائم پای ورزشکار اغلب در مردان بالغ رخ می دهد. کودکان به ندرت بیمار می شوند.

علائم میکوز پا

با پیشرفت بیماری، پوسته پوسته شدن و خشکی پوست، خارش و سوزش به ویژه در فواصل بین انگشتان و ایجاد ترک های دردناک زیر انگشتان ظاهر می شود. گاهی اوقات اولین علائم میکوز پا تاول هایی است که با ایجاد فرسایش می ترکد. اغلب این بیماری به شکل پاک شده رخ می دهد که فقط با پوسته شدن جزئی که یادآور آرد است در چین های بین انگشتان ظاهر می شود.

4 شکل بالینی این بیماری وجود دارد.

نوع بین دیجیتالی یا intertriginous رایج ترین است. پوست بین انگشتان قرمز می شود، ترک می خورد، لایه سطحی خیس می شود و پوسته می شود. این علائم تا کف پا گسترش یافته و با خارش و سوزش شدید همراه است. التهاب باکتریایی اغلب همراه است.

نوع سنگفرشی-هیپرکراتوز با ضخیم شدن و ترک خوردگی شدید پوست همراه است. کف آن قرمز می شود و پوست می کند. ترک های عمیق و دردناک در ناحیه پاشنه پا ظاهر می شود؛ خارش معمولاً مشخص نیست. این ضایعه اغلب یک ضایعه دو طرفه است و به آن "پای موکاسین" نیز می گویند.

نوع دیسیدروتیک با ظهور تاول های متعدد خارش دار و دردناک همراه است. آنها با یکدیگر ادغام می شوند و حباب های بزرگی را تشکیل می دهند. پوشش تاول ها می ترکد و سطحی براق، آسیب پذیر و دردناک را نشان می دهد - فرسایش. تظاهرات خارجی شبیه اگزما است.

التهاب میکروبی اغلب با بزرگ شدن غدد لنفاوی اینگوینال، تب، درد در ساق پا، حالت تهوع، سردرد و سایر علائم مسمومیت همراه است. با شکل دیسیدروتیک، اغلب آلرژی به قارچ ها رخ می دهد - اگزمای قارچی. با بثورات در مناطقی از بدن که به قارچ آلوده نیستند، به عنوان مثال، روی دست ها همراه است.

نسخه پاک شده معمولاً مورد توجه قرار نمی گیرد. با لایه برداری جزئی پوست بین انگشتان بزرگ و اشاره و/یا حلقه و کوچک روی پا همراه است. خارش ندارد.

علائم میکوز پا

انواع مختلف میکوز پا می تواند بیماری مستقل باشد یا به عنوان بخشی از عفونت قارچی عمومی بدن رخ دهد. گاهی اوقات علامت "دو پا - یک دست" با درگیری این اندام ها رخ می دهد. اونیکومیکوزیس، تخریب قارچی ناخن، ممکن است رخ دهد. گاهی اوقات چین های اینگوینال به طور همزمان تحت تأثیر قرار می گیرند.

علائم اصلی و درمان میکوز پا در عکس ارائه شده است:

لایه برداری پوست

پوست خشک و ترک خورده

حباب و فرسایش

تشخیص

یک متخصص پوست با تجربه می تواند در اولین معاینه انواع مختلف قارچ پا را تشخیص دهد. با این حال، بررسی میکروسکوپی برای تایید تشخیص ضروری است. برای آن، از پوسته های ضایعه استفاده می شود، با یک کاردک خراشیده می شود و با محلول قلیایی درمان می شود. ماده به دست آمده زیر میکروسکوپ بررسی می شود و عوامل بیماری زا شناسایی می شوند.

میکروسکوپ مستقیم سریع، ارزان و آسان انجام می شود، اما نمی تواند تعیین کند که کدام نوع قارچ باعث بیماری می شود. بنابراین، مواد بر روی یک محیط غذایی تلقیح می‌شوند و پس از آن یک بررسی فرهنگی از مواد حاصل انجام می‌شود. با این حال، کشت قارچ پس از تشخیص آن در زیر میکروسکوپ تنها در 20 تا 6٪ موارد امکان پذیر است.

