Симптоми на микоза на краката. Лабораторна диагностика на гъбични заболявания на кожата Не се използва при диагностика на повърхностни микози

Люспите или космите се поставят върху предметно стъкло (стъклото трябва да бъде обезмаслено) и се заливат с една, две или три капки 30% разтвор на поташ или сода каустик и се покриват с покривно стъкло. В рамките на 2-3 минути с леко нагряване на пламъка на спиртна горелка препаратът се притиска леко с покривно стъкло, докато
сив облак при изследване на везни. Косата не трябва да се унищожава, тя само набъбва с такова нагряване. При микроскопско изследване (100-200 пъти увеличение) с потъмняла диафрагма се откриват гъбични елементи - спори или мицелни нишки. Необходимо условие за успеха на микроскопското изследване е щателното получаване на люспи и косми, които трябва да се вземат от засегнатите лезии със специални пинсети (цилиарни пинсети). Необходимо е да се обърне внимание не само на добре видими косми, крусти и люспи, но и на малко забележими остатъци от косми (т.нар. пънчета) и черни точки, които се отстраняват със скалпел или хистологична игла. Никога не трябва да се задоволявате с насочване на пациента към лезията, необходимо е самият лекар внимателно да прегледа целия скалп.

В косата, засегната от трихофитоза, спорите на гъбичките са подредени във верига. При микроспория спорите са много по-малки, отколкото при трихофития, не се сгъват във вериги и се намират от външната страна на косата. Вътре в косъма има нишки от септиран мицел. Косата е, така да се каже, облечена в ножница от върби. При краста се наблюдават полиморфни спори, различни груби нишки и обикновено въздушни мехурчета (фиг. 48).

В същото време гъбичките не засягат напълно цялата коса, но остават незасегнати области.
За да се получи материал от гладка кожа, се извършва остъргване на люспи. периферни лезии с остра лъжица или скалпел. Остъргването от ноктите е по-удобно да се извършва с остър медицински нож (скалпел), като се отстраняват малки, но дълбоки участъци от вътрешната повърхност на нокътната плоча или се изстъргва прахът от питириазис от роговите нокътни плочи.
Изходният материал се вари в епруветка с алкали и след това се оставя да престои в тази епруветка за 12-20 часа.
След това съдържанието се центрофугира и утайката се изследва под микроскоп (метод на Н. А. Черногубов).
Гъбите се отглеждат добре върху изкуствени хранителни среди, съдържащи въглехидрати и протеинови вещества. Така наречената оригинална среда Sabouraud, бирена мъст, агар и зеленчуци са особено разпространени.

2. Лабораторно изследване на патологичен материал

2.1. Микроскопски изследвания

За откриване на морфологичните елементи на гъбичките - дрождени клетки, псевдомицел, мицел, конидиофори, конидии, тъканни форми на дълбоки микози - патологичният материал се изследва в нативни и оцветени препарати.

Течният патологичен материал се изследва в неоцветено състояние в следните избистрящи течности: смес от алкохол и глицерин (етилов алкохол 1 част, глицерин 2 части, дестилирана вода 2 части), разтвор на Лугол (1 g кристален йод, 2 g калий). йодид, 150 ml вода), както и във вода или физиологичен разтвор. За приготвяне на нативни препарати капка материал се нанася върху предметно стъкло с примка или пипета, след това 1-2 капки избистряща течност, покрива се с покривно стъкло и се микроскопира при ниско увеличение 1:80 (окуляр 10x и цел 8x), при която могат да се видят клъстери от дрождени клетки, псевдомицел, мицел и други елементи на гъби. При голямо увеличение от 1:400 могат да се характеризират отделни клетки.

Плътният патологичен материал (кожа, люспи на ноктите) се поставя в капка от 10-20% разтвор на KOH, леко загрята над пламъка на горелката (за по-добра мацерация), докато по периферията на капката се появят алкални кристали. След това капката се покрива с покривно стъкло, леко се натиска върху него и се микроскопира, първо при слабо увеличение, за да се намери люспата, а след това при голямо увеличение.

В материала на косъма, обвивката от спори около косъма (ектотрикс) или в косъма (ендотрикс), гъбичните елементи обикновено са много ясно видими. Лезиите на косата, както и размерите на спорите, са специфични за различните видове дерматофити. Необходима е диференциална диагноза между гъбични структури и артефакти. Възможни източници на фалшиви положителни резултати са липидни капчици, въздушни мехурчета, текстилни влакна и така наречената „мозаечна гъба“. Липидните капчици могат да изглеждат като клетки от дрожди и такива находки са най-чести при лошо избистрен материал. Текстилните влакна обикновено лежат отделно от материала на епидермиса, косата или ноктите. Те са по-големи от хифите на гъбата, имат неравномерна дебелина и не съдържат прегради. „Мозаечната гъба“ е артефакт, получен в процеса на кристализация на KOH с прекомерно нагряване на препаратите. За разлика от гъбите, ясните клетъчни деления не са определени.

Важна стъпка в диагностиката на гъбичните инфекции е изготвянето на оцветени препарати. Всеки патологичен материал (намазки, отпечатъци от органи, центрофуги и, разбира се, хистологични срезове) трябва да бъде подложен на три основни вида обработка: 1) оцветяване с метода PAS за идентифициране на истински гъби - евмицети; 2) оцветяване по метода на Грам или в модификации по Грам-Вайгерт, по Боголепов, по Браун-Брена - за идентифициране на съпътстващата бактериална микробиота, за откриване на актиномицети и нокардия; 3) оцветяване по метода на Ziehl-Nielson или модификация по метода на Kignon - за откриване на киселинно-устойчиви микроорганизми, предимно за индикация и диференциация с Mycobacterium tuberculosis, за откриване на причинители на проказа, нокардия и спорообразуващи дрожди.

PAS-метод (Шиф-йодна киселина) включва откриване на неутрални полизахариди в стените на микроорганизмите. В стените на повечето евмицети има глюкан-мананов комплекс в различни концентрации, поради което се получава оцветяване.

Прокариотите (бактериите) се оказват PAS-отрицателни, включително актиномицетите и нокардиите, които представляват интерес за миколога. По време на образуването на актиномикотични друзи обаче се образува така нареченият "цимент", който слепва вегетативния актиномикотичен мицел в гранула, която също дава PAS-положителен цвят. В тази връзка този метод е приложим и при диагностиката на актиномикоза.

PAS реакцията (и нейната модификация) е най-важният метод за диагностициране на тъканни форми на гъбична инфекция. Методът се основава на окисляването на гликолови групи от въглехидрати с йодна или хромна киселина. Йодната киселина окислява 1,2 и 1,4 гликолите до алдехиди и разкъсва връзките между въглеродните атоми, носещи хидроксил. Алдехидните групи могат също да бъдат открити с помощта на алдехидния реактив на Шиф. In situ, в стените на гъбата, хетерополизахаридният комплекс е интензивно оцветен в лилаво-червен цвят (метод - вижте приложенията).

За потискане на оцветяването на околните тъкани се използва обработка ("контрабоядисване") със светло зелено, метанил жълто и др. В този случай се откриват само гъбични клетки, което е много полезно на етапа на индикация на патогена в тъканите или в препаратите за намазка. В същото време не е възможно да се прецени реакцията на тялото и промяната на тъканите към такива препарати. Винаги е необходимо да имате паралелни слайдове, оцветени с PAS метода и насрещно оцветени с хематоксилин.

На практика се използва не само класическата версия на PAS метода, но и неговите различни модификации: окисление с хромна киселина (вместо йодна киселина) е реакцията на Bauer, оцветяване на Gridley, импрегниране с метенамин сребро по метода на Gomory-Grocott. Всички те се използват успешно за откриване на тъканни форми на гъбички и се основават на един и същ принцип (техника - виж приложението). Таблица 3.

Таблица 3

Тинкториални свойства на тъканни форми на гъби

(в патологичен материал, в хистологични срезове)

Опортюнистични микози	Методи за откриване
Кандидоза	PAS или Gridley петна
Аспергилоза	Хематоксилин и еозин, импрегниране на Gomory-Grocott
Зигомикоза	Хематоксилин и еозин
Криптококоза	Alcian blue (по метода на Mowry) + PAS реакция + хематоксилин
Пневмоцистоза	Бауер петно, Gomory-Grocott импрегниране, тионин петно
фузариум	Оцветяване по метода на Романовски-Гимза, по метода на Райт
Scedosporium
Трихоспороза	Хематоксилин и еозин, оцветяване по Романовски-Гимза
Феохифомикоза и хромомикоза	Хематоксилин и еозин
Първични патогенни микози:	Методи за откриване
кокцидиоидомикоза	PAS-реакция + хематоксилин
Хистоплазмоза	Импрегниране на Gomory-Grocott, оцветяване по Bauer, оцветяване по Romanovsky-Giemsa
Северноамериканска бластомикоза
Паракокцидиоза	PAS-реакция, импрегниране на Gomory-Grocott
Адиаспиромикоза	Хематоксилин и еозин, PAS реакция
Псевдомикоза:	Методи за откриване
Актиномикоза	Хематоксилин и еозин, оцветяване по Грам-Вайгерт
Нокардиоза	оцветяване по метода на Ziel-Nielsen, по метода на Kignon, по метода на Gram.

