Причинителят на сифилис. Таксономия

No23 Причинителят на сифилис. Таксономия. Характеристика. Микробиологична диагностика. Лечение.
Treponema palladium; Т. entericum
Морфология: типични трепонеми с 8-12 завъртания, опорно-двигателен апарат - по 3 периплазмени флагела на всеки полюс на клетката. Оцветяването по Грам не се възприема, според Romanovsky-Giemsa - леко розово, открито чрез импрегниране със сребро.
културни ценности: вирулентен щам върху домашен любимец. среда не расте, натрупването на култура става чрез заразяване на заека в тестиса. Вирулентните щамове се култивират върху среди с мозъчна и бъбречна тъкан.
Биохимични свойства: микроаерофил
Антигенна структура:комплекс, има специфични протеинови и липоидни антигени, като последният е идентичен по състав с кардиолипин, извлечен от говеждо сърце (дифосфадилглицерин)
Фактори на патогенност: адхезините участват в процеса на прикрепване, липопротеините участват в развитието на имунопатологични процеси.
Устойчивост: чувствителен към изсушаване, слънчева светлина, остава върху предмети до изсъхване. При неблагоприятни условия преминава в L-форми и образува кисти.
Патогенеза: Причинява сифилис. От мястото на входната врата трепонемите навлизат в регионалните лимфни възли, където се размножават. Освен това Т. прониква в кръвния поток, където се прикрепя към ендотелиоцитите, причинявайки ендартериит, водещ до васкулит и тъканна некроза. С кръвта Т. се разпространява в цялото тяло, засявайки органи: черен дроб, бъбреци, костна, сърдечно-съдова и нервна система.
Имунитет: Не се развива защитен имунитет. В отговор на антигените на патогена се развиват ХЗТ и автоимунни процеси. Хуморалният имунитет се произвежда срещу липоидния антиген на T. и е титър на IgA и IgM.
микроскопско изследване. Извършва се с първичен сифилис по време на появата на твърд шанкър. Материал за изследване: отделяне от шанкър, съдържание на регионални лимфни възли, от които се приготвя "натрошен" капков препарат и се изследва в тъмно поле. При положителен резултат се виждат тънки усукани нишки с дължина 6-14 микрона, които имат 10-12 еднакви малки къдрици с правилна форма. Бледата трепонема се характеризира с движения, подобни на махало и огъване напред. С развитието на лезии на устната лигавица с вторичен сифилис, както и с локализирането на твърд шанкър в устната кухина, е необходимо да се разграничи бледа трепонема от сапрофитни трепонеми, които са представители на нормалната микрофлора. В този случай откриването на типични трепонеми в пунктата на регионалните лимфни възли е от решаващо диагностично значение.
Серодиагностика. Реакцията на Васерман се задава едновременно с 2 антигена: 1) специфичен, съдържащ антигена на патогена - трепонема, унищожена чрез ултразвук; 2) неспецифичен - кардиолипин. Изследваният серум се разрежда в съотношение 1:5 и се поставя RSK по общоприетия метод. При положителна реакция се наблюдава забавяне на хемолизата, при отрицателна реакция настъпва хемолиза на еритроцитите; интензитетът на реакцията се оценява съответно от (+ + + +) до (-). Първият период на сифилис е серонегативен и се характеризира с отрицателна реакция на Васерман. При 50% от пациентите реакцията става положителна не по-рано от 2-3 седмици след появата на твърд шанкър. Във втория и третия период на сифилис честотата на положителните реакции достига 75-90%. След курса на лечение реакцията на Васерман става отрицателна. Успоредно с реакцията на Васерман се провежда реакция на микропреципитация с неспецифичен кардиолипинов антиген и изследвания инактивиран кръвен серум или плазма. В ямката върху плочка от плексиглас (или обикновено стъкло) се нанасят 3 капки серум и се добавя 1 капка кардиолипинов антиген. Сместа се разбърква старателно и резултатите се вземат предвид. Положителната реакция с кръвния серум на пациент със сифилис се характеризира с образуване и загуба на люспи с различни размери; при отрицателен резултат се наблюдава равномерна светлинна опалесценция.
RIF – индиректна имунофлуоресцентна реакция – специфична е при диагностицирането на сифилис. Като антиген се използва суспензия от тъканни трепонеми. Използва се реакцията RIF_200. Серумът на пациента се инактивира по същия начин, както при реакцията на Васерман, и се разрежда в съотношение 1:200. Капки антиген се нанасят върху предметни стъкла, изсушават се и се фиксират за 5 минути в ацетон. След това серумът на пациента се нанася върху лекарството, след 30 минути се измива и изсушава. Следващата стъпка е третирането на препарата с флуоресцентен серум срещу човешки глобулини. Разгледайте препарата с помощта на флуоресцентен микроскоп, като отбележите степента на луминесценция на трепонема.
RIT реакцията на обездвижване на трепонема също е специфична. Жива култура от трепонема се получава чрез култивиране в тестис на заек. Тестисът се раздробява в специална среда, в която трепонемите остават подвижни. Реакцията се провежда, както следва: суспензия от тъканни (подвижни) трепонеми се смесва в епруветка с тестовия серум и се добавя свеж комплемент. В едната контролна епруветка вместо тестовия серум се добавя серум на здрав човек, а в другата вместо пресен комплемент се добавя инактивиран - неактивен комплемент. След задържане при 35 °C при анаеробни условия (анаеростат) от всички епруветки се приготвя "натрошен" капков препарат и в тъмно поле се определя броят на подвижните и неподвижните трепонеми.
Лечение: пеницилини, тетрациклини, бисмут-съдържащи лекарства.

Сифилисът е циклично възникващо полово предавано заболяване при хора, причинено от spirochete pallidum; Етап I се проявява с твърд шанкър (fr. шанкър- язва), II етап - увреждане на стените на кръвоносните съдове и различни обриви, III - гуми в различни органи с увреждане на нервната система. Гума (лат. . гуми- гума) - хроничен инфилтрат под формата на възел, склонен към гниене и язва. Сифилитична гума ( син.: сифилитичен гранулом, гумозен сифилис, третичен сифилом) е безболезнена полусферична гума, която е проява на третичен активен сифилис. патоген - Treponema pallidum- е открит през 1905 г. от Ф. Шаудин и Е. Хофман.

T. pallidum- микроорганизъм със спираловидна форма, с размери 0,09 - 0,18 х 6 - 20 микрона. Броят на къдриците на спиралата е от 8 до 12, къдриците са еднакви, разположени на еднакво разстояние една от друга около 1 μm, височината намалява към краищата. В електронен микроскоп изглежда като змия или земен червей. В двата края на трепонемата има блефаропласти с прикрепени към тях флагели, чийто брой варира от две до няколко, те образуват аксиална нишка, усукана около протоплазмения цилиндър на спирохетата. При неблагоприятни условия може да образува кисти. При животните може да се появи подобна на капсула обвивка с мукополизахаридна природа.

