Bacillus cereus ip 5832 πολιτιστικές και μορφολογικές ιδιότητες. Bactisubtil

Bacillus cereus

Χαρακτηριστικά των βακίλων: αντιπροσωπεύονται από μεγάλες ευθείες ράβδους που λεκιάζουν θετικά για Gram, είναι ικανοί να σχηματίζουν σπόρια σε αερόβιες συνθήκες, το μόνο παθογόνο είδος για τον άνθρωπο είναι ο Bacillus anthracis (βάκιλος του άνθρακα), ορισμένα ευκαιριακά είδη είναι επίσης ικανά να προκαλώντας τροφική δηλητηρίαση και νοσοκομειακές λοιμώξεις. Οι βάκιλλοι απομονώνονται από το έδαφος, το γλυκό και το θαλασσινό νερό, καθώς και από τα φυτά. Μπορούν να αναπτυχθούν σε θερμοκρασίες που κυμαίνονται από 5 έως 75 °C και η επιβίωσή τους σε ακραίες συνθήκες διευκολύνεται από τη δημιουργία σπορίων. Οι νοσοκομειακές βλάβες (πνευμονία, σηψαιμία, ενδοκαρδίτιδα, μηνιγγίτιδα κ.λπ.) προκαλούνται από τα B. subtilis, B. cereus και B. megaterium (Εικ. 4, βλ. έγχρωμο ένθετο), B. alvei, B. laterosporus, B. pumilus, B thuringiensis και B. sphaericus. Οι βλάβες καταγράφονται σχετικά σπάνια και η ανάπτυξή τους στον άνθρωπο διευκολύνεται από τον εκτεταμένο επιπολασμό των βακτηρίων και την υψηλή αντοχή των σπορίων τους σε διάφορες επιδράσεις.

Ο Bacillus cereus είναι μια πανταχού παρούσα, gram-θετική, που σχηματίζει σπόρους, κινούμενη ράβδος.

Συστηματική θέση του μικροοργανισμού.

Οικογένεια

Μύκητες ανεπαρκείς Ευβακτηρίδια Bacillaceae Βακίλλος subtilis

Προκαλούν γαστρικές παθήσεις στους ανθρώπους (διάρροια κ.λπ.), καθώς και σηψαιμία, ενδοκαρδίτιδα και βλάβες στο κεντρικό νευρικό σύστημα. Η ασθένεια είναι συνήθως βραχύβια και υποχωρεί χωρίς καμία θεραπεία, αλλά έχουν αναφερθεί και μεμονωμένοι θάνατοι. Η τροφική δηλητηρίαση από Bacillus cereus δεν αναφέρεται λόγω του σχετικά χαμηλού αριθμού περιπτώσεων ασθένειας που προκαλείται από αυτόν (έως και 1% του συνόλου). Η συχνότητα της νόσου ποικίλλει γεωγραφικά. Έτσι, σε ορισμένες χώρες ευθύνονται για λιγότερο από το 1% όλων των τροφικών δηλητηριάσεων, ενώ σε άλλες - περισσότερο από το 30%. Ο Bacillus cereus απομονώνεται από προϊόντα σχετικά συχνά, γεγονός που καθιστά αυτόν τον τύπο βακτηρίων σημαντικό οργανισμό δοκιμής δείκτη για τη βιομηχανία τροφίμων. Τα τρόφιμα που κινδυνεύουν περισσότερο από μόλυνση είναι το κρέας και τα γαλακτοκομικά προϊόντα, τα λαχανικά, οι σούπες, τα μπαχαρικά και, ειδικότερα, οι παιδικές τροφές. Σχεδόν όλα τα στελέχη του Bacillus cereus παράγουν τοξίνες. Σχεδόν το 95% των προϊόντων απομόνωσης Bacillus cereus παράγουν κυτταροτοξικές εντεροτοξίνες. Από αυτά, η μη αιμολυτική εντεροτοξίνη (NHE) παράγεται από περισσότερο από το 90% των στελεχών και η αιμολυσίνη BL (HBL) παράγεται από περίπου το 55% των στελεχών που μελετήθηκαν. Πιστεύεται ότι το HBL και το NHE σχηματίζονται στα έντερα του ασθενούς μετά την κατανάλωση τροφών μολυσμένων με φυτικά κύτταρα ή σπόρια Bacillus cereus. Εκτός από αυτές τις δύο τοξίνες, ορισμένα στελέχη του Bacillus cereus παράγουν μια θερμοσταθερή εμετική εντεροτοξίνη (ΕΤΕ). Πιστεύεται ότι η εντεροτοξίνη ETE συσσωρεύεται αρχικά στα τρόφιμα, πιο συχνά σε αμυλούχα τρόφιμα όπως το ρύζι και τα ζυμαρικά. Για αυτούς τους λόγους, η παρακολούθηση αυτών των προϊόντων για την περιεκτικότητα σε εντεροτοξίνες με τη χρήση αξιόπιστων μεθόδων επιταχυνόμενων δοκιμών γίνεται όλο και πιο σημαντική.

Παθογένεια, έκταση της νόσου

Bacillus cereus - Άγαρ δεξτρόζης καζεΐνης-πεπτόνης

Ο Bacillus cereus είναι ένας ευκαιριακός μικροοργανισμός που προκαλεί σποραδικές τροφικές δηλητηριάσεις στον άνθρωπο. Ο αιτιολογικός ρόλος του Bacillus cereus στην τροφική δηλητηρίαση αρχικά μελετήθηκε και περιγράφηκε από τον Hauge το 1950. Η πηγή της τροφικής δηλητηρίασης που προκλήθηκε από τον Bacillus cereus θεωρήθηκε αρχικά ότι ήταν γαστρονομικά προϊόντα που περιέχουν άμυλο πατάτας. Στη συνέχεια περιγράφηκαν κρούσματα παρόμοιων δηλητηριάσεων που προκλήθηκαν από φυτά, κρέας, ψάρια και άλλα προϊόντα διατροφής. Ο Bacillus cereus πολλαπλασιάζεται πιο γρήγορα σε θρυμματισμένα προϊόντα (κιμάς, κοτολέτες, λουκάνικα, κρέμες). Δεν επιτρέπονται περισσότερα από 100 κύτταρα/g στις πρώτες ύλες· δεν επιτρέπεται η παρουσία Bacillus cereus σε κονσέρβες. Σε αποστειρωμένα κονσερβοποιημένα κρέατα, υπό τις καθιερωμένες τεχνολογικές συνθήκες, δεν υπάρχουν κύτταρα αυτού του βακτηρίου. Όταν τα βιώσιμα σπόρια παραμένουν σε ένα κονσερβοποιημένο προϊόν, το παθογόνο μπορεί να πολλαπλασιαστεί υπό συνθήκες αποθήκευσης κονσερβοποιημένων τροφίμων στους 20 o C. Ταυτόχρονα, εμφανίζεται μια γκρίζα επίστρωση στην επιφάνεια του προϊόντος, η μυρωδιά και η συνοχή του αλλάζουν. Ο Bacillus cereus μπορεί επίσης να προκαλέσει διαρροϊκό σύνδρομο σε ζώα, πτηνά και έντομα 6-18 ώρες μετά την κατανάλωση μολυσμένων τροφίμων. Αυτό οφείλεται κυρίως σε διάφορους τύπους τοξινών (NHE, HBL, bc-D-ENT) που περιέχονται σε μολυσμένα τρόφιμα και στη συνέχεια λόγω του πολλαπλασιασμού των βακτηρίων στα έντερα. Αυτό το σύμπλεγμα τοξινών Bacillus cereus προκαλεί κυτταροτοξική δράση και έκκριση υγρού στο έντερο. Όταν εκτελείται μια βιοδοκιμασία σε ποντίκια, τα ζώα εμφανίζουν νέκρωση δέρματος στο σημείο της ένεσης και επακόλουθο θάνατο.

Επί του παρόντος, τα επίσημα καταχωρημένα βιολογικά φάρμακα που βασίζονται σε εξασθενημένα στελέχη της φυσιολογικής εντερικής μικροχλωρίδας χρησιμοποιούνται ευρέως στην ιατρική πρακτική.

1. Παρασκευάσματα όπως το bactisubtil. Παρασκευάσματα που περιέχουν καθαρή καλλιέργεια του στελέχους Bacillus IP 5832 με βλαστικά σπόρια σε ποσότητα τουλάχιστον 1 δισεκατομμυρίου Ομαλοποιούν τη φυσιολογική ισορροπία της εντερικής μικροχλωρίδας. Τα βακτηριακά σπόρια που περιέχονται στα σκευάσματα είναι ανθεκτικά στη δράση του γαστρικού υγρού και βλασταίνουν σε φυτικές μορφές στα έντερα. Οι φυτικές μορφές βακτηρίων παράγουν ένζυμα που διασπούν τους υδατάνθρακες, τα λίπη και τις πρωτεΐνες, με αποτέλεσμα το σχηματισμό ενός όξινου περιβάλλοντος που αποτρέπει τις διαδικασίες αποσύνθεσης. Τα φάρμακα προάγουν τη φυσιολογική σύνθεση των βιταμινών Β και Ρ στα έντερα. Διατίθεται σε κάψουλες.

2. Τα παρασκευάσματα του τύπου φλονιβίνης BS περιέχουν μια καθαρή καλλιέργεια του στελέχους βάκιλλου 1P5832 (109) με βλαστικά σπόρια. Τα στελέχη Bacillus IP5832 είναι γενετικά ανοσοποιημένα σε όλους τους τύπους σουλφοναμιδίων, νυστατίνης και στα περισσότερα αντιβιοτικά ευρέος φάσματος. Διατίθεται σε κάψουλες.

3. Τα παρασκευάσματα τύπου βιοσπορίνης περιέχουν Bacillus subtilis, Bacillus lichineformis. Διατίθεται σε κάψουλες.

4. Τα παρασκευάσματα του τύπου bifidumbacterin είναι μια μικροβιακή μάζα ζωντανών bifidobacteria που λυοφιλοποιούνται σε ένα καλλιεργητικό μέσο. Είναι τα πιο σημαντικά ανθρώπινα συμβιώματα, που κυριαρχούν στην υγιή εντερική μικροχλωρίδα τόσο των παιδιών όσο και των ενηλίκων. Μία δόση περιέχει τουλάχιστον 108 ζωντανά bifidobacteria. Διατίθεται σε δισκία, κάψουλες, σακούλες και φιάλες.

Η αποτελεσματικότητα των υγρών bifidobacterins μελετάται επί του παρόντος. Έρευνα από Ρώσους επιστήμονες έχει αποδείξει ότι η αποτελεσματικότητα αυτών των φαρμάκων κατά της δυσβακτηρίωσης υπερβαίνει την αποτελεσματικότητα των ξηρών bifidobacterins. Ταυτόχρονα, το θεραπευτικό αποτέλεσμα κατά τη θεραπεία με υγρά bifidobacterins αναπτύχθηκε μετά από 1-2 μήνες, ενώ η χρήση ξηρών bifidobacterins οδήγησε σε βελτίωση των κλινικών και εργαστηριακών συμπτωμάτων μόνο μετά από 3-6 μήνες. Αυτό οφείλεται στο γεγονός ότι τα υγρά βιολογικά προϊόντα, πρώτον, περιέχουν μεγαλύτερο αριθμό μικροβιακών σωμάτων (1011-1015 σε 1 ml όγκου σε σύγκριση με 108 σε ξηρά παρασκευάσματα), δεύτερον, δεν περιέχουν ξένη μικροχλωρίδα και, τρίτον, Η βιωσιμότητα των μικροοργανισμών των υγρών παρασκευασμάτων αποδείχθηκε ότι ήταν σημαντικά υψηλότερη. Δηλαδή, τα ζωντανά bifidobacteria διατηρούν πλήρως τις φυσιολογικές τους ιδιότητες, με αποτέλεσμα να έχουν θεραπευτική δράση σε μικρά χρονικά διαστήματα. Παρασκευάσματα όπως το bifiliz dry και το bifiform έχουν επίσης δημιουργηθεί με βάση ζωντανά bifidobacteria. Η σύνθεση φαρμάκων όπως το bifiliz περιλαμβάνει λυσοζύμη, λόγω της οποίας έχει αντιφλεγμονώδη δράση, επιπλέον, διεγείρει τις μεταβολικές διεργασίες και την ερυθροποίηση. Κατά τα άλλα, όσον αφορά τις φαρμακολογικές ιδιότητες και τις ενδείξεις χρήσης, τα φάρμακα αυτά είναι παρόμοια με φάρμακα του τύπου bifidumbacterin.

5. Παρασκευάσματα όπως τα προβιοτικά lifepack - περιέχουν Bifidobacterium bifidum (5x107 μικροβιακά σώματα σε 1 κάψουλα).

6. Τα παρασκευάσματα τύπου Bificol είναι βιολογικά παρασκευάσματα ξηρού συμπλόκου δύο συστατικών από ζωντανή βακτηριακή αναερόβια και αερόβια μικροχλωρίδα του ανθρώπινου εντέρου, στελέχη bifidobacteria (Bifidobacterium bifidum I) και Escherichia coli (Escherichia coli M-17). Είναι μια λυοφιλοποιημένη καλλιέργεια βακτηρίων που αναπτύσσονται μαζί με τα συγκεκριμένα στελέχη. 1 δόση του φαρμάκου περιέχει τουλάχιστον 107 ζωντανά bifidobacteria και τουλάχιστον 107 Escherichia coli M-17. Διατίθεται σε φιάλες.

7. Παρασκευάσματα όπως το colibacterin είναι ένα λυοφιλοποιημένο προϊόν ζωντανών βακτηρίων του ανταγωνιστικά ενεργού στελέχους Escherichia coli M-17, έχουν ανταγωνιστική δράση έναντι ενός ευρέος φάσματος παθογόνων και υπό όρους παθογόνων μικροοργανισμών, ομαλοποιώντας έτσι τη φυσιολογική ισορροπία της εντερικής μικροχλωρίδας. Διατίθεται σε αμπούλες και δισκία.

8. Τα παρασκευάσματα τύπου Lactobacterin είναι ένα λυοφιλοποιημένο προϊόν ζωντανών γαλακτοβακίλλων. Οι γαλακτοβάκιλλοι αποτελούν μέρος της φυσιολογικής μικροχλωρίδας. Το όξινο περιβάλλον που δημιουργείται από τους γαλακτοβάκιλλους προάγει την ανάπτυξη της δισχιδούς χλωρίδας και άλλης φυσιολογικής μικροχλωρίδας στο έντερο, καθώς είναι βέλτιστο για αυτά τα βακτήρια και έτσι διατηρεί και ρυθμίζει τη φυσιολογική ισορροπία της εντερικής μικροχλωρίδας. Διατίθεται σε αμπούλες, δισκία και υπόθετα.

9. Παρασκευάσματα όπως το acipol είναι ένα μείγμα ζωντανών γαλακτοβακίλλων acidophilus και θερμανθέντων κόκκων κεφίρ. Τα φάρμακα έχουν υψηλή βιοχημική οξεία και ανταγωνιστική δράση. Οι θερμαινόμενοι κόκκοι κεφίρ είναι ένας ανοσοτροποποιητής που διεγείρει την άμυνα του οργανισμού. Διατίθεται σε φιάλες και ταμπλέτες.

10. Τα παρασκευάσματα του τύπου ακύλακτος είναι ένα λυοφιλοποιημένο προϊόν ζωντανών οξεόφιλων γαλακτοβακίλλων. Διατίθεται σε φιάλες.

11. Τα σκευάσματα Tipalinex είναι ένα από τα πιο ισορροπημένα ευβιοτικά, που περιέχει ζωντανά λυοφιλισμένα βακτήρια: Lactobacillus acidophilus, Bifidumbakterium infantis v.liberorum, Streptococcus faecium. Αυτά τα βακτήρια είναι εκπρόσωποι της φυσιολογικής εντερικής μικροχλωρίδας και είναι ανθεκτικά στα αντιβιοτικά και στους χημειοθεραπευτικούς παράγοντες. Τα βακτήρια γαλακτικού οξέος, που παράγουν οργανικά οξέα (γαλακτικό, οξικό, προπυλένιο), δημιουργούν ένα όξινο περιβάλλον στο έντερο, το οποίο είναι δυσμενές για την ανάπτυξη παθογόνων και υπό όρους παθογόνων μικροοργανισμών. Ως αποτέλεσμα, η φυσιολογική ισορροπία της εντερικής μικροχλωρίδας ομαλοποιείται. Επιπλέον, τα βακτήρια του γαλακτικού οξέος σταθεροποιούν τις μεμβράνες των εντερικών επιθηλιακών κυττάρων, συμμετέχουν στην επεξεργασία των μονοσακχαριτών και ρυθμίζουν την ισορροπία των ηλεκτρολυτών στο έντερο. Εκτός από την ευβιοτική δράση, ο συνδυασμός μικροοργανισμών που περιλαμβάνονται στο φάρμακο παρέχει επίσης βακτηριοκτόνα και αντιδιαρροϊκά αποτελέσματα. Διατίθεται σε κάψουλες.

12. Τα παρασκευάσματα τύπου Nutrolin B περιέχουν σπορογόνους γαλακτοβάκιλλους και βιταμίνες B, B2, B6, PP. Διατίθεται σε μορφή κάψουλων, δισκίων και σιροπιού.

13. Τα σκευάσματα τύπου Travis περιέχουν Lactobacillus Acidophilus, Lactobacillus Bulgaricus, Bacillus Bifidum, Streptococcus thermophilus. Διατίθεται σε κάψουλες.

14. Τα παρασκευάσματα τύπου hilak είναι ένα παρασκεύασμα με τη μορφή σταγόνων για χορήγηση από το στόμα, που περιέχει ένα στείρο συμπύκνωμα μεταβολικών προϊόντων ουσιών για τον σχηματισμό γαλακτικού οξέος με μεταβολικά προϊόντα θετικών και αρνητικών κατά gram συμβιώσεων της εντερικής μικροχλωρίδας, καθώς και αμινοξέα, πτητικά λιπαρά οξέα βραχείας αλυσίδας, βιοσυνθετικό γαλακτικό οξύ, ρυθμιστικό διάλυμα γάλακτος-αλατούχου διαλύματος, λακτόζη. Τα φάρμακα βοηθούν στη διατήρηση της οξύτητας στα έντερα εντός του φυσιολογικού κανόνα, γεγονός που οδηγεί στην ομαλοποίηση της σαπροφυτικής εντερικής χλωρίδας και δημιουργεί δυσμενείς συνθήκες για τη ζωή παθογόνων μικροοργανισμών. Υπό την επίδραση των φαρμάκων, ομαλοποιείται η φυσική σύνθεση των βιταμινών Β και Κ. Τα πτητικά λιπαρά οξέα μικρής αλυσίδας που περιέχονται στα φάρμακα εξασφαλίζουν την αποκατάσταση της κατεστραμμένης εντερικής μικροχλωρίδας σε μολυσματικές ασθένειες του γαστρεντερικού σωλήνα, αυξάνουν την αναγεννητική ικανότητα του κύτταρα του ιστού του περιβλήματος του εντερικού τοιχώματος και αποκαθιστούν τη διαταραγμένη ισορροπία νερού-ηλεκτρολυτών στον εντερικό αυλό.

15. Τα σκευάσματα τύπου εντερόλης περιέχουν λυοφιλοποιημένο Saccharomyces boulardii (ιατρική μαγιά). Έχουν αντιμικροβιακή δράση, είναι ανταγωνιστές παθογόνων και υπό όρους παθογόνων μικροοργανισμών: κλωστρίδια, σταφυλόκοκκοι, candida και λάμβλια. Αύξηση της τοπικής ανοσολογικής άμυνας ως αποτέλεσμα αυξημένων ανοσοσφαιρινών. Έχουν αντιτοξική δράση και βελτιώνουν τον τροφισμό του εντερικού βλεννογόνου. Διατίθεται σε μορφή σκόνης σε φακελάκια και κάψουλες.

Πίνακας περιεχομένων του θέματος "Αιτιογόνος παράγοντας του άνθρακα. Κλινικές εκδηλώσεις λοίμωξης από άνθρακα. Bacillus cereus.":

Bacillus cereus. Μορφολογία του βάκιλου του cereus. Πολιτιστικές ιδιότητες του bacillus cereus. Κλινική δηλητηρίασης από βάκιλλο cereus. Αρχές μικροβιολογικής διάγνωσης του βάκιλλου του εγκεφάλου. Αναγνώριση βακίλλου του cereus.

Bacillus cereus- ένα σαπρόφυτο βακτήριο του εδάφους, ευρέως διαδεδομένο στη φύση. Τα βακτήρια συχνά μολύνουν τα τρόφιμα, προκαλώντας τροφική δηλητηρίαση. Τα φαινόμενα δηλητηρίασης διαμεσολαβούνται από την εντεροτοξίνη. Σχηματίζεται από βακτήρια που αναπτύσσονται από σπόρια που είναι ανθεκτικά σε ορισμένες συνθήκες θερμικής επεξεργασίας προϊόντων διατροφής (συνήθως λαχανικών). Τα βακτήρια παράγουν τοξίνες μόνο in vivo, κατά τη βλάστηση των σπορίων. Τα τελευταία χρόνια έχουν επίσης σημειωθεί νοσοκομειακές λοιμώξεις που προκαλούνται σποραδικά από το B. cereus - βακτηριαιμία, ενδοκαρδίτιδα και μηνιγγίτιδα σε άτομα με προσθετικά όργανα, καθετήρες, σε ασθενείς με αιμοδυναμικές διαταραχές, καθώς και σε άτομα που λαμβάνουν κυτταροστατικά και ανοσοκατασταλτικά για πολύς καιρός. Οι βλάβες είναι σοβαρές και συχνά θανατηφόρες.

Μορφολογία και πολιτιστικές ιδιότητες του βάκιλλου cereus

Μορφολογικά Bacillus cereusμοιάζει με βάκιλο του άνθρακα. οι κύριες διαφορές είναι η κινητικότητα και η αιμολυτική δραστηριότητα. Στα επιχρίσματα, τα βακτήρια είναι διατεταγμένα σε μοτίβο περίφραξης. Η βέλτιστη θερμοκρασία για ανάπτυξη είναι 30 °C. βέλτιστο pH 7-9,5. Στο άγαρ, το παθογόνο σχηματίζει «απλωμένες» αποικίες με οδοντωτές άκρες. στο CA, οι αποικίες περιβάλλονται από μια ευρεία ζώνη αιμόλυσης (βλ. Εικ. 4 ένθετο). Με την πάροδο του χρόνου οι αποικίες αποκτούν χαρακτηριστική κηρώδη όψη [από λατ. τώρα, κερί, κερί]. Σε υγρά μέσα, σχηματίζουν μια λεπτή μεμβράνη στην επιφάνεια, ένα λευκό λεπιοειδές ίζημα και θολότητα του ζωμού. Τα βακτήρια παρουσιάζουν υψηλή πρωτεολυτική δράση και υγροποιούν τη ζελατίνη σε 1-4 ημέρες. όλα τα στελέχη παράγουν λεκιθινάση και ακετοΐνη. Σχηματίζουν οξύ σε μέσα που περιέχουν γλυκόζη και μαλτόζη.

Κλινικές εκδηλώσεις δηλητηρίασης από bacillus cereus

Bacillus cereusπροκαλεί δύο ειδών τροφικές δηλητηριάσεις (γαστρεντερίτιδα).

Δηλητηρίαση από Bacillus cereusο πρώτος τύπος χαρακτηρίζεται από συντομευμένη περίοδο επώασης (περίπου 4-5 ώρες). Χαρακτηρίζεται από εξουθενωτική διάρροια και έμετο. Η ασθένεια αναπτύσσεται όταν τρώτε τροφές μολυσμένες με μεγάλο αριθμό μικροοργανισμών.

Δηλητηρίαση από Bacillus cereusΟ δεύτερος τύπος δηλητηρίασης έχει μεγαλύτερη περίοδο επώασης (περίπου 17 ώρες). Οι ασθενείς παραπονιούνται για κράμπες στην κοιλιακή χώρα και διάρροια. Αυτό το σύνολο συμπτωμάτων συχνά συγχέεται εσφαλμένα ως τροφική δηλητηρίαση που προκαλείται από κλωστρίδια.

Αρχές μικροβιολογικής διάγνωσης του βάκιλλου του εγκεφάλου

Διαγνωστικό σημάδι βάκιλλου του cereusεξετάστε την ανίχνευση σε ύποπτα προϊόντα διατροφής περισσότερων από 10 5 βακτηρίων σε 1 g/ml προϊόντος ή 10 2 -10 3 βακτηρίων σε 1 g/ml περιττωμάτων και εμετού ή νερού πλύσης. Οι κύριες διαφορές μεταξύ του B. cereus και του B. anthracis είναι η αιμολυτική δραστηριότητα, η κινητικότητα, η αντίσταση στην πενικιλίνη, η ταχεία υγροποίηση της ζελατίνης και η μη παθογένεια για τα λευκά ποντίκια.

Η εφεύρεση σχετίζεται με τον τομέα της ιατρικής, δηλαδή τη μικροβιολογία, και μπορεί να χρησιμοποιηθεί σε βακτηριολογικά εργαστήρια για την ανίχνευση της ανταγωνιστικής δραστηριότητας του στελέχους Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893). Η συνεπώαση πραγματοποιείται σε φυσιολογικό διάλυμα του απομονωμένου στελέχους του Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) σε καθαρή καλλιέργεια και της απομονωμένης καθαρής καλλιέργειας ενός ευκαιριακού παθογόνου μικροοργανισμού (OPM) από τα κόπρανα του ασθενούς. Το προκύπτον μείγμα σπέρνεται χρησιμοποιώντας Gold σε θρεπτικό άγαρ με και χωρίς πενικιλίνη σε συγκέντρωση 0,01 U/ml και εάν ανιχνευθεί μείωση της ποσότητας UPM στο μέσο με πενικιλίνη σε σύγκριση με την ποσότητα UPM στο μέσο χωρίς αυτό , η παρουσία ανταγωνιστικής δραστηριότητας του στελέχους Bacillus cereus IP 5832 προσδιορίζεται (ATCC 14893) έναντι του στελέχους UPM, ενώ το ευβιοτικό αξιολογείται ως αποτελεσματικό έναντι του στελέχους UPM που απομονώθηκε από τον ασθενή όταν ελέγχεται για εντερική δυσβίωση. Η εφεύρεση παρέχει καταστολή του στελέχους Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) χωρίς να διακυβεύεται η βλάστηση των δοκιμαστικών καλλιεργειών UPM. 3 τραπέζια

Η εφεύρεση σχετίζεται με τον τομέα της ιατρικής, δηλαδή τη μικροβιολογία, και μπορεί να χρησιμοποιηθεί σε βακτηριολογικά εργαστήρια για τον προσδιορισμό της ανταγωνιστικής δραστηριότητας του στελέχους Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) με σκοπό την ατομική αξιολόγηση της αποτελεσματικότητας των ευβιοτικών, του κύριου δραστικού αρχή του οποίου είναι το στέλεχος Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893), σε σχέση με ευκαιριακούς μικροοργανισμούς που απομονώθηκαν από έναν ασθενή κατά τη διάρκεια μιας μελέτης για εντερική δυσβίωση. Η εφεύρεση μπορεί επίσης να χρησιμοποιηθεί στη γαστρεντερολογία για μεμονωμένη επιλογή ευβιοτικών, το κύριο δραστικό συστατικό των οποίων είναι το στέλεχος Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893), στη θεραπεία της εντερικής δυσβίωσης.

Μεταξύ των φαρμάκων για τη διόρθωση της αλλοιωμένης μικροβιοκένωσης του εντέρου, τα ευβιοτικά, που προορίζονται για την καταστολή παθογόνων και ευκαιριακών μικροοργανισμών, κατέχουν σημαντική θέση. Τις περισσότερες φορές, τα ευβιοτικά περιλαμβάνουν εκπροσώπους του γένους Bacillus, που δεν είναι εκπρόσωποι της φυσιολογικής εντερικής μικροχλωρίδας, εξαλείφονται αμέσως μετά την απόσυρση και είναι ισχυροί ανταγωνιστές άσχετων μικροοργανισμών λόγω της παραγωγής λυσοζύμης, πρωτεολυτικών ενζύμων και βακτηριοσινών. Είναι γνωστό ότι οι βάκιλλοι καταστέλλουν αποτελεσματικότερα τα παθογόνα εντεροβακτήρια και ορισμένους ευκαιριακούς μικροοργανισμούς που αποικίζουν τον εντερικό βιότοπο: S. aureus, Candida spp., E. coli, P. aeruginosa, K. pneumoniae και άλλα ευκαιριακά εντεροβακτήρια.

Ένα από τα πιο ευρέως χρησιμοποιούμενα ευβιοτικά φάρμακα σε πολλές χώρες είναι το φάρμακο «Baktisubtil» (Γαλλία), το κύριο δραστικό συστατικό του οποίου είναι το στέλεχος Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893). Γνωστό είναι και το ευβιοτικό «Flonivin», το κύριο δραστικό συστατικό του οποίου είναι επίσης το στέλεχος Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893), BS Κατασκευαστής: Galenika, A.D., Σερβία.

Τα βιομηχανικά στελέχη του γένους Bacillus δεν σχηματίζουν βιομεμβράνες, καθώς οι συγκολλητικές τους ιδιότητες στα εντερικά επιθηλιακά κύτταρα είναι αδύναμες. Με βάση το γεγονός ότι η δραστηριότητα του στελέχους Bacillus cereus εμφανίζεται στον εντερικό αυλό και σχετίζεται κυρίως με την υψηλή ανταγωνιστική δραστηριότητα αυτού του στελέχους και όχι με ανταγωνιστικές σχέσεις για τις θέσεις προσκόλλησης στον βλεννογόνο, τότε η αποτελεσματικότητα των ευβιοτικών, κύρια δραστική αρχή του οποίου είναι το στέλεχος Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893), σε σχέση με ευκαιριακούς μικροοργανισμούς που απομονώνονται από έναν ασθενή κατά τη διάγνωση της εντερικής δυσβίωσης, μπορεί να κριθεί από την παρουσία ή την απουσία ανταγωνιστικής δραστηριότητας του στελέχους IP του Bacillus cereus. 5832 (ATCC 14893).

Οι βακτηριοσίνες ή ουσίες που μοιάζουν με βακτηριοκίνη παράγονται από τους βάκιλλους κυρίως εξωκυτταρικά και είναι ικανές να συσσωρεύονται στο θρεπτικό μέσο. Χάρη σε αυτό, θεωρητικά, η ανταγωνιστική δράση των βακίλλων μπορεί να ανιχνευθεί χρησιμοποιώντας διάφορες τροποποιήσεις μεθόδων άμεσου ή καθυστερημένου ανταγωνισμού, που παραδοσιακά χρησιμοποιούνται μόνο για την ανίχνευση ανταγωνισμού προβιοτικών γαλακτο- και μπιφιδοβακτηρίων: η μέθοδος ραβδώσεων, η μέθοδος καθυστερημένου ανταγωνισμού Frederick με ενδιάμεση θανάτωση το στέλεχος παραγωγής με χλωροφόρμιο, η μέθοδος άγαρ διπλής στρώσης .

