Таксономия, пневмококи, лабораторни методи за грип

МИНИСТЕРСТВО НА ЗДРАВЕОПАЗВАНЕТО НА РУСКАТА ФЕДЕРАЦИЯ КАЗАНСКИ ДЪРЖАВЕН МЕДИЦИНСКИ УНИВЕРСИТЕТ КАТЕДРА ПО МИКРОБИОЛОГИЯ

ПНЕВМОКОК

КАЗАН 1999г

UDC 576.851.21(07)

Публикувано с решение на Централния координационен и методичен съвет на Казанския държавен медицински университет.

съставен от:

(Ръководител на катедрата по микробиология, доктор на медицинските науки, професор О. К. Поздеев, асистент на катедрата по микробиология, кандидат на медицинските науки, Е. Р. Федорова.

Рецензенти:

Ръководител на катедрата по епидемиология, Казански държавен медицински университет, доктор на медицинските науки, доцент М.Ш. Шафеев, ръководител на катедрата по епидемиология, Казанска държавна медицинска академия, доктор на медицинските науки, професор V.E. Григориев.

Пневмококи /O.K. Поздеев, Е.Р. Федоров - Казан: KSMU, 1999. - 14 с.

С копирането, разпространението, публикуването на текста или част от него във вашите ресурси, вие поемате отговорност в съответствие с действащото законодателство.

Изключително за използване на произведението за лични цели (член 18, член 26 от Закона на Руската федерация „За авторското право и сродните му права“). Търговското възпроизвеждане е забранено.

Казански държавен медицински университет, 1999 г

Pneumococcus (Streptococcus pneumoniae) е изолиран за първи път от Pasteur (1881), докато работи върху ваксина против бяс и първоначално е смятан за причинител на бяс. Етиологичната роля на микроорганизма в развитието на пневмония при хората е доказана от Frenkel и Weichselbaum (1884). Бактериите колонизират човешки и животински организми и принадлежат към групата на така наречените „орални” стрептококи. Те са основните причинители на пневмония, а също така могат да причинят плеврит, менингит, пълзящи язви на роговицата, гнойно възпаление на средното ухо, септични състояния и други заболявания. В IX издание на ръководството на Bergey за бактериите (1994 г.) пневмококите са включени в група 17, „Грам-положителни коки“.

Епидемиология на лезиите. Pneumococcus е един от основните причинители на бактериална пневмония, регистрирана извън болниците (2-4 случая на 1000 души); Всяка година в света се наблюдават най-малко 500 000 случая на пневмококова пневмония (реалната стойност е много по-висока). Децата и възрастните хора са най-податливи на инфекция. Резервоарът на инфекцията са пациенти и носители (20-50% от децата в предучилищна възраст и 20-25% от възрастните); основният път на предаване е контактен; по време на огнища също се предава по въздуха. Пиковата честота настъпва през студения сезон. В по-голямата част от случаите клиничните форми на инфекция се развиват, когато резистентността на организма е нарушена (включително поради студен стрес), както и на фона на други патологии (сърповидно-клетъчна анемия, болест на Ходжкин, HIV инфекция, миелом, захарен диабет , състояния след спленектомия и др.) или с алкохолизъм. Варианти 1, 2 и 3 играят най-голямо епидемиологично значение при патологията при възрастни; за деца - 1, 2, 3 и 14 варианта. Вирулентността на сероварите в низходящ ред е варианти 3, 1, 2, 5, 7 и 8. Чувствителни към пневмококи са бели мишки (при заразяване умират от септицемия за 24 часа), телета, агнета, прасенца, кучета и маймуни.

Морфология. Пневмококите са неподвижни, не образуват спори и имат леко удължена форма, напомняща очертанията на пламък на свещ. В петна от клиничен материал те са подредени по двойки, всяка от които е заобиколена от дебела капсула. В петна от хранителна среда те могат да бъдат разположени в къси вериги и да са по-заоблени. На проста среда те образуват тънка капсула; неговото развитие се стимулира чрез въвеждане на кръв, серум или асцитна течност. Образуването на капсули е най-силно изразено при бактерии тип III. Когато са подредени във вериги, капсулата може да е обща.

Културни ценности. Пневмококите са аероби или факултативни анаероби; При култивиране се предпочитат капнофилни условия (5-10% CO2). Те са хемоорганографи и растат добре върху кръвна или серумна среда, допълнена с 0,1% глюкоза. Виреят в температурен диапазон 28-42 °C, оптимална - 37 °C. Оптимално pH -7,6-7,8. Върху плътни среди образуват деликатни, полупрозрачни, ясно очертани колонии с диаметър около 1 mm. Понякога те могат да бъдат плоски с централна депресия; подобно на други стрептококи, колониите никога не се сливат

помежду си. Върху кръвен агар образуват малки полупрозрачни зеленикаво-сиви колонии. Центърът на колониите е по-тъмен, периферията е по-светла. Под колонията и по периферията й се вижда зона на а-хемолиза под формата на зеленикаво обезцветена зона (което се дължи на прехода на хемоглобина към метхемоглобина). Колониите от тип III пневмококи често имат мукозна консистенция и са с размер до 2 mm. Те са малко мътни и могат да се слеят помежду си. Те образуват S- и R-форми на колонии. При преминаване от S- към R-форма те губят способността си да синтезират капсулата. В течна среда със серум и 0,2% глюкоза те дават равномерна мътност и малка флокулентна утайка. При продължително отглеждане утайката се увеличава.

Устойчивост. Пневмококите принадлежат към групата на нестабилните микроорганизми. Те се задържат в сухи храчки до два месеца. Може да се съхранява дълго време при ниски температури; при температура 60 °C загиват за 3-5 минути. 3% разтвор на карболова киселина ги убива за 1-2 минути. Оптохинът (в концентрация 1:100 000) и жлъчката имат вредно въздействие върху пневмококите, което се използва за идентифициране на бактерии.

Пневмококите се различават от другите микроорганизми по редица свойства (Таблица 1).

Таблица 1 Биохимични свойства на пневмококите

Тестова подложка	Резултат	Тестова подложка	Резултат
Растеж при 100°C
		Рафиноза
сряда с 6,5% Над
а-хемолиза
В-хемолиза		Трехалоза
		Фосфатаза
Хипурат		β-галактозидаза
Глицерол
Обозначения: “+” - 90% или повече щамове са положителни; (+) - 80-89% от щамовете са положителни; d - 21-79% от щамовете са положителни; (-) - 11-20% от щамовете са положителни; „- - 90% или повече от щамовете са отрицателни.

Антигенна структура. В пневмококите са открити няколко типа антигени: полизахарид, 0-соматичен антиген, разположен в клетъчната стена; полизахаридни капсулни К-антигени и М-протеин. Полизахаридният соматичен антиген е подобен на С-субстанцията на други стрептококи. Връзката определя сходството в химичната структура на рибитейхоевите киселини, свързани с холин фосфата. Капсулните антигени също имат полизахаридна природа, състояща се от монозахариди, повтарящи се в различни комбинации: D-глюкоза, D-галактоза и L-рамноза. Въз основа на структурата на капсулните антигени, пневмококите се разделят на 84 серовара. Трябва да се помни, че капсулните антигени реагират кръстосано с антисеруми към антигени на стрептококи от група А и В, както и със серуми към антигени на Klebsiella и Escherichia. По време на прехода от S към R форма капсулните антигени се губят. За серотипиране на пневмококи се произвеждат групови серуми, обозначени с латински букви (A, B, C, D и др.) и серовариантни серуми, обозначени с римски цифри. Аглутиниращият серум III не е включен в серумните смеси. Пуска се отделно и не може да се отглежда. При хората най-често се изолират пневмококи от сероварианти I, II и III. Те са най-вирулентни за хората, така че тестът за аглутинация първоначално се извършва с антисеруми срещу тези варианти. Ако резултатът е отрицателен, реакцията на аглутинация се извършва със смес от серуми А, В, С и др. (до получаване на положителен резултат), а след това с отделни антисеруми. За по-бързо идентифициране на серовари се използва реакцията на Neufeld (подуване на имунната капсула). Методът се основава на способността на пневмококовите капсули да увеличават обема си в присъствието на хомоложен антисерум, което се регистрира чрез светлинна оптична микроскопия. Капсулните полизахариди имат сенсибилизиращи свойства, проявяващи се в развитието на реакция на свръхчувствителност от забавен тип, открита чрез кожни тестове.

Фактори на патогенност. Основният фактор е капсулата, която предпазва бактериите от микробицидния потенциал на фагоцитите и ги отклонява от действието на опсонините. Некапсулираните щамове са практически авирулентни и са редки. По-голямата част от набора от антипневмококови АТ се състои от АТ до Ag капсули. Важна функция на капсулата и М-протеина е и осигуряването на адхезия към лигавицата. Веществото С е от съществено значение, тъй като то специфично взаимодейства със С-реактивния протеин. Последицата от такава реакция е активирането на допълнителната каскада и освобождаването на медиатори на острата фаза на възпалението; натрупването им в белодробната тъкан стимулира миграцията на полиморфонуклеарни фагоцити. Образуването на мощни възпалителни инфилтрати е придружено от нарушаване на хомеостазата на белодробната тъкан и нейната хепатизация. Пневмококите произвеждат ендотоксин, а- и бета-хемолизини (пневмолизини) и левкоцидин. α-пневмолизин е термолабилен протеин, способен да неутрализира О-стрептолизин,

еритрогенно вещество, невраминидаза. Пневмококите също така синтезират редица ензими, които допринасят за патогенезата на лезиите - мурамидаза, хиалуронидаза (насърчава разпространението на микроорганизми в тъканите), пептидаза (разгражда IgA).

Патогенеза на лезиите. Биотопът на пневмококите са горните дихателни пътища. Патогенезата на повечето пневмонии включва аспирация на слюнка, съдържаща S. pneumoniae и проникване на бактерии в долните дихателни пътища. Съществено е нарушението на защитните дренажни механизми - кашличен импулс и мукоцилиарен клирънс. При възрастни по-често се наблюдават лобарни белодробни лезии, при деца и възрастни хора преобладават перибронхиални или фокални лезии. Образуването на мощни възпалителни инфилтрати е придружено от нарушаване на хомеостазата на белодробната тъкан и нейната хепатизация. Инфекциите с най-вирулентния серовар 3 могат да бъдат придружени от образуване на кухини в белодробния паренхим. От първичното огнище патогенът може да проникне в плевралната кухина и перикарда или да се разпространи хематогенно и да причини менингит, ендокардит и ставни лезии

Клинични проявления. Класическата пневмококова пневмония започва внезапно; Те отбелязват повишаване на телесната температура, продуктивна кашлица и болка в гърдите. При отслабени хора и възрастни хора заболяването се развива бавно, с лека треска, нарушено съзнание и признаци на белодробна сърдечна недостатъчност. Стрептококов менингит се регистрира във всички възрастови групи; те се характеризират с бурно начало с повишаване на телесната температура, скованост на мускулите на врата, главоболие, гадене и повръщане. Лезиите на съдовете на менингите често са придружени от загуба на съзнание; сред децата и възрастните хора смъртността може да достигне 80%. Доста често се наблюдават хематогенни пневмококови лезии, както и синузит, мастоидит, среден отит, ендокардит и перитонит при хора с имунна недостатъчност (например HIV-инфектирани) или пациенти със спленектомия. След преболедуване се развива нестабилен имунитет, който е типоспецифичен и се дължи на появата на антитела срещу типичния капсулен полизахарид.

