روش های کرم شناسی روشهای تحقیق پایه برای تک یاخته ها

ساده ترین ها به 4 کلاس تقسیم می شوند:

هنگامی که آنزیست می شود، میکروارگانیسم شکلی گرد پیدا می کند و با یک پوسته محافظ پوشیده می شود. به شکل کیست، تک یاخته ها کمتر در معرض عوامل محیطی نامطلوب قرار می گیرند.

تحقیقات ممکن است شامل موارد زیر باشد:

توجه داشته باشید:انواع مختلفی از تشخیص وجود دارد، ما انواعی را که در عمل آزمایشگاهی بالینی رایج هستند در نظر خواهیم گرفت.

انواع خصوصی تشخیص

در هر مورد خاص، دستیار آزمایشگاه وظیفه یافتن یک پاتوژن خاص را دارد، گاهی اوقات دیگران به همراه عامل اصلی پیدا می شوند.

6 گونه از این میکروارگانیسم قادر به زندگی در روده انسان وجود دارد. فقط آمیب اسهال خونی که به صورت رویشی و به صورت کیست بروز می کند اهمیت بالینی دارد.

علاوه بر این، از روش های ایمونولوژیک استفاده می شود:

• ایمونوفلورسانس غیر مستقیم؛
• آگلوتیناسیون غیر مستقیم (PHA)؛
• ایمونودیفیوژن شعاعی

توجه داشته باشید: روش‌های سرولوژیکی غیر اطلاعاتی هستند و فقط به عنوان افزودنی به روش‌های اصلی در موارد مشکوک استفاده می‌شوند.

تشخیص مژگانی (سیلیات)

شکل بیماریزای میکروارگانیسم های این جنس بالانتیدیا است. این یک میکروبی است که باعث بالانتیدازیس می شود - بیماری همراه با فرآیند زخم روده بزرگ. عامل ایجاد کننده در اسمیر بومی به شکل رویشی و کیست یافت می شود. مواد اسمیر (مدفوع و مخاط) در طی معاینه سیگموئیدوسکوپی گرفته می شود و روی محیط های مخصوص کاشته می شود.

تشخیص تاژکک ها (لیشمانیا، ژیاردیا، تریپانوزوم ها، تریکومونادها)

لیشمانیا، تریپانوزوما، ژیاردیا، تریکومونادها برای انسان خطرناک هستند.

لیشمانیا- میکروب هایی که باعث لیشمانیوز می شوند در اسمیر خون، مواد مغز استخوان، خراش های حاصل از نفوذ پوست بررسی می شوند. در برخی موارد در تشخیص لیشمانیا از کاشت روی بسترهای غذایی استفاده می شود.

تریپانوزوم ها- عوامل ایجاد کننده بیماری خواب (تریپانوزومیازیس آمریکایی / آفریقایی یا بیماری شاگاس).

نوع آفریقایی در دوره اولیه در مطالعه خون محیطی تعیین می شود. میکروب های پاتولوژیک در طول پیشرفت بیماری در مواد سوراخ های غدد لنفاوی، در مراحل پیشرفته - در مایع مغزی نخاعی یافت می شوند.

برای تشخیص تریپانوزوم ها در صورت مشکوک به بیماری شاگاس، ماده آزمایشی در زیر میکروسکوپ با بزرگنمایی کم مورد بررسی قرار می گیرد. در این مورد، اسمیر و یک قطره غلیظ از قبل رنگ آمیزی می شود.

تریکوموناس(روده ای، دهانی) با میکروسکوپ مواد گرفته شده از غشاهای مخاطی آسیب دیده شناسایی می شوند.

شناسایی اسپروزوئرها (پلاسمودیوم مالاریا، عامل کوکسیدوز و غیره)

شایع ترین و خطرناک ترین گونه برای انسان، پلاسمودیوم مالاریا است که دارای 4 نوع اصلی پاتوژن است: عامل بیماری مالاریا سه روزه، مالاریا چهار روزه، مالاریا استوایی و مالاریا بیضی شکل.

رشد جنسی پلاسمودیوم (اسپوروگونی) در پشه های آنوفل صورت می گیرد. غیرجنسی (اسکیزوگونی بافت و گلبول قرمز) - در بافت کبد و گلبول های قرمز انسان. این ویژگی های چرخه زندگی باید در هنگام تشخیص پلاسمودیوم مالاریا در نظر گرفته شود.

بنابراین، در خون یک بیمار تازه بیمار، سلول های زایای چرخه اسپوروژنی یافت می شود. اما در اوج حملات مالاریا، شیزونت ها به تعداد زیاد در خون ظاهر می شوند.

علاوه بر این، در مراحل مختلف تب مالاریا، اشکال مختلفی از پلاسمودیوم ظاهر می شود:

• در طول دوره سرما، خون با merozoites، نوعی شیزونت پر می شود.
• در اوج دما، تروفوزوئیت های حلقه ای شکل در گلبول های قرمز تجمع می یابند.
• کاهش دما با غلبه تروفوزوئیت های آمیبوئید مشخص می شود.
• در طول دوره های شرایط طبیعی، خون حاوی اشکال بالغ شیزونت است.

مطالعه عامل ایجاد کننده مالاریا (پلاسمودیوم مالاریا) به صورت اسمیر و در قطره غلیظ انجام می شود.

توجه داشته باشید:تشخیص مالاریا در مطالعه اسمیر و قطرات غلیظ خون گاهی اشتباه است. پلاکت های خون در برخی موارد ممکن است به اشتباه به عنوان پاتوژن مالاریا طبقه بندی شوند. همچنین، قطعات لکوسیت ها و سایر سلول ها گاهی اوقات پلاسمودیوم را شبیه سازی می کنند.

روشهای تحقیق پایه برای تک یاخته ها

بیایید نگاهی کوتاه به رایج ترین روش های تحقیق برای حضور تک یاخته ها بیندازیم.

تشخیص تک یاخته با استفاده از اسمیر بومی و لام رنگ آمیزی شده با محلول لوگول (در مدفوع)

این دارو از امولسیون مدفوع در محلول ایزوتونیک تهیه می شود. دو قطره کلرید سدیم و محلول لوگول روی یک اسلاید شیشه ای ریخته می شود. مواد مورد آزمایش با یک چوب چوبی به هر دو ترکیب اضافه می شود و پس از پوشاندن با شیشه، با وضوح های مختلف میکروسکوپ مشاهده می شود.