Για να αναγνωρίσουμε την ανταγωνιστική δραστηριότητα του στελέχους Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893), χρησιμοποιήσαμε τις παραπάνω μεθόδους.

Για να εκτιμηθεί η ανταγωνιστική δράση των βακίλων με τη μέθοδο του άμεσου ανταγωνισμού, ένα εναιώρημα μιας ημερήσιας καλλιέργειας B.cereus επιστρώθηκε σε όλη τη διάμετρο ενός τρυβλίου Petri με θρεπτικό άγαρ σε συγκέντρωση 1×10 9 σύμφωνα με το πρότυπο οπτικής θολότητας GISC πήρε το όνομα από. L.A. Tarasevich. Καλλιέργειες ευκαιριακών μικροοργανισμών που απομονώθηκαν κατά τη διάγνωση της εντερικής δυσβίωσης σπάρθηκαν κάθετα. Επωάστηκε στους 37°C για 24 ώρες. Η παρουσία ανταγωνιστικής δραστικότητας λήφθηκε υπόψη από την παρουσία επιβράδυνσης της ανάπτυξης στα στελέχη δοκιμής.

Κατά την αξιολόγηση της ανταγωνιστικής δραστηριότητας των βακίλλων χρησιμοποιώντας τη μέθοδο του καθυστερημένου ανταγωνισμού, οι δοκιμαστικές καλλιέργειες ευκαιριακών μικροοργανισμών εμβολιάστηκαν 24 και 48 ώρες μετά τον εμβολιασμό των βακίλων.

Στις εξεταζόμενες επιλογές για την αξιολόγηση του ανταγωνισμού του στελέχους Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893), σύμφωνα με τα δικά μας δεδομένα, το στέλεχος δεν εμφάνισε ανταγωνιστική δράση έναντι δοκιμαστικών καλλιεργειών ευκαιριακών μικροοργανισμών (80 στελέχη). Ορισμένα ενεργά κινητικά στελέχη ευκαιριακών μικροοργανισμών (P. aeruginosa, E. coli) αναπτύχθηκαν στην επιφάνεια των βακτηριακών αποικιών.

Πιστεύεται ότι οι μεταβολίτες των βακίλων έχουν πιο ισχυρή ανταγωνιστική δράση από τις ζωντανές καλλιέργειες. Ως εκ τούτου, χρησιμοποιήσαμε επίσης τη μέθοδο του καθυστερημένου ανταγωνισμού με την ενδιάμεση θανάτωση του στελέχους παραγωγής με χλωροφόρμιο. Το στέλεχος Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) εμβολιάστηκε σε στερεοποιημένο 1,5% θρεπτικό άγαρ που χύθηκε σε τρυβλία Petri και αναπτύχθηκε για 48 ώρες στους 37°C. Μετά την επώαση, η προκύπτουσα καλλιέργεια θανατώθηκε με ατμό χλωροφορμίου και ένα εναιώρημα της δοκιμαστικής καλλιέργειας του ευκαιριακού μικροοργανισμού επιστρώθηκε. Για να γίνει αυτό, αναμείξτε 0,1 ml καλλιέργειας σε τελική συγκέντρωση 10 8 κυττάρων σύμφωνα με το πρότυπο οπτικής θολότητας με 2,5-3 ml ημί-υγρού άγαρ 0,7% λιωμένο και ψυχθέν σε θερμοκρασία 46-48°C. Εάν υπάρχει η ικανότητα παραγωγής βακτηριοσινών, θα πρέπει να παρατηρηθεί μια ζώνη αναστολής ανάπτυξης του στελέχους δοκιμής γύρω από την αποικία του στελέχους Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893). Δεν ανιχνεύθηκε ανταγωνιστική δράση των βακίλων, επειδή παρατηρήθηκε ανάπτυξη δοκιμαστικών καλλιεργειών "γκαζόν" UPM στην επιφάνεια του μέσου με υποτιθέμενες βακτηριοσίνες.

Λάβαμε παρόμοια δεδομένα χρησιμοποιώντας μια τροποποιημένη μέθοδο άγαρ διπλής στιβάδας με ενοφθαλμισμό βακίλων με γκαζόν, ακολουθούμενη από θανάτωση και στρωματοποίηση της δοκιμαστικής καλλιέργειας UPM.

Η πλησιέστερη τεχνική ουσία στη μέθοδο που αξιώνεται είναι η μέθοδος του ανεστραμμένου άγαρ, η οποία περιγράφεται για τον εντοπισμό της ανταγωνιστικής δράσης προβιοτικών που περιέχουν Bacillus subtilis και Escherichia coli έναντι της ευκαιριακής ζύμης. Για να γίνει αυτό, τα στελέχη του Bacillus subtilis και του Escherichia coli σπέρνονται σε ένα στερεό θρεπτικό μέσο, ​​μετά από 2 ημέρες το άγαρ αναποδογυρίζεται και μια προτιτλοδοτημένη δόση σπόρων μαγιάς σπέρνεται στην ανάποδη πλευρά του. Επωάστε για 24 ώρες σε αερόβιες συνθήκες στους 37°C. Η παρουσία ανταγωνισμού ανιχνεύεται ποσοτικά με την καταστολή της ανάπτυξης ζυμομύκητα σε σύγκριση με έναν παρόμοιο εμβολιασμό χωρίς προβιοτικά στελέχη.

Η μέθοδος του ανεστραμμένου άγαρ περιγράφεται και δοκιμάζεται για την αξιολόγηση των αντιμυκητιασικών επιδράσεων των προβιοτικών που περιέχουν Bacillus subtilis και Escherichia coli. Αλλά η ανταγωνιστική επίδραση σε άλλους ευκαιριακούς μικροοργανισμούς (όχι ευκαιριακή ζύμη) δεν έχει αξιολογηθεί. Επιπλέον, η αρχική μέθοδος περιλαμβάνει την επιλογή μιας δόσης σπόρων μαγιάς στην οποία δεν θα αναπτυχθούν περισσότερες από 70 αποικίες σε άγαρ. Αυτό απαιτεί τιτλοδότηση και πρόσθετη έρευνα κατά τη δοκιμή κάθε στελέχους. Η δοκιμή αυτής της μεθόδου χρησιμοποιώντας το ευβιοτικό στέλεχος Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) και 80 δοκιμαστικές καλλιέργειες ευκαιριακών μικροοργανισμών που απομονώθηκαν κατά τη διάγνωση της εντερικής δυσβίωσης δεν μας επέτρεψε να εντοπίσουμε μία μόνο περίπτωση ανταγωνιστικής δραστηριότητας του στελέχους Bacillus cereus ( IP 5832 ATCC 14893).

Για την αξιολόγηση της ανταγωνιστικής δράσης προβιοτικών που περιέχουν γαλακτο- και μπιφιδο, περιγράφονται επίσης μέθοδοι συγκαλλιέργειας σε υγρό μέσο με διάφορες μεθόδους έμμεσης αξιολόγησης που δεν συνεπάγονται επακόλουθη σπορά σε στερεό θρεπτικό μέσο για τον προσδιορισμό του αριθμού των κατασταλμένων UPM.

Έτσι, καμία από τις γνωστές μεθόδους για την ανίχνευση της ανταγωνιστικής δραστηριότητας των προβιοτικών γαλακτοβακτηρίων και των bifidobacteria, σύμφωνα με τους συγγραφείς, δεν μας επέτρεψε να ανιχνεύσουμε την ανταγωνιστική δράση του στελέχους Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) έναντι ευκαιριακών μικροοργανισμών που απομονώθηκαν από έναν ασθενή κατά τη διάρκεια μια μελέτη για την εντερική δυσβίωση.

Στη βιβλιογραφία, επίσης, δεν έχουμε βρει τρόπο να αξιολογήσουμε μεμονωμένα την αποτελεσματικότητα του φαρμάκου "Baktisubtil" ή άλλων ευβιοτικών φαρμάκων, το κύριο δραστικό συστατικό των οποίων είναι το στέλεχος Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893), έναντι ευκαιριακών μικροοργανισμών που απομονώνονται από συγκεκριμένος ασθενής κατά τη διάρκεια μελέτης για δυσβακτηρίωση των εντέρων.

Ο στόχος της εφεύρεσης είναι να ταυτοποιήσει την ανταγωνιστική δράση του στελέχους Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) έναντι ευκαιριακών μικροοργανισμών που απομονώθηκαν από έναν συγκεκριμένο ασθενή κατά τη διάρκεια μιας μελέτης για εντερική δυσβίωση.

Το τεχνικό αποτέλεσμα της εφεύρεσης είναι η καταστολή του ευβιοτικού στελέχους Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) χωρίς να διακυβεύεται η βλάστηση των δοκιμαστικών καλλιεργειών.

Το τεχνικό αποτέλεσμα επιτυγχάνεται με την απομόνωση μιας καθαρής καλλιέργειας ευκαιριακών μικροοργανισμών από τα κόπρανα του ατόμου, στη συνέχεια με απομόνωση του στελέχους Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) σε μια καθαρή καλλιέργεια, μετά την οποία το στέλεχος Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893 είναι co) - επωάστηκε με καθένα από τα στελέχη ευκαιριακών μικροοργανισμών σε φυσιολογικό διάλυμα, ακολουθούμενη από σπορά χρυσού σε θρεπτικό άγαρ με πενικιλίνη σε συγκέντρωση 0,01 U/ml και χωρίς αυτήν, και κατά τον εντοπισμό μείωσης του αριθμού ευκαιριακών μικροοργανισμών σε ένα μέσο με πενικιλλίνη σε σύγκριση με τον αριθμό των ευκαιριακών μικροοργανισμών μικροοργανισμών σε ένα μέσο χωρίς πενικιλίνη, προσδιορίζεται η παρουσία ανταγωνιστικής δράσης του στελέχους Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) έναντι ενός στελέχους ευκαιριακού μικροοργανισμού, ενώ το ευβιοτικό αξιολογείται ως αποτελεσματικό. στέλεχος ενός ευκαιριακού μικροοργανισμού που απομονώθηκε από έναν δεδομένο ασθενή σε μια μελέτη για εντερική δυσβίωση.

Η μέθοδος εκτελείται ως εξής:

Χρησιμοποιώντας τυπικές μεθόδους, απομονώνεται καθαρή καλλιέργεια ευκαιριακών μικροοργανισμών από τα κόπρανα του ασθενούς και το στέλεχος Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) σε καθαρή καλλιέργεια, η οποία είναι η κύρια δραστική ουσία του ευβιοτικού. Απομονώσαμε μια καθαρή καλλιέργεια του στελέχους Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) από το ευβιοτικό «Baktisubtil». 1 ml ενός εναιωρήματος μιας δοκιμαστικής καλλιέργειας ενός ευκαιριακού μικροοργανισμού σε φυσιολογικό διάλυμα σε τελική συγκέντρωση 109 κυττάρων σύμφωνα με το πρότυπο οπτικής θολότητας αναμιγνύεται με 1 ml ενός εναιωρήματος Bacillus cereus στην ίδια συγκέντρωση. Το μίγμα επωάζεται για 48 ώρες στους 37°C. Στη συνέχεια η σπορά πραγματοποιείται σύμφωνα με το Gold. Για να γίνει αυτό, η ποσοτική σπορά πραγματοποιείται με χρήση βρόχου μέτρησης με διάμετρο 3 mm και χωρητικότητα 2 μl σε θρεπτικό άγαρ με πενικιλίνη σε συγκέντρωση 0,01 U/ml για την καταστολή των βακίλων και σε μέσο χωρίς αντιβιοτικά για τον έλεγχο της ανάπτυξη και των δύο τύπων πολιτισμών. Για να αποκλειστούν άλλοι πιθανοί παράγοντες που καταστέλλουν την ανάπτυξη του UPM και των βακίλων (έλλειψη θρεπτικής βάσης), η σπορά ελέγχου μονοκαλλιεργειών πραγματοποιείται παράλληλα μετά την επώαση υπό παρόμοιες συνθήκες. Ο αριθμός των αναπτυσσόμενων μικροοργανισμών υπολογίζεται σύμφωνα με τον πίνακα 1 - Πίνακας υπολογισμού για τον προσδιορισμό του αριθμού των βακτηρίων σε 1 ml υγρού. Εάν ανιχνευθούν περισσότερες από μία UPM από τα κόπρανα του ασθενούς, η περιγραφόμενη διαδικασία εκτελείται με καθένα από τα UPM. Εάν ανιχνευθεί μείωση στον αριθμό των ευκαιριακών μικροοργανισμών στο μέσο με πενικιλίνη σε σύγκριση με τη σπορά ελέγχου, προσδιορίζεται η παρουσία ανταγωνιστικής δραστηριότητας του στελέχους Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) έναντι του στελέχους του ευκαιριακού μικροοργανισμού που απομονώθηκε από το ασθενή κατά τη διάρκεια της μελέτης για εντερική δυσβίωση. Η παρουσία ή η απουσία ανταγωνιστικής δραστηριότητας του στελέχους Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) είναι ένα κριτήριο αξιολόγησης για τον προσδιορισμό της αποτελεσματικότητας των ευβιοτικών, η κύρια δραστική αρχή των οποίων είναι το στέλεχος Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893), έναντι ενός στελέχους ένας ευκαιριακός μικροοργανισμός που απομονώθηκε από έναν δεδομένο ασθενή κατά τη διάρκεια της μελέτης για εντερική δυσβίωση. Παρουσία ανταγωνιστικής δραστηριότητας του στελέχους Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893), το ευβιοτικό αξιολογείται ως αποτελεσματικό έναντι του στελέχους ενός ευκαιριακού μικροοργανισμού που απομονώθηκε από αυτόν τον ασθενή κατά τη διάρκεια μιας δοκιμής για εντερική δυσβίωση.

Τα βασικά διακριτικά χαρακτηριστικά της προτεινόμενης μεθόδου είναι:

Απομονώστε μια καθαρή καλλιέργεια ευκαιριακών μικροοργανισμών από τα κόπρανα του ατόμου.

Απομονώνεται καθαρή καλλιέργεια του στελέχους IP 5832 του Bacillus cereus (ATCC 14893), που είναι η κύρια δραστική ουσία του ευβιοτικού.

Στη συνέχεια, το στέλεχος Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) συνεπωάζεται με καθένα από τα στελέχη ευκαιριακών μικροοργανισμών σε φυσιολογικό διάλυμα.

Επακόλουθη σπορά του μείγματος σε θρεπτικό υπόστρωμα σύμφωνα με τον Χρυσό.

Η σπορά πραγματοποιείται σε θρεπτικό άγαρ με και χωρίς πενικιλίνη σε συγκέντρωση 0,01 U/ml.

Εάν ανιχνευθεί μείωση στον αριθμό των ευκαιριακών μικροοργανισμών σε ένα μέσο με πενικιλίνη σε σύγκριση με τον αριθμό των ευκαιριακών μικροοργανισμών σε ένα μέσο χωρίς πενικιλλίνη, η παρουσία ανταγωνιστικής δραστηριότητας του στελέχους Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) έναντι στελεχών ευκαιριακών μικροοργανισμών καθορίζεται?

Παρουσία ανταγωνιστικής δραστικότητας του στελέχους Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) έναντι στελεχών ευκαιριακών μικροοργανισμών, το ευβιοτικό αξιολογείται ως αποτελεσματικό έναντι ενός στελέχους ευκαιριακού μικροοργανισμού που απομονώθηκε από έναν δεδομένο ασθενή κατά τη διάρκεια της δοκιμής για εντερική δυσβίωση.

Η σχέση αιτίου-αποτελέσματος μεταξύ των βασικών διακριτικών χαρακτηριστικών και του επιτευχθέντος αποτελέσματος:

Η ατομικότητα της αναγνώρισης της ανταγωνιστικής δραστηριότητας του στελέχους Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) έναντι ευκαιριακών μικροοργανισμών και, με τη σειρά του, η ατομικότητα της αξιολόγησης της αποτελεσματικότητας των ευβιοτικών, η κύρια δραστική αρχή των οποίων είναι το στέλεχος Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) κατά ευκαιριακών μικροοργανισμών. Οι μικροοργανισμοί που απομονώνονται από έναν ασθενή κατά τη διάρκεια μιας μελέτης για εντερική δυσβίωση διασφαλίζονται με την απομόνωση ευκαιριακών μικροοργανισμών σε καθαρή καλλιέργεια από τα κόπρανα του ατόμου και την απομόνωση μιας καθαρής καλλιέργειας του στελέχους Bacillus cereus IP 5834 (ATCC), ακολουθούμενη από ATCC. επώαση από κοινού σε φυσιολογικό ορό και επιμετάλλωση σύμφωνα με Gold σε θρεπτικό μέσο.

Η σπορά σύμφωνα με το Gold σε θρεπτικό μέσο είναι απαραίτητη για τον προσδιορισμό του αριθμού των κατασταλμένων UPM.

Το θρεπτικό άγαρ με πενικιλίνη σε συγκέντρωση 0,01 U/ml σάς επιτρέπει να καταστείλετε το ευβιοτικό στέλεχος του Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893), χωρίς να διακυβεύεται η βλάστηση των δοκιμαστικών καλλιεργειών, γεγονός που καθιστά δυνατή την ανίχνευση της ανταγωνιστικής δραστηριότητας του B. cereus ενάντια σε ευκαιριακούς μικροοργανισμούς.

Ως δοκιμαστικές καλλιέργειες, μελετήσαμε στελέχη ευκαιριακών μικροοργανισμών που απομονώθηκαν από ασθενείς με εντερική δυσβίωση - 20 απομονώσεις από το καθένα από τα S. aureus, S. epidermidis, Klebsiella spp., E. coli με τυπικές ιδιότητες, E. coli με αλλοιωμένη ενζυμική δραστηριότητα, Enterobacter spp ., Citrobacter spp., Ρ. aeruginosa.

1 ml ενός εναιωρήματος δοκιμαστικών καλλιεργειών UPM σε φυσιολογικό διάλυμα σε τελική συγκέντρωση 109 κυττάρων σύμφωνα με το πρότυπο οπτικής θολότητας αναμείχθηκε με 1 ml ενός εναιωρήματος στελέχους Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893), στην ίδια συγκέντρωση. Για να αποφευχθεί ο πολλαπλασιασμός βακίλλων ή ευκαιριακών βακτηρίων, η χρήση οποιουδήποτε υγρού μέσου καλλιέργειας για την επώαση των αρθρώσεων θεωρήθηκε ακατάλληλη. Το μίγμα επωάστηκε για 48 ώρες στους 37°C. Θεωρήθηκε ότι κατά τη διάρκεια αυτής της περιόδου το UPM πέθανε υπό την επίδραση των μεταβολιτών των βακίλων. Η ποσοτική σπορά πραγματοποιήθηκε με χρήση βρόχου μέτρησης με διάμετρο 3 mm και χωρητικότητα 2 μl σύμφωνα με το Gold. Σπάρθηκαν σε θρεπτικό άγαρ με αντιβιοτικά για την καταστολή των βακίλων και σε μέσο χωρίς αντιβιοτικά για τον έλεγχο της ανάπτυξης και των δύο τύπων καλλιεργειών. Για να αποκλειστούν άλλοι πιθανοί παράγοντες που καταστέλλουν την ανάπτυξη του UPM και των βακίλλων (έλλειψη θρεπτικής βάσης), η σπορά ελέγχου μονοκαλλιεργειών πραγματοποιήθηκε παράλληλα μετά την επώαση υπό παρόμοιες συνθήκες. Ο αριθμός των αναπτυγμένων μικροοργανισμών υπολογίστηκε σύμφωνα με τον πίνακα 1 - Πίνακας υπολογισμού για τον προσδιορισμό του αριθμού βακτηρίων σε 1 ml υγρού 1.

Για την καταστολή της ανάπτυξης βακίλλων στο μέσο σποράς, επιλέχθηκε προηγουμένως ένα εκλεκτικό πρόσθετο - ένα αντιβιοτικό σε συγκέντρωση που καταστέλλει τους βάκιλλους, αλλά δεν αναστέλλει την ανάπτυξη μικροοργανισμών, με βάση δεδομένα για την ευρεία αντίσταση στην πενικιλίνη και τη στρεπτομυκίνη μεταξύ των ελεγμένα ευκαιριακά βακτήρια (ιδιαίτερα εντεροβακτήρια). Διαφορετικές συγκεντρώσεις αντιβιοτικών προστέθηκαν σε θρεπτικό άγαρ που τήχθηκε και ψύχθηκε στους 46-48°C. Κατά τη δοκιμή μέσων με στρεπτομυκίνη, το φάρμακο προστέθηκε σε συγκεντρώσεις 1,0 U/ml, 0,5 U/ml, 0,25 U/ml μέσου. 25 καλλιέργειες UPM και Bacillus cereus στελέχους IP 5832 (ATCC 14893) εμβολιάστηκαν σε συγκέντρωση 109 κύτταρα/ml σε μέσα με και χωρίς αντιβιοτικά. Ωστόσο, η ανάπτυξη των βακίλων δεν κατεστάλη πλήρως - από 109 έως 104 κύτταρα/ml σε μέγιστη συγκέντρωση στρεπτομυκίνης 1,0 U/ml μέσου. Ταυτόχρονα, καλλιέργειες UPM (Klebsiella spp., Enterobacter spp., άτυπο E. coli, Citrobacter spp., S. aureus) που απομονώθηκαν κατά τη διάγνωση της δυσβίωσης καταστέλλονται σε διάφορους βαθμούς από στρεπτομυκίνη σε 74 (96%) τεστ ( Πίνακας 2 - Επιλογή αντιβιοτικού για την καταστολή του στελέχους IP 5832 του Bacillus cereus (ATCC 14893) και της ταυτόχρονης ανάπτυξης ευκαιριακών μικροοργανισμών).

Κατά τη δοκιμή μέσων με πενικιλίνη, το φάρμακο προστέθηκε σε συγκεντρώσεις 0,001 U/ml, 0,01 U/ml, 0,1 U/ml, 1,0 U/ml μέσου. Η σπορά και η καταγραφή των αποτελεσμάτων έγιναν με παρόμοιο τρόπο. Τα ευκαιριακά εντεροβακτήρια δεν καταστέλλονταν ακόμη και με μέγιστη συγκέντρωση πενικιλίνης 1,0 U/ml μέσου. Παρατηρήθηκε πιο έντονη καταστολή του S. aureus. Παρατηρήθηκε ένα αποδεκτό επίπεδο βλάστησης ευκαιριακών βακτηρίων, συμπεριλαμβανομένου του S. aureus, με ταυτόχρονη πλήρη καταστολή του στελέχους Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) σε συγκέντρωση πενικιλίνης 0,01 U/ml θρεπτικού μέσου (Πίνακας 2 - Επιλογή αντιβιοτικού για την καταστολή του στελέχους Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) και την ταυτόχρονη ανάπτυξη ευκαιριακών μικροοργανισμών).

Παρουσία ανταγωνιστικής δραστικότητας του στελέχους Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) έναντι ευκαιριακών μικροοργανισμών, το ευβιοτικό αξιολογείται ως αποτελεσματικό έναντι ενός στελέχους ευκαιριακού μικροοργανισμού που απομονώθηκε από έναν δεδομένο ασθενή κατά τη διάρκεια της δοκιμής για εντερική δυσβίωση.

Επιλέξαμε την ανταγωνιστική δράση του στελέχους IP 5832 Bacillus cereus ως κριτήριο αξιολόγησης για την ατομική αξιολόγηση της αποτελεσματικότητας των ευβιοτικών, η κύρια δραστική αρχή του οποίου είναι το στέλεχος IP 5832 του Bacillus cereus (ATCC 14893), σε σχέση με ένα στέλεχος ευκαιριακών μικροοργανισμών. απομονώθηκε από αυτόν τον ασθενή κατά τη διάρκεια μιας μελέτης για εντερική δυσβίωση (ATCC 14893). Αυτό εξηγείται από το γεγονός ότι η δραστηριότητα του στελέχους Bacillus cereus εμφανίζεται στον εντερικό αυλό και σχετίζεται κυρίως με την υψηλή ανταγωνιστική δραστηριότητα αυτού του στελέχους και όχι με ανταγωνιστικές σχέσεις για τις θέσεις προσκόλλησης στον βλεννογόνο.

Το σύνολο των βασικών διακριτικών χαρακτηριστικών της προτεινόμενης μεθόδου είναι νέο και καθιστά δυνατή την καταστολή του ευβιοτικού στελέχους Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) χωρίς να διακυβεύεται η βλάστηση των δοκιμαστικών καλλιεργειών, η οποία, με τη σειρά της, διασφαλίζει την αναγνώριση της ανταγωνιστικής δραστηριότητας του το ευβιοτικό στέλεχος Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) σε σχέση με ευκαιριακούς μικροοργανισμούς που απομονώθηκαν κατά τη διάρκεια μελέτης για εντερική δυσβίωση από έναν ασθενή, το οποίο μπορεί να χρησιμοποιηθεί για την ατομική αξιολόγηση της αποτελεσματικότητας των ευβιοτικών, η κύρια δραστική αρχή του οποίου είναι ο Bacillus cereus στέλεχος IP 5832 (ATCC 14893), σε σχέση με ευκαιριακούς μικροοργανισμούς που απομονώθηκαν από ασθενή κατά την εξέταση για εντερική δυσβίωση.

Παραδείγματα συγκεκριμένης υλοποίησης:

Μια βακτηριολογική εξέταση των κοπράνων για εντερική δυσβίωση (Αρ. 247) αποκάλυψε Citrobacter freundii σε ποσότητα 5×10 6 CFU/g.

1 ml ενός εναιωρήματος μιας καθαρής καλλιέργειας Citrobacter freundii, που απομονώθηκε από τα κόπρανα του ασθενούς, σε φυσιολογικό διάλυμα σε τελική συγκέντρωση 10 κυττάρων σύμφωνα με το πρότυπο οπτικής θολότητας αναμίχθηκε με 1 ml ενός εναιωρήματος μιας καθαρής καλλιέργειας Bacillus cereus στέλεχος IP 5832 (ATCC 14893), που απομονώθηκε από το ευβιοτικό «Bactistatin», στην ίδια συγκέντρωση. Το μίγμα επωάστηκε για 48 ώρες στους 37°C. Στη συνέχεια, πραγματοποιήθηκε ποσοτική σπορά χρησιμοποιώντας θηλιά μέτρησης με διάμετρο 3 mm και χωρητικότητα 2 μl σε Χρυσό σε θρεπτικό άγαρ με πενικιλίνη σε συγκέντρωση 0,01 U/ml για καταστολή βακίλλων και σε μέσο χωρίς αντιβιοτικά για έλεγχο της ανάπτυξης και των δύο τύπων πολιτισμών. Ο αριθμός των αναπτυγμένων μικροοργανισμών υπολογίστηκε σύμφωνα με τον Πίνακα 1 - Πίνακας υπολογισμού για τον προσδιορισμό του αριθμού βακτηρίων σε 1 ml υγρού.

Στην παραλλαγή ελέγχου, η συγκέντρωση του Citrobacter freundii ήταν 10 8 CFU/g, στην πειραματική παραλλαγή 5 × 10 CFU/g. Αποκαλύφθηκε η ανταγωνιστική δράση του στελέχους Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) έναντι του στελέχους Citrobacter freundii (Νο. 247). Το φάρμακο "Baktisubtil" έχει προσδιοριστεί ότι είναι αποτελεσματικό έναντι του στελέχους του Citrobacter freundii που απομονώθηκε από έναν ασθενή κατά τη διάρκεια μιας μελέτης για εντερική δυσβίωση.

Μια βακτηριολογική εξέταση των κοπράνων για εντερική δυσβίωση (Αρ. 512) αποκάλυψε S aureus σε ποσότητα 10 6 CFU/g.

1 ml ενός εναιωρήματος μιας καθαρής καλλιέργειας S aureus που απομονώθηκε από τα κόπρανα του ασθενούς σε φυσιολογικό διάλυμα σε τελική συγκέντρωση 109 κύτταρα/ml σύμφωνα με το πρότυπο οπτικής θολότητας αναμείχθηκε με 1 ml ενός εναιωρήματος μιας καθαρής καλλιέργειας Bacillus στέλεχος cereus IP 5832 (ATCC 14893), απομονωμένο από το ευβιοτικό “Baktisubtil” », στην ίδια συγκέντρωση. Το μίγμα επωάστηκε για 48 ώρες στους 37°C. Στη συνέχεια, πραγματοποιήθηκε ποσοτική σπορά χρησιμοποιώντας θηλιά μέτρησης με διάμετρο 3 mm και χωρητικότητα 2 μl σε Χρυσό σε θρεπτικό άγαρ με πενικιλίνη σε συγκέντρωση 0,01 U/ml για καταστολή βακίλλων και σε μέσο χωρίς αντιβιοτικά για έλεγχο της ανάπτυξης και των δύο τύπων πολιτισμών. Ο αριθμός των αναπτυγμένων μικροοργανισμών υπολογίστηκε σύμφωνα με τον Πίνακα 1 - Πίνακας υπολογισμού για τον προσδιορισμό του αριθμού βακτηρίων σε 1 ml υγρού.

Στην παραλλαγή ελέγχου, η συγκέντρωση του S aureus ήταν 5×106 CFU/g, στην πειραματική παραλλαγή - 106 CFU/g. Δεν ανιχνεύθηκε ανταγωνιστική δράση του στελέχους Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) έναντι του στελέχους S aureus (αρ. 512). Το φάρμακο "Baktisubtil" προσδιορίζεται ότι είναι αναποτελεσματικό έναντι του στελέχους S aureus που απομονώθηκε από έναν ασθενή κατά τη διάρκεια μιας δοκιμής για εντερική δυσβίωση.

Βακτηριολογική εξέταση κοπράνων για εντερική δυσβίωση (Νο 429) ανέδειξε Klebsiella pneumoniae σε ποσότητα 10 4 CFU/g, Enterobacter agglomerans σε ποσότητα 10 6 CFU/g, Citrobacter freundii σε ποσότητα 10 4 CFU/g, Staphylococcus aureus σε ποσότητα 10 4 CFU/g. G.

