Симптоми на микоза на краката. Лабораторна диагностика на гъбични заболявания на кожата. Не се използва при диагностика на повърхностни микози

Люспите или космите се поставят върху предметно стъкло (стъклото трябва да е обезмаслено) и се напълват с една, две или три капки 30% разтвор на калий или сода каустик и се покриват с покривно стъкло. В продължение на 2-3 минути, с леко нагряване на пламъка на спиртна горелка, леко притиснете препарата с покривно стъкло, докато
сив облак при изследване на везни. Косата не трябва да се унищожава, тя само набъбва при такова нагряване. При микроскопско изследване (увеличение 100-200 пъти) с потъмняла диафрагма се откриват гъбични елементи - спори или мицелни нишки. Необходимо условие за успеха на микроскопското изследване е щателното получаване на люспи и косми, които трябва да бъдат взети от засегнатите области със специални пинсети (пинсети за мигли). Необходимо е да се обърне внимание не само на ясно видими косми, крусти и люспи, но и на едва забележими остатъци от косми (т.нар. пънчета) и черни точки, които се отстраняват със скалпел или хистологична игла. Никога не трябва да се задоволявате с насочване на пациента към засегнатите области; самият лекар трябва внимателно да прегледа целия скалп.

В косата, засегната от трихофитоза, гъбичните спори са подредени във верига. При микроспория спорите са много по-малки, отколкото при трихофития, не образуват вериги и са разположени от външната страна на косата. В косъма има нишки от септиран мицел. Косата е сякаш облечена в калъф и спор. При краста се наблюдават полиморфни спори, груби, разнообразни нишки и обикновено въздушни мехурчета (фиг. 48).

В този случай гъбичките не засягат напълно цялата коса, но остават незасегнати области.
За да се получи материал от гладка кожа, люспите се изстъргват. периферните области на лезията с остра лъжица или скалпел. По-удобно е да изстържете ноктите с остър медицински нож (скалпел), като отстраните малки, но дълбоки участъци от вътрешната повърхност на нокътната плоча или изстържете праха от питириазис от роговите плочи на нокътя.
Изходният материал се вари в епруветка с алкали и след това се оставя да престои в тази епруветка за 12-20 часа.
След това съдържанието се центрофугира и утайката се изследва под микроскоп (метод на Н. А. Черногубов).
Гъбите се развиват добре върху изкуствени хранителни среди, съдържащи въглехидрати и протеинови вещества. Особено разпространени са така наречената оригинална среда Sabouraud, бирена мъст, агар и зеленчуци.

2. Лабораторно изследване на патологичен материал

2.1. Микроскопски изследвания

За откриване на морфологичните елементи на гъбичките - дрождени клетки, псевдомицел, мицел, конидиофори, конидии, тъканни форми на дълбоки микози - патологичният материал се изследва в нативни и оцветени препарати.

Течният патологичен материал се изследва в неоцветено състояние в следните очистващи течности: смес от алкохол с глицерин (етилов алкохол 1 част, глицерин 2 части, дестилирана вода 2 части), разтвор на Лугол (1 g кристален йод, 2 g калиев йодид, 150 ml вода), както и във вода или физиологичен разтвор. За приготвяне на нативни препарати капка материал се нанася върху предметно стъкло с помощта на примка или пипета, след това се нанасят 1-2 капки избистряща течност, покрива се с покривно стъкло и се микроскопира при ниско увеличение 1:80 (10x окуляр и 8x обектив), при който можете да видите клъстери от дрождени клетки и псевдомицелий, мицел и други елементи на гъби. При голямо увеличение от 1:400 могат да се характеризират отделни клетки.

Плътният патологичен материал (кожа, люспи на ноктите) се поставя в капка от 10-20% разтвор на КОН, леко загрята над пламъка на горелката (за по-добра мацерация), докато около периферията на капката се появят алкални кристали. След това капката се покрива с покривно стъкло, леко се притиска и се изследва под микроскоп, първо при слабо увеличение, за да се намери скалата, а след това при голямо увеличение.

В материала на косъма мантията от спори, заобикаляща косъма (ектотрикс) или вътре в косъма (ендотрикс) гъбичните елементи обикновено са много ясно видими. Лезиите на косата, както и размерът на спорите, са специфични за различните видове дерматофити. Необходима е диференциална диагноза между гъбични структури и артефакти. Възможните източници на фалшиво положителни резултати включват липидни капчици, въздушни мехурчета, текстилни влакна и така наречената „мозаечна гъба“. Липидните капчици могат да приличат на клетки от дрожди, което се среща най-често при лошо изчистен материал. Текстилните влакна обикновено лежат отделно от материала на епидермиса, косата или ноктите. Те са по-големи от гъбичните хифи, имат неравномерна дебелина и не съдържат прегради. „Мозаечната гъба“ е артефакт, получен по време на кристализацията на KOH поради прекомерно нагряване на препаратите. За разлика от гъбите, няма ясни разделения на клетки.

Важна стъпка в диагностиката на гъбичните инфекции е приготвянето на оцветени препарати. Всеки патологичен материал (препарати за намазка, отпечатъци от органи, центрофугати и, разбира се, хистологични срезове) трябва да бъде подложен на три основни вида обработка: 1) оцветяване с помощта на метода PAS за идентифициране на истински гъби - евмицети; 2) оцветяване по метода на Грам или в модификации по Грам-Вайгерт, по Боголепов, по Браун-Брена - за идентифициране на съпътстваща бактериална микробиота, за идентифициране на актиномицети и нокардия; 3) оцветяване по метода на Ziehl-Nielson или модификация по метода на Kinyon - за идентифициране на киселинно-устойчиви микроорганизми, предимно за индикация и диференциация с Mycobacterium tuberculosis, за откриване на причинители на проказа, нокардия и спорообразуващи дрожди.

PAS методът (Piodic Acid Schiff) включва идентифициране на неутрални полизахариди в стените на микроорганизмите. В стените на повечето евмицети има глюкан-мананов комплекс в различни концентрации, поради което се получава оцветяване.

Прокариотите (бактериите) се оказват PAS-отрицателни, включително актиномицетите и нокардиите, които представляват интерес за миколога. Въпреки това, по време на образуването на актиномикотични друзи се образува така нареченият "цимент", който слепва вегетативния актиномикотичен мицел в гранула, което също дава PAS-положително оцветяване. В тази връзка този метод е приложим и при диагностиката на актиномикоза.

PAS реакцията (и нейната модификация) е най-важният метод за диагностициране на тъканни форми на гъбична инфекция. Методът се основава на окисляването на гликолови групи от въглехидрати с периодна или хромна киселина. Периодната киселина окислява 1,2 и 1,4 гликолите до алдехиди и разкъсва връзките между въглеродните атоми, носещи хидроксилни групи. Алдехидните групи могат също да бъдат открити с помощта на алдехидния реактив на Шиф. In situ, в стените на гъбата, хетерополизахаридният комплекс се оцветява интензивно в лилаво-червено (методология - вижте приложенията).

За потискане на цвета на околните тъкани се използва обработка („контрацвет“) със светло зелено, метанил жълто и др. В този случай се откриват само гъбични клетки, което е много полезно на етапа на индикиране на патогена в тъкани или в препарати за намазка. В същото време не е възможно да се прецени реакцията на тялото и промяната на тъканите към такива лекарства. Винаги е необходимо да има паралелни препарати, оцветени по метода PAS с допълнително оцветяване с хематоксилин.

На практика се използва не само методът PAS в класическата версия, но и неговите различни модификации: окисление с хромна киселина (вместо йодна киселина) - това е реакцията на Бауер, оцветяване на Гридли, импрегниране с метенамин сребро според Gomory- Метод на Грокот. Всички те се използват успешно за откриване на тъканни форми на гъбички и се основават на същия принцип (техника - виж Приложението). Таблица 3.

Таблица 3

Тинкториални свойства на тъканни форми на гъби

(в патологичен материал, в хистологични срезове)

Опортюнистични микози	Методи за откриване
Кандидоза	PAS или Gridley оцветяване
Аспергилоза	Хематоксилин и еозин, импрегниране на Gomori-Grocott
Зигомикоза	Хематоксилин и еозин
Криптококоза	Alcian blue (по метода на Mowry) + PAS реакция + хематоксилин
Пневмоцистоза	Оцветяване по метода на Бауер, импрегниране по Gomory-Grocott, оцветяване с тионин
фузариум	Оцветяване по метода на Романовски-Гимза, по метода на Райт
Сцедоспориоза
Трихоспороза	Хематоксилин и еозин, оцветяване по Романовски-Гимза
Феохифомикоза и хромомикоза	Хематоксилин и еозин
Първични патогенни микози:	Методи за откриване
Кокцидиоидоза	PAS реакция + хематоксилин
Хистоплазмоза	импрегниране по Gomory-Grocott, оцветяване по метода на Bauer, оцветяване по метода на Romanovsky-Giemsa
Северноамериканска бластомикоза
Паракокцидиоза	PAS реакция, импрегниране по Gomory-Grocott
Адиаспиромикоза	Хематоксилин и еозин, RAS реакция
Псевдомикози:	Методи за откриване
Актиномикоза	Хематоксилин и еозин, оцветяване по Грам-Вайгерт
Нокардиоза	оцветяване по метода на Ziehl-Neelsen, по метода на Kinyon, по метода на Gram.