با توجه به علائم خاص، تک یاخته های یافت شده ثبت می شوند. برای دقت، 2-3 آماده سازی از یک ماده تهیه می شود. در موارد مشکوک، تجزیه و تحلیل چندین بار در طول 2-3 هفته تکرار می شود.

این روش می تواند اشکال رویشی و کیستیک را تشخیص دهد:

• لامبلیا;
• بالانتیدیا;
• آمیب اسهال خونی

همراه با اشکال بیماری زا، تک یاخته های غیر بیماری زا نیز تعیین می شوند. ناقلان سالم نیز دارای اشکال مجرای و کیستیک هستند.

مهم:تحقیقات به منظور جلوگیری از اشتباهات و اشتباهات باید به طور مکرر انجام شود.

نتیجه تشخیص تک یاخته با روش اسمیر بومی و رنگ آمیزی شده باید حاوی شرح شکل پاتوژن (نفوذ، کیست، بافت) باشد.

الزامات تحقیق:

• مواد گرفته شده برای تجزیه و تحلیل (مدفوع مایع) حداکثر 30 دقیقه پس از اجابت مزاج بررسی می شود.
• مدفوع تشکیل شده باید در عرض 2 ساعت پس از اجابت مزاج تشخیص داده شود.
• مواد نباید حاوی ناخالصی (ضدعفونی کننده ها، آب، ادرار) باشد.
• فقط از چوب های چوبی برای کار با مواد استفاده می شود ، شیشه ها به دلیل لغزش مخاط مناسب نیستند.
• چوب ها باید بلافاصله پس از استفاده سوزانده شوند.

روش حفاظتی (بررسی مدفوع) در تشخیص تک یاخته ها

این مطالعه با تثبیت تک یاخته با یک ماده نگهدارنده انجام می شود. تفاوت این روش با روش قبلی در این است که نگهدارنده ها به شما امکان می دهند دارو را برای مدت طولانی ذخیره کنید.

مواد نگهدارنده مورد استفاده:

• بارو. حاوی مواد نگهدارنده: 0.7 میلی لیتر کلرید سدیم، 5 میلی لیتر فرمالین، 12.5 میلی لیتر الکل 96 درصد، 2 گرم فنل و 100 میلی لیتر آب مقطر. ترکیب رنگ: محلول 0.01٪ تیونین (آزور).
• راه حل صفرلیف ترکیب: 1.65 گرم سولفات روی، 10 میلی لیتر فرمالین، 2.5 گرم فنل کریستالی، 5 میلی لیتر اسید استیک، 0.2 گرم متیلن بلو، 100 میلی لیتر آب. این ماده نگهدارنده در مواردی استفاده می شود که مواد باید بیش از یک ماه نگهداری شوند.

بطری های خالی با یک ماده نگهدارنده پر می شوند، مواد به نسبت 3: 1 به آنها منتقل می شود، سپس، در صورت لزوم، یک رنگ اضافه می شود. ارزیابی نتایج در مطالعه 2-3 دارو انجام می شود.

روش غنی‌سازی فرمالین-اتر (تجزیه و تحلیل حضور تک یاخته‌ها در مدفوع)

این روش تشخیصی به شما امکان می دهد کیست های تک یاخته ای را جدا و متمرکز کنید. مواد زیر برای تجزیه و تحلیل مورد نیاز است: فرمالین (10 میلی لیتر)، 0.85 گرم محلول ایزوتونیک، آب مقطر، اتر سولفوریک، محلول لوگول.

مخلوطی از مواد زیستی با مایعات ذکر شده مخلوط و سانتریفیوژ می شود. رسوب به دست آمده در پایین لوله با محلول لوگول رنگ آمیزی شده و از نظر وجود کیست و اشکال رویشی بررسی می شود.

روش تشخیص لیشمانیا (اسمیر مغز استخوان)

برای تشخیص لیشمانیوز، از معرف ها استفاده می شود: مخلوطی از نیکیفوروف (اتر سولفوریک و الکل اتیلیک)، بافر فسفات، آزور-ائوزین به گفته رومانوفسکی.

ماده مغز استخوان پس از آماده سازی خاص با دقت زیادی روی یک لام شیشه ای قرار می گیرد. یک میکروسکوپ با سیستم غوطه وری استفاده می شود.

در دوره حاد بیماری، تعداد زیادی لیشمانیا در نقطه نقطه یافت می شود.

توجه داشته باشید:گاهی اوقات سلول های خونی می توانند شبیه لیشمانیا درمان شده باشند، بنابراین برای تکنسین آزمایشگاه بسیار مهم است که مراقب باشد و تجربه کافی برای مطالعه مستقل داشته باشد.

روش تشخیص لیشمانیا در اسمیر از نفوذ پوست

معرف های مورد نیاز مشابه آزمایش قبلی هستند.

مواد آزمایش از محتویات سل یا زخم موجود بدست می آید. خراش دادن به ظن لیشمانیوز با چاقوی جراحی و بدون خون بسیار با احتیاط انجام می شود. سپس آماده سازی روی شیشه آماده می شود. برای صحت نتایج به دست آمده، چندین آماده سازی به طور همزمان مورد بررسی قرار می گیرند.

در صورت وجود بیماری، از بین ماکروفاژها، فیبروبلاست ها و سلول های لنفوئیدی موجود در ماده آزمایش، لیشمانیا نیز مشخص می شود.

روش جداسازی کشت خالص لیشمانیا حاصل از تراشیدن بافت های پاتولوژیک

با این روش تشخیص، ساده‌ترین خراش‌های بافت در یک محیط غذایی مخصوص قرار می‌گیرد که لیشمانیا به طور فعال در آن تکثیر می‌کند.