انواع درمان میکوز پا

داروهای درمان بیماری های قارچی باید توسط متخصص پوست تجویز شود. معمولاً درمان میکوز پا با استفاده از وسایل خارجی انجام می شود.

یکی از داروهای موثر برای این بیماری کلوتریمازول است. در فروشگاه ما می توانید آن را با هزینه کم خریداری کنید. دارویی به شکل لوسیون، کلوتریمازول برای ناخن و پوست، از تکثیر قارچ ها در ضخامت لایه شاخی اپیتلیوم سرکوب می کند. اگر چین‌های بین انگشتی تحت تأثیر قرار گرفته باشند، لوسیون هر روز روی پوست تمیز و خشک پا به مدت یک هفته و در صورت لزوم بیشتر استفاده می‌شود.

در صورت کراتینه شدن شدید و ترک خوردن پوست ابتدا لازم است رسوبات مرده پوست از بین برود. این امر مستلزم استفاده از داروهای لایه بردار است. به عنوان مثال، پماد سالیسیلیک، کرم های حاوی اسید لاکتیک یا اوره تجویز می شود. پس از از بین بردن رسوبات شاخی، لوسیون 1 تا 2 بار در روز استفاده می شود.

در نوع دیسیدروتیک، اولین قدم کاهش گریه است. برای این کار از لوسیون هایی با تانن یا اسید بوریک استفاده می شود. در موارد شدید، گلوکوکورتیکوئیدها به درمان اضافه می شود. سپس طبق رژیم معمول از لوسیون کلوتریمازول استفاده کنید.

اگر پا ساییده شده است، آن را با لوسیون یک بار در روز به مدت 7-10 روز درمان کنید، اما مدت دوره فردی است و توسط پزشک تعیین می شود.

درمان سیستمیک

پای ورزشکاران طولانی مدت یا مکرر ممکن است به داروهای ضد قارچ خوراکی نیاز داشته باشد. آنها از دستگاه گوارش به جریان خون و سپس به پوست می روند و در آنجا قارچ ها را از بین می برند. سه داروی اصلی استفاده می شود:

• فلوکونازول؛
• ایتراکونازول؛
• تربینافین

مدت زمان مصرف این داروها حداقل یک ماه است. قیمت آنها بسیار بالا است. بنابراین، پیشگیری از میکوز پا همیشه آسان‌تر و سودمندتر از درمان آن است.

اگر قارچ نه تنها پوست، بلکه ناخن ها را نیز درگیر کرده باشد، داروهای سیستمیک اغلب تجویز می شوند. در این حالت، داروها در قسمت در حال رشد صفحه ناخن جمع می شوند و ناخن سالم به تدریج دوباره رشد می کند. برای بهبود اثر، ناخن را می توان به طور کامل با جراحی برداشت، پس از آن بدون قارچ ترمیم می شود.

ترکیبی از برداشتن ناخن و درمان سیستمیک و موضعی ضد قارچی اغلب در بیماران مسن ضروری است. در این گروه از بیماران، ناخن ها اغلب به کندی رشد می کنند، گردش خون در پا مختل می شود، بنابراین برای رسیدن به اثر، دوز زیادی از داروها و یک دوره طولانی درمان لازم است.

درمان با داروهای مردمی

فقط استفاده از دستور العمل های طب سنتی کمکی به خلاص شدن از شر قارچ نمی کند. با این حال، چنین افزودنی به درمان معمولی دوره درمان را کوتاه می کند و بهبودی را تسریع می کند.

مفید است که هر روز عصر به مدت 10 دقیقه حمام گرم پا بگیرید، سپس پاهای خود را با حوله به خصوص بین انگشتان پا کاملاً بکشید و از لوسیون دارویی کلوتریمازول برای ناخن و پوست استفاده کنید. مواد مفید حمام که التهاب را تسکین می دهد و خارش را کاهش می دهد:

• گیاه celandine و مخمر سنت جان;
• ریشه بیدمشک؛
• علف افسنطین؛
• برگ های اکالیپتوس؛
• سوزن صنوبر؛
• تفاله های تازه از قهوه آسیاب شده دم کرده؛
• نمک؛
• مخلوطی از صابون رنده شده، جوش شیرین، پرمنگنات پتاسیم و پودر خردل.