Treponema се оцветява слабо с анилинови багрила, поради което причинителят на сифилис се нарича бледа спирохета. Редуцира сребърния нитрат до метално сребро, което се отлага върху повърхността на микроба и го прави видим в тъканите: при оцветяване според Морозов трепонемите изглеждат кафяви или почти черни. При оцветяване по Романовски - Гимза те придобиват бледорозов цвят.

Трепонемите обикновено се размножават чрез напречно делене, докато разделените клетки могат да се прилепват една към друга за известно време. Времето за разделяне е около 30 часа.

Живите трепонеми са много подвижни, извършват движения около собствената си надлъжна ос, както и флексионни, вълнообразни и транслационни движения.

Към днешна дата няма такъв метод, който би могъл да получи последователно култури от трепонема. Treponema pallidum, патогенна за хората, никога не е била култивирана върху изкуствени хранителни среди, в пилешки ембриони или в клетъчни култури. Тези разновидности на техните щамове, които растат в анаеробни условия, вероятно са сапрофитни спирохети, близки до причинителя на сифилиса. Тяхната физиология остава малко проучена. Трепонемите са хемоорганотрофи, нямат каталаза и оксидаза и могат да ферментират въглехидрати. Те растат върху много богата среда, съдържаща до 11 аминокиселини, витамини, соли и серумен албумин. Най-добрият начин за отглеждане на патогенни спирохети е заразяване на заек в тестиса (експериментален орхит). Предполага се, че има T. pallidumжизнен цикъл, включващ, в допълнение към спираловидната форма, гранулиран стадий и стадий на цистоподобни сферични тела. Именно гранулираните форми на тези микроорганизми са способни да преминават през бактериални филтри.

Антигените на Treponema са слабо разбрани. Установено е, че трепонема съдържа протеинови, полизахаридни и липидни комплекси. Антигенният състав на културните и тъканните трепонеми е толкова близък, че антигени, получени от културни трепонеми, могат да се използват за CSC при диагностицирането на сифилис. В човешкото тяло трепонемите стимулират производството на антитела, които причиняват обездвижване и смърт на живи подвижни трепонеми, свързват комплемента в присъствието на суспензия T. pallidumили свързани спирохети и също се откриват в индиректния RIF.

Причинителят на сифилис не образува екзотоксини. Бледите трепонеми са относително нестабилни към външни влияния. Загиват бързо при изсушаване и при повишена температура (при 55 °C за 15 минути). В 0,3 - 0,5% разтвор на HCl те незабавно губят подвижността си; те също бързо го губят и умират в присъствието на арсенови, бисмутови и живачни препарати. В цяла кръв или в серум при 4 °C те остават жизнеспособни в продължение на 24 часа, което трябва да се има предвид при кръвопреливане.

Епидемиология.Сифилисът е типично полово предавано заболяване. Източникът на инфекцията е болен човек, обикновено заразен от 3 до 5 години; пациентите с късни форми на сифилис не са заразни. Заразяването в по-голямата част от случаите става чрез различни видове сексуални и домашни контакти, рядко трансплацентарно от болна майка на дете (вроден сифилис) или като професионална инфекция при контакт с медицински персонал. При естествени условия само човек страда от сифилис, в експеримента е възможно да се заразят маймуни, хамстери и зайци. При маймуните на мястото на инжектиране на трепонемите се образува твърд шанкър, при зайци и хамстери инфекцията протича безсимптомно.

Патогенеза и клиника.Инкубационният период на придобития сифилис варира от 2 до 10 седмици, обикновено от 20 до 28 дни. Входните врати на инфекцията са най-често лигавиците на гениталните органи, по-рядко - устната кухина, както и увредената кожа. На мястото на въвеждане патогенът се размножава, образува се първичен сифилом (твърд шанкър) - ерозия или язва с уплътнена основа. Освен това патогенът навлиза в лимфната система, развиват се лимфангит и регионален лимфаденит. Това е типична клиника на първичен сифилис, която продължава 1,5 - 2 месеца. След това тези знаци изчезват. Вторичният период на сифилис е свързан с генерализиране на процеса, когато се увеличават много лимфни възли и се появяват обриви по кожата и лигавиците; могат да се наблюдават увреждания на вътрешните органи и нервната система. Има вторичен пресен и вторичен рецидивиращ сифилис. С всеки следващ рецидив интензивността на обрива става по-слабо изразена и периодите между рецидивите се увеличават. Елементите на обрива съдържат голям брой живи трепонема, през този период пациентът е най-заразен. Продължителността на вторичния сифилис е до 4 години или повече. Освен това заболяването навлиза в дълъг асимптоматичен период, след което след няколко години се развива третичен сифилис. В същото време се наблюдават груби органични лезии на вътрешните органи, сърдечно-съдовата система, централната нервна система, костите, образуват се гуми, придружени от разрушаване на тъканите и дегенеративни промени. Характерна клинична характеристика на сифилиса е липсата на субективни оплаквания от страна на пациента (болка, сърбеж, парене и др.).

Имунитет.Срещу сифилис не възниква нито естествен, нито изкуствен имунитет; има само инфекциозен имунитет и докато той съществува, човек практически не е податлив на нова инфекция. Инфекциозният имунитет се развива 10-11 дни след появата на твърд шанкър (имунитет на чанкер), през този период или не се наблюдава повторна инфекция, или образуваният нов шанкър протича абортивно (суперинфекция). В бъдеще, със суперинфекция, естеството на получените лезии съответства на стадия на заболяването по време на повторната инфекция. Суперинфекцията се обяснява с временно отслабване или „срив“ на инфекциозния имунитет. От суперинфекцията е необходимо да се разграничи повторната инфекция, т.е. нова, повторна инфекция на човек, който преди това е имал сифилис (излекуван) и следователно е загубил инфекциозен имунитет. Описани са случаи на дори трикратно заболяване със сифилис. Инкубационният период при такива пациенти е по-кратък, по-често се развиват множество язвени шанкри с лимфаденит, серологичните реакции стават положителни по-рано. Във вторичния период папулите по кожата често са ерозирани. Това се обяснява с факта, че при сифилис се развива реакция на свръхчувствителност от забавен тип, след лечение сенсибилизираните лимфоцити остават в тялото за дълго време. Инфекциозният имунитет е нестерилен по природа и се дължи на хуморални фактори: в серума на пациента се откриват имуноглобулини от класове G, A и M.