Лечение. В основата на лечението на пневмококова инфекция са антибиотиците - пеницилин, тетрациклин, хлорамфеникол, ванкомицин, рифампицин, цефтриаксон.

Предотвратяване. Неспецифичната профилактика на пневмококови инфекции е насочена към идентифициране на пациенти и носители с последващо лечение. За специфична профилактика на инфекцията деца над две години, възрастни в риск, както и здрави лица по време на огнище на заболяването се ваксинират с поливалентната полизахаридна ваксина "Пневмовекс 23". Лекарството съдържа 23 капсулни полизахаридни антигени на пневмококи (1, 2, 3, 4, 5, 6B, 7F, 8, 9N, 9V, 10A, 11A, 12F, 14, 15B, 17F, 18C, 1-9F, 19A, 20 , 22F, 23F, 33F). Антигени

пневмококи са получени от 90% от щамовете, изолирани от кръвта на пациенти с инвазивна пневмококова инфекция в САЩ и съответстващи на щамовете, открити в Русия. Имунизацията се извършва двукратно с интервал от 5-8 години.

След ваксинацията се създава изкуствен, активен, типово специфичен имунитет.

Лабораторна диагностика. „Златният стандарт“ е изолирането на патогена. Трябва да се помни, че материалът трябва да се изследва бързо, т.к бактериите са склонни към бърза автолиза поради активността на вътреклетъчните ензими. Материалът за изследването е храчка, плеврален излив и други ексудати, цереброспинална течност, кръв, слуз от носа и фаринкса, секрет от очни язви, секрет от ухото, урина, части от органи (в случай на смърт на пациента) . Сигнален отговор на пневмококова инфекция може да бъде издаден, когато неутрофили и грам-положителни ланцетни диплококи (най-малко 10 на зрително поле) се открият в натривки от храчки. В противен случай те прибягват до изолиране на патогена.

Първият етап от изследването.Патологичният материал се подлага на предварителна бактериоскопия (с изключение на кръвта). Храчките се поставят в стерилно петриево блюдо, измиват се, с примка се улавя гнойна лигавица, смила се върху предметно стъкло, изсушава се и се оцветява по Грам. Намазката разкрива грам-положителни коки с ланцетовидна или овална форма, заобиколени от капсула (образуването на капсула се наблюдава само при пневмококи, изолирани от болни и заразени животни). Откриването на пневмококови капсули може да се извърши по метода на Burri-Gins. Инокулацията на патологичен материал се извършва върху 5-10% кръвен или серумен агар и обогатителна среда (8-10% суроватъчен бульон). Ако се подозира сепсис от пневмококова природа, 5-10 ml от кръвта на пациента се инокулират в 45-90 ml суроватъчен бульон. Цереброспиналната течност, ако е бистра, се центрофугира и няколко капки от утайката се инокулират върху хранителни среди. Като среда за обогатяване се използва полутвърд суроватъчен агар. Културите се инкубират при 37 °C в продължение на 24 часа. Най-добрият метод за изолиране на чиста култура от пневмококи е заразяването на бели мишки с патологичен материал. Храчките, измити в петриево блюдо със стерилен физиологичен разтвор, се стриват в стерилно хаванче със стерилен пестик или натрошено стъкло, като се добавя физиологичен разтвор в съотношение 1:2-1:5. Суспензията се утаява, супернатантната течност в количество от 0,5-1 ml се прилага интраперитонеално на бели мишки. Ако в материала присъстват пневмококи, мишките умират в рамките на 72 часа. Типичните пневмококи се откриват в петна от органи и кръв. Органите и кръвта също се култивират върху суроватъчен бульон и върху петриеви панички с кръв или серумен агар.

Втори етап на изследването.Изследва се моделът на растеж върху хранителни среди. На кръвен агар колониите от пневмококи са малки, кръгли, гладки

ръбове, нежни, заобиколени от зона на позеленяване на средата (което много напомня на растежа на вириданс стрептококи). Върху серумния агар колониите са деликатни, полупрозрачни и прозрачни. По време на бактериоскопия на намазки, оцветени по Грам. Откриват се грам-положителни диплококи без капсули. След бактериоскопия колониите, за които има съмнение за пневмококи, се субкултивират върху наклонен серум или кръвен агар или в суроватъчен бульон. При микроскопиране на петна от обогатяващата среда, заедно с различна микрофлора, могат да се открият грам-положителни коки, подредени по двойки или къси вериги. Материалът от обогатяващата среда се прехвърля в твърда хранителна среда. Културите се инкубират при 37°С в продължение на 24 часа.

Третият етап от изследването.Върху наклонени части от кръвния агар пневмококите образуват деликатно, тънко, полупрозрачно покритие. В суроватъчния бульон пневмококите причиняват мътност и лека утайка. В цитонамазки от твърда културална среда, пневмококите могат да имат различен външен вид. Наред с диплококите с удължена форма със заострени външни краища, напомнящи пламък на свещ, има клетки с правилна овална и кръгла форма. В бульонната култура пневмококите често са подредени във вериги. Въз основа на морфологичните и културните свойства на пневмококите е трудно да се разграничат от viridans streptococci, поради което е предложен набор от специални тестове за тяхното разграничаване:

Разтворимост в жлъчка (дезоксихолатен тест);

Способност за разграждане на инулин;

Чувствителност към оптохин;

Реакция на аглутинация със специфични антипневмококови серуми;

Способността да разлага глюкоза, малтоза, захароза, лактоза, манитол, сорбитол и салицин.

Най-достъпните методи за разграничаване на пневмококите от другите стрептококи са тест с оптохин (потиска растежа им); Те се отличават от вириданс стрептококите по способността си да ферментират инулин, както и по чувствителността към жлъчката.

Дезоксихолатен тест. След предварителна бактериоскопия 10 капки изолирана чиста култура (за предпочитане бульон) се добавят в епруветка с 5 капки стерилна говежда жлъчка. Контролата е култура, добавена в епруветка с 5 капки физиологичен разтвор. След 30-60 минути инкубация при 37 ° C се наблюдава пълен лизис на културата под формата на избистряне в епруветката с жлъчка; в контролната епруветка сместа остава мътна. Трябва да се помни, че авирулентните пневмококови култури са устойчиви на жлъчката.

Устойчивостта на жлъчката може също да бъде тествана чрез култура в 10% жлъчен бульон. Тестовият материал се добавя към средата и бульонът става мътен. След 24 часа инкубация при 37 °C, наличието на пневмококи ще бъде показано чрез избистряне на бульона в резултат на лизиране на бактерии.

Можете да използвате и дискове, напоени с 20% жлъчен разтвор. Дисковете се поставят върху порасналата култура в съд и се инкубират за 1-2 часа при 37 °C. При наличие на пневмококи колониите се лизират около диска на разстояние 1-2 мм.

Тест за инулин. Пневмококовата култура се посява върху среда с инулин. За да направите това, добавете 200 ml стерилна дестилирана вода, 18 ml лакмусова тинктура и 3 g инулин към 100 ml говежди серум, загрят при 56 °C за 30 минути, и стерилизирайте с течаща пара за 30 минути. Културите се инкубират при 37 °C в продължение на 24 часа. Pneumococcus разлага инулина, което води до оцветяване на средата в червено. Viridans streptococcus не причинява зачервяване на околната среда.

Тест с оптохин. Тестваната пневмококова култура се инокулира върху суроватъчен бульон с оптохин в разреждане 1:100 000 или 1:200 000. Пневмококите не се развиват на такава среда. Можете също да определите чувствителността към оптохин чрез посяване върху 10% кръвен агар, съдържащ оптохин в разреждане 1:50 000. Контролът е засяване на културата върху кръвен агар. Пневмококите не растат върху среда с оптохин, растеж на пневмококи се наблюдава върху контролната среда. Можете да използвате дискове, напоени с 6 μg оптохин, които се нанасят върху повърхността на средата след инокулацията. При пневмококите около диска се образува зона на инхибиране на растежа с диаметър най-малко 18 mm.

Тест за вирулентност. Ежедневна култура от пневмококи, отглеждани в суроватъчен бульон, се разрежда с 1% стерилна пептонна вода (pH - 7,6) или леко алкален бульон до 1:10. Разредената култура се прилага интраперитонеално на бели мишки с тегло 16-20 g в обем от 0,5 ml и се наблюдава в продължение на 72 часа. Органите на мъртва мишка се инокулират върху хранителни среди и петната от пръстови отпечатъци се изследват под микроскоп. Силно вирулентните култури включват пневмококи, които причиняват смъртта на мишки след въвеждане на култура в разреждане 1:10. Авирулентните култури не причиняват смърт при мишки.

Серотипиране на пневмококи. 18-часовата култура се тества в реакцията на микроаглутинация на Sabin. 4 капки пневмококова култура се нанасят върху предметно стъкло. Към 1 капка добавете капка антипневмококов серум тип 1, към 2-ра - серум тип II, към 3-та - серум - 111, към 4-та - капка нормален серум. Смесите върху стъкло се смесват с бримка и се изследват под лупа или микроскоп при малко увеличение. При положителен случай се наблюдава аглутинация в една от първите три капки. Видът на пневмокока се определя чрез реакция на аглутинация със специфични аглутиниращи серуми от първите три фиксирани типа. Култури, които не са аглутинирани от тези видове серуми, се класифицират като Х-група. Реакцията се организира по следния начин. Изсипете 0,5 ml 18-часова бульонна култура в епруветки. След това се добавя равен обем серум, разреден с физиологичен разтвор в съотношение 1:5. Контролите са 2 епруветки, едната от които съдържа тестовата култура, смесена с

нормален заешки серум, а другият - само тестовата култура. Съдържанието на епруветките се разклаща добре и се поставя в термостат при 37 °C за 2 часа, след което се извършва предварително изчисляване на реакцията. Крайните резултати се отбелязват след допълнително съхранение при стайна температура за 20 часа. Аглутинацията се оценява като четири плюса, ако съдържанието на епруветките е напълно изчистено и аглутинационната култура е плътен филм, който не се разпада при разклащане; три плюса, ако, когато съдържанието на епруветката е напълно изчистено, аглутиниращата култура лесно се разпада на части; два плюса - ако не настъпи изчистване, частиците от аглутинираната култура са ясно видими с просто око в мътното съдържание на епруветката; с аглутинация за един плюс в епруветката се открива финозърнеста смес от слепени пневмококи. При видима на око отрицателна реакция не се наблюдава аглутинация;

Съдържанието на епруветките след разклащане е равномерно мътно.

