Клинична и лабораторна диагностика на HIV инфекцияима три направления:

1. Установяване на факта на HIV инфекция, диагностика на HIV инфекция.
2. Определяне на стадия на клиничния ход на заболяването и идентифициране на вторични заболявания.
3. Прогнозиране на прогресията на клиничния ход на заболяването, лабораторен мониторинг на ефективността на лечението и страничните ефекти на антиретровирусните лекарства.

1. Установяване на HIV инфекция, диагностика на HIV инфекция

За определяне на HIV инфекцията се използват следните специфични показатели: антитела срещу HIV, HIV антигени, HIV РНК и провирусна ДНК. Антителата срещу HIV се определят чрез ензимно-свързан имуносорбентен анализ (ELISA) или имуноблотинг, който по същество е вид ELISA. HIV антигените (протеините) се определят чрез ELISA. Използвайки молекулярно-генетичните методи на полимеразна верижна реакция (PNR) и bDNA, може да се определи ХИВ РНК и провирусна ДНК. Допълнителното използване на метода за хибридизация на нуклеинови киселини със специфични ДНК сонди позволява да се провери специфичността на ДНК последователностите, получени по време на PCR. Чувствителността на PCR е откриването на вирусни гени в една от пет хиляди клетки.

По време на първичната инфекция се наблюдава следната динамика на HIV маркерите в кръвта на заразените хора. През първия месец, в резултат на активиране на репликативния процес, настъпва рязко повишаване на вирусния товар (съдържание на ХИВ РНК в плазмата); след това, поради разпространението на вируса и масовата инфекция на целевите клетки в кръвта и лимфни възли, става възможно да се определи провирусна ДНК. Основната диагностична стойност е фактът за идентифициране на провирусна ДНК, интегрирана в генома на целевата клетка.

Вирусният товар отразява интензивността на процеса на репликация в заразените клетки. По време на периода на първична инфекция нивото на вирусния товар е различно при заразяване с различни подтипове на ХИВ, но динамиката на промените му е приблизително еднаква. Така че, при заразяване с подтип В, ​​например, ако през първия месец след инфекцията вирусният товар е 700 копия/ml, тогава през 2-ия месец има намаление до 600, през 3-тия - до 100, през 4-ия - до 50 копия/мл. Тази динамика се наблюдава на фона на повишаване на нивото на специфични антитела срещу HIV в кръвта. Съдържанието на провирусна ДНК в кръвните мононуклеарни клетки на HIV-инфектирани пациенти се характеризира с относително постоянство през първите 6 месеца с незначителни колебания в някои подтипове. По този начин натоварванията на РНК и ДНК не са идентични.

По време на инкубационния етап за известно време специфичните антитела срещу ХИВ не се образуват в количества, достатъчни за определяне чрез съществуващите лабораторни методи. Преди регистриране на антитела за много кратко време се наблюдава появата в кръвта на Nef протеина, който потиска репликативния процес и структурния протеин р24. Антигенът p24 може да бъде открит в кръвта чрез ензимен имуноанализ още 1-2 седмици след инфекцията и може да бъде открит до 8-та седмица, след което съдържанието му рязко намалява. По-нататък в клиничния ход на HIV инфекцията се наблюдава второ повишаване на нивото на протеина p24 в кръвта. Пада по време на формирането на СПИН. Изчезването на свободни (несвързани с антитела) p24 основни протеини в кръвта и появата на специфични антитела срещу HIV протеините отбелязват началото на сероконверсия (фиг. 9.6).

Виремията и антигенемията причиняват образуването на специфични антитела от клас IgM (анти-р24, анти-gp41, анти-gp120, анти-gp160). Свободните антитела от класовете IgM и IgG към протеина p24 могат да се появят от 2-рата седмица, тяхното съдържание се увеличава в рамките на 2-4 седмици, достигайки определено ниво, на което остава в продължение на месеци (IgM) и години (IgG) (фиг. 9.7).