قبل از انجام خراش دادن، پوست با دقت با الکل درمان می شود، سپس برشی در غده ایجاد می شود، که محتویات آن برداشته می شود و با محیط در لوله آزمایش قرار می گیرد. این ماده چندین بار گرفته می شود و پس از آن در لوله های آزمایش مختلف قرار می گیرد. سپس در یک ترموستات در دمای 22-24 درجه، کشت صورت می گیرد. نتایج زیر میکروسکوپ ارزیابی می شود. این روش زمانی استفاده می‌شود که سایر روش‌های ارزان‌تر و سریع‌تر برای تشخیص تک یاخته‌ها بی‌اثر باشند.

با تماشای یک بررسی ویدیویی می توانید ببینید که چگونه آزمایش های حضور تک یاخته ها در عمل با یک قطره خون رمزگشایی می شوند:

لوتین الکساندر، ستون نویس پزشکی

مدفوع به دو صورت بررسی می شود:

1. ماکروسکوپی - کرم ها، سر، بخش ها، تکه های استروبیلی را پیدا کنید. بخش‌های کوچکی از مدفوع در یک حمام مسطح یا ظرف پتری با آب مخلوط می‌شود و در صورت لزوم با استفاده از ذره‌بین در نور مناسب در پس زمینه‌ای تاریک مشاهده می‌شود. تمام تشکل های مشکوک با موچین به یک فنجان آب دیگر یا روی یک اسلاید شیشه ای در یک قطره گلیسیرین رقیق منتقل می شوند.

با روش حمایت کردنقسمت مورد بررسی از مدفوع با آب در یک استوانه شیشه ای هم زده می شود، پس از ته نشین شدن، لایه بالایی آب تخلیه می شود. این کار چندین بار تکرار می شود. هنگامی که مایع شفاف شد، تخلیه می شود و رسوب در یک ظرف پتری مشاهده می شود.

2. میکروسکوپی - برای تشخیص تخم ها و لاروهای کرم ها. روش های تحقیق زیادی وجود دارد.

یک). اسمیر بومی - رایج ترین و از نظر فنی در دسترس ترین روش تحقیق. شما می توانید تخم ها و لاروهای همه کرم ها را پیدا کنید. با این حال، با تعداد کمی تخم، آنها همیشه پیدا نمی شوند. بنابراین از روش غنی سازی استفاده می شود.

یک). روش فولبرگ - این یک روش غنی سازی است که بر اساس ظهور تخم های کرمی در محلول اشباع NaCl (1.2 - چگالی؛ 400 گرم NaCl در هر 1 لیتر آب؛ 40٪ محلول NaCl) است. روش موثرتر از اسمیر بومی است. 2-5 گرم مدفوع را در ظروف شیشه ای قرار داده و با محلول NaCl پر می کنند، هم می زنند و پس از 45 دقیقه فیلم تشکیل شده با یک حلقه فلزی جدا می شود، یک قطره گلیسیرین روی یک لام شیشه ای قرار می گیرد. زیر میکروسکوپ بررسی کنید. عیب روش ظهور تاخیری تخم های کرم های مختلف، کرم نواری کوتوله - بعد از 15-20 دقیقه، کرم گرد - 1.5 ساعت، کرم شلاقی - 2-3 ساعت است.

2) روش کلانتری - همچنین یک روش غنی‌سازی است، اما از محلول اشباع NaNO 3 (چگالی 1.38) استفاده می‌شود. بیشتر تخمها شناور هستند و نیازی به بررسی رسوب نیست. عیب این است که تخم‌ها برای مدت طولانی در محلول نگه داشته می‌شوند، که منجر به این واقعیت می‌شود که برخی از تخم‌ها شروع به متورم شدن و ته نشین شدن می‌کنند و از لایه سطحی ناپدید می‌شوند.

3. روش گوریاچف - بر اساس اصل رسوب تخم، تشخیص تخم های ترماتود کوچک. محلول اشباع NaCl به عنوان محلول استفاده می شود و 3-4 میلی لیتر محلول مدفوع به دقت روی آن قرار می گیرد. بعد از 15 تا 20 ساعت، تخم های ترماتود به ته می رسند. مایع تخلیه می شود، بر روی یک لام شیشه ای و زیر میکروسکوپ رسوب می شود.

4. روش پیچش شولمان – برای تشخیص لارو کرم در مدفوع. فقط مدفوع تازه جدا شده را بررسی کنید. 2-3 گرم در یک ظرف شیشه ای قرار داده و 5 برابر مقدار آب ریخته می شود، به سرعت با چوب، بدون دست زدن به دیواره های شیشه هم می زنیم - 20-30 دقیقه، سپس چوب را به سرعت جدا می کنیم و یک قطره مایع در انتها به یک اسلاید شیشه ای منتقل شده و میکروسکوپ می شود.

5. روش برمن - بر اساس توانایی لاروهای کرم در مهاجرت به سمت گرما و شناسایی آنها در مدفوع است.

6. روش هارادا و موری (روش رشد لارو) و برای آزمایش آنکیلوستومیازیس توصیه می شود. این روش مبتنی بر این واقعیت است که در گرما و روی کاغذ فیلتر شده مرطوب، تخم‌های کرم قلابدار به لاروهای فیلاری فرم تبدیل می‌شوند که به راحتی قابل تشخیص هستند. 15 گرم مدفوع به وسط یک نوار کاغذ صاف شده اعمال می شود، کاغذ با مدفوع در یک شیشه قرار می گیرد، به طوری که انتهای پایین آن در آب غوطه ور می شود و انتهای بالایی با چوب پنبه ثابت می شود. شیشه به مدت 5-6 روز در ترموستات با دمای 28 درجه سانتیگراد نگهداری می شود. لاروهای فیلاریفرم در این مدت رشد کرده و به داخل آب فرود می آیند. مایع زیر ذره بین بررسی می شود. اگر تشخیص آن مشکل باشد، مایع پس از کشتن لارو با حرارت دادن به 60 سانتریفیوژ می شود. تکنسین آزمایشگاه باید دستکش بپوشد.

7. روش های انتروبیازیس - شناسایی تخم کرم و کرم گاو.

الف) تراشیدن از چین های دور مقعدی - با یک سواب پنبه ای محکم روی یک چوب چوبی پیچیده و با محلول گلیسیرین 50٪ مرطوب شده است. در آزمایشگاه، سواب با 1-2 قطره از محلول آبی 50٪ گلیسیرین شسته می شود.