Типизирането на пневмококи от X-група се извършва с помощта на група

серуми, съдържащи смес от взети типични аглутиниращи серуми

в равни обеми. Пригответе следните групови серуми чрез

смесване на равни обеми неразредена стандартна диагностика

серуми (Lund, I960):

A -1, II, IV, V, XVIII серовари;

B - VI, VIII, XIX серовари;

C - VII, XX. XXIV, XXXI, XL серовари;

D - IX, XI, XVI, XXXVI. XXXVII серовари;

E - X, XXI. XXXIII, XXXIX серовари;

F - XII. XVII. XXII, XXXVII, XXXII, XLI серовари;

G - XIII, XXV. XXIX, XXXIV, XXXV, XXXVIII, XLII, XLVII серовари;

J - XLIII. XLIV, XLV, XLVI серовари.

Използва се аглутиниращ серум тип III (без смесване с други стандартни серуми) поради трудността да се получи достатъчно висок титър. Типизирането се извършва на два етапа: първо с помощта на групови серуми, а след това с индивидуални серуми на групата, с която е получена положителна реакция. Серотипирането на пневмококи се използва предимно за епидемиологични изследвания на резултатите от специфична серотерапия и серопрофилактика.

Микроаглутинация на пневмококи по метода на Sabin може да се получи чрез смесване на антипневмококови серуми с ексудат от коремната кухина на мишка, замърсена с храчка на пациент. Вече четири часа след инфекцията в ексудата се открива чиста култура от пневмококи, което дава положителна аглутинация на Sabin.

Ускорени методи за откриване и типизиране на пневмококи. 1. Методът на Neufeld или феноменът на подуване на пневмококовата капсула. На трима се прилага една бучка прясно отделена храчка на болния

покривни стъкла, към всяко от тях добавете капка неразреден специфичен антипневмококов серум (типове 1, II, III) и капка синьо на Loeffler. Капките се смесват старателно и се покриват с предметно стъкло с кладенче, намазано по краищата с вазелин. След две минути висящите капки се изследват под микроскоп с имерсионна система. При положителен случай се наблюдава рязко увеличение на пневмококовите капсули. Ако резултатът е отрицателен, капсулите почти не се ценят. Реакцията на подуване е специфична и не дава положителен резултат при други капсулни бактерии. Не го използвам за изследване на храчки от пациенти, лекувани със сулфонамиди и антибиотици, т.к в този случай могат да се изолират некапсулни пневмококи.

2. Метод на утаяване. 5-10 ml храчки се варят на водна баня до получаване на плътен съсирек. Съсирекът се смила и се добавя малко количество физиологичен разтвор и се вари отново няколко минути, за да се извлече специфичният полизахарид от пневмококите. Суспензията се центрофугира и се провежда реакция на пръстеновидно утаяване с получената бистра течност и специфични стандартни серуми в епруветки за утаяване. Появата на пръстен на границата между течностите показва положителен резултат.

3. Определяне на пневмококови капсули по Burri. Капка от тестовия материал и капка мастило се нанасят в края на слайда. Сместа се разбърква и се прави натривка, изсушава се на въздух и без фиксиране се изследва под микроскоп. Фонът на препарата е тъмно опушен, микробните тела и техните капсули не се оцветяват. Препаратът, приготвен по Burri, може да се фиксира със сместа на Никифоров, изплаква се с вода и се оцветява с Ziel fuchsin, разреден 1:3, за 3-5 минути. На тъмния фон на намазката се открояват неоцветени капсули, вътре в които има бактерии с яркочервен цвят (метод на Hins).

скарлатинапричиняват различни серотипове на бета-хемолитични стрептококи, които имат М-антиген и произвеждат еритрогенин (токсигенни стрептококи от серогрупа А) - (Streptococcus pyogenes). При липса на антитоксичен имунитет се появява скарлатина, а при наличие на болки в гърлото.

Клинична картина

 Интоксикация - треска, общо неразположение, главоболие.

 Скарлатинният обрив е точков, при умерен натиск със стъклена шпатула петната се виждат по-ясно. При по-силен натиск обривът придобива златисто-жълтеникав оттенък на кожата. Появява се на 1-3 ден от заболяването и се локализира главно по бузите, слабините и страните на тялото. Кожата на назолабиалния триъгълник остава бледа и без обрив. Обривът обикновено продължава 3-7 дни, след което избледнява, без да оставя пигментация. Обривът се сгъстява по завоите на крайниците - аксиларни, лакътни, подколенни области.

 Ален език - на 2-4-ия ден от заболяването езикът на пациента става отчетливо зърнест, яркочервен на цвят, така нареченият "малинов" език.

 Възпаленото гърло е постоянен симптом на скарлатина. Може да е по-тежко от обикновеното възпалено гърло.

 Лющене на кожата – настъпва след изчезване на обрива (14 дни от началото на заболяването): в областта на дланите и стъпалата е едроплоско, започващо от върховете на пръстите; По тялото, шията и ушите има пилинг, подобен на питириаза.

Пневмококи, таксономия. Имоти. Серологични групи. Отличителни черти от други стрептококи. Причинени заболявания. Принципи и методи на лабораторната диагностика.

Морфология и биологични свойства. Пневмококите (Streptococcus pneumoniae) са овални, леко удължени, ланцетовидни коки, разположени по двойки, наподобяващи пламък на свещ. Те могат да бъдат разположени и в къси вериги, наподобяващи стрептококи. Подвижни, не образуват спори, грам-положителни.
Те се отглеждат върху среда с добавен протеин: кръв, серум и асцитна течност. Върху кръвен агар колониите от пневмококи са малки, наподобяващи капки роса, прозрачни на пропускаща светлина, с депресиран център, заобиколен от зона на непълна хемолиза, зеленикав цвят, подобен на колонии от вириданс стрептокок. В течна среда те произвеждат леко помътняване, понякога образувайки утайка. Биохимично те са доста активни: разграждат глюкоза, лактоза, малтоза, инулин и други въглехидрати, за да образуват киселина, не втечняват желатина и не образуват индол. Разграждането на инулина е диференциална диагностична характеристика, която помага да се разграничат пневмококите от стрептококите, които не разграждат инулина. Важна отличителна черта е способността на пневмококите да се разтварят в жлъчката, докато стрептококите са добре запазени в нея.

Патогенеза и клиника. Пневмококите са причинители на лобарна пневмония при хората. Те могат също да причинят пълзящи язви на роговицата, катар на горните дихателни пътища, менингит, ендокардит, увреждане на ставите и други заболявания.

След преболедуване имунитетът е слабо напрегнат, краткотраен и типоспецифичен.
Микробиологична диагностика. Материалите за изследването са храчка, кръв, тампон от гърлото и цереброспинална течност. Поради факта, че пневмококът умира бързо, патологичният материал трябва да бъде доставен в лабораторията за изследване възможно най-скоро.

Менингококи. Таксономия, свойства. Антигенна структура на менингококи, класификация. Патогенеза на менингококова инфекция, клинични прояви. Принципи и методи на микробиологична диагностика. Разграничаване на причинителя на менингококова инфекция и други менингококи. Специфична профилактика.

N.meningitidis (менингококи).

Менингококът е причинителят на менингококова инфекция - строга антропоноза с въздушно-капково предаване на патогена. Основният източник са медиите. Естественият резервоар е човешкият назофаринкс. Морфологичните, културните и биохимичните свойства са подобни на гонококите. Разлики - те ферментират не само глюкоза, но и малтоза, и произвеждат хемолизин.Те имат капсула, която е по-голяма по размер и има различна структура от тази на гонокока.

Антигенен състав.Те имат четири основни антигенни системи.

1. Специфични за капсулна група полизахаридни антигени. Щамовете от серогрупа А най-често причиняват епидемични взривове.

2. Протеинови антигени на външната мембрана. Въз основа на тези антигени менингококите от серогрупи B и C се разделят на класове и серотипове.

3. Родо-видоспецифични антигени.

4. Липополизахаридни антигени (8 вида). Те имат висока токсичност и предизвикват пирогенни ефекти.

Фактори на патогенност.Адхезионни фактори и колонизация - пили и протеини на външната мембрана. Фактори на инвазивност са хиалуронидаза и други произведени ензими (невраминидаза, протеази, фибринолизин). От голямо значение са капсулните полизахаридни антигени, които предпазват микроорганизмите от фагоцитоза.

Имунитетиздръжлив, антимикробен.

Лабораторна диагностикавъз основа на бактериоскопия, изолиране на култура и нейната биохимична идентификация, серологични диагностични методи. Материалът се инокулира върху твърди и полутечни хранителни среди, съдържащи кръв, асцитна течност и кръвен серум.

Оксидаза-позитивните култури се считат за принадлежащи към рода Neisseria. Менингококът се характеризира с ферментация на глюкоза и малтоза. Принадлежността към серогрупа се определя чрез тест за аглутинация (RA).

Гонококи. Таксономия, свойства. Патогенеза на гонококова инфекция, характеристики на имунитета. Принципи и методи за лабораторна диагностика на остра и хронична гонорея, бленорея. RSK Bordet-Gengou, цел, механизъм, отчитане на реакцията. Профилактика на бленорея при новородени. Профилактика и лечение на гонорея. Специфична терапия.

N.gonorrheae (гонококи).

Gonococcus е причинителят на гонореята, полово предавана болест с възпалителни прояви в пикочно-половата система. Субстратът за колонизация е епителът на уретрата, ректума, конюнктивата на окото, фаринкса, шийката на матката, фалопиевите тръби и яйчника.

Диплококите, лесно оцветени с метиленово синьо и други анилинови багрила, са плеоморфни (полиморфизъм). Те са много придирчиви към условията на отглеждане и хранителните среди. От въглехидратите ферментира само глюкозата.

Антигенна структурамного променлив - характеризира се с фазови вариации (изчезване на антигенни детерминанти) и антигенни вариации (промени в антигенните детерминанти).

Фактори на патогенност.Основните фактори са пиеше, с помощта на които гонококите извършват адхезия и колонизация на епителните клетки на лигавицата на пикочно-половия тракт и липополизахарид(ендотоксин, освободен при унищожаването на гонококите). Гонококите синтезират IgAI протеаза, която разгражда IgA.

Лабораторна диагностика.Бактериоскопската диагностика включва оцветяване по Грам и метиленово синьо. Типични признаци на гонококи са грам-отрицателно оцветяване, бобовидни диплококи, вътреклетъчна локализация.

Инокулацията се извършва върху специална среда (KDS-MPA от заешко месо или говеждо сърце със серум, асцит-агар, кръвен агар).