Появата на пълна сероконверсия, когато в периферната кръв се регистрира високо ниво на специфични IgG антитела към HIV структурните протеини p24, gp41, gp120, gp160, значително улеснява диагностицирането на HIV инфекцията. Антителата срещу HIV се появяват при 90-95% от заразените хора в рамките на 3 месеца след заразяването, при 5-9% - в периода от 3 до 6 месеца от момента на заразяването и при 0,5-1% - на по-късна дата.

Въпреки факта, че антителата срещу ХИВ се появяват последни, основният лабораторен диагностичен показател към днешна дата е откриването на специфични антитела с помощта на ELISA и имуноблотинг.

Данните са представени в таблица 9.2 [покажи] и 9.3 [покажи] , ясно демонстрират високата чувствителност на съвременните ензимно-свързани имуносорбентни тестови системи за откриване на антитела срещу HIV, която надвишава чувствителността на имуноблотинга. В някои случаи, когато се получи първоначален положителен резултат от ELISA, той може да бъде потвърден при имуноблотинг само след 2-3 седмици.

При изследване на пациенти с ХИВ инфекция (инфектирани с ХИВ) с помощта на имуноблотинг тестови системи от водещи компании в света, антитела срещу gp160 и p24/25 се откриват във всички случаи; антитела към други протеини се откриват в 38,8-93,3% от случаите (Таблица 9.4 [покажи] ).

Трудности при идентифицирането на антитела при пациенти с HIV инфекция могат да възникнат по време на периоди на масивна виремия и антигенемия, когато съществуващите специфични антитела в кръвта са свързани с вирусни частици и процесът на репликация изпреварва производството на нови антивирусни антитела. Тази ситуация може да възниква и да си отива по време на инфекциозния процес.

При пациенти с първоначално отслабена имунна система виремията и антигенемията се появяват по-рано и остават на високо ниво до изхода на заболяването. Такива пациенти имат ниско ниво на свободни антитела срещу ХИВ поради две причини - недостатъчно производство на антитела от В-лимфоцити и свързване на антитела с вириони и разтворими протеини на ХИВ, следователно за определяне на инфекцията се използват тестови системи с повишена чувствителност или модификации на от имунните комплекси се изискват методи за анализ, които включват етапа на освобождаване на антитяло.

Най-често намаляването на съдържанието на антитела срещу ХИВ поради тези причини се случва в терминалния стадий, когато антителата срещу ХИВ в серума може да не бъдат открити с помощта на методи за ензимно-свързан имуносорбентен анализ или метода на имуноблотинг (Western blot). В допълнение към появата на специфични антитела срещу HIV, имунният отговор през първите 4 месеца се характеризира с намаляване на съдържанието на CD4+ клетки в кръвта на заразения човек и увеличаване на CD8+ клетките. Освен това съдържанието на клетки, носещи CD4 и CD8 рецептори, се стабилизира и остава непроменено за известно време. Увеличаването на съдържанието на CD8 лимфоцити е защитна реакция, т.к Клетъчно-зависимата цитотоксичност се осъществява от CD8+ лимфоцити, които са насочени към унищожаване на HPV-инфектирани клетки. Първоначално цитотоксичните лимфоцити (CTL) реагират на Nef регулаторния протеин на вируса, който играе важна роля за намаляване на вирусното (РНК) натоварване в плазмата на HIV-инфектиран човек през първите месеци. След това се формира CTL отговор към други, вкл. структурни протеини на HIV, в резултат на което 12 месеца след заразяването цитотоксичният ефект се повишава значително.

Лабораторни диагностични схеми за HIV инфекция

Като се има предвид горната динамика на специфичните маркери на HIV инфекцията, на практика е препоръчително да се придържате към следните лабораторни диагностични схеми при възрастни (фиг. 9.8-9.10).

Диаграмите отразяват трите основни етапа на първичната лабораторна диагностика на HIV инфекцията:

1. Прожекция.
2. Референтни.
3. Експерт.