Лабораторна диагностика.За диагностицирането на сифилис е оптимален интегриран подход, включващ едновременното използване на няколко метода. Те традиционно се разделят на директни, които позволяват да се докаже наличието на патоген в тестовия материал (инфекция на животни, различни видове микроскопия и молекулярно-генетични методи за откриване на ДНК). T. pallidum- PCR и ДНК сондиране), и индиректни - серологични тестове за откриване на антитела. От своя страна серологичните тестове са представени от нетрепонемни и трепонемални.

Тестовият материал за откриване на трепонема при директни методи е изхвърлянето на твърд шанкър или неговия пунктат, пунктат на лимфен възел, изстъргване на розеола, цереброспинална течност. Патогенът се открива най-добре в нативен материал чрез тъмно поле (виж Фиг. 111.4) или фазово-контрастна микроскопия, което позволява да се наблюдават различни видове движение на жив патоген. Ако вече е започнало антибиотично лечение, патогенът не може да бъде открит в патологичния материал. Ако е необходимо, се извършва директен (или индиректен) RIF или препаратът се оцветява по Romanovsky-Giemsa. Тези методи се използват само за ранна диагностика на сифилис.

Серологичните тестове могат да се използват на различни етапи от заболяването, с изключение на серонегативен първичен сифилис. Обикновено се използва комплекс от серологични реакции. ДА СЕ нетрепонемнитестовете с визуално определяне на резултатите включват: реакция на фиксиране на комплемента (реакция на Васерман \u003d RSKk \u003d RW) с кардиолипиновия антиген на сърдечния мускул на бика (кръстосано реагиращ антиген), реакция на микропреципитация (MR или RMP) - микрореакция с плазма и инактивиран серум; RPR - бърз плазмен реагин тест и други реакции. Експертите смятат, че е най-добре да се използват два теста за масов скрининг: RPR и RPHA или ELISA, тъй като RPR е по-чувствителен при първичен сифилис, RPHA в по-късните стадии на заболяването и ELISA във всички етапи. Микроскопски четими нетрепонемни тестове включват VDRL тест и USR тест. Нетрепонемните тестове се използват като скрининг тестове, тъй като могат да дадат фалшиво положителни резултати. IN трепонематестовете използват антигени от трепонемален произход. Те се използват за потвърждаване на резултатите от нетрепонемни тестове (фалшиво положителни?) с клинично, епидемиологично и анамнестично съмнение за сифилис, за диагностика на латентни и късни форми, за ретроспективна диагноза. Трепонемните тестове включват: RSKt (RSK с трепонемален антиген), RIBT (или RIT) - реакцията на имобилизация на бледа трепонема, RIF (една от най-добрите реакции), RPHA, ELISA, имуноблотинг.

Микробиологична диагностика на сифилис

Практическа работа

Медицина и ветеринария

Името "бледа" трепонема получи поради ниската способност за оцветяване. Има и други патогенни трепонеми: T. pertenue - причинител на фрамбезия, T. carateum - причинител на пинта, T. bejel - причинител на хронична генерализирана спирохетоза (bejel). Посочени причинители и наречени ...

Методически указания за студенти за практическо занятие №36.

Тема на урока:

Мишена: Изучаване на методите за микробиологична диагностика, терапия и профилактика на сифилис.

Модул 2 . Специална, клинична и екологична микробиология.

Тема 36: Микробиологична диагностика на сифилис.

Уместност на темата:

Причинителят на сифилис

Сифилисът е инфекциозна болест, предавана по полов път, причинена от Treponema pallidum, характеризираща се с увреждане на кожата, вътрешните органи, костите и нервната система. Има придобит и вроден сифилис.

Таксономия. Причинителят на сифилис - бледа трепонема (Treponema pallidum) - е открит през 1905 г. от Ф. Шаудин и Е. Хофман; принадлежи към семейство Spirochaetaceae, отдел Gracilicutes.

Морфология и тинкториални свойства.Името "бледа" трепонема получи поради ниската способност за оцветяване. Има и други патогенни трепонеми: T. pertenue - причинител на фрамбезия, T. carateum - причинител на пинта, T. bejel - причинител на хронична генерализирана спирохетоза (bejel). Тези патогени и болестите, които причиняват, са по-често срещани в региони с горещ и влажен климат. Бледа трепонема - тънка спираловидна бактерия с дължина от 4 до 14 микрона, с равномерни малки къдрици (8-14 къдрици); заедно със спиралата може да има други форми - под формата на кисти, гранули, L-форми; оцветени според Romanovsky-Giemsa в характерен бледорозов цвят. Движения от спираловидна към флексия.

Култивиране.Бледата трепонема е задължителен анаероб, изключително придирчив към хранителните среди. Treponema, култивирана върху хранителна среда - културна спирохета - се различава от патогенната по-ниска вирулентност, но техните антигени са сходни, което се използва при серодиагностиката на сифилис.

Антигенна структура.Бледата трепонема се характеризира с антигенни асоциации с други трепонеми, както и с липоиди от животински и човешки тъкани. В патогена са идентифицирани няколко антигена, един от които, липоидният антиген, е идентичен на липоидния екстракт от говеждо сърце.

съпротива. В околната среда бледата трепонема е слабо устойчива; на 55 0 C умира в рамките на 15 минути, чувствителен към изсушаване, светлина, живачни соли, бисмут, арсен, пеницилин. Върху предмети от бита остава инфекциозен, докато не изсъхне; добре запазени в трупна тъкан.

податливост на животните.Експериментално може да се предизвика патологичен процес в тестиса и върху кожата на зайците, и в кожата на човекоподобните маймуни.

Епидемиология. Източникът на инфекция е болен човек. Заразяването става предимно чрез полов контакт, по-рядко чрез предмети от бита (чаши, четки за зъби, цигари и др.), замърсени с отделянето на болния; възможна е инфекция чрез целувки, мляко на кърмачка (домашен сифилис), не са изключени случаи на инфекция по време на кръвопреливане от донори със сифилис.

Патогенеза и клинична картина.Причинителят на сифилис навлиза в тялото през кожата или лигавицата, разпространява се през органи и тъкани, причинявайки тяхното увреждане. Инкубационният период продължава средно 3-4 седмици. След инкубационния период сифилисът протича циклично под формата на първичен, вторичен и третичен период. На мястото на въвеждане на патогена (на гениталиите, в устната кухина и т.н.) се появява първична лезия - твърд шанкър - рязко ограничено уплътнение с язва на повърхността. Вторичният период на сифилис продължава 3-4 години, характеризира се с обрив, нарушение на общото състояние на тялото. Третичният период се характеризира с увреждане на кожата, лигавиците, вътрешните органи, костите, нервната система: появяват се образувания, склонни към гниене, язви.

Имунитет. Няма вроден имунитет срещу сифилис. При сифилис се развива нестерилен имунитет; След лечение имунитетът не се запазва, така че са възможни повторни заболявания.