Причинители на газова анаеробна инфекция. Таксономия. Имоти. Характеристики на токсините. Патогенеза, клинични форми. Принципи и методи на лабораторна диагностика, лекарства за специфична профилактика и лечение.

Газовата гангрена е анаеробна поликлостридиална (т.е. причинена от различни видове клостридии) ранева (травматична) инфекция. Основното значение е C.perfringens, по-рядко - C.novyi, както и други видове клостридии в устойчиви асоциации помежду си, аеробни пиогенни коки и гнилостни анаеробни бактерии.

C.perfringens е нормален обитател на червата на хора и животни, попада в почвата с изпражненията. Той е причинител на инфекция на рани - причинява заболяване, когато патогенът навлезе в рани при анаеробни условия. Той е силно инвазивен и токсикогенен. Инвазивността е свързана с производството на хиалуронидаза и други ензими, които имат разрушителен ефект върху мускулната и съединителната тъкан. Основен фактор на патогенност - екзотоксин, който има хемо-, некро-, невро-, левкотоксични и летални ефекти. В съответствие с антигенната специфичност на екзотоксините те се изолират серотиповепатоген. Заедно с газовата гангрена, C. perfringens причинява хранителни токсични инфекции (те се основават на действието на ентеротоксини и некротоксини).

Характеристики на патогенезата.За разлика от гнойните заболявания, причинени от аероби, при анаеробната инфекция не преобладава възпалението, а некроза, оток, образуване на газове в тъканите, отравяне с токсини и продукти от тъканния разпад.

Имунитет- предимно антитоксични.

Лабораторна диагностикавключва бактериоскопия на секрет от рана, изолиране и идентифициране на патогена, откриване и идентифициране на токсина в биологични проби чрез неутрализационна реакция със специфични антитоксични антитела.

Профилактика и лечение.Основата за предотвратяване на газовата гангрена е навременното и правилно хирургично лечение на рани. При тежки рани се прилагат антитоксични серуми срещу основните видове клостридии по 10 хил. IU, за медицински цели - 50 хил. IU.

Clostridia тетанус. Таксономия. Свойства, характеристики на токсините. Патогенеза на заболяването. Десцендентен тетанус. Клиника. Принципи и методи на лабораторната диагностика. Целта на бактериологичните изследвания, лекарства за специфична профилактика и лечение.

Тетанусът е остра инфекция на раната, характеризираща се с лезии невротоксиндвигателни клетки на гръбначния и главния мозък, което се проявява под формата на конвулсии на набраздените мускули. Заболяват хора и селскостопански животни. Почвата, особено замърсената с човешки и животински екскременти, е постоянен източник на инфекция с тетанус.

Причинителят е C.tetani - едра спорообразуваща грам-положителна пръчка. Спорите са разположени крайно (тип тъпанче) и са подвижни благодарение на камшичетата - перитрихи. Задължителен анаероб. Спорите са много устойчиви.

Антигенни свойства.Патогенът има О- и Н-антигени.

Фактори на патогенност.Основният фактор е най-силният екзотоксин. Има две основни фракции от него: тетаноспазмин (невротоксин) и тетанолизин (хемолизин). Невротоксинът навлиза в централната нервна система в областите на мионевралните синапси, предава се от неврон на неврон в областта на синапсите, натрупва се в двигателните области на гръбначния мозък и мозъка и блокира синаптичното предаване. Смъртта настъпва от парализа на дихателния център, асфиксия (увреждане на мускулите на ларинкса, диафрагмата, междуребрените мускули) или парализа на сърцето.

Лабораторна диагностика.Микробиологичната диагностика включва бактериоскопия на изходните материали, култура за изолиране на патогена и неговата идентификация и откриване на тетаничен токсин.

Изолирането на патогена се извършва съгласно стандартната схема за анаероби, като се използват различни твърди и течни (среда на Kitt-Tarozzi) среди, идентификация въз основа на морфологични, културни, биохимични и токсигенни свойства.

Най-простият и ефективен метод за микробиологична диагностика е биотест върху бели мишки. Едната група се заразява с тестовия материал, втората (контролната) - след смесване на пробите с антитоксичен тетаничен серум. При наличието на тетаничен токсин експерименталната група мишки умира, докато контролната група остава жива.

Лечение и спешна профилактика.Използват се донорски тетаничен имуноглобулин (антитоксин), антитоксичен серум (350 IU/kg), антибиотици (пеницилини, цефалоспорини). За създаване на ваксинален имунитет се използва тетаничен токсоид, най-често като част от DTP ваксини (тетаничен токсоид, дифтериен токсоид и убити бацили на коклюш).

Clostridium ботулизъм. Таксономия. Имоти. Характеристики на токсините, разлика от екзотоксини на патогени на други хранителни инфекции. Принципи и методи на лабораторната диагностика. Лекарства за специфична профилактика и лечение.

Ботулизмът е тежко хранително отравяне, свързано с консумацията на продукти, заразени с C.botulinum и характеризиращо се със специфично увреждане на централната нервна система. Името си е получило от лат. botulus - наденица.

Свойства на патогена.Големи полиморфни грам-положителни пръчици, подвижни, имат перитрихални флагели. Спорите са овални и разположени субтерминално (тенис ракета). Те произвеждат осем вида токсини, различни по антигенна специфичност, и съответно се разграничават 8 вида патогени. Сред най-важните характеристики е наличието или отсъствието на протеолитични свойства (хидролиза на казеин, производство на сероводород).

Токсинът има невротоксичен ефект. Токсинът влиза в тялото с храната, въпреки че вероятно може да се натрупа, когато патогенът се размножава в тъканите на тялото. Токсинът е термично лабилен, въпреки че е необходимо кипене до 20 минути за пълно инактивиране. Токсинът бързо се абсорбира в стомашно-чревния тракт, прониква в кръвта, селективно действа върху ядрата на продълговатия мозък и ганглиозните клетки на гръбначния мозък. Развиват се нервно-паралитични явления - нарушения на преглъщането, афония, дисфагия, офталмо-плегичен синдром (страбизъм, двойно виждане, увиснали клепачи), парализа и пареза на фарингеалните и ларингеалните мускули, спиране на дишането и сърдечната дейност.

Лабораторна диагностика.Принципите са общи за клостридиите.

Лечение и профилактика.Основава се на ранното използване на антитоксични серуми (поливалентни или, когато видът е установен, хомоложни). Профилактиката се основава на санитарно-хигиенен режим при обработка на хранителни продукти. Особено опасни са домашно приготвените консервирани гъби и други продукти, съхранявани при анаеробни условия.

11. Pseudomonas aeruginosa. Таксономия. Имоти. Причинени заболявания.
Роля при нозокомиални инфекции. Принципи и методи на лабораторната диагностика.

Родът pseudomonas, P. aeruginosa (Pseudomonas aeruginosa) е един от основните причинители на локални и системни гнойно-възпалителни процеси в лечебните заведения.

Патогенът е разпространен навсякъде (вода, почва, растения, животни) и се среща нормално при човека (най-често в червата, по кожата и лигавиците). Морфология- грам-отрицателна права или леко извита пръчка, подвижна, разположена поединично, по двойки или в къси вериги в петна. Синтезира слуз (капсулно вещество), особено по-вирулентните мукоидни щамове.

Културни ценности.Той е аероб и има набор от ензими, съответстващи на вида на дишането (цитохроми, цитохромоксидаза, дехидрази. В течна среда образува сивкаво-сребрист филм. В твърда среда често се наблюдава феноменът на дъговия лизис. До края на деня поради синтеза на пигмент пиоцианинВ културата се появява синьо-зелен цвят.

Биохимични свойства. Pseudomonas aeruginosa се характеризира с ниска захаролитична активност (окислява само глюкоза), висока протеолитична активност и образуване на зона на бета-хемолиза върху кръвния агар. Синтезира триметиламин, който придава на културите приятен аромат на жасмин. Произвежда производството на бактериоцини - пиоцини.

Антигенни и патогенни свойства.Основните антигени на Pseudomonas aeruginosa са групово-специфичен соматичен О-антиген и тип-специфичен флагеларен Н-антиген. О-антигенен комплекс - агрегат от LPS с протеини и липиди на клетъчната стена, има ендотоксинови свойства и е един от основните фактори за патогенност. Pseudomonas aeruginosa има голям набор от фактори на патогенност - ендотоксин (LPS, подобно на други грам-отрицателни бактерии), редица екзотоксини - цитотоксин, екзоензим S, хемолизини, екзотоксин А (най-важният, напомнящ на дифтериен екзотоксин), ензими ( колагеназа, невраминидаза, протеази).

Лабораторна диагностика. P.aeruginisa получи името си заради синкаво-зеленото оцветяване на секрета от раната и превързочния материал. Основният диагностичен метод е бактериологичен. Откриването на пиоцианиновия пигмент е важно. Лечение и специфична профилактика.Няма специфична профилактика. При хранителни токсични инфекции и чревна дисбиоза, причинена от Pseudomonas aeruginosa, е ефективен сложен интести-бактериофаг, който включва псевдомонас фаг. Сред антибактериалните лекарства най-често се използват аминогликозиди, цефалоспорини и хинолони.

Условнопатогенни грам-отрицателни бактерии - причинители на гнойно-възпалителни процеси (Proteus, Klebsiella, чудотворен бацил и др.), Таксономия. Обща характеристика на ентеробактериите. Принципи и методи на лабораторната диагностика.

Род Klebsiella.

Род Klebsiella принадлежи към семейство Enterobacteriaceae. Особеност на представителите на рода е способността да образуват капсула. Основният вид е K. pneumoniae. Те причиняват опортюнистични лезии - придобита в болница пневмония, инфекции на пикочните пътища, диария при новородени. Klebsiella причинява мастит, септицемия и пневмония при животните и се намира постоянно върху кожата и лигавиците на хора и животни. Klebsiella са прави, неподвижни пръчки с различни размери. Факултативни анаероби. Оксидаза - отрицателна, каталаза - положителна.

Фактори на патогенност.Те включват полизахаридна капсула (К-антиген), ендотоксин, фимбрии, сидерофорна система (свързва железни йони и намалява съдържанието им в тъканите), термолабилни и термостабилни екзотоксини.

Клинични проявления. K.pneumoniae (subsp. pneumoniae) се характеризира с болничен бронхит и бронхопневмония, лобарна пневмония, инфекции на пикочните пътища, лезии на менингите, ставите, гръбначния стълб, очите, както и бактериемия и септикопиемия. Подвидът ozaenae причинява специална форма на хроничен атрофичен ринит - озен.

Лабораторна диагностика.Основният метод е бактериологичен. Лечение.Една от характеристиките на Klebsiella е тяхната мултилекарствена резистентност и развитието на лезии на фона на намаляване на резистентността на организма. Антибиотиците се използват за генерализирани и бавни хронични форми на клебсиела, обикновено в комбинация с лекарства, които стимулират имунната система.