Ако се предполага диагноза криптококоза, препоръчително е да се използват методи за специфично откриване на капсулен материал. Cr.neoformansсъдържащи гликозаминогликани (киселинни полизахариди). За тази цел се използва оцветяване в синьо Alcian (по метода на Mowry), основно кафяво (по метода на Shubich), оцветяване с муцикармин. Много полезно е тройното оцветяване: PAS реакция, след това третиране с алцианово синьо, след това с хематоксилин. В този случай става възможно разграничаването на криптококи от тъканни форми на други гъби с подобна морфология.

Описанието на патологичния материал (хистологични препарати) включва данни за морфологията и размера на тъканните форми на гъбичките, техните тинкториални характеристики, връзката им с тъканите на гостоприемника, наличието на фагоцитоза и определянето на съпътстващата микробиота.

2.2. Засяване на патологичен материал и количествено отчитане на клетките при микози, причинени от дрожди

Получаването на гъбични култури е необходимо за тяхното идентифициране и определяне на чувствителността към противогъбични лекарства.

Храчките преди изследването се хомогенизират за 5-10 минути чрез разклащане със стерилни перли. Ако храчките съдържат много слуз и са слабо хомогенизирани, към тях могат да се добавят 1-2 ml стерилен физиологичен разтвор. Храчките се изследват микроскопски в нативни или оцветени препарати. Ако елементите на гъбичките се виждат в зрителното поле по време на микроскопия на храчки с голямо увеличение, тогава трябва да се посеят в разреждания 1:10, 1:100, 1:1000, ако не се открият елементи на гъбичките, храчките се засяват неразредени. Разрежданията се приготвят в течна хранителна среда (пивна мъст, Sabouraud, 1% пептонна вода) или в стерилен физиологичен разтвор. От всяко разреждане 0,1 ml се инокулира с шпатула за 2 чаши пивна агар, Sabouraud агар или MPA с добавяне на антибактериални антибиотици - пеницилин и стрептомицин, биомицин (100-200 единици / ml среда). Хранителната среда се изсушава предварително в термостат при +37 С, т.к. при наличие на кондензат растежът на колониите може да има конфлуентен характер. Културите се инкубират в термостат при + 37 ° С в продължение на 48 часа.След това, ако има растеж на колонии от същия тип дрожди, те се записват количествено. Изчисляването на броя на дрождевите клетки (n) в 1 ml или 1 g от тестовия материал се извършва по формулата n = abs, където a е средният брой колонии в едно петриево блюдо, b = 10 с инокулация. обем от 0,1 ml, c е степента на разреждане на екскрецията (10,100,1000).

Пример за изчисление: средно 60 колонии растат върху плочи с разреждане 1:1000, докато 1 ml от тестовата екскреция съдържа 60 x 10 x 1000 = 600 000 клетки от дрожди.

BAL, ПРОМИВНА течност от бронхи, максиларни кухини, жлъчка (порции A, B, C), стомашен сок, дуоденално съдържимо, урина се прехвърлят в центрофужни епруветки и се центрофугират за 10-15 минути, след което супернатантата се отцежда с бързо движение . От утайката се приготвят нативни препарати за микроскопия. Ако по време на микроскопията дрождевите клетки се открият във всяко зрително поле, тогава инокулацията се извършва в разреждания от 1: 100 и 1: 1000, 0,1 ml всяка, върху твърда хранителна среда и се инкубира при 37 ° С в продължение на 48 часа. не се откриват по време на микроскопия на утайката, утайката се засява без развъждане. Количеството на дрождената флора се изчислява на 1 ml патологичен материал.

ФЕКСИИТЕ се вземат с мерителна лъжица в количество 0,2 g, поставят се в 1,8 ml течна мъст и се разбъркват старателно със стъклена пръчка. Полученото разреждане (1:10) се оставя да престои 5-10 минути, приготвят се разреждания 1:100, 1:1000 и се инокулират в обем от 0,1 ml на 2 петриеви панички с агарна среда. Отчитане на количеството произведена дрождена флора на 1 g изпражнения.

Гръбначно-мозъчна течност. Характеризира външния му вид (прозрачен или мътен, безцветен или оцветен, наличие на примеси от кръв, утайка). Микроскопски петна от седимента на CSF след центрофугиране. Приготвят се три препарата: нативен - в капка стерилен физиологичен разтвор: нативен - в капка мастило и цитонамазка за оцветяване по метода PAS, по Грам и алциево синьо по Моури.

Микроскопия гръбначно-мозъчна течноств нативни и оцветени препарати позволява да се установи наличието на дрождени клетки и фрагменти от мицела на гъбичките или бактерии, които причиняват гноен менингит (менингококи, пневмококи, Haemophilus influenzae и др.). Капсулната гъбичка може да бъде открита в препарата на трупа Cryptococcus neoformans.В същото време на сивия фон на трупа се виждат пъпкуващи дрождени клетки, заобиколени от светъл ореол на капсулата. Препаратите с мастило могат също да съдържат форми на дрожди кандида албиканскапсули без лек ореол около клетката.

кр. неоформиможе да се открие и чрез оцветяване с алциево синьо (по Mowry). Оцветяването възниква поради селективното откриване на капсулен хетерополизахарид, характерен за Cr.neoformans. Ако се открие бактериална флора в препарат, оцветен по Грам, се извършва допълнително изследване на цереброспиналната течност съгласно подходящите бактериологични методи. След микроскопиране на утайката, течността се инокулира върху 3 чаши прясно приготвен, изсушен мъст агар или агар Sabouraud, както и върху течна мъст или течна среда Sabouraud. 2-3 капки течна утайка се нанасят върху повърхността на хранителния агар от плочи 1 и 2 и внимателно се разтриват с шпатула, а 1 капка се инокулира върху повърхността на агара от плоча 3 за откриване на нишковидни гъбички. Останалата течност се прехвърля в 5 ml течна мъст или агар Sabouraud. Посевите се инкубират при две температурни условия: чаша 1 - при +37 o C, и чаши 2 и 3 и сеитба върху течна среда - при +28 o C - +30 o C. Посевите при температура +37 o C се гледани на 2 и 5 ден и при 28 - 30 около C - на 4, 7, 10 ден от растежа. Ако не се забележи растеж на 5-ия ден при температура от +37 ° C и на 10-ия ден при температура 28-30 ° C, инокулацията се извършва от течна хранителна среда върху плочи с пивна мъст или агар Sabouraud. При липса на растеж на дрождената флора резултатът от посявката на течността се записва като отрицателен.

ОТХОДНИ ФИСТУЛИ. Изследването започва с микроскопиране на материала в нативни или оцветени препарати. След това материалът се инокулира върху агарна среда (пивна мъст или Sabouraud), за което 2-3 капки от разряда се нанасят върху чашата и се разпределят върху повърхността на агара с шпатула. Инокулациите се инкубират 48 часа при +37°C.

ОТХОДЯЩА лигавица.

1. Тампонът се поставя в епруветка с 2 ml течна среда (пивна мъст, Sabouraud's Medium или MPB) и се разклаща в продължение на 5-7 минути, без да се накисва запушалката. Приготвят се разреждания от 1:10, 1:100 и 0,1 ml от всяко разреждане се инокулират в две плочки с мъст агар, агар на Сабуро или MPA. Инокулациите върху твърда среда и епруветка с течна среда с тампон (за обогатяване) се инкубират при температура +37 С. След 48 часа се преброяват колониите и броят на дрождевите клетки се взема с тампон. приблизително определено. За да направите това, броят на порасналите колонии от дрожди се умножава по 20 и се разрежда. При липса на растеж на колонии върху плочите, взети от разрежданията, се извършва повторно посяване от обогатяващата среда върху една плоча с пивна агар.

2. Посяването може да се извърши с тампон с ротация върху повърхността на хранителната среда. В същото време броят на колониите от дрожди не се взема предвид, а се отбелязват само наличието и интензивността на растежа: единични колонии, значителен или непрекъснат растеж, липса на растеж на микробиота.

КРЪВ. Пробите от венозна кръв за хемокултура трябва да бъдат разредени със среда за обогатяване най-малко 1:5, така че бактерицидните свойства на кръвта да не потискат растежа на гъбичките. Посейте съответно 5-10 ml прясна кръв в 50-100 ml хранителна среда (течна среда Sabouraud с 2% глюкоза или среда Kitt-Tarozzi след регенерирането й). За сеитба можете да вземете кръв с антикоагулант (1:10 5% разтвор на натриев цитрат). Културите се отглеждат в продължение на 10 дни при +37°C с контролно засяване на 5 и 10 ден. Утайката се взема със стерилна пипета, 3 капки от която се засяват с бактериологична примка върху повърхността на пивния агар в петриеви панички. Чашите със семена се поставят в термостат с температура +37 ° C за 2-5 дни. При разрастване на дрождева флора се дава предварителен отговор за наличието на гъбичките в кръвта и посявката се определя към рода и вида.