Микроскопията в тъмно поле се използва за откриване на бледа трепонема в отделянето на твърд шанкър. До края на първичния и вторичния период сергологичните реакции на Васерман, седиментните реакции на Кан, цитохоличните и други тестове, които откриват антитела срещу бледа трепонема, стават положителни. При масови изследвания се използва реакция на селекция или микрореакция върху стъкло с капка кръв или серум и специален антиген. Изследователските лаборатории също използват реакцията на имобилизиране на трепонема и други съвременни методи.

Схема на микробиологично изследване при сифилис

Микроскопско изследване Серодиагностика

(комплекс от серологични реакции):

Реакция на Васерман

Реакция на обездвижване на Treponema

Микроскопия на нативен препарат РИФ

В тъмното поле

ОТГОВОР ОТГОВОР

Лечение. Най-ефективните антимикробни средства са антибиотиците от пеницилиновата серия. Използват се и препарати от бисмут, йод и др.

Предотвратяване. Няма специфична профилактика. Неспецифичната профилактика се състои в спазване на правилата за хигиена, както и в провеждането на комплекс от санитарни и хигиенни мерки от обществен характер: отчитане на пациенти със сифилис, хоспитализация на всички пациенти с инфекциозни форми, включващи всички членове на семейството. болен в прегледа, системно изследване на рискови групи, обучение на населението и др.

Конкретни цели:

Запознайте се с морфологията на причинителя на сифилис.

Определете характеристиките на клиничния ход на сифилиса.

Дефинирайте понятията "тъкан" и "културна" трепонема.

Интерпретирайте резултатите от микроскопското изследване.

Изучаване на методите за серологична диагностика на сифилис.

Запознайте се с методите за профилактика и специфична терапия.

Умейте да:

• Съберете материал за изследване от пациенти
• Интерпретирайте резултатите от микроскопското изследване
• Знайте как да проведете реакцията на Васерман

Теоретични въпроси:

1. Патоген.

• Имоти. съпротива.
• Патогенност за хора и животни. Патогенни фактори, токсини.
• Патогенеза на заболяването при хора, имунитет.
• Микробиологична диагностика.
• Специфична профилактика и лечение

2. Цели на задаване на реакцията на Васерман.

3. Диагностична стойност на реакцията на Васерман и седиментните реакции.

4. Механизъм на реакцията на Васерман.

5. Характеристики на имунитета при сифилис.

Практически задачи, които се изпълняват в класната стая:

• Микроскопия на демонстрационни препарати.
• Очертаване на демонстрационни микропрепарати в протокола.
• Анализ на схемата за лабораторна диагностика.
• Формулиране на протокола.

Литература:

1. Коротяев А.И., Бабичев С.А., Медицинска микробиология, имунология и вирусология / Учебник за медицинските университети, Санкт Петербург: “Специална литература”, 1998.- 592с.

2. Тимаков В.Д., Левашев В.С., Борисов Л.Б. Микробиология / Учебник.-2-ро изд., Преработ. и допълнителни - М.: Медицина, 1983, - 512s.

3. Пяткин К.Д. Кривошеин Ю.С. Микробиология с вирусология и имунология , - Киев: Vishcha school, 1992. - 431s.

4. Медицинска микробиология /Редактиран от V.I. Покровски.- М.: GEOTAR-MED, 2001.- 768s.

5. Ръководство за практически упражнения по микробиология, имунология и вирусология. / Ед. М.П. Zykova.- М. "Медицина". 1977. 288s.

6. Черкес Ф.К., Богоявленская Л.Б., Белскан Н.А. микробиология. / Ед. Ф.К. Черкес М.: Медицина, 1986. 512s.

7. Записки от лекции.

Допълнителна литература:

1. Макияров К.А. Микробиология, вирусология и имунология - Алма-Ата: "Казахстан", 1974 г. 372 с.

2. Титов М.В. Инфекциозни болести , - К., 1995. 321s.

3. Шувалова Е.П. Инфекциозни болести.- М.: Медицина, 1990.- 559s.

4. BME, том 1, 2, 7.

5. Павлович С.А. Медицинска микробиология в графики: Proc. надбавка за медицински ин-тов Мн.: Виш. училище, 1986. 255с.

Кратки насоки за работа в практическо занятие.

В началото на урока се проверява нивото на подготовка на учениците за урока.

• Самостоятелна работа.
• формулиране на реакцията на Васерман.
• Отчитане на реакцията на Васерман и записване в протокола.
• Анализ и записване на лабораторни диагностични схеми в протокола.

Съставът на самостоятелната работа включва и микроскопиране на демонстрационни препарати и тяхното скициране в протокола на урока.

В края на урока се провежда тестов контрол и анализ на крайните резултати от самостоятелната работа на всеки студент.

Технологична карта на практическото занятие

№ p \ p	Етапи	Време в мин.	Начини на обучение	Оборудване	Местоположение
	Проверка и коригиране на изходното ниво на подготовка за урока	20	Тестови елементи за изходно ниво	Маси. Предметни тестове.	стая за учене
	Самостоятелна работа	35	Графика логическа структура	Колекция от демонстрационни препарати, биологични препарати.
	Самоконтрол и корекция на усвоения материал	15	Целеви програми за обучение
	Тестови контрол	15	Тестове
	Анализ на резултатите от работата

Алгоритъм на лабораторната работа:

Проучване на схемата за лабораторна диагностика на сифилис.

Микроскопия на готови намазки от култура и тъканни трепонеми.

Запознаване с правилата за вземане на материал от пациенти за микроскопиране на изследвания материал.

Микроскопия и анализ на демонстрационни препарати.

Нанасяне на препарати в протокола.

Записване на схеми на лабораторна диагностика в протокола.

Формулиране на протокола.

Тестови контрол и анализ на резултатите от самостоятелната работа на всеки студент.

Целеви учебни задачи:

1. Пациент с диагноза "първичен сифилис" е приет в АТЦ. Кой от следните диагностични методи се използва в този стадий на заболяването?

А . микроскопия в тъмно поле;

° С. RP в гел

Д. RA

д . индиректна имунофлуоресценция

2. При пациент от отделението по лицево-челюстна хирургия, при поставяне на реакцията на Васерман, тя се оказа отрицателна. Кои от следните резултати определят явлението отрицателен RSK?

А . чрез аглутинация на еритроцити;

б . от наличието на еритроцитна утайка;

° С . чрез промяна на цвета на течността;

д . чрез образуване на филм

д . от наличието на хемолиза в епруветките.

3. При преглед на пациент с CVA се установяват папулозно-розеолозни обриви по тялото и крайниците и увеличени лимфни възли. Предварителна диагноза сифилис. Какъв метод на лабораторна диагностика може да потвърди тази диагноза?