نواحی آسیب دیده را می توان با قطران توس یا پماد تهیه شده از 100 گرم کره مخلوط شده با یک سر له شده سیر چرب کرد. بره موم که می توان آن را به ناخن های دردناک پانسمان کرد نیز مفید است.

تهیه کمپرس از داروهای طبیعی مفید است. ابتدا به مدت 1 تا 2 ساعت و در صورت تحمل یک شبه می گذارند. از مواد زیر استفاده می شود:

• پالپ کدو تنبل؛
• دانه های تربچه سیاه خرد شده؛
• نعناع، ​​آسیاب شده با نمک؛
• برگ های باباآدم یا روون، کمی با وردنه نرم می شوند.

روغن کاری مناطق آسیب دیده با آب برخی از گیاهان و سایر داروهای طبیعی موثر است:

• محلول الکل بره موم؛
• آب پیاز یا سیر؛
• آب سلندین؛
• روغن درخت چای.

پیشگیری از بیماری

برای جلوگیری از میکوز یا جلوگیری از عود آن، پیشگیری ساده اما ثابت مورد نیاز است:

• در تابستان کفش های تنفسی ساخته شده از مواد طبیعی بپوشید.
• هنگام بازدید از استخرها، حمام ها، دوش های عمومی، دمپایی لاستیکی فردی بپوشید.
• مثلاً هنگام ملاقات، کفش های شخص دیگری را نپوشید.
• فقط از وسایل بهداشتی خود استفاده کنید - قیچی، سنگ پا، سوهان ناخن.

برای جلوگیری از عفونت مجدد، کفی و سطوح داخلی کفش باید مرتباً با مواد ضدعفونی کننده درمان شود. یک دستور عامیانه معروف محلولی از جوهر سرکه است، اما بوی تند و ناخوشایندی دارد.

پزشکان استفاده از داروی Mikospray را توصیه می کنند که نه تنها دارای اثر ضد قارچی است بلکه اثر ضد باکتریایی نیز دارد. مایکواسپری نه تنها برای درمان کفش، بلکه برای استفاده از پاها قبل از بازدید از مکان های عمومی برای محافظت از پاها نیز عالی است.

ساکنان مسکو و مناطق می توانند داروهای درمان قارچ پا و پیشگیری از آن را در فروشگاه آنلاین ما خریداری کنند. آنها اثربخشی و ایمنی را ثابت کرده اند. استفاده از آنها برای تمام افرادی که نمی خواهند به قارچ پا مبتلا شوند یا به سرعت از شر آن خلاص شوند توصیه می شود.

تشخیص دقیق مایکوزهای مهاجمآسان نیست. این نه تنها با مشکلات در به دست آوردن کشت قارچ، بلکه در تفسیر نتایج تحقیقات نیز توضیح داده می شود، زیرا قارچ ها، اعم از مخمری و رشته ای، می توانند غشاهای مخاطی را مستعمره کرده و نمونه های مورد مطالعه را آلوده کنند. در این راستا، تشخیص قارچ‌های مهاجم مبتنی بر رویکردی یکپارچه است که نه تنها نتایج مطالعات قارچ‌شناختی (فرهنگی) و سرولوژیکی (تعیین آنتی‌ژن قارچی)، بلکه علائم بالینی عفونت قارچی، داده‌های روش‌های تحقیقاتی کمکی (رایانه‌ای) را شامل می‌شود. یا تصویربرداری رزونانس مغناطیسی، سونوگرافی).

گروه همکاری اروپا و آمریکا برای مطالعه مایکوزهای مهاجممعیارهایی برای تشخیص مایکوزهای مهاجم در بیماران دچار نقص ایمنی ایجاد شده است. آنها در سال 2001 در کنفرانس بین المللی ضد میکروبی ها و شیمی درمانی (ICAAC، شیکاگو) و در سال 2002 به صورت چاپی ارائه شدند. معیارهایی برای قارچ های تهاجمی اثبات شده، محتمل و احتمالی تعریف شده است که برای استفاده در مطالعات بالینی و اپیدمیولوژیک توصیه می شود.