ب) روش کنه چسبنده (روش گراهام)

نوار چسب روی چین‌های پری مقعدی اعمال می‌شود، سپس با یک لایه چسبنده روی لام شیشه‌ای قرار می‌گیرد و میکروسکوپ می‌شود.

ج) سوهان زدن به کمک چوب چشم (روش رابینوویچ). برای تراشیدن پری مقعد از چوب چشم شیشه ای استفاده می شود که پهن ترین قسمت آن با چسب مخصوص پوشانده شده است که امکان نگه داشتن تخم کرم سنجاق را فراهم می کند.

معاینه خون، صفرا، خلط و عضلات

میکروسکوپ خون - لاروهای فیلاریا شناسایی می شوند.

بررسی خلط - تخم پاراگانیم، لارو کرم گرد، نکاتور، استرونژیلوئید، عناصر مثانه اکینوکوک.

معاینه ماهیچه ها - در صورت مشکوک بودن به تریکینوز، ماهیچه های بیمار یا جسد و همچنین گوشتی که گفته می شود باعث عفونت فرد شده است، بررسی می شود. برای انجام تریچینوسکوپی، عضله را به قطعات کوچک برش می دهند و در کمپرسورها قرار می دهند، این دو شیشه عریض و ضخیم هستند که ماهیچه ها را خرد می کنند و لاروهای تریکینلا به شکل کپسول یافت می شوند - روش فشرده سازی.

روش هضم - ماهیچه ها با آب معده مصنوعی (محلول اسید کلریدریک و پپسین) ریخته می شوند. ماهیچه ها هضم می شوند و لاروها به راحتی شناسایی می شوند. تعیین شدت تهاجم: تعداد لارو تا 200 در هر 1 گرم بافت عضلانی - شدت تهاجم متوسط. تا 500 - فشرده؛ بیش از 500 - تهاجم شدید.

روش های سرولوژیکی

روش های تحقیق کرم شناسی. روش‌های تشخیص کرمک بر اساس تشخیص مستقیم خود کرم‌ها یا قطعات آن‌ها و همچنین لاروها و تخم‌های کرم‌ها (روش‌هایی برای بررسی مدفوع، ادرار، صفرا و محتویات اثنی عشر، خلط، خون و بافت‌ها) به روش‌های مستقیم تقسیم می‌شوند. مواد به دست آمده با خراشیدن از ناحیه پری مقعد و فضاهای زیر زبانی) و غیرمستقیم، که تغییرات ثانویه ای را که در نتیجه فعالیت کرم ها در بدن انسان رخ می دهد را نشان می دهد (مطالعات ترکیب مورفولوژیکی خون، روش های ایمونولوژیکی برای تشخیص کرمی، مطالعات اشعه ایکس و غیره). از بین روش های مستقیم، رایج ترین آنها کوپرولوژیک است که به دو دسته ماکرو و میکروهلمینتوسکوپی تقسیم می شوند. در برخی موارد از روش های خاصی استفاده می شود.

روش های تحقیق ماکروژلمیتوسکوپیبا هدف جستجوی کرم ها یا قطعات آنها (اسکولکس، بخش ها، قسمت هایی از استروبیلا سستودها). آنها برای تشخیص آن دسته از کرم های کرمی استفاده می شوند که در آنها تخم ها با مدفوع بیمار دفع نمی شوند یا به مقدار کمی دفع می شوند و نه همیشه (به عنوان مثال، با انتروبیازیس، کرم های سوزنی در مدفوع، با تنیدوزها، بخش ها یافت می شوند).

برای تشخیص کرم های سوزنی یا بخش هایی از سستودها در مدفوع، مدفوع با چشم غیر مسلح مشاهده می شود. برای تشخیص افتراقی تنیدوز، توصیه می شود مدفوع رقیق شده با آب را در قسمت های کوچک جداگانه در کووت های عکاسی سیاه یا در ظروف پتری در پس زمینه تاریک مشاهده کنید. سازندهای بزرگ مشکوک به قطعات کرم ها در زیر ذره بین بین دو اسلاید شیشه ای بررسی می شوند. اگر طبق نشانه های بالینی، تشخیص کرم های کوچک یا سر سستود پس از درمان پیشنهاد شود، ذرات مشکوک زیر ذره بین در قطره گلیسرول و در صورت لزوم زیر میکروسکوپ بررسی می شوند.

روش های تحقیق میکروهلمینتوسکوپی(کیفی) با هدف شناسایی تخم ها و لاروهای کرم ها انجام می شود. روش اسمیر ضخیم را با صفحه پوششی سلفون مطابق کاتو اعمال کنید. ترکیب کاتو شامل 6 است میلی لیترمحلول آبی 3% مالاکیت گرین 500 میلی لیترگلیسیرین و 500 میلی لیترمحلول فنل 6 درصد بشقاب های کاتو (سلفون آبدوست برش خورده 20*40 میلی متر) در 24 غوطه ور می شوند ساعتدر مخلوط کاتو به طوری که در مجاورت یکدیگر قرار گیرند (3-5 میلی لیترمحلول کاتو برای 100 بشقاب). 100 میلی گرممدفوع روی یک لام شیشه ای اعمال می شود، مطابق با کاتو با صفحه پوششی سلفون پوشانده می شود و به سمت پایین فشرده می شود تا مدفوع روی لام شیشه ای داخل صفحه سلفون آغشته شود. اسمیر در دمای اتاق باقی می ماند تا 40-50 شفاف شود دقیقه،و سپس زیر میکروسکوپ مشاهده می شود. در فصل گرما برای جلوگیری از خشک شدن آماده سازی، یک اسفنج مرطوب روی بشقاب آماده شده قرار می دهند.

برای تشخیص کامل انواع کرم ها باید از روش اسمیر ضخیم صفحه پوشش سلفون کاتو همراه با یکی از روش های غنی سازی استفاده شود. رایج ترین آنها روش کلانتریان و روش فولبورن است.