Необходимостта от няколко етапа на лабораторна диагностика се дължи преди всичко на икономически съображения. Така например разходите за провеждане на едно експертно изследване с помощта на имуноблотинг с използване на домашни тестови системи е до 40 щатски долара, скринингът (чрез ELISA) е около 0,2, т.е. съотношението е 1:200.

На първия етап (фиг. 9.8) антителата срещу HIV се определят в субектите с помощта на една ензимно-свързана имуносорбентна тестова система, предназначена да открива антитела към двата вида вирус - HIV-1 и HIV-2.

Производителите в предложените тестови системи използват вирусен лизат, рекомбинантни протеини и синтетични пептиди като антигенна основа. Всеки от изброените носители на HIV антигенни детерминанти има своите предимства и недостатъци. Следователно, когато избирате тестови системи с приблизително еднаква цена, трябва да се предпочитат комплекти с най-висока чувствителност (за предпочитане 100%). Сред тестовите системи с еднаква цена и чувствителност е препоръчително да се съсредоточите върху тези с максимална специфичност.

На базата на вирусния лизат са създадени първите тест системи за лабораторна диагностика на HIV инфекцията. През 80-те години такива тестови системи се характеризираха с чувствителност под 100% и ниска специфичност, проявяваща се с голям брой (до 60%) фалшиво положителни резултати.

Когато вирионът се образува в култура от лимфоцити, неговата обвивка се създава от външната мембрана и следователно съдържа антигени на главния комплекс за хистосъвместимост от класове I и II. Това обстоятелство причинява фалшиво положителни реакции, ако в кръвта на пациентите има антитела срещу алоантигени на хистосъвместимост.

По-късно за получаване на вируса беше предложено да се използва култура от макрофаги, в която вирусните частици се образуват предимно вътреклетъчно чрез пъпкуване не от външната мембрана на клетката, а от мембраните на ендоплазмения ретикулум. Тази технология намали броя на фалшивите положителни резултати.

Ензимно-свързани имуносорбентни тестови системи, които използват комбинация от пречистен вирусен лизат със синтетични пептиди, които са най-значимите за антиген части от вирусните протеини или рекомбинантни протеини, са признати за едни от най-добрите по отношение на най-важните характеристики - чувствителност и специфичност.

Чувствителността на тестовата система зависи и от характеристиките на другите компоненти на комплектите. По този начин тестовите системи, които използват конюгати, които разпознават антитела не само от клас IgG, но също и от IgM и IgA, позволяват да се открие по-ранна фаза на сероконверсия. Изглежда обещаващо да се използват тестови системи, които могат едновременно да откриват както антивирусни антитела, така и антиген p24, което прави лабораторната диагностика на HIV инфекцията още по-ранна.

Първоначалният положителен резултат трябва да бъде проверен отново чрез повторно тестване на пробата в същата система за тестване, но за предпочитане в различна серия и от различен лаборант. Ако повторен тест доведе до отрицателен резултат, тестът се извършва за трети път.

След потвърждаване на положителен резултат е препоръчително да вземете втора кръв и да я тествате за антитела срещу ХИВ като първична. Повтарящите се вземания на кръв помагат за предотвратяване на грешки, причинени от неточно етикетиране на епруветки и формуляри за препоръки.

Кръвен серум, който е серопозитивен на етапа на скрининг, се изпраща за референтни изследвания, извършени с помощта на две или три високоспецифични тест системи ELISA. При два положителни резултата се извършва експертно изследване чрез имуноблотинг.

Използването на ензимно-свързани имуносорбентни тестови системи в референтната диагностика, които могат да се използват за диференциране на специфични антитела срещу HIV-1 и HIV-2, улеснява по-нататъшната работа и ви позволява незабавно да изследвате положителна проба на експертния етап, като използвате подходящия имуноблотинг (HIV-1 или HIV-2).

Лабораторна експертиза за HIV инфекция се прави само въз основа на положителен резултат от имуноблотинг (Western blot). При извършване на експертна диагностика е необходимо да се използва номенклатурата на гените и генните продукти на HIV, предложена през 1990 г. от група експерти на СЗО (Таблица 9.5). [покажи] ).