قارچ های تهاجمی اثبات شده ناشی از قارچ های رشته ایتشخیص میسلیوم قارچی در بیوپسی یا آسپیراسیون در طی بررسی بافت شناسی یا سیتولوژی یا جداسازی کشت از نمونه های به دست آمده در شرایط آسپتیک از یک ضایعه استریل معمولی که بر اساس نتایج مطالعات بالینی و رادیولوژیکی با عفونت همراه است. به استثنای مطالعات ادرار و غشاهای مخاطی.

میکوز تهاجمی اثبات شده ناشی از قارچ های مخمرتشخیص سلول‌های مخمر (قارچ‌های جنس کاندیدا می‌توانند کاذب یا میسلیوم واقعی را تشکیل دهند) در بیوپسی یا آسپیراسیون، به استثنای نمونه‌هایی از غشاهای مخاطی، یا جداسازی کشت از نمونه‌های به‌دست‌آمده در شرایط آسپتیک از یک ضایعه استریل معمولی، که با توجه به به نتایج معاینه بالینی و رادیولوژیک مرتبط با عفونت، به استثنای ادرار، نمونه‌هایی از سینوس‌ها و غشاهای مخاطی، یا تشخیص با میکروسکوپ و رنگ‌آمیزی اختصاصی (در یک قطره جوهر هندی، رنگ موسیکارمین) سلول‌های مخمر یا آنتی ژن مثبت Cryptococcus spp. در مایع مغزی نخاعی

قارچی ناشی از قارچ های رشته ای: جداسازی کشت خون قارچ ها به استثنای گونه های Aspergillus. و Penicillium spp.، از جمله Penicillium marneffei، در ترکیب با علائم بالینی یک فرآیند عفونی سازگار با پاتوژن جدا شده.

قارچی ناشی از قارچ های مخمری: جداسازی کشت خون کاندیدا یا سایر قارچ های مخمری از بیماران با علائم بالینی عفونت مرتبط با این پاتوژن.

مجموعه ای از مطالعات تشخیصی برای قارچ های مهاجم

بیومتریال تحت مطالعه	نشانه ها، رسانه های مورد استفاده، معنی
خون	نشانه ها: تب مداوم (4-5 روز یا بیشتر) در طول درمان با آنتی بیوتیک های وسیع الطیف. دومین "موج" تب در طول درمان با آنتی بیوتیک جمع آوری خون از ورید در ویال های باکتری های هوازی* یا در یک محیط انتخابی برای قارچ، تکرار شود (2-3 بار در روز با فاصله زمانی 1 ساعت) اهمیت تشخیصی: جداسازی قارچ های مخمری، تفسیر دقیق هنگام جداسازی قارچ های رشته ای، به استثنای Fusarium spp.
کاتتر وریدی	نشانه ها: جداسازی قارچ های مخمر از خون کاتتر ورید مرکزی یا محیطی در تمام موارد جداسازی مخمر از خون خارج می شود برای تحقیقات قارچ شناسی از بخش دیستال کاتتر به طول 6-5 سانتی متر که به روش آسپتیک برداشته شده است استفاده می شود که این مطالعه به صورت نیمه کمی (روش ماکی) یا به روش کمی بر روی محیط کشت سابورو انجام می شود. اهمیت تشخیصی: جداسازی قارچ های مخمری در یک مطالعه نیمه کمی 15 CFU یا بیشتر، در یک مطالعه کمی - 103 CFU/ml یا بیشتر برای تایید تشخیص عفونت مرتبط با کاتتر یا عفونت کاتتر
ترشحات دستگاه تنفسی فوقانی، خلط، شستشو از نای، برونش ها، مایع لاواژ برونکوآلوئولار	نشانه ها: سوء ظن مایکوزهای ناشی از قارچ های رشته ای یا کریپتوکوکوس نئوفورمانس؛ تب طولانی مدت در طول درمان با آنتی بیوتیک وسیع الطیف و نوتروپنی میکروسکوپ نمونه ها با کالکوفلور سفید (تشخیص میسلیوم یا کاذب). کاشت در محیط سابورو. تعیین آنتی ژن آسپرژیلوس در مایع لاواژ برونکوآلوئولار در حضور ضایعات در ریه مشخصه آسپرژیلوزیس مهاجم اهمیت تشخیصی: جداسازی قارچ های رشته ای یا کریپتوکوکوس نئوفرمانس
مایع مغزی نخاعی	نشانه ها: علائم مننژیت؛ تشخیص ضایعه (ها) در مغز با استفاده از توموگرافی کامپیوتری یا تصویربرداری رزونانس مغناطیسی. علائم "مغزی" ناشی از تب و نوتروپنی میکروسکوپ با کالکوفلور سفید، در یک قطره جوهر. تعیین آنتی ژن Aspergillus، Cryptococcus. کاشت در چهارشنبه Sabouraud اهمیت تشخیصی: تشخیص قارچ، مخمر و رشته ای؛ آنتی ژن مثبت
بیوپسی، آسپیراسیون، مایع صفاقی، مایع جنب	نشانه ها: علائم بالینی و/یا رادیولوژیکی قارچ تهاجمی؛ تب در طول درمان با آنتی بیوتیک های طیف گسترده. میکروسکوپ با کالکوفلور سفید، کشت بر روی محیط Sabouraud's اهمیت تشخیصی: تشخیص قارچ، مخمر و رشته ای