روش کلانتریان: در فلاسک هایی با گردن پهن 100 عدد میلی لیتربا یک میله شیشه ای کاملا هم بزنید 5 جیمدفوع با افزودن تدریجی محلول اشباع نیترات سدیم (1 کیلوگرمنیترات سدیم در هر 1 لآب هنگام جوشیدن) تا لبه لیوان. ذرات بزرگی که روی سطح شناور شده اند با یک قاشق کاغذ پاک می شوند. یک اسلاید شیشه ای روی سطح محلول نمکی اعمال می شود (محلول نمکی اضافه می شود تا زمانی که مخلوط با لام شیشه ای تماس کامل پیدا کند). بعد از 20-30 دقیقهاسلاید شیشه ای برداشته می شود و فیلم زیر میکروسکوپ مشاهده می شود. در صورت عدم وجود این نمک، می توانید از محلول اشباع نمک خوراکی مطابق با Fholleborn (400) استفاده کنید. جینمک در 1 لآب جوش).

با توجه به اینکه تخمک هایی با وزن مخصوص زیاد (تخم های بارور نشده آسکاریدها، تخم های ترماتود و سستودهای بزرگ) شناور نیستند، علاوه بر بررسی لایه سطحی مایع، هنگام استفاده از روش فولبورن، مشاهده 2-4 آماده سازی از رسوب در زیر میکروسکوپ.

روش‌های تحقیق آزمایشگاهی ویژه برای انواع کرم‌ها.

برای تشخیص تکه‌های کرم‌ها، مدفوع برهنه مشاهده می‌شود، سپس با آب مخلوط می‌شود و در بخش‌های کوچک در ظرف پتری در برابر پس‌زمینه‌ای تیره بررسی می‌شود. تمام ذرات مشکوک روی یک لام شیشه ای در یک قطره آب قرار می گیرند و زیر یک ذره بین بررسی می شوند. می توانید مقدار مصرف روزانه را با اضافه کردن 5 تا 10 برابر آب در یک سیلندر قرار دهید. پس از هم زدن، ظرف را تا رسوب کامل ذرات معلق رها می کنند. لایه سطحی مایع تخلیه شده و آب تمیز ریخته می شود. رسوب شسته شده در بخش های کوچک با چشم غیر مسلح یا زیر ذره بین مشاهده می شود. روش های معاینه میکروسکوپی برای تشخیص تخم مرغ استفاده می شود.

روش اسمیر بومی. مقدار کمی مدفوع از مکان های مختلف قسمت آزمایش بر روی یک لام شیشه ای در یک قطره محلول گلیسرول 50٪، محلول کلرید سدیم ایزوتونیک یا آب تریتور می شود. مخلوط با یک ورقه پوششی پوشانده شده و زیر میکروسکوپ مشاهده می شود.

روش شناور فولبورن. یک قسمت از مدفوع با 20 قسمت از محلول کلرید سدیم اشباع (وزن مخصوص 1.18) مخلوط می شود که در بخش های کوچک اضافه می شود. ذرات درشتی که روی سطح شناور شده اند فورا حذف می شوند و مخلوط به مدت 45 دقیقه باقی می ماند. در طی این مدت، تخم های کرمی که وزن مخصوص کمتری نسبت به محلول کلرید سدیم دارند، روی سطح شناور می شوند. فیلم سطح با یک حلقه سیمی به قطر حدود 1 سانتی متر برداشته می شود و برای بررسی زیر میکروسکوپ به یک اسلاید شیشه ای منتقل می شود.

روش کلانتریان کارایی روش شناور با جایگزینی کلرید سدیم با محلول اشباع نیترات سدیم افزایش می یابد. در این مورد، مخلوط به مدت 10-15 دقیقه نگه داشته می شود.

لایه سطحی تشکیل شده پس از ته نشین شدن مخلوطی از مدفوع با محلول کلرید سدیم یا نیترات سدیم نیز می تواند با یک لام شیشه ای جدا شود. برای این منظور، شیشه ای که تا لبه آن از مخلوط مدفوع با محلول نمک پر شده است را با لام شیشه ای می پوشانند تا سطح زیرین آن با مایع تماس پیدا کند. پس از ته نشین شدن، شیشه برداشته می شود و با برگرداندن سریع سطحی که فیلم روی آن قرار دارد، زیر میکروسکوپ مشاهده می شود.

خراشیدن چین‌های اسپرینال (برای شناسایی تخم‌های کرم سنجاقی و انکوسفرهای کرم گاو) صبح قبل از ساخت توالت انجام می‌شود. یک کاردک چوبی آغشته به آب یا محلول 50 درصد گلیسیرین برای خراش دادن اطراف مقعد استفاده می شود. مواد به دست آمده به یک لام شیشه ای در یک قطره آب یا محلول گلیسرول 50 درصد منتقل می شود و زیر میکروسکوپ مشاهده می شود. کاردک را می توان با یک سواب پنبه ای مرطوب جایگزین کرد، که برای پاک کردن ناحیه پری مقعدی استفاده می شود، سپس به خوبی در آب بشویید. آب سانتریفیوژ شده و رسوب زیر میکروسکوپ بررسی می شود.

روش برمن (برای تشخیص لارو). یک توری فلزی پوشیده شده با 5-6 گرم مدفوع روی یک قیف شیشه ای که در پایه قرار داده شده است ثابت می شود. یک لوله لاستیکی با یک گیره در انتهای پایین قیف قرار می گیرد. قیف با آب گرم شده تا دمای 50 درجه پر می شود، به طوری که قسمت پایین توری با مدفوع با آب در تماس است. لاروها به طور فعال به داخل آب حرکت می کنند و در قسمت پایین لوله لاستیکی تجمع می یابند. پس از 4 ساعت، مایع داخل لوله های سانتریفیوژ پایین می آید، سانتریفیوژ می شود و رسوب زیر میکروسکوپ بررسی می شود.

تجزیه و تحلیل خلط، مخاط بینی و ترشحات واژن برای تشخیص تخم‌های پاراگونیموس فلوک ریه، لارو آسکاریس و کرم قلابدار، تخم‌های کرم سوزنی، قطعات مثانه اکینوکوک. قسمت مورد بررسی از مخاط (ترشحات) روی شیشه آغشته می شود و به صورت ماکروسکوپی روی زمینه سیاه و سفید و سپس زیر میکروسکوپ مشاهده می شود. می توانید محلول 25 درصد آنتی فرمین را به مواد آزمایش اضافه کنید، کاملا تکان دهید و 1-1.5 ساعت نگه دارید تا مخاط حل شود. مخلوط سانتریفیوژ شده و رسوب زیر میکروسکوپ بررسی می شود.