1 ml ενός εναιωρήματος μιας καθαρής καλλιέργειας καθενός από τα στελέχη ευκαιριακών μικροοργανισμών που απομονώθηκαν από έναν ασθενή, σε φυσιολογικό διάλυμα σε τελική συγκέντρωση 109 κυττάρων σύμφωνα με το πρότυπο οπτικής θολότητας, αναμίχθηκαν με 1 ml ενός εναιωρήματος ενός καθαρή καλλιέργεια του στελέχους Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893), που απομονώθηκε από ένα ευβιοτικό "Baktisubtil" στην ίδια συγκέντρωση. Έτσι, λήφθηκαν 4 μίγματα στελεχών ευκαιριακών μικροοργανισμών και βακίλων. Τα μίγματα επωάστηκαν για 48 ώρες στους 37°C. Στη συνέχεια, πραγματοποιήθηκε ποσοτική σπορά χρησιμοποιώντας θηλιά μέτρησης με διάμετρο 3 mm και χωρητικότητα 2 μl σε Χρυσό σε θρεπτικό άγαρ με πενικιλίνη σε συγκέντρωση 0,01 U/ml για την καταστολή των βακίλων και σε μέσο χωρίς αντιβιοτικά για τον έλεγχο της ανάπτυξη καθενός από τις απομονωμένες καλλιέργειες. Ο αριθμός των αναπτυγμένων μικροοργανισμών υπολογίστηκε σύμφωνα με τον Πίνακα 1 - Πίνακας υπολογισμού για τον προσδιορισμό του αριθμού βακτηρίων σε 1 ml υγρού.

Στην παραλλαγή ελέγχου, η συγκέντρωση της Klebsiella pneumoniae ήταν 10 8 CFU/g, στην πειραματική παραλλαγή 10 6 CFU/g. Στην παραλλαγή ελέγχου, η συγκέντρωση του Enterobacter agglomerans ήταν 10 7 CFU/g, στην πειραματική παραλλαγή 10 5 CFU/g. Στην παραλλαγή ελέγχου, η συγκέντρωση του Staphylococcus aureus ήταν 10 8 CFU/g, στην πειραματική παραλλαγή 5×10 6 CFU/g. Στην παραλλαγή ελέγχου, η συγκέντρωση του Citrobacter freundii ήταν 10 7 CFU/g, στην πειραματική παραλλαγή 10 6 CFU/g.

Αποκαλύφθηκε η ανταγωνιστική δράση του στελέχους Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) έναντι των στελεχών Klebsiella pneumoniae, Enterobacter agglomerans, Staphylococcus aureus, Citrobacter freundii. Το φάρμακο "Baktisubtil" έχει προσδιοριστεί ότι είναι αποτελεσματικό έναντι αυτών των στελεχών που απομονώθηκαν από έναν δεδομένο ασθενή κατά τη διάρκεια μιας μελέτης για δυσβακτηρίωση.

Βακτηριολογική εξέταση κοπράνων για εντερική δυσβίωση (Αρ. 449) αποκάλυψε Enterobacter agglomerans σε ποσότητα 10 6 CFU/g, Klebsiella pneumoniae σε ποσότητα 5×10 4 CFU/g, Citrobacter freundii σε ποσότητα CFU1 σολ.

1 ml ενός εναιωρήματος μιας καθαρής καλλιέργειας καθενός από τα απομονωμένα στελέχη ευκαιριακών μικροοργανισμών σε φυσιολογικό διάλυμα σε τελική συγκέντρωση 109 κυττάρων σύμφωνα με το πρότυπο οπτικής θολότητας αναμίχθηκαν με 1 ml ενός εναιωρήματος καθαρής καλλιέργειας Bacillus cereus στέλεχος IP 5832 (ATCC 14893), που απομονώθηκε από το ευβιοτικό "Baktisubtil", στην ίδια συγκέντρωση. Έτσι, λήφθηκαν 3 μείγματα στελεχών ευκαιριακών μικροοργανισμών και βακίλων. Τα μίγματα επωάστηκαν για 48 ώρες στους 37°C. Στη συνέχεια, πραγματοποιήθηκε ποσοτική σπορά με θηλιά μέτρησης με διάμετρο 3 mm και χωρητικότητα 2 μl σε Χρυσό σε θρεπτικό άγαρ με πενικιλίνη σε συγκέντρωση 0,01 U/ml για την καταστολή των βακίλων και σε μέσο χωρίς αντιβιοτικά για τον έλεγχο της ανάπτυξη καθενός από τις απομονωμένες καλλιέργειες. Ο αριθμός των αναπτυγμένων μικροοργανισμών υπολογίστηκε σύμφωνα με τον Πίνακα 1 - Πίνακας υπολογισμού για τον προσδιορισμό του αριθμού βακτηρίων σε 1 ml υγρού.

Στην παραλλαγή ελέγχου, η συγκέντρωση του Enterobacter agglomerans ήταν 108 CFU/g, στην πειραματική παραλλαγή 5×107 CFU/g. Στην παραλλαγή ελέγχου, η συγκέντρωση της Klebsiella pneumoniae ήταν 107 CFU/g, στην πειραματική παραλλαγή 5×106 CFU/g. Στην παραλλαγή ελέγχου, η συγκέντρωση του Citrobacter freundii ήταν 107 CFU/g, στην πειραματική παραλλαγή 5×105 CFU/g.

Αποκαλύφθηκε η ανταγωνιστική δράση του στελέχους Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) έναντι του στελέχους Citrobacter freundii· η ανταγωνιστική δράση του στελέχους Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) έναντι του Enterobacter p. Το φάρμακο "Baktisubtil" έχει προσδιοριστεί ότι είναι αποτελεσματικό έναντι του στελέχους του Citrobacter freundii και αναποτελεσματικό έναντι των στελεχών του Enterobacter agglomerans και της Klebsiella pneumoniae που απομονώθηκαν από αυτόν τον ασθενή κατά τη διάρκεια μιας μελέτης για δυσβακτηρίωση.

Μια βακτηριολογική εξέταση των κοπράνων για εντερική δυσβίωση (Αρ. 461) αποκάλυψε Klebsiella pneumoniae σε ποσότητα 10 6 CFU/g και Citrobacter freundii σε ποσότητα 10 6 CFU/g.

1 ml ενός εναιωρήματος μιας καθαρής καλλιέργειας καθενός από τα απομονωμένα στελέχη ευκαιριακών μικροοργανισμών σε φυσιολογικό διάλυμα σε τελική συγκέντρωση 109 κυττάρων σύμφωνα με το πρότυπο οπτικής θολότητας αναμίχθηκαν με 1 ml ενός εναιωρήματος καθαρής καλλιέργειας Bacillus cereus στέλεχος IP 5832 (ATCC 14893), που απομονώθηκε από το ευβιοτικό "Baktisubtil", στην ίδια συγκέντρωση. Έτσι, λάβαμε 2 μείγματα στελεχών ευκαιριακών μικροοργανισμών και βακίλλων. Τα μίγματα επωάστηκαν για 48 ώρες στους 37°C. Στη συνέχεια, πραγματοποιήθηκε ποσοτική σπορά χρησιμοποιώντας θηλιά μέτρησης με διάμετρο 3 mm και χωρητικότητα 2 μl σε Χρυσό σε θρεπτικό άγαρ με πενικιλίνη σε συγκέντρωση 0,01 U/ml για την καταστολή των βακίλων και σε μέσο χωρίς αντιβιοτικά για τον έλεγχο της ανάπτυξη όλων των απομονωμένων πολιτισμών. Ο αριθμός των αναπτυγμένων μικροοργανισμών υπολογίστηκε σύμφωνα με τον Πίνακα 1 - Πίνακας υπολογισμού για τον προσδιορισμό του αριθμού βακτηρίων σε 1 ml υγρού.

Στην παραλλαγή ελέγχου, η συγκέντρωση της Klebsiella pneumoniae ήταν 107 CFU/g, στην πειραματική παραλλαγή 5×105 CFU/g. Στην παραλλαγή ελέγχου, η συγκέντρωση του Citrobacter freundii ήταν 10 8 CFU/g, στην πειραματική παραλλαγή 5×10 7 CFU/g.

Αποκαλύφθηκε η ανταγωνιστική δράση του στελέχους Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) έναντι του στελέχους Klebsiella pneumoniae και η ανταγωνιστική δράση του στελέχους Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) έναντι του Citrobacter που δεν ανιχνεύθηκε. Το φάρμακο "Baktisubtil" έχει προσδιοριστεί ότι είναι αποτελεσματικό έναντι του στελέχους Klebsiella pneumoniae και αναποτελεσματικό έναντι του στελέχους Citrobacter freundii που απομονώθηκε από αυτόν τον ασθενή κατά τη διάρκεια μιας μελέτης για δυσβακτηρίωση.

Χρησιμοποιώντας το αναπτυγμένο μέσο με πενικιλίνη σε συγκέντρωση 0,01 U/ml, μελετήθηκε ο ανταγωνισμός του στελέχους Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) και 96 UPM καλλιέργειες που απομονώθηκαν σε σημαντικές ποσότητες κατά τη διάρκεια της μελέτης για εντερική δυσβίωση: Citrobacter spp. (16 στελέχη), Klebsiella spp. (17), S. aureus (18), Enterobacter spp. (15), τυπικό E. coli (15), E. coli με άτυπες ιδιότητες (15). Η ανταγωνιστική δράση του ευβιοτικού αξιολογήθηκε από τον αριθμό των στελεχών των δοκιμασμένων μικροοργανισμών που κατέστειλε (σε%) (Πίνακας 3 - Ανταγωνισμός του στελέχους Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) και ευκαιριακών μικροοργανισμών).

Μελέτες έχουν δείξει ότι το μελετημένο στέλεχος του Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) καταστέλλει το 17,7% (17 απομονώσεις) των ελεγμένων στελεχών UPM.

Ωστόσο, η μείωση του αριθμού των ευκαιριακών μικροοργανισμών ήταν ασήμαντη - κατά 0,5-2 lg. Το 79,0% (81 απομονώσεις) των ελεγμένων στελεχών αποδείχθηκε ανθεκτικό και μάλιστα ικανό να αναπαραχθεί παρουσία ευβιοτικού.

Η μέθοδος της εφεύρεσης καθιστά δυνατή την καταστολή του ευβιοτικού στελέχους Bacillus cereus στέλεχος IP 5832 (ATCC 14893) χωρίς να διακυβεύεται η βλάστηση των δοκιμαστικών καλλιεργειών, το οποίο, με τη σειρά του, διασφαλίζει την αναγνώριση της ανταγωνιστικής δραστηριότητας του ευβιοτικού στελέχους Bacillus cereus (IPATCC2 IP 583 14893) έναντι ενός στελέχους ευκαιριακού μικροοργανισμού, που απομονώθηκε κατά τη διάγνωση της εντερικής δυσβίωσης σε έναν ασθενή, το οποίο μπορεί να χρησιμοποιηθεί για την ατομική αξιολόγηση της αποτελεσματικότητας των ευβιοτικών, η κύρια δραστική αρχή του οποίου είναι το στέλεχος Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893), έναντι ευκαιριακών μικροοργανισμών που απομονώθηκαν από τον ασθενή κατά τη διάρκεια μελέτης για εντερική δυσβίωση.

Τραπέζι 1
Πίνακας υπολογισμού για τον προσδιορισμό του αριθμού βακτηρίων σε 1 ml υγρού
ΕΝΑ	Εγώ	II	III	Ποσότητα σε 1 ml
1-6	-	-		<1000
8-20	-	-	-	3000
20-30	-	-	-	5000
30-60	-	-	-	10000
70-80	-	-	-	50000
100-150	5-10	-	-	100000
δεν υπολογίζονται	20-30	-	-	500000
-"-	40-60	-	-	1 εκατομμύριο
-"-	100-150	10-20	-	5 εκατομμύρια
-"-	δεν υπολογίζονται	30-40	-	10 εκατομμύρια
-"-	-"-	60-80	Μονές αποικίες	100 εκατομμύρια
πίνακας 2
Επιλογή αντιβιοτικού για την καταστολή του στελέχους Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) και την ταυτόχρονη ανάπτυξη ευκαιριακών μικροοργανισμών
Αύξηση του UMR σε δεδομένη συγκέντρωση αντιβιοτικού, CFU/ml	Αριθμός στελεχών UPM που αναπτύχθηκαν σε δεδομένη συγκέντρωση αντιβιοτικού, abs (%)
Στρεπτομυκίνη, μονάδες/ml μέσου	Πενικιλλίνη, μονάδες/ml μέσου
1,0	0,5	0,25	1,0	0,01	0,01	0,001
10 8 (πανομοιότυπο με τον έλεγχο)	1 (4)	8 (32)	10 (40)	16 (64)	19 (76)	22 (88)	23 (92)
10 6	4 (16)	2 (8)	0	4 (16)	3 (12)	3 (12)	2 (8)
10 5	15 (60)	12 (48)	15 (60)	5 (20)	3 (12)	0	0
10 4	3 (12)	3(12)	0	0	0	0	0
<10 4	2 (8)	0	0	0	0	0	0
Ανάπτυξη του Bacillus cereus σε δεδομένη συγκέντρωση αντιβιοτικού, CFU/ml	10 4	10 4	10 4	Ots.	Ots.	Ots.	10 4

Πίνακας 3
Ανταγωνισμός του στελέχους Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) και ευκαιριακών μικροοργανισμών
Καλλιέργειες δοκιμής UPM	Αριθμός στελεχών	Ευαίσθητα στελέχη κοιλιακούς (%)	Ανθεκτικά στελέχη κοιλιακούς (%)*
Μείωση κατά 1 lg	Μειώστε κατά 2 lg	Ολικά ανθεκτικά στελέχη	Από αυτά, είναι ικανά να αναπτυχθούν παρουσία ευβιοτικού**
Klebsiella spp.	17	1 (5,9)	0	16(94,1)	1 (6.25)
Enterobacter spp.	15	4 (26,7)	1 (6,6)	10 (66,7)	1(10)
Citrobacter spp.	16	5(31,3)	0	11 (68,7)	1 (9,1)
τυπικό E. coli	15	1 (6,7)	0	14 (93,3)	0
άτυπο E. coli	15	2(13,3)	0	13 (86,7)	1 (7,7)
S. aureus	20	3 (15,0)	0	17 (85,0)	6 (35,3)
* - ο αριθμός των UPM δεν άλλαξε σε σύγκριση με τον έλεγχο ή άλλαξε κατά όχι περισσότερο από 0,5 lg ** - ο αριθμός των UPM αυξήθηκε σε σύγκριση με τον έλεγχο

Πηγές πληροφοριών

1. Osipova I.G., Mikhailova R.A., Sorokulova I.B., Vasilyeva E.A., Gaiderov A.A. Προβιοτικά σπορίων // Journal of microbiology, virology and immunology. - 2003. - Αρ. 3. - Σελ.113-119.

2. Blinkova L.P., Semenova S.A., Butova L.G. και άλλα Ανταγωνιστική δράση πρόσφατα απομονωμένων στελεχών βακτηρίων του γένους Bacillus // Journal of microbiology, virology and immunology. - 1994. - Αρ. 5. - Σ.71-75.

3. Στελέχη βακτηρίων Bacillus subtilis και Bacillus licheniformis, που χρησιμοποιούνται ως συστατικά ενός φαρμάκου κατά των ιογενών και βακτηριακών λοιμώξεων και ενός φαρμάκου που βασίζεται σε αυτά τα στελέχη. / Patent RU 2142287, δημοσίευση. 10/12/99. - Ταύρος. N20.

4. Ένα στέλεχος βακτηρίων Bacillus subtilis με ευρύ φάσμα ανταγωνιστικής δράσης. / Patent RU N2182172, δημοσίευση. 05/10/02.

5. Gataullin A.G., Mikhailova N.A., Blinkova L.P., Romanenko E.E., Elkina S.I., Gaiderov A.A., Kalina N.G. Ιδιότητες απομονωμένων στελεχών Bacillus subtilis και η επίδρασή τους στην εντερική μικροχλωρίδα πειραματικών ποντικών // Journal of Microbiology, Virology and Immunology. - 2004. - Αρ. 2. - Σ.91-94.

6. Davydov D.S., Mefed K.M., Osipova I.G., Vasilyeva E.A. Παγκόσμια χρήση των προβιοτικών σπορίων στην πρακτική της υγείας // Κλινική διατροφή. - 2007. - Αρ. 1-2. - S.A36.

7. Sorokulova I.B. Η επίδραση των προβιοτικών από τους βάκιλλους στη λειτουργική δραστηριότητα των μακροφάγων // Αντιβιοτικά και χημειοθεραπεία. - 1998. - Αρ. 2. - Σελ.20-23.

8. Blinkova L.P. Βακτηριοσίνες: κριτήρια, ταξινόμηση, ιδιότητες, μέθοδοι ανίχνευσης // Journal of Microbiology, Virology and Immunology. - 2003. - Αρ. 3. - Σ.109-113.

9. Postnikova E.A., Efimov B.A., Volodin N.N., Kafarskaya L.I. Αναζήτηση υποσχόμενων στελεχών bifidobacteria και lactobacilli για την ανάπτυξη νέων βιολογικών προϊόντων // Journal of microbiology, epidemiology and immunology. - 2004. - Αρ. 2. Σ.64-69.

10. Gratia A., Fredericq P. Deversite des souches antibiotiques de Escherichia coli et étendue varibile de leur champ d'action Ibid: 1031-1033.

11. Fredericq P. Actions antibiotiques reciproques chez les Enterobacteriaceae. ΣΤΡΟΦΗ ΜΗΧΑΝΗΣ. Belge Pathol. Med. Exp.1948, 19(Suppl. 4): 1-107.

12. Ermolenko E.I., Isakov V.A., Zhdan-Pushkina S.Kh., Tets V.V. Ποσοτική αξιολόγηση της ανταγωνιστικής δραστηριότητας των γαλακτοβακίλλων // Journal of microbiology, virology and immunology. - 2004. - Αρ. 5. - Σ.94-98.

13.Ushakova N.A., Chernukha B.A. Η επίδραση του θερμοκρασιακού σοκ στη βιολογική αποτελεσματικότητα του προβιοτικού Bacillus subtilis 8130 // Κλινική διατροφή. - 2007. - Αρ. 1-2. - S.A70.

14. Arzumanyan V.G., Mikhailova N.A., Gaiderov A.A., Basnakyan I.A., Osipova I.G. Μια ποσοτική μέθοδος για την αξιολόγηση του καθυστερημένου ανταγωνισμού προβιοτικών καλλιεργειών έναντι ευκαιριακών ζυμομυκήτων // Κλινική εργαστηριακή διάγνωση. - 2005. - Αρ. 5. Σ.53-54.

15. Μέθοδος προσδιορισμού της ανταγωνιστικής δράσης των προβιοτικών. / RU Patent No. 2187801, δημοσίευση. 20/08/2002.

16. Zykova N.A., Molokeeva N.V. Νέο προβιοτικό φάρμακο "Trilact" // Κλινική διατροφή. - 2007. - Αρ. 1-2. - S.A42.

17. Οδηγίες για τη χρήση ενοποιημένων μεθόδων μικροβιολογικής (βακτηριολογικής) έρευνας σε κλινικά διαγνωστικά εργαστήρια: Παράρτημα 1 στη διαταγή του Υπουργείου Υγείας της ΕΣΣΔ Νο. 535. - 1986.

18. Sanford Jay P., Gilbert David N., Moeliering Robert C. Jr., Sande Merle A. Twenty-neth edition The Sanford Guide to antimicrobial therapy, 1999.

ΑΠΑΙΤΗΣΗ

Μια μέθοδος για την ατομική αξιολόγηση της αποτελεσματικότητας των ευβιοτικών, η κύρια δραστική αρχή της οποίας είναι το στέλεχος Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893), έναντι ευκαιριακών μικροοργανισμών που απομονώθηκαν από ασθενή κατά τη διάρκεια μελέτης για εντερική δυσβίωση, η οποία συνίσταται στην απομόνωση ευκαιριακών μικροοργανισμών σε καθαρή μορφή καλλιέργεια από τα κόπρανα του ατόμου, στη συνέχεια ο Bacillus cereus STRAIN IP 5832 (ATCC 14893) απομονώνεται σε καθαρή καλλιέργεια, μετά την οποία το στέλεχος Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) επωάζεται ταυτόχρονα με καθένα από τα στελέχη ευκαιριακών μικροοργανισμών διάλυμα, ακολουθούμενη από σπορά σύμφωνα με το Gold σε θρεπτικό άγαρ με και χωρίς πενικιλίνη σε συγκέντρωση 0,01 U/ml, και εάν ανιχνευθεί μείωση στον αριθμό των ευκαιριακών μικροοργανισμών σε ένα μέσο με πενικιλίνη σε σύγκριση με τον αριθμό των ευκαιριακών μικροοργανισμών σε μέσο χωρίς πενικιλίνη, η παρουσία ανταγωνιστικής δραστηριότητας του στελέχους Bacillus cereus IP 5832 προσδιορίζεται (ATCC 14893) έναντι ενός στελέχους ευκαιριακού μικροοργανισμού, όπου το ευβιοτικό αξιολογείται ως αποτελεσματικό έναντι ενός στελέχους ευκαιριακού μικροοργανισμού που απομονώνεται από έναν δεδομένο ασθενή όταν ελεγμένο για εντερική δυσβίωση.

Ως χειρόγραφο

Gataullin Airat Gafuanovich

ΒΙΟΛΟΓΙΚΕΣ ΙΔΙΟΤΗΤΕΣ ΤΩΝ ΣΤΕΛΕΧΩΝ BACILLUS SUPTILIS ΠΟΥ ΕΙΣΧΟΝΤΑΙ ΓΙΑ ΤΗ ΔΗΜΙΟΥΡΓΙΑ ΝΕΩΝ ΠΡΟΒΙΟΤΙΚΩΝ

διατριβή για το πτυχίο του υποψηφίου βιολογικών επιστημών

Μόσχα - 2005

Η εργασία διεξήχθη στο Κρατικό Ίδρυμα Επιστημονικής Έρευνας Ινστιτούτο Εμβολίων και Ορών που ονομάστηκε έτσι. ΟΛΑ ΣΥΜΠΕΡΙΛΑΜΒΑΝΟΝΤΑΙ. Mechnikov RAMS, Μόσχα.

Επιστημονικοί Υπεύθυνοι: Διδάκτωρ Ιατρικών Επιστημών,

Η καθηγήτρια Mikhailova N.A. Διδάκτωρ Βιολογικών Επιστημών Blinkova L.P.

Επίσημοι αντίπαλοι: Διδάκτωρ Ιατρικών Επιστημών,

Ο καθηγητής Baturo A.P. Διδάκτωρ Ιατρικών Επιστημών, Καθηγητής Likhoded V.G.

Κορυφαίος οργανισμός: Ομοσπονδιακή Υπηρεσία για την Εποπτεία της Προστασίας των Δικαιωμάτων των Καταναλωτών και της Ανθρώπινης Ευημερίας Εθνικός φορέας ελέγχου Ομοσπονδιακό κρατικό επιστημονικό ίδρυμα GosNII για την τυποποίηση και τον έλεγχο των ιατρικών βιολογικών παρασκευασμάτων που φέρει το όνομά του. ΛΑ. Ταράσεβιτς

Η υπεράσπιση θα πραγματοποιηθεί ¿3" και το 2005 στις 14:00 σε συνεδρίαση του συμβουλίου διατριβής D 001.035.01 στο Κρατικό Ινστιτούτο Ερευνών Εμβολίων και Ορών με το όνομα I.I. Mechnikov RAMS στη διεύθυνση: 105064, Μόσχα, Maly Kazenny λωρίδα, αρ. 5α.

Η διατριβή βρίσκεται στη βιβλιοθήκη του Κρατικού Ινστιτούτου Ερευνών Εμβολίων και Ορών με το όνομα I.I. Mechnikov RAMS.

Επιστημονικός Γραμματέας

συμβούλιο διατριβής

Υποψήφιος Βιολογικών Επιστημών

ΓΕΝΙΚΗ ΠΕΡΙΓΡΑΦΗ ΕΡΓΑΣΙΑΣ

Συνάφεια του προβλήματος

Στην ιατρική μικροβιολογία, έχουν συσσωρευτεί δεδομένα που δικαιολογούν τη χρήση σαπροφυτικής μικροχλωρίδας για τη διόρθωση δυσβιοτικών διαταραχών, μικροοργανισμοί των οποίων, κατά τη διάρκεια της ζωτικής τους δραστηριότητας, παράγουν βιολογικά δραστικές ουσίες (BAS) που καταστέλλουν την ανάπτυξη παθογόνων μικροοργανισμών [Mikhailova N.A. et al., 1993; Mazankova L.N. et al, 1997; Osipova I.G. et al., 2003].

Τα θεραπευτικά και προφυλακτικά φάρμακα που βασίζονται σε ζωντανά μη παθογόνα μικρόβια, ικανά να παρέχουν, μέσω μιας φυσικής μεθόδου χορήγησης, ευεργετικά αποτελέσματα στις φυσιολογικές και βιοχημικές λειτουργίες του σώματος του ξενιστή μέσω της βελτιστοποίησης της μικροβιολογικής του κατάστασης, ταξινομούνται ως προβιοτικά φάρμακα [Shenderov B.A. , 1997].

Για την πρόληψη και τη θεραπεία ασθενειών του γαστρεντερικού σωλήνα, χρησιμοποιούνται ευρέως βιολογικά προϊόντα που βασίζονται σε ζωντανές μικροβιακές καλλιέργειες βακτηρίων που σχηματίζουν σπόρους [Slabospitskaya A.T. et al., 1990; Nikitenko V.I., 1991; Nikitenko L.I., Nikitenko V.I., 1992; Smirnov V.V. et al., 1995; Shenderov B.A. et al., 1997; Pobery IA. et al., 1998].

Το γένος Bacillus έχει προσελκύσει την προσοχή των ερευνητών από την αρχαιότητα. Οι πληροφορίες που λαμβάνονται στον τομέα της μικροβιολογίας, της βιοχημείας, της φυσιολογίας και της γενετικής των βακτηρίων υποδεικνύουν τα πλεονεκτήματα του Bacillus ως παραγωγών βιολογικά δραστικών ουσιών: ένζυμα, αντιβιοτικά, εντομοκτόνα [Smirnov V.V. et al., 1982; Parshina S.N. et al, 1990; Harwood Κ., 1992; Blinkova L.P. et al, 1994].

Η ποικιλομορφία των μεταβολικών διεργασιών, η γενετική και βιοχημική μεταβλητότητα, η αντίσταση στα λυτικά και πεπτικά ένζυμα χρησίμευσαν ως σκεπτικό για τη χρήση των βακίλων σε διάφορους τομείς της ιατρικής. Ο Οργανισμός Τροφίμων και Φαρμάκων των ΗΠΑ έχει εκχωρήσει στο B. subtilis GRAS (γενικά θεωρείται ασφαλές) το καθεστώς, το οποίο αποτελεί προϋπόθεση για τη χρήση τους στην παραγωγή φαρμάκων [Harwood K., 1992; Nikitenko L.I., 1992; Kandybin N.V. et al., 1995; Ivanovsky A.A., 1996, 1997; Boyko N.V. et al., 1997; Payne J. M, 1992; Kubo K, 1994; Tsuge Κ. et al., 1995; Rychen G. et al., 1995, Donovan W.P. et al., 1995].

Η δραστηριότητα πολλών εκπροσώπων του γένους Bacillus είναι έντονη και εκδηλώνεται ενάντια σε ένα ευρύ φάσμα παθογόνων και υπό όρους παθογόνους μικροοργανισμούς.Χάρη στη σύνθεση διαφόρων ενζύμων και άλλων ουσιών, ρυθμίζουν και διεγείρουν την πέψη, έχουν αντιαλλεργική και αντιτοξική δράση. Η χρήση βακίλλων αυξάνει σημαντικά τη μη ειδική αντίσταση του μακροοργανισμού.Επιπλέον, αυτοί οι μικροοργανισμοί είναι τεχνολογικά προηγμένης παραγωγής, σταθεροί κατά την αποθήκευση και, κυρίως, φιλικοί προς το περιβάλλον [Soroku Yu-va IB, 1996]

Το είδος B sub lilts παρουσιάζει μεγαλύτερο ενδιαφέρον για τη βιοτεχνολογία. Για αυτό έχει δημιουργηθεί μια τράπεζα δεδομένων για τη μοριακή γενετική, η SubtiList, στην οποία καταχωρούνται όλες οι πληροφορίες σχετικά με το βακτηριακό γονιδίωμα.

Τα βακτήρια B subtilis χρησιμοποιούνται ευρέως στην τεχνολογία παραγωγής ενός αριθμού βακτηριακών και ενζυμικών παρασκευασμάτων [Shablinskas AI, 1990, Gulko MA, 1994, Gastro GR, 1992, Dercova K et al, 1992, Kudrya VA, 1994, Lin S-Cet , 1994, Cromwick AM et al, 1996, Buchell M E et al, 1997, Oh M K et al, 1995]

Στη βάση τους, έχουν δημιουργηθεί παρασκευάσματα - προβιοτικά, που χαρακτηρίζονται από ένα ευρύ φάσμα θεραπευτικών και προφυλακτικών επιδράσεων και περιβαλλοντικής ασφάλειας [Nakhabin IM, Perelygin VV, 1996] Τα προβιοτικά σπορίων χρησιμοποιούνται αποτελεσματικά για τη θεραπεία γαστρεντερικών ασθενειών σε ανθρώπους και ζώα εκτροφής [MPTopchiy, 1997, VGuida , 1978, Kharchenko, 1980, Nikitenko V I, 1992]

Τα πιο γνωστά φάρμακα επί του παρόντος είναι τα ακόλουθα φάρμακα: bactisu btil, sporobacterin, biosporin, bactisporin, subalin, cereobiogen, enterogermin και άλλα [Smirnov VV et al. 1988, 1992, 1995,1997, Nikitenko V19,19, 1992, Gracheva N M et al, 1996, Vinnik Yu Si et al, 1998, Sorokulova I B, 1996, 1997, St gard H, 1989, Maruta K, 1996, Su Li et al, 1996, Adami A et al, 1997],

Η θεραπευτική αποτελεσματικότητα των προβιοτικών των σπορίων διασφαλίζεται από τις βιολογικές ιδιότητες των στελεχών που χρησιμοποιούνται για την παραγωγή τους.Το φάσμα της ανταγωνιστικής τους δράσης έναντι παθογόνων και υπό όρους παθογόνων μικροοργανισμών, που αποτελούν μία από τις αιτίες ανωμαλιών, είναι καθοριστικής σημασίας.

Οι εξελίξεις της μικροοικολογίας σε διάφορους βιοτόπους του ανθρώπινου ή ζωικού σώματος Επιπλέον, δεν μπορεί κανείς να αγνοήσει την ικανότητα των βακίλλων να παράγουν διάφορες βιολογικά δραστικές ουσίες, όπως πολυπεπτιδικά αντιβιοτικά, ένζυμα, βακτηριοσίνες κ.λπ., καθώς και την αντοχή τους στα αντιβιοτικά.

Στόχος της εργασίας:

Να μελετήσει τις βιολογικές ιδιότητες απομονωμένων στελεχών B.subtilis και να αξιολογήσει τη δυνατότητα χρήσης τους για την ανάπτυξη ενός πρωτότυπου προβιοτικού σπορίων

Στόχοι της έρευνας:

Επιστημονική καινοτομία.