* فرکانس جداسازی قارچ از خون زمانی که خون اولیه به هر دو ویال با محیط کشت باکتریایی و با محیط قارچ انتخابی کشیده شد، یکسان بود. این مطالعه با استفاده از یک آنالایزر باکتری شناسی VASTES 9240 انجام شد.

مایکوز تهاجمی احتمالیبر اساس ترکیبی از معیارهای زیر تشخیص داده می شود:
یک نشانه از دسته معیارهای میکروبیولوژیکی؛
یک علامت از دسته "قابل توجه" یا دو علامت از گروه علائم بالینی "کمتر قابل توجه" فرآیند عفونی.

مایکوز تهاجمی احتمالیبر اساس ترکیبی از معیارهای زیر تشخیص داده می شود:
وجود حداقل یک عامل خطر که باعث ایجاد قارچ تهاجمی می شود.
یک علامت از دسته معیارهای میکروبیولوژیکی یا یک علامت از دسته علائم بالینی "قابل توجه" (دو مورد از گروه "کمتر قابل توجه") علائم بالینی فرآیند عفونی.

مفهوم " میکوز تهاجمی احتمالی» استفاده از آن در کارآزمایی های بالینی که اثربخشی داروهای ضد قارچ را مطالعه می کنند، توصیه نمی شود. شما می توانید این اصطلاح را هنگام تجزیه و تحلیل درمان تجربی ضد قارچی، مطالعات اپیدمیولوژیک و مطالعه فارماکونومیک استفاده کنید.

در تحقیقات قارچ شناسیآسپیراسیون یا بیوپسی استریل نه تنها جداسازی کشت های قارچی، بلکه تشخیص میسلیوم یا سودومایسلیوم توسط میکروسکوپ را نیز در نظر می گیرد. در آماده‌سازی‌های بافت‌شناسی، تمایز آسپرژیلوس از Fusarium spp، Sceclosporium apiospermum و برخی قارچ‌های رشته‌ای دیگر دشوار است. برای تشخیص افتراقی، باید یک مطالعه ایمونوهیستوشیمی با آنتی بادی برای آسپرژیلوس انجام شود.

جداسازی قارچ های مخمریاز خون در حداقل یک مطالعه متعلق به رده مایکوز تهاجمی "اثبات شده" است و یک نشانه مطلق برای تجویز داروهای ضد قارچ سیستمیک در بیماران مبتلا به نوتروپنی است. فراوانی تشخیص قارچ های مخمر از خون کم است، حتی با کاندیدیازیس منتشر 35-50٪ است.
انجام دادن کشت خون مکرراحتمال به دست آوردن نتایج مثبت را افزایش می دهد.