Ако се предполага диагноза криптококоза, препоръчително е да се използват методи за специфично откриване на капсулен материал Cr.neoformansсъдържащи гликозаминогликани (киселинни полизахариди). За тази цел се използва оцветяване с алциево синьо (по метода на Mowry), основно кафяво (по метода на Shubich) и оцветяване с муцикармин. Много е полезно тройното оцветяване: PAS реакция, след това третиране с Alcian blue, след това хематоксилин. В този случай става възможно разграничаването на криптококи от тъканни форми на други гъби с подобна морфология.

Описанието на патологичния материал (хистологични препарати) включва данни за морфологията и размера на тъканните форми на гъбичките, техните тинкториални характеристики, връзката с тъканите на гостоприемника, наличието на фагоцитоза и определяне на придружаващата микробиота.

2.2. Посяване на патологичен материал и количествено преброяване на клетките при микози, причинени от дрождеви гъбички

Получаването на гъбични култури е необходимо за тяхното идентифициране и определяне на чувствителността към противогъбични лекарства.

Преди изследването храчките се хомогенизират за 5-10 минути чрез разклащане със стерилни перли. Ако храчките съдържат много слуз и са слабо хомогенизирани, към тях могат да се добавят 1-2 ml стерилен физиологичен разтвор. Храчките се изследват микроскопски в нативни или оцветени препарати. Ако микроскопията на храчките с голямо увеличение показва гъбични елементи в зрителното поле, тогава трябва да се посее в разреждания 1:10, 1:100, 1:1000; ако не се открият гъбични елементи, храчките се засяват неразредени. Разрежданията се приготвят в течна хранителна среда (пивна мъст, Sabouraud, 1% пептонна вода) или в стерилен физиологичен разтвор. От всяко разреждане 0,1 ml се инокулира с помощта на шпатула върху 2 чаши пивна агар, Sabouraud агар или MPA с добавяне на антибактериални антибиотици - пеницилин и стрептомицин, биомицин (100-200 единици/ml среда). Хранителната среда е предварително изсушена в термостат при +37 С, т.к в присъствието на кондензат растежът на колониите може да бъде сливащ се. Посевите се инкубират в термостат при + 37 o C за 48 ч. След това, ако има растеж на колонии от същия тип дрожди, те се преброяват количествено. Изчисляването на броя на дрождевите клетки (n) в 1 ml или 1 g от тестовия материал се извършва по формулата n = авс, където a е средният брой колонии в едно петриево блюдо, b = 10 с обем. от инокулум от 0,1 ml, c е степента на разреждане на екскретите (10,100,1000).

Пример за изчисление: върху съдове с разреждане 1:1000 нарастват средно 60 колонии, докато 1 ml от изследваните екскременти съдържа 60 x 10 x 1000 = 600 000 клетки от дрожди.

BAL, промивна течност на бронхите, максиларни кухини, жлъчка (порции A, B, C), стомашен сок, дуоденално съдържание, урина се прехвърлят в центрофужни епруветки и се центрофугират в продължение на 10-15 минути, след което супернатантната течност бързо се отцежда. От утайката се приготвят нативни препарати за микроскопия. Ако микроскопията разкрие дрождеви клетки във всяко зрително поле, тогава сеитбата се извършва в разреждания 1:100 и 1:1000, по 0,1 ml всяка, върху твърда хранителна среда и се инкубира при 37 С за 48 часа.Ако микроскопията на утайката направи не разкриват клетки от дрожди, утайката се засява без разреждане. Количеството на дрождената флора се изчислява на 1 ml патологичен материал.

ФЕКСИИТЕ се вземат с мерителна лъжица в количество 0,2 g, поставят се в 1,8 ml течна мъст и се разбъркват добре със стъклена пръчка. Полученото разреждане (1:10) се оставя да престои 5-10 минути, приготвят се разреждания 1:100, 1:1000 и се инокулират в обем от 0,1 ml върху 2 петриеви панички с агарна среда. Количеството на дрождевата флора се записва на 1 g изпражнения.

Гръбначно-мозъчна течност. Характеризира външния му вид (прозрачен или мътен, безцветен или оцветен, наличие на кръв, утайка). Микроскопски петна от седимента на цереброспиналната течност след центрофугиране. Приготвят се три препарата: нативен - в капка стерилен физиологичен разтвор; нативен - в капка мастило и натривка за оцветяване по метода PAS, Грам и Алциево синьо по Моури.

Микроскопия гръбначно-мозъчна течноств нативни и оцветени препарати ни позволява да определим наличието на пъпкуващи дрождени клетки и фрагменти от гъбичен мицел или бактерии, които причиняват гноен менингит (менингококи, пневмококи, Haemophilus influenzae и др.). В мастиления препарат може да бъде открита капсулна гъбичка. Cryptococcus neoformans.В същото време на сивия фон на мастилото се виждат пъпкуващи дрождени клетки, заобиколени от светъл ореол на капсулата. Препаратите с мастило могат също да съдържат форми на дрожди Candida albicansкоито нямат светъл ореол на капсулата около клетката.

Кр. неоформиможе да се открие и чрез оцветяване със синьо Alcian (Mowry). Оцветяването се дължи на селективното откриване на капсулния хетерополизахарид, характерен за Cr.neoformans. Ако се открие бактериална флора в препарат, оцветен по Грам, се извършва допълнително изследване на цереброспиналната течност с помощта на подходящи бактериологични методи. След микроскопиране на утайката, течността се инокулира върху 3 чаши прясно приготвен, изсушен мъст агар или агар Sabouraud, както и върху течна мъст или течна среда Sabouraud. Нанесете 2-3 капки течна утайка върху повърхността на хранителния агар от чаши 1 и 2 и го разтрийте старателно с шпатула и инокулирайте 1 капка в три точки на повърхността на агара от чаша 3, за да откриете нишковидни гъбички. Останалата течност се прехвърля в 5 ml течна мъст или агар Sabouraud. Посевите се инкубират при две температурни условия: чаша 1 - при +37 o C, и чаши 2 и 3 и засяване в течна среда - при +28 o C - +30 o C. Разглеждат се посеви при температура +37 o C на 2 и 5 ден и при 28 - 30 o C - на 4, 7, 10 ден от растежа. Ако на 5-ия ден при температура +37 o C и на 10-ия ден при температура 28-30 o C няма растеж, посейте от течна хранителна среда върху плочи с мъст или агар на Сабуро. Ако няма растеж на дрождева флора, резултатът от инокулирането на течността се записва като отрицателен.

ОТПУСКАНЕ на фистули. Изследването започва с микроскопиране на материала в нативни или оцветени препарати. След това материалът се инокулира върху агарна среда (пивна мъст или Sabouraud), за което 2-3 капки от разряда се нанасят върху чаша и се разпределят върху повърхността на агара с шпатула. Посевите се инкубират 48 часа при +37 o C.

ОТПУСКАНЕ на лигавиците.

1. Тампонът се поставя в епруветка с 2 ml течна среда (пивна мъст, среда на Sabouraud или MPB) и се разклаща в продължение на 5-7 минути, без да се накисва запушалката. Пригответе разреждания 1:10, 1:100 и инокулирайте 0,1 ml от всяко разреждане върху две чаши агар от пивна мъст, агар Sabouraud или MPA. Инокулациите върху твърда среда и епруветка с течна среда с тампон (за обогатяване) се инкубират при температура +37 С. След 48 часа се преброяват колониите и броят на дрождевите клетки се взема с тампон. приблизително определено. За да направите това, броят на отгледаните колонии от дрожди се умножава по 20 и разреждането. Ако няма растеж на колонии върху плочите, взетите разреждания се посяват повторно от средата за обогатяване върху една плоча с пивна агар.

2. Засяването може да се извърши чрез движение на тампон с ротация по повърхността на хранителната среда. В този случай броят на колониите от дрожди не се взема предвид, а се отбелязват само наличието и интензивността на растеж: единични колонии, значителен или непрекъснат растеж, липса на растеж на микробиота.

КРЪВ. Пробите от венозна кръв за хемокултура трябва да бъдат разредени със среда за обогатяване най-малко 1:5, така че бактерицидните свойства на кръвта да не инхибират растежа на гъбичките. Инокулирайте съответно 5-10 ml прясно взета кръв в 50-100 ml хранителна среда (течна среда на Sabouraud с 2% глюкоза или среда на Kitt-Tarozzi след нейната регенерация). За култура можете да вземете кръв с антикоагулант (1:10 5% разтвор на натриев цитрат). Културите се отглеждат 10 дни при +37 o C с контролна сеитба на 5 и 10 ден. С помощта на стерилна пипета вземете утайката, 3 капки от която се разпръскват с бактериологична примка върху повърхността на мъстния агар в петриеви панички. Засадените чаши се поставят в термостат с температура +37 o C за 2-5 дни. При растеж на дрождева флора се дава предварителен отговор за наличието на гъбичките в кръвта и културата се определя към рода и вида.