Друг метод за хемокултура за микофлора е описан (H.Rieth). В този случай инокулацията на 5-10 ml кръв се извършва на капки. 40-50 капки кръв се нанасят върху повърхността на плътна хранителна среда в петриево блюдо със стерилна пипета на разстояние 0,5 cm между капките. Засяването се извършва в две петриеви панички, като в едната се инкубират при температура +37 o C, а в другата при стайна температура за 2-5 дни.

ЧАСТИ от органни тъкани. Прави се отпечатък с част от изследваната тъкан върху повърхността на плътна хранителна среда в петриево блюдо, след което се пресява бримка. Същото парче тъкан се поставя в 50 ml течна хранителна среда (пивна мъст, среда на Sabouraud). Културите се инкубират в термостат при температура +37 ° С в продължение на 5 дни.

КОЖА и люспи по ноктите. Посевните люспи се произвеждат независимо от резултатите от микроскопията. За да направите това, със стерилна микологична шпатула, навлажнена в кондензата на средата, люспите се прехвърлят в епруветка върху скосена мъст-агар на 2-3 точки, като се притискат към повърхността на средата. В зависимост от количеството материал, получен за изследването, сеитбата се извършва в 2-3 епруветки. Културите се инкубират в термостат при температура 28-37 о С до 5 дни.

Методите за бърза идентификация са широко използвани C.albicans. Този вид е способен да образува зародишни тръбички и къси нишки от псевдомицел в рамките на няколко часа (2-4 часа при 37°C) върху кръвен серум, яйчен белтък, среда на Eagle, среда 199 и др. В практиката лабораториите използват човешки серум (остатъци от серологични реакции), където при 37 ° C се образуват зародишни тръбички и след 24 часа псевдомицелни възли. За вида C.albicansтова явление е типично в 90% от случаите. Рядко се образуват кълнове C. tropicalis.

2.3. Микроскопско изследване и посяване на патологичен материал при съмнение за микози, причинени от плесени

Патологичният материал може да се изследва в нативни и оцветени препарати. Предметните стъкла и покривните стъкла, предназначени за приготвяне на микропрепарати, трябва да се съхраняват в смес от алкохол и етер (1:1), за да се избегне замърсяване на въздуха с микобиота. Преди употреба предметните стъкла и покривните стъкла се стерилизират върху пламък на горелка.

Микроскопия на материала

микроскопия на храчки. За приготвяне на нативни препарати храчките се прехвърлят в стерилно петриево блюдо и се изследват на черен фон за откриване на малки частици (бучки). Бучките могат да бъдат гнойни, гнойно-лигавични, гнойно-кървави. Размерът на бучките варира в рамките на 0,3-3 mm в диаметър, цветът им може да бъде сив, жълтеникав, зеленикав. За приготвяне на нативни микропрепарати отделни бучки се прехвърлят с дисекционни игли или бактериологична бримка в капка алкохол с глицерин или в капка 10% разтвор на КОН. Покрийте с покривно стъкло, леко натиснете с дисекционна игла и микроскоп при ниско (1:80, 10x окуляр и 8x обектив) и високо (1:400, 10x окуляр и 40x обектив) увеличения на микроскопа.

Препарати от промивки, ексудат, както и жлъчка, урина, стомашен сок, цереброспинална течност се приготвят от естествена утайка или от утайка, получена в резултат на центрофугиране (при 1500 rpm за 5 минути). Утайката се прехвърля с примка или пастьорова пипета в капка 10% разтвор на КОН върху предметно стъкло, покрива се с покривно стъкло и се изследва при малки и големи увеличения на микроскопа.

За да се приготвят оцветени препарати, изследваните бучки или капка утайка се разпределят равномерно с дисекционни игли или по-малко предметно стъкло върху повърхността на стерилно предметно стъкло, докато се получи тънко петно. Получената петна се изсушава на въздух, фиксира се с метилов алкохол или смес от Никифоров (равни части 96% етилов алкохол и етер) за 3-5 минути или чрез трикратно обгаряне на пламък на горелка. Фиксираната цитонамазка се оцветява по Грам, PAS метод, бял калкофлуор. Оцветеният препарат се микроскопира с помощта на имерсионна микроскопска система (1:900, окуляр 10x, обектив 90x).

Посевен материал

При изследване на всеки патологичен материал за нишковидни гъбички, той се инокулира върху плътна среда на Sabouraud или мъст с добавяне на пеницилин и стрептомицин (100-200 единици / ml среда). Сеитбата се извършва в две повторения, като се вземат предвид различните температурни условия за отглеждане на нишковидни гъби (+37 ° C и +28 ° C), винаги на 3 точки в центъра на съда. Инкубационното време е 4-5 дни.

Храчките (избрани бучки) се прехвърлят с бактериологична бримка или пипета на Пастьор към повърхността на средата на Sabouraud или пивната мъст. Мястото на инокулация се маркира с молив на обратната страна на дъното на петриевото блюдо. Засятите петриеви панички се поставят в термостат с капака нагоре.

След определен период на инкубация чашките със семена се изследват и ако се открие спорулация, се определя културата на гъбата. При липса на спорулация, гъбата се субкултивира върху диференциална среда на Czapek за по-нататъшна идентификация.

Утайката от промиване на бронхи, максиларни кухини, ексудат, урина, стомашен сок (нативен или след центрофугиране) се взема с пипета и се инокулира в обем от 0,1 ml. Изпражненията се разреждат 1:10 (1 g изпражнения и 9 ml течност) в течна среда на Sabouraud или течен стерилен изотоничен разтвор на натриев хлорид, емулгират се, утаяват се за 10 минути, за да се утаят големи частици, инокулират се със супернатант в обем от 0,1 ml . Отделящият се външен слухов канал и фаринкса, взети с тампон, се засяват, като внимателно се прекарва всяка страна на тампона върху повърхността на хранителната среда. Можете да инокулирате тампони за тампони. За да направите това, тампоните се поставят в 10 ml течна среда на Sabouraud или течна мъст със стъклени перли и се емулгират в продължение на 10 минути, 0,1 ml от измиването на тампона се инокулира с морава (според Leshchenko V.M., 1973) или в три точки.

Люспите на кожата и ноктите се поставят върху повърхността на хранителната среда, като внимателно се притискат.

Утайката от гръбначно-мозъчната течност (центрофугиране при 1500 rpm за 5 минути) се инокулира в две чаши от средата, по 0,1 ml всяка, и нейният остатък се инокулира в обогатяващата среда (течна среда на Sabouraud или течна мъст), излята в епруветки в обем 5 ml. Инокулираните чаши се инкубират както обикновено, а епруветките с инокулация върху обогатяващата среда се инкубират при + 28 °C в продължение на 10 дни.

В случай на растеж на мицелна гъба върху твърда среда, нейната култура се определя от тази инокулация, при липса на растеж върху агар на Сабуро или пивна мъст, гъбичката се изследва от обогатяващата среда. За да се направи това, културата на гъбичките се субкултивира отново върху диференциална плътна среда на Czapek и се идентифицира допълнително.

От парче органна тъкан (биопсия, аутопсия) се прави отпечатък върху повърхността на плътна среда с врязаната страна на изследваното парче в три точки. В същото време парчета тъкан се поставят в 50 ml течна хранителна среда (Saburo, мъст).

Кръвта се изследва за съмнение за фунгемия в две до три повторения. Инокулирайте съответно 5 или 10 ml кръв в 50 или 100 ml течна среда на Sabouraud с 2% глюкоза. Културите се отглеждат при +37 С и +28 С в продължение на 10 дни. Първият преглед на посевите се извършва след 5 дни, вторият - след 10 дни. На петия ден може да се наблюдава растеж на мицелна гъбичка под формата на филцова бучка на дъното и повърхностен филм. Мицелът се посява отново върху диференциална среда на Czapek, за да се определи рода и вида на гъбата. Ако на 5-ия ден не се забележи растеж на гъбичките, посевите се съхраняват до 10 дни и при липса на растеж резултатите от изследването се записват като отрицателни.

При сеитба на три точки растежът на гъбичките в две и три точки се определя като диагностично значим, в една точка - случаен. Ако е необходимо, е възможно повторно засяване.

Идентифициране на изолирани култури от плесени

След изолиране на културата нишковидните гъби се субкултивират върху диференциална среда на Czapek за генерична и, ако е възможно, видова идентификация.

В практиката на диагностичните лаборатории по правило се използват културни и морфологични критерии за идентификация: оценява се естеството на растежа на гъбичната култура върху агаровата среда (културна диагностика, макроморфология) и микроморфологията на гъбичките.

В трудни случаи се използват допълнителни диагностични методи (изследване на ензимната активност, температурни характеристики на растежа на някои плесени).

Концепцията за макроморфология (културни белези) включва структурата на колонията (пухкава, филцова, кадифена, паяжина, вълнеста, дрипава, брашнеста и др.), Повърхността (плоска, нагъната, неравна, куполообразна, коремиформена, зонална и др. .), пигментация на гъбната колония и субстрат (различни нюанси на зелено, синьо, лилаво, черно, сиво и др.), наличие на ексудат на повърхността на колонията.