دیگر تفسیردر صورت شناسایی قارچ های رشته ای در خون نتیجه می دهد. فراوانی بالای جداسازی قارچ‌های رشته‌ای مشخصه Fusarium spp است. و به 40-60 درصد می رسد. آسپرژیلوس بسیار نادر تشخیص داده می شود، در بیشتر موارد به عنوان آلودگی در نظر گرفته می شود، به استثنای آسپرژیلوس ترئوس.

انتخاب آسپرژیلوس ترئوساز خون بیماران مبتلا به هموبلاستوز ممکن است نشان دهنده آسپرژیلمی واقعی باشد و در صورت وجود علائم بالینی عفونت، مبنای تجویز داروهای ضد قارچ است.

معیارهای مایکوز تهاجمی

فهرست مطالب	شاخص
عوامل ایجاد کننده بروز مایکوزیس مهاجم (ماکروارگانیسم)	نوتروپنی (< 0,5*109/л в течение 10 дней) تب مداوم برای بیش از 96 ساعت در طول درمان با آنتی بیوتیک وسیع الطیف دمای بدن بالاتر از 38 درجه سانتیگراد یا کمتر از 36 درجه سانتیگراد و هر یک از علائم مستعد کننده زیر: نوتروپنی طولانی مدت (بیش از 10 روز) در 60 روز گذشته، درمان شدید سرکوب کننده سیستم ایمنی در 30 روز گذشته، قارچ تهاجمی اثبات شده یا احتمالی در قبلی نوتروپنی دوره یا ایدز وجود علائم GVHD، عمدتاً موارد دوره شدید (درجه II) یا دوره گسترده بیماری مزمن استفاده طولانی مدت (بیش از 3 هفته) از گلوکوکورتیکوئیدها در 60 روز گذشته
علائم میکروبیولوژیکی	جداسازی کشت قارچ های رشته ای (شامل گونه های Aspergillus، Fusaruim، Sceclosporium spp. و zygomycetes) و Cryptococcus neqformans از خلط یا مایع لاواژ برونکوآلوئولار نتایج مثبت معاینه فرهنگی یا سیتولوژیک (میکروسکوپ مستقیم) برای تشخیص قارچ های رشته ای از آسپیراسیون سینوس های پارانازال تشخیص قارچ های رشته ای یا کریپتوکوکوس نئوفورمانس با سیتولوژی/میکروسکوپ مستقیم از خلط یا مایع لاواژ برونکوآلوئولار آنتی ژن آسپرژیلوس مثبت در مایع لاواژ برونکوآلوئولار، مایع مغزی نخاعی و نمونه خون (حداقل دو مورد) آنتی ژن کریپتوکوک مثبت در نمونه های خون تشخیص عناصر قارچی با بررسی سیتولوژیک یا میکروسکوپ مستقیم در نمونه‌های مایعات استریل معمولی (به عنوان مثال، Cryptococcus spp. در مایع مغزی نخاعی) دو نتیجه مثبت از مطالعات در مورد تشخیص کشت مخمر در ادرار در غیاب سوند ادراری کریستال های کاندیدا در ادرار بدون کاتتر ادراری جداسازی گونه های کاندیدا. از کشت خون
علائم بالینی دستگاه تنفسی تحتانی	باید با محلی که از آن نمونه ها برای تحقیقات میکروبیولوژیکی گرفته می شود مرتبط باشد هر یک از انواع زیر ارتشاح ریوی جدید بر اساس CT: علامت هاله، علامت هلال، حفره با مناطق تحکیم * علائم عفونت دستگاه تنفسی تحتانی (سرفه، درد قفسه سینه، هموپتیزی، تنگی نفس)، مالش اصطکاک جنب، هرگونه نفوذ جدید که در علائم با اهمیت بالا لحاظ نشده است. افیوژن پلور
دستگاه تنفسی فوقانی علائم با اهمیت بالا نشانه هایی با اهمیت کمتر	علائم رادیولوژیک عفونت تهاجمی در سینوس های بینی (فرسایش دیواره یا گسترش عفونت به ساختارهای مجاور، تخریب گسترده استخوان های جمجمه) آبریزش بینی، احتقان بینی، زخم بینی، اپیستاکسی، ادم اطراف چشم، درد در فک بالا، زخم سیاه نکروزه یا سوراخ شدن کام سخت
سیستم عصبی مرکزی علائم با اهمیت بالا نشانه هایی با اهمیت کمتر	علائم رادیولوژیک مشکوک به عفونت CNS (ماستوئیدیت یا سایر فوکوس پارامننژیال، آمپیم خارج دورال، ضایعات متعدد در ماده مغز یا نخاع) علائم و نشانه های عصبی کانونی، از جمله تشنج کانونی، همی پارزی؛ اختلالات هوشیاری، علائم مننژ، اختلال در ترکیب بیوشیمیایی مایع مغزی نخاعی و ترکیب سلولی آن (در غیاب سایر عوامل بیماری زا، بر اساس کشت و میکروسکوپ، در غیاب سلول های تومور)