А. алергични;

b. биологични;

° С . бактериологичен;

д . бактериоскопски;

д. ELISA

4. По време на рецепцията зъболекарят откри твърд шанкър в устната кухина на пациента. Кой от изброените методи за лабораторна диагностика може да се използва за поставяне на диагноза?

А . реакция на обездвижване на трепонема

б . Реакция на Васерман

° С. Реакция на Кан

Д. RA

д . бактериоскопски

5. Жена дойде в предродилната клиника на 8-та седмица от бременността. При прегледа й е взета кръв за наличие на специфични антитела срещу трепонема. Кой от следните серологични тестове може да се използва за откриване на антитела срещу трепонема?

А. Реакцията на Райт

б . Реакция на Васерман

° С. Реакция на Видал

д . Реакция на Борде-Гангу

д. RTGA.

6. За да потвърди диагнозата сифилис, лаборантът извърши серологичен тест, при който използва кръвния серум на пациента, кардиолипиден антиген, комплемент и индикаторна система. Какво е името на дадената реакция?

А . реакция на обездвижване на трепонема;

б . реакция на Васерман;

° С. Реакция на Кан

Д. RP

д . реакция на имунофлуоресценция.

7. При провеждане на серологичен тест за откриване на антитела срещу причинителя на сифилис в кръвния серум на пациента, трепонемите се инкубират със серума на пациента при анаеробни условия, след което бактериите губят своята мобилност. Каква беше реакцията и какво означава това?

А . реакция на Васерман, пациентът има сифилис;

б .Реакция на Васерман, пациентът има инкубационен период;

° С . реакция на обездвижване на трепонема, пациентът има сифилис;

д . индиректна реакция на имунофлуоресценция, пациентът има сифилис;

д . реакция на обездвижване на treponema, пациентът някога е имал сифилис.

8. За серологична диагностика на сифилис, използвайки реакцията на Васерман, лаборантът подготви следните реагенти: кардиолипиден антиген, изотоничен разтвор на натриев хлорид, хемолитична система. Какъв друг компонент е необходим за организиране на тази реакция?

А . живи трепонеми;

б . овчи еритроцити;

° С. допълнение;

д . антиглобулинов серум;

д . диагностичен преципитиращ серум.

9. В микропрепарат, приготвен от пунктат на лимфните възли на пациента, оцветен по Romanovsky-Giemsa, лекарят разкрива тънки микроорганизми с 12-14 еднакви къдрици с бледо розов цвят. За причинител на какво инфекциозно заболяване можем да говорим в този случай?

А . рецидивираща треска;

b. лептоспироза;

° С. лайшманиоза

Д. сифилис

д. трипанозомоза.

10. Остъргване от устната лигавица е взето от пациент със съмнение за първичен сифилис. Микроскопията на цитонамазка, оцветена по метода на Романовски-Гимза, разкрива усукани лилави бактерии. Кое от следните заключения е правилно?

А . пациентът е диагностициран T. палидум;

б . Пациентът има атипична форма T. палидум;

° С . пациентът има непатогенни трепонеми;

д . избран е грешен метод на оцветяване;

д. -

11. Клиницистът подозира първичен сифилис при пациент. Какъв материал за изследване трябва да се вземе за потвърждаване на диагнозата?

А . тъканна течност от твърд шанкър и пунктат на лимфни възли;

б . изстъргване от кожни обриви;

° С. алкохол;

Д. слуз от носа

д. слюнка.

12. Взета е кръв от пациент със съмнение за вторичен сифилис. Какъв диагностичен метод трябва да се използва за потвърждаване на диагнозата?

А . реакция на Видал;

б . алергичен тест;

д . Реакция на Борде-Гангу

д . бактериологичен метод

° С . индиректна имунофлуоресцентна реакция.

Както и други произведения, които може да ви заинтересуват
68128.		Думи във vіrshі - аз рай в душата	78,5 КБ
	Мета: унищожаване на академичните познания по теория на литературата и идейно-художествен анализ на поетичното произведение, за да се улесни четенето му по различни начини; да развиват образно поетичните мисли; обърнете любовта към художественото слово и към родната природа. Ще прочета поетичните редове, а вие сте виновни за подаването ...
68129.		Интелектуална игра "Литературна Веселка" Ти живееш в сърцата на хората, Тарас!	43,5 КБ
	Шевченко да развие логически мисли чрез различно четене, да се научи да разбира думите на Шевченко и да развие своята креативност. Тарас Шевченко Тарас Це бунтовно пророкува името е известно не само на украинците, но и на целия свят. Shevchenko tse krinitsa z zhelelny water yak vtamovu spiritual spraga to people.
68130.		Запознаване със страната Логика	28,5 КБ
	Днес децата се лекуват на невъобразимо скъпа цена. Децата могат да ходят до училище по най-краткия път, но години наред могат да се лутат из различни лабиринти. Децата имитират качване в автобуса и пътуването. Оста на компанията на як Деца Боря Петрик Юрко Вира Стас Ира.
68131.		Аналогия. Добрир малюнкив по аналогия	263,5 КБ
	Тип урок: научен ум и начинаещ Обработка: геометрични фигури и малки предмети на Grim Photographer; индивидуални комплекти геометрични фигури на гралото бебе с последователност. Подреждам фигурите с ръце. Всички фигури в различни цветове А сега оставете очите си да се чудят...
68132.		Пътувайте през океана от логически задачи	27,5 КБ
	Мета: Познавайте деца с различни разбирания; развиват мисли, език, памет, предпазливост; vikhovuvat smilivist, rіshuchіst. Ръководител на урока Информирайте ги и маркирайте урока. Днес сме virushaemo в околосветското плаване по-скъпо на кораба. Проверяват ни за много лакомства. Людина е замислен идиот. Мислите се изразяват с думи.
68133.		Sumy и nesumísní разбират. Молба за повторение	84,5 КБ
	Мета: да систематизира знанията за учене за разбирането на сумите и несъответствията на разбирането, задълбочено разбиране на знанията за логическия ред на развитие на логическите мисли, зачитането на паметта на ума; да събуди любов към съществата, да събуди познавателен интерес към всички живи същества, да формира самоосветление ...
68136.		МОДЕРНИЗАЦИЯ НА ВСИЧКО ЗА РАЗБИРАНЕ НА УКРАЙНА: МЕХАНИЗМИ НА ИНСТИТУЦИОНАЛНО РЕГУЛИРАНЕ	188KB
	Ефективността и ефективността на функционирането на системата за жизненоважно осветление в Украйна в началото на XXI век може да бъде безопасна само през есента, ако не звучи като възраждане на целите на timchas, породени от икономическа и политическа нестабилност , демографска криза, социокултурен вакуум.