Род Proteus.

Родът Proteus принадлежи към семейство Enterobacteriaceae. Родът е кръстен на сина на Посейдон Протей, който успя да промени външния си вид. Представителите на рода са способни да променят външните прояви на растеж върху твърди хранителни среди, а също така се отличават с най-голям плеоморфизъм (променливост на морфологията) в сравнение с други ентеробактерии.

Протеите разграждат тирозина, намаляват нитратите, оксидазата е отрицателна, каталазата е положителна. Те живеят в червата на много видове гръбначни и безгръбначни животни, почвата, отпадъчните води и разлагащата се органична материя. Може да причини инфекции на пикочните пътища при хора, както и септични лезии при пациенти с изгаряния и след операция. Доста често те причиняват и хранително отравяне. Най-често в патологията играят роля P.vulgaris и P.mirabilis.

Културни ценности.Протеите растат върху прости среди в широк температурен диапазон. Оптималното pH е 7,2-7,4, температурата е от +35 до 37 градуса по Целзий. Колониите от протеи в O-формата са кръгли, полудигитални и изпъкнали, докато H-формите дават непрекъснат растеж. Растежът на протеите е придружен от гниеща миризма. Характерен е феноменът на роене, Н-формите дават характерен пълзящ растеж върху МРА под формата на синкаво-опушен деликатен воал. При засяване по метода на Шушкевич в кондензационната влага на прясно нарязан МРА културата постепенно се издига под формата на воал нагоре по повърхността на агара. На MPB се отбелязва дифузна мътност на средата с гъста бяла утайка на дъното.

Фактори на патогенност.Те включват LPS на клетъчната стена, способността за „роене“, фимбрии, протеази и уреаза, хемолизини и хемаглутинини.

Лабораторна диагностика.Основният метод е бактериологичен. Използват се диференциално диагностични среди (Плоскирев), обогатителни среди и MPA по метода на Шушкевич. Лечение. За чревна дисбактериоза, свързана с Proteas (колит), можете да използвате Proteus phage и лекарства, които го съдържат (intestiphage, coliproteus bacteriophage).

"Чудесна пръчка" (Serratia marcescens), вид бактерии от пигментните микроорганизми. Грам-отрицателни подвижни (перитрихни) неспорови пръчици. По тип метаболизъм - факултативен анаероб. На повърхността на агара образува гладки или зърнести тъмно и яркочервени колонии с метален блясък. Живее в почвата, водата и храната. Развивайки се върху хляба (при висока влажност) и в млякото, ги оцветява в червено; такива продукти не са разрешени за продажба. Условно патогенен за животни и хора; може да причини нагнояване.

13. Ешерихия. Таксономия. Заболявания, причинени от ешерихия коли. Патогенни варианти на диарогенна ешерихия. Антигенна структура, класификация. Характеристики на микробиологичната диагностика. Разграничаване на диарогенните ешерихии от опортюнистични.

Escherichia е най-разпространената аеробна чревна бактерия, която при определени условия може да причини широка група човешки заболявания, както с чревна (диария), така и с екстраинтестинална (бактериемия, инфекции на пикочните пътища и др.) локализация. Основният вид е E. coli (Escherichia coli) - най-честият причинител на инфекциозни заболявания, причинени от ентеробактерии. Този патоген е индикатор за фекално замърсяване, особено във водата.

Културни ценности.В течна среда Е. coli произвежда дифузна мътност, а в твърда среда образува S- и R-форма колонии. Върху Ендо, основната среда за Escherichia, ферментиращите лактоза Е. coli образуват интензивно червени колонии с метален блясък, неферментиращите образуват бледорозови или безцветни колонии с по-тъмен център, върху средата на Плоскирев те са червени с жълтеникав оттенък; на медията на Левин са тъмносини с метален блясък.

Биохимични свойства.В повечето случаи E. coli ферментира въглехидрати (глюкоза, лактоза, манитол, арабиноза, галактоза и др.) С образуването на киселина и газ, произвежда индол, но не образува сероводород и не втечнява желатина.

Основните фактори на патогенност на диарогенната E.coli.

1. Фактори на адхезия, колонизация и инвазия, свързани с пили, фимбриални структури и протеини на външната мембрана. Те са кодирани от плазмидни гени и подпомагат колонизацията на долната част на тънките черва.

2. Екзотоксини: цитотонини (стимулират хиперсекрецията на течност от чревните клетки, нарушават водно-солевия метаболизъм и насърчават развитието на диария) и ентероцитотоксини (действат върху клетките на чревната стена и капилярния ендотел).

3. Ендотоксин (липополизахарид).

В зависимост от наличието на различни фактори на патогенност, диарогенните E. coli се разделят на пет основни вида: ентеротоксигенни, ентероинвазивни, ентеропатогенни, ентерохеморагични, ентероадхезивни.

4. Патогенните E. coli се характеризират с производството на бактериоцини (колицини).

Ентеротоксигенна E.coliимат високомолекулен термично лабилен токсин, подобен по действие на холерата, причиняващ холероподобна диария (гастроентерит при малки деца, диария на пътниците и др.).

Ентероинвазивна ешерихия колиспособни да проникват и да се размножават в чревните епителни клетки. Те предизвикват обилна диария с примес на кръв и голям брой левкоцити (показател за инвазивен процес) в изпражненията. Клинично прилича на дизентерия. Щамовете имат някои прилики с Shigella (неподвижни, не ферментират лактоза и имат високи ентероинвазивни свойства).

Ентеропатогенна E.coli- основните причинители на диария при деца. Лезиите се основават на адхезията на бактериите към чревния епител с увреждане на микровилите. Характеризира се с водниста диария и тежка дехидратация.

Ентерохеморагична ешерихия колипричиняват диария, примесена с кръв (хеморагичен колит), хемолитично-уремичен синдром (хемолитична анемия в комбинация с бъбречна недостатъчност). Най-често срещаният серотип на ентерохеморагична Escherichia coli е O157:H7.

Ентероадхезив Е. coliне образуват цитотоксини, слабо проучени.

Лабораторна диагностика.Основният подход е изолирането на чиста култура върху диференциална диагностична среда и нейното идентифициране чрез антигенни свойства. РА се диагностицира с набор от поливалентни ОК (към О- и К-антигени) серуми.

Сред патогенните стрептококи специално място заема S.pneumoniae (pneumococcus). Той играе много важна роля в човешката инфекциозна патология. Този вид е един от основните причинители на лобарна пневмония. Според далеч непълни данни всяка година в света има повече от 500 хиляди пневмонии, причинени от пневмококи, особено често при деца и възрастни хора. В допълнение към пневмонията, този микроб причинява менингит, ендокардит, перитонит, отит, ринит, синузит, сепсис, пълзящи язви на роговицата и редица други заболявания. За извършване на лабораторна диагностика се използват бактериоскопски, бактериологични и биологични методи. Материалът за изследване е храчка, гной, кръв, цереброспинална течност, слуз от устата и назофаринкса, секрет от максиларния синус, очите и ушите. Важно е незабавно да изпратите материала в лабораторията и да го изследвате много бързо, тъй като пневмококите са податливи на автолиза.

Бактериоскопско изследване

Бактериоскопското изследване на материала (с изключение на кръвта) се свежда до направата на две цитонамазки. Едната от тях е оцветена с Грам, втората с Бури-Гинс, което позволява идентифицирането на капсулата. Пневмококите са разположени под формата на ланцетни диплококи, заобиколени от обща капсула. Ако в зрителното поле се открият 10 или повече типични диплококи, е много вероятно да се заключи, че присъства S. pneumoniae. Първичната микроскопия обаче не дава право да се направи окончателна диагноза, тъй като намазките могат да съдържат капсулни непатогенни диплококи - представители на нормалната микрофлора. Следователно е необходимо да се инокулира клиничен материал и да се изолира чиста култура.

Бактериологични изследвания

За сепсис до леглото на пациента, инокулирайте 10 ml кръв във флакон, съдържащ 100 ml суроватка или захарен бульон, инкубирайте 18-20 часа при 37 ° C, след това инокулирайте върху кръвен агар, изолирайте и идентифицирайте чиста култура. При менингит цереброспиналната течност се центрофугира и утайката се инокулира върху кръвен агар. Върху него пневмококите растат под формата на малки кръгли колонии, заобиколени от зелена зона, в центъра на колонията се вижда характерна депресия. Не е препоръчително да се култивира храчка или гной върху хранителни среди, тъй като наличието на сапрофитна микрофлора потиска растежа на S. pneumoniae. По-добре е тестваният материал да се въведе в коремната кухина на бели мишки. Биотестът е бърз, надежден и точен метод за изолиране на чиста култура от пневмококи. Белите мишки са много чувствителни към тези бактерии и в рамките на 10-12 часа след заразяването пневмококите проникват в кръвта и паренхимните органи, причинявайки сепсис. Култивирането на кръв от сърцето или части от вътрешни органи по време на аутопсия на животни позволява да се изолира чиста култура на патогена. За идентифициране на пневмококи се използват техните свойства. За разлика от други видове стрептококи, S.pneumoniae не се развива на среда с оптохин, инулинът е ферментирал и е много чувствителен към действието на жлъчката (дезоксихолатен тест). Бързият лизис на пневмококите от жлъчката може да бъде открит, ако 0,5 ml жлъчка се добавят към 1 ml бульонна култура. След 15-20 минути в термостата настъпва пълно лизиране на бактериалните клетки. За определяне на пневмококови серовари (в момента има 85 от тях) се използва реакцията на стъклена аглутинация със стандартни серуми или феноменът на "подуване на капсулата". В присъствието на хомоложен серум, пневмококовата капсула набъбва силно. Още по-добре е да се извърши серотипиране, като се използват търговски реагенти в реакции на латексна аглутинация или коаглутинация, чрез които се разкриват капсулни антигени. Сред стрептококите е важен и род Enterococcus, най-значимите видове от които са E.faecalis, E.faecium и E.durans. Те са доста широко разпространени в природата. Основната им екологична ниша са червата на човека и животните, но се срещат и като част от нормалната микрофлора на кожата на перинеума, пикочно-половите органи, оро- и назофаринкса. Те могат да причинят нагнояване на рани, бактериемия, увреждане на урогениталната система, особено при пациенти с дълготрайни катетри, хранителни токсични инфекции, дисбактериоза на чревния тракт и по-рядко ендокардит. В петна от тестовия материал ентерококите са разположени по двойки, къси вериги или под формата на клъстери, грам-положителни. Бактериологичната диагностика на ентерококови инфекции се извършва без никакви затруднения, тъй като тези бактерии се развиват добре върху прости среди. Agar dif-3 е селективен за тях (до 600 ml 3% MPA, добавете 400 ml 40% жлъчка). След 24 часа инкубация колониите, които са се разраснали, са с размер 0,4-1,0 mm и са сивкави на цвят. На кръвния агар настъпва непълна или пълна хемолиза около колониите. За разлика от viridans streptococci, ентерококите могат да растат върху MPA с 6,5% NaCl, редуциращи млякото с метиленово синьо при 37 ° C след 4-6 часа. Идентифицирането на изолирани култури се извършва по морфологични, културни и биохимични характеристики.