*در صورت عدم وجود عفونت ناشی از میکروارگانیسم‌هایی که می‌توانند تصویر رادیولوژیکی مشابهی ایجاد کنند، از جمله ایجاد حفره‌ها (Mycobacterium spp.، Legionella spp.، Nocardia spp.).

در تشخیص در خونیا سایر سوبستراهای زیستی استریل قارچ های مخمری، شناسایی گونه ها و تعیین حساسیت به داروهای ضد قارچ ضروری است؛ هنگام جداسازی قارچ های رشته ای (کپک)، فقط شناسایی گونه ها، حساسیت مشخص نمی شود.

در بالینی تمرینحساسیت قارچ های رشته ای به دلیل استانداردهای ناقص برای تعیین حساسیت این گونه قارچ ها به ضد قارچ ها مورد مطالعه قرار نگرفته است. علاوه بر این، تنها یک مطالعه ارتباط بین حساسیت گونه های Aspergillus را نشان داد. و نتایج درمان آسپرژیلوزیس مهاجم در بیماران مبتلا به بدخیمی های خونی. هیچ یک از مطالعات بعدی نتایج مشابهی پیدا نکرد.

اخیراً گزارش های جداگانه ای در مورد ایجاد مقاومت اکتسابی قارچ A.fumigatus به ایتراکونازول و وریکونازول ظاهر شده است.

شناسایی قارچ به گونهبه ویژه آنهایی که از جایگاه های استریل به دست می آیند، در درجه اول برای انتخاب یک ضد قارچ و انجام درمان ضد قارچی کافی ضروری هستند. بنابراین، Candida krusei به فلوکونازول مقاوم است و نسبت به سایر گونه های مخمر نسبت به آمفوتریسین B حساسیت کمتری دارد. Aspergillus terreus، Scedosporium apiospermum (Pseudallescheria boydii)، Trichosporon beigelii، Scopulariopsis spp. مقاوم به آمفوتریسین B؛ موکورال ها به ایتراکونازول مقاوم هستند، وریکونازول، کاندیدا گلابراتا حساسیت وابسته به دوز به فلوکونازول نشان می دهد و هنگامی که این نوع قارچ جدا می شود، حتی سویه های حساس، باید دوز فلوکونازول را افزایش داد (بزرگسالان به جای 40 میلی گرم 800 میلی گرم تجویز می شود). Candida lusitaniae به آمفوتریسین B مقاوم است.

شناسایی قارچ به گونههمچنین برای انجام تجزیه و تحلیل اپیدمیولوژیک در بیمارستان مهم است - شناسایی عوامل ایجاد کننده شیوع عفونت و در صورت امکان منبع عفونت. شیوع عفونت ناشی از قارچ های کمیاب مانند C. lusitaniae، C. krusei، C. lipolytica شرح داده شده است.

مستقر شناسایی گونه های قارچمیکوز تهاجمی یا کلونیزاسیون قارچی غشاهای مخاطی را می توان فرض کرد. به عنوان مثال، آسپرژیلوس نایجر به طور قابل توجهی کمتر از آسپرژیلوس فومیگاتوس باعث آسپرژیلوزیس مهاجم در بیماران مبتلا به لوسمی حاد می شود. جداسازی آسپرژیلوس نایجر از مایع لاواژ برونکوآلوئولار اغلب به عنوان کلونیزاسیون دستگاه تنفسی و از خلط به عنوان آلودگی هوا در نظر گرفته می شود و در تأیید تشخیص آسپرژیلوز مهاجم نیاز به تحقیقات بیشتری دارد.