T. pallidum подвид pallidum - спирална бактерия с размери 6-14x0.2-0.3 микрона; в културите може да бъде голям. Къдриците на спиралата са еднакви, но във височина могат да бъдат до 14. Те могат да образуват L-образна форма.

Основен как се разпространява сифилисът- напречно деление. Причинителят на сифилисне е устойчив във външната среда и умира при изсъхване, но се запазва на студено до 50 дни. Нагряването при температура 40 ° C за един час води до загуба на патогенни свойства; при 48 °C бактериите умират в рамките на 10 минути.

Причинителят на сифилисслабо оцветени с анилинови багрила (оттук и името "бледа спирохета"). сифилисни бактерииредуцирайте сребърния нитрат до метално сребро, което придава на тъканите черен или тъмнокафяв цвят.

В домашната практика методът на осребряване според Морозов е често срещан. Според Romanovsky-Giemsa става розово и непатогенно трепонема- в лилаво или синьо. Използва се и негативно оцветяване с Burri.

Културни свойства на сифилис. Култура на причинителя на сифилис

Бледа спирохетавзискателен към условията на отглеждане, расте слабо на изкуствени среди; все още не са налични методи за стабилно производство на култури.

У нас най-голям брой щамове на сифилисидентифицира казанските микробиолози V.M. Аристовски и П.П. Гелцер.

Тези "Казан" щамове на сифилисзаедно с щама Reiter, те се използват за производството на Ag за серодиагностика. С дългосрочно отглеждане сифилисни бактериисе адаптират към по-прости среди (например Kitta-Tarozzi) и губят своите патогенни свойства.

Сифилис колониималки, се появяват на 3-5-ия ден от култивирането.

Съдържанието на статията

Бледа трепонема

Морфология и физиология

T.pallidum има спираловидна форма, протопластичен цилиндър, който е усукан на 8-12 спирали. 3 периплазмени флагела се простират от краищата на клетката. Бледата трепонема не възприема добре анилинови багрила, поради което се оцветява с боя Романовски-Гимза. Въпреки това, най-ефективният метод е да се изследва в тъмно поле или фазово-контрастен микроскоп. Микроаерофил. Не расте върху изкуствени хранителни среди. T. pallidum се култивира в тъкан на заешки тестиси, където се размножава добре и напълно запазва свойствата си, причинявайки орхит при животното. Антигени. Антигенната структура на T. pallidum е сложна. Свързва се с протеини на външната мембрана, липопротеини. Последните са кръстосано реактивни антигени, общи за хората и говедата. Те се използват като антиген в теста на Васерман за серодиагностика на сифилис.

Патогенност и патогенеза

Вирулентните фактори на Treponema pallidum включват протеини на външната мембрана и LPS, които проявяват своите токсични свойства след освобождаване от клетката. В същото време, очевидно, способността на трепонема да образува отделни фрагменти по време на деленето, прониквайки дълбоко в тъканите, също може да се припише на фактори на вирулентност. Има три етапа в патогенезата на сифилиса. При първичен сифилис се наблюдава образуването на първичен фокус - твърд шанкър на мястото на входната врата на инфекцията с последващо проникване в регионалните лимфни възли, където патогенът се размножава и натрупва. Първичният сифилис продължава около 6 седмици. Вторият етап се характеризира с генерализиране на инфекцията, придружено от проникване и циркулация на патогена в кръвта, което е придружено от кожни обриви. Продължителността на вторичния сифилис при нелекувани пациенти варира от 1-2 години. В третия стадий се откриват инфекциозни грануломи (склонни към гниене венци), локализирани във вътрешни органи и тъкани. Този период при нелекувани пациенти продължава няколко години и завършва с увреждане на централната нервна система (прогресивна парализа) или на гръбначния мозък (tasca dorsalis).

Имунитет

При сифилис има хуморален и клетъчен имунен отговор. Получените антитела нямат защитни свойства. Клетъчният имунен отговор е свързан с фиксирането на патогена и образуването на грануломи. Елиминирането на трепонема от тялото обаче не се случва. В същото време неблагоприятните условия на околната среда предизвикват образуването на кисти от трепонема, които се локализират в стената на кръвоносните съдове. Смята се, че това показва прехода на болестта към етапа на ремисия. Заедно с кистите, трепонемите образуват L-образни форми. При сифилис се образува ХЗТ, което може да се открие чрез кожно-алергичен тест с убита трепонема суспензия. Смята се, че проявата на третичния период на сифилис е свързана с ХЗТ.

Екология и епидемиология

Сифилисът е типична антропонозна инфекция. Заболяват само хора, които са резервоар на заразата в природата. Предаването на инфекцията става по полов път и много по-рядко - чрез бельо и други предмети. Във външната среда (въздух) трепонема бързо умира.

Сифилис и други трепонематози

Сифилисът е хронично инфекциозно венерическо заболяване на човек, има циклично прогресиращо протичане, засяга кожата, лигавиците, вътрешните органи и нервната система. Причинителят на заболяването е Treponema pallidum , Има три основни периода в развитието на сифилис, чиито лабораторни диагностични методи имат свои собствени характеристики. В ранния период на заболяването материалът за лабораторна диагностика е изолацията от твърд шанкър, пунктат от лимфните възли, остъргвания от розеола, сифилис и др. Във вторичния и третичния период се изследва кръвен серум и цереброспинална течност.Поради факта, че изолирането на чисти трепонемни култури в конвенционалните бактериологични лаборатории е невъзможно, по време на първичния период на заболяването (рядко по-късно) се използва бактериоскопски диагностичен метод се извършва. Започвайки от вторичния период, се използват главно серологични методи.