Με βάση τη μελέτη των μορφολογικών, φυσιολογικών-βιοχημικών, γενετικών και άλλων βιολογικών ιδιοτήτων των απομονωθέντων στελεχών, επιλέχθηκε ένα στέλεχος Β. subtilis 1719 χωρίς πλασμίδια, το οποίο εμφανίζει ανταγωνισμό σε ευκαιριακούς και παθογόνους μικροοργανισμούς διαφόρων ταξινομικών ομάδων, έχει χαμηλή πρόσφυση δραστηριότητα, και είναι ανθεκτικό στη γενταμυκίνη, την πολυμυξίνη και την ερυθρομυκίνη.

Προσεγγίσεις για τη δημιουργία τεχνολογίας παραγωγής έχουν τεκμηριωθεί πειραματικά, συμπεριλαμβανομένης της μελέτης των ιδιοτήτων ανάπτυξης του στελέχους B.subilhs 1719 σε πρωτότυπα θρεπτικά μέσα, των συνθηκών σταθεροποίησης της βιωσιμότητάς του και της ανταγωνιστικής του δράσης ως στάδια για τη λήψη ενός νέου προβιοτικού φαρμάκου

Κατατέθηκε αίτηση για εφεύρεση (αρ. 2005111301 με ημερομηνία 19 Απριλίου 2005): «Το βακτηριακό στέλεχος Bacillus subtllll.4 1719 είναι παραγωγός ανταγωνιστικά ενεργής βιομάζας έναντι παθογόνων μικροοργανισμών, καθώς και πρωτεολυτικών, αμυλολυτικών ενζύμων και λιβενίων».

Πρακτική σημασία.

Το απομονωμένο και ταυτοποιημένο στέλεχος B.SllbtlllS 1719 κατατέθηκε στην Κρατική Συλλογή Καλλιεργειών GISC που πήρε το όνομά του. ΛΑ. Tarasevich με αριθμό 277 και μπορεί να προταθεί για την ανάπτυξη βιομηχανικής τεχνολογίας για την παραγωγή ενός πρωτότυπου βιοθεραπευτικού προβιοτικού φαρμάκου.

1. Τα ταυτοποιημένα τρία στελέχη βακτηριακών καλλιεργειών αντιστοιχούν στο είδος B. suhlllts ως προς τις μορφολογικές, φυσιολογικές, βιοχημικές και άλλες ιδιότητες. Δεν περιέχουν πλασμίδια, είναι ανταγωνιστικά ενεργά έναντι ευκαιριακών και παθογόνων βακτηρίων διαφορετικών ταξινομικών ομάδων και έχουν χαμηλό ή μεσαίο επίπεδο προσκόλλησης.

2. Το στέλεχος B.subtlhs 1719 έχει προβιοτικές ιδιότητες, που εκδηλώνονται στην εξάλειψη ευκαιριακών και παθογόνων μικροοργανισμών με την αποκατάσταση της ποσοτικής και ποιοτικής σύνθεσης της φυσιολογικής μικροχλωρίδας σε πειραματική δυσβίωση και επίσης έχει ανοσοτροποποιητική επίδραση στον μακροοργανισμό.

Έγκριση εργασιών

Υλικά που παρουσιάστηκαν στο συνέδριο «Λειτουργική διατροφή, ασφάλεια τροφίμων και ανθρώπινη υγεία σε μια μητρόπολη» (Μόσχα, 2003). στον διαγωνισμό νέων επιστημόνων του Κρατικού Ινστιτούτου Ερευνών Ιδρυμάτων που φέρει το όνομα. Ι.Ι. Mechnikov (Μόσχα, 2004); στην κοινωνία

VOEMP (Μόσχα, 2004); στην 8η Διεθνή Σχολή Πούτιν-Συνέδριο Νέων Επιστημόνων «Βιολογία - η επιστήμη του 21ου αιώνα» (Pushchino, 2004); στο 5ο Συνέδριο της Επιστημονικής Εταιρείας Γαστρεντερολόγων (Μόσχα 2005).

Η έγκριση της διατριβής πραγματοποιήθηκε στο επιστημονικό συνέδριο του τμήματος μικροβιολογίας του NIIWS. Ι.Ι. Mechnikov RAMS (Μόσχα, Μάιος 2005).

Πεδίο και δομή της διπλωματικής εργασίας

Η διατριβή παρουσιάζεται σε 131 σελίδες. Αποτελείται από εισαγωγή, βιβλιογραφική ανασκόπηση (2 κεφάλαια), ίδια αποτελέσματα (5 κεφάλαια), συμπέρασμα και συμπεράσματα. Ο κατάλογος των αναφορών περιλαμβάνει: 236 πηγές (169 εγχώριες και 67 ξένες). Το έργο περιέχει 10 σχήματα και 19 πίνακες.

Αντικείμενα έρευνας

Στελέχη: Bacillus subtilis που απομονώθηκε από διάφορες περιβαλλοντικές πηγές.

Καλλιέργειες μικροοργανισμών που απομονώθηκαν από ποντίκια με πειραματική δυσβίωση.

Δοκιμή - καλλιέργειες που χρησιμοποιούνται για τον προσδιορισμό της ανταγωνιστικής δραστηριότητας, από τη συλλογή του GISK που πήρε το όνομά του. ΛΑ. Ταράσεβιτς

Θρεπτικά μέσα:

Άγαρ πεπτόνης κρέατος (MPA), ζωμός πεπτόνης κρέατος (MPB), τροποποιημένο μέσο Gause Νο. 2, θρεπτικό άγαρ με προσθήκη 7% NaCl - για καλλιέργειες καλλιέργειας, 5% άγαρ αίματος για προσδιορισμό αιμολυτικών ιδιοτήτων, ζωμός αυγού για δοκιμή δραστηριότητας λεκιθινάσης , αγαρ καζεΐνης και πατάτας για τον προσδιορισμό των ενζυματικών ιδιοτήτων, AGV - για την αξιολόγηση της αντοχής στα αντιβιοτικά.

Οι βιοχημικές ιδιότητες των βακίλων προσδιορίστηκαν σε μέσα Omelyansky με δείκτη μπλε βρωμοθυμόλης και υδατάνθρακες - γλυκόζη, ξυλόζη, μαννιτόλη, λακτόζη, σακχαρόζη, μαλτόζη, σαλικίνη και εσκουλίνη. Για καλλιέργειες χωρίς σπόρους, χρησιμοποιήθηκαν μέσα Hiss που περιέχουν υδατάνθρακες και μέσα με αμινοξέα.

Η χρήση κιτρικού και προπιονικού άλατος δοκιμάστηκε σε μέσο Coser και η ικανότητα αναγωγής νιτρικών δοκιμάστηκε σε ζωμό με νιτρικά. Προσδιορισμός ακετοΐνης σε μέσο

(αντίδραση Voges-Proskauer) πραγματοποιήθηκε στο μέσο του Clark. Η ικανότητα παραγωγής υδρόθειου μελετήθηκε στο μέσο του Kligler. Η δράση της καταλάσης ανιχνεύθηκε σε μια αντίδραση με H2O2, η ικανότητα των καλλιεργειών να παράγουν ινδόλη ανιχνεύθηκε σε ζωμό θρεπτικών συστατικών με χαρτί δείκτη. ένζυμο ουρεάσης - σε θρεπτικό υλικό Christensen με ουρία.

Επιπλέον, για τη μελέτη της δομής της μικροχλωρίδας των ποντικών, χρησιμοποιήσαμε κρύο ζωμό ορού γάλακτος και διάλυμα Hanks, διαφορικά διαγνωστικά μέσα: Endo, CI-agar, Ploskireva, σταφυλοκοκκικά και εντεροκοκκικά άγαρ, 88-agar, Mac-Sopkay μέσο, ​​cetrimide άγαρ, μέσο Blaurock, thioglycollate Wednesday, Wilson Blair Wednesday και άλλα.

Για την αξιολόγηση των ιδιοτήτων ανάπτυξης, χρησιμοποιήθηκαν τα ακόλουθα μέσα:

Ημι-συνθετικό μέσο με την προσθήκη υδρόλυσης πατάτας-γλυκερίνης [Mikhailova N.A. 1995].

Μέσο Νο. 5 (g/l): διυποκατεστημένο φωσφορικό κάλιο 3-νερό - 0,3; διυποκατεστημένο θειικό αμμώνιο - 2; κιτρικό νάτριο 5,5-υδατικό - 2; θειικός χαλκός 5-νερό - 0,005; θειικός ψευδάργυρος 7-νερό - 0,004; θειικό σίδηρο (II) 7-νερό - 0,0005; χλωριούχο ασβέστιο - 0,165; θειικό μαγγάνιο (II) 5-νερό - 0,05; θειικό μαγνήσιο 7-νερό - 0,3; ξηρή ενζυματική πεπτόνη για βακτηριολογικούς σκοπούς - 5.

Μέσο Νο. 9 (g/l): θειικός σίδηρος (II) 7-νερό - 0,01; θειικό μαγνήσιο 7-νερό - 0,1; χλωριούχο ασβέστιο - 0,08; ξηρή ενζυματική πεπτόνη για βακτηριολογικούς σκοπούς - 5,0; γλυκόζη - 10,0, εκχύλισμα μαγιάς - 3.

Μέσο VK-2 (g/l): χλωριούχο μαγγάνιο - 0,01; χλωριούχο ασβέστιο - 0,05; χλωριούχο νάτριο - 5,0; διυποκατεστημένο φωσφορικό νάτριο 12-νερό - 2,0; διυποκατεστημένο 3-νερό φωσφορικό κάλιο - 2,0; γλυκόζη - 10,0, ξηρή ενζυματική πεπτόνη για βακτηριολογικούς σκοπούς - 10,0.

Μέσο SPAS-2 (g/l): διυποκατεστημένο φωσφορικό κάλιο 3-νερό - 2,5; χλωριούχο νάτριο - 5,0; άμυλο - 2,5; Τροποποιημένο προϊόν υδρόλυσης σόγιας - 10,0; ξηρή ενζυματική πεπτόνη για βακτηριολογικούς σκοπούς - 10.0.

Μέσο SPAS-4 (g/l): χλωριούχο νάτριο - 5,0, Τροποποιημένο υδρόλυμα σόγιας - 10,0; εκχύλισμα μαγιάς ζωοτροφών - 1,0; υδρόλυμα οξέος καζεΐνης - 5,0.

Μέσο SPAS-6 (g/l), διυποκατεστημένο 3-νερό φωσφορικό κάλιο - 2,5; χλωριούχο νάτριο - 5,0, καζαμινοξέα 5,0; μη τροποποιημένο υδρόλυμα σόγιας - 10,0, άμυλο - 2,5.

Ερευνητικές μέθοδοι

Η απομόνωση και η ταυτοποίηση των στελεχών μικροοργανισμών πραγματοποιήθηκε με επιμετάλλωση σε διαφορικά διαγνωστικά θρεπτικά μέσα σε τρυβλία Petri ή δοκιμαστικούς σωλήνες. Οι καλλιέργειες τοποθετήθηκαν σε θερμοστάτη στους 37 °C για 18-24 ώρες.Μετά από μέτρηση των καλλιεργειών, παρασκευάστηκαν επιχρίσματα, χρωματίστηκαν με Gram, υποβλήθηκαν σε μικροσκόπιο και επιλέχθηκαν καλλιέργειες βακτηρίων που σχηματίζουν σπόρους [Smirnov V.V., 1983, Murray P.R., 1999 ]

Μελέτη μορφολογίας βακτηριακών αποικιών.

Για να μελετηθεί η μορφολογία των αποικιών στον μικροβιακό πληθυσμό, παρασκευάστηκαν 10πλάσιες αραιώσεις της αρχικής καλλιέργειας σε 0,9% φυσιολογικό διάλυμα και σπάρθηκαν σε μέσο ΜΡΑ [Smirnov V.V., 1983, Murray P.R., 1999].

Μελέτη συγκέντρωσης βιομάζας.

Η συγκέντρωση μικροβιακών κυττάρων στο υγρό καλλιέργειας προσδιορίστηκε χρησιμοποιώντας το πρότυπο βιομηχανικό δείγμα θολότητας GISC που ονομάστηκε έτσι. ΛΑ. Tarasevich για 10 μονάδες.

Προσδιορισμός της ευαισθησίας του στελέχους στα αντιβιοτικά

Η ευαισθησία των στελεχών στα αντιβιοτικά μελετήθηκε με τη μέθοδο της διάχυσης με δίσκο, χρησιμοποιώντας τυπικούς δίσκους εμποτισμένους με αντιβιοτικά σε μέσο AGV [Birger Μ.Ο., 1982; Reshedko G.K., 2003; MUK 4.2.1980-04, 2004]

Οι φυσιολογικές και βιοχημικές ιδιότητες μελετήθηκαν με την ικανότητα χρήσης διαφόρων υδατανθράκων: γλυκόζη, ξυλόζη, μαννιτόλη, σακχαρόζη, μαλτόζη και εσκουλίνη, λακτόζη και σαλικίνη. με το σχηματισμό αερίου κατά τη διάσπαση της γλυκόζης. λόγω της ικανότητάς του να αναπτύσσεται σε μέσα παρουσία 7% NaCl, να μειώνει τα νιτρικά, να παράγει ινδόλη, υδρόθειο, να συνθέτει ένζυμα: ουρεάση, πρωτεάση, αμυλάση και λιπάση. Αξιολογήθηκε επίσης η κινητικότητα των στελεχών.

Η τοξικότητα, η τοξικότητα και η μολυσματικότητα των απομονωθέντων στελεχών προσδιορίστηκαν σε λευκούς εξωγαμικούς ποντικούς βάρους 14-16 g, σύμφωνα με τις συνιστώμενες μεθόδους [Smirnov V.V., 1983, Murray P.R., 1999].

Η συγκολλητική δράση των στελεχών B. subtills προσδιορίστηκε χρησιμοποιώντας τη μέθοδο Brilis B. κατά την αξιολόγηση του δείκτη προσκόλλησης των μικροοργανισμών (MAI), η πρόσφυση θεωρήθηκε χαμηλή όταν η MAI ήταν 1,00 - 2,49, μέτρια όταν η IAM ήταν 2,5 - 3,99, υψηλή όταν IAM > 4,0 [Brilis V I., 1982, 1990]

Η ανταγωνιστική δράση δοκιμάστηκε με τη μέθοδο του καθυστερημένου ανταγωνισμού σε σχέση με εκείνες που προέκυψαν από τη συλλογή του GISC που ονομάστηκε έτσι. Τεστ L.A. Tarasevich - στελέχη που χρησιμοποιούνται στην αξιολόγηση των δεικτών ποιότητας προβιοτικών παρασκευασμάτων, [Boiko N.V., 1989· Blinkova L.P. 1994].

Κυτταροτοξική δοκιμή για τον προσδιορισμό της συγκέντρωσης του TNF-a Η συγκέντρωση του TNF-a προσδιορίστηκε από την κυτταροτοξική επίδραση ορού ποντικού σε κύτταρα στόχους της σειράς L929.

Η φαγοκυτταρική δραστηριότητα των ουδετερόφιλων μελετήθηκε στο κυτταροχημικό τεστ για την αναγωγή του νιτρομπλε τετραζολίου (δοκιμή NBT) με φαγοκύτταρα ποντικού και χρησιμοποιώντας εξαρτώμενη από τη λουμινόλη χημειοφωταύγεια [Zinkin V.Yu., 2004]

Το επίπεδο των κυτοκινών (IL-1P, IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, IL-I2, IFN-γ) σε ορούς ζώων προσδιορίστηκε χρησιμοποιώντας ενζυμική ανοσοπροσροφητική δοκιμασία (ELISA) χρησιμοποιώντας συστήματα δοκιμής από Biosource » (Βέλγιο)

Η πειραματική δυσβίωση διαμορφώθηκε σε λευκά ποντίκια που ζυγίζουν 14-16 g, στα οποία πραγματοποιήθηκε απολύμανση της φυσιολογικής μικροχλωρίδας χρησιμοποιώντας το αντιβιοτικό υδροχλωρική δοξυκυκλίνη (JSC Belmedpreparaty) ή επιλεκτική απολύμανση της υπό όρους παθογόνου βρεγματικής μικροχλωρίδας του παχέος εντέρου με τη χρήση του φαρμάκου fluoroflonaol , Reddy's Lab., Ινδία).

Πραγματοποιήθηκαν μελέτες της μικροχλωρίδας του αυλού και του βρεγματικού τοιχώματος με ανάλυση κοπράνων και τμημάτων του παχέος εντέρου που ελήφθησαν ασηπτικά από ποντίκια [Zudenkov A.E., 2001; Vorobyov A.A., 2001,2003].

Για τον προσδιορισμό της συγκολλητικής δραστηριότητας των εντεροκυττάρων, χρησιμοποιήθηκε μια τροποποίηση της μεθόδου «γάντι» και υπολογίστηκε ο μέσος δείκτης πρόσφυσης (AIA) [Gorskaya N.M., 1994, Brilis V.I., 1982, 1990]

Η ανάλυση πλασμιδικού DNA διεξήχθη χρησιμοποιώντας μια τυπική διαδικασία σχεδιασμένη για καθαρισμό του πλασμιδικού DNA χρησιμοποιώντας αλκαλική λύση [Osterman LD, 1981; Maniatis T. et al., 1984].

Η αξιολόγηση των ιδιοτήτων ανάπτυξης των θρεπτικών μέσων κατά την καλλιέργεια πραγματοποιήθηκε με τη χρήση του αυτοματοποιημένου σταθμού εργασίας μικροβιολόγου και χημειοθεραπευτή "Mikrob-Avtomat" που βασίζεται σε φωτόμετρο ταμπλέτας "Multiskan-Ascent" (Termo-Labsystems, Φινλανδία), εξοπλισμένο με θερμοστάτη και σέικερ Στατιστικές μέθοδοι

Η στατιστική επεξεργασία των αποτελεσμάτων πραγματοποιήθηκε σύμφωνα με γενικά αποδεκτές μεθόδους (Ashmarin I P, Vorobyov A.A., 1962).Τα αποτελέσματα θεωρήθηκαν αξιόπιστα στο p<0,05. Достоверность различий между средними значениями (X) экспериментальных данных оценивали по критерию Стьюдента

ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΑ ΕΡΕΥΝΑΣ Στα αρχικά στάδια της εργασίας, απομονώθηκαν 15 καλλιέργειες βακτηρίων. Αποκαλύφθηκε ότι μόνο 3 στελέχη δεν είχαν δράση αιμολυτικής και λεκιθινάσης (παράγοντες παθογένειας), επομένως επιλέχθηκαν για περαιτέρω μελέτη.

Η μικροσκοπική εξέταση των επιχρισμάτων έδειξε ότι τα στελέχη είναι θετικά κατά Gram, που χαρακτηρίζονται από παρακεντρική και κεντρική εντόπιση των ενδοσπόρων.

Κατά τη μελέτη καλλιεργειών σε θρεπτικό μέσο Gause Νο. 2, τροποποιημένο με άγαρ, τρεις παραλλαγές αποικιών χαρακτηριστικών του

Όλα τα στελέχη είχαν μορφολογικές και φυσιολογικές-βιοχημικές ιδιότητες τυπικές των εκπροσώπων των βακτηρίων.Ήταν κινητά, αναπτύχθηκαν σε ένα μέσο παρουσία 7% NaCl και χαρακτηρίζονταν από ένα σύνολο διαφόρων ενζύμων που διασπούν υποστρώματα όπως γλυκόζη, σακχαρόζη. , μαλτόζη, ξυλόζη, εσκουλίνη, ζελατίνη, άμυλο, καζεΐνη, ανηγμένα νιτρικά, δεν σχημάτισαν υδρόθειο

Είναι γνωστό ότι οι καλλιέργειες B subtilis έχουν έντονες ανταγωνιστικές ιδιότητες έναντι ενός ευρέος φάσματος παθογόνων και υπό όρους παθογόνων μικροοργανισμών. Στην εργασία μας, αυτή η ιδιότητα αξιολογήθηκε χρησιμοποιώντας τη μέθοδο καθυστερημένου ανταγωνισμού, χρησιμοποιώντας στελέχη δοκιμαστικής καλλιέργειας από τη συλλογή του GISC που ονομάστηκε έτσι. ΛΑ. Tarasevich (Πίνακας 1).

Πίνακας 1. Ανταγωνιστική δράση των στελεχών Bacillus subtilis

Ζώνες αναστολής ανάπτυξης των δοκιμαστικών στελεχών (mm) _iX±m)___

Τα μελετηθέντα στελέχη του B.subtilis o g- yi g-fi f) C ^ aureus FDA 209Р S aureus 29213 f, sch Tf GCh £ a o a 0 σε s s 1 S I X. aureus "Filliov" a gch 1 G "s<3 о чО "о ГЧ Г4 О С (N 00 оо гц Гч| M1 "nJ

Ο κ. Ο<Л _ VI m IT) (N о п ГЧ гч +1 fl

Νο. 1719 N + g- G4 f, +1 f! +i

σε O VI O f o oo _ o o O

№ 1594 <Ч| CJ +1 +1 «-I С сч; п!

O O O O o 00 ft 00 o

Νο. 1318 Ni g", +1" +1 o! с> !Nj еч fl +1 О fj +1 fi + m + i + о + Г> f + о ГЧ + О CN ГЧ* +1 О + Гч ГЧ f. +1 (Ν

Τα δεδομένα που ελήφθησαν έδειξαν ότι το επίπεδο ανταγωνιστικής δραστικότητας των στελεχών διέφερε ανάλογα με το στέλεχος δοκιμής που χρησιμοποιήθηκε. Και τα τρία στελέχη είχαν έντονη ανταγωνιστική δράση έναντι δύο ειδών Shigella (Sflexncri 337 και s.sonnei 170), S.aureus FDA 209P, S. aureus "Nikiforov", P.mirabilis 24a, P.vulgans 177, C.albicans E.coli 1882, P.aeruginosa 9022 και E.coh 212 (O157:H7), με τα υψηλότερα ποσοστά να ανιχνεύονται στο στέλεχος B.subtilis 1719, το οποίο επίσης έδειξε ανταγωνισμό έναντι του S.aureus 29213, του S.aureus 25423.

Πρέπει να σημειωθεί ιδιαίτερα ότι τα στελέχη που μελετήθηκαν έδειξαν αρκετά έντονο ανταγωνισμό προς το εντεροπαθογόνο στέλεχος E. coli 212 (0157:H7), ικανό να συνθέτει τοξίνη τύπου Shiga (cytovertoxin), και το στέλεχος B. subtilis No. είχε τη μέγιστη δραστικότητα (30 + 2,0) χιλ. 1719.

Τρία πρωτότυπα στελέχη B subtilis μελετήθηκαν για την ικανότητά τους να προσκολλώνται, η οποία είναι μια από τις σημαντικότερες ιδιότητες των προβιοτικών καλλιεργειών (Πίνακας 2).

Πίνακας 2. Συγκολλητική δράση των στελεχών Bacillus subtilis.

Μελετήθηκαν στελέχη Συγκολλητική δράση

Δείκτης πρόσφυσης μικροοργανισμών (MAI) (X±w) Επίπεδο πρόσφυσης

B. subtilis 1719 1,53+0,08 Χαμηλό

B. subtilis 1594 2,84±0,47 Μέσος όρος

B. subtilis 1318 3,08±0,33 Μέσος όρος

Αποκαλύφθηκε ότι το στέλεχος B.subtilis 1719 είχε χαμηλή, και τα στελέχη B.subtilis 1594 και 1318 μέση συγκολλητική δράση.

Η αντίσταση στα αντιβιοτικά του στελέχους, υποψήφιο για προβιοτικά φάρμακα, είναι επίσης μια σημαντική ιδιότητα που καθορίζει τη δυνατότητα χρήσης του σε συνδυασμό με αντιβακτηριακά φάρμακα. Από την άποψη αυτή, διεξήχθη μια μελέτη για την αντοχή στα αντιβιοτικά των στελεχών του B. subtilis σε 14 αντιβιοτικά που χρησιμοποιούνται συχνότερα στην κλινική. Το στέλεχος B.subtilis 1719 ήταν ανθεκτικό στη γενταμυκίνη, την πολυμυξίνη και την ερυθρομυκίνη, ενώ τα στελέχη B.subtilis 1594 και B.subtilis 1318 ήταν ανθεκτικά μόνο στη γενταμυκίνη.

Ήταν ενδιαφέρον να μάθουμε εάν η αντίσταση στα αντιβιοτικά σχετίζεται με τον χρωμοσωμικό εντοπισμό του γενετικού καθοριστικού παράγοντα αυτού του χαρακτηριστικού ή με την παρουσία του πλάσματος.

Η ανάλυση της μεταφοράς πλασμιδίου από στελέχη B. subtilis θα μπορούσε να παρέχει πληροφορίες σχετικά με τη φύση της ανθεκτικότητας στα αντιβιοτικά. Σε ένα πήκτωμα αγαρόζης 0,9%, μετά από ηλεκτροφόρηση, ένα κλάσμα που ταιριάζει με το μέγεθος του πλασμιδικού DNA αναγνωρίστηκε σε έναν αριθμό αναλυθέντων δειγμάτων DNA (ίχνη 2, 4 και 6) (Εικ. 1). Ωστόσο, το σχέδιο διανομής αυτών των εμπορικών σημάτων στο πήκτωμα αγαρόζης θα διαφέρει από αυτό του πλασμιδικού DNA ελέγχου.

Για να προσδιοριστεί τελικά εάν το DNA που προέκυψε ήταν πλασμίδιο ή αν ήταν χρωμοσωμικά θραύσματα, το απομονωμένο υλικό υποβλήθηκε σε επεξεργασία με ενδονουκλεάσες μικρής κοπής του δεύτερου τύπου (ένζυμο περιορισμού Pst I). Κατά την ανάλυση προϊόντων περιορισμού σε γέλη αγαρόζης (Εικ. 1), απομονώθηκε το χαμηλού μοριακού βάρους κλάσμα του DNA

που εξήχθη από τα στελέχη που μελετήθηκαν, αποσυντέθηκε χωρίς τον σχηματισμό διαυγών θραυσμάτων, τα οποία έδειξαν την απουσία μορίων πλασμιδικού DNA στα δείγματα

Ρύζι. 1. Δεδομένα ηλεκτροφόρησης παρασκευασμάτων DNA που απομονώθηκαν από στελέχη

Επεξήγηση του χαρακτηρισμού

Προφανώς, η αναγνωρισμένη αντοχή στα αντιβιοτικά αναφέρεται στη φυσική αντοχή και πιθανώς ελέγχεται από γονίδια που εντοπίζονται στο χρωμόσωμα

Σε πειράματα in vivo, το στέλεχος B subtilis 1719 αποδείχθηκε μη τοξικό, μη τοξικογόνο και μη λοιμογόνο.

Η χορήγηση του αντιβιοτικού υδροχλωρικής δοξυκυκλίνης σε δόση 5 mg σε ποντίκια (βάρους 14-16 g) κατέστησε δυνατή τη δημιουργία ενός μοντέλου δυσβίωσης στο οποίο τα έντερα των ζώων ήταν μολυσμένα με υπό όρους παθογόνο και παθογόνο μικροχλωρίδα

Η εισαγωγή της καλλιέργειας B subtilis 1719 σε δόση 0,5x10% 1,0x109 m/ποντικό για 7 ημέρες συνέβαλε στην ομαλοποίηση της σύνθεσης και του αριθμού των αυλών και

№1 №2 №3 №4 №5 №6 №7 №8 №9 № 10 №11

δείκτης διαδικασίας

εγγενές DNA του στελέχους B sullish 1719 διασπασμένο DNA του στελέχους B sullish 1719 εγγενές DNA του στελέχους B sullish 1594 split DNA του στελέχους B syllish 1594 φυσικό DNA του στελέχους B sullish 1318 split DNA του στελέχους B sullish 1318 split DNA του στελέχους B sullish ( NHL 534 διαχωρισμένο DNA στέλεχος Β 8db 534 φυσικό πλασμίδιο

διαίρεση πλασμιδίου pPETpB^et

τη νυχτερινή μικροχλωρίδα, καθώς και την εξάλειψη ευκαιριακών μικροοργανισμών (Πίνακας 3).

Πίνακας 3. Μικροχλωρίδα σε ποντικούς με πειραματική δυσβίωση και μετά από διόρθωση με την καλλιέργεια του B. mutilum (Bs) 1719 σε διάφορες δοσολογίες

D Δείκτης αριθμός Ig CFU/ml σε ποντικούς (1 g κόπρανα LII 11

1 cm εντέρου) (X±t)

Έλεγχος (άθικτος) Μετά τη χορήγηση Μετά από θεραπεία με δόση Bs (μικροβιακά κύτταρα)

δοξυκυκλίνη 0,5x10" 1,0x109

Μικροοργανισμοί i a Βρεγματικό στρώμα του εντέρου i a o i Βρεγματικό στρώμα του εντέρου h i "X Βρεγματικό στρώμα του εντέρου I * s s = S c 5 H

e e e & S « ! s g a 3 C

E. coli: 7+0,42 7+0,7 7,3+0,64 6,5+1,4 710,7 6,5+0,48 811,4 5+0,43

1ac\ % 94 100 64 84 100 100 100 μηνών

lac, % b 0 36 16 * 0 0 0 0

αιμόλυση 0 0 0 0 0 0 0 0 1

R. vulgaris 0 0 710,26* 0 0 0 * 0 0

P. mirabilis * (1 0 6±0,42* 4,3І,7* 0* * 0 0 0

S. freundii 610,42* 0 0 0 0 0 0 0

Enterococcus spp. 7±<).21 7+0.64 6±0,59 5.5Ю.84 7±0,42 5.5+0.84 710.48 510.47

S. epidermidis o 0 0 0 0 0 0 0

S. aureus 5±0,21 0 4±1,2* 4+0,21* * 0 0 * 0 "II

Staphylococcus spp. 4+0,43* * 0 0 410,48* 0 0 0 «

Candida spp. 6i0,64 0 4,5±0,21 6+0,92* * 0 * 0 1 0* 0

Lactobacillus spp. 9.510,42 ¡ 7.610,43 1 5.510,4* 1 4+0,23* 910,44 7+0,34 1 910,21 7,5+0,84

1 Bifidobacterium spp. 2±0,1 2±0,1 1 2+0,1 2+0,1 1 2+0,1 2+0,1 2U.1 I 210,1

Clostridium spp. 5±0,22 3,1±0,21 1 510,21 4,5+0,24 1 5+0,59 1 4.510,73 1 5Μ.21 1 4,65+0,24

Σημείωση: *σελ<0,05

Παρόμοια αποτελέσματα λήφθηκαν κατά την επιλεκτική απολύμανση της υπό όρους παθογόνου βρεγματικής μικροχλωρίδας του παχέος εντέρου εξωγαμικών ποντικών χρησιμοποιώντας το φάρμακο φθοροκινολόνης ciprofloxacin, το οποίο διατηρεί τον αριθμό των bifidobacteria και των γαλακτοβακίλλων. Πολιτισμός του B. subnhs 1719,

που χορηγήθηκαν σε παρόμοιες δόσεις, οδήγησαν σε σημαντική) μείωση του αριθμού των σταφυλόκοκκων (8,3 φορές) σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου των ζώων που δεν έλαβαν καλλιέργεια προβιοτικών. Η χορήγηση του Citran σε ζώα οδήγησε σε απότομη αλλαγή στην αναλογία σταφυλόκοκκοι: βακτήρια, και η εισαγωγή της καλλιέργειας \ 1719 άλλαξε αυτή την αναλογία στο επίπεδο των ανέπαφων ποντικών

Στο επόμενο στάδιο, μελετήσαμε την επίδραση της καλλιέργειας του B ublin 1719 στη συγκολλητική ικανότητα των εντερικών επιθηκών κυττάρων (εντεροκύτταρα) κατά τη διάρκεια πειραματικής δυσβίωσης που προκαλείται από τη χορήγηση του αντιβιοτικού υδροχλωρικής δοξυκυκλίνης.