Описан е друг метод за хемокултура за микофлора (H. Rieth). В този случай се инокулират 5-10 ml кръв на капки. Нанесете 40-50 капки кръв върху повърхността на плътна хранителна среда в петриево блюдо със стерилна пипета на разстояние 0,5 cm между капките. Инокулацията се извършва в две петриеви панички, като едната се инкубира при температура +37 o C, а в другата при стайна температура за 2-5 дни.

ПАРЧЕТА органна тъкан. С тестовото парче тъкан се прави отпечатък върху повърхността на плътна хранителна среда в петриево блюдо, след което се извършва пресяване с бримка. Същото парче тъкан се поставя в 50 ml течна хранителна среда (пивна мъст, среда на Sabouraud). Посевите се инкубират в термостат при температура +37 o C в продължение на 5 дни.

КОЖА и люспи по ноктите. Посяването на люспите се извършва независимо от резултатите от микроскопията. За да направите това, като използвате стерилна микологична шпатула, навлажнена в кондензата на средата, люспите се прехвърлят в епруветка върху наклонен мъст агар на 2-3 точки, като се притискат към повърхността на средата. В зависимост от количеството материал, получен за изследване, инокулацията се извършва в 2-3 епруветки. Посевите се инкубират в термостат при температура 28-37 o C до 5 дни.

Методите за бърза идентификация са широко използвани C. albicans. Този вид е способен да образува зародишни тръбички и къси нишки от псевдомицел в рамките на няколко часа (2-4 часа при 37 o C) върху кръвен серум, яйчен белтък, среда на Eagle, среда 199 и др. На практика в лабораториите се използва човешки серум (остатъци от серологични реакции), където при 37 o C се образуват зародишни тръбички, а след 24 часа се образуват снопове от псевдомицел. Заради външния вид C. albicansтова явление е типично в 90% от случаите. По-рядко се образуват кълнове C. tropicalis.

2.3. Микроскопско изследване и посявка на патологичен материал за суспектни микози, причинени от плесени

Патологичният материал може да се изследва в нативни и оцветени препарати. Предметните стъкла и покривните стъкла, предназначени за приготвяне на микропредметни стъкла, трябва да се съхраняват в смес от алкохол и етер (1:1), за да се избегне замърсяване на въздуха с микобиота. Преди употреба предметните стъкла и покривните стъкла се стерилизират върху пламък на горелка.

Микроскопия на материала

МИКРОСКОПИЯ на храчки. За да се приготвят нативни препарати, храчката се прехвърля в стерилна петриева паничка и се изследва на черен фон за откриване на малки частици (бучки). Бучките могат да бъдат гнойни, гнойно-лигавични, гнойно-кървави. Размерът на бучките варира в рамките на 0,3-3 mm в диаметър, цветът им може да бъде сив, жълтеникав, зеленикав. За да се приготвят естествени микропредметни стъкла, отделни бучки се прехвърлят с дисекционни игли или бактериологична бримка в капка алкохол с глицерин или в капка 10% разтвор на КОН. Покрийте с покривно стъкло, приложете лек натиск с дисекционна игла и микроскоп при ниско (1:80, 10x окуляр и 8x обектив) и високо (1:400, 10x окуляр и 40x обектив) увеличения на микроскопа.

Препарати от вода за изплакване, ексудат, както и жлъчка, урина, стомашен сок и ликьор се приготвят от естествена утайка или от утайка, получена чрез центрофугиране (при 1500 rpm за 5 минути). Утайката се прехвърля с примка или пипета на Пастьор в капка 10% разтвор на КОН върху предметно стъкло, покрива се с покривно стъкло и се изследва при ниско и голямо увеличение на микроскопа.

За да се приготвят оцветени препарати, бучките или капчиците седимент, които ще се изследват, се разпределят равномерно с дисекционни игли или по-малко предметно стъкло върху повърхността на стерилно предметно стъкло, докато се получи тънко петно. Получената петна се изсушава на въздух, фиксира се с метилов алкохол или смес на Никифоров (равни части 96% етилов алкохол и етер) за 3-5 минути или чрез трикратно обгаряне на пламък на горелка. Фиксираната цитонамазка се оцветява по метода на Грам, метода PAS и калкофлуор бяло. Оцветеният образец се микроскопира с помощта на имерсионна микроскопска система (1:900, 10x окуляр, 90x обектив).

Посевен материал

При изследване на всеки патологичен материал за нишковидни гъби, той се инокулира върху твърда среда на Sabouraud или мъст с добавяне на пеницилин и стрептомицин (100-200 единици / ml среда). Сеитбата се извършва в две повторения, като се вземат предвид различните температурни условия за отглеждане на нишковидни гъби (+37 o C и +28 o C), винаги на 3 точки в центъра на чашата. Инкубационното време е 4-5 дни.

Храчките (избрани бучки) се прехвърлят с бактериологична бримка или пипета на Пастьор към повърхността на средата на Сабуро или пивната мъст. Мястото на посяване се маркира с молив на гърба на дъното на петриевото блюдо. Засятите петриеви панички се поставят в термостат с капака нагоре.

След определен период на инкубация, посявките се изследват и ако се открие спорулация, се определя гъбичната култура. Ако няма спорулация, гъбата се субкултивира върху диференциалната среда на Czapek за по-нататъшна идентификация.

Утайката от промивните води на бронхите, максиларните кухини, ексудат, урина, стомашен сок (нативен или след центрофугиране) се взема с пипета и се инокулира в обем от 0,1 ml. Изпражненията се разреждат 1:10 (1 g изпражнения и 9 ml течност) в течна среда на Sabouraud или течен стерилен изотоничен разтвор на натриев хлорид, емулгират се, оставят се да се утаят за 10 минути, за да се утаят големи частици, и супернатантата се инокулира в обем от 0,1 мл. Секретът от външния слухов проход и фаринкса, взет с тампон, се посява чрез внимателно прекарване на тампона от двете страни върху повърхността на хранителната среда. Тампони от тампони могат да бъдат инокулирани. За да направите това, тампоните се поставят в 10 ml течна среда на Sabouraud или течна мъст със стъклени перли и се емулгират в продължение на 10 минути, инокулирани с 0,1 ml промиване на тампон с морава (според Leshchenko V.M., 1973) или в три точки.

Люспите на кожата и ноктите се поставят върху повърхността на хранителната среда, като внимателно се притискат.

Утайката от цереброспиналната течност (центрофуга при 1500 rpm за 5 минути) се инокулира в две чаши от 0,1 ml среда, а остатъкът се инокулира в обогатителна среда (течна среда на Sabouraud или течна мъст), излята в епруветки от 5 ml. Инокулираните блюда се инкубират както обикновено, а епруветките, инокулирани върху обогатяващата среда, се инкубират при + 28 °C в продължение на 10 дни.

Ако има растеж на нишковидна гъба върху твърда среда, нейната култура се определя от тази инокулация; ако няма растеж върху агар на Сабуро или пивна мъст, гъбата се изследва от обогатяващата среда. За да се направи това, гъбичната култура се субкултивира отново върху диференциалната плътна среда на Czapek и впоследствие се идентифицира.

От парче органна тъкан (биопсия, аутопсия) се прави отпечатък върху повърхността на твърда среда, като отрязаната страна на парчето се изследва в три точки. В същото време парчета тъкан се поставят в 50 ml течна хранителна среда (Saburo, мъст).

Ако се подозира фунгемия, кръвта се изследва в две до три повторения. Инокулирайте съответно 5 или 10 ml кръв в 50 или 100 ml течна среда Sabouraud с 2% глюкоза. Културите се отглеждат при +37 С и +28 С в продължение на 10 дни. Първият преглед на посевите се извършва след 5 дни, вторият - след 10 дни. На петия ден можете да наблюдавате растежа на нишковидната гъба под формата на филцова бучка на дъното и повърхностен филм. Мицелът се субкултивира върху диференциална среда на Czapek за определяне на рода и вида на гъбата. Ако на 5-ия ден не се наблюдава растеж на гъбички, посевите се съхраняват до 10 дни и ако няма растеж, резултатите от теста се записват като отрицателни.

При сеитба в три точки растежът на гъбичките в две и три точки се определя като диагностично значим, в една точка - случаен. Ако е необходимо, е възможно повторно засяване.

Идентифициране на изолирани плесенни култури

След изолиране на културата нишковидните гъби се субкултивират върху диференциалната среда на Czapek за генерично и, ако е възможно, видово определяне.

В практиката на диагностичните лаборатории, като правило, те използват културни и морфологични критерии за идентификация: те оценяват модела на растеж на гъбична култура върху агарна среда (културна диагностика, макроморфология) и микроморфологията на гъбичките.

В трудни случаи се използват допълнителни диагностични методи (изследване на ензимната активност, температурни характеристики на растежа на някои плесени).

Концепцията за макроморфология (характеристики на културата) включва структурата на колонията (пухкава, филцова, кадифена, паяжина, вълнеста, дрипава, брашнеста и др.), Повърхност (плоска, нагъната, неравна, куполообразна, сърцевидна, зонална и др.), пигментация на гъбичната колония и субстрат (различни нюанси на зелено, синьо, лилаво, черно, сиво и др.), наличие на ексудат на повърхността на колонията.