Страница 40 от 91

Причинителят на лобарната пневмония (пневмония) е пневмокок - Diplococcus pneumoniae, открит за първи път от Пастьор в слюнката на човек, починал от бяс (1881 г.).
Морфология и тинкториални свойства. Пневмококите (фиг. 67 и 68 на вложката) са чифтни коки с удължена ланцетоподобна форма. Поради това те се наричат ​​иначе ланцетни диплококи. Образувайки къси вериги, пневмококите стават подобни на стрептококите и следователно II. Ф. Гамалея ги е нарекъл Streptococcus lanceolatus. Размерът на клетката варира от 0,5X0,75 до 1X1,5 μm. Те нямат спори или флагели. Отличителна черта на пневмокока е образуването на капсула, която може да бъде ясно изразена в патологични материали (храчка, кръв и др.). При култивиране върху хранителни среди капсулата се губи. Пневмококите лесно приемат анилинови багрила и се оцветяват положително по Грам.
Културални и биохимични свойства.

Ориз. 68. Пневмококи в цитонамазка от храчки.

Пневмококите са аероби и факултативни анаероби. Оптималната температура е около 37°. Те растат върху среда, съдържаща животински протеин (кръвен или серумен агар, асцитагар).
След 24 часа на повърхността на агара се образуват малки колонии, напомнящи стрептококови колонии, но по-малки и по-прозрачни.
Върху наклонен агар, с обилна инокулация, се получава много деликатно прозрачно покритие, състоящо се от малки, несливащи се колонии; върху бульона има лека мътност и малка люспеста утайка.
Прясно изолирани щамове не растат върху желатин. Старите лабораторни щамове пневмококи могат да произвеждат малки белезникави колонии още при 18-22°. Желатинът не е втечнен.
Те растат добре в млякото, подсирвайки го, за да образуват киселина.
Върху кръвния агар около колониите се образува зона на непълна хемолиза със зеленикаво-кафяво оцветяване на средата.

Ориз. 67. Пневмококи в чиста култура от бульон.

Пневмококите разграждат захарозата, рафинозата и лактозата. Най-важната характеристика е разграждането на инулина. Повечето стрептококи нямат това свойство. Вирулентните пневмококи са разтворими в жлъчката.
Антигенна структура и серологични видове пневмококи. Цитоплазмата на пневмококите съдържа протеинов антиген, общ за всички пневмококи. Този антиген определя тяхната видова специфичност. Капсулата съдържа специфични полизахаридни антигени (хаптен), които се различават по своя химичен състав при различните пневмококи (тип антигени). Въз основа на тези типични антигени, използвайки реакцията на аглутинация и преципитация, всички пневмококи се разделят на три основни групи (I, II, III) и четвърта група (X-група). Х-групата включва повече от 70 вида.
Съпротива. На изкуствени хранителни среди пневмококите умират бързо (4-7 дни). Под слой от вазелин в течна и полутечна среда, съдържаща протеин, те остават жизнеспособни за 3-12 месеца.
Пневмококите понасят добре изсушаването: те се задържат в сухи храчки при дифузна светлина до 2 месеца. При нагряване до 52-55° умират за 10 минути, при 60° умират още по-бързо. В разтвор на карболова киселина (3%) пневмококите умират в рамките на 1-2 минути.
Пневмококите са особено чувствителни към оптохин. Под въздействието на последния те умират в концентрация 1: 1 000 000.
Образуване на токсини и патогенност за животни. Пневмококовата отрова е ендотоксин. Сред лабораторните животни белите мишки и зайците са по-чувствителни към пневмококи. Парентералното приложение на вирулентни пневмококи след 24-48 часа причинява смърт на животни със симптоми на сепсис. При аутопсия на мястото на инжектиране се установява фибринозен ексудат, слезката е увеличена и хиперемирана.
Патогенеза и заболявания при човека. Входната точка на инфекцията обикновено е лигавицата на фаринкса. Въвеждането на пневмококи в тялото и тяхното проникване в белодробната тъкан очевидно може да се случи както през лимфната и кръвоносната система, така и директно през клоните на бронхите. Най-често срещаното заболяване е лобарна пневмония, която се характеризира с внезапно начало, висока температура, понякога с втрисане, болка в страната при дишане, главоболие, понякога загуба на съзнание, делириум и силна възбуда. Впоследствие се появява кашлица с характерни ръждивочервени храчки. В белите дробове се наблюдава процес, който често включва един, по-рядко два или три лоба.
Източници на инфекцията са болният човек и бактерионосителят. Заразяването отвън става както по аерогенен път - чрез капчици от носителя, така и чрез прахова инфекция. Пневмококите могат да се задържат в изсушена храчка за дълго време (около 2 месеца) и да навлязат във въздуха с прах.
При изследване на здрави хора често се откриват патогенни пневмококи в назофаринкса, така че не може да се изключи възможността за автоинфекция и фактори, които отслабват съпротивителните сили на организма, като хипотермия, играят важна роля.
В допълнение към лобарната пневмония, пневмококите причиняват възпаление на средното ухо, мозъчните обвивки (менингит), както и на лигавицата на носа и въздушните синуси, тонзилит, пълзящи язви на роговицата и възпаление на слъзния сак.
Имунитет. Пневмонията не осигурява имунитет. Заболяването може да се повтори няколко пъти. Това се обяснява с наличието на много видове пневмококи и факта, че прекарана пневмония повишава чувствителността на организма към пневмококите.
Серумът на преболедувалите съдържа антитела (аглутинини и др.).
По време на кризата с пневмония концентрацията на антитела в кръвта достига значителен титър и рязко се увеличава фагоцитозата (I. Ya. Chistovich). Въз основа на тези данни имунитетът при пневмония трябва да се разглежда предимно като фагоцитен, в който основна роля играят антителата (бактериотропини).
Микробиологична диагностика. Материалите за изследване при пневмококови заболявания са храчки, кръв и гной, взети от различни лезии, по-рядко цереброспинална течност.
Патологичният материал (с изключение на кръвта) се изследва бактериоскопски, бактериологично и чрез заразяване на бели мишки. Последният метод трябва да се използва, тъй като изходният материал, особено храчката, обикновено съдържа изобилна чужда микрофлора, която при директно инокулиране на материала върху хранителни среди затруднява изолирането на пневмококи.
Натривки от храчка, гной и др. се оцветяват по Грам. Под микроскоп се откриват ланцетни диплококи, заобиколени от капсула, оцветени положително по Грам.
За да изолирате култури, инокулирайте ги върху кръвен агар или асциг агар. След 24-48 часа растеж при 37°С, при наличие на пневмокок, се появяват характерни колонии. Колониите се засяват върху наклонени суроватъчен или асцитен агар и изолираната култура се тества за разтворимост в жлъчката и способността да разгражда инулин.
Заразяването на бяла мишка е най-надеждният начин за изолиране на пневмококова култура. Материал от пациент или труп (храчка, гной, парче орган и др.) се поставя в стерилна чаша, след което се стрива в стерилен хаван, с 1-2 ml стерилен бульон и 0,5 ml от тази суспензия се инжектира интраперитонеално. в бяла мишка. След смъртта на мишката, която настъпва в рамките на 12-48 часа, се вземат кръвни култури от сърцето, като в почти всички случаи се получава чиста култура на пневмококи.
Ако се подозира сепсис, 10-20 ml кръв се инокулират в асцитен или серумен бульон. След обогатяване бульонът се инокулира върху кръвен агар и изолираната чиста култура се идентифицира по морфологични и биохимични характеристики.
Специфична терапия и химиотерапия. Понастоящем сулфонамидни лекарства и антибиотици (пеницилин, биомицин, тетрациклин и др.) се използват с голям успех за лечение на лобарна пневмония.

Родът Streptococcus включва: Streptococcus pyogenes (хемолитичен) и Streptococcus pneumoniae (пневмокок). Стрептококите са открити за първи път от Billroth (1874) и L. Pasteur (1879). Те са изследвани от E. Rosenbach (1884).

Streptococcus pyogenes (хемолитичен)

Морфология. Стрептококите са коки, които имат сферична форма. Диаметърът на всеки кок е средно 0,6-1 микрона, но се характеризират с полиморфизъм: има малки и големи коки, строго сферични и овални. Стрептококите са подредени във верига, което е резултат от разделянето им в една и съща равнина. Дължината на веригите е различна. На твърда хранителна среда веригите обикновено са къси, на течна среда са дълги. Стрептококите са неподвижни и нямат спори (виж фиг. 4) Прясно изолираните култури понякога образуват капсула. В ултратънки срезове се вижда микрокапсула, под която има трислойна клетъчна стена и трислойна цитоплазмена мембрана. Грам положителен.

Култивиране. Стрептококите са факултативни анаероби. Виреят при температура 37° C и рН 7,6-7,8. Оптималната среда за растежа им е среда, съдържаща кръв или кръвен серум. Върху твърди хранителни среди колониите от стрептококи са малки, плоски, мътни и сивкави на цвят. Някои видове стрептококи образуват хемолиза върху кръвен агар. β-хемолитичните стрептококи образуват ясна зона на хемолиза, α-хемолитичните стрептококи образуват малка зеленикава зона (резултат от прехода на хемоглобина към метхемоглобин). Има стрептококи, които не предизвикват хемолиза.

В захарния бульон стрептококите растат с образуването на финозърнеста утайка около стената и дъното, докато бульонът остава прозрачен.

Ензимни свойства. Стрептококите имат захаролитични свойства. Те разграждат глюкоза, лактоза, захароза, манитол (не винаги) и малтоза, за да образуват киселина. Протеолитичните им свойства са слабо изразени. Подсирват млякото, но не втечняват желатина.

Образуване на токсини. Стрептококите произвеждат редица екзотоксини: 1) стрептолизини - разрушават червените кръвни клетки (О-стрептолизин има кардиотоксичен ефект); 2) левкоцидин - унищожава левкоцитите (образувани от силно вирулентни щамове); 3) еритрогенен (скарлатинен) токсин - определя клиничната картина на скарлатината - интоксикация, съдови реакции, обрив и др. Синтезът на еритрогенен токсин се определя от профага; 4) цитотоксини – имат способността да предизвикват гломерулонефрит.

В стрептококите са открити различни антигени. Цитоплазмата на клетката съдържа специфичен антиген от нуклеопротеидна природа - еднакъв за всички стрептококи. Антигените от протеинов тип са разположени на повърхността на клетъчната стена. В клетъчната стена на стрептококите е открит антиген от полизахаридната група.