Ορισμός ομάδων ποντικιών:

Ομάδες ποντικών

Σχετικά με το Clean in

στην αρχή του πειράματος Ο Δοξυκυκλίνη

Ш Δοξυκυκλίνη

χωρίς εξισορρόπηση Β Δοξυκυκλίνη + Β cYi 0,5 0 Δοξυκυκλίνη h-BvcYi 1,0 □ Καθαρή +

VbYk 0.5 ■ Clean +

V. eiYiL 0,5X109mk V diYiSi 1,0 x ] O"m k

Ρύζι. Εικ. 2. Μέσος δείκτης προσκόλλησης (AIA) του στελέχους δοκιμής 8.xy1oek 25 σε εντεροκύτταρα σε ένα μοντέλο πειραματικής δυσβίωσης και όταν διορθώνεται από την καλλιέργεια του B. subtilis 1719.

Όταν η δυσβίωση διορθώθηκε με την καλλιέργεια B 8uNSh 1719 σε διάφορες δόσεις, παρατηρήθηκε μείωση στην ικανότητα προσκόλλησης των εντεροκυττάρων (Εικ. 2)

Σε μια σειρά πειραμάτων για τη μελέτη της επίδρασης του στελέχους Β. 1719 η ικανότητα αυτών των βακίλων να αξιόπιστα

αλλαγή της μεταβολικής δραστηριότητας των ουδετερόφων σύμφωνα με τη δοκιμή NBT (Εικόνα 3)

Ομάδες ζώων

Ρύζι. 3. Επίδραση της καλλιέργειας B SllbtlllS 1719 στη δραστηριότητα των ουδετερόφιλων (δοκιμή NST) σε πειραματική δυσβίωση

Χρησιμοποιώντας τη μέθοδο της εξαρτώμενης από λουμινόλη χημειοφωταύγειας, λήφθηκαν παρόμοια αποτελέσματα σχετικά με τη λειτουργική δραστηριότητα των ουδετερόφιλων

Η μεγαλύτερη αύξηση στο επίπεδό του σημειώθηκε κατά την περίοδο της μέγιστης εκδήλωσης δυσβίωσης που προκαλείται από τη χορήγηση δοξυκυκλίνης

Υπό την επίδραση του K)LT)ra στην υποβίλα 1719, εμφανίζεται μείωση της παραγωγής

IFNF-a Η εισαγωγή της καλλιέργειας σε άθικτα ζώα δεν επηρέασε το επίπεδο παραγωγής

Δοξυκυκλίνη

Ομάδες ποντικών

Ρύζι. 4. Μελέτη της επίδρασης της καλλιέργειας του Β. νουκλεϊκού οξέος 1719 στο επίπεδο παραγωγής του παράγοντα νέκρωσης όγκου α (TNF-a) κατά τη διάρκεια πειραματικής δυσβίωσης

Προσδιορισμός της συσσώρευσης κυτοκίνης (1L-1P, 1L-2, 1L-4, 1L-6, [L-10, 1H2, 1PL-y)

Η δυναμική στους ορούς αίματος ποντικών μετά από μία μόνο ένεση της καλλιέργειας B^tsynHu 1719 αποκάλυψε τα ακόλουθα μοτίβα.

Τις πρώτες 12 ώρες μετά την εισαγωγή της βακτηριακής καλλιέργειας, δεν υπήρξαν αλλαγές στο επίπεδο των κυτοκινών, με εξαίρεση το Ib-1(5).Το περιεχόμενο άλλων κυτοκινών που μελετήθηκαν σε σύγκριση με άθικτα ζώα αυξήθηκε σημαντικά μόνο κατά 24 ώρες : I-1P (13,7 φορές) και I-4 (14,6 φορές), 1b-2 (5,2 φορές), 1b-6 (7 φορές), 1N0 (1,5 φορές), 1N2 (5,2 φορές), 1RI- y (9,7 φορές).

Στην παραγωγή προβιοτικών σκευασμάτων, σημαντικός τεχνολογικός δείκτης είναι η απόδοση βιομάζας κατά την καλλιέργεια μικροοργανισμών. Αυτός ο δείκτης εξαρτάται άμεσα από τις ιδιότητες ανάπτυξης των θρεπτικών μέσων που χρησιμοποιούνται. Μας

Μελετήθηκαν τα κύρια χαρακτηριστικά των διαδικασιών καλλιέργειας του Bisquid 1719 σε επτά θρεπτικά μέσα διαφόρων συνθέσεων.

Τα ληφθέντα δεδομένα παρουσιάζονται στον Πίνακα 4. Το μέσο Νο. 5, το SPAS-6 και το μέσο πατάτας-γλυκερίνης εξασφάλισαν την ανάπτυξη του στελέχους με δείκτη οπτικής πυκνότητας

(OP), ίσο με 0,24±0,01 (u=0,03 h"1), 0,22+0,01 (iKKOZZch1) και 0,3+0,01 (u=0,025 h"1), αντίστοιχα. Στα μέσα SPAS-2, SPAS-4, Νο. 9, η μέγιστη τιμή OP ήταν 0,42+0,03 (u=0,067 h"1), 0,38+0,02 (u=0,05h"") και 0 ,58+0,03 (u =0,037 h"1), αντίστοιχα, και στο μέσο VK-2 - 0,85±0,6 (u=0,068 h""). Ώρα να φτάσουμε

η μέγιστη συγκέντρωση βιομάζας σε αυτά τα μέσα διέφερε από

9±0,7 ώρες (SPAS-2) έως 18±1,3 ώρες (KGG).

Πίνακας 4. Συσσώρευση βιομάζας στελεχών B. nibiHn 1719 σε μέσα διαφόρων συνθέσεων κατά τη διάρκεια καλλιέργειας για 20 ώρες (X±t)

Μέσο Μέσος χρόνος της ^-φάσης (η) Διάρκεια της εκθετικής φάσης (η) Χρόνος επίτευξης της συγκέντρωσης βιομάζας (η) Μέγιστη απόδοση βιομάζας (οπτική πυκνότητα) Ρυθμός ανάπτυξης (i)

Αρ. 5 2 8+0,67 13±1,05 0,24+0,01 0,03

Αρ.9 2 11 ±0,8 13+0,99 0,5810,03 0,037

KGG 2 2±0,12 18+1,3 0,3+0,01 0,025

ΣΠΑΣ-2 2 4+0,36 9±0,7 0,42+0,03 0,067

ΣΠΑΣ-4 2 4±0,34 11+1,1 0,38±0,02 0,05

ΣΠΑΣ-6 1,5 3+0,23 18+1,6 0,22±0,01 0,033

VK-2 1,5 8±0,72 14±1,0 0,85+0,6 0,068

Η μέγιστη απόδοση βιομάζας (BY) ανιχνεύθηκε στο μέσο VK-2 με ρυθμό ανάπτυξης και η χαμηλότερη στο μέσο SPAS-6 με ρυθμό ανάπτυξης

Είναι γνωστό ότι η γλυκόζη, η μαλτόζη, η σακχαρόζη και η λακτόζη χρησιμοποιούνται συχνότερα ως πηγή υδατανθράκων στα μέσα καλλιέργειας. Στα πειράματά μας, ελήφθη υψηλή απόδοση βιομάζας στο μέσο VK-2 με την προσθήκη γλυκόζης ή σακχαρόζης· οι δείκτες OD αντιστοιχούσαν σε

Κατά τη χρήση μαλτόζης, το υψηλότερο OP καταγράφηκε στο

μέσο Νο. 9 0,695 ± 0,025 (u = 0,058 h "), ωστόσο, αποδείχθηκε ότι ήταν χαμηλότερο από τις τιμές που ελήφθησαν στο μέσο VK-2 με τη συμπερίληψη λακτόζης, σακχαρόζης και γλυκόζης ως πηγές υδατανθράκων.

Διαπιστώθηκε ότι η σύνθεση των θρεπτικών μέσων δεν είχε καμία επίδραση στις ανταγωνιστικές ιδιότητες του στελέχους.

Στο επόμενο στάδιο, αξιολογήθηκαν οι συνθήκες για τη σταθεροποίηση της βιωσιμότητας και των ανταγωνιστικών ιδιοτήτων του στελέχους B. lumbago 1719 όταν αποθηκεύτηκε σε λυοφιλοποιημένη και υγρή κατάσταση σε θερμοκρασία 5±3 °C (Πίνακας 5).

Σε λυοφιλοποιημένη κατάσταση με σταθεροποιητή κίτρινου σακχαρόζης, η καλλιέργεια του Lybly 1719 διατήρησε τη βιωσιμότητα και τις ανταγωνιστικές της ιδιότητες για τουλάχιστον 4 χρόνια (περίοδος παρατήρησης). Στον πίνακα Στο σχήμα 5 παρουσιάζονται επίσης τα αποτελέσματα της μελέτης των ιδιοτήτων των καλλιεργειών που αποθηκεύτηκαν για 3 χρόνια σε υγρή μορφή με την προσθήκη διαφόρων σταθεροποιητών.

Πίνακας 5. Βιωσιμότητα των κυττάρων του στελέχους B. mlinth 1719 όταν αποθηκεύονται παρουσία διαφόρων σταθεροποιητών

Από τα δεδομένα στον Πίνακα 5 προκύπτει ότι ο βέλτιστος υγρός σταθεροποιητής είναι ένα διάλυμα NaCl 7%, το οποίο σας επιτρέπει να διατηρήσετε τη βιωσιμότητα του στελέχους 1719 για 2 χρόνια. Για να διατηρήσετε τις ιδιότητες της καλλιέργειας για 1 έτος, είναι επίσης δυνατό να χρησιμοποιήστε απεσταγμένο νερό και διάλυμα γλυκερίνης 10%.

Όταν αποθηκεύτηκε παρουσία διαφόρων σταθεροποιητών, δεν υπήρξαν στατιστικά σημαντικές αλλαγές στις ανταγωνιστικές ιδιότητες του στελέχους B subtihs 1719

Συγκριτική ανάλυση του στελέχους 1719 για ανταγωνιστικό και συγκολλητικό

ιδιότητες με εμπορικά προβιοτικά σκευάσματα Sporobak-

terin, Ρωσία (B subtihs 534), Cereobiogen, Κίνα (B cereus DM423), Subtil, Βιετνάμ (Biemis var vietnamí), Baktisubtil, Γαλλία (B cereus IP5832), Nutrolin, Ινδία (B toagulans) (Πίνακας 6), επιτρέπεται να αποκτήσετε τα ακόλουθα αποτελέσματα

Το υψηλότερο επίπεδο ανταγωνιστικής δράσης του B subi/lis 1719 εκδηλώθηκε έναντι των στελεχών S flex neri 337 (30±3.0), S aureus «Nikiforov» (30+2.5), P uilgam 177 (30±2.0) P aeruginosa 9022 (27 ±1,5) και E coli 212 (0157 H7) (30±1,5) Ελαφρώς ασθενέστερος ανταγωνισμός ανιχνεύθηκε σε αυτό το στέλεχος με καλλιέργειες δοκιμής Ecoh 1882 (26±1,2), Saw eus 25423 (21± 1,5), S sonnet 170 (20) 2.0), 5 aureus "Phillipov" (20±1.5),

Λιγότερο σημαντική επιβράδυνση της ανάπτυξης εντοπίστηκε για τις δοκιμαστικές καλλιέργειες Saurem FDA 209P (15±1,5), S aureus 29213 (15±3,0), P mirabilis 24a (12±1,2)

Μεταξύ των προβιοτικών καλλιεργειών που μελετήθηκαν, το πιο κοντινό, αλλά κατώτερο από το στέλεχος 1719 σε ανταγωνιστική δράση, ήταν το στέλεχος

534 Το πηκτικό στέλεχος Β "ινδικό*" αποδείχθηκε ότι ήταν ένας ασθενής ανταγωνιστής, κατώτερος από αυτή την άποψη από όλα τα στελέχη που χρησιμοποιήθηκαν στο πείραμα

Μια σύγκριση των ιδιοτήτων της κόλλας έδειξε ότι, γενικά, τα στελέχη εμπορικών παρασκευασμάτων είχαν μέσο επίπεδο πρόσφυσης, ενώ το IAM κυμαινόταν από 3,08 έως 3,8, εκτός από το στέλεχος «ινδικό» (IAM = 5,36 ± 0,56 για το στέλεχος B subtllis 1719 αυτό Ο δείκτης αποδείχθηκε ο χαμηλότερος (IAM = 1,53 ± 0,08)

Πίνακας 6. Συγκριτικά χαρακτηριστικά της ανταγωνιστικής δραστικότητας του στελέχους B. mlinth 1719 και καλλιέργειες εμπορικών προβιοτικών παρασκευασμάτων στο πείραμα

Ζώνες αναστολής ανάπτυξης των δοκιμαστικών στελεχών (mm) (X+t)

Τα μελετηθέντα στελέχη Bacillus o G--vi Pi s, 3 s n yi s. o sch< с bu S ГЛ (Ч О сч 5 Vi S.aureus 25423 Л", aureus «Никифоров» S 0 5 <=; s 1 ÍÜ 5 1". пи rabil is 24а 0 г-- ¡с 1 о W4 о 3 о сч (Ч о ^ 5 § ^ сч ОС оо "с го ^ г» ■П" о сч Ñ

V. subtihs Αρ. 1719 Г-(cm "+1 N о с +1 о ГЛ ж +i t (Ч +i n 1П (N +1 о f, σε +i С СЧ СЧ +¡ έτσι σε + Pó о, сч " +1 σε сч σε +i Г-- (N +Í vo p περίπου Сч" + о с.

B.subtihs 534 Sporobacterin (Ρωσία) (-; SCh +1 CS o +1 o SCh O GL +1 O g +1 g o. +1 00 +i SCh (Ch

B. cereus DM423 Cereobiogen (Κίνα) SP +i h- (N o o<4 О +1 о СЧ +1 <4 in +1 О о (Чг +1 о о о о о с +1

B. cereus var. vietnamí Subtil (Βιετνάμ) 1P + O o<4 + СЧ О о + (N о" +1 СЧ О, +i О о о + CI + о о О о о

V. cereus IP 5832 Baktisubtil (Γαλλία) Ш оо + σε о О g- + о +1 (N σε +i σε о CN + g"- ■h- + t o + g" o o o o + g ■p +¡ o

B. coagulans Nutrolin (Ινδία) s o O o + SCH "Í. O +1 p SCh o" -H (N O + o o o o o o

Έτσι, το στέλεχος B. bubik 1719, το οποίο απομονώσαμε, είχε ποιοτικά πλεονεκτήματα σε σχέση με άλλες δοκιμασμένες καλλιέργειες εμπορικών παρασκευασμάτων όσον αφορά τις μελετημένες ιδιότητες, γεγονός που μας επιτρέπει να το θεωρήσουμε πολλά υποσχόμενο για χρήση στην ανάπτυξη ενός νέου προβιοτικού σκευάσματος.

1. Με βάση τις μορφολογικές και φυσιολογικές-βιοχημικές ιδιότητες, τα απομονωμένα στελέχη αναγνωρίστηκαν ως B Raulym. Δεν βρέθηκαν πλασμίδια στα παρασκευάσματα DNA των στελεχών B.mth/bx, κάτι που προφανώς υποδεικνύει χρωμοσωμικό έλεγχο της αντοχής στα αντιβιοτικά.

2. Χρησιμοποιώντας ένα μοντέλο δυσβίωσης σε λευκά ποντίκια, φάνηκε η προβιοτική δράση του στελέχους B. thylish 1719, που εκδηλώνεται με την εξάλειψη ευκαιριακών και παθογόνων μικροοργανισμών με την αποκατάσταση της ποιοτικής και ποσοτικής σύνθεσης της φυσιολογικής μικροχλωρίδας.

3. Βέλτιστο μέσο για συσσώρευση βιομάζας κατά την καλλιέργεια στελέχους

Το 1719 είναι ένα μέσο BK-2 με προσθήκη γλυκόζης ή σακχαρόζης ως πηγή υδατανθράκων.

4. Έχει διαπιστωθεί ότι το στέλεχος B. lialisia 1719 διατηρεί βιωσιμότητα και ανταγωνιστική δράση σε λυοφιλοποιημένη κατάσταση με σταθεροποιητή σακχαρόζης-ζελατίνης για τουλάχιστον 4 χρόνια (περίοδος παρατήρησης), σε υγρή μορφή σταθεροποιημένη με διάλυμα 7% Νο. 01 - 2 χρόνια και 1 έτος παρουσία απεσταγμένου νερού ή διαλύματος γλυκερίνης 10%.

5. Ανταγωνιστικά δραστικό, χαμηλής κόλλας, χωρίς πλασμίδια, μη τοξικό στέλεχος B. naylisha 1719, το οποίο έχει προβιοτική και ανοσοτροποποιητική δράση, κατατίθεται στην Κρατική Συλλογή Καλλιεργειών GISC που φέρει το όνομά του. ΛΑ. Ταράσεβιτς.

6. Το στέλεχος V.zyysh 1719 (277) είναι πολλά υποσχόμενο για χρήση στην ανάπτυξη νέων προβιοτικών σκευασμάτων λόγω των βιολογικών ιδιοτήτων και των βασικών τεχνολογικών χαρακτηριστικών του.

1 Gataullin A G, Gaiderov A A Mikhailova N A, Osipova I G, Romanen-ko E Βιολογικές ιδιότητες του BaaNi subtils strains of different origins Co “Τρέχοντα ζητήματα ανάπτυξης εμβολίου-ορού στον 21ο αιώνα” Perm 2003, σελ. 329-331

2 Gataullin A G, Mikhaitova N A, Btinkova L P, Elkina S I, Gorobets OB, Gaiderov A A, Kalina NG Μελέτη της βρεγματικής μικροχλωρίδας της εντερικής οδού ποντικών με χρήση διαφορικών διαγνωστικών μέσων Συλλογή "Ανάπτυξη και τυποποίηση μικροβιολογικών θρεπτικών μέσων και συστημάτων δοκιμής Makkala" , 2003 σελ. 48

3 Gataullin A G, Btinkova L P, Mikhaitova N A, Elkina S I, Gaiderov A A, Kalina N G, Gorobets O B Αλλαγές στη σύνθεση της βρεγματικής μικροχλωρίδας κατά τη διάρκεια πειραματικής δυσβίωσης ως δείκτης της επίδρασης των θεραπευτικών φαρμάκων στον μακροοργανισμό Anapi Mechniivsky,200 , Αρ. 4-5, σσ. 123-124

4 Mikhailova N A, Blinkova L P, Elkina S I, Gataullin A G, Gorobets O B, Gaiderov A A, Kalina N G Η δυσβίωση ως αναπόσπαστος δείκτης των παρενεργειών των φαρμάκων Μήνυμα 1 Συλλογή αναφορών «Λειτουργική διατροφή, ασφάλεια τροφίμων και υγεία ανθρώπων σε συνθήκες μητρόπολης « Μ, 2003, σσ. 38-39

5 Mikhailova N A, Blinkova L P, Elkina S I, Gataullin A G, Gorobets O B, Gaiderov A A, Kalina N G Η δυσβίωση ως αναπόσπαστος δείκτης των παρενεργειών των φαρμάκων Μήνυμα 2 Υλικά του ΙΙ Διεθνούς Συνεδρίου της Μόσχας «Κατάσταση βιοτεχνολογίας και προοπτικές ανάπτυξης» Μόσχα , 2003, σελ. 162

6 Gataullin AG, Blinkova LP, Mikhailova NA, Elkina SI, Gaiderov A A, Kalina N G, Gorobets O B Αλλαγή στη σύνθεση της βρεγματικής μικροχλωρίδας ως δείκτης της αποτελεσματικότητας της χρήσης φαρμακευτικών φαρμάκων στην πειραματική δυσβίωση Analy Mechniyvsky Institute Kharyv40, 20 , Νο. 6, σελ. 10- 13

7 Gaiderov A A, Gataullin A G, Vasilyeva E A, Mikhailova N A, Osipova I G Μελέτη της επίδρασης των προβιοτικών παρασκευασμάτων στον μακροφάγο σύνδεσμο της μη ειδικής ανοσίας Συλλογή υλικών του διεθνούς συνεδρίου «Προβιολογικά, πρεβιοτικά, συνβιοτικά και λειτουργικά τρόφιμα. Τρέχουσα κατάσταση και προοπτικές ” Μ, 2004, σσ. 21-22

8 Blinkova L P, Mikhailova N A, Elkina S I, Gataullin A G, Kalina N G, Tokarskaya M M Η επίδραση του «Milife» και των συνδυασμών του με ένα προβιοτικό σπορίων στην αντοχή των λευκών ποντικών κατά τις πειραματικές λοιμώξεις Συλλογή υλικών του Διεθνούς Συνεδρίου «Προβιοτικά, Πρεβιοτικά» , συνβιοτικά και λειτουργικά τρόφιμα Τρέχουσα κατάσταση και προοπτικές» Μ, 2004, σελ. 4041

9 Blinkova L P, Mikhailova N A, Shmygaleva T P, Gataullin A G, Novikov V Yu, Shmygalev P A Συγκολλητικές ιδιότητες κυττάρων και σπορίων In subtilis Συλλογή υλικών του διεθνούς συνεδρίου «Προβιοτικά, πρεβιοτικά, συνβιοτικά και λειτουργικά τρόφιμα Τρέχουσα κατάσταση και προοπτικές « M, 2004, σσ. 41-42

10 Mikhailova N A, Godkov M A, Gataullin A G, Zinkin Yu V, Vetoshkin A I, Kharitonova A V, Gaiderov A A Immunomodulating effect of Culture B subtilis Συλλογή υλικών του διεθνούς συνεδρίου «Probiotics, prebiotics, synbiotics and functional foods Modern state and prospects» M , 2004, σσ. 204-205

11 Gataullin A G, Mikhailova N A, Blinkova L P, Romanenko E E, Elkina S I, Gaiderov A A, Kalina N G Ιδιότητες απομονωμένων στελεχών Bacillus subtilis και η επίδρασή τους στην εντερική μικροχλωρίδα των πειραματόζωων Zh mik-robiol, 2004, αρ. 92. -94

12 Gataullin AG, Zinkin YuV, Vetoshkin AI, Godkov MA, Gaiderov A A, Kharitonova A V Μελέτη της επίδρασης του φαρμάκου B subtilis στη δυσβίωση με χρήση ανάλυσης χημειοφωταύγειας Συλλογή υλικών του Διεθνούς Συνεδρίου «8th International Putin School-Conference of Young Scientists» Pushchino, 2004, s 256

13 Blinkova L P, Mikhailova N A, Gorobets O B, Elkina S I, Gataullin A G Kalina N G, Gaiderov A A Experimental study of the effect of biologically active drugs on C albicans Advances in medical mycology, 2004, τόμος III, σελ. 48-49

14 Gataullin A G, Mikhailova N A, Khvatov V B, Blinkova L P, Zinkin Yu V, Kharitonova A V Εφαρμογή της ανάλυσης χημειοφωταύγειας για την αξιολόγηση αντι-

βακτηριακή και αντιμυκητιακή δράση του φαρμάκου B subtil είναι. Advances in medical mycology, 2004, τόμος III. σελ.50-51.

15. Mikhailova N., Blinkova L. P.. Gataullin A.G. Μελέτη παραμέτρων καλλιέργειας προβιοτικών στελεχών Bacillus subtihs σε διάφορα θρεπτικά μέσα. Υλικά του III Διεθνούς Συνεδρίου της Μόσχας «Βιοτεχνολογία: κατάσταση και προοπτικές ανάπτυξης». Μόσχα, 2005, σελ. 124.

16. Gataullin A.G., Blinkova L.P., Mikhailova N.A. Συσσώρευση βιομάζας προβιοτικών στελεχών B. subtihs σε θρεπτικά μέσα διαφόρων συνθέσεων. Σάβ. υλικά του Πανρωσικού επιστημονικού συνεδρίου με διεθνή συμμετοχή: «Ιατρικά ανοσοβιολογικά παρασκευάσματα στον 21ο αιώνα: ανάπτυξη, παραγωγή και εφαρμογή» Ufa. 2005, μέρος 1.ε. 134-136

Δημοσιεύθηκε στις 19 Μαΐου 2005. Τόμος εκτύπωσης 1 p.l. Αρ. Παραγγελίας 615. Κυκλοφορία 100 αντίτυπα. Εκτύπωση: Sprint-Print LLC, Moscow, st. Krasnobogatyrskaya, 92 τηλ.: 963-41-11, 964-31-39

-»« g.i» j» "-" Ж J

ΑΝΑΣΚΟΠΗΣΗ ΤΗΣ ΒΙΒΛΙΟΓΡΑΦΙΑΣ

Κεφάλαιο 1. Μικροβιακός ανταγωνισμός - η βάση για τη δημιουργία βιοθεραπευτικών φαρμάκων για τη διόρθωση δυσβιοτικών καταστάσεων

Κεφάλαιο 2. Τα προβιοτικά σπορίων και οι επιδράσεις τους στον μακροοργανισμό

2.1. Παρασκευάσματα από βακτήρια του γένους Bacillus

2.2. Σύγχρονες ιδέες για τους μηχανισμούς θεραπευτικής και προφυλακτικής δράσης των προβιοτικών από βακτήρια του γένους Bacillus

2.3. Βιολογικά δραστικές ουσίες που παράγονται από αερόβια βακτήρια που σχηματίζουν σπόρους

2.4. Παθογόνοι παράγοντες βακτηρίων του γένους Bacillus 34 ΙΔΙΑ ΕΡΕΥΝΑ

Κεφάλαιο 3. Αντικείμενα και μέθοδοι έρευνας

3.1. Αντικείμενα έρευνας

3.2. Μέθοδοι έρευνας 43 3.2.1. Εξοπλισμός και τεχνικές

Κεφάλαιο 4. Χαρακτηριστικά μεμονωμένων στελεχών

4.1. Μελέτη μορφολογικών και φυσιολογικών-βιοχημικών ιδιοτήτων στελεχών

4.2. Ανταγωνιστική και συγκολλητική δράση των στελεχών B.subtilis σε πειράματα in vitro

4.3. Προσδιορισμός αντοχής στα αντιβιοτικά και πλασμιδικό προφίλ στελεχών B.subtilis

Κεφάλαιο 5. Επίδραση του στελέχους B.subtilis 1719 στον μακροοργανισμό

5.1. Μελέτη τοξικότητας, τοξικότητας, λοιμογόνου δράσης και προβιοτικής δράσης του στελέχους B.subtilis 1719 σε πειράματα in vivo

5.2. Μελετώντας την επίδραση του στελέχους B. subtilis 1719 στις παραμέτρους ανοσίας σε πειράματα in vivo με πειραματική δυσβίωση

Κεφάλαιο 6. Τεχνολογικά χαρακτηριστικά του στελέχους B.subtilis 1719 ως βάση ενός προβιοτικού σκευάσματος

6.1. Αξιολόγηση ιδιοτήτων ανάπτυξης σε διάφορα υγρά θρεπτικά μέσα

6.2. Μελέτη της βιωσιμότητας και της ανταγωνιστικής δραστηριότητας του στελέχους B.subtilis 1719 κατά την αποθήκευση

Κεφάλαιο 7. Συγκριτικά χαρακτηριστικά των ιδιοτήτων του στελέχους B.subtilis\l\9 και των στελεχών που αποτελούν τη βάση ορισμένων εμπορικών προβιοτικών σκευασμάτων. ΣΥΜΠΕΡΑΣΜΑ

Εισαγωγή Διατριβή στη βιολογία με θέμα "Βιολογικές ιδιότητες των στελεχών Bacillus subtilis που υποσχόμενοι για τη δημιουργία νέων προβιοτικών"

Συνάφεια του προβλήματος

Στο παρόν στάδιο της ιατρικής μικροβιολογίας, έχουν εμφανιστεί νέα δεδομένα που τεκμηριώνουν τη χρήση σαπροφυτικής μικροχλωρίδας, η οποία είναι ικανή να παράγει βιολογικά δραστικές ουσίες (BAS) κατά τη διάρκεια της ζωής τους που καταστέλλουν την ανάπτυξη παθογόνων μικροοργανισμών, κακοήθων όγκων και ομαλοποιούν διάφορες παθολογικές και βιοχημικές διεργασίες στο ανθρώπινο σώμα.

Την τελευταία δεκαετία, βιολογικά προϊόντα που βασίζονται σε ζωντανές μικροβιακές καλλιέργειες βακτηρίων που σχηματίζουν σπόρους έχουν χρησιμοποιηθεί ευρέως για την πρόληψη και τη θεραπεία ασθενειών του γαστρεντερικού σωλήνα.

Τα βακτήρια του γένους Bacillus, μία από τις πιο διαφορετικές και διαδεδομένες ομάδες μικροοργανισμών, αποτελούν σημαντικά συστατικά της εξωγενούς χλωρίδας των ανθρώπων και των ζώων.

Το γένος Bacillus έχει προσελκύσει την προσοχή των ερευνητών από την αρχαιότητα. Η συσσωρευμένη γνώση στον τομέα της μικροβιολογίας, της φυσιολογίας, της βιοχημείας και της βακτηριακής γενετικής υποδεικνύει τα πλεονεκτήματα του Bacillus ως παραγωγών βιολογικά δραστικών ουσιών: ένζυμα, αντιβιοτικά, εντομοκτόνα. Η υψηλή προσαρμοστικότητα σε διάφορες συνθήκες διαβίωσης (παρουσία ή απουσία οξυγόνου, ανάπτυξη και ανάπτυξη σε ένα ευρύ φάσμα θερμοκρασιών, χρήση διαφόρων οργανικών ή ανόργανων ενώσεων ως πηγές τροφής κ.λπ.) συμβάλλουν στην εξάπλωση των βακίλων στο έδαφος, το νερό, αέρα, προϊόντα διατροφής και άλλα αντικείμενα του εξωτερικού περιβάλλοντος, καθώς και στο σώμα των ανθρώπων και των ζώων.