Микроморфологията на гъбата от култура се изследва с помощта на препарати, които в зависимост от рода на гъбата се приготвят по следния начин: капка течност за приготвяне на препарати (равни части алкохол, глицерин и вода) се нанася върху чаша. пързалка; в него се поставя парче мицел, отрязва се с микологична шпатула от колонията под формата на триъгълник, като се захващат централните и периферните части, и отрязаното парче се изправя с две дисекционни игли, като се внимава да се избегне образуването на въздушни мехурчета. . В някои случаи (mucor и rhizopus), когато се приготвя лекарството, мицелът се разстила върху сухо предметно стъкло, върху него се нанася капка течност и се покрива с покривно стъкло. Препаратите се разглеждат под микроскоп при малко и голямо увеличение. Субстратът и въздушният мицел се изследват, отбелязва се наличието или отсъствието на прегради (прегради) и се обръща внимание на естеството на спорообразуването: конидиофори с конидии и спорангии със спорангиеспори.

Конидиефорите се различават по структура: от прости единични хифи, носещи спори, до разклонени дървовидни образувания. Конидиефорите са разположени поединично или в групи; те се различават значително от вегетативните хифи на мицела, безцветни или оцветени, възходящи, изправени, каскадни, пълзящи. Те могат да се състоят от една клетка и от голям брой клетки с различни форми и размери, всяка от които има свое име. Например, в род Aspergillus, конидиефорът се състои от следните клетки: дръжка, везикуларно подуване, стеригмати, вериги от конидии. В рода Penicillium конидиофора има формата на прости или сложни четки, също състоящи се от различни клетки: рами клони, метули, фиалиди, вериги от конидии.

Плесенните гъби Mucor и Rhizopus образуват спори под формата на спорангии с ендоспорангиоспори. Спорангият е разположен в края на спорангиофора. Спорангиите са сферични или крушовидни, повечето със специална колона, която е продължение на спорангиофора вътре в спорангиума. Спорангиоспорите са кръгли, безцветни или цветни.

Конидиите (спорите) на плесенните гъби са полиморфни (цилиндрични, сферични, овални, елипсовидни, яйцевидни, крушовидни, клубовидни), едно- и многоклетъчни, различни по размер и цвят, единични, във вериги или събрани в главички и подредени в клъстери. Повърхността на конидиите може да бъде гладка, грапава, шиповидна, набраздена, настръхнала и др.

Микроскопско изследване и посявка на патологичен материал за микози, причинени от диморфни гъби

При тези микози е необходимо да се вземе предвид диморфизмът на патогените.

Патологичен материал за първични патогенни микотични инфекции (кокцидиоидоза, хистоплазмоза, паракокцидиоидоза, северноамериканска бластомикоза), както и хромомикоза, споротрихоза и мицетоми могат да бъдат гной, храчки, остъргвания от язвени лезии по кожата и лигавиците, цереброспинална течност, кръв, биопсирани парчета от лезии поражения.

Трудността при идентифицирането на причинителите на тези микози е, че поради техния диморфизъм микроскопията на патологичния материал ще разкрие тъканни форми на гъбичките, най-често дрождеви клетки с различна морфология или сфери с ендоспори, напълно различни от елементите на същата. гъба, извлечена от нейната култура, отгледана при температура от +28 - +30 o C върху обикновено агаве Sabouraud, със стойност на pH, по-близка до киселинната. Все пак трябва да се има предвид, че при някои диморфни гъби е възможно да се получи в култура дрождева фаза на растеж на гъбичките, често напомняща тъканната им форма, но когато се отглеждат в среда, богата на протеини с леко алкална реакция (pH = 7,6 - 7,8 ), при температура 37 o C.

Горното се отнася за гъбите: Histoplasma capsulatum, Blastomyces dermatitidis, Paracoccidioides brasiliensis, Coccidioides immitisИ Sporothrix schenckii.

Лабораторната диагностика на микозите, причинени от споменатите тук гъбички, се основава на откриването на тъканни форми в патологичен материал чрез микроскопия, изолиране на културата на патогена и идентифицирането му чрез културни и морфологични характеристики.

Микроскопското изследване се извършва в неоцветени препарати върху предметно стъкло в капка 10% разтвор на каустик или смес от алкохол и глицерин в равни обеми или в оцветени петна (Таблица 3).

Инокулацията на патологичен материал се извършва върху гореспоменатите хранителни среди в петриеви панички с помощта на бактериологична шпатула съгласно общоприетия метод.

2.5. Микроскопско изследване и посявка на патологичен материал за дерматомикоза (кератомикоза и дерматофитоза).

Обект на изследване са повърхностни микози, засягащи само кератиновия слой на епидермиса, и дерматофити, засягащи кожата и нейните придатъци (коса, нокти), чиито причинители са гъбички, свързани с рода Trichophyton, Microsporum и Epidermophyton.

Лабораторните микологични изследвания включват същите стъпки като при други микози: микроскопия на материала и получаване на чиста култура при засяването му. Правилното събиране на материал значително влияе върху успеха на микроскопията и вземането на култура.

Патологичният материал се изследва възможно най-скоро след вземането му. Първо се разделя на три части: за микроскопия, култивиране и повторно изследване. Микроскопията на патологичен материал е най-простият и бърз метод за установяване на наличието на гъбички в тъканите. Натрошеният материал се поставя в средата на предметно стъкло в капка 10-20% разтвор на КОН и леко се нагрява върху пламъка на спиртна лампа, докато се получи белезникав ръб по ръба на капката, покрит с покривно стъкло и се оставя за 5-10 минути (коса, кожни люспи) и 30 - 40 минути (нокът) за накисване и избистряне; материалът може да се обработва без нагряване, за това препаратът се оставя в 20% разтвор на КОН за 30-60 минути.

Микроскопирайте първо под микроскоп с ниско, а след това с голямо увеличение.

Културата е необходима за изолиране и идентифициране на патогена. Инокулираният материал се раздробява максимално и се инокулира в минимални количества върху наклонен агар в епруветки на 2-3 точки на разстояние 1-2 см. Най-малко 2-3 епруветки (косъм) и 4-5 епруветки (кожни и нокътни люспи) се инокулират с материала от една проба. За първично изолиране на дерматофити е най-добре да се използва стандартна агарна среда на Сабуро с 2-4% глюкоза или мъст агар, съдържащ антибактериални антибиотици (пеницилин 50 μg/ml + стрептомицин 50 μg/ml или биомицин 200 единици/ml) и анти- антибиотик за плесени актидион (циклохексимид) 0,1 - 0,5 mg/ml. Actidione не повлиява растежа на дерматофитите и инхибира много плесени, както и видовете Candida и Cryptococcus.

Културите се инкубират при 22-30 o C (най-добре 28 o C). Появата на растеж на дерматофити се наблюдава от 4-ия до 12-ия ден на инкубацията в точките на засяване по краищата на въведения материал. Ако няма растеж в рамките на 30 дни, резултатите от културата се считат за отрицателни. При оптимални условия първичните култури на много дерматофити могат да бъдат идентифицирани 7-10 дни след засяването, но посевите трябва да се наблюдават в продължение на 20-30 дни. Първичните култури растат относително бавно и при използване на среди без антибиотици, дерматофитите могат да бъдат потиснати от по-бързо растящи бактерии или плесени. Когато се появи растеж в първичното засяване, е необходимо да се пресее от ръба на колонията върху свежа диференциална среда, за да се получи чиста култура, която ще служи като материал за идентифициране на изолирания дерматофит.

2.6. Серологични методи за диагностика на микози

Значението на серологичните методи се състои главно в следното: идентифициране на пациенти с вероятни инвазивни микози; потвърждаване на микотичния характер на алергичните заболявания; скринингово изследване на рискови групи от развитие на микози.

Фалшиви положителни резултати от серологични тестове са възможни при миконосителство и при здрави хора, чувствителни към гъбични антигени; отрицателни тестове могат да се появят при имунна недостатъчност дори на фона на продължаваща инвазивна микоза.

Рутинни общоприети методи за серологична диагностика на микози
описано достатъчно подробно / П. Н. Кашкин, В. В. Лисин. "Практичен
ръководство по медицинска микология", Медицина, 1983/. В най-ново време обаче
десетилетия се наблюдават забележими промени в методологическите подходи /Елинов Н.П.,
2001/. Бяха предложени оригинални процедури за откриване на антигени и антитела
някои метаболити на гъбични клетки; създадени са специални диагностични тестове
комплекти („китове“), например Pastorex ® Candida, за определяне в
реакции на "латексна аглутинация" на повтарящи се олигоманозни епитопи на антиген
структури/изразени върху голям брой макромолекули
гъба; за определяне на Candida mannan antigen, напр.
серум на пациент с кандидемия, можете да използвате комплекта Platelia ® Candida.
Използвайки първия набор, прагът за определяне на антигенни структури е 2,5 ng/ml, използвайки втория във връзка с метода _____________, прагът за определяне - 0,5 ng/ml.

Причинителите на микозите най-често се идентифицират по време на лабораторни изследвания на различни клинични материали

Кръв

• Кандида
• криптококи
• Мицелните патогени рядко се откриват при кръвни изследвания, с изключение на фузариум

Гръбначно-мозъчна течност

• Кандида
• криптококи

Гнойно отделяне от абсцеси, язви и др.