مستقر ترشحات قارچ های رشته ایاز خلط، مایع برونش آلوئولار و آسپیراسیون سینوس‌های پارانازال، تنها می‌توان میکوز تهاجمی را فرض کرد، بدون اینکه آن را در رده «اثبات‌شده» قرار داد. با این حال، تشخیص آسپرژیلوس در خلط، به ویژه آسپرژیلوس فومیگاتوس یا آسپرژیلوس فلاووس، در بیماران نوتروپنیک دریافت کننده مغز استخوان آلوژنیک باید همیشه مورد توجه قرار گیرد. این امر مستلزم بررسی مجدد قارچ شناسی و توموگرافی کامپیوتری ریه است. بنابراین، با نوتروپنی، احتمال تشخیص آسپرژیلوز تهاجمی در مورد کشت مثبت Aspergillus spp وجود دارد. در خلط 80٪ است.

انتخاب Cryptococcus neoformansدر بیماران دچار نقص ایمنی از دستگاه تنفسی (شستشو، لاواژ) از نظر تشخیصی مهم است. اگر شناسایی قارچ‌های مخمری از مایعات به‌دست‌آمده از دستگاه تنفسی (شستشوی نای، برونش، لاواژ برونکوآلوئولار) بیماران مبتلا به نقص ایمنی نیازی به تحقیقات نداشته باشد، غربالگری برای شناسایی کریپتوکوکوس نئوفورمانس از این نمونه‌ها ضروری است.

تشخیص کاندیدا در ادراردر بیماران مبتلا به نوتروپنی و تب، معمولاً تظاهرات عفونت کاندیدیایی منتشر در نظر گرفته می شود.

به موقع تشخیصیتهاجمی با موفقیت از یک آزمایش تجاری برای تشخیص گردش یک آنتی ژن خاص Aspergillus spp استفاده می کند. galactomann (جزء محلول در آب پلی ساکارید دیواره سلولی قارچ).

گالاکتومانمی توان با دو روش تعیین کرد: روش آگلوتیناسیون لاتکس (Pastorex Aspergillus، BioRAD) و روش ایمونواسی آنزیمی (Platelia Aspergillus، BioRAD).

مزیت - فایده - سود - منفعت روش ایمونواسی آنزیمیآستانه حساسیت کمتری برای تعیین سطح گالاکتومان در خون - 1 نانوگرم در میلی لیتر یا کمتر و با استفاده از آگلوتیناسیون لاتکس - 15 نانوگرم در میلی لیتر است. تعیین گالاکتومان در خون (حداقل 2 نمونه)، مایع مغزی نخاعی و شستشوی برونش آلوئولار ارزش تشخیصی دارد. حساسیت روش ایمونواسی آنزیمی حدود 90 درصد، ویژگی 90-99 درصد، در گیرندگان مغز استخوان آلوژنیک این شاخص ها کمتر و به دلیل پیشگیری به ترتیب برابر با 60-70 درصد و 80-90 درصد است. استفاده از داروهای ضد قارچ (ضد قارچ ها سطح آستانه گالاکتومان را کاهش می دهند).

در 40 درصد موارد، تشخیص galactomannدر خون جلوتر از تظاهرات آسپرژیلوز تهاجمی است که با معاینه رایانه ای ریه ها مشخص می شود و در 70٪ از علائم بالینی عفونت جلوتر است.

ارزش تشخیصی تست تشخیص آنتی ژن آسپرژیلوسدر صورتی است که مطالعه به طور مکرر انجام شود. تعیین آنتی ژن آسپرژیلوس در خون باید در طول درمان با آنتی بیوتیک های وسیع الطیف در بیماران مبتلا به نوتروپنی 2 بار در هفته در طول تب انجام شود. برای پنومونی که در طول درمان آنتی باکتریال رخ می دهد یا ادامه می یابد. هنگامی که ضایعات در بافت ریه شناسایی می شوند (توموگرافی کامپیوتری).