Микроморфологията на гъбата от културата се изследва по препарати, които в зависимост от родовата принадлежност на гъбата се приготвят по следния начин: капка течност за приготвяне на препарати (равни части спирт, глицерин и вода) се нанася върху предметно стъкло; в него се поставя парче мицел, изрязва се с микологична шпатула от колонията под формата на триъгълник със захващане на централната и периферната част, отрязаното парче се изправя с две дисекционни игли, като се внимава да се избегне образуването на въздушни мехурчета. В някои случаи (мукор и ризопус) при приготвяне на препарата мицелът се разстила върху сухо предметно стъкло, върху него се нанася капка течност и се покрива с покривно стъкло. Препаратите се разглеждат под микроскоп при малки и големи увеличения. Те изучават субстрата и въздушния мицел, отбелязват наличието или отсъствието на прегради (прегради), обръщат внимание на естеството на спорулацията: конидиофори с конидии и спорангии със спорангиоспори.

Конидиофорите се различават по своята структура: от прости единични спорови хифи до разклонени дървовидни образувания. Конидиефорите са разположени поединично или на групи, те се различават значително от вегетативните хифи на мицела, безцветни или оцветени, възходящи, изправени, низходящи, пълзящи. Те могат да се състоят от една клетка и от голям брой клетки с различни форми и размери, всяка от които има свое име. Например, в род Aspergillus, конидиефорът се състои от следните клетки: дръжка, везикуларно подуване, стеригмати, вериги от конидии. В рода Penicillium конидиофора има формата на прости или сложни четки, също състоящи се от различни клетки: клонки от рами, метули, фиалиди, вериги от конидии.

Плесените Mucor и Rhizopus имат спорулация под формата на спорангии с ендоспорангиоспори. Спорангият е в края на спорангиофора. Спорангиите са сферични или крушовидни, в повечето случаи със специално стълбче, което е продължение на спорангиофора вътре в спорангиума. Спорангиоспорите са кръгли, безцветни или цветни.

Конидиите (спорите) при плесените са полиморфни (цилиндрични, сферични, овални, елипсовидни, яйцевидни, крушовидни, клубовидни), едноклетъчни и многоклетъчни, варират по размер и цвят, единични, във вериги или събрани в глави и подредени в групи . Повърхността на конидиите може да бъде гладка, грапава, бодлива, набраздена, настръхнала и др.

Микроскопско изследване и посяване на патологичен материал при микози, причинени от диморфни гъби

При тези микози е необходимо да се вземе предвид диморфизмът на патогените.

Патологичният материал при първични патогенни микотични инфекции (кокцидиоидоза, хистоплазмоза, паракокцидиоидомикоза, северноамериканска бластомикоза), както и хромомикоза, споротрихоза и мицетоми могат да бъдат гной, храчки, остъргвания от язвени лезии по кожата и лигавиците, цереброспинална течност, кръв, биопсирани парчета от огнищата поражение.

Трудността при определяне на причинителите на тези микози се състои в това, че поради техния диморфизъм, микроскопията на патологичния материал ще разкрие тъканни форми на гъбичките, най-често дрождени клетки с различна морфология или сфери с ендоспори, напълно различни от елементи от същата гъба, извлечени от нейната култура, отгледана при температура от +28 - +30 ° C върху обичайното агаве Sabouraud, с рН стойност, по-близка до киселинната. Все пак трябва да се има предвид, че при някои диморфни гъби също е възможно да се получи фаза на растеж на дрожди на гъбата в култура, често наподобяваща нейната тъканна форма, но когато се отглежда върху среда, богата на протеини със слабо алкална реакция ( pH = 7,6 - 7,8 ), при температура 37 o C.

Горното се отнася за гъбите: Histoplasma capsulatum, Blastomyces dermatitidis, Paracoccidioides brasiliensis, Coccidioides immitisи Sporothrix schenckii.

Лабораторната диагностика на микозите, причинени от споменатите тук гъби, се основава на откриването на тъканни форми в патологичния материал по време на микроскопия, изолиране на културата на патогена и идентифицирането му чрез културни и морфологични характеристики.

Микроскопското изследване се извършва в неоцветени препарати върху предметно стъкло в капка 10% алкален разтвор на каустик или смес от алкохол и глицерин в равни обеми или в оцветени петна (Таблица 3).

Инокулацията на патологичен материал се извършва върху горните хранителни среди в петриеви панички с помощта на бактериологична шпатула съгласно общоприетия метод.

2.5. Микроскопско изследване и посяване на патологичен материал при дерматомикоза (кератомикоза и дерматофитоза).

Обект на изследване са повърхностни микози, които засягат само кератиновия слой на епидермиса, и дерматофити, които засягат кожата и нейните придатъци (коса, нокти), чиито причинители са гъбички, свързани с родовете Trichophyton, Microsporum и Epidermophyton.

Лабораторното микологично изследване включва същите стъпки, както при другите микози: микроскопия на материала и получаване на чиста култура при засяване. Правилното събиране на материал значително влияе върху успеха на микроскопията и културата.

Патологичният материал се изследва възможно най-скоро след вземането. Преди това той е разделен на три части: за микроскопия, култивиране и повторно изследване. Микроскопията на патологичен материал е най-простият и бърз метод за установяване на наличието на гъбички в тъканите. Натрошеният материал се поставя в средата на предметно стъкло в капка 10-20% разтвор на КОН и леко се нагрява върху пламъка на спиртна лампа, докато се получи белезникав ръб по ръба на капката, покрит с покривно стъкло и се оставя за 5-10 минути (коса, кожни люспи) и 30-40 минути (нокът) за мацерация и просветление; материалът може да се обработва без нагряване, за това препаратът се оставя в 20% разтвор на КОН за 30-60 минути.

Микроскопски първо под малко, след това голямо увеличение на микроскопа.

Културелното изследване е необходимо за изолиране и идентифициране на патогена. Инокулираният материал се раздробява максимално и се инокулира в минимални количества върху наклонен агар в епруветки на 2-3 точки на разстояние 1-2 см. Най-малко 2-3 епруветки (косъм) и 4-5 епруветки (люспи на кожата и ноктите) се инокулират с материала от една проба. За първично изолиране на дерматофити е най-добре да се използва стандартна агарна среда на Sabouraud с 2-4% глюкоза или мъст агар, съдържащ антибактериални антибиотици (пеницилин 50 µg/ml + стрептомицин 50 µg/ml или биомицин 200 единици/ml) и анти -плесенен антибиотик актидион (циклохексимид) 0,1 - 0,5 mg / ml. Actidion не повлиява растежа на дерматофитите и инхибира много плесени, както и видовете Candida и Cryptococcus.

Инокулациите се инкубират при 22-30°C (за предпочитане 28°C). Появата на дерматофитен растеж се наблюдава от 4 до 12 дни инкубация в точките на засяване по краищата на въведения материал. Ако няма растеж в рамките на 30 дни, резултатите от културата се считат за отрицателни. При оптимални условия първичните култури на много дерматофити могат да бъдат идентифицирани 7-10 дни след инокулацията, но културите трябва да се наблюдават в продължение на 20-30 дни. Първичните култури растат относително бавно и когато се използват среди без антибиотици, дерматофитите могат да бъдат победени от по-бързо растящи бактерии или плесени. Когато се появи растеж при първичната инокулация, е необходимо да се отсее от ръба на колонията върху свежа диференциална среда, за да се получи чиста култура, която ще служи като материал за идентифициране на изолирания дерматофит.

2.6. Серологични методи за диагностика на микози

Стойността на серологичните методи се състои главно в следното: идентифициране на пациенти с вероятни инвазивни микози; потвърждаване на микотичния характер на алергичните заболявания; скринингово изследване на рискови групи за развитие на микози.

Фалшиви положителни резултати от серологични тестове са възможни при миконосителство и при здрави хора, сенсибилизирани от гъбични антигени, отрицателните тестове могат да бъдат с имунодефицит дори на фона на продължаваща инвазивна микоза.

Рутинни конвенционални методи за серологична диагностика на микози
описано достатъчно подробно /P.N.Kashkin, V.V.Lisin. "Практичен
ръководство по медицинска микология", Медицина, 1983 г. /. Въпреки това през последните години
десетилетия са настъпили забележими промени в методологическите подходи / Елинов Н.П.,
2001/. Предложени оригинални процедури за откриване на антигени и антитела
някои метаболити на гъбични клетки; създаде специална диагностика
комплекти („китове“), например Pastorex ® Candida, за определяне в
реакции на "латекс-аглутинация" на повтарящи се олигоманозни епитопи на антигенни
структури/ изразени върху голям брой макромолекули
гъбички; за определяне на Candida mannan antigen, например, в
серум на пациент с кандидемия, може да се използва комплектът Platelia ® Candida.
Използвайки първия набор, прагът за определяне на антигенни структури е 2,5 ng / ml, използвайки втория, във връзка с метода _____________, прагът за определяне - 0,5 ng/ml.

Причинителите на микозите най-често се откриват при лабораторно изследване на различни клинични материали

Кръв

• Кандида
• криптококи
• Мицелните патогени рядко се откриват при кръвни изследвания, с изключение на фузариум

гръбначно-мозъчна течност

• Кандида
• криптококи

Гной, отделен от абсцеси, язви и др.