• Кандида
• криптококи
• фузариум
• Аспергилус
• Споротрикс

Респираторни секрети (храчка, BAL течност, биопсия на бронхиална четка, транстрахеален аспират)

• Аспергилус
• Кандида
• криптококи
• Мукор
• Scedosporium
• Rhizopus
• Споротрикс

Секрет, биопсичен материал от рани

• Аспергилус
• Кандида
• фузариум
• Rhizopus

Други биосубстрати

• Кандида
• криптококи

Материал от гръдна и коремна кухина; синовиалната течност

• Аспергилус
• Кандида
• фузариум

Стъкловидно тяло

• Кандида
• Аспергилус

IV. Критерии за диагностициране на системни микози: клинични и лабораторни параметри на окончателната диагноза

Езофагит

• наличие на характерни промени по време на езофагоскопия
• идентифициране на гъбичките по време на култивиране на биопсичен материал
• наличие на псевдомицел в оцветени петна или признаци на инвазивен гъбичен растеж в биопсичен материал

Пневмония

Пневмония поради Candida spp.

• остри инфилтративни промени на рентгенография на гръдния кош, съвпадащи с клиничните прояви на гъбична пневмония
• идентифициране Candida spp.При култивиране на материал от долните дихателни пътища, получен от трансторакална биопсия, трансбронхиална биопсия, находки от белодробна биопсия или торакоскопски насочена биопсия
• идентифициране на псевдомицел в адекватно оцветен биопсичен материал

Пневмония поради Aspergillus spp., Fusarium spp., Scedosporium apiospermum

• идентифициране на гъбични елементи в тъкани и положителна култура
• персистиращи или прогресиращи инфилтрати в белите дробове, резистентни на антибиотична терапия
• откриване на един от тези патогени чрез храчка или BAL култура
• клинични признаци на пневмония (кашлица, задух, "плеврална" болка, хрипове, шум от плеврално триене)
• характерни промени при рентгеново или компютърно сканиране на белите дробове:

Субплеврални инфилтративни, нодуларни, остроъгълни или кавернозни промени

Симптом на "ореол" при компютърна томография на белите дробове

Прогресиране на инфилтративни промени с образуване на кухини и появата на симптома "сърп"

• липса на други патогени при култивиране на BAL течност, които биха могли да причинят представените промени в белите дробове

Синузит

• клинични и рентгенологични признаци на остър синузит
• микроскопски и културни признаци на микоза при изследване на аспириран или биопсичен материал

Инфекция на пикочните пътища

• откриване на >1x10 CFU/ml с многократни култури от правилно събрана урина

Фунгемия

• Еднократно откриване на гъбички при хемокултура в период на повишаване на телесната температура > 38 o C

Остра дисеминирана микоза

• Фунгемия в комбинация с културни или хистологични признаци на увреждане на дълбоки тъкани (включително подкожна тъкан) или идентифициране на патогена от два нормално стерилни биосубстрата

Ендофталмит

• офталмологични признаци на ендофталмит
• идентифициране на патогена от окото, кръвта или други огнища на разпространение

Абсцес или остеомиелит

• рентгенографски/CT/MRI признаци на остеомиелит
• идентифициране на патогена в аспириран или биопсичен материал

Менингит

• определяне на промени в CSF, потвърждаващи наличието на възпаление и откриване на гъбички чрез микроскопия на CSF
• откриване на гъбички чрез култура на CSF или определяне на антигени Cr.neoformans, Candida и Aspergillusв CSF

Хронична дисеминирана (хепатолиенална) кандидоза

Възможен

• персистираща или интермитентна треска след края на период на неутропения в комбинация с характерни признаци на увреждане на черния дроб, далака или бъбреците

Доказано

• горното в комбинация със засяване Candida spp.от кръвта преди появата на признаци на увреждане на черния дроб, далака или бъбреците или с културни, хистологични признаци на кандидоза в биопсичен материал от лезиите

V. ПРИЧИНИ ЗА ГЪБИЧНИ ИНФЕКЦИИ

Съществуват различни принципи за класифициране на гъбичните инфекции и техните причинители. Струва ни се, че практически най-просто и целесъобразно е патогенните гъби да се разделят на 5 основни групи:

1. Патогени на повърхностни микози;

2. Патогени на дерматомикоза;

3. Патогени на подкожни микози;

4. Причинители на дълбоки микози (първични патогенни микромицети, причинители на опортюнистични инфекции).

5. Патогени на псевдомикоза.

* Трябва да се подчертае, че патогените от първите три групи при имуносупресирани пациенти могат да причинят фунгемия и множество органни лезии.

В следващите раздели ние даваме описание на причинителите на микозите по една схема: името му според приетата номенклатура, списък със синоними, макроскопски характеристики на колониите върху хранителни среди и микроскопични характеристики на гъбични елементи, видими под микроскоп в нативни препарати и от колонии. Дадени са данни и за разпространението на гъбите в природата и са изброени болестите, които причиняват.

Лабораторната диагностика на гъбичните заболявания се основава на откриване на гъбичките и определяне на техния род и вид. Състои се от два основни етапа: микроскопско и културно изследване.

Микроскопско изследване

Микроскопското изследване е първото и важно звено за потвърждаване на предварителната диагноза.

Успехът на микроскопското изследване до голяма степен зависи от правилното вземане на патологичен материал. За микроскопско изследване е необходимо да се избере коса, която има видими признаци на гъбично увреждане (матова, начупена, удебелена). Космите с променен външен вид се отстраняват с пинсети за епилация. За да откриете единични засегнати косми с микроспория, можете да използвате флуоресцентна лампа с филтър на Wood (зеленикаво-синьо сияние).

При избора на засегнатата коса могат да се използват редица допълнителни характеристики. Косата, засегната от микроспори, има сива обвивка от външно разположени спори в основата. При хронична трихофитоза се откриват къси сиви засегнати косми, извити под формата на "запетая" и "въпросителни знаци", както и "черни точки" (удебелени черни засегнати косми, отчупени в устието на фоликула). дебелина на люспите. В случай на инфилтративно-гнойна трихофитоза, за микроскопско изследване, в допълнение към засегнатата коса, можете да използвате гной и корички от лезията.

От кожни лезии с микроспория, трихофитоза и микоза на ингвиналните гънки трябва да се изстържат люспите от периферната зона на лезията, където гъбичките се намират в по-големи количества. Велусната коса се изстъргва заедно с кожните люспи.

При изследване на засегнатата коса с микроспория и трихофитоза се обръща внимание на местоположението на спорите (вътре или извън косата) и техния размер. Тези данни позволяват в някои случаи да се изясни диагнозата, клиничната форма на микозата и епидемиологията.

При интердигиталната форма на микоза на краката за микроскопско изследване се използват кожни люспи и остатъци от мацерирания рогов слой. Областта на нокътя, която трябва да се вземе за микроскопско изследване, зависи от формата на онихомикоза. При повърхностна форма е необходимо да се изстърже повърхността на нокътната плоча.

При най-честата дистално-латерална форма се използва изстъргване от нокътното легло, изпод плочката (поднокътна хиперкератоза) с част от отрязаната изменена нокътна плочка. За проксималната субунгвална форма се използват специални методи за събиране на материал (пробиване на прозорци с бормашина, биопсия на ноктите).

При сквамозно-хиперкератотична форма на микоза на краката, люспите се изстъргват от плантарната повърхност. При дисхидротичната форма на микоза на краката, кориците на мехурчетата се отрязват за изследване.

Техника за подготовка на материал за микроскопско изследване на косми . Малка капка 30% KOH се нанася върху предметно стъкло и засегнатата коса се поставя в него с дисекционна игла. Капката с косата се нагрява леко над пламъка на алкохолна лампа, докато над повърхността на течността се появят пари или ръбът от кристали изпадне по ръба на капката алкали. След покриване с покривно стъкло излишната основа се отстранява с филтърна хартия. Лекарството се изследва първо при ниско, а след това при голямо (х 400) увеличение на микроскопа.

Люспи по кожата и ноктите . Тънки люспи за нокти за микроскопско изследване се поставят върху предметно стъкло в капка 30% KOH и се нагряват, като се добавя алкална основа, докато се изпарява. Охладеният, неоцветен образец се покрива с покривно стъкло и се изследва под микроскоп.

Дебели кожни и нокътни люспи се поставят в центрофужна епруветка и се пълнят с няколко капки 30% KOH. Епруветката се загрява до кипене и се оставя за 20-30 минути. Част от размекнатия материал се прехвърля върху предметно стъкло със стъклена пръчица, като се притиска с кибрит, докато се появи „облак“, след което се изследва под микроскоп.

гной . Капка гной се смесва с капка спирт и глицерин половин и половина и се изследва в нативен препарат.

Културна диагностика

Провежда се културна диагностика за окончателно изясняване на диагнозата и изясняване на епидемиологията. Това включва получаване на култура от гъбичките, последвано от микроскопско изследване.