Специфичността на ивиците върху имуноблота трябва да се оцени много внимателно и задълбочено, като се използват резултатите от изследвания на контролни серуми (положителни и отрицателни), които се провеждат успоредно с изследването на експериментални проби, и проба от имуноблот с обозначението на HIV протеини (прикрепено от производителя към тестовата система). Тълкуването на получените резултати трябва да се извърши в съответствие с инструкциите, приложени към тестовата система. По правило критерият за положителност е задължителното наличие на антитела към два протеина (предшественик, външен или трансмембранен), кодирани от гена env, и възможното наличие на антитела към продуктите на два други структурни гена на ХИВ - gag и pol (Таблица 9.6 [покажи] ).

Ако се получи съмнителен резултат, е необходимо да се използва списъкът с препоръки за окончателно изясняване на резултатите от имуноблотинга (Таблица 9.7 [покажи] ).

Според препоръките на Руския научно-методически център за профилактика и контрол на СПИН, положителен резултат се счита за наличие на антитела към поне един от протеините gp41, gp120, gp160 в комбинация с антитела към други специфични HIV -1 белтъци или без тях. Тези препоръки са направени въз основа на опит със серуми от деца от нозокомиални огнища, при които често се откриват антитела само към един от протеините на обвивката на вируса.

По-голямата част от първоначално изследваните пациенти, които са серопозитивни при ELISA, принадлежат към фазата на персистираща генерализирана лимфаденопатия (PGL) или към асимптомната фаза. Следователно, върху имуноблот (нитроцелулозна лента, върху която са имобилизирани HIV протеини), като правило се определя следната комбинация от антитела срещу HIV-1: антитела към протеините на обвивката gp160, gp120 и gp41, кодирани от env гена, в комбинация с антитела към основните протеини p24 (протеин нуклеокапсид, кодиран от gag гена) и p31/34 (ендонуклеаза, кодирана от pol гена).

Положителни реакции само с gag и/или pol протеини могат да възникнат по време на ранна сероконверсия и могат също да показват HIV-2 инфекция или неспецифична реакция.

Ако се получи съмнителен резултат, е възможно да се използват различни методологични техники за изясняване на факта на HIV инфекцията.

В зависимост от техническите възможности (наличие на диагностични комплекти и реактиви, наличие на специално оборудване и обучение на персонала) на експертната лаборатория се извършват допълнителни диагностични изследвания (фиг. 9.10).

В някои случаи е препоръчително да се използват молекулярно-генетични методи за определяне на генетичните последователности на HIV в серум, кръвни лимфоцити или аспирации на лимфни възли. Специфичността на ДНК последователностите, получени в резултат на PCR, може да бъде проверена чрез хибридизиране на нуклеинови киселини със специфични ДНК сонди.

Методите на радиоимунопреципитация (RIP) и индиректна имунофлуоресценция (IFI) също могат да се използват за окончателна проверка на серуми със съмнителни резултати от имуноблотинг.

Откриването на ХИВ РНК в кръвната плазма чрез качествен или количествен метод не е от значение за диагностицирането на ХИВ инфекцията. Този резултат трябва да бъде потвърден чрез стандартни методи, като имуноблотинг, 2-4 месеца след получаване на първоначалния съмнителен или отрицателен отговор.

Изолирането на ХИВ в клетъчна култура е истината от последна инстанция. Методът обаче е сложен, скъп и се извършва само в специално оборудвани изследователски лаборатории.

Съдържанието на CD4+ клетки в кръвта е неспецифичен показател, но в противоречиви случаи (ELISA "+", имуноблот "-", наличие на клинични признаци на HIV инфекция / СПИН) може да се използва като насока за определяне на експертно решение. Ако лабораторията има възможност да извършва само имуноблотинг, тогава трябва да се придържате към препоръките, посочени в табл. 9.7 и на фиг. 9.9.