• Кандида
• криптококи
• фузариум
• Аспергилус
• Споротрикс

Респираторни секрети (храчка, BAL, биопсия на бронхиална четка, транстрахеален аспират)

• Аспергилус
• Кандида
• криптококи
• Мукор
• Scedosporium
• Rhizopus
• Споротрикс

Отделящ се, биопсичен материал от рани

• Аспергилус
• Кандида
• фузариум
• Rhizopus

Други биосубстрати

• Кандида
• криптококи

Материал от гръдния кош, коремната кухина; синовиалната течност

• Аспергилус
• Кандида
• фузариум

стъкловидно тяло

• Кандида
• Аспергилус

IV. Критерии за диагностициране на системни микози: клинични и лабораторни параметри на окончателната диагноза

Езофагит

• наличието на характерни промени в езофагоскопията
• откриване на гъбички по време на култивирането на биопсичен материал
• наличие на псевдомицел в оцветени петна или признаци на инвазивен гъбичен растеж в биопсичен материал

Пневмония

Пневмония поради Candida spp.

• остри инфилтративни промени на рентгеновата снимка на белите дробове, съвпадащи с клиничните прояви на гъбична пневмония
• откриване Candida spp.При култивиране на материал от отпадъци от долните дихателни пътища, получени от трансторакална биопсия, трансбронхиална биопсия, находки от белодробна биопсия или тороскопска насочена биопсия
• откриване на псевдомицел в адекватно оцветен биопсичен материал

Пневмония поради Aspergillus spp., Fusarium spp., Scedosporium apiospermum

• откриване на гъбични елементи в тъкани и положителна култура
• персистиращи или прогресиращи белодробни инфилтрати, резистентни на антибиотична терапия
• откриване на един от посочените патогени по време на култивирането на храчки или BAL
• клинични признаци на пневмония (кашлица, задух, "плеврална" болка, хрипове, плеврално триене)
• характерни промени на рентгеново или CT на белите дробове:

Субплеврални инфилтративни, нодуларни, остроъгълни или кавернозни промени

Знак на ореол върху КТ на белия дроб

Прогресиране на инфилтративни промени с образуване на кухини и поява на симптом на "сърп"

• липсата на други патогени по време на култивирането на BAL, които биха могли да причинят представените промени в белите дробове

Синузит

• клинични и рентгенографски характеристики на острия синузит
• микроскопски и културни признаци на микоза при изследване на аспириран или биопсичен материал

инфекция на пикочните пътища

• >1 x 10 cfu/mL, открити при повторни култури от правилно събрана урина

фунгемия

• Еднократно откриване на гъбички по време на хемокултура при повишаване на телесната температура > 38 ° C

Остра дисеминирана микоза

• Фунгемия в комбинация с културни или хистологични признаци на дълбоко тъканно увреждане (включително подкожна тъкан) или идентифициране на патогена от два нормално стерилни биосубстрата

Ендофталмит

• офталмологични признаци на ендофталмит
• идентифициране на патогена от окото, кръвта или други огнища на разпространение

Абсцес или остеомиелит

• рентгенографски/CT/MRI признаци на остеомиелит
• идентифициране на патогена в аспират или биопсичен материал

Менингит

• определяне на промени в CSF, потвърждаващи наличието на възпаление и откриване на гъбички чрез микроскопия на CSF
• откриване на гъбички чрез култура на CSF или откриване на антиген Cr.neoformans, Candida и Aspergillusв CSF

Хронична дисеминирана (хепатолиенална) кандидоза

Възможен

• персистираща или интермитентна треска след края на период на неутропения, свързана с характерни признаци на увреждане на черния дроб, далака или бъбреците

Доказано

• горното комбинирано със засяване Candida spp.от кръвта преди появата на признаци на увреждане на черния дроб, далака или бъбреците или с културни, хистологични признаци на кандидоза в биопсичния материал от огнищата

V. ПРИЧИНИ ЗА ГЪБИЧНИ ИНФЕКЦИИ

Съществуват различни принципи за класифициране на гъбичните инфекции и техните патогени. Практически най-просто и целесъобразно ни се струва да разделим патогенните гъбички на 5 основни групи:

1. Патогени на повърхностни микози;

2. Причинители на дерматомикоза;

3. Патогени на подкожни микози;

4. Причинители на дълбоки микози (първични патогенни микромицети, патогени на опортюнистични инфекции).

5. Причинители на псевдомикози.

* Трябва да се подчертае, че патогените от първите три групи при имуносупресирани пациенти могат да причинят фунгемия и множество органни лезии.

В следващите раздели ние даваме описание на причинителите на микозите по една схема: неговото име според приетата номенклатура, списък със синоними, макроскопско описание на колонии върху хранителни среди и микроскопско описание на гъбични елементи видими под микроскоп в нативни препарати и от колонии. Дадени са данни и за разпространението на гъбите в природата и са изброени болестите, които причиняват.

Лабораторната диагностика на гъбичните заболявания се основава на откриването на гъбичките и определянето на техния род и вид. Състои се от два основни етапа: микроскопско и културно изследване.

микроскопско изследване

Микроскопското изследване е първото и важно звено за потвърждаване на предварителната диагноза.

Успехът на микроскопското изследване до голяма степен зависи от правилното вземане на патологичен материал. За микроскопско изследване е необходимо да се избере коса, която има видими признаци на увреждане на гъбичките (тъпа, начупена, удебелена). Променените на вид косми се отстраняват с пинсети за епилация. За да откриете единична засегната коса с микроспория, можете да използвате флуоресцентна лампа с филтър на Wood (зеленикаво-синьо сияние).

При избора на засегнатата коса могат да се използват редица допълнителни характеристики. Космите, засегнати от микроспори, имат сива обвивка от външно разположени спори в основата. При хронична трихофитоза, в дебелината на люспите, къси сиви, извити под формата на "запетая" и "въпросителни знаци" засегнати косми, както и "черни точки" (удебелена черна, засегната коса, счупена в устата на фоликула). При инфилтративно-гнойна трихофитоза за микроскопско изследване, в допълнение към засегнатата коса, може да се използва гной и корички от лезията.

От лезиите на кожата с микроспория, трихофитоза и микоза на ингвиналните гънки, люспите трябва да бъдат изстъргани от периферната зона на лезията, където гъбичките се намират в по-голям брой. Vellus косата се изстъргва заедно с кожните люспи.

При изследване на засегнатата коса с микроспория и трихофитоза се обръща внимание на особеностите на местоположението на спорите (вътре или извън косата) и техния размер. Тези данни позволяват в някои случаи да се изясни диагнозата, клиничната форма на микозата и епидемиологията.

При интердигиталната форма на микоза на краката за микроскопско изследване се използват кожни люспи и остатъци от мацерирания рогов слой. Областта на нокътя, която трябва да се вземе за микроскопско изследване, зависи от формата на онихомикоза. При повърхностна форма е необходимо да се направи изстъргване от повърхността на нокътната плоча.

При най-честата дистално-латерална форма се използва изстъргване от нокътното легло, изпод плочата (поднокътна хиперкератоза) с част от отрязаната променена нокътна плочка. При проксимална субунгвална форма се използват специални методи за вземане на материала (пробиване на прозорци с бормашина, биопсия на ноктите).

При сквамозно-хиперкератотична форма на микоза на краката, люспите се изстъргват от плантарната повърхност. При дисхидротичната форма на микоза на краката, капаците на мехурите се отрязват за изследване.

Техника за подготовка на материал за микроскопско изследване на косми . Малка капка 30% KOH се нанася върху предметно стъкло и засегнатата коса се поставя в него с дисекционна игла. Капка с косъм се нагрява леко над пламъка на спиртна лампа, докато над повърхността на течността се появят пари или изпадне ръб от кристали по ръба на алкалната капка. След покриване с покривно стъкло, излишната основа се отстранява с филтърна хартия. Лекарството се изследва първо под малко, а след това при голямо (х 400) увеличение на микроскопа.

Люспи по кожата и ноктите . Тънки люспи за нокти за микроскопско изследване се поставят върху предметно стъкло в капка 30% КОН и се нагряват чрез добавяне на основа по време на изпаряване. Охладеният неоцветен препарат се покрива с покривно стъкло и се микроскопира.

Дебели кожни и нокътни люспи се поставят в центрофужна епруветка и се пълнят с няколко капки 30% KOH. Епруветката се загрява до кипване и се оставя за 20-30 минути. Част от размекнатия материал се пренася със стъклена пръчица върху предметно стъкло, като се притиска с клечка кибрит, докато се появи “облак”, след което се микроскопира.

гной . Капка гной се смесва с капка спирт, смесен с глицерин и се изследва в нативен препарат.

Културна диагностика

За окончателно изясняване на диагнозата и изясняване на епидемиологията се извършва културна диагностика. Това включва получаване на култура от гъбичките, последвано от микроскопско изследване.