Засегнатата коса, люспи (кожа и нокът), мехури или гной се посяват върху изкуствена хранителна среда. Чрез появата на гигантски колонии върху петриеви блюда може да се получи представа за рода на патогена (Microsporum, Trichophyton, Epidermophyton), неговия тип (L. canis или ferrugineum, T. violaceum, verrucosum или gypseum). Окончателното изясняване на рода и вида на гъбата е възможно само въз основа на микроскопско изследване на получената култура.

Лабораторна диагностика на повърхностна кандидоза

За лабораторно изследване за дрождеподобни гъби е необходим пресен материал. За микроскопско изследване, в зависимост от клиничните прояви и локализацията на лезиите, кожни люспи, остъргвания от ноктите, капка гной изпод нокътната гънка, белезникави налепи от засегнатите области на устната лигавица и външните гениталии, стените на влагалището, могат да се вземат изстъргвания от лигавицата мембрани на уретрата, както и измиване от червената граница на устните, засегнатите участъци от кожата на големи и малки гънки.

В зависимост от местоположението на лезията и естеството на клиничните прояви, материалът за изследване се взема с памучен тампон, скалпел, бримка и др. Предварително се вземат люспи на кожата и ноктите, остатъци от епидермиса и изстъргвания от лигавицата. третиран с 30% KOH. Патологичният материал се изследва в неоцветени или оцветени препарати.

В първия случай материалът се смесва с равно количество алкохол и глицерин. При оцветяване по Грам клетките на дрождите и псевдомицела изглеждат тъмно лилави, по Ziehl-Neelsen - синьо и по Romanovsky-Giemsa - розово-виолетово. В този случай отличителна черта на клетката на дрождите е пъпкуването - откриването на фигура на „пясъчен часовник“. Вземането на материал от лигавицата на устната кухина, гениталиите, от кожата на червената граница на устните, от ъглите на устата, от кожата на големи и малки гънки се извършва със стерилен тампон. След вземане на материала, тампонът се поставя в друга стерилна епруветка с течна мъст. Епруветката с тампона се изпраща в микробиологичната лаборатория. Изолирането на чиста култура от дрожди-подобни гъбички от рода Candida се извършва съгласно общоприетите микробиологични методи.

Според учените 70% от населението на света има симптоми на микоза на краката. Това заболяване засяга интердигиталните гънки и кожата на стъпалата. Причината за заболяването е гъба, която първоначално е била открита само в ограничени райони на Югоизточна Азия и Африка. Първата световна война, предизвикала масова миграция на хора и влошени санитарни условия, довела до разпространението на болестта по целия свят.

Какво причинява микоза на краката

Основният причинител на заболяването е Trichophyton rubrum. Инфекцията може да бъде причинена от T. mentagrophytes и Epidermophyton floccosum. Много по-рядко гъбичките от рода Candida и плесенните микроорганизми могат да станат патогенни микроби.

Най-важните рискови фактори за заболяването:

• диабет;
• състояние на имунна недостатъчност (СПИН);
• плоски стъпала;
• атеросклероза на периферните артерии;
• разширени вени на долните крайници.

Външни условия, благоприятни за развитието на инфекция:

• затворени неабсорбиращи обувки;
• наранявания на краката (мазоли, ожулвания);
• спортувам.

Симптомите на краката на спортиста най-често се появяват при възрастни мъже. Децата рядко боледуват.

Симптоми на микоза на краката

С развитието на заболяването се появяват пилинг и суха кожа, сърбеж и парене, особено в пространствата между пръстите, както и появата на болезнени пукнатини под пръстите. Понякога първите симптоми на микоза на краката са мехури, които се пукат с образуването на ерозии. Често заболяването протича в изтрита форма, проявяваща се само с лек пилинг, напомнящ на брашно, в гънките между пръстите.

Има 4 клинични форми на заболяването.

Интердигиталният или интертригинозният вариант е най-често срещаният. Кожата между пръстите се зачервява, напуква се, повърхностният слой се намокря и се лющи. Тези признаци се простират до подметката и са придружени от силен сърбеж и парене. Често се свързва бактериално възпаление.

Сквамозно-хиперкератотичният вариант е свързан със силно удебеляване и напукване на кожата. Подметката почервенява и се бели. В областта на петата се появяват дълбоки, болезнени пукнатини, сърбежът обикновено не е характерен. Това често е двустранна лезия и се нарича още "мокасинов крак".

Дисхидротичният вариант е придружен от появата на множество малки сърбящи, болезнени мехури. Те се сливат един с друг, образувайки големи мехурчета. Обвивките на мехурите се пукат, разкривайки лъскава, уязвима, болезнена повърхност - ерозия. Външните прояви наподобяват екзема.

Микробното възпаление често се свързва с увеличени ингвинални лимфни възли, треска, болка в краката, гадене, главоболие и други признаци на интоксикация. При дисхидротичната форма често възниква алергия към гъбички - микотична екзема. Придружава се от обриви на участъци от тялото, които не са заразени с гъбички, например на ръцете.

Изтритата версия обикновено остава незабелязана. Придружава се от леко лющене на кожата между големия и показалеца и/или безименния и малкия пръст на стъпалото. Няма сърбеж.

Признаци на микоза на краката

Различните видове микоза на краката могат да бъдат независими заболявания или да се появят като част от обща гъбична инфекция на тялото. Понякога знакът „два крака - една ръка“ се появява с участието на тези органи. Може да се появи онихомикоза, гъбично разрушаване на нокътя. Понякога едновременно са засегнати и ингвиналните гънки.

Основните симптоми и лечение на микоза на краката са представени на снимката:

Лющене на кожата

Суха и напукана кожа

Мехурчета и ерозии

Диагностика

Опитен дерматолог може да разпознае различните видове микоза на краката още при първия преглед. За потвърждаване на диагнозата обаче е необходимо микроскопско изследване. За него се използват люспи от лезията, изстъргват се с шпатула и се третират с алкален разтвор. Полученият материал се изследва под микроскоп и се откриват патогени.

Директната микроскопия е бърза, евтина и лесна за изпълнение, но не може да определи кой тип гъбички причинява заболяването. Поради това материалът се засява върху хранителна среда, последвано от културно изследване на получения материал. Въпреки това е възможно да се получи култура на гъбички след откриване под микроскоп само в 20–6% от случаите.

Видове лечение на микоза на краката

Лекарствата за лечение на гъбични заболявания трябва да се предписват от дерматолог. Обикновено лечението на микоза на краката се извършва с външни средства.

Едно от ефективните лекарства за това заболяване е клотримазол. В нашия магазин можете да го закупите на ниска цена. Лекарството под формата на лосион Клотримазол за нокти и кожа потиска пролиферацията на гъбичките в дебелината на роговия слой на епитела. Ако са засегнати интердигиталните гънки, лосионът се нанася ежедневно върху чиста, суха кожа на краката в продължение на една седмица, ако е необходимо и повече.

При силно вроговяване и напукване на кожата е необходимо първо да се отстранят мъртвите кожни натрупвания. Това изисква използването на ексфолиращи лекарства. Например, предписват се салицилов мехлем, кремове с млечна киселина или урея. След отстраняване на роговите налепи лосионът се използва 1 – 2 пъти на ден.

При дисхидротичния вариант първата стъпка е да се намали сълзенето. За това се използват лосиони с танин или борна киселина. В тежки случаи към лечението се добавят глюкокортикоиди. След това нанесете Клотримазол лосион по обичайната схема.

Ако ходилото е изтощено, третирайте го с лосион веднъж дневно в продължение на 7-10 дни, но продължителността на курса е индивидуална и се определя от лекаря.

Системна терапия

Дългосрочното или повтарящо се заболяване на краката на спортиста може да изисква перорални противогъбични лекарства. Те преминават от стомашно-чревния тракт в кръвта и след това в кожата, където унищожават гъбичките. Използват се три основни лекарства:

• флуконазол;
• итраконазол;
• тербинафин

Продължителността на приема на тези лекарства е най-малко един месец. Цената им е доста висока. Следователно предотвратяването на микоза на краката винаги е по-лесно и по-изгодно, отколкото да се лекува.

Особено често се предписват системни лекарства, ако гъбичките са засегнали не само кожата, но и ноктите. В този случай лекарствата се натрупват в нарастващата част на нокътната плоча и здравият нокът постепенно израства. За подобряване на ефекта нокътят може да се отстрани изцяло оперативно, след което се възстановява без гъбички.

При пациенти в напреднала възраст често е необходима комбинация от премахване на ноктите и системна и локална противогъбична терапия. При тази група пациенти ноктите често растат бавно, кръвообращението в краката е нарушено, така че за постигане на ефект са необходими големи дози лекарства и продължителен курс на лечение.

Лечение с народни средства

Използването само на рецепти от традиционната медицина няма да помогне да се отървете от гъбичките. Но такова допълнение към конвенционалната терапия съкращава курса на лечение и ускорява възстановяването.

Всяка вечер е полезно да правите топли бани на краката за 10 минути, след което да потупвате добре краката си с кърпа, особено между пръстите, и да нанасяте лечебен лосион за нокти и кожа Клотримазол. Полезни съставки за баня, които облекчават възпалението и намаляват сърбежа:

• билка жълтурчета и жълт кантарион;
• корени от репей;
• трева от пелин;
• евкалиптови листа;
• елхови игли;
• прясна утайка от сварено смляно кафе;
• сол;
• смес от настърган сапун за пране, сода за хляб, калиев перманганат и горчица на прах.