Бактериоскопско изследване

Преди да вземете патологичния материал, първо избършете сифилитичната язва с памучен тампон, за да отстраните мазната плака и замърсяващата микрофлора. След това дъното на твърдия шанкър се дразни със скалпел или метална шпатула или язвата се изстисква енергично отстрани с пръсти в гумена ръкавица, за да отдели ексудат от раната. С малко количество бистра течност може да се добави към капка 0,85% разтвор на натриев хлорид. Ако е невъзможно да се вземе материал от дъното на шанкъра (фимоза, белези от язва и др.), Се пунктират регионалните лимфни възли тъмно зрително поле (по-добре!) Или с помощта на фазово-контрастен или аноптрален микроскоп. Бледата трепонема в тъмното зрително поле изглежда като леко лъскава тънка деликатна спирала със стръмни равномерни заоблени първични къдрици. Движенията са плавни, така че се огъва под ъгъл. Но особено характерните за него трептения, подобни на махало. Причинителят на сифилиса трябва да се разграничава от Treponema refringens (колонизира външните полови органи), която е по-дебела, груба, с неправилни едри къдрици и има активни хаотични движения, но не се огъва. Трепонемите на fusosp-irochetous симбиоза се отличават с тънък модел, нежни къдрици и хаотично движение.При диагностицирането на орален сифилис бледо трепонема трябва да се диференцира и от зъбните трепонеми, особено T. dentium, както и от T. buccalis. Първият от тях обикновено е трудно да се разграничи от сифилитичния. Вярно е, че е по-къс, има 4-8 остри къдрици, няма движение на махалото. T. buccalis е по-дебел, има груби първоначални къдрици и хаотично движение.В случай на съмнение трябва да се има предвид, че всички сапрофитни трепонеми, за разлика от бледите, се оцветяват добре с анилинови бои. Те не проникват в лимфните възли, така че изследването на пункции има голяма диагностична стойност. Откриването на типични трепонеми в пунктата на лимфните възли безспорно потвърждава диагнозата сифилис. Предимствата му се състоят в това, че материалът се изследва бързо, а морфологията на трепонемите в живо състояние е най-характерна. Вече не се използват петна от мастило по метода Burri.Ако не е възможно да се проведе изследване в тъмното поле на зрението, могат да се използват различни методи за оцветяване. Бледата трепонема не възприема добре анилинови багрила. От многото предложени методи за оцветяване, най-добри резултати се получават с помощта на оцветяването Romanovkim-Giemsa. Направените петна се фиксират с метилов алкохол или в смес на Никифоров. Резултатите за яснота се получават, когато оцветителят по Романовски-Гимза се излее в препарата. За целта парченца кибрит се поставят в петриево блюдо, върху тях се поставя предметно стъкло с петно ​​надолу и багрилото се налива, докато намокри петното. Времето за оцветяване се удвоява. Под микроскопия бледо трепонемите имат бледорозов цвят, докато други видове трепонема стават сини или синьо-виолетови.Може да се използва и методът на осребряване на Морозов. Трепонемите напълно запазват своите морфологични характеристики и изглеждат кафяви или почти черни под микроскоп. Но посребрените препарати не се съхраняват дълго време. Напоследък рядко се използват методи за оцветяване с трепонема.Ако сифилисът се лекува с химиотерапевтични лекарства, е почти невъзможно да се идентифицира патогенът в патологични материали дори с помощта на тъмно зрително поле. При получаване на отрицателен анализ, той трябва да се повтори.

Серологична диагностика на сифилис

При провеждане на серологични реакции сега се използват следните изследователски методи, обединени в Украйна: реакция на фиксиране на комплемента (RCC), имунофлуоресценция (RIF), имобилизация на трепонема (PIT), микрореакция на утаяване (MPR) и ензимен имуноанализ (ELISA) В продължение на много години, основната и най-честата реакция се счита за реакция на свързване на комплемента или реакция на Васерман (РВ, RW). За настройката му се използва кръвен серум на пациент със сифилис и цереброспинална течност в случай на увреждане на нервната система.Методът за настройка на реакцията на Васерман не се различава от техниката за провеждане на RSC. Единствената разлика е, че за RO се използва не само специфичен трепонем, но и неспецифичен кардиолипинов антиген.5-10 ml кръв се вземат от кубиталната вена на празен стомах или не по-рано от 6 часа след хранене. Не можете да вземете кръв от пациенти с треска, след пиене на алкохол и мазни храни, от бременни жени 10 дни преди раждането и родилки. Серумът, извлечен от кръвта, се нагрява при температура 56 ° C в продължение на 30 минути, за да инактивира собствения си комплемент. RO задължително се определя с два антигена: специфичен и неспецифичен , Специфичният ултразвуков трепонемален антиген се приготвя от култури от бледа трепонема (щам на Reiter), отгледани в епруветки и изложени на ултразвук. Произвежда се под формата на лиофилизиран прах. Неспецифичният кардиолипинов антиген се получава чрез алкохолна екстракция на липиди от говеждо сърце и пречистване от баластни смеси, опакован в ампули от 2 ml. За да се въведе антигенът в RO, той се титрува съгласно тези инструкции. Непосредствено преди настройката на RV се извършва титруване на комплемента и хемолитичния серум по същата схема, както в RSK. Реакцията на Васерман се поставя както качествено, така и количествено. Провежда се качествена реакция в три епруветки с два антигена по обичайната схема.Резултатите от реакцията се оценяват по система 4 плюс: положителна реакция - когато има пълно или значително забавяне на хемолизата (4 +, 3 +); слабо положителна реакция - частично забавяне на хемолизата (2 +); съмнителна реакция - леко забавяне на хемолизата (1 +). В случай на пълна хемолиза, RO се счита за отрицателен.Всеки серум, който е дал положителна качествена реакция, трябва също да бъде изследван чрез количествен метод с последователно разреждане от 1:10 до 1:640., който идва пълен (4 +) или значка (3 +) забавяне на хемолизата. Количественият метод за определяне на RO е важен за оценка на ефективността на лечението на сифилис. Бързото намаляване на титъра на реагин показва успешна терапия. Ако серумният титър не намалява дълго време, това показва липса на ефективност на използваните лекарства и необходимостта от промяна на тактиката на лечение.Когато pylori за серонегативен първичен сифилис или латентен, третичен или вроден, се препоръчва да се постави реакцията на Васерман на студено по същата схема. При съмнение за невросифилис се извършва РО с цереброспинална течност, която е инактивирана, тъй като не съдържа собствен комплемент. В реакцията се въвежда неразредена цереброспинална течност и в разреждания 1: 2 и 1: 5. Реакцията на Васерман става положителна 2-3 седмици след появата на твърд шанкър. При вторичен сифилис той е положителен в 100% от случаите, при третичен - в 75%.В допълнение, в комплекса от серологични реакции (CSR), реакцията на микропреципитация с кръвна плазма или инактивиран серум се използва като скринингов тест.

Микрореакция на утаяване

Преципитационна микрореакция, поставена с кардиолипинов антиген. Принципът на реакцията е, че при добавяне на емулсия от кардиолипинов антиген към кръвната плазма или серум на пациент със сифилис се образува утайка (комплекс антиген-антитяло), която се утаява под формата на бели люспи. Те използват тази техника: три капки плазма (или инактивиран серум) се пипетират в ямката на плаката, след което се добавя една капка от емулсията на стандартния кардиолипинов антиген. Реакционните компоненти се смесват чрез разклащане на плочата в продължение на 5 минути, след което се добавят три капки 0,9% разтвор на натриев хлорид и се оставят при стайна температура за още 5 минути. Задължителен контрол със слабо положителен кръвен серум. Резултатите се оценяват с просто око върху изкуствен източник на светлина. Когато в кладенеца се появят големи люспи, реакцията се счита за положителна (4 +, 3 +), средна и малка - като слабо положителна (2 +, 1 +). Ако резултатът е отрицателен, утайка не се образува.Микрореакцията на утаяване може да се извърши и чрез количествен метод за установяване на титъра на преципитиращите антитела и въз основа на това да се оцени ефективността на лечението. По-високи MRP титри се получават с плазма, отколкото със серум. В чужбина аналог на MRP с пациентски серум е VDRL (Veneral disease research laboratoiy), а с плазма - RPR (Rapid plasma reagin).