تجزیه و تحلیل شیره اثنی عشر و معده برای تشخیص تخم های فلوک کبد، کرم قلابدار، لارو Strongyloides. هر سه بخش از محتویات دوازدهه به دست آمده با سانتریفیوژ شده و رسوب زیر میکروسکوپ بررسی می شود. همچنین کاوش و.

مطالعه بافت ها برای شناسایی لارو تریکینلا، قطعات عضله بیوپسی شده با دقت به الیاف تقسیم می شوند، بین شیشه های کمپرسور (عینک های ضخیم با پیچ) فشرده می شوند و زیر میکروسکوپ با نور سایه بررسی می شوند. برای شناسایی سیستیسرک ها، ماهیچه ها با سوزن های تشریح طبقه بندی می شوند، وزیکول جدا شده از بافت اطراف تمیز می شود، بین دو لام شیشه ای فشرده می شود و زیر ذره بین بررسی می شود.

آزمایش خون (برای تشخیص لارو فیلاریا). یک قطره آویزان روی یک لغزش پوششی که با وازلین لبه شده است بررسی می شود. می توانید 0.3 میلی لیتر خون را با 10 برابر محلول 3 درصد مخلوط کنید. مخلوط سانتریفیوژ شده و رسوب زیر میکروسکوپ بررسی می شود. برای غنی‌سازی فرآورده‌ها، 3 میلی‌لیتر محلول فرمالین 2 درصد یا مقدار 5 برابر مایع متشکل از 95 میلی‌لیتر محلول فرمالین 5 درصد، 5 میلی‌لیتر اسید استیک و 2 میلی‌لیتر محلول الکل غلیظ هماتوکسیلین اضافه می‌شود. به 1 میلی لیتر خون وریدی. مخلوط سانتریفیوژ شده، رسوب با آب مقطر شسته شده و زیر میکروسکوپ بررسی می شود. برای افتراق انواع فیلاریا، اسمیرهای رنگ آمیزی شده بر اساس روش گیمسا-رومانوفسکی مورد بررسی قرار می گیرند.

روش های تشخیص ایمونولوژیک آزمایشات تشخیصی آلرژیک (آگلوتیناسیون، تثبیت کمپلمان) و آلرژی (نگاه کنید به) را با نوع مربوطه کرم کرم انجام دهید.

روش های تحقیق کرم شناسی برنج. تخم هلمینت. 1-10 - تخم کرم های گرد (نماتد): 1 - 3 - کرم های گرد (1 - تخم بارور شده ، 2 - تخم بارور شده بدون پوشش پروتئینی ، 3 - تخمک بارور نشده)؛ 4 - کرم گرد گربه; 5 - گوشتخواران کرم گرد; 5 - کرم های سوزنی؛ 7 - شلاق زدن; 8 - تومینکس; 9 - کرم قلابدار; 10 - تریکو استرونژیلید. 11-15 - تخم کرم های نواری (سستود): 11 - کرم گاو؛ 12 - کرم کوتوله; 13 - کرم نواری موش صحرایی; 14 - کرم کدو; 15 - روبان پهن. 16 - 24 - تخم های فلوک (ترماتود): 16 - ترماتود (شیستوزوم) ژاپنی؛ 17 - ترماتود (شیستوزوم) ادرار - جنسی. 18 - ترماتود (شیستوزوم) مونسون. 19 - ترماتود (parogonymus) ریوی؛ 20 - ترماتود (opisthorchis) سیبری (گربه)؛ 21 - ترماتود (کلونورکیس) چینی؛ 22 - ترماتود روده (متاگونیموس)؛ 23 - ترماتود (فاسیولا) کبد؛ 24 - ترماتود (دیکروسلیوم) نیزه ای.

یک روش موثر و راحت برای تحقیقات کرم شناسی است مطالعه یک اسمیر غلیظ بر اساس کاتو، که ماهیت آن تشخیص تخم کرم کرم در یک اسمیر غلیظ از مدفوع است که با گلیسیرین شفاف شده و با مالاکیت سبز رنگ آمیزی شده است. ترکیب مخلوط کاتو 6 میلی لیتر محلول آبی 3٪ مالاکیت سبز، 500 میلی لیتر گلیسیرین، 500 میلی لیتر محلول فنل 6٪ است. محلول پایدار است و می توان آن را در دمای اتاق نگهداری کرد. برای تهیه آماده سازی، تکه هایی از مدفوع به اندازه یک نخود روی یک اسلاید شیشه ای اعمال می شود، با یک فیلم سلفون آبدوست که در مخلوط کاتو به مدت 24 ساعت پیر شده است، پوشانده می شود و روی شیشه فشار می دهد تا مواد به طور مساوی توزیع شود. اسمیرهای شفاف شده به مدت 40-60 دقیقه به صورت میکروسکوپی بررسی می شوند. تخم‌های کرم شناسایی شده شمارش می‌شوند و وابستگی گونه‌های آنها با ویژگی‌های مورفولوژیکی تعیین می‌شود. این روش اجازه می دهد تا تخم های آسکاریس، کرم شلاقی، سستود، ترماتود، به میزان کمتری - کرم قلابدار و کرم نواری پیگمی آشکار شود.