Въз основа на състава на полизахаридната група-специфична антигенна фракция, всички стрептококи се разделят на групи, обозначени с главни букви A, B, C, D и т.н. до S. В допълнение към групите, стрептококите се разделят на серологични типове, които са обозначени с арабски цифри.

Група А включва 70 типа. Тази група включва повечето стрептококи, които причиняват различни заболявания при хората. Група Б включва главно стрептококи, които са условно патогенни за хората. Група С включва стрептококи, патогенни за хората и животните. Група D се състои от стрептококи, които не са патогенни за хората, но тази група включва и ентерококи, които са обитатели на чревния тракт на хора и животни. Попадайки в други органи, те причиняват възпалителни процеси: холецистит, пиелит и др. По този начин те могат да бъдат класифицирани като опортюнистични микроби.

Принадлежността на изолираните култури към една от серологичните групи се определя чрез реакция на утаяване с групови серуми. За определяне на серологичните типове се използва реакция на аглутинация със специфични за типа серуми.

Стрептококите са доста стабилни в околната среда. При температура 60°C умират след 30 минути.

Те остават в засъхнала гной и храчки в продължение на месеци. Нормалните концентрации на дезинфектанти ги унищожават за 15-20 минути. Ентерококите са много по-устойчиви, дезинфекционните разтвори ги убиват само след 50-60 минути.

Възприемчивост на животните. Говеда, коне, кучета и птици са чувствителни към патогенни стрептококи. От лабораторните животни чувствителни са зайците и белите мишки. Въпреки това стрептококите, които са патогенни за хората, не винаги са патогенни за опитни животни.

Източници на инфекция. Хора (болни и носители), по-рядко животни или заразени продукти.

Пътища на предаване. Въздушен и въздушен прах, понякога хранителен, вероятно контакт с домакинството.

Заболяванията могат да възникнат в резултат на екзогенна инфекция, както и ендогенно - с активиране на опортюнистични стрептококи, които живеят върху лигавиците на фаринкса, назофаринкса и вагината. Намаляването на съпротивителните сили на организма (охлаждане, гладуване, претоварване и др.) може да доведе до автоинфекции.

Пресенсибилизацията е от голямо значение в патогенезата на стрептококови инфекции - като следствие от предишно претърпяно заболяване от стрептококова етиология.

Когато стрептококите проникнат в кръвта, те причиняват тежък септичен процес.

Заболявания при хоратанай-често причинени от β-хемолитични стрептококи от серологична група А. Те произвеждат ензими за патогенност: хиалуронидаза, фибринолизин (стрептокиназа), дезоксирибонуклеаза и др. Освен това стрептококите имат капсула и М-протеин, които имат антифагоцитни свойства.

Стрептококите причиняват различни остри и хронични инфекции при човека, както с образуване на гной, така и негнойни, различни по клинична картина и патогенеза. Гнойни - флегмони, абсцеси, раневи инфекции, негнойни - остри инфекции на горните дихателни пътища, еризипел, скарлатина, ревматизъм и др.

Стрептококите често причиняват вторични инфекции при грип, морбили, магарешка кашлица и други заболявания и често усложняват раневите инфекции.

Имунитет. Природата на имунитета е антитоксична и антибактериална. Постинфекциозният антимикробен имунитет е с ниска сила. Това се обяснява със слабата имуногенност на стрептококите и голям брой серовари, които не осигуряват кръстосан имунитет. В допълнение, при стрептококови заболявания се наблюдава алергизация на тялото, което обяснява склонността към рецидив.

Предотвратяване. Свежда се до санитарно-хигиенни мерки, укрепващи цялостната устойчивост на организма. Специфична превенция не е разработена.

Лечение. Използват се антибиотици. Често се използва пеницилин, към който стрептококите не са станали резистентни, както и еритромицин и тетрациклин.

Значението на стрептококите в етиологията на ревматичния кардит. Патогенезата на ревматичния кардит не е достатъчно проучена. Но редица факти говорят в полза на ролята на стрептокока в развитието на това заболяване:

1. При пациенти с ревматичен кардит се посявка В-хемолитичен стрептокок от гърлото.

2. Ревматизмът често се появява след боледуване от тонзилит, тонзилит, фарингит, които сенсибилизират тялото.

3. В кръвния серум на пациентите се откриват антистрептолизин и антистрептохиалуронидаза - антитела срещу стрептококови ензими и токсини.

4. Косвено потвърждение за ролята на стрептокока е успешното лечение с пеницилин.

Напоследък се отдава голямо значение на L-формите на стрептокока при възникване на хронични форми на ревматичен кардит.

Предотвратяването на екзацербации на ревматичен кардит се свежда до предотвратяване на стрептококови заболявания (например през пролетта и есента се прилага превантивен курс на пеницилин). Лечението се свежда до употребата на антибактериални лекарства - пеницилин.

Значението на стрептококите в етиологията на скарлатината. Г. Н. Габричевски (1902) за първи път предполага, че хемолитичният стрептокок е причинителят на скарлатина. Но тъй като стрептококите, изолирани при други заболявания, не се различават от причинителите на скарлатина, това мнение не се споделя от всички. Сега е установено, че скарлатината се причинява от стрептококи от група А, които произвеждат еритрогенен токсин.

Преболедувалите развиват имунитет – стабилен, антитоксичен. Напрежението му се определя чрез стадиране на реакцията на Дик - интрадермално инжектиране на еритрогенен токсин. При тези, които не са болни, около мястото на инжектиране се появява хиперемия и подуване, което се характеризира като положителна реакция (липса на антитоксин в кръвния серум). При преболедувалите такава реакция липсва, тъй като образуваният от тях антитоксин неутрализира еритрогенния токсин.

Предотвратяване. Изолация, хоспитализация. Гама-глобулин се прилага при контактни, отслабени деца. Специфична превенция не е разработена.

Лечение. Използват се пеницилин и тетрациклин. В тежки случаи се прилага антитоксичен серум.

Цел на изследването: идентифициране на стрептокок и определяне на неговия серовар.

Материал за изследване

1. Слуз от гърлото (възпалено гърло, скарлатина).

2. Остъргване от засегнатата област на кожата (еризипел, стрептодермия).

3. Гной (абсцес).

4. Урина (нефрит).

5. Кръв (съмнение за сепсис; ендокардит).

Основни методи на изследване

1. Бактериологичен.

2. Микроскопични.

Напредък на изследването

Втори ден от изследването

Извадете чашите от термостата и проверете. При наличие на съмнителни колонии се правят натривки от част от тях, оцветяват се по Грам и се изследват микроскопски. Ако в намазката се открият стрептококи, част от останалата колония се субкултивира в епруветки върху агар със серум за изолиране на чиста култура и върху бульон с кръв в епруветки. До края на деня 5-6-часова култура от бульон или агар се субкултивира в бульон Мартин с 0,25% глюкоза, за да се определи серологичната група в реакцията на утаяване на Lensfield. Епруветките и бутилките се поставят в термостат и се оставят до следващия ден.

Трети ден от изследването

Посевите се изваждат от термостата, проверява се чистотата на културата върху наклонен агар, правят се петна, оцветяват се по Грам и се изследват под микроскоп. Ако има чиста култура от стрептококи, инокулирайте върху среда на Hiss (лактоза, глюкоза, малтоза, захароза и манитол), мляко, желатин, 40% жлъчка и поставете в термостат.

Преглеждайки бульона на Мартин. При наличие на специфичен растеж се провежда преципитационна реакция на Lensfield за определяне на серологичната група.

Настройка на реакцията на утаяване според Ленсфийлд. Една дневна култура, отглеждана в бульон на Мартин, се излива в няколко центрофужни епруветки и се центрофугира за 10-15 минути (3000 rpm).

Супернатантната течност се излива в буркан с дезинфекционен разтвор, а утайката се пълни със стерилен изотоничен разтвор на натриев хлорид и отново се центрофугира. Към утайката, събрана от всички центрофужни епруветки, се добавят 0,4 ml 0,2% солна киселина. След това епруветката се поставя на водна баня и се вари 15 минути, като периодично се разклаща. След кипене получената суспензия се центрофугира отново. Антигенът се екстрахира в супернатантата, която се излива в чиста епруветка и се неутрализира с 0,2% разтвор на натриев хидроксид до рН 7,0-7,2. Като индикатор се добавя бромотимолово синьо (0,01 ml от 0,04% разтвор). При тази реакция цветът се променя от сламеножълт на син.

След това 0,5 ml серуми от антистрептококова група се изсипват в 5 епруветки за утаяване, които се приготвят чрез имунизиране на зайци (виж Глава 19). Серум A се добавя към 1-ва епруветка, серум B към 2-ра, серум C към 3-та, серум D към 4-та, изотоничен разтвор на натриев хлорид (контролен) към 5-та. След това, с помощта на пипета на Пастьор, внимателно наслоете получения екстракт (антиген) във всички епруветки по стената.

Ако реакцията е положителна в епруветка с хомоложен серум, на границата на екстракта със серума се образува тънък млечнобял пръстен (фиг. 38).

Четвърти ден на изследване

Резултатите се записват (Таблица 25).

В момента се определя дезоксирибонуклеаза, както и антистрептохиалуронидаза и антистрептолизин-О.

Контролни въпроси

1. Какви основни лабораторни методи за изследване на стрептококи познавате?

2. Защо да използваме реакцията на утаяване на Ленсфийлд?

3. Защо антигенът трябва да е прозрачен при извършване на тази реакция? Опишете техниката за поставяне на тази реакция.

Вземете от учителя антистрептококови серуми A, B, C, D и изотоничен разтвор на натриев хлорид. Настройте реакцията на утаяване, покажете резултатите на учителя и ги скицирайте.

Културни медии

Кръвен агар(вижте глава 7).

Серумен агар(вижте глава 7).

Медиите му(сух).

Месен пептонен желатин (MPG). Към 100 ml МПБ се добавят 10-15 g ситно нарязан желатин. Желатинът трябва да набъбне при бавно нагряване на водна баня (при температура 40-50 ° C). 10% разтвор на натриев карбонат (сода за хляб) се добавя към разтопения желатин и рН се настройва на 7,0. След това веднага филтрирайте през нагънат филтър. Филтрирането е бавно. За да се ускори процесът, филтрирането може да се извърши в горещ автоклав. Филтрираната среда се излива в епруветки от 6-8 ml и се стерилизира. Стерилизацията се извършва или частично при температура 100 ° C в продължение на 3 дни подред, или едновременно при 110 ° C в продължение на 20 минути в автоклав. Охлаждането на средата се извършва в епруветки, поставени вертикално.

Приготвяне на мляко. Прясното мляко се слага да заври, поставя се на хладно за едно денонощие, отстранява се от сметаната и отново се кипва. Оставете за един ден и отстранете горния слой. Обезмасленото мляко се филтрира през слой памучна вата, след това се алкализира с 10% разтвор на натриев карбонат до рН 7,2 и се излива в 5-6 ml епруветки.