Засегнатите косми, люспи (кожа и нокти), мехури или гной се засяват върху изкуствена хранителна среда. Чрез появата на гигантски колонии върху петриеви блюда може да се получи представа за рода на патогена (Microsporum, Trichophyton, Epidermophyton), неговия тип (L. canis или ferrugineum, T. violaceum, verrucosum или gypseum). Окончателното уточняване на рода и вида на гъбата е възможно само въз основа на микроскопско изследване на получената култура.

Лабораторна диагностика на повърхностна кандидоза

За лабораторни изследвания на гъбички, подобни на дрожди, е необходим пресен материал. За микроскопско изследване, в зависимост от клиничните прояви и локализацията на лезиите, кожни люспи, остъргвания от ноктите, капка гной изпод нокътната ролка, белезникави плаки от засегнатите области на устната лигавица и външните полови органи, вагиналните стени, могат да се вземат изстъргвания от лигавицата мембрани на уретрата, както и измиване от червената граница на устните, засегнатите участъци от кожата на големи и малки гънки.

В зависимост от местоположението на лезията и естеството на клиничните прояви, материалът за изследването се взема с памучен тампон, скалпел, бримка и др. Предварително се правят люспи на кожата и ноктите, остатъци от епидермиса и изстъргвания от лигавицата -третирани с 30% KOH. Патологичният материал се изследва в неоцветени или оцветени препарати.

В първия случай материалът се смесва с равно количество алкохол с глицерин. При оцветяване по Грам клетките на дрождите и псевдомицела изглеждат тъмно лилави, според Ziehl-Neelsen - синьо, а според Romanovsky-Giemsa - розово-виолетово. В същото време отличителният белег на клетката на дрождите е пъпкуването - откриването на фигура на пясъчен часовник. Вземането на материал от лигавицата на устната кухина, гениталните органи, от кожата на червената граница на устните, от ъглите на устата, от кожата на големи и малки гънки се извършва със стерилен тампон. Тампонът след вземане на материала се поставя в друга стерилна епруветка с течна мъст. Епруветка с тампон се изпраща в микробиологичната лаборатория. Изолирането на чиста култура от дрожди-подобни гъбички от рода Candida се извършва по общоприетия микробиологичен метод.

Според учените 70% от населението на света има симптоми на микоза на краката. При това заболяване страдат интердигиталните гънки и кожата на стъпалата. Причината за заболяването е гъба, която първоначално е била открита само в ограничени райони на Югоизточна Азия и Африка. Първата световна война, причиняваща масова миграция на населението и влошаване на санитарните условия, доведе до разпространението на болестта в целия свят.

Какво причинява стъпалото на спортиста

Основният причинител на заболяването е Trichophyton rubrum. T. mentagrophytes и Epidermophyton floccosum могат да причинят щети. Много по-рядко гъбичките от рода Candida и плесенните микроорганизми могат да станат патогенни микроби.

Най-важните рискови фактори за заболяването:

• диабет;
• състояние на имунна недостатъчност (СПИН);
• плоски стъпала;
• атеросклероза на периферните артерии;
• разширени вени на долните крайници.

Външни условия, благоприятни за развитието на инфекция:

• затворени нехигроскопични обувки;
• наранявания на краката (мазоли, ожулвания);
• спорт.

Симптомите на краката на спортиста са най-чести при възрастни мъже. Децата рядко боледуват.

Симптоми на краката на спортиста

С развитието на заболяването се появяват лющене и сухота на кожата, сърбеж и парене, особено в интердигиталните пространства, появата на болезнени пукнатини под пръстите. Понякога първите симптоми на микоза на краката са мехурчета, които се пукат с образуването на ерозии. Често заболяването протича в изтрита форма, проявяваща се само като лек пилинг, наподобяващ брашно, в гънките между пръстите.

Има 4 клинични форми на заболяването.

Интердигиталният или интертригинозният вариант е най-честият. Кожата между пръстите се зачервява, напуква се, повърхностният слой се намокря и се лющи. Тези признаци се простират до подметката, придружени от силен сърбеж и парене. Често се свързва с бактериално възпаление.

Сквамозно-хиперкератотичният вариант е свързан с изразено удебеляване и напукване на кожата. Подметката е червена и се лющи. В областта на петата се появяват дълбоки болезнени пукнатини, сърбежът обикновено е нехарактерен. Често това е двустранна лезия, нарича се още "мокасинов крак".

Дисхидротичният вариант е придружен от появата на множество малки сърбящи болезнени мехури. Те се сливат един с друг, образувайки големи мехурчета. Обвивките на мехурите се пукат, разкривайки лъскава, уязвима, болезнена повърхност - ерозия. Външните прояви наподобяват екзема.

Често микробното възпаление се присъединява към увеличаване на ингвиналните лимфни възли, треска, болка в краката, гадене, главоболие и други признаци на интоксикация. При дисхидротична форма често се появява алергия към гъбички - микотична екзема. Придружава се от обриви на участъци от тялото, които не са заразени с гъбички, например на ръцете.

Изтритата версия обикновено протича неусетно. Придружава се от леко лющене на кожата между палеца и показалеца и/или безименния и малкия пръст на крака. Сърбежът отсъства.

Признаци на стъпалото на спортиста

Различните видове микоза на краката могат да бъдат независими заболявания или да се появят като част от обща гъбична инфекция на тялото. Понякога има признак "два крака - една ръка" с участието на тези органи. Може да се присъедини онихомикоза - гъбично унищожаване на нокътя. Понякога едновременно страдат и ингвиналните гънки.

Основните симптоми и лечение на микоза на краката са показани на снимката:

белене на кожата

Сухота и напукване на кожата

Мехурчета и ерозия

Диагностика

Опитен дерматолог може да разпознае различни видове микоза на краката при първия преглед. За потвърждаване на диагнозата обаче е необходимо микроскопско изследване. За него се използват люспи от лезията, изстъргват се с шпатула и се третират с алкален разтвор. Полученият материал се изследва под микроскоп и се откриват патогени.

Директната микроскопия е бърза, евтина и лесна за изпълнение, но не определя кой вид гъбички са причинили заболяването. Следователно материалът се засява върху хранителна среда, последвано от културно изследване на получения материал. Въпреки това е възможно да се получи култура на гъбички след откриването им под микроскоп само в 20-6% от случаите.

Видове лечение на микоза на краката

Лекарствата за лечение на гъбични заболявания трябва да се предписват от дерматолог. Обикновено лечението на микоза на краката се извършва с помощта на външни средства.

Едно от ефективните лекарства за това заболяване е клотримазол. В нашия магазин можете да го закупите на ниска цена. Лекарството под формата на лосион Клотримазол за нокти и кожа инхибира възпроизводството на гъбички в дебелината на роговия слой на епитела. Ако са засегнати интердигиталните гънки, лосионът се прилага ежедневно върху чиста, суха кожа на краката в продължение на една седмица, ако е необходимо, повече.

При тежка кератинизация и напукване на кожата е необходимо първо да се премахнат мъртвите кожни натрупвания. Това изисква използването на ексфолиращи лекарства. Например, предписвайте салицилов мехлем, кремове с млечна киселина или урея. След отстраняване на роговите налепи лосионът се прилага 1-2 пъти на ден.

При дисхидротичен вариант на първия етап е необходимо да се намали плачът. За това се използват лосиони с танин или борна киселина. В тежки случаи към лечението се добавят глюкокортикоиди. След това нанесете Клотримазол лосион по обичайния начин.

При изтрита форма краката се третират с лосион веднъж дневно в продължение на 7 до 10 дни, но продължителността на курса е индивидуална и се определя от лекаря.

Системна терапия

При дългосрочно или повтарящо се заболяване на краката на спортиста може да се наложи да приемате противогъбични лекарства през устата. Те преминават от стомашно-чревния тракт в кръвта, а след това в кожата, където унищожават гъбичките. Използват се три основни лекарства:

• флуконазол;
• итраконазол;
• тербинафин.

Продължителността на приема на тези средства е най-малко един месец. Цената им е доста висока. Следователно предотвратяването на микоза на краката винаги е по-лесно и по-изгодно, отколкото да се лекува.

Особено често се предписват системни лекарства, ако гъбичките са засегнали не само кожата, но и ноктите. В този случай лекарствата се натрупват в нарастващата част на нокътната плоча и постепенно расте здрав нокът. За подобряване на ефекта нокътят може да се отстрани изцяло оперативно, след което да се възстанови без гъбичките.

Комбинацията от отстраняване на ноктите, системна и локална противогъбична терапия е особено често необходима при пациенти в напреднала възраст. При тази група пациенти ноктите често растат бавно, кръвообращението в краката е нарушено, така че за постигане на ефект са необходими големи дози лекарства и дълъг курс на лечение.

Лечение с народни средства

Използването само на рецепти от традиционната медицина няма да помогне да се отървете от гъбичките. Това допълнение към конвенционалната терапия обаче съкращава курса на лечение и ускорява възстановяването.

Полезно е всяка вечер да правите топли бани на краката в продължение на 10 минути, след това добре да попиете краката с кърпа, особено между пръстите, и да нанесете лечебен лосион за нокти и кожа Клотримазол. Полезни съставки за баня, които облекчават възпалението и намаляват сърбежа:

• билка жълтурчета и жълт кантарион;
• корени от репей;
• трева от пелин;
• евкалиптови листа;
• елхови игли;
• прясна утайка от сварено смляно кафе;
• сол;
• смес от настърган сапун за пране, сода за хляб, калиев перманганат и горчица на прах.