همچنین به طور گسترده استفاده می شود روش های غنی سازی. اصل روش های فلوتاسیون معلق کردن مدفوع در محلول نمکی است که تراکم نسبی بالاتری در مقایسه با تخم کرم ها دارد و در نتیجه آنها به سطح شناور می شوند. محتویات لایه سطحی زیر میکروسکوپ بررسی می شود. به عنوان مخلوط های غنی کننده، از محلول ها استفاده می شود: نمک سفره - 400 گرم در 1 لیتر آب (چگالی نسبی مطابق با Fülleborn -1.18). نیترات سدیم - 1 کیلوگرم در 1 لیتر آب (چگالی نسبی مطابق با Kalantaryan-1.38)؛ نیترات سدیم - 900 گرم و نیترات پتاسیم - 400 گرم در 1 لیتر آب (چگالی نسبی مطابق با Brudastov و Krasnonos-1.48). جوشانده و سرد شده است.
برای تحقیق، 10-5 گرم مدفوع به لیوان یا لیوان فایانس اضافه می شود، 100-200 میلی لیتر محلول نمکی به آن اضافه می شود و کاملاً مخلوط می شود. سپس ذرات درشتی را که روی سطح آمده اند با کاردک چوبی یا اسکوپی که از کاغذ یا مقوا ساخته شده است جدا می کنند و بلافاصله یک لام شیشه ای عریض روی فیلم سطحی قرار می دهند تا محلول نمکی و لام شیشه ای در تماس کامل باشند. پس از 30-40 دقیقه از ته نشین شدن مخلوط، لام شیشه ای برداشته شده، با فیلم بالا زیر میکروسکوپ قرار می گیرد و کل سطح به دقت بررسی می شود. برای جلوگیری از خشک شدن، می توانید 2-3 قطره از محلول گلیسیرین 50٪ اضافه کنید. فیلم سطح را می توان با یک حلقه سیمی نیز جدا کرد. با افزایش چگالی نسبی محلول های نمک، کارایی روش های فلوتاسیون افزایش می یابد. با استفاده از این روش ها می توان تخم های نماتد، سستود و ترماتود را تشخیص داد.

برای تشخیص تخم مرغ در مدفوع، از روش رسوب گذاری Krasilnikov استفاده می شود.. مدفوع با محلول شوینده 1٪ (پودر لباسشویی Lotos و غیره) به نسبت 1:10 مخلوط می شود تا زمانی که یک سوسپانسیون تشکیل شود. تحت تأثیر مواد شوینده، اجزای مختلف مدفوع (پروتئین ها، چربی ها، عناصر بافتی) حل می شوند. پس از 30 دقیقه، محتویات لوله به مدت 1-2 دقیقه تکان داده می شود و پس از آن به مدت 5 دقیقه سانتریفیوژ می شوند. آماده سازی از رسوب تهیه می شود و زیر میکروسکوپ مشاهده می شود.
در شرایط مزرعه و همچنین در طی بررسی های انبوه جمعیت برای آلودگی کرمی، استفاده از روش اسمیر ضخیم کاتو راحت است. در شرایط ثابت هنگام معاینه بیماران ترجیحاً از مؤثرترین روشهای فلوتاسیون استفاده شود. هنگام استفاده از این روش ها در طول میکروسکوپ، توصیه می شود تخم های موجود در آماده سازی را بشمارید. با توجه به وزن یا حجم استانداردی که برای مطالعه مدفوع گرفته می شود (مثلاً 1 قاشق چای خوری یا قاشق غذاخوری)، و حجم ثابت محلول های نمکی، می توان به طور تقریبی درباره شدت حملات قضاوت کرد. این رکورد کمی می تواند در اثبات درمان تجویز شده و ارزیابی اثر کرم زدایی مفید باشد. علاوه بر این، سایر روش های کمی دقیق تر، به ویژه روش Stoll، می تواند برای تعیین شدت عفونت استفاده شود.

برای تشخیص تنیارینکوزیس و انتروبیازیساستفاده از روش تحقیق خراش های پری مقعد-رکتال. یک کاردک چوبی آغشته به محلول گلیسرول 50 درصد برای خراشیدن چین های پری مقعدی صبح قبل از اجابت مزاج در اطراف مقعد و پایین رکتوم استفاده می شود. ماده به‌دست‌آمده که با یک کاردک توسط لبه پوششی تمیز می‌شود، روی یک لام شیشه‌ای در قطره‌ای از محلول گلیسرول 50 درصد قرار می‌گیرد، با یک ورقه پوششی پوشانده می‌شود و زیر میکروسکوپ بررسی می‌شود. همچنین می‌توانید نواری از نوار سلولزی را بررسی کنید که ابتدا با یک سمت چسب به چین‌های پرنال فشار داده می‌شود، سپس روی یک لام شیشه‌ای قرار می‌گیرد و میکروسکوپ می‌شود.

شناسایی لارو نماتد در مدفوع به روش برمن. این روش بر اساس خاصیت ترموتروپیک لارو است. برای تحقیق، 1 قاشق غذاخوری مدفوع گرفته می شود، در یک توری فلزی یا یک توری از چند لایه گاز روی یک قاب سیمی قرار می گیرد. شبکه در یک قیف ثابت در یک سه پایه نصب می شود. یک لوله لاستیکی با یک گیره به قیف می پیوندد. با بالا بردن توری، قیف را با آب پر می کنند (درجه حرارت +40 درجه ... + 50 درجه سانتی گراد) به طوری که قسمت پایین توری در آب غوطه ور می شود. لاروهای مدفوع به طور فعال به آب گرم مهاجرت می کنند و با ته نشین شدن در قسمت پایین قیف تجمع می یابند. پس از 2-4 ساعت، گیره باز می شود، آب در لوله سانتریفیوژ پایین می آید و به مدت 2-3 دقیقه سانتریفیوژ می شود. سپس مایع رویی تخلیه می شود، رسوب به یک اسلاید شیشه ای منتقل می شود و در زیر میکروسکوپ مشاهده می شود، جایی که لاروهای متحرک پاتوژن استرونژیلوئیدیازیس پیدا می شود.

روش هاراد و موری اجازه می دهد تا لارو کرم های قلابدار و نکاتورها را متمایز کند. لارو کرم قلابدار روی کاغذ صافی کشت می شود. برای این منظور 0.5 گرم مدفوع تازه گرفته شده از بیمار حداکثر تا 1 ساعت پس از اجابت مزاج بر روی نوارهای کاغذ صافی به اندازه 12*1.5 سانتی متر ریخته می شود و هر دو انتهای نوار را تمیز می کند. یک سر نوار در یک لوله آزمایش غوطه ور می شود که قسمت چهارم آن با آب پر شده و سر دیگر آن با چوب پنبه بسته می شود. لوله ها در یک ترموستات در دمای +26 ... + 28 درجه سانتیگراد قرار می گیرند. لاروهایی که از تخم‌ها رشد کرده‌اند در امتداد کاغذ صافی فرود می‌آیند و در انتهای لوله آزمایش قرار می‌گیرند. پس از 5-6 روز، نوار کاغذ برداشته می شود و مایع باقی مانده در لوله آزمایش زیر ذره بین بررسی یا سانتریفیوژ می شود. رسوب تشکیل شده در طول سانتریفیوژ در زیر میکروسکوپ نوری بررسی می شود. هنگام استفاده از شیشه های شیشه ای چهار وجهی به جای لوله آزمایش (اندازه 15XYX7 سانتی متر) که به دیواره های آن 4 نوار کاغذی وصل شده است، کارایی آنالیزها افزایش می یابد (GM Maruashvili et al., 1966).