Бульон Мартин. Равно количество пептон на Мартин (смлени свински стомаси, изложени на солна киселина) се добавя към водата за месо. Получената смес се вари 10 минути, алкализира се с 10% разтвор на натриев хидроксид до рН 8,0, добавя се 0,5 натриев ацетат, отново се вари и се излива в стерилни съдове. В бульона на Мартин се добавя 0,25% глюкоза.

Сряда Кита - Тароци(вижте глава 34).

Streptococcus pneumoniae (пневмококи)

Пневмококите са описани за първи път от R. Koch (1871).

Морфология. Пневмококите са диплококи, при които страните на клетките, обърнати една към друга, са сплескани, а противоположните страни са удължени, поради което имат копиевидна форма, напомняща пламък на свещ (виж фиг. 4). Размерът на пневмококите е 0,75-0,5 × 0,5-1 микрона, те са разположени по двойки. В течни хранителни среди те често образуват къси вериги, като стават подобни на стрептококите. Преумококите са неподвижни, нямат спори и в тялото си образуват капсула, обграждаща двата кока. Капсулата съдържа топлоустойчиво вещество антифагин (защита на пневмокока от фагоцитоза и действието на антитела). При отглеждане на изкуствени хранителни среди пневмококите губят капсулата си. Пневмококите са грам-положителни. Грам-отрицателни бактерии се срещат в по-стари култури.

Култивиране. Пневмококите са факултативни анаероби. Виреят при температура 36-37° C и pH 7,2-7,4. Те са взискателни към средата, тъй като не могат да синтезират много аминокиселини, така че растат само върху среда с добавяне на естествен протеин (кръв или серум). Върху серумен агар те образуват малки, деликатни, доста прозрачни колонии. На кръвния агар растат влажни колонии със зеленикаво-сив цвят, заобиколени от зелена зона, която е резултат от превръщането на хемоглобина в метхемоглобин. Пневмококите растат добре в бульон с добавяне на 0,2% глюкоза и в бульон със суроватка. Растежът в течна среда се характеризира с дифузна мътност и прахообразна утайка на дъното.

Ензимни свойства. Пневмококите имат доста изразена захаролитична активност. Те разграждат: лактоза, глюкоза, захароза, малтоза, инулин до образуване на киселина. Манитолът не е ферментирал. Техните протеолитични свойства са слабо изразени: те подсирват млякото, не втечняват желатина и не образуват индол. Пневмококите се разтварят в жлъчката. Разграждането на инулин и разтварянето в жлъчката е важна диагностична характеристика, която разграничава Streptococcus pneumoniae от Streptococcus pyogenes.

Фактори на патогенност. Пневмококите произвеждат хиалуронидаза, фибринолизин и др.

Образуване на токсини. Пневмококите произвеждат ендотоксин, хемолизин и левкоцидин. Вирулентността на пневмококите също се свързва с наличието на антифагин в капсулата.

Антигенна структура и класификация. В цитоплазмата на пневмококите има протеинов антиген, общ за цялата група, а в капсулата има полизахариден антиген. Въз основа на полизахаридния антиген всички пневмококи са разделени на 84 серовара. Сред патогенните за хората серовари I, II и III са най-чести.

Устойчивост на фактори на околната среда. Пневмококите принадлежат към групата на нестабилните микроорганизми. Температура от 60°C ги убива за 3-5 минути. Те са доста устойчиви на ниски температури и изсушаване. В засъхнали храчки те остават жизнеспособни до 2 месеца. Те могат да се съхраняват върху хранителна среда за не повече от 5-6 дни. Ето защо при култивиране е необходимо презасаждане на всеки 2-3 дни. Конвенционалните разтвори на дезинфектанти: 3% фенол, сублимат в разреждане 1:1000 ги унищожават за няколко минути.

Пневмококите са особено чувствителни към оптохин, който ги убива при разреждане 1:100 000.

Възприемчивост на животните. Естественият гостоприемник на пневмококите е човекът. Пневмококите обаче могат да причинят заболяване при телета, агнета, прасенца, кучета и маймуни. От опитните животни белите мишки са силно чувствителни към пневмококи.

Източници на инфекция. Болен човек и бактерионосител.

Пътища на предаване. Въздушни капчици, може би въздушен прах.

Входна порта. Лигавицата на горните дихателни пътища, очите и ушите.

Заболявания при хората. Пневмококите могат да причинят гнойно-възпалителни заболявания с различна локализация. Специфични за пневмококите са:

1) лобарна пневмония;

2) пълзяща язва на роговицата;

Най-често срещаното заболяване е лобарната пневмония, която засяга един, по-рядко два или три дяла на белия дроб. Заболяването протича остро, придружено от висока температура и кашлица. Обикновено завършва критично.

Имунитет. След заболяването остава нестабилен имунитет, тъй като пневмонията се характеризира с рецидиви.

Предотвратяване. Това се свежда до санитарни и превантивни мерки. Специфична превенция не е разработена.

Лечение. Използват се антибиотици – пеницилин, тетрациклин и др.

Контролни въпроси

1. Морфология на пневмококите. Култивиране и ензимни свойства.

2. Какви фактори определят патогенността на пневмококите и какво предпазва пневмококите от фагоцитоза?

3. Кои са основните входни врати на пневмококовата инфекция. Какви заболявания причиняват пневмококите?

Микробиологично изследване

Цел на изследването: идентифициране на пневмокок.

Материал за изследване

1. Храчки (пневмония).

2. Слуз от гърлото (възпалено гърло).

3. Секреция от язва (пълзяща язва на роговицата).

4. Секреция от ухото (отит на средното ухо).

5. Гной (абсцес).

6. Плеврален пунктат (плеврит).

7. Кръв (съмнение за сепсис).

1 (По-добре е да вземете сутрешна храчка (при специфична пневмония храчката има ръждив цвят).)

Основни методи на изследване

1. Микроскопичен.

2. Микробиологични.

3. Биологичен.

Напредък на изследването

Биологична проба. Малко (3-5 ml храчка) се емулгира в стерилен бульон, 0,5 ml от тази смес се инжектира интраперитонеално в бяла мишка. След 6-8 часа мишката показва признаци на заболяване. По това време вече може да се открие пневмокок в ексудата на коремната кухина. Ексудатът се взема със стерилна спринцовка. От него се правят натривки, оцветяват се по Грам и се изследват под микроскоп. За да се изолира чиста култура, ексудатът се инокулира върху серумен агар. Ако мишката умре или се разболее, кръвта от сърцето се култивира върху серумен агар, за да се изолира чиста култура. Културите се поставят в термостат.

Ускорен метод за определяне на вида на пневмокока(реакция на микроаглутинация). 4 капки ексудат от коремната кухина на заразена мишка се нанасят върху предметно стъкло. Аглутиниращ серум от тип I се добавя към първата капка, серум от тип II се добавя към втората, тип III се добавя към третата и изотоничен разтвор на натриев хлорид (контрола) се добавя към четвъртата.

Серумите тип I и II са предварително разредени в съотношение 1:10, а серумът тип III - 1:5. Всички капки се разбъркват, изсушават, фиксират и оцветяват с разреден фуксин. Ако резултатът е положителен, в една от капките се отбелязва микробно струпване (аглутинация).

Втори ден от изследването

Културите се изваждат от термостата, изследват се и се правят намазки от съмнителни колонии. Ако в намазките има грам-положителни ланцетни диплококи, се изолират 2-3 колонии върху наклонен серумен агар, за да се получи чиста култура. Културите се поставят в термостат. От бульона се правят петна, оцветяват се по Грам и се изследват под микроскоп.

Трети ден от изследването

Културите се отстраняват от термостата. Те проверяват чистотата на културата - правят цитонамазки, оцветяват по Грам и микроскопират. Ако в изолираната култура има грам-положителни ланцетни диплококи, изолираната култура се идентифицира чрез култивиране:

1) върху среда на Hiss (лактоза, глюкоза, захароза, малтоза) засяването се извършва по обичайния начин - чрез инжектиране в средата;

2) върху среда с инулин;

3) върху среда с оптохин;

4) направете изследване на жлъчката.

Инулин тест. Изследваната култура се засява върху хранителна среда, съдържаща инулин и лакмусова тинктура и се поставя в термостат. След 18-24 часа културите се изваждат от термостата. При наличие на пневмококи средата става червена (стрептококите не променят консистенцията и цвета на средата).

Определяне на чувствителността към оптохин. Изолираната култура се посява върху 10% кръвен агар, съдържащ оптохин 1:50000. Пневмококите, за разлика от стрептококите, не растат върху среда, съдържаща оптохин.

Тест на жлъчката. 1 ml от изпитваната бульонна култура се излива в аглутинационни епруветки. Към една от тях се добавя капка заешка жлъчка, втората епруветка служи за контрола. И двете епруветки се поставят в термостат. След 18-24 часа настъпва лизиране на пневмококи, което се изразява в избистряне на мътен бульон. При контролата суспензията остава мътна.

Жлъчна проба може да се направи върху твърда хранителна среда. За да направите това, зърно суха жлъчка се нанася върху колония от пневмококи, отглеждани в съдове с агар и серум - колонията се разтваря и изчезва.

Четвърти ден на изследване

Резултатите се записват (Таблица 26).

Забележка. j - разграждане на въглехидрати с образуване на киселина.

В момента серологичните методи за изследване (RSK и RIGA) се използват широко за определяне на стрептококови антитела. Определянето на групата и серовара на изолираната култура се извършва с помощта на флуоресцентни антитела.

Определяне на пневмококова вирулентност. Ежедневна бульонна култура от пневмококи се разрежда с 1% пептонна вода от 10 -2 до 10 -8, 0,5 ml от всяко разреждане се прилага на две бели мишки. Културата, която е причинила смъртта на мишки при разреждане 10 -7, се оценява като вирулентна; ​​при разреждане 10 -4 -10 -6 се счита за умерено вирулентна. Култура, която не причинява смъртта на мишки, е авирулентна.

Контролни въпроси

1. Какви методи за изолиране на чиста култура от пневмококи познавате?

2. Кое животно е най-чувствително към пневмококи?

3. Какви реакции се извършват с ексудат от заразена мишка и с каква цел?

4. От кои представители на пиогенните коки трябва да се диференцира пневмококът и с какъв тест?

5. Как да се определи вирулентността на пневмококите?

Упражнение

Направете диаграма на изследването на храчките, като посочите нейните етапи по дни.

Културни медии

Серумен агар(вижте глава 7).

Суроватъчен бульон(вижте глава 7).

Кръвен агар(вижте глава 7).

Медиите му(сух).

Среда за проби с инулин. Към 200 ml дестилирана вода се добавят 10 ml инактивиран говежди серум, 18 ml лакмусова тинктура и 3 g инулин. Стерилизирайте с течаща пара при 100°C в продължение на 3 последователни дни. Жлъчен бульон (виж Глава 7).