Засегнатите места могат да се смазват с брезов катран или самостоятелно приготвен мехлем от 100 грама масло, смесено със счукана глава чесън. Полезен е и прополисът, който може да се превърже на болните нокти.

Полезно е да се правят компреси от природни средства. Първо се оставят за 1 - 2 часа, а при добра поносимост - цяла нощ. Използват се следните съставки:

• пулп от тиква;
• натрошени семена от черна ряпа;
• мента, смляна със сол;
• листа от репей или офика, леко омекотени с точилка.

Ефективно е смазването на засегнатите места със сокове от някои растения и други природни средства:

• алкохолен разтвор на прополис;
• сок от лук или чесън;
• сок от жълтурчета;
• масло от чаено дърво.

Предотвратяване на заболявания

За да избегнете микозата или да предотвратите повторната й поява, се нуждаете от проста, но постоянна превенция:

• през лятото носете дишащи обувки от естествен материал;
• когато посещавате басейни, бани, обществени душове, носете индивидуални гумени чехли;
• не носете обувки на някой друг, например на парти;
• използвайте само собствените си хигиенни средства - ножица, пемза, пила за нокти.

За да се избегне повторна инфекция, стелките и вътрешната повърхност на обувките трябва редовно да се третират с дезинфектанти. Добре позната народна рецепта е разтвор на оцетна есенция, но има остра неприятна миризма.

Лекарите препоръчват използването на Mycospray, който има не само противогъбичен, но и антибактериален ефект. Mycospray е чудесен не само за третиране на обувки, но и за нанасяне върху краката преди посещение на обществени места за защита на краката.

Жителите на Москва и регионите могат да закупят лекарства за лечение на крака на спортиста и за неговата профилактика в нашия онлайн магазин. Те са доказано ефективни и безопасни. Използването им се препоръчва за всички хора, които не желаят да се заразят с гъбички по краката или бързо да се отърват от тях.

Прецизна диагностика на инвазивни микозиНе е лесно. Това се дължи не само на трудностите при получаване на култура от гъбички, но и при интерпретирането на резултатите от изследванията, тъй като гъбичките, както дрожди, така и мицели, могат да колонизират лигавиците и да замърсят изследваните проби. В тази връзка диагнозата на инвазивните микози се основава на интегриран подход, включващ не само резултатите от микологични (културни) и серологични (определяне на гъбичен антиген) изследвания, но и клиничните симптоми на гъбична инфекция, данни от спомагателни изследвания методи (компютър или ядрено-магнитен резонанс, ултразвук).

Европейска американска кооперативна група за изследване на инвазивни микозипри имунокомпрометирани пациенти са разработени критерии за диагностика на инвазивни микози. Те са представени през 2001 г. на Международната конференция по антимикробни средства и химиотерапия (ICAAC, Чикаго), а през 2002 г. в печатен вид. Определени са критериите за доказана, вероятна и възможна инвазивна микоза, които се препоръчват за използване в клинични и епидемиологични проучвания.

Доказана инвазивна микоза, причинена от нишковидни гъби: откриване на гъбичен мицел в проби от биопсия или аспирати по време на хистологично или цитологично изследване или изолиране на култура от проби, получени при асептични условия от нормално стерилно огнище, което според резултатите от клинични и радиологични изследвания е свързано с инфекция, с изключение на изследванията на урината и лигавицата.

Доказана инвазивна микоза, причинена от дрождеви гъбички: откриване на клетки от дрожди (гъбите от рода Candida могат да образуват псевдомицел или истински мицел) в биопсични проби или аспирати, с изключение на проби от лигавиците, или изолиране на култура от проби, получени при асептични условия от нормално стерилен фокус, които, според резултатите от клинични и радиологични изследвания, свързани с инфекция, с изключение на урина, синуси и мукозни проби, или откриване чрез микроскопия и специфично оцветяване (в мастилена капка, оцветяване с муцикармин) на клетки от дрожди или положителен антиген на Cryptococcus spp. в цереброспиналната течност.

Фунгемия, причинена от нишковидни гъби: изолиране на хемокултура от гъби, с изключение на Aspergillus spp. и Penicillium spp., включително Penicillium marneffei, в комбинация с клинични симптоми на инфекциозен процес, съответстващ на изолирания патоген.

Фунгемия, дължаща се на дрождени гъбички: Изолиране на хемокултура на гъбички от рода Candida или други дрождеви гъбички при пациенти с клинични признаци на инфекция, свързана с този патоген.

Набор от диагностични изследвания за инвазивни микози

Изследван биоматериал	Показания, използвани среди, стойност
Кръв	Показания: персистираща треска (4-5 дни или повече) на фона на широкоспектърна антибиотична терапия; втората "вълна" на треска на фона на антибиотична терапия Вземане на кръв от вена във флакони за аеробни бактерии* или в селективна среда за гъбички, многократно (2-3 пъти през деня с интервал от 1 час) Диагностична стойност: изолиране на дрождеви гъби, внимателна интерпретация при изолиране на нишковидни гъби с изключение на Fusarium spp.
венозен катетър	Показания: изолиране на дрожди от кръвта Централният или периферен венозен катетър се отстранява при всички случаи на изолиране на дрожди от кръвта За микологично изследване се използва асептично отстранен дистален сегмент на катетъра с дължина 5–6 cm. Диагностична стойност: изолиране на дрождени гъбички в полуколичествено изследване от 15 cfu или повече, в количествено изследване - 103 cfu / ml или повече за потвърждаване на диагнозата свързана с катетър инфекция или инфекция на катетъра
Секрети от горните дихателни пътища, храчка, трахеални и бронхиални тампони, течност от бронхоалвеоларен лаваж	Показания: съмнение за микози, причинени от нишковидни гъбички или Cryptococcus neoformans; продължителна треска по време на широкоспектърна антибиотична терапия и неутропения Микроскопия на проби с калкофлуор бял (откриване на мицел или псевдомицел); инокулация върху среда на Sabouraud; определяне на Aspergillus антиген в бронхоалвеоларен лаваж при наличие на огнища в белите дробове, характерни за инвазивна аспергилоза Диагностична стойност: изолиране на нишковидни гъби или Cryptococcus neoformans
Гръбначно-мозъчна течност	Показания: симптоми на менингит; откриване на фокус (огнища) в мозъка с компютърен или магнитен резонанс; "Церебрални" симптоми на фона на треска и неутропения Микроскопия с бял калкофлуор, в капка мастило; определяне на Aspergillus антиген, Cryptococcus; инокулация върху среда на Sabouraud Диагностична стойност: откриване на гъбички, както дрожди, така и мицели; положителен антиген
Биопсии, аспирати, перитонеална течност, плеврална течност	Показания: клинични и/или рентгенологични признаци на инвазивна микоза; треска по време на терапия с широкоспектърни антибиотици. Микроскопия с бял калкофлуор, посявка върху среда на Сабуро Диагностична стойност: откриване на гъбички, както дрожди, така и нишковидни

* Честотата на изолиране на гъбичките от кръвта е идентична при първоначалното вземане на кръвни проби както във флакони с хранителна среда за култивиране на бактерии, така и със селекционна среда за гъбички. Изследването е проведено на бактериологичен анализатор VASTES 9240.

Вероятна инвазивна микозадиагностициран с комбинация от следните критерии:
един знак от категорията микробиологични критерии;
един признак от категорията на "значимите" или два от групата на "по-малко значимите" клинични симптоми на инфекциозния процес.

Възможна инвазивна микозадиагностициран въз основа на комбинация от следните критерии:
наличието на поне един рисков фактор, предизвикващ развитието на инвазивна микоза;
един признак от категорията на микробиологичните критерии или един признак от категорията на "значимите" (два от групата на "по-малко значимите") клинични симптоми на инфекциозния процес.

Концепцията за " възможна инвазивна микоза» не се препоръчва за употреба в клинични проучвания, изследващи ефективността на противогъбични лекарства. Можете да използвате този термин при анализа на емпирична противогъбична терапия, епидемиологични проучвания, изучаване на фармакоикономиката.

При микологични изследваниястерилни аспирати или проби от биопсия вземат предвид не само изолирането на културата от гъбички, но и откриването на мицел или псевдомицел чрез микроскопия. В хистологичните препарати Aspergillus е трудно да се разграничи от Fusarium spp., Sceclosporium apiospermum и някои други нишковидни гъби. За диференциална диагноза трябва да се направи имунохистохимично изследване с антитела срещу аспергилус.

Изолиране на дрождеви гъбичкиот кръвта в поне едно проучване принадлежи към категорията на "доказаната" инвазивна микоза и е абсолютна индикация за назначаване на системни антимикотици при пациенти с неутропения. Честотата на откриване на дрожди от кръвта е ниска, дори при дисеминирана кандидоза, тя е 35-50%.
Задържане повтарящи се кръвни културиувеличава вероятността от положителни резултати.