Лицата, чието експертно изследване на серума е дало съмнителни (неопределени) резултати, с изключение на случаите на откриване на антитела само срещу p17 (HIV-1) или p16 (HIV-2), трябва да бъдат повторно тествани в рамките на 6 месеца (след 3 месеца) . В случай на истинска HIV инфекция, след 3-6 месеца се наблюдава „положителна“ динамика в спектъра на антителата - допълнително образуване на антитела към други вирусни протеини. Фалшивата реакция се характеризира с персистиране на съмнителен модел на имуноблотинг за дълго време или изчезване на подозрителни ивици. Ако след определения период резултатите от повторното имуноблотинг са отрицателни или остават двусмислени, тогава при липса на рискови фактори, клинични симптоми или други фактори, свързани с HIV инфекцията, лицето може да се счита за серонегативно за антитела срещу HIV-1 и HIV -2.

Фалшиво положителни резултати, дължащи се на наличието в кръвта на пациентите на антитела срещу алоантигени на хистосъвместимост, които са част от обвивката на ХИВ, се появяват на имуноблоти под формата на ленти на ниво gp41 и gp31. Причините за други неспецифични реакции (например към p24, който често се среща при индивиди с автоимунни процеси) все още не са изяснени.

Подобренията в технологията на производство на ензимно-свързаните имуносорбентни тестови системи позволиха да се постигне висока чувствителност - до 99,99%, докато чувствителността на метода за имуноблотинг е 97%. Следователно, отрицателен резултат при имуноблотинг с положителни резултати при ELISA може да означава начален период на сероконверсия, характеризиращ се с ниско ниво на специфични антитела. Следователно е необходимо изследването да се повтори след 1,5-2 месеца, т.е. периодът от време, необходим за завършване на сероконверсията и постигане на концентрация на специфични антитела в кръвта, достатъчна за откриване чрез имуноблотинг.

Положителен резултат (резултати) от изследване на референтния или само скрининг етап на лабораторна диагностика на ХИВ инфекция, т.е. положителен резултат във всяка ензимно-свързана имуносорбентна тестова система, в крайна сметка непотвърден от експертни методи, се тълкува като наличие на на кръстосано реагиращи антитела в кръвта на изследваното лице. Кръстосаната реакция се отнася до свързването на антитела към неспецифични места на HIV протеини или пептиди, използвани като антигенна основа в тестовата система, при която е получен положителен резултат.

При липса на имунна недостатъчност и клинични признаци на HIV инфекция, такива лица се считат за серонегативни за HIV антитела и трябва да бъдат заличени от регистъра.

Окончателната диагноза на HIV инфекцията се установява само въз основа на всички клинични, епидемиологични и лабораторни данни. Само лекуващият лекар има право да информира пациента за диагнозата HIV инфекция.

Основният метод за потвърдителна (експертна) лабораторна диагностика на HIV инфекцията е имуноблотинг. Въпреки това, предвид по-ниската му чувствителност в сравнение с ELISA, редица изследователи предложиха използването на комбинация от няколко тестови системи за окончателно определяне на наличието на специфични антитела срещу ХИВ. Например G. van der Groen et al. предложи алтернативен метод на имуноблотинга за проверка на положителните резултати от етапа на скрининг на лабораторната диагностика на HIV инфекцията. Това включва паралелно изучаване на материала в три тестови системи, които се основават на различни методи за откриване на специфични антитела срещу ХИВ (няколко варианта на ELISA, реакция на аглутинация) с помощта на антигени от различно естество. Авторите успяха да изберат такива комбинации от тестови системи, чието използване осигурява 100% чувствителност и специфичност в сравнение с резултатите, получени при имуноблотинг.

Евтиността на този метод на експертна диагностика е несъмнено предимство, но липсата на информация за това кои специфични вирусни протеини имат антитела в кръвта на пациента не позволява да се оцени спецификата на реакцията във всеки отделен случай, както и да се наблюдават промените в спектърът на антителата в ранния стадий на сероконверсия.