روش های تحقیق برای شیستوزومیازیس . بررسی مدفوع - بخشی از مدفوع با 250 میلی لیتر آب مخلوط می شود، از طریق 3 لایه گاز در یک ظرف مخروطی فیلتر می شود که تا بالا با آب پر می شود. پس از 30 دقیقه، لایه مایع تخلیه می شود، بخش تازه ای از آب به رسوب اضافه می شود. رسوب شسته می شود تا مایع رویی شفاف به دست آید و مورد بررسی میکروسکوپی قرار گیرد.

روش لاروسکوپی - 25-20 گرم مدفوع در ارلن با یک لوله شیشه ای لحیم شده در کنار قرار داده شده و با آب لوله کشی شسته می شود. سپس فلاسک را با کاغذ تیره می پوشانیم و لوله شیشه ای لحیم شده را در نور با دمای 25+...+30 درجه سانتی گراد می گذاریم. میراسیدی های هچ شده در منیسک در لوله جانبی متمرکز شده اند، جایی که می توان آنها را با ذره بین یا با چشم غیر مسلح مشاهده کرد. معاینه ادرار - 100 میلی لیتر ادرار بین ساعت 10 صبح تا 2 بعد از ظهر جمع آوری می شود، یا قسمت روزانه ته نشین می شود و سپس با سرعت 1500 دور در دقیقه سانتریفیوژ می شود. رسوب حاصل بر روی یک لام شیشه ای اعمال می شود و میکروسکوپ می شود. WHO روشی را برای فیلتر کردن کل قسمت ادرار توصیه می کند. پس از فیلتراسیون، فیلترها با فرمالین یا حرارت داده می شوند (برای از بین بردن تخم مرغ) و سپس با محلول آبی نین هیدرین مرطوب می شوند. در آماده سازی های خشک، جنین های تخم مرغ رنگ ارغوانی به دست می آورند.

استفاده از ایمونولوژیک روش‌های تحقیق برای تشخیص شیستوزومیازیس دشوار است، زیرا شیستوزوم‌های بالغ و تخم‌های آنها حاوی تعداد زیادی آنتی‌ژن هستند که باعث پاسخ‌های ایمنی می‌شوند که مختص گونه نیستند (D. Bradley, 1979).

در کشور ما برای فرمولاسیون واکنش های ایمونولوژیک در بیماری کرمی، تعدادی تشخیص استاندارد تولید می شود. تست پوستی آلرژیک برای اکینوکوکوز و آلوئوکوکوز، RLA با آنتی ژن اکینوکوکوز، RSK در سرما، واکنش بارش در سرما در تغییرات مختلف (بارش حلقه ای، بارش در لوله های آزمایش یا مویرگ ها که با آنتی ژن های تریچینوزیس، سیستیسرکوز و میگروآاسکاریازیس قرار می گیرند) دارند. برنامه های کاربردی. تشخیص های استاندارد برای تنظیم واکنش های سرولوژیکی فوق توسط شرکت های تولید کننده آماده سازی باکتریایی انجام می شود. سازنده دستورالعمل های دقیق در مورد قوانین نگهداری، تاریخ انقضای دارو و دستورالعمل های استفاده از آنتی ژن های مناسب با تکنیک واکنش را به دستگاه های تشخیصی تولید شده ضمیمه می کند.

در سال‌های اخیر، فهرست آزمایش‌های سرولوژیکی مورد استفاده برای تشخیص بیماری کرمی به طور قابل توجهی گسترش یافته است. برای این منظور از واکنش های زیر استفاده می شود: RIGA، ایمونوفلورسانس غیرمستقیم (RIF)، ایمونودیفیوژن ژل (RID)، ایمونوالکتروفورز ضد (VIEF)، REAMA. از این واکنش ها می توان برای آسکاریازیس، توکسوکاریازیس، تریچینوز، عفونت کرم قلابدار، فیلاریازیس، اکینوکوکوزیس و آلوئوکوکوزیس، اپیستورکیازیس، شیستوزومیازیس، پاراگونیمیازیس استفاده کرد. اما برای این واکنش ها در کشور ما، تشخیص استاندارد صادر نمی شود و تکنیک تنظیم آنها تنظیم نمی شود. آزمایشگاه‌های مجزا، عمدتاً علمی، آنتی‌ژن‌های اختصاصی خود را تهیه می‌کنند و از آن‌ها در اصلاحات مختلف استفاده می‌کنند. شرح این روش ها به طور گسترده در ادبیات ارائه شده است و کاملاً یکسان نیست. تفسیر داده های ایمونولوژیک باید بر اساس مطالعه پویایی پاسخ ایمنی، با در نظر گرفتن سطح ویژگی و حساسیت هر آزمایش سرولوژیکی اعمال شده باشد. بنابراین، هنگام تشخیص، و همچنین در طول بررسی های سرواپیدمیولوژیک جمعیت، توصیه می شود از چندین واکنش حساس استفاده کنید. از این موقعیت‌ها، واکنش‌های VIEF و REMA به خوبی خود را ثابت کرده‌اند، که با حساسیت بالا و ویژگی نسبتاً بالا متمایز می‌شوند (P. Ambroise-Thomas، 1978؛ I. E. Ballad، 1979؛ G. M. Negryanu، 1980؛ A. M. Ponomareva، 1981؛ A. M. Ponomareva، 1981. Ya. Lysenko، 1978، و غیره). اثربخشی REAMA در آمیبیاز، لیشمانیوز، تریپانوزومیازیس و توکسوپلاسموز آزمایش شده است (GA Ermolin، 1980).