Η ποικιλομορφία των μεταβολικών διεργασιών, η γενετική και βιοχημική μεταβλητότητα, η αντίσταση στα λυτικά και πεπτικά ένζυμα χρησίμευσαν ως σκεπτικό για τη χρήση των βακίλων σε διάφορους τομείς της ιατρικής. Ο Οργανισμός Τροφίμων και Φαρμάκων των ΗΠΑ έχει εκχωρήσει στο Bacillus subtilis την κατάσταση του GRAS (γενικά θεωρείται ασφαλής) - απολύτως ασφαλείς οργανισμοί, που αποτελεί προϋπόθεση για τη χρήση αυτών των βακτηρίων στην παραγωγή φαρμάκων.

Η δράση των βακίλων εκδηλώνεται ενάντια σε ένα ευρύ φάσμα παθογόνων και υπό όρους παθογόνων μικροοργανισμών. Χάρη στη σύνθεση διαφόρων ενζύμων και άλλων ουσιών, ρυθμίζουν και διεγείρουν την πέψη και έχουν αντιαλλεργική και αντιτοξική δράση. Όταν χρησιμοποιούνται βάκιλλοι, η μη ειδική αντίσταση του μακροοργανισμού αυξάνεται σημαντικά. Αυτοί οι μικροοργανισμοί είναι εύκολο να κατασκευαστούν, σταθεροί στο ράφι και, κυρίως, φιλικοί προς το περιβάλλον.

Τα θεραπευτικά και προφυλακτικά φάρμακα που βασίζονται σε ζωντανά μη παθογόνα μικρόβια, ικανά να παρέχουν, μέσω μιας φυσικής μεθόδου χορήγησης, ευεργετικές επιδράσεις στις φυσιολογικές και βιοχημικές λειτουργίες του οργανισμού του ξενιστή μέσω της βελτιστοποίησης της μικροβιολογικής του κατάστασης, ταξινομούνται σήμερα ως προβιοτικά φάρμακα.

Από τους βάκιλλους, τα στελέχη του B. subtilis παρουσιάζουν μεγαλύτερο ενδιαφέρον. Ως προς τη γνώση των γενετικών και φυσιολογικών ιδιοτήτων, καταλαμβάνουν τη δεύτερη θέση μετά το E. coli. Οι μεγάλες δυνατότητες του B. subtilis στη βιοτεχνολογία αποδεικνύεται από τη δημιουργία μιας τράπεζας δεδομένων για τη μοριακή γενετική αυτού του στελέχους - SubtiList, στην οποία εισάγονται όλες οι πληροφορίες σχετικά με το βακτηριακό γονιδίωμα.

Με βάση τα ζωντανά βακτήρια του γένους Bacillus, έχουν δημιουργηθεί προβιοτικά σκευάσματα που είναι αβλαβή για τον μακροοργανισμό, έχουν ευρύ φάσμα θεραπευτικών και προφυλακτικών επιδράσεων και είναι περιβαλλοντικά ασφαλή. Τα αποτελέσματα σχετικά με τη χρήση ζωντανών μικροβιακών καλλιεργειών του γένους Bacillus για τη θεραπεία γαστρεντερικών ασθενειών σε ανθρώπους και ζώα εκτροφής έχουν μεγάλη επιστημονική και πρακτική σημασία.

Επί του παρόντος, γνωστά προβιοτικά φάρμακα χρησιμοποιούνται ευρέως στην πρακτική υγειονομική περίθαλψη: bactisubtil, sporobacterin, biosporin, bactisporin, subalin, cereobiogen, enterogermin και άλλα.

Οι ενδείξεις για θεραπευτική χρήση και η θεραπευτική αποτελεσματικότητα αυτών των φαρμάκων περιορίζονται από τις ιδιότητες των στελεχών που χρησιμοποιούνται για την παραγωγή τους. Το φάσμα της ανταγωνιστικής δράσης έναντι παθογόνων και ευκαιριακών μικροοργανισμών που προκαλούν μικροοικολογικές διαταραχές σε διάφορους βιοτόπους του ανθρώπινου ή ζωικού σώματος είναι καθοριστικής σημασίας. Επιπλέον, δεν μπορεί κανείς να αγνοήσει την ικανότητα των βακίλων να παράγουν βιολογικά δραστικές ουσίες (πολυπεπτιδικά αντιβιοτικά, ένζυμα κ.λπ.) και την αντοχή τους στα αντιβιοτικά.

Η ποικιλομορφία και η αναδυόμενη αντοχή στα αντιβιοτικά των μικροοργανισμών που εμπλέκονται στην ανάπτυξη δυσβιοτικών διαταραχών, αφενός, καθώς και η μεταβλητότητα των βιοσυνθετικών δυνατοτήτων διαφορετικών στελεχών του B. subtilis, από την άλλη, καθιστούν σκόπιμο να παρακολουθούνται συνεχώς τα στελέχη που έχουν στοχεύσει προβιοτική δραστηριότητα ή/και είναι παραγωγοί διαφόρων βιολογικά δραστικών ουσιών.

Στόχος της εργασίας:

Να μελετήσει τις βιολογικές ιδιότητες απομονωμένων στελεχών του B. subtilis και να αξιολογήσει τη δυνατότητα χρήσης τους για την ανάπτυξη ενός πρωτότυπου προβιοτικού σπορίων.

Στόχοι της έρευνας:

1. Μελετήστε τις μορφολογικές, φυσιολογικές-βιοχημικές, ανταγωνιστικές, συγκολλητικές και άλλες ιδιότητες απομονωμένων καλλιεργειών B. subtilis σε πειράματα in vitro και επιλέξτε το πιο υποσχόμενο στέλεχος για περαιτέρω έρευνα.

2. Αξιολογήστε την προβιοτική δράση του επιλεγμένου στελέχους B.subtilis σε πειράματα in vivo.

3. Επιλέξτε ένα θρεπτικό μέσο που είναι το βέλτιστο για τη συσσώρευση βιομάζας του στελέχους B.subtilis που μελετήθηκε.

4. Προσδιορίστε τη βιωσιμότητα και την ανταγωνιστική δράση του επιλεγμένου στελέχους B.subtilis κατά την αποθήκευση.

5. Συγκρίνετε τις ιδιότητες του αρχικού στελέχους B. subtilis και τις καλλιέργειες που χρησιμοποιούνται για την παραγωγή εμπορικών προβιοτικών σκευασμάτων.

Επιστημονική καινοτομία.

Με βάση τη μελέτη των μορφολογικών, φυσιολογικών-βιοχημικών, γενετικών και άλλων βιολογικών ιδιοτήτων των απομονωθέντων στελεχών, επιλέχθηκε ένα στέλεχος Β. subtilis 1719 χωρίς πλασμίδια, το οποίο εμφανίζει ανταγωνισμό σε ευκαιριακούς και παθογόνους μικροοργανισμούς διαφόρων ταξινομικών ομάδων, έχει χαμηλή πρόσφυση δραστηριότητα, είναι ανθεκτικό στη γενταμυκίνη, την πολυμυξίνη και την ερυθρομυκίνη.

Προσεγγίσεις για τη δημιουργία τεχνολογίας παραγωγής έχουν τεκμηριωθεί πειραματικά, συμπεριλαμβανομένης της μελέτης των ιδιοτήτων ανάπτυξης του στελέχους B. subtilis 1719 σε πρωτότυπα θρεπτικά μέσα, των συνθηκών για τη σταθεροποίηση της βιωσιμότητάς του και της ανταγωνιστικής του δράσης ως στάδια για τη λήψη ενός νέου προβιοτικού φαρμάκου.

Υποβλήθηκε αίτηση για εφεύρεση (αρ. 2005111301 με ημερομηνία 19 Απριλίου 2005): "Το βακτηριακό στέλεχος Bacillus subtilis 1719 είναι παραγωγός ανταγωνιστικά ενεργής βιομάζας έναντι παθογόνων μικροοργανισμών, καθώς και πρωτεολυτικών, αμυλολυτικών και λιπολυτικών ενώσεων."

Πρακτική σημασία.

Το απομονωμένο και ταυτοποιημένο στέλεχος B.subtilis 1719 κατατέθηκε στην Κρατική Συλλογή Καλλιεργειών GISC που ονομάστηκε έτσι. J.I.A. Tarasevich με αριθμό 277 και μπορεί να προταθεί για την ανάπτυξη βιομηχανικής τεχνολογίας για την παραγωγή ενός πρωτότυπου βιοθεραπευτικού προβιοτικού φαρμάκου.

Κύριες διατάξεις που υποβλήθηκαν για υπεράσπιση:

1. Τα ταυτοποιημένα τρία στελέχη βακτηριακών καλλιεργειών αντιστοιχούν στο είδος B. subtilis σε μορφολογικές, φυσιολογικές, βιοχημικές και άλλες ιδιότητες. Δεν περιέχουν πλασμίδια, είναι ανταγωνιστικά ενεργά έναντι ευκαιριακών και παθογόνων βακτηρίων διαφορετικών ταξινομικών ομάδων και έχουν χαμηλό ή μεσαίο επίπεδο προσκόλλησης.

2. Το στέλεχος B.subtilis 1719 έχει προβιοτικές ιδιότητες, που εκδηλώνονται με την εξάλειψη ευκαιριακών και παθογόνων μικροοργανισμών με την αποκατάσταση της ποσοτικής και ποιοτικής σύνθεσης της φυσιολογικής μικροχλωρίδας σε πειραματική δυσβίωση και επίσης έχει ανοσοτροποποιητική επίδραση στον μακροοργανισμό.

3. Με βάση τα τεχνολογικά του χαρακτηριστικά, το στέλεχος B.subtilis 1719 μπορεί να προταθεί ως υποψήφιο για τη δημιουργία ενός πρωτότυπου προβιοτικού φαρμάκου.

ΑΝΑΣΚΟΠΗΣΗ ΤΗΣ ΒΙΒΛΙΟΓΡΑΦΙΑΣ

συμπέρασμα Διατριβή με θέμα "Μικροβιολογία", Gataullin, Airat Gafuanovich

1. Με βάση τις μορφολογικές και φυσιολογικές-βιοχημικές ιδιότητες, τα απομονωμένα στελέχη ταυτοποιήθηκαν ως B. subtilis. Δεν βρέθηκαν πλασμίδια σε παρασκευάσματα DNA των στελεχών B. subtilis, κάτι που προφανώς υποδεικνύει χρωμοσωμικό έλεγχο της αντοχής στα αντιβιοτικά.

2. Χρησιμοποιώντας ένα μοντέλο δυσβίωσης σε λευκά ποντίκια, φάνηκε η προβιοτική δράση του στελέχους B.subtilis 1719, που εκδηλώνεται με την εξάλειψη ευκαιριακών και παθογόνων μικροοργανισμών με την αποκατάσταση της ποιοτικής και ποσοτικής σύνθεσης της φυσιολογικής μικροχλωρίδας.

3. Το βέλτιστο μέσο για τη συσσώρευση βιομάζας κατά την καλλιέργεια του στελέχους B. subtilis 1719 είναι το μέσο VK-2 με την προσθήκη γλυκόζης ή σακχαρόζης ως πηγή υδατανθράκων.

4. Έχει διαπιστωθεί ότι το στέλεχος B.subtilis 1719 διατηρεί βιωσιμότητα και ανταγωνιστική δράση σε λυοφιλοποιημένη κατάσταση με σταθεροποιητή σακχαρόζης-ζελατίνης για τουλάχιστον 4 χρόνια (περίοδος παρατήρησης), σε υγρή μορφή σταθεροποιημένη με διάλυμα NaCl 7% - 2 χρόνια και 1 έτος παρουσία απεσταγμένου νερού ή διαλύματος γλυκερίνης 10%.

5. Ανταγωνιστικά δραστικό, χαμηλής πρόσφυσης, χωρίς πλασμίδια, μη τοξικό στέλεχος B.subtilis 1719, το οποίο έχει προβιοτική και ανοσοτροποποιητική δράση, κατατίθεται στην Κρατική Συλλογή Καλλιεργειών GISC που φέρει το όνομά του. J1.A. Ταράσεβιτς.

6. Το στέλεχος B.subtilis 1719 (277), με βάση τις βιολογικές του ιδιότητες και τα βασικά τεχνολογικά του χαρακτηριστικά, είναι πολλά υποσχόμενο για χρήση στην ανάπτυξη νέων προβιοτικών σκευασμάτων.

ΣΥΜΠΕΡΑΣΜΑ

Οι ανακαλύψεις και τα επιτεύγματα της σύγχρονης βιολογικής και ιατρικής επιστήμης κατέστησαν δυνατή την ανάπτυξη και εφαρμογή νέων βιολογικών προϊόντων - προβιοτικών. Αυτά τα φάρμακα βασίζονται σε ζωντανές μικροβιακές καλλιέργειες. Το θεραπευτικό αποτέλεσμα αυτών των φαρμάκων βασίζεται στον έντονο μικροβιακό ανταγωνισμό έναντι παθογόνων και υπό όρους παθογόνων στελεχών - παθογόνων. Στη διαδικασία θεραπείας, η ανοσοτροποποιητική δράση των προβιοτικών δεν είναι λιγότερο σημαντική. Τα αναμφισβήτητα πλεονεκτήματα των φαρμάκων που παράγονται από ζωντανά βακτήρια έναντι των φαρμάκων που συντίθενται χημικά είναι η αβλαβή τους, οι φυσιολογικές τους ιδιότητες για τον ανθρώπινο οργανισμό και η απουσία αλλεργικών αντιδράσεων. Ήδη, τα προβιοτικά έχουν πάρει ηγετικές θέσεις στη διόρθωση της γαστρεντερικής μικροχλωρίδας, στις μεταβολικές διαταραχές και στη θεραπεία των συνεπειών της αντιβακτηριδιακής, χημειοθεραπείας, ορμονικής και ακτινοθεραπείας. Μια μελέτη του φαινομένου της βακτηριακής μετατόπισης έδειξε ότι τα προβιοτικά μπορούν να αντικαταστήσουν με επιτυχία τα αντιβιοτικά και τα πρωτεολυτικά ένζυμα στην πρόληψη και θεραπεία διαφόρων χειρουργικών λοιμώξεων.

Την τελευταία δεκαετία, βιολογικά προϊόντα που βασίζονται σε ζωντανές μικροβιακές καλλιέργειες βακτηρίων που σχηματίζουν σπόρους έχουν χρησιμοποιηθεί ευρέως για την πρόληψη και τη θεραπεία ασθενειών του γαστρεντερικού σωλήνα.

Η ποικιλομορφία των μεταβολικών διεργασιών, η γενετική και βιοχημική μεταβλητότητα, η αντίσταση στα λυτικά και πεπτικά ένζυμα χρησίμευσαν ως σκεπτικό για τη χρήση των βακίλων σε διάφορους τομείς της ιατρικής. Αυτοί οι μικροοργανισμοί είναι εύκολο να κατασκευαστούν, σταθεροί κατά την αποθήκευση και, κυρίως, φιλικοί προς το περιβάλλον.

Η υψηλή δραστικότητα στελεχών έναντι ενός συνόλου δοκιμαστικών καλλιεργειών δεν εγγυάται τη δράση του έναντι άλλων. Από αυτή την άποψη, η χρήση των προβιοτικών σπορίων περιορίζεται σε συγκεκριμένους θεραπευτικούς σκοπούς. Η μεταβλητότητα των νοσολογικών μορφών των πυωδών-σηπτικών ασθενειών και η ποικιλία των αιτιολογικά σημαντικών μικροοργανισμών για την ανάπτυξη δυσβιοτικών διαταραχών καθορίζουν τις απαιτήσεις για το βιολογικό προϊόν που χρησιμοποιείται. Αυτό ενθαρρύνει τους ερευνητές να εξετάζουν συνεχώς στελέχη ανταγωνιστών με επιθυμητές ιδιότητες.

Τα στελέχη που μελετήσαμε είχαν μορφολογικές και φυσιολογικές-βιοχημικές ιδιότητες τυπικές των εκπροσώπων του B. subtilis και χαρακτηρίζονταν από ένα σύνολο ενζύμων που διασπούν διάφορα υποστρώματα.

Σύμφωνα με τη βιβλιογραφία, το B.subtilis έχει έντονες ανταγωνιστικές ιδιότητες έναντι ενός ευρέος φάσματος παθογόνων μικροοργανισμών και υψηλή ενζυματική δραστηριότητα, λόγω της οποίας ομαλοποιεί τις πεπτικές διεργασίες και παρέχει επίσης αντιτοξική και αντιαλλεργική δράση.

Τα στελέχη του Β. subtilis που μελετήθηκαν είχαν ένα ευρύ φάσμα ανταγωνιστικής δράσης, χαμηλό (Β. subtilis Νο. 1719) ή μεσαίο (Β. subtilis Νο. 1594, Β. subtilis Νο. 1318) επίπεδο προσκόλλησης.

Έτσι, τα στελέχη που μελετήσαμε χαρακτηρίστηκαν από υψηλή προβιοτική δράση. Ωστόσο, η μελέτη των βιοχημικών ιδιοτήτων έδειξε ότι το στέλεχος B. subtilis 1719 είχε υψηλότερη ενζυματική δράση (πρωτεάση, αμυλάση, λιπάση), η οποία εκφραζόταν στη μεγαλύτερη ζώνη υδρόλυσης των υπό μελέτη υποστρωμάτων. Επιπλέον, το χαμηλό επίπεδο συγκολλητικής δραστηριότητας του στελέχους B. subtilis 1719 και, προφανώς, η φυσική του αντίσταση στα αντιβιοτικά, ελεγχόμενη από το χρωμόσωμα, μας επέτρεψαν να συμπεράνουμε ότι η περαιτέρω μελέτη αυτής της καλλιέργειας είναι πολλά υποσχόμενη.

Κατά τη γνώμη μας, οι προοπτικές για επέκταση της βιομηχανικής παραγωγής φαρμάκων με βάση το γένος Bacillus είναι πολύ μεγάλες.

Οι βάκιλλοι είναι ικανοί να εκκρίνουν πολλά ένζυμα στο υγρό της καλλιέργειας. Χρησιμεύουν ως σημαντικός βιομηχανικός χώρος για την παραγωγή πρωτεολυτικών και αμυλολυτικών ενζύμων που χρησιμοποιούνται στην παραγωγή προϊόντων διατροφής, απορρυπαντικών και βιοϊατρικών ουσιών. Την τελευταία δεκαετία, με τη συμμετοχή τους, ελήφθησαν μια σειρά από νέα αντιβιοτικά, βακτηριακά εντομοκτόνα και άλλες βιολογικά δραστικές ουσίες.

Παρά το γεγονός ότι το B. subtilis έχει κατάσταση GRAS, υπάρχουν μεμονωμένες αναφορές στη βιβλιογραφία σχετικά με την παρουσία παραγόντων παθογένειας σε ορισμένα στελέχη του B. subtilis. Υποδεικνύεται ότι αυτό δεν είναι μόνιμο σημάδι, καθώς εξαφανίζεται κατά τη διάρκεια της επανασποράς. Έχει προταθεί ότι οι παθογόνες ιδιότητες των βακτηρίων σχετίζονται με την παρουσία πλασμιδίων. Για παράδειγμα, οι Le N. και Anagnostopoulos S. απομόνωσαν πλασμίδια από 8 στελέχη B. subtilis από 83 άτομα που εξετάστηκαν. Το πλασμιδικό DNA προσδιορίστηκε μόνο στα κύτταρα τοξικογόνων στελεχών του B. subtilis και δεν βρέθηκε στα κύτταρα άλλων στελεχών του ίδιου είδους που δεν είναι τοξικογόνα. Η εξάλειψη των πλασμιδίων από τοξικογόνα στελέχη υπό την επίδραση παραγόντων εξάλειψης οδήγησε στην εξάλειψη των τοξικογόνων ιδιοτήτων των διηθημάτων καλλιέργειας. Ωστόσο, ο γενετικός ρόλος των πλασμιδίων δεν έχει μελετηθεί επαρκώς.

Στις μελέτες μας, δεν βρέθηκαν πλασμίδια στα απομονωμένα παρασκευάσματα DNA των τριών στελεχών του Β. subtilis που μελετήθηκαν.

Οι συγγραφείς που μελέτησαν την επίδραση των βακίλων στο σώμα των θερμόαιμων ζώων κατέληξαν στο συμπέρασμα ότι τα στελέχη του B. subtilis είναι εντελώς ακίνδυνα για τον άνθρωπο και τα ζώα. Απόδειξη αβλαβούς για τον μακροοργανισμό παρέχεται από πειραματικά δεδομένα ότι μέσα σε λίγες ημέρες μετά την παρεντερική χορήγηση, το B.subtilis αποβάλλεται από τον οργανισμό. Οι μηχανισμοί της θεραπευτικής επίδρασης αυτών των καλλιεργειών μελετήθηκαν σε ζώα. Επί του παρόντος, πιστεύεται ότι το θεραπευτικό αποτέλεσμα των προβιοτικών σπορίων καθορίζεται από ένα σύμπλεγμα παραγόντων, όπως: η παραγωγή βακτηριοσινών από καλλιέργειες B. subtilis, οι οποίες καταστέλλουν την ανάπτυξη παθογόνων και υπό όρους παθογόνων μικροοργανισμών. σύνθεση πολύ ενεργών ενζύμων: πρωτεάσες, ριβονουκλεάσες, τρανσαμινάσες κ.λπ. παραγωγή ουσιών που εξουδετερώνουν τις βακτηριακές τοξίνες.

Μια μελέτη των ιδιοτήτων του επιλεγμένου στελέχους σε ποντίκια έδειξε ότι είναι μη λοιμογόνο και δεν έχει τοξικότητα ή τοξικότητα.

Οι παράγοντες της θετικής επίδρασης των προβιοτικών στον μακροοργανισμό είναι διάφορα προϊόντα μικροβιακής σύνθεσης: αμινοξέα, πολυπεπτιδικά αντιβιοτικά, υδρολυτικά ένζυμα και μια σειρά από άλλες βιολογικά δραστικές ουσίες μικρότερης σημασίας. Ως εκ τούτου, η μελέτη και η απομόνωση των προστατευτικών ουσιών που παράγονται από μικροοργανισμούς του γένους Bacillus και η δημιουργία βιοϊατρικών φαρμάκων με βάση αυτούς είναι επιτακτική ανάγκη.

Στο γαστρεντερικό σωλήνα, εκδηλώνεται μια άμεση ανταγωνιστική δράση των βακίλων, η οποία είναι κυρίως επιλεκτική σε σχέση με παθογόνους και υπό όρους παθογόνους μικροοργανισμούς. Ταυτόχρονα, χαρακτηρίζονται από την απουσία ανταγωνισμού έναντι των εκπροσώπων της φυσιολογικής μικροχλωρίδας.

Στις μελέτες μας, κατά τη διόρθωση της πειραματικής δυσβίωσης που προκαλείται από τη χορήγηση του αντιβιοτικού δοξυκυκλίνης, η καλλιέργεια του B. subtilis 1719 συνέβαλε στην ομαλοποίηση της σύνθεσης και του αριθμού της εντερικής μικροχλωρίδας, καθώς και στην εξάλειψη υπό όρους παθογόνων μικροοργανισμών στο βρεγματική και αυλική μικροχλωρίδα.

Από τη βιβλιογραφία προκύπτει ότι τα βιομηχανικά στελέχη του γένους Bacillus έχουν χαμηλό δείκτη συγκολλητικής δραστηριότητας στα ερυθροκύτταρα και ασθενή ή μέτρια συγκολλητικότητα στα εντερικά επιθηλιακά κύτταρα. Τα στελέχη B. subtilis 534 και ZN έχουν περισσότερες προσκολλητίνες στους υποδοχείς των εντεροκυττάρων, το στέλεχος B. licheniformis - στα κολονοκύτταρα, π.χ. Διαφορετικά στελέχη φαίνεται να έχουν προσκολλητίνες σε υποδοχείς σε διαφορετικά εντερικά κύτταρα.

Η δραστηριότητά τους εμφανίζεται στον εντερικό αυλό και στρέφεται κατά παθογόνων μικροοργανισμών, χωρίς να ασκούν ανταγωνιστική επίδραση στους εκπροσώπους της φυσιολογικής μικροχλωρίδας. Κατά τη λήψη προβιοτικών σπορίων, γίνεται αντιληπτή η δυνατότητα αποκατάστασης της αυτοχλωρίδας σε διάφορους εντερικούς τόπους και μετά από 3-5 ημέρες αυξάνεται ο αριθμός των γαλακτοβακίλλων, των bifidobacteria, του E. coli κ.λπ. και στη συνέχεια αποκαθίσταται σε φυσιολογικά επίπεδα.

Τα αποτελέσματα των μελετών μας για την προσκόλληση μικροοργανισμών στα εντεροκύτταρα καθιστούν πιο πιθανό να υποστηρίξουμε ότι η συγκολλητική ικανότητα των εντερικών κυττάρων εξαρτάται από την ποσοτική και ποιοτική σύνθεση της φυσιολογικής μικροχλωρίδας. Σε δυσβιοτικές καταστάσεις, οι υποδοχείς ανοίγουν στην επιφάνεια των εντεροκυττάρων, στους οποίους προσκολλώνται υπό όρους παθογόνοι και παθογόνοι μικροοργανισμοί, και όταν διορθωθεί η δυσβίωση, το έντερο αποικίζεται από φυσιολογική μικροχλωρίδα και ο αριθμός των εντεροκυτταρικών υποδοχέων που είναι ικανοί να προσκολληθούν στην επιφάνειά του. οι γηγενείς μικροοργανισμοί μειώνονται.

Είναι γνωστό ότι η φυσιολογική μικροχλωρίδα παίζει σημαντικό ενεργητικό ρόλο στον μηχανισμό σχηματισμού της ανοσίας και ειδικών προστατευτικών αντιδράσεων στη μεταγεννητική ανάπτυξη του μακροοργανισμού.

Ο ρόλος της μικροχλωρίδας στην ανάπτυξη της ανοσολογικής απόκρισης οφείλεται στις καθολικές ανοσοτροποποιητικές της ιδιότητες, οι οποίες περιλαμβάνουν την ανοσοδιέγερση και την ανοσοκαταστολή. Έχει διαπιστωθεί ότι οι βακτηριακές λιποπολυσακχαρίτες (LPS) έχουν ανοσορυθμιστική επίδραση στην ανοσοαπόκριση Ig A και παίζουν το ρόλο των ανοσοενισχυτικών. Η μικροχλωρίδα εξασφαλίζει την ανάπτυξη ενός συμπλέγματος μη ειδικών και ειδικών ανοσολογικών αντιδράσεων, σχηματίζοντας μηχανισμούς προσαρμογής και προστασίας.

Ανεξάρτητα από το πόσο υψηλή είναι η αντιμικροβιακή δράση ενός φαρμάκου, παίζει καθοριστικό ρόλο στην εξάλειψη της λοιμώδους παθολογικής κατάστασης. Η δημιουργία φαρμάκων που είναι αποτελεσματικά στις αντιμικροβιακές ιδιότητες και διεγείρουν τις ανοσολογικές αποκρίσεις φαίνεται να είναι ένα σημαντικό έργο. Ως εκ τούτου, ένας μεγάλος αριθμός μελετών στοχεύει στη μελέτη της επίδρασης των προβιοτικών φαρμάκων σε διάφορα μέρη του ανοσοποιητικού συστήματος ανθρώπων και ζώων.

Η χορήγηση ζωντανών καλλιεργειών αερόβιων βακίλων διεγείρει σημαντικά την in vivo παραγωγή ιντερφερόνης ορού και ιντερφερόνης που προκαλείται in vitro από τον ιό της νόσου των Newcastle.

Ορισμένες μελέτες δείχνουν ότι τα προβιοτικά φάρμακα έχουν ανοσοτροποποιητική δράση, αποκαθιστώντας το ανοσοποιητικό καθεστώς που έχει εξασθενήσει από παθολογία, αυξάνοντας την παραγωγή ενδογενούς ιντερφερόνης, ενισχύοντας τη λειτουργική δραστηριότητα των κυττάρων μακροφάγων, αυξάνοντας τη φαγοκυτταρική δραστηριότητα των λευκοκυττάρων του αίματος - μονοκυττάρων και ουδετερόφιλων.

Οι μελέτες μας έδειξαν ότι η καλλιέργεια του B. subtilis 1719 άλλαξε σημαντικά τη μεταβολική δραστηριότητα των ουδετερόφιλων κατά τη διόρθωση της δυσβίωσης και δεν προκάλεσε αλλαγές στη λειτουργική δραστηριότητα των ουδετερόφιλων στην κανονική κατάσταση της γηγενούς μικροχλωρίδας. Επιπλέον, διαπιστώθηκε ότι η δυσβίωση συνοδεύτηκε από αύξηση του επιπέδου του TNF-a, που έδειξε έντονη φαγοκυτταρική, κυτταροτοξική, συγκολλητική δραστηριότητα μακροφάγων, λεμφοκυττάρων, καθώς και ενδοθηλιακών και επιθηλιακών κυττάρων του λεπτού εντέρου.

Η αυξημένη έκκριση προφλεγμονώδους κυτοκίνης σε ποντίκια με δυσβίωση πιθανώς αντανακλά την ενεργοποίηση ανοσοεπαρκών κυττάρων (Τ λεμφοκύτταρα, μονοκύτταρα/μακροφάγα). Υπό την επίδραση της καλλιέργειας B.subtilis 1719*, παρατηρήθηκε μείωση στην παραγωγή TNF-a. Η εισαγωγή της καλλιέργειας σε άθικτα ζώα δεν προκάλεσε αλλαγές στο επίπεδο παραγωγής TNF-a.

Λαμβάνοντας υπόψη ότι ο TNF-a είναι δείκτης φλεγμονωδών αντιδράσεων, συνήχθη το συμπέρασμα ότι το προβιοτικό παίζει σημαντικό ρόλο στην αύξηση της αντιφλεγμονώδους δραστηριότητας των ανοσοεπαρκών κυττάρων στα ζώα.

Μελέτες που διεξήχθησαν για τη μελέτη της δυναμικής της παραγωγής κυτοκίνης υπό την επίδραση του στελέχους B. subtilis 1719 έδειξαν ότι η καλλιέργεια δεν είχε καμία επίδραση στην παραγωγή κυτοκινών τις πρώτες ώρες μετά τη χορήγηση, εκτός από την IL-lp, η ποσότητα της οποίας συσσωρεύτηκε σταδιακά . Το επίπεδο άλλων κυτοκινών που μελετήθηκαν (IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, IL-12, IFN-y) αυξήθηκε σημαντικά στο διάστημα από 12 έως 24 ώρες.

Έτσι, η τροποποίηση των κυττάρων του ανοσοποιητικού συστήματος και οι αλλαγές στο δυναμικό κυτοκίνης μπορεί να είναι ένας από τους μηχανισμούς μέσω των οποίων η καλλιέργεια του B. subtilis 1719 συμβάλλει στη διόρθωση της δυσβίωσης.