Засегнатите места могат да се смазват с брезов катран или самостоятелно приготвен мехлем от 100 грама масло, смесено със счукана глава чесън. Полезен е и прополисът, с който може да се превърже болните нокти.

Полезно е да се правят компреси от природни средства. Първо се оставят за 1-2 часа, а при поносимост и за една нощ. Използват се следните съставки:

• пулп от тиква;
• натрошени семена от черна ряпа;
• мента, смляна със сол;
• листа от репей или офика, леко омекотени с точилка.

Ефективно е смазването на засегнатите места със сокове от някои растения и други природни средства:

• алкохолен разтвор на прополис;
• сок от лук или чесън;
• сок от жълтурчета;
• масло от чаено дърво.

Предотвратяване на заболявания

За да се избегне микозата или да се предотврати нейният рецидив, е необходима проста, но постоянна профилактика:

• през лятото носете дишащи обувки от естествен материал;
• когато посещавате басейни, бани, обществени душове, носете индивидуални гумени чехли;
• не носете обувки на някой друг, например при посещение;
• използвайте само собствените си хигиенни средства - ножица, пемза, пила за нокти.

За да се избегне повторно заразяване, стелките и вътрешните повърхности на обувките трябва редовно да се третират с дезинфектанти. Добре позната народна рецепта е разтвор на оцетна есенция, но има остра, неприятна миризма.

Лекарите препоръчват използването на лекарството Mikospray, което има не само противогъбичен, но и антибактериален ефект. Mycospray е чудесен не само за третиране на обувки, но и за нанасяне върху краката преди посещение на обществени места за защита на краката.

Жителите на Москва и регионите могат да закупят лекарства за лечение на микоза на краката и за нейната профилактика в нашия онлайн магазин. Те са с доказана ефективност и безопасност. Тяхната употреба се препоръчва за всички хора, които не искат да се заразят с гъбички по краката или бързо да се отърват от тях.

Прецизна диагностика на инвазивни микозиНе е лесно. Това се обяснява не само с трудностите при получаване на култура от гъбички, но и при интерпретирането на резултатите от изследванията, тъй като гъбичките, както дрожди, така и нишковидни, могат да колонизират лигавиците и да замърсят изследваните проби. В тази връзка диагнозата на инвазивните микози се основава на интегриран подход, включващ не само резултатите от микологични (културни) и серологични (определяне на гъбичен антиген) изследвания, но и клинични симптоми на гъбична инфекция, данни от спомагателни изследователски методи ( компютър или ядрено-магнитен резонанс, ултразвук).

Европейско-американска група за сътрудничество за изследване на инвазивни микозиРазработени са критерии за диагностициране на инвазивни микози при имунокомпрометирани пациенти. Те са представени през 2001 г. на Международната конференция по антимикробни средства и химиотерапия (ICAAC, Чикаго), а през 2002 г. в печатен вид. Определени са критериите за доказана, вероятна и възможна инвазивна микоза, които се препоръчват за използване в клинични и епидемиологични проучвания

Доказана инвазивна микоза, причинена от нишковидни гъби: откриване на гъбичен мицел в биопсии или аспирати по време на хистологично или цитологично изследване или изолиране на култура от проби, получени при асептични условия от нормално стерилна лезия, която според резултатите от клинични и радиологични изследвания е свързана с инфекция, с с изключение на изследванията на урината и лигавиците.

Доказана инвазивна микоза, причинена от дрождеви гъбички: откриване на дрождени клетки (гъбите от рода Candida могат да образуват псевдомицел или истински мицел) в биопсии или аспирати, с изключение на проби от лигавици, или изолиране на култура от проби, получени при асептични условия от нормално стерилна лезия, която според към резултатите от клинични и радиологични изследвания, свързани с инфекция, с изключение на урина, проби от синусите и лигавиците, или откриване чрез микроскопия и специфично оцветяване (в капка мастило, оцветяване с муцикармин) на клетки от дрожди или положителен антиген на Cryptococcus spp. в цереброспиналната течност.

Фунгемия, причинена от нишковидни гъби: изолиране на хемокултура на гъбички, с изключение на Aspergillus spp. и Penicillium spp., включително Penicillium marneffei, в комбинация с клинични симптоми на инфекциозен процес, съвместим с изолирания патоген.

Фунгемия, причинена от дрожди: изолиране на хемокултура на Candida или други дрождеви гъбички от пациенти с клинични признаци на инфекция, свързана с този патоген.

Комплекс от диагностични изследвания за инвазивни микози

Изследван биоматериал	Показания, използвани среди, значение
Кръв	Показания: персистираща треска (4-5 дни или повече) по време на терапия с широкоспектърни антибиотици; втора "вълна" на треска по време на антибиотична терапия Вземане на кръв от вена във флакони за аеробни бактерии* или в селективна среда за гъбички, многократно (2-3 пъти на ден с интервал от 1 час) Диагностично значение: изолиране на дрождеви гъби, внимателна интерпретация при изолиране на нишковидни гъби, с изключение на Fusarium spp.
венозен катетър	Показания: изолиране на дрождени гъбички от кръвта Централният или периферен венозен катетър се отстранява при всички случаи на изолиране на дрожди от кръвта За микологично изследване се използва асептично отстранена дистална секция на катетъра с дължина 5-6 см. Изследването се извършва полуколичествено (метод Маки) или количествен метод върху средата на Сабуро Диагностично значение: изолиране на дрождеви гъбички при полуколичествено изследване от 15 CFU или повече, при количествено изследване - 103 CFU/ml или повече за потвърждаване на диагнозата свързана с катетър инфекция или инфекция с катетър
Секреция от горните дихателни пътища, храчки, промивки от трахеята, бронхите, бронхоалвеоларен лаваж	Показания: съмнение за микози, причинени от нишковидни гъбички или Cryptococcus neoformans; продължителна треска по време на широкоспектърна антибиотична терапия и неутропения Микроскопия на проби с калкофлуор бял (откриване на мицел или псевдомицел); засяване върху среда на Сабуро; определяне на Aspergillus антиген в течност от бронхоалвеоларен лаваж при наличие на лезии в белите дробове, характерни за инвазивна аспергилоза Диагностично значение: изолиране на нишковидни гъби или Cryptococcus neoformans
Гръбначно-мозъчна течност	Показания: симптоми на менингит; откриване на лезия(и) в мозъка с помощта на компютърна томография или ядрено-магнитен резонанс; "мозъчни" симптоми, дължащи се на треска и неутропения Микроскопия с калкофлуор бяло, в капка мастило; определяне на Aspergillus, Cryptococcus антиген; сеитба в сряда на Сабуро Диагностично значение: откриване на гъбички, както дрожди, така и нишковидни; положителен антиген
Биопсии, аспирати, перитонеална течност, плеврална течност	Показания: клинични и/или рентгенологични признаци на инвазивна микоза; треска по време на терапия с широкоспектърни антибиотици. Микроскопия с калкофлуор бяло, посявка върху среда на Сабуро Диагностично значение: откриване на гъбички, както дрожди, така и нишковидни

* Честотата на изолиране на гъбички от кръвта е идентична, когато първоначалната кръв е изтеглена в двата флакона с бактериална хранителна среда и със селективна гъбична среда. Изследването е проведено с бактериологичен анализатор VASTES 9240.

Възможна инвазивна микозадиагностициран въз основа на комбинация от следните критерии:
един знак от категорията микробиологични критерии;
един признак от категорията "значими" или два от групата на "по-малко значимите" клинични симптоми на инфекциозния процес.

Възможна инвазивна микозадиагностициран въз основа на комбинация от следните критерии:
наличието на поне един рисков фактор, предизвикващ развитието на инвазивна микоза;
един признак от категорията на микробиологичните критерии или един признак от категорията "значими" (два от групата на "по-малко значимите") клинични симптоми на инфекциозния процес.

Концепцията " възможна инвазивна микоза» Не се препоръчва за употреба в клинични проучвания, изучаващи ефективността на противогъбични лекарства. Можете да използвате този термин, когато анализирате емпирична противогъбична терапия, епидемиологични проучвания и изучаване на фармакоикономика.

При микологични изследваниястерилните аспирати или биопсии вземат предвид не само изолирането на гъбични култури, но и откриването на мицел или псевдомицел чрез микроскопия. В хистологичните препарати Aspergillus е трудно да се разграничи от Fusarium spp., Sceclosporium apiospermum и някои други нишковидни гъби. За диференциална диагноза трябва да се направи имунохистохимично изследване с антитела срещу Aspergillus.

Изолиране на дрождеви гъбичкиот кръвта в поне едно проучване принадлежи към категорията на „доказана” инвазивна микоза и е абсолютна индикация за предписване на системни антимикотици при пациенти с неутропения. Честотата на откриване на дрожди от кръвта е ниска, дори при дисеминирана кандидоза е 35-50%.
Извършване повтарящи се кръвни културиувеличава вероятността за получаване на положителни резултати.