Имунофлуоресцентна реакция (RIF)

Групата специфични реакции, които се използват широко за серологична диагностика на сифилис, включва индиректна имунофлуоресцентна реакция. Като антиген използва суспензия от патогенна бледа трепонема от щам Nichols от паренхима на заешки тестиси на 7-ия ден след заразяването. Реакцията се поставя в две модификации: RIF-ABS и RIF-200. В първия вариант се използва сорбент на антитела (sonicat) - ултразвуков трепонемален антиген за CSC. Произвежда се от предприятието Каунас за производство на бактериални препарати (Литва). При опцията RIF-200 серумът на пациента се разрежда 200 пъти, за да се премахне ефекта на груповите антитрепонемни антитела RIF-ABS се поставя върху тънки, добре обезмаслени предметни стъкла. На обратната страна на очилата с нож за стъкло са маркирани 10 кръга с диаметър 0,7 см. В рамките на кръга върху стъклото се нанася антиген - суспензия от бледи трепонеми - в такова количество, че да има 50- 60 от тях в зрителното поле. Намазките се изсушават на въздух, фиксират се на пламък и 10 минути в ацетон. Добавете 0,2 ml сорбент (соникат) и 0,5 ml кръвен серум на пациента в отделна епруветка, разбъркайте добре. Сместа се нанася върху намазка (антиген), така че да се покрие равномерно, инкубира се 30 минути във влажна камера при 3-7 ° C (фаза II на реакцията). След това намазката се промива с фосфатен буфер, изсушава се и върху нея се нанася антишобулин флуоресцентен серум за 30 минути, поставя се във влажна камера при 37 ° C (фаза II). Лекарството се промива отново с фосфатен буфер, изсушава се и се изследва под флуоресцентен микроскоп.При положителна реакция бледите трепонеми излъчват златисто-зелена светлина, при отрицателна - не светят.200 пъти с фосфатен буфер. При провеждане на имунофлуоресцентна реакция с цереброспиналната течност на пациент със сифилис на нервната система се използват RIF-c и RIF-10, т.е. течността се въвежда в реакцията неинактивирана и разредена или разредена 1:10.

Тест за имобилизиране на Treponema pallidum (PIT)

Реакцията на имобилизиране на бледи трепонеми (PIT) се основава на феномена на загуба на тяхната мобилност в присъствието на имобилизиращи антитрепонемни антитела от серума на пациента и комплемента при условия на анаеробиоза. Като антиген в реакцията се използва суспензия от бледи трепонеми от тъканта на тестисите на заек, заразен с лабораторен щам на Nichols. Суспензията се разрежда със стерилен 0,85% разтвор на натриев хлорид, така че в зрителното поле да има 10-15 спирохети.За провеждане на реакцията се използват 0,05 ml кръвен серум на пациента, 0,35 ml антиген и 0,15 ml комплемент смесени в стерилна епруветка. Опитът е придружен от контроли на серум, антиген и комплемент. Епруветките се поставят в анаеростат, създават се анаеробни условия и се държат в термостат за 18-20 часа при температура 35 ° C. След това се приготвят капки налягане от всяка епруветка, преброяват се най-малко 25 трепонема и колко от тях те са подвижни и колко са неподвижни. Процентът на специфична имобилизация на бледи трепонеми се изчислява по формулата: x = (A-B) / B * 100, където X е процентът на имобилизация, A е броят на подвижните трепонеми в контролната тръба, B е броят на подвижните трепонема в епруветката. Реакцията се счита за положителна, когато процентът на обездвижване е 50 или повече, слабо положителен - от 30 до 50, съмнителен - от 20 до 30 и отрицателен - от 0 до 20. Овчинников. Анаеробните условия на експеримента се създават чрез поставяне на реагиращата смес (серум, антиген, комплемент) в меланжори, двата края на които се затварят с гумен пръстен. Техниката меланжерин позволява да се направи без сложно оборудване и апаратура за създаване на анаеробиоза, но дава резултати, които не са достъпни за класическата микроаневростатична техника.Реакциите на имобилизация на Treponema и имунофлуоресценция се считат за най-специфични в серологичната диагноза на сифилис. И все пак PIT, въпреки своята специфика, не се препоръчва за използване в широката практика поради сложността на настройката.

Ензимен имуноанализ (ELISA)

Ензимно-свързаният имуносорбентен анализ (ELISA) се извършва както с кадриолипинов антиген (неспецифична, селективна реакция), така и с трепонема (специфична реакция), което потвърждава диагнозата сифилис тестов серум. Ако съдържа антитела срещу трепонема, се образува комплекс антиген-антитяло (фаза II). След измиване на несвързаните неспецифични антитела към ямките се добавя антиглобулинов серум, конюгиран с ензим (най-често с пероксидаза от хрян). Конюгатът е здраво свързан към комплекса антиген-антитяло (фаза II).След измиване на несвързания конюгат към ямките се добавя OFD оцветяващият субстрат - ортофенилендиамин (фаза III). Пероксидазната реакция се спира чрез добавяне на сярна киселина. За контрол поставят същите проби с положителни и очевидно отрицателни серуми.Отчитането на резултатите от анализа се извършва с помощта на фотометър, който определя оптичната плътност в двувълнов режим (492 nm и 620 nm). В допълнение към фотометъра са необходими едно- и осемканални автоматични пипети с полипропиленов накрайник и подходящи комплекти диагностични тест-системи за установяване на реакция на ензимни антитела.Методът ELISA се използва широко в серологичната диагностика на сифилис. Той е еднакво ефективен за откриване на заболяването в инкубационния период (1-2 седмици след заразяването), с клинични прояви на заболяването и неговите латентни форми. Много често ELISA се използва при скринингови изследвания на населението, особено в станциите за кръвопреливане.В лабораторната практика понякога се използват реакцията на имунна адхезия (RIP) и реакцията на индиректна хемаглутинация (RNHA). Първият от тях се основава на факта, че патогенните тестикуларни трепонеми от щама Nichols, когато се смесят със серума на пациента в присъствието на комплемент и човешки еритроцити, се придържат към повърхността на червените кръвни клетки. RNHA се използва широко за диагностициране на сифилис поради своята методологична простота. Той става положителен вече три седмици след заразяването. Резултатът от положителна реакция остава години след възстановяването. Аналог на тази реакция в чужбина е TRHA (хемоаглутинация на Treponema pallidum).