Η ανάλυση των αποτελεσμάτων της επιστημονικής έρευνας που διεξάγεται στη χώρα μας και στο εξωτερικό δείχνει την κλίμακα χρήσης βακτηρίων του γένους Bacillus για την απόκτηση προϊόντων από βακτηριακή βιομάζα ή τους μεταβολίτες τους. Γνωστές μέθοδοι για την καλλιέργεια βακτηρίων του γένους Bacillus αποτελούν τη βάση για την τεχνολογία παραγωγής ενός αριθμού βακτηριακών και ενζυμικών παρασκευασμάτων. .

Κατά τη μελέτη των ιδιοτήτων ανάπτυξης της καλλιέργειας B. subtilis 1719 σε διάφορα υγρά θρεπτικά μέσα, διαπιστώθηκε ότι για τη μέγιστη συσσώρευση βιομάζας, το πιο κατάλληλο υπόστρωμα για την καλλιέργεια του στελέχους μπορεί να θεωρηθεί το μέσο BK-2 με προσθήκη γλυκόζης ή σακχαρόζη

Επί του παρόντος, κατά την επιλογή και τον χαρακτηρισμό καλλιεργειών παραγωγής μικροοργανισμών, λαμβάνονται υπόψη κυρίως οι ακόλουθοι δείκτες βιολογικών χαρακτηριστικών: το φάσμα και το επίπεδο ανταγωνιστικής δραστηριότητας, η δυνατότητα κατασκευής, δηλ. ικανότητα γρήγορης συσσώρευσης βιολογικής μάζας, αντοχή στην ξήρανση με ψύξη, βιωσιμότητα κατά την αποθήκευση. Ιδιαίτερη προσοχή δίνεται στα κριτήρια για τον βαθμό ασφάλειας των μικροοργανισμών που χρησιμοποιούνται για την ανθρώπινη υγεία.

Σε μελέτες που διεξήχθησαν για την αξιολόγηση της βιωσιμότητας των μικροβιακών κυττάρων του B.subtilis 1719 όταν αποθηκεύονταν παρουσία υγρών σταθεροποιητών, αποκαλύφθηκε ότι ο βέλτιστος σταθεροποιητής ήταν ένα διάλυμα NaCl 7%, το οποίο επέτρεψε τη διατήρηση της βιωσιμότητας και των ανταγωνιστικών ιδιοτήτων του στελέχους για 2 χρόνια. Για να διατηρηθούν οι ιδιότητες της καλλιέργειας για 1,5 χρόνο, είναι δυνατή η χρήση διαλύματος γλυκερίνης 10%, αποσταγμένου νερού 1 έτους και διαπιστώθηκε ότι αυτά τα πληρωτικά δεν είχαν στατιστικά σημαντική επίδραση στις ανταγωνιστικές ιδιότητες του Β. στέλεχος subtilis 1719. Θα πρέπει να σημειωθεί ότι ένα σημαντικό γεγονός είναι η ικανότητα του στελέχους B.subtilis 1719 να διατηρεί ανταγωνιστική δράση έναντι του S.sonnei και του S.aureus σε υγρούς σταθεροποιητές για μεγάλο χρονικό διάστημα 36 μηνών. (περίοδος παρατήρησης).

Η ξήρανση με ψύξη με σταθεροποιητή σακχαρόζης-ζελατίνης διατήρησε τη βιωσιμότητα και την ανταγωνιστική δράση του στελέχους 1719 του Β. subtilis για 4 χρόνια (περίοδος παρατήρησης).

Επί του παρόντος, γνωστά προβιοτικά φάρμακα χρησιμοποιούνται ευρέως στην πρακτική υγειονομική περίθαλψη: bactisubtil, sporobacterin, biosporin, bactisporin, subalin, cereobiogen, enterogermin και άλλα

Συγκριτική μελέτη του στελέχους B. subtilis 1719 για ανταγωνιστική και συγκολλητική δράση με εμπορικές καλλιέργειες των ακόλουθων προβιοτικών παρασκευασμάτων: Sporobacterin, Ρωσία (B. subtilis 534), Cereobiogen, Κίνα (B. cereus DM423), Subtil, Βιετνάμ (B. cereus var vietnami), Baktisubtil, Γαλλία (B.cereus IP5832), Nutrolin, Ινδία (B.coagulans), έδειξαν ότι το απομονωμένο στέλεχος είναι πρωτότυπο και μπορεί να προταθεί ως παραγωγής κατά την απόκτηση ενός νέου προβιοτικού φαρμάκου.

Έτσι, όσον αφορά τις φυσιολογικές και βιοχημικές ιδιότητες, το στέλεχος B. subtilis 1719 έχει σαφώς διακριτά μεμονωμένα χαρακτηριστικά, τα οποία περιλαμβάνονται στο διαβατήριο καλλιέργειας όταν κατατίθεται στη συλλογή καλλιέργειας του GISC που φέρει το όνομά του. J.I.A. Ταράσεβιτς. Επιπλέον, η κυρίαρχη θέση του απομονωμένου στελέχους 1719 του Β. subtilis όσον αφορά την ανταγωνιστική δράση υποδεικνύει τις προοπτικές χρήσης αυτής της καλλιέργειας για την ανάπτυξη ενός προβιοτικού παρασκευάσματος που βασίζεται σε αυτό.

Βιβλιογραφία Διατριβή στη βιολογία, υποψήφιος βιολογικών επιστημών, Gataullin, Airat Gafuanovich, Μόσχα

1. Ashmarin I.P., Vorobyov A.A. Στατιστικές μέθοδοι στη μικροβιολογική έρευνα. Medizd, 1962, 180 p.

2. Baibakov V.I., Karikh T.L., Borukaeva L.A. Κανονικοποίηση της εντερικής μικροχλωρίδας και της γενικής κατάστασης των ποντικών JCR υπό την επίδραση του συμπυκνώματος bifidobacteria.//Αντιβιοτικά και χημειοθεραπεία. 1997. - Τ. 42, Νο. 3. - σελ. 20-24.

3. Baida G.E., Budarina Zh.I. Πρωτογενής δομή και ανάλυση του γονιδίου αιμολυσίνης II του Bacillus cereus // 2 Rev. βουνά επιστημονικός συνδ. λένε Scientists, Pushchino, 23-25 ​​Απριλίου. 1997: Περίληψη. κανω ΑΝΑΦΟΡΑ Πουστσίνο. - 1997 - σσ. 45-46.

4. Baida G.E., Kuzmin N.P. Το γονίδιο HLY-III του Bacillus cereus, κλωνοποιημένο σε Escherichia coli, κωδικοποιεί μια νέα αιμολυσίνη που σχηματίζει πόρους. συνδ. αφιερωμένο στη μνήμη του ακαδημαϊκού A.A. Baeva: Abstracts of report, Moscow, 20-22 Μαΐου 1996. M. - 1996. - P. 108, 291.

5. Baranovsky A.Yu., Kondrashina E.A. Δυσβακτηρίωση και εντερική δυσβίωση // Αγία Πετρούπολη. "Πέτρος". -2000. -209 σελ.

6. Bakhanova E.M., Nikolaev S.M., Nikolaeva I.G., et al. Rast. πόροι. 2001. Τ. 37, αρ. 1. σελ. 70-76. Επίδραση εκχυλίσματος από βλαστούς Pentaphylloides fruticosa στην πορεία πειραματικής εντερικής δυσβίωσης που προκαλείται από σουλφαδιμεθοξίνη και ισονιαζίδη

7. Belyavskaya V.A., Sorokulova I.B., Ilyichev A.A. Προοπτικές για το σχεδιασμό ανοσοπαρασκευασμάτων που βασίζονται σε ανασυνδυασμένους βάκιλλους // Νέες κατευθύνσεις βιοτεχνολογίας: Proc. έγγρ. YI Conf. RF, 24-26 Μαΐου 1994. Pushchino. -1994.-Σ. 68.

8. Belyavskaya V.A., Sorokulova I.B., Masycheva V.A. Ανασυνδυασμένα προβιοτικά: προβλήματα και προοπτικές χρήσης στην ιατρική και την κτηνιατρική // Dysbacteriosis and eubiotics: Abstracts of the All-Russian Scientific and Practical Conf. Μ. - 1996. - Σ. 7.

9. Belyavskaya V.A., Cherdyntseva N.V., Bondarenko V.M., et al., Βιολογικές επιδράσεις της ιντερφερόνης που παράγεται από ανασυνδυασμένα βακτήρια του προβιοτικού φαρμάκου Subalin. Εφημερίδα microbiol., 2003, Νο. 2, σελ. 102-109.

10. Belyaev E.I. Τρόποι βελτίωσης φαρμάκων που ομαλοποιούν την εντερική μικροχλωρίδα / Rep. συλλογή επιστημονικών εργασιών: «Ανθρώπινη αυτοχλωρίδα σε φυσιολογικές και παθολογικές καταστάσεις. Πικρός. - 1988. - Σ. 74-78.

11. Bilibin A.F. // Ter. αψίδα. -1967. Νο. 11. - σελ. 21-28.

12. Bilibin A.F. // Klin. Φάρμακο. 1970. - Αρ. 2. - Σ. 7-12.

13. Birger M.O. Εγχειρίδιο μεθόδων μικροβιολογικής και ιολογικής εξέτασης. Προσδιορισμός της ευαισθησίας των μικροοργανισμών στα αντιβιοτικά. Μ.: Ιατρική, 1982. - Σ. 180.

14. Blinkova L.P., Semenov S.A., Butova L.G. Ανταγωνιστική δράση πρόσφατα απομονωμένων στελεχών βακτηρίων του γένους Bacillus // JMEI. 1994. -Ν5.-Σ. 71-72.

15. Boyko N.V., Turyanitsa A.I., Popovich E.P., Vyunitskaya V.A. Ανταγωνιστική επίδραση των καλλιεργειών Bacillus subtilis σε βακτήρια του γένους Klebsiella / Microbiol. και. 1989. - Τ. 51, Ν 1. - Σ. 87-91.

16. Boyko N.V., Lisetska M.V. Rozrobka probutiyuv vib1rkovostn: Protiskle-romna efektivshst dyakikh στελέχη V. subtilis // Nauk. Vyun. Ουζγκόρ. un-tu. Ser. Ταύρος. 1997. - Ν 4. - Σ. 194-198.

17. Bondarenko V.M., Petrovskaya V.G. Πρώιμα στάδια ανάπτυξης της μολυσματικής διαδικασίας και ο διπλός ρόλος της φυσιολογικής μικροχλωρίδας // Δελτίο της Ρωσικής Ακαδημίας Ιατρικών Επιστημών. -M.- 1997.-N3.-C. 7-10.

18. Bondarenko V.M., Chuprinina R.P., Aladysheva Zh.I., Matsulevich T.V. Προβιοτικά και μηχανισμοί της θεραπευτικής τους δράσης // Πείραμα. και σφήνα, γαστρεντερόλη. 2004. Αρ. 3. Σ. 83-87.

19. Bochkareva N.G., Belogortsev Yu.A., Udalova E.V. και άλλα Το βακτηριακό στέλεχος Bacillus subtilis είναι παραγωγός ενός συμπλέγματος υδρολυτικών ενζύμων εμπλουτισμένων με β-γλυκανάση // Pat. N 2046141 Russia, C12 N 9/42, Δημ. 20.10.95. - Ταύρος. Ν 29.

20. Μπρίλης Β.Ι. Συγκολλητικές ιδιότητες των γαλακτοβακίλλων // Περίληψη. dis. Ph.D. μέλι. Sci. Tartu. -1990. - 25 δευτ.

21. Brilis V.I., Briline T.A., Lenzner H.P., Lenzner A.A. Συγκολλητικές και αιμοσυγκολλητικές ιδιότητες των γαλακτοβακίλλων. Εφημερίδα Microbiol., 1982, 9: 7578.

22. Vasilyeva V.L., Tatskaya V.N., Reznik S.R. Εμπειρία στη χρήση φυτικών και μικροβιακών ανοσοενισχυτικών για τη λήψη ανοσολογικών υγρών ασκίτη σε πειραματόζωα // Mzhrobyul. περιοδικό 1974. Τ. 36, Ν 3. - Σ. 358-360.

23. Vershigora A.E. Βασικές αρχές της ανοσολογίας // Κίεβο: Σχολή Vishcha. 1975. - 319 σελ.

24. Vinnik Yu.S., Peryanova O.P., Yakimov S.V. et al., Μέθοδος θεραπείας πυωδών τραυμάτων με χρήση ανταγωνιστών / International journal on immunorehabilitation. 1998. - Ν 4., σελ. 143.

25. Vinogradov E.Ya., Shichkina V.P. Βακτηριακό στέλεχος B. mucilaginosus ως παραγωγός βιοδιεγέρτη μη ειδικής ανοσίας σε μόσχους // A.S. 1210452, ΕΣΣΔ -1/00. Δημ. 27/04/96. - Ταύρος. Ν 12.

26. Vladimirov Yu.A., Sherstnev M.P. Results of Science and Technology: Biophysics 1989; 24:172.

27. Vorobyov A.A., Abramov N.A., Bondarenko V.M., Shenderov B.A. Η δυσβακτηρίωση είναι ένα επείγον πρόβλημα στην ιατρική // Δελτίο της Ακαδημίας Ιατρικών Επιστημών. -1997. - Νο. 3. -Σ.3-9.

28. Vorobyov A.A., Nesvizhsky Yu.V., Zudenkova A.E., Budanova E.V. Συγκριτική μελέτη της βρεγματικής και αυλικής μικροχλωρίδας του παχέος εντέρου σε πειράματα σε ποντίκια. Εφημερίδα microbiol., 2001, 1: 62-67.

29. Vorobyov A.A., Nesvizhsky Yu.V., Lipnitsky E.M. και άλλα Μελέτη της βρεγματικής μικροχλωρίδας του ανθρώπινου εντέρου. Εφημερίδα microbiol., 2003, 1: 6063.

30. Vyunitskaya V.A., Boyko N.V., Spivak N.Ya., Ganova L.A./ Μερικοί μηχανισμοί δράσης νέων μικροβιοτικών // Μικροβιολογικά και βιοτεχνολογικά θεμέλια της εντατικοποίησης της παραγωγής καλλιεργειών και της παραγωγής ζωοτροφών: Συλλογή περιλήψεων Alma-Ata, 1990. - P. 17.

31. Galaev Yu.V. Παθογόνα ένζυμα βακτηρίων // M.: Medicine. 1968. - 115 σελ.

32. Goncharova G.I., Semenova A.P., Lyannaya A.M., et al. Ποσοτικό επίπεδο δισχιδούς χλωρίδας στο έντερο και η συσχέτισή της με την ανθρώπινη υγεία. // Αντιβιοτικά και μικροοικολογία ανθρώπων και ζώων. -1988.-Σ.118-123

33. Γκόρσκαγια Ε.Μ. Μηχανισμοί ανάπτυξης μικροοικολογικών διαταραχών στα έντερα και νέες προσεγγίσεις για τη διόρθωσή τους.//Διατριβή με τη μορφή επιστημονικής

34. Gracheva N.M., Goncharova G.I. και άλλα Η χρήση βακτηριακών βιολογικών σκευασμάτων στην πρακτική της θεραπείας ασθενών με εντερικές λοιμώξεις. Διάγνωση και θεραπεία εντερικής δυσβίωσης. Κατευθυντήριες γραμμές. 1986, σελ. 23

35. Gracheva N.M., Gavrilov A.F., Avakov A.A. κ.λπ. - Νέα φάρμακα. 1994, Νο. 1, σελ. 3-12

36. Gracheva N.M., Gavrilov A.F., Solovyova A.I. και άλλα. Η αποτελεσματικότητα του νέου βακτηριακού φαρμάκου βιοσπορίνη στη θεραπεία οξέων εντερικών λοιμώξεων // Περιοδικό. microbiol. 1996. - Ν 1. - Σ. 75-77.

37. Grebneva A.J1., Myagkova L.P. Intestinal dysbacteriosis // Οδηγός γαστρεντερολογίας σε 3 τόμους Μ., 1996. -T.Z. -Σ.324-334

38. Grigorieva T.M., Kuznetsova N.I., Shagov E.M. Στέλεχος Bacillus thuringiensis 4KN, που συνθέτει μια εξωτοξίνη με ειδική δράση κατά του σκαθαριού της πατάτας του Κολοράντο // Βιοτεχνολογία. 1994. - Ν 9-10. - Σ. 7-10.

39. Gulko M.A., Kazarinova JI.A., Pozdnyakova T.M. Μέθοδος για την παραγωγή ινοσίνης // Pat. N 175583, C12P 19/32. Δημ. 30/08/94. - Ταύρος. Ν 16.

40. Demyanov A.V., Kotov A.Yu., Simbirtsev A.S., Diagnostic value of studying cytokine level in κλινική πράξη. Journal of Cytokines and Inflammation, 2003, Vol. 2, No. 3, p. 20-35

41. Egorov N.S., Zarubina A.P., Vybornykh S.N., Landau N.S. Συνθετικό * μέσο για την ανάπτυξη βακτηρίων του γένους Bacillus // Δελτίο του Κρατικού Πανεπιστημίου της Μόσχας. 1989. Ν 4.1. Σελ. 52.

42. Ermakova L.M., Smirnova T.A., Alikhanyan S.I. et al., Crystal inclusions in a Bacillus subtilis mutant with a altered spectrum of proteinases // Dokl. Ακαδημία Επιστημών της ΕΣΣΔ. 1977. - Τ. 236, Ν 4. - Σ. 1001-1003.

43. Zhirkov I.N., Bratukhin I.I. Η χρήση του προβιοτικού RAS για τη διόρθωση της δυσβακτηρίωσης σε μόσχους // Κτηνιατρική. 1999. Ν 4. - σσ. 40-42.

44. Zgonnik V.V., Furtat I.M., Vasilevskaya I.A. και άλλα Ανταγωνιστικές ιδιότητες βακτηρίων που σχηματίζουν σπόρους που μολύνουν τη διαδικασία παραγωγής λυσίνης // Microbiol. και. 1993. -Τ.55, Ν4. - σελ. 53-58.

45. Zinkin V.Yu. Φωτομετρική δοκιμή NBT με ουδετερόφιλα ανθρώπινου αίματος και η κλινική και ανοσολογική σημασία της σε ασθενείς με μυοσκελετικό τραύμα. Περίληψη του συγγραφέα. dis. Ph.D. μέλι. Επιστήμες - Μόσχα, 2004.

46. ​​Zudenkov A.E. Μικροχλωρίδα και σύνθεση ανοσοεπαρκών κυττάρων της βρεγματικής βλεννίνης του παχέος εντέρου σε φυσιολογικές συνθήκες και σε ορισμένες παθολογικές καταστάσεις. Περίληψη του συγγραφέα. dis. Ph.D. μέλι. Επιστήμες, Μόσχα, 2001.

47. Ivanovsky A.A., Νέα προβιοτική βακτοκυτταρολακτίνη για διάφορες παθολογίες σε ζώα // Κτηνιατρική. 1996 - Ν11. - σελ. 34-35.

48. Ivanovsky A.A., Vepreva N.S., Zimireva V.V., Lagunova O.P. Μέθοδος για την παραγωγή προβιοτικών για κτηνιατρική / RU Patent N 2084233, publ. 20.07.97. Ταύρος. Ν 20.

49. Kandybin N.V., Ermolova V.P., Smirnov O.V. Αποτελέσματα και προοπτικές για τη χρήση βακτηριοκτόνου // Sovrem. κατόρθωμα βιοτεχν.: Mater. 1 Συνδ. Βόρειος Καύκασος περιοχή, Σταυρούπολη, Σεπτ. 1995. Σταυρούπολη. - 1995. - σσ. 14-15.

50. Kashirskaya N.Yu. Η σημασία των προβιοτικών και των πρεβιοτικών στη ρύθμιση της εντερικής μικροχλωρίδας.//Russian Medical Journal. 2000. - Τ. 8, Αρ. 13-14. - σελ. 572-575.

51. Kovalchuk L.V., Gankovskaya L.V., Rubakova E.I. Σύστημα κυτοκινών. Μ., 2000.

52. Kozachko I.A., Vyunitskaya V.A., Berezhnizkaya T.G. και άλλα. Τα βακτήρια του γένους 4 Bacillus είναι πολλά υποσχόμενες καλλιέργειες για τη δημιουργία βιολογικών μέσων προστασίας των φυτών από ασθένειες. // Mshrobyul. και. - 1995.- Τ.57, Ν 5. - Σ. 69-78.

53. Krasnogolovets V.N. Εντερική δυσβίωση. Μ., 1979. -198 σελ.

54. Kudryavtsev V.A., Safronova J.I.A., Osadchaya A.I. και άλλα Η επίδραση των ζωντανών καλλιεργειών του Bacillus subtilis στη μη ειδική αντίσταση του οργανισμού // Microbiol. και. 1996 - Τ.58, Ν 2. - Σ. 46-53.

55. Kuznetsova N.I., Smirnova T.A., Shamshina T.N. και άλλα Στέλεχος Bacillus thuringiensis, τοξικό για τις οικιακές μύγες // Βιοτεχνολογία. 1995. -Ν3-4.-Σ. 11-14.

56. Lapchinskaya A.V., Shenderov B.A. Διόρθωση της δυσβακτηρίωσης που προκαλείται από την κεφαλεξίνη και ορισμένους ανοσοτροποποιητές.//Ιατρικές πτυχές της μικροβιακής οικολογίας. Μ., 1991. -Σ.70-79

57. Lenzner A.A., Lenzner H.T., Michelsaar M.E. et al. Γαλακτοχλωρίδα και αντοχή στον αποικισμό.//Αντιβιοτικά και μέλι. βιοτεχνολογία. -1987. -32. - Νο. 3. -ΜΕ. 173-180.

58. Leshchenko V.M. Κλινική, διάγνωση και θεραπεία της σπλαχνικής καντιντίασης. Κατευθυντήριες γραμμές. Μ., 19871.

59. Lisetska M.V. Πειραματική μελέτη της ανταγωνιστικής δραστηριότητας του στελέχους 1b του Bacillus subtilis και της Klebsiella rhinoscleromatis // Nauk. Vyun. Ουζγκόρ. un-tu. Ser. Ταύρος. 1997. - Ν 4. - Σ. 207-212

60. Λοπατίνα Τ.Κ. et al. Ανοσοτροποποιητική επίδραση ευβιοτικών φαρμάκων* // Δελτίο της Ρωσικής Ακαδημίας Ιατρικών Επιστημών. Μ., «Ιατρική». -1997. Νο. 3. -Σ.30-34

61. Λούκιν Α.Α. Σχηματισμός αντιβιοτικών και σπορίωση σε μικροοργανισμούς χωρίς πλασμίδια και πλασμίδια // Pushchino. 1978. - σσ. 25-28.

62. Mazankova JI.H., Mikhailova N.A., Kurokhtina I.S. και άλλα. Η βακτισπορίνη είναι ένα νέο προβιοτικό για τη θεραπεία οξέων εντερικών λοιμώξεων σε παιδιά // Άνθρωπος και Ιατρική: Proc. κανω ΑΝΑΦΟΡΑ V Russian National Congress, Μόσχα, 8-12 Απριλίου 1997. - Μ. - Σ. 199.

63. Mazankova L.N., Vaulina O.V. Νέα φάρμακα για τη διόρθωση δυσβιοτικών διαταραχών.//Παιδιατρός. 2000. Νο. 3. - Σ. 51-53.

64. Maniatis T., French E., Sambrook J. Methods of genetic engineering. Μοριακή κλωνοποίηση, 1984.

65. Markov I.I., Zhdanov I.P., Markov A.I. Στέλεχος Bacillus subtilis MZh-6 ανταγωνιστής του Mycobacterium tuberculosis // Pat. N 2120992, C 12N 1/20. - Εκδ. 27.10.98.-Τουλ.Ν30.

68. Mikshis N.I., Shevchenko O.V., Eremin S.A. et al., Population heterogeneity of Bacillus anthracis strains II Dep. στο ΒΙΝΙΤΗ 06/04/98. Σαράτοφ. -1998.-7 σελ.

69. Mitrokhin S.D. // Αντιβιοτικά και χημειοθεραπεία. 1991. - Νο 8. - Σελ.46 - 50.

70. Mitrokhin S.D. Μεταβολίτες της φυσιολογικής ανθρώπινης μικροχλωρίδας στη ρητή διάγνωση και παρακολούθηση της θεραπείας της δυσβίωσης του παχέος εντέρου: Περίληψη της διατριβής. ιατρ. Sciences, M., 1998. 37 p.

71. Mitrokhin S.D., Ardatskaya M.D., Nikushkin E.V., Ivanikov I.O. και άλλοι - Μ., 1997. 45 σελ. Ολοκληρωμένη διάγνωση, θεραπεία και πρόληψη της εντερικής δυσβακτηρίωσης (δυσβίωση) στην κλινική εσωτερικών παθήσεων (Οδηγίες).

72. Mitrokhin S.D., Shenderov B.A. Μικροβιολογικοί και βιοχημικοί δείκτες αλλαγών στη μικροβιακή οικολογία του παχέος εντέρου των αρουραίων υπό την επίδραση της ριφαμπικίνης. Αντιβιοτικά και χημειοθεραπεία - 1999, Τ. 34 Νο. 6 (482-4).

73. Molchanov O.JL, Poznyak A.JI. Η χρήση της βιοσπορίνης στη σύνθετη θεραπεία της βακτηριακής κολπίτιδας // Proc. Dokl: Σύγχρονες τεχνολογίες διάγνωσης και θεραπείας λοιμωδών νοσημάτων. Αγ. Π. - 1999, σελ. 187.

74. Muzychenko JI.A., Senatorova V.N., Alkhovskaya JI.JI. και άλλα Μορφομετρική ανάλυση ανάπτυξης μικροοργανισμών / Βιοτεχνολογία. 1990. - Ν 3. - Σ. 3-6.

75. Müller G., Litz P., Munch G. Microbiology of food products of plant origin// M.: B.I..- 1977.- P.343 347

76. Nikitenko V.I. Βακτηριακό φάρμακο για την πρόληψη και τη θεραπεία της φλεγμονής. διεργασίες καύσης και αλλεργικές ασθένειες // Διεθνής εφαρμογή. N 89/09607, WO, δημοσίευση. 19/10/1989.

77. Nikitenko V.I. Αντί για φάρμακα, βακτήρια // Επιστήμη στην ΕΣΣΔ. - 1991. - Ν 4. -Σ. 116-121.

78. Nikitenko V.I. Ένα στέλεχος βακτηριδίων Bacillus subtilis που χρησιμοποιείται για τη λήψη γαλακτοκομικού προϊόντος που προορίζεται για τη θεραπεία της διάθεσής, της δυσβακτηρίωσης και των βακτηριακών λοιμώξεων // A.S. N 1648975, S.U. δημοσιεύθηκε 15.05. 91.

79. Nikitenko V.I., Nikitenko I.K. Ένα στέλεχος βακτηρίων Bacillus pulvifaciens που χρησιμοποιείται για την παρασκευή ενός θεραπευτικού και προφυλακτικού φαρμάκου κατά των βακτηριακών λοιμώξεων σε ζώα // A.S. N 1723117, S.U. δημοσίευση 12. 1992.

80. Nikitenko V.I., Nikitenko I.K. Ένα στέλεχος βακτηρίων Bacillus subtilis που χρησιμοποιείται για τη λήψη ενός φαρμάκου για την πρόληψη και τη θεραπεία αντιφλεγμονωδών διεργασιών και αλλεργικών ασθενειών // A.S. N 1723116, S.U. δημοσίευση 12. 1992.

81. Nikitenko L.I., Nikitenko V.I. Βακτηριακό στέλεχος Bacillus sp. συστατικό ενός θεραπευτικού και προφυλακτικού φαρμάκου κατά της δυσβακτηρίωσης και των αλλεργιών // A.S. N 1710575, S.U. - δημοσίευση 5. 1992.

82. Nikitenko V.I., Gorbunova N.N., Zhigailov A.V. Το Sporobacterin είναι ένα νέο φάρμακο για τη θεραπεία της δυσβακτηρίωσης και των πυωδών-φλεγμονωδών διεργασιών // Δυσβακτηρίωση και ευβιοτικά: Περιλήψεις αναφορών All-Russian. επιστημονικό-πρακτικό συνδ. -Μ.- 1996.-Σ. 26.

83. Nikolicheva T.A., Tarakanov B.V., Golinkevich E.K., Komkova E.E. Αλλαγές στη βιοκένωση της πεπτικής οδού των χοιριδίων όταν ο Bacillus micilaginosis περιλαμβάνεται στη διατροφή // Δελτίο. Παν-ρωσικό Ινστιτούτο Ερευνών Φυσιολ., Βιοχημείας και Διατροφής των Αγροτικών Ζώων. 1989.-Ν 2. - Σ. 31-35.

84. Obukhova O.V., Soboleva N.N. Σχετικά με την παρουσία ενός παράγοντα κατανομής σε καλλιέργειες σαπροφυτικών βακτηρίων σπορίων // Περιοδικό. microbiol. 1950. - Ν 12. Σ. 482-485.

85. Προσδιορισμός της ευαισθησίας των μικροοργανισμών στα αντιβακτηριακά φάρμακα. Μεθοδολογικές συστάσεις MUK 4.2.1980-04, 2004.

86. Osadchaya A.I., Kudryavtsev V.A., Safronova JI.A. Η επίδραση της μέσης οξύτητας και θερμοκρασίας στην ανάπτυξη και την απέκκριση των πολυσακχαριτών του Bacillus subtilis κατά τη διάρκεια της βυθισμένης καλλιέργειας // Misrobyul. περιοδικό 1998. - Τ. 60., Ν 4. - Σ. 25-32.

87. Osipova I.G. Μερικές πτυχές του μηχανισμού της προστατευτικής δράσης των ευβιοτικών κολιβακτηρίων και σπορίων και νέες μέθοδοι ελέγχου τους. // Περίληψη του συγγραφέα. Διδακτορική διατριβή στη βιολογία - Μ., 1997. - 25 σελ.

88. Osipova I.G., Sorokulova I.B., Tereshkina N.V., Grigorieva JI.B. Μελέτη της ασφάλειας των βακτηρίων του γένους Bacillus, τα οποία αποτελούν τη βάση ορισμένων προβιοτικών // Περιοδικό. microbiol. 1998. - Ν 6. - Σ. 68-70.

89. Osipova I.G., Mikhailova N.A., Sorokulova I.G., Vasilyeva E.A., Gaiderov A.A. Προβιοτικά σπορίων. Εφημερίδα microbiol. - 2003. Νο 3. Με. 113-119.

90. Osterman L.D. Μέθοδοι για τη μελέτη πρωτεϊνών και νουκλεϊκών οξέων. 1981.

91. Panin A.N., Serykh N.I., Malik E.V. και άλλα.. Αύξηση της αποτελεσματικότητας της προβιοτικής θεραπείας σε χοιρίδια / Veterinary Medicine, 1996. - N 3. - P. 17.