Лабораторната диагностика на HIV инфекцията при деца, родени от заразени с HIV майки, има свои собствени характеристики. От момента на раждането майчините антитела срещу ХИВ могат да циркулират в кръвта на такива деца за дълго време (до 15 месеца). Само имуноглобулини от клас IgG проникват през плацентарната бариера, така че идентифицирането на HPV-специфични имуноглобулини от класове IgM и IgA при дете позволява да се потвърди инфекцията, но отрицателният резултат не може да показва липсата на HIV.

При деца под 1 месец все още няма репликация на HPV и единственият метод за проверка е PCR. Определянето на антиген p24 при деца на възраст над 1 месец също е потвърждаващ метод.

Липсата на антитела срещу HIV при новородени не означава, че вирусът не е проникнал през плацентарната бариера. Във всеки случай децата на HIV-инфектирани майки подлежат на лабораторно диагностично изследване и наблюдение в продължение на 36 месеца от раждането.

Резултатите от лабораторните тестове за маркери на HIV инфекция изискват внимателна интерпретация и трябва да се разглеждат само във връзка с данните от епидемиологични и клинични изследвания. От друга страна, трябва да се отбележи, че въпреки високата чувствителност на съвременните методи, отрицателните резултати от изследването не могат напълно да изключат наличието на HIV инфекция. Следователно, отрицателен резултат от изследване, например чрез имуноблотинг, може да се формулира само като липса на специфични антитела срещу HIV-1 и HIV-2.

Диагностика на HIV инфекция при серонегативни пациенти

Качеството на тестовите системи, използвани в лабораторната диагностика на ХИВ инфекцията, се подобрява всяка година, а тяхната чувствителност нараства. Въпреки това, високата променливост на ХИВ може да доведе до появата на нови типове, антителата към които може да не бъдат разпознати от съществуващите тестови системи. Освен това са известни случаи на атипичен хуморален отговор на имунната система на гостоприемника към вируса. Така L. Montagnier през 1996 г. съобщава за двама пациенти със СПИН, при които през последните няколко години не са открити специфични антитела в кръвта им, диагнозата е направена въз основа на клинични данни и потвърдена в лабораторията само чрез изолиране на HPV-1 в клетъчна култура. В такива случаи е необходимо да се използват препоръките на СЗО, според които клиничната диагноза на ХИВ инфекцията при възрастни и деца е възможна при наличие на едно от 12-те заболявания, определящи СПИН:

1. кандидоза на хранопровода, трахеята, бронхите, белите дробове;
2. извънбелодробна криптококоза;
3. криптоспоридиоза с диария за повече от един месец;
4. цитомегаловирусна инфекция на всеки орган (с изключение и в допълнение към черния дроб, далака и лимфните възли при пациент на възраст над 1 месец):
5. инфекция, причинена от вируса на херпес симплекс, персистираща повече от 1 месец при пациент на възраст над 1 месец;
6. мозъчен лимфом при пациент под 60-годишна възраст;
7. лимфоцитна интерстициална пневмония при дете под 13-годишна възраст;
8. дисеминирана инфекция, причинена от бактерии от групата Micobacterium avium intracellulare или M. Kansassii;
9. Пневмоцистна пневмония;
10. прогресивна мултифокална левкоенцефалопатия;
11. токсоплазмоза на централната нервна система при пациенти на възраст над 1 месец.

Наличието на едно от тези заболявания позволява да се диагностицира ХИВ инфекцията при липса на лабораторен кръвен тест за наличие на антитела срещу ХИВ или дори ако се получи серонегативен резултат.

Източник: Медицинска лабораторна диагностика, програми и алгоритми. Изд. проф. Карпищенко А. И., Санкт Петербург, Интермедика, 2001 г

внимание!При положителни и съмнителни реакции срокът за издаване на резултати може да бъде удължен до 10 работни дни.

Антитела срещу HIV типове 1, 2, p 24 антиген - изследване на специфични антитела, които възникват в тялото в отговор на инфекция с човешки имунодефицитен вирус (HIV) тип 1, 2 и p 24 антиген на човешкия имунодефицитен вирус.