други интерпретациярезултати в случай на откриване на нишковидни гъбички в кръвта. Високата честота на изолиране на нишковидни гъби е характерна за Fusarium spp. и възлиза на 40-60%. Aspergillus се открива изключително рядко, в повечето случаи се счита за зараза, с изключение на Aspergillus terreus.

Избор Aspergillus terreusот кръвта на пациенти с хемобластоза може да показва истинска аспергилемия и при наличие на клинични симптоми на инфекция е основата за предписване на антимикотици.

Критерии за инвазивна микоза

Индекс	Критерии
Фактори, предизвикващи появата на инвазивна микоза (макроорганизъм)	неутропения (< 0,5*109/л в течение 10 дней) Постоянна треска за повече от 96 часа по време на широкоспектърна антибиотична терапия Телесна температура над 38 °C или под 36 °C и някой от следните предразполагащи признаци: продължителна неутропения (повече от 10 дни) през предходните 60 дни, интензивна имуносупресивна терапия през последните 30 дни, доказана или вероятна инвазивна микоза в предходните периодична неутропения или СПИН Наличие на симптоми на GVHD, предимно случаи на тежко протичане (II степен) или обширно протичане на хронично заболяване Дългосрочна (повече от 3 седмици) употреба на глюкокортикоиди през последните 60 дни
Микробиологични признаци	Културално изолиране на филаментозни гъбички (включително Aspergillus spp., Fusaruim spp., Sceclosporium spp. и zygomycetes) и Cryptococcus neqformans от храчка или течност от бронхоалвеоларен лаваж Положителни резултати от културално или цитологично изследване (директна микроскопия) за откриване на нишковидни гъби от аспирати на параназалните синуси Откриване на филаментозни гъбички или Cryptococcus neoformans чрез цитология/директна микроскопия от храчка или течност от бронхоалвеоларен лаваж Положителен Aspergillus антиген в бронхоалвеоларен лаваж, цереброспинална течност и кръвни проби (поне две) Положителен криптококов антиген в кръвни проби Откриване на гъбични елементи чрез цитологично изследване или директна микроскопия в проби от нормално стерилни течности (например Cryptococcus spp. в цереброспинална течност) Два положителни резултата от проучвания за откриване на дрождени култури в урината при липса на уринарен катетър Кандида кристали в урината без уринарен катетър Изолиране на Candida spp. от хемокултури
Клинични признаци Долни дихателни пътища	Трябва да бъде свързано с локуса, от който се вземат проби за микробиологично изследване Всеки от следните типове нови белодробни инфилтрати според КТ: знак на ореол, знак на полумесец, кухина със зони на консолидация* Симптоми на инфекция на долните дихателни пътища (кашлица, болка в гърдите, хемоптиза, диспнея), триене на плеврата, всяка нова инфилтрация, която не е включена в признаците с висока значимост; плеврален излив
Горните дихателни пътища Знаци с голямо значение Признаци с по-малко значение	Рентгенологични признаци на инвазивна инфекция в носните синуси (ерозия на стената или разпространение на инфекция в съседни структури, обширно разрушаване на костите на черепа) Хрема, назална конгестия, назална язва, епистаксис, периорбитален оток, болка в горната челюст, черна некротична язва или перфорация на твърдото небце
Централна нервна система Знаци с голямо значение Признаци с по-малко значение	Рентгенологични признаци на подозирана инфекция на ЦНС (мастоидит или друго параменингеално огнище, екстрадурален емпием, множество лезии в субстанцията на главния или гръбначния мозък) Фокални неврологични симптоми и признаци, включително фокални гърчове, хемипареза; нарушения на съзнанието, менингеални симптоми, нарушения в биохимичния състав на цереброспиналната течност и нейния клетъчен състав (при липса на други патогени, според посявка и микроскопия, при липса на туморни клетки)

*При липса на инфекция, причинена от микроорганизми, които могат да причинят подобна радиологична картина, включително образуване на кухини (Mycobacterium spp., Legionella spp., Nocardia spp.).

При откриване в кръвтаили други стерилни биосубстрати на дрождени гъбички, е необходимо да се извърши идентификация на вида и да се определи чувствителността към противогъбични лекарства; при изолиране на нишковидни (плесенни) гъбички, само идентификация на вида, чувствителността не се определя.

В клинични практикаЧувствителността на филаментозните гъби не е изследвана поради несъвършените стандарти за определяне на чувствителността на такива гъбички към антимикотици. Освен това само едно проучване демонстрира връзка между чувствителността на Aspergillus spp. и резултатите от лечението на инвазивна аспергилоза при пациенти с хематологични злокачествени заболявания. Нито едно от следващите проучвания не е открило подобни резултати.

Напоследък започнаха да се появяват изолирани съобщения за формирането на придобита резистентност на гъбички A. fumigatus към итраконазол и вориконазол.

Определяне на гъбите по видове, особено тези, получени от стерилни локуси, е необходимо преди всичко за избор на антимикотик и провеждане на адекватна противогъбична терапия. По този начин Candida krusei е резистентна към флуконазол и по-малко чувствителна от други видове дрожди към амфотерицин В; Aspergillus terreus, Scedosporium apiospermum (Pseudallescheria boydii), Trichosporon beigelii, Scopulariopsis spp. устойчив на амфотерицин В; Mucorales са резистентни към итраконазол, вориконазол, Candida glabrata проявява дозозависима чувствителност към флуконазол и когато се изолира този вид гъбички, дори чувствителни щамове, дозата на флуконазол трябва да се увеличи (на възрастни се предписват 800 mg вместо 400 mg); Candida lusitaniae е резистентна към амфотерицин B.

Определяне на гъбите по видовесъщо е важен за провеждане на епидемиологичен анализ в болница - идентифициране на причинителите на огнища на инфекция и, ако е възможно, източника на инфекция. Описани са огнища на инфекция, причинена от такива редки гъби като C. lusitaniae, C. krusei, C. lipolytica.

Базиран идентифициране на видовете гъбиМоже да се предположи инвазивна микоза или гъбична колонизация на лигавиците. Например Aspergillus niger е значително по-малко вероятно от Aspergillus fumigatus да причини инвазивна аспергилоза при пациенти с остра левкемия. Изолирането на Aspergillus niger от бронхоалвеоларния лаваж най-често се разглежда като колонизация на дихателните пътища, а от храчките като замърсяване от въздуха и изисква допълнителни изследвания при потвърждаване на диагнозата инвазивна аспергилоза.

Базиран секрети от нишковидни гъбиот храчки, бронхоалвеоларна течност и аспират от параназалните синуси, може да се предположи само инвазивна микоза, без да се включва в категорията "доказана". Въпреки това, откриването на Aspergillus в храчки, особено Aspergillus fumigatus или Aspergillus flavus, при пациенти с неутропения, получаващи алогенен костен мозък, трябва винаги да се взема предвид. Това налага повторно микологично изследване и компютърна томография на белите дробове. По този начин, при неутропения, вероятността за откриване на инвазивна аспергилоза в случай на положителна култура на Aspergillus spp. в храчките е 80%.

Избор Cryptococcus neoformansпри имунокомпрометирани пациенти от респираторния тракт (промивки, промивки) е диагностично значим. Ако идентифицирането на дрождеви гъбички от течности, получени от респираторния тракт (трахеален, бронхиален лаваж, бронхоалвеоларен лаваж) на имунокомпрометирани пациенти не е необходимо изследване, тогава е необходим скрининг за идентифициране на Cryptococcus neoformans от тези проби.

Откриване на кандида в уринатапри пациенти с неутропения и треска обикновено се счита за проява на дисеминирана кандидозна инфекция.

Своевременно диагностикаинвазивни успешно използват търговски тест за откриване на циркулацията на специфичен антиген на Aspergillus spp. галактоман (полизахариден водоразтворим компонент на клетъчната стена на гъбата).

Галактоманможе да се определи чрез два метода: метод на латексна аглутинация (Pastorex Aspergillus, BioRAD) и метод на ензимен имуноанализ (Platelia Aspergillus, BioRAD).

Предимство метод за имуноензимен анализе по-нисък праг на чувствителност за определяне на нивото на галактоман в кръвта - 1 ng/ml или по-малко, а чрез латексна аглутинация - 15 ng/ml. Определянето на галактоман в кръвта (поне 2 проби), цереброспиналната течност и бронхоалвеоларния лаваж има диагностична стойност. Чувствителността на метода за имуноензимен анализ е около 90%, специфичността е 90-99%, при реципиентите на алогенен костен мозък тези показатели са по-ниски и са равни съответно на 60-70% и 80-90%, поради профилактичните използване на противогъбични лекарства (антимикотиците намаляват праговото ниво на галактоман).

В 40% от случаите откриване галактоманв кръвта изпреварва проявите на инвазивна аспергилоза, установени при компютърно изследване на белите дробове, а в 70% изпреварва клиничните симптоми на инфекция.

Диагностична стойност на теста за откриване на антиген Аспергилусе случаят, ако изследването се провежда многократно. Определянето на Aspergillus антиген в кръвта трябва да се извършва по време на треска по време на лечение с широкоспектърни антибиотици при пациенти с неутропения 2 пъти седмично; за пневмония, която възниква или продължава по време на антибактериална терапия; когато се открият лезии в белодробната тъкан (компютърна томография).