други интерпретациярезултати при откриване на нишковидни гъбички в кръвта. Високата честота на изолиране на нишковидни гъби е характерна за Fusarium spp. и е 40-60%. Aspergillus се среща изключително рядко, в повечето случаи се счита за зараза, с изключение на Aspergillus terreus.

Избор Aspergillus terreusот кръвта на пациенти с хемобластоза може да показва истинска аспергилемия и при наличие на клинични симптоми на инфекция е основата за предписване на антимикотици.

Критерии за инвазивна микоза

Индекс	Критерии
Фактори, предизвикващи появата на инвазивна микоза (макроорганизъм)	неутропения (< 0,5*109/л в течение 10 дней) Устойчива треска за повече от 96 часа на широкоспектърни антибиотици Телесна температура над 38°C или под 36°C и някой от следните предразполагащи признаци: продължителна неутропения (повече от 10 дни) през предходните 60 дни, интензивна имуносупресивна терапия през последните 30 дни, доказана или вероятна инвазивна микоза през предходните периодична неутропения или СПИН Наличие на симптоми на GVHD, особено случаи на тежко протичане (степен II) или обширно протичане на хронично заболяване Дългосрочна (повече от 3 седмици) употреба на глюкокортикоиди през последните 60 дни
Микробиологични признаци	Изолиране на култура от филаментозни гъбички (включително Aspergillus spp., Fusaruim spp., Sceclosporium spp. и Zygomycetes) и Cryptococcus neqformans от храчка или течност от бронхоалвеоларен лаваж Положителни резултати от посявка или цитологично изследване (директна микроскопия) за откриване на нишковидни гъби от аспирати на параназалните синуси Откриване на филаментозни гъбички или Cryptococcus neoformans при цитология/директна микроскопия от храчка или течност от бронхоалвеоларен лаваж Положителен Aspergillus антиген в бронхоалвеоларен лаваж, цереброспинална течност и кръвни проби (поне две) Положителен криптококов антиген в кръвни проби Откриване чрез цитология или директна микроскопия на гъбични елементи в проби от нормално стерилни течности (напр. Cryptococcus spp. в цереброспинална течност) Два положителни резултата от теста за откриване на дрождена култура в урината при липса на уринарен катетър Кандида кристали в урината без уринарен катетър Изолиране на Candida spp. от хемокултури
Клинични признаци долните дихателни пътища	Трябва да бъде свързано с локуса, от който се вземат проби за микробиологично изследване Всеки от следните типове нови белодробни инфилтрати на КТ: знак на ореол, знак на полумесец, кухина със зони на консолидация* Симптоми на инфекция на долните дихателни пътища (кашлица, гръдна болка, хемоптиза, диспнея), плеврално триене, всеки нов инфилтрат, който не е включен в характеристиките с висока значимост; плеврален излив
горните дихателни пътища Знаци с голямо значение Признаци с по-малко значение	Рентгенологични признаци на инвазивна инфекция в синусите на носа (ерозия на стената или разпространение на инфекция в съседни структури, обширно разрушаване на костите на черепа) Хрема, назална конгестия, назална язва, епистаксис, периорбитален оток, максиларна болка, черна некротична язва или перфорация на твърдото небце
Централна нервна система Знаци с голямо значение Признаци с по-малко значение	Рентгенови данни за подозирана инфекция на ЦНС (мастоидит или друго параменингеално огнище, екстрадурален емпием, множество лезии в субстанцията на главния или гръбначния мозък) Фокални неврологични симптоми и признаци, включително фокални гърчове, хемипареза; нарушения на съзнанието, менингеални симптоми, нарушения на биохимичния състав на цереброспиналната течност и нейния клетъчен състав (при липса на други патогени, според култура и микроскопия, при липса на туморни клетки)

*При липса на инфекция, причинена от микроорганизми, способни да причинят подобна радиологична картина, включително образуване на кухини (Mycobacterium spp., Legionella spp., Nocardia spp.).

При откриване в кръвтаили други стерилни биосубстрати на дрождени гъбички, е необходимо да се извърши идентификация на вида и да се определи чувствителността към противогъбични лекарства, при изолиране на нишковидни (плесенни) гъбички - само идентификация на вида, чувствителността не се определя.

В клинични практикачувствителността на нишковидните гъби не се изследва поради несъвършенството на стандартите за определяне на чувствителността на такива гъби към антимикотици. Освен това, само едно проучване демонстрира корелация между Aspergillus spp. и резултати от лечението на инвазивна аспергилоза при пациенти с хемобластоза. Нито едно от следващите проучвания не е открило подобни резултати.

Напоследък започнаха да се появяват отделни съобщения за формирането на придобита резистентност на гъбички A. fumigatus към итраконазол, вориконазол.

Идентификация на гъбите по видове, особено получен от стерилни локуси, е необходим преди всичко за избора на антимикотична и адекватна противогъбична терапия. По този начин, Candida krusei са резистентни към флуконазол и по-малко чувствителни от други видове дрожди към амфотерицин В; Aspergillus terreus, Scedosporium apiospermum (Pseudallescheria boydii), Trichosporon beigelii, Scopulariopsis spp. устойчив на амфотерицин В; Mucorales са резистентни към итраконазол, вориконазол, Candida glabrata показва дозозависима чувствителност към флуконазол и ако се изолира този вид гъбички, дори чувствителни щамове, дозата на флуконазол трябва да се увеличи (на възрастни се предписват 800 mg вместо 400 mg) ; Candida lusitaniae е резистентна към амфотерицин B.

Идентификация на гъбите по видовее важен и за епидемиологичен анализ в болница - определяне на причинителите на огнища на инфекция и, ако е възможно, източника на инфекция. Описани са огнища на инфекция, причинена от такива редки гъби като C. lusitaniae, C. krusei, C. lipolytica.

Въз основа видова идентификация на гъбитеможе да се предположи инвазивна микоза или гъбична колонизация на лигавиците. Например Aspergillus niger е значително по-малко вероятно от Aspergillus fumigatus да причини инвазивна аспергилоза при пациенти с остра левкемия. Изолирането на Aspergillus niger от бронхоалвеоларния лаваж най-често се разглежда като колонизация на дихателните пътища, а от храчките - като замърсяване от въздуха и изисква допълнителни изследвания за потвърждаване на диагнозата инвазивна аспергилоза.

Въз основа изолиране на нишковидни гъбиот храчки, бронхоалвеоларна течност, аспират от параназалните синуси, може да се предположи само инвазивна микоза, без да се включва в категорията „доказана“. Въпреки това, откриването на Aspergillus в храчки, особено Aspergillus fumigatus или Aspergillus flavus, при пациенти с неутропения, получаващи алогенен костен мозък, трябва винаги да се взема предвид. Това налага повторно микологично изследване и компютърна томография на белите дробове. Така че, при неутропения, вероятността за откриване на инвазивна аспергилоза в случай на положителна култура на Aspergillus spp. в храчките е 80%.

Избор Cryptococcus neoformansпри имунокомпрометирани пациенти от респираторния тракт (промивки, промивки) е диагностично значим. Ако идентифицирането на дрождеви гъбички от течности, получени от дихателните пътища (промивки от трахеята, бронхите, бронхоалвеоларен лаваж) на имунокомпрометирани пациенти не е задължително, тогава е необходим скрининг за откриване на Cryptococcus neoformans от тези проби.

Откриване на кандида в уринатапри пациенти с неутропения и треска обикновено се счита за проява на дисеминирана кандидозна инфекция.

Своевременно диагностикаинвазивни успешно използват търговски тест за откриване на циркулацията на специфичен антиген на гъби Aspergillus spp. галактоман (полизахариден водоразтворим компонент на клетъчната стена на гъбата).

Галактоманможе да се определи чрез два метода: латексна аглутинация (Pastorex Aspergillus, BioRAD) и ензимен имуноанализ (Platelia Aspergillus, BioRAD).

предимство ензимен имуноанализе по-нисък праг на чувствителност за определяне на нивото на галактоман в кръвта - 1 ng / ml или по-малко и с помощта на латексна аглутинация - 15 ng / ml. Диагностичната стойност е определянето на галактоман в кръвта (поне 2 проби), цереброспиналната течност, бронхоалвеоларния лаваж. Чувствителността на метода за имуноензимен анализ е около 90%, специфичността е 90-99%, при алогенни реципиенти на костен мозък тези цифри са по-ниски и равни на 60-70% и 80-90%, съответно, поради профилактичната употреба на противогъбични лекарства (антимикотиците намаляват праговото ниво на галактоман).

В 40% от случаите откриване галактоманв кръвта изпреварва проявите на инвазивна аспергилоза, определени чрез компютърно изследване на белите дробове, и в 70% изпреварва клиничните симптоми на инфекция.

Диагностична стойност на теста за откриване на антиген Аспергилусима в случай, че изследването се провежда многократно. Определянето на антигена на Aspergillus в кръвта трябва да се извършва с треска по време на лечение с широкоспектърни антибиотици при пациенти с неутропения 2 пъти седмично; с пневмония, която възниква или продължава на фона на антибиотична терапия; при откриване на огнища в белодробната тъкан (компютърна томография).