ХИВ(вирус на човешка имунна недостатъчност) е вирус от семейството на ретровирусите (бавно репликиращ се вирус), който инфектира клетките на човешката имунна система (CD4, Т-хелперни клетки) и причинява синдром на придобита имунна недостатъчност.

Инкубационният период обикновено е 3-6 седмици. В редки случаи антителата срещу HIV започват да се откриват само няколко месеца или повече след заразяването. Нивата на тяхната концентрация могат да намалеят значително в терминалния период на заболяването. В редки случаи антителата срещу HIV инфекцията могат да изчезнат за дълго време.

Антиген p 24 HIV 1.2тип, открит в кръвния серум, показва ранен стадий на заболяването. През първите няколко седмици след инфекцията, количеството на вируса и p 24 антигена в кръвта нараства бързо. Веднага щом започнат да се произвеждат антитела срещу ХИВ 1 и 2, нивото на антигена p 24 започва да намалява.

Определянето на антиген p 24 позволява диагностициране на HIV инфекцията в ранните стадии на инфекцията, преди производството на антитела.

Едновременното откриване на антитела срещу вируса HIV-1.2 и антигена на вируса p 24 повишава диагностичната стойност на изследването.

Този анализ ви позволява да откриете антитела срещу HIV-1,2, както и HIV-1,2 p 24 антиген. Анализът ви позволява да диагностицирате ХИВ инфекцията в ранните етапи.

Начини на предаване на инфекцията:

• сексуален;
• по време на кръвопреливане;
• от заразена майка на новородено.

HIV инфекция- продължително и тежко заболяване, което е придружено от увреждане на клетките на човешката имунна система; Все още не са разработени ефективни методи за лечение и средства за специфична профилактика (ваксини) срещу него.

Източникът на вируса на имунната недостатъчност е човекът. Вирусът при човека може да бъде изолиран от семенна течност, цервикален секрет, лимфоцити, кръвна плазма, цереброспинална течност, сълзи, слюнка, урина и кърма, но концентрацията на вируса в тях е различна. Най-висока концентрация на вируса се съдържа в следните биологични среди: сперма, кръв, цервикален секрет.

Начините, по които вирусът може да бъде предаден от заразено лице на незаразено лице, са ограничени.

Пътища на предаване на HIV инфекцията
Има 3 начина за предаване на вируса на имунната недостатъчност:

1. Сексуалният път е най-честият. Заразяването става чрез незащитен полов контакт, като вирусът навлиза в тялото през лигавиците. Рани по лигавицата, язви, възпаления увеличават вероятността от инфекция. Хората, които страдат от полово предавани инфекции, имат 2 до 5 пъти по-висок риск от заразяване при контакт със заразен човек. За предаването на вируса е важна не само степента на интимност на контакта, но и количеството на патогена. По време на незащитен секс вероятността жената да се зарази от мъж е приблизително три пъти по-висока, тъй като повече от вируса навлиза в тялото й и жената има много по-голяма повърхност, през която вирусът може да проникне в тялото (вагинална лигавица) . Рискът от инфекция е най-висок при анален секс и най-малък при орален секс.
2. Контакт с кръвта на заразен човек: а) при използване на общи игли, спринцовки, прибори за приготвяне на лекарства, нестерилни медицински инструменти; б) прилагане на лекарства, при приготвянето на които се използва кръв; в) използване, трансфузия на заразена донорска кръв и лекарства, направени от нея (рискът е изключително нисък, тъй като всички донори, както и кръвта, се проверяват внимателно).
3. От HIV-инфектирана майка (вертикален път) до плода по време на бременност, по време на преминаване през родовия канал и по време на кърмене.

СПИН - терминален стадий на HIV инфекцията
СПИН не се развива за една нощ. При повечето хора с антитела срещу вируса на имунната недостатъчност клиничните признаци на СПИН може да не се появят от 2 до 10 години или повече, а при успешно лечение този период се увеличава значително. Това е така, защото отнема доста време, докато броят на CD4 Т клетките спадне до ниво, при което имунната система отслабва.

Вирусът заразява и други типове клетки, включително клетки