92. Panchishina M.V., Oleinik S.F. Εντερική δυσβίωση. Κίεβο, 1983

93. Parshina S.N., Imshenetsky A.A., Nesterova N.G. και άλλα. Το βακτηριακό στέλεχος Bacillus segesh είναι παραγωγός πρωτεολυτικών ενζύμων με θρομβολυτικά αποτελέσματα // A. C. N 1615177, C 12N 1/20. Δημοσιεύθηκε 23/12/90 - Δελτίο N 4. 1988.

94. Perth S. D. Βασικές αρχές της καλλιέργειας μικροοργανισμών και κυττάρων. M. Mir, 1978, 332 pp.

95. Petrov L.N., Verbitskaya N.B., Vakhitov T.Ya. Σχεδιασμός φαρμάκων για τη θεραπεία και την πρόληψη της δυσβίωσης με βάση τις ιδέες για την ανθρώπινη ενδο-οικολογία // Rus. και. HIV/AIDS και συναφή πρόβλημα 1997.- Τ. 1, Ν 1. Σ. 161-162.

96. Petrovskaya V.G., Marko O.P. Ανθρώπινη μικροχλωρίδα σε φυσιολογικές και παθολογικές καταστάσεις. Μ.: Ιατρική. -1976. -217 C.

97. Poberiy I.A., Kharechko A.T., Sadovoy N.V., Litusov N.V. Νέο σύνθετο ευβιοτικό «βιοσπορίνη» για παιδιά και ενήλικες / Healthcare of Bashkortostan. 1998. -Ν 1. - Σ. 97-99.

98. Pogosyan G.P., Nadirova A.B., Kaliev A.B., Karabaev M.K. Πλασμίδιο pCLl και αντιμικροβιακή δράση του Bacillus sp. 62 II Μοριακή γενετική, μικροβιολ. και ιολογία. 1999. - Ν 1. - Σ. 37-38.

99. Podberezny V.V., Parikov V.A. Μέσο για την καλλιέργεια συμβιόντων βακτηρίων Bacillus pulvifaciens ή Bacillus subtilis - παραγωγός προβιοτικών // RU Patent No. 2100029, publ. 27/12/97. Δελτίο Νο 36.

100. Podberezny V.V., Polyantsev N.I., Ropaeva L.V. Καλλιέργεια στελεχών παραγωγής Bacillus subtilis σε ορό γάλακτος τυριού // Veterinary Medicine.- 1996.-N 1.-S. 21-29.

101. Ποδοπρίγορα Γ.Ι. Ανοσολογικοί και μη ειδικοί μηχανισμοί αντίστασης στον αποικισμό.//Αντιβιοτικά και αντίσταση αποικισμού/Σωροί του Παν-Ρωσικού Ερευνητικού Ινστιτούτου Αντιβιοτικών. - M. -1990. - τεύχος Χ1Χ. -ΜΕ. 15-25.

102. Polkhovsky V.A., Bulanov P.A. Σχετικά με τις αποκαρβοξυλάσες αμινοξέων στο Bacillus cereus //Μικροβιολογία. 1968. - Τ. 37, Ν 4. - Σ. 600-604.

103. Pospelova V.V., Gracheva N.M., Antonova L.V. et al. Βιολογικά μικροβιακά παρασκευάσματα, οι μορφές δοσολογίας και οι περιοχές εφαρμογής τους // Νέα φάρμακα: Εξπρές πληροφορίες. -1990. -Τόμ. 5. - σελ. 1-8.

104. Pospelova V.V., Rakhimova N.G., Khaleneva M.P. και άλλα.Νέοι τομείς εφαρμογής μικροβιακών βιολογικών προϊόντων για τη διόρθωση της βακτηριοκένωσης του ανθρώπινου σώματος.//Immunobiol. φάρμακα. Μ. -1989. -ΜΕ. 142-152.

105. Reznik S.R. Μια μέθοδος για τη θεραπεία και την πρόληψη ιογενών και βακτηριακών ασθενειών των ζώων // SU, A.s. N 1311243, δημοσίευση. 1982.

106. Reznik S.R., Sorokulova I.B., Vyunitskaya V.A. και άλλα.Προληπτικό βιολογικό προϊόν sporolact // Patent N 2035186. RU. - A 61 K 35/66, εκδ. 20/05/95, δελτίο. Ν 14.

107. Reznik S.R., Shust I.I. Αιματολογικές και κυτταροχημικές παράμετροι μόσχων όταν χορηγείται το φάρμακο Bacteria-SL // Βιοχημεία γεωργικών ζώων και πρόγραμμα διατροφής: Proc. κανω ΑΝΑΦΟΡΑ Πανενωσιακή συμπόσιο -Κίεβο, 1989. Σ. 25.

108. Reshedko G.K., Stetsyuk O.U. Χαρακτηριστικά προσδιορισμού της ευαισθησίας των μικροοργανισμών με τη μέθοδο της διάχυσης του δίσκου. Σύγχρονες μέθοδοι κλινικής μικροβιολογίας, τεύχος 1. Smolensk, 2003.

109. Ryapis JI.A., Lipnitsky A.V. Μικροβιολογικές και πληθυσμιακές γενετικές πτυχές της βακτηριακής παθογένειας // Περιοδικό. microbiol. 1998. - Ν 6. Σ. 109-112.

110. Savitskaya K.I. Διαταραχές της μικροοικολογίας του γαστρεντερικού σωλήνα και χρόνιες εντερικές παθήσεις // Terra medica. - 1998. Ν 2. - σσ. 13-15.

111. Svechnikova E.B., Maksyutova L.F., Khunafin S.N. et al., Εμπειρία χρήσης βακτισπορίνης στη σύνθετη θεραπεία παιδιών με θερμικό τραυματισμό // Proc. Dokl: Σύγχρονες τεχνολογίες διάγνωσης και θεραπείας λοιμωδών νοσημάτων. Αγ. Π. - 1999 - Σελ. 268.

112. Sinev M.A., Budarina Zh.I., Gavrilenko I.V. et al., Απόδειξη της ύπαρξης αιμολυσίνης II του Bacillus cereus: κλωνοποίηση του γενετικού καθοριστικού παράγοντα της αιμολυσίνης II // Molek. biol. 1993. - Τ. 27, Ν 6. - Σ. 1218-1229.

113. Slabospitskaya A.T., Krymovskaya S.S., Reznik S.R. Ενζυματική δραστηριότητα βακίλλων που είναι πολλά υποσχόμενα για συμπερίληψη σε βιολογικά προϊόντα // Microbiol. και. 1990. - Ν2. - Σ. 9-14.

114. Smirnov V.V., Reznik S.R., Vasilevskaya I.A. Τα αερόβια βακτήρια που σχηματίζουν σπόρους είναι παραγωγοί βιολογικά δραστικών ουσιών. - Κίεβο, 1982 - 280 σελ.

116. Smirnov V.V., Reznik S.R., Vasilevskaya I.A. Αερόβια βακτήρια που σχηματίζουν σπόρους - παραγωγοί βιολογικά δραστικών ουσιών // Κίεβο. Naukova Duma.- 1983.- 278 σελ.

117. Smirnov V.V., Reznik S.R., Sorokulova I.B. και άλλοι Σχετικά με ορισμένους μηχανισμούς εμφάνισης ασυμπτωματικής βακτηριαιμίας // Microbiol. περιοδικό 1988 -Τ. 50, Ν6.-Σ. 56-59.

118. Smirnov V.V., Reznik S.R., Sorokulova I.B. και άλλοι Μέθοδος θεραπείας πυώδους-σηπτικής μετά τον τοκετό ασθενειών με αναστολή ζωντανών καλλιεργειών // A. p. N 1398868 S.U. - A 61 K 35/74. - δημοσίευση 30/05/88, δελτίο. Ν 20.

119. Smirnov V.V., Reznik S.R., Sorokulova I.B. και άλλοι Το φάρμακο βιοσπορίνη για την πρόληψη και τη θεραπεία ανθρώπινων γαστρεντερικών ασθενειών // A. p. N 1722502. S.U. - Α 61 Κ. 39/02, εκδ. 30/03/92.

120. Smirnov V.V., Reznik S.R., Sorokulova I.B., Vyunitskaya V.A. Αμφιλεγόμενα θέματα δημιουργίας και χρήσης βακτηριακών παρασκευασμάτων για τη διόρθωση της μικροχλωρίδας των θερμόαιμων ζώων // Microbiol. περιοδικό 1992. - Τ.54, Ν 6.- Σ. 82-92.

121. Smirnov V.V., Reznik S.R., Vyunitskaya V.A., et al., Σύγχρονες ιδέες για τους μηχανισμούς θεραπευτικής και προφυλακτικής δράσης προβιοτικών από βακτήρια του γένους Bacillus II Microbiol. περιοδικό - 1993. - 55, - Αρ. 4. Σ. 92-112

122. Smirnov V.V., Osadchaya A.I., Kudryavtsev V.A., Safronova JI.A. Ανάπτυξη και σπορίωση του Bacillus subtilis υπό διάφορες συνθήκες αερισμού // Microbiol. περιοδικό 1993. - Τ. 55, Ν 3. - Σ. 38-44.

123. Smirnov V.V., Reznik S.R., Sorokulova I.B. και άλλα Προληπτικό βιολογικό προϊόν subalin // Patent N 2035185, RU. A 61 K 35/66, εκδ. 20/05/95, δελτίο. Ν 14.

124. Smirnov V.V., Sorokulova I.B., Osipova I.G. Βιολογικό προϊόν subticol για την πρόληψη και τη θεραπεία μολυσματικών ασθενειών // Patent N 2129432. -A. 61 Κ 35/74. - Ταύρος. Ν 12, δημοσίευση. 27/04/99.

125. Smirnov V.V., Reva O.N., Vyunitskaya V.A. Δημιουργία και πρακτική εφαρμογή ενός μαθηματικού μοντέλου της ανταγωνιστικής δράσης των βακίλων στο σχεδιασμό των προβιοτικών // Mshrobyulopchnyi zhurn. 1995. -Τ. 64, Ν 5. -S. 661-667.

126. Smirnov V.V., Kosyuk I.V. Συγκολλητικές ιδιότητες βακτηρίων του γένους Bacillus - συστατικά του drobiotic // Mshrobyulopchnyi zhurnal. 1997. - Τ. 69, Ν 6. - Σ. 36-43.

127. Sorokulova I.B. Προοπτικές για τη χρήση βακτηρίων του γένους Bacillus για το σχεδιασμό νέων βιολογικών προϊόντων // Αντιβιοτικά και χημειοθεραπεία. -1996. Τ.41, Ν 10. - σσ. 13-15.

128. Sorokulova I.B. Συγκριτική μελέτη των βιολογικών ιδιοτήτων της βιο-σπορίνης και άλλων εμπορικών παρασκευασμάτων που βασίζονται σε βάκιλλους // Mshrobyu-lopchny journal. 1997. - Τ. 69, Ν 6. - Σ. 43-49.

129. Sorokulova I.B. Η επίδραση των προβιοτικών από τους βάκιλλους στη λειτουργική δραστηριότητα των μακροφάγων / Αντιβιοτικά και χημειοθεραπεία. 1998. - Τ. 43, Ν 2. - Σ. 20-23.

130. Storozhuk P.G., Bykov I.M., Storozhuk A.P. Παθογενετικός προσανατολισμός πρωτεϊνικής διατροφής και θεραπείας ενζυμικής υποκατάστασης σε καταστάσεις ανοσοανεπάρκειας του σώματος // Διεθνές περιοδικό για την ανοσοαποθεραπεία. 1998. - Ν 10., σσ. 110-115.

131. Tabolin V.A., Belmer S.V., Gasilina T.V. και άλλα Ορθολογική θεραπεία της εντερικής δυσβίωσης στα παιδιά. Κατευθυντήριες γραμμές. Μ., 1998. -11 σελ.

132. Topchy M.P. Η χρήση φαρμάκων από ζωντανές καλλιέργειες Bacillus subtilis για δυσβακτηρίωση σε μόσχους: Περίληψη διατριβής. dis. Ph.D. biol. Sci. Μινσκ, 1997. -21 σελ.

133. Trishina N.V. Η σχέση μεταξύ της ανάπτυξης εντερικής δυσβίωσης και της κατάστασης ανοσίας κατά της ενδοτοξίνης. Περίληψη του συγγραφέα. dis. Ph.D. μέλι. Sci. -Μόσχα, 2003., 24 σελ.

134. Δάσκαλος Ι.Υα. Μακροφάγα στο ανοσοποιητικό σύστημα. Μ 1978; 175.).

135. Fazylova A.A. Κλινική και ανοσολογική αιτιολογία για τη χρήση σποροβακτηρίνης και βακτησπορίνης για εντερική δυσβίωση σε μικρά παιδιά // Συγγραφέας. μπορώ. dis. Ούφα. - 1998. - 24 σελ.

136. Harwood K. Bacillus. Γενετική και βιοτεχνολογία. Μ., 1992. - Σελ. 52.

137. Kharchenko S.N., Reznik S.R., Litvin V.P. Μέθοδος για την καταπολέμηση της μούχλας των ζωοτροφών // A.S. N 751382, USSR, δημοσίευση. στο Β.Ι., 1980, Νο. 28.

138. Khmel I.A., Chernin L.S., Levanova N.B. και άλλα Στέλεχος βακτηρίων Bacillus pumilus για τη λήψη φαρμάκου κατά φυτοπαθογόνων μικροοργανισμών // Patents 1817875 Russia F01N 63/00, C12N 1/20. δημοσίευση 20.05.95. - Ταύρος. Ν 14.

139. Chernyakova V.I., Bereza N.M., Selezneva S.I. Βακτηριολογική και ανοσολογική αποτελεσματικότητα του φαρμάκου βιοσπορίνη σε μη ειδική ελκώδη κολίτιδα // Mikrobiol.zh. 1993. - Τ. 55, Ν 3. - Σ. 63-67.

140. Chkhaidze I.G., V.G. Likhoded, et al. Διορθωτική επίδραση των αντισωμάτων στην πειραματική δυσβακτηρίωση // Περιοδικό. Microbiol. 1998, αρ. 4: 12-14.

141. Sharp R., Skaven M., Atkinson T. Bacillus: Genetics and biotechnology. -Μ. 1992. - 398 σελ.

142. Sheveleva S.A. Προβιοτικά, πρεβιοτικά και προβιοτικά προϊόντα. Τρέχουσα κατάσταση του ζητήματος // Θέματα διατροφής. -1999. -Τ.68. - Νο 2. -Σελ.32

143. Shenderov B. A. Ιατρική μικροβιακή οικολογία και λειτουργική διατροφή - M., 1998, T. I, P. 287.

144. Shenderov B.A. Αντοχή στον αποικισμό και χημειοθεραπευτικά και αντιβακτηριακά φάρμακα. // Αντιβιοτικά και αντίσταση αποικισμού: Πρακτικά του Πανρωσικού Ερευνητικού Ινστιτούτου Αντιβιοτικών. Μ. -1990. - τεύχος Χ1Χ. -Σ.5-16.

145. Shenderov B.A., Manvelova M.A., Stepanchuk Yu.B., Skiba N.E. Προβιοτικά και λειτουργική διατροφή // Αντιβιοτικά και χημειοθεραπεία. 1997. - Τ. 42, Ν 7. - Σ. 30-34.

146. Shenderov B.A. Ιατρική μικροβιακή οικολογία και λειτουργική διατροφή.-M., 1998, T. II, P. 413

147. Yampolskaya T.A., Velikzhanina G.A., Zhdanova N.I. κλπ. Βακτηριακό στέλεχος Bacillus subtilis που παράγει L-φαινυλαλανίνη: A.s. N 1693056, C 12 R 13/22, δημοσίευση. 23.11.91. Ταύρος. Ν 43.

148. Adami A., Sandrucci A., Cavazzoni V. Γουρουνάκια που τρέφονται από τη γέννηση με τον προβιοτικό Bacillus coagulans ως πρόσθετο: Ζωοτεχνικές και μικροβιολογικές πτυχές // Ann. microbiol. ed enzimol. 1997. - V. 47, N 1. - P. 139-149.

149. Azuma I., Sugimura C., Iton S. Επικουρική δράση βακτηριακών γλυκολιπιδίων // Jap. J. Microbiol. 1977. - V. 20, N 5. - P. 465-468.

150. Benedettini J. et al. Ανοσοτροποποίηση από σπόρια Bacillus subtilis // Boll. 1η, Sierote Milan. 1983.-V. 62.,Ν6.-Π. 509-516.

151. Berkel H., Hadlok R. Lecithinase-und Toxinbildung durch Stamme der Gat-tung Bacillus // Lebensmittelhygiene. 1976. - V. 27, N 2. - p. 63-65.

152. Bernheimer A., ​​Avigad L. Nature and Properties of Cytolytic Agent που παράγεται από τον Bacillus subtilis // J. Gen. Μικροβ. - 1970. V. 61, Ν 2. - Σ. 361-369.

153. Blaznic J, Kumel Ι.Μ., Salamum Β. et αϊ. Sdravljenje kronicne granulomotozne bolezni z acidofilnem mlecom // Zdrav.Vesth. 1976. Ν 45. - Σ. 77-79.

154. Boer A.S., Priest F., Diderichsen B. On the industrial use of Bacillus licheniformis: A review // Appl. Microbiol, and Biotechnol. 1994. - V. 40, N 5. - P. 595-598.

155. Buchell Μ.Ε., Smith J., Lynch H.C. Ένα φυσιολογικό μοντέλο για τον έλεγχο της παραγωγής ερυθρομυκίνης σε καλλιέργεια παρτίδας και κυκλικής τροφοδοσίας // Μικροβιολογία. -1997. V. 143, N 2. - P. 475-480.

156. Cipradi G. et al. Επιδράσεις μιας επικουρικής θεραπείας με Bacillus subtilis για τροφική αλλεργία // Χημειοθεραπεία. -1986. 5, Ν6. -Σ.408-410

157. Cromwick A.M., Birrer G.A., Gross R.A. Επιδράσεις του pH και του αερισμού στον σχηματισμό y-πολυ (γλουταμινικού οξέος) από το bacillus licheniformis σε καλλιέργειες ζυμωτή ελεγχόμενης παρτίδας // Biotechnol. και Bioeng. 1996. - V. 50, N 2. - P. 222-227.

158. Danchin Α., Glasser Ρ., Kunst F. et al. Bacillus subtilis devoile ses genes // Biofutur. 1998. - Ν 174. - Σελ. 14-17.

159. Devin K.M. Το έργο του γονιδιώματος του Bacillus subtilis: Στόχοι και πρόοδος // Trends Biotechnol. 1995. - V. 13, N 6. - P. 210-216.

160. Donovan W.P., Rupar M.J., Slanei A.C. Bacillus thuringiensis crytic, πρωτεϊνική τοξική σε έντομα κολεόπτερα // Patent N 5378625 USA A61K 31/00. Δημ. 01/03/95.

161. Dubos R. Τοξικοί παράγοντες σε ένζυμα που χρησιμοποιούνται σε προϊόντα πλυντηρίου // Επιστήμη. 1971. - Ν 3993. - Σ. 259-260.

162. Edlund C., Nord C.E. Επίδραση των κινολονών στην εντερική οικολογία. Drugs, 1998, 58(2): 65-70.

163. Νόσος Flindt M. Pulmonare λόγω εισπνοής παραγώγων του Bacillus subtilis που περιέχουν πρωτεολυτικό ένζυμο // Lancet. - 1969. V. 1, Ν 7607. - P. 1177-1181.

164. Fox M. The phylogeny of procaryotes // Science. -1980. V. 209, Ν 4455. Σ. 457-463.

165. Fuller R. J Appl Bacteriol 1989; 66:5:365-378.

166. Gastro G.R., Ferrero M.A., Abate C.M. et al. Ταυτόχρονη παραγωγή άλφα και βήτα αμυλασών από τον Bacillus subtilis Mir-5 σε παρτίδα και συνεχή καλλιέργεια // Biotechnol. Κάτοικος της Λατβίας. 1992. - V. 14, N 1. - P. 49-54.

167. Glatz Β.Α., Spira W.M., Goepfert J.M. Αλλαγή της αγγειακής διαπερατότητας σε κουνέλια από διηθήματα καλλιέργειας Bacillus cereus και συγγενών ειδών // Infect, and Immunol. 1974. V. 10, Ν 2. - Σ. 299-303.

168. Guida V., Guida R. Importansia dos Bacillos esporulados aerobios em gastroenterologia e nutricao // Rev. Βραζιλία. ιατρ. 1978. - V. 35, N 12. - P. 702707.

169. Haenel H., Bending J. Intestinal flora in health and disease // Προγρ. Τρόφιμα και Διατροφή sci.- 1975.-V. 21, N l.-P. 64.

170. Himanen J.-P., Pyhala L., Olander R.-M. et al. Biological activites of lipo-teichoic acid and peptidoglycan teichoic acid of Bacillus subtilis 168 // J. Gen. Microbiol. - 1993.-V. 139, N 11.-P. 2659-2665.

171. Hirano Υ., Matsudo Μ., Kameyama Τ. Δισδιάστατη ηλεκτροφόρηση γέλης πολυακρυλαμιδίου πρωτεϊνών που συντίθενται κατά την πρώιμη βλάστηση του Bacillus subtilis 168 παρουσία ακτινομυκίνης D // J. Basic Microbiol. 1991. - V. 31, N 6. - P. 429-436.

172. Humbert Florence Les probiotigues: un sujet d" actualite // Bull. inf. Stat. exp. auicult. Ploufragan. 1988. - V. 28, N 3. - P. 128-130.

173. Inouye S., Kondo S. Amicoumacin και SF-2370, φαρμακολογικά δραστικοί παράγοντες μικροβιακής προέλευσης // Novel Microbial Prod. Med. και Αγρ. Άμστερνταμ. -1989.-Π. 179-193.

174. Johnson S. E. Θανατηφόρα τοξίνη του Bacillus cereus 1. Σχέσεις και φύση της τοξίνης, της αιμολυσίνης και της φωσφολιπάσης // J. Bacterid. 1967. V. 94, N 2. - P. 306316.

175. Kakinuma A., Hori M., Isono M. Προσδιορισμός λιπαρού οξέος στην επιρφακτίνη και διασαφήνιση της συνολικής δομής της σουρφακτίνης // Agric. and Biol. Chem. 1969. - V. 33. - P. 973-976.

176. Kaneko J., Matsushima H. ​​Crystal-like structure in the sporulation cells of Bacillus subtilis 168 // J. Electron. Microsc. - 1973. V. 22, N 2. - P. 217-219.

177. Kaneko J., Matsushima H. ​​Crystalline inclusions in sporulating Bacillus subtilis κύτταρα // In: Spores YI. Επιλέγω. Χυλός. 6th Int. Spore Conf. Βάσιγκτων. - 1975. -Π. 580-585.

178. Kitazawa Η, Nomura Μ, Itoh Τ. J Dairy Sci 1991; 74:7:2082 2088.

179. Κούμπο Καζουχίρο. Καθαρή καλλιέργεια του Bacillus subtilis FERM BP-3418 // Pat. N 5364738. Η.Π.Α. MKI A01N 25//00. - δημοσίευση 15/11/94.

180. Kudrya V.A., Simonenko L.A. Απομόνωση αλκαλικής πρωτεϊνάσης σερίνης και λεκτίνης από το υγρό καλλιέργειας του Bacillus subtilis // Appl. Microbiol, and Biotechnol. -1994.-V. 41,Ν5.-Π. 505-509.

181. Le H., Anagnostopoulos C. Ανίχνευση και χαρακτηρισμός πλασμιδίων που απαντώνται στη φύση // Molec. Γεν. Genet. 1977. - V. 157. - Σ. 167-174.

182. Legakis N.J., Papavassilion J. Τεχνική χρωματογραφίας λεπτής στιβάδας για ταχεία ανίχνευση βακτηριακών φωσφολιπασών // J. Clin. Microbiol - 1975. V.2, Ν 5. - Ρ. 373-376.

183. Leviveld H.L.M., Bachmayer Η., Boon Β. et αϊ. Ασφαλής βιοτεχνολογία. Μέρος 6. Αξιολόγηση ασφάλειας, όσον αφορά την ανθρώπινη υγεία μικροοργανισμών που χρησιμοποιούνται στη βιοτεχνολογία // Εφαρμογή. Microbiol, and Biotechnol. 1995. V. 43, N 3. - P. 389-393.

184. Lin S.-C., Carswell K.S., Sharma M.M., Georgiou G. Continuos production of the lipopeptide biosurfactant of Bacillus licheniformis JF-2 // Appl. Microbiol, and Biotechnol. 1994. - V. 41, N 3. - P. 281-285.

185. Lovett P., Bramucci M. Plasmid DNA in bacilli // In: Microbiology-Washington. 1976. - Σελ. 388-393.

186. Markham R., Wilkie B. Επίδραση του απορρυπαντικού στην αλλεργική ευαισθητοποίηση αεροζόλ με ένζυμα από εσάς. subtilis // Int. Αψίδα. Αλλεργία και Εφαρμ. Immunol. 1976.-V. 51, Ν 5. - Σ. 529-543.

187. Maruta Kiyoshi Αποκλεισμός των εντερικών παθογόνων παραγόντων με συνεχή σίτιση με Bacillus subtilis C-3102 και η επίδρασή του στην εντερική μικροχλωρίδα στα κοτόπουλα κρεατοπαραγωγής // Anim. Sci. και Τεχνολ. 1996. - V. 67, N 3. - P. 273-280.

188. Moszer I., Glaser P., Danchin A. SubtiList: Μια σχεσιακή βάση δεδομένων για το γονιδίωμα του Bacillus subtilis // Microbiology. 1995. - V. 141, N 2. - P. 261-268.

189. Murray P.R., Baron E.J., Pfaller M.A., Tenover F.C., Jolken R.H., Manual of Clinical Microbiology, 7th Edition, Washington D.C., ASM Press, 1999

190. Nozari-Renard J. Induction d 5, OInterferon par Bacillus subtilis // Ann. Microbiol. 1978. - V. 129a. - Ν 4. - Σ. 525-542.

191. Oh M.K., Kim B.G., Park S.H. Σημασία μεταλλαγμάτων σπορίων για τροφοδοτούμενη παρτίδα και συνεχή ζύμωση του Bacillus subtilis // Biotechnol. και Bioeng. 1995.-V. 47, Ν 6. - Σ. 696-702.

192. Payne Jewel M. Isolates of Bacillus thuringiensis Hist είναι ενεργοί αγιανιστικοί νηματώδεις / Patent N 5151363, C12 N 1/20, A 01 N 63/00, appl. 27/07/90, δημοσίευση. 29.09.92.

193. Pepys J., Hargreave F., Longbotton Y. Αλλεργικές αντιδράσεις των πνευμόνων σε ένζυμα του Bacillus subtilis // Lancet. 1969. - V. 1, N 44 - 7607. - P. 1181-1184.

194. Peterson W.L., Mackrowiak Ph.A., Barnett C.C. et al. Ο ανθρώπινος γαστρικός βακτηριοκτόνος φραγμός: Μηχανισμοί δράσης, σχετική αντιβακτηριακή δράση και διατροφικές επιρροές.//J. μόλυνση Ασθένειες. -1989. -159 Αρ. 5. -σελ.978-985.

195. Prasad S.S.V., Shethna G.J. Βιολογικές δραστηριότητες βιοχημείας του πρωτεϊνικού κρυστάλλου του Bacillus thuringiensis // J. Sci. και Ind. Res. 1976. - V. 35, N 10. - P. 626-632.

196. Rocchietta I. Η χρήση του Bacillus subtilis στη θεραπεία των ασθενειών/Minerva Med. -1969. -60. N3/4. -Π. 117-123.

197. Rosenthal G.J., Corsini Ε. // Methods Immunotoxicol. 1995. V 1, Ρ 327-343

198. Rychen G., Simoes Nunes C. Effets des flores lactigues des produits laitiers fermentes: Une base scientifigue pour l "etude des probiotiques microbiens dans l"espece porcine // Prod. anim. 1995. - V. 8, N 2. - P. 97-104.

199. Salminen Seppo Κλινικές πτυχές των προβιοτικών //Ecol. υγείας και ασθένειας.-1999.- 11.-Ν4.-Π. 251-252

200. Shore N., Greene R., Kezeni H. Lung disfuction in worcers που εκτίθενται σε Bacillus subtilis // Environm. Res. 1971. - V. 4, N 6. - P. 512-519.

201. Slein M., Logan G., Characterization of the phospholipases of you. cereus και τα αποτελέσματά τους στα ερυθροκύτταρα, τα οστά και τα νεφρικά κύτταρα // J. Bacteriol. 1965. - V. 90, Nl.-P. 69-81.

202. Somerville H.J. Η εντομοκτόνος ενδοτοξίνη του Bacillus thuringiensis // Στο: Sem. θέμα etude Παραγωγή, φύση. et πρωτ. φυτό. 1977. - Σελ. 253-268.

203. Spira W., Goepfert J. Βιολογικά χαρακτηριστικά μιας εντεροτοξίνης που παράγεται από τον Bacillus cereus // Can. J. Microbiol. 1975. - V. 21, N 8. - P. 1236-1246.

204. Stgard Henri Microbielle v kstfremmer til svin. Teori og prasksis/ Dan veterinaertidsskr. 1989. - V. 72, N 15. - P. 855-864.

205. Su Li, Zhang Zhihong, Xiao Xianzhi, Wang Xiaomin Wuhan daxue xuebao. Ziran kexue ban // J. Wuhan Univ. Natur. Sci. Εκδ. 1996. - V. 42, N 4. - C. 516518.

206. Sumi H. Physiological function of natto // J. Brew. Soc. Ιάπωνες. 1990. - V. 85, N 8.-P. 518-524.

207. Tihole F. Fizioloski pomer backteriemije z geiunalo microflora // Zdravstv vestn 1982. - V. 51, N 1. P. 3-5.

208. Towalski Z., Rothman H. Enzyme technology //στο: The Biotechnological Challenge. Cambridge University Press. Cambridge, 1986 - Σελ. 37 -76.

209. Tsuge Kenji, Ano Takashi, Shoda Makoto. Χαρακτηρισμός του Bacillus subtilis YB8, συμπαραγωγού λιποπεπτιδίων surfactin και plipastatin B1 //J. Γεν. and Appl. Microbiol. 1995.- 41, Ν 6. Σ. 541-545.

210. Van der Waaij D. Αντίσταση αποικισμού του πεπτικού συστήματος: μηχανισμός και κλινικές συνέπειες.//Nahrung. -1987. -31 Αρ. 5. -σελ.507-524.

211. Vollaard E.J., Clasener H.A.L., Janssen J.H.M. Η συμβολή του Escherichia coli στη μικροβιακή αντοχή στον αποικισμό.//.!, της Αντιμικροβιακής Χημειοθεραπείας. -1990.- 26. -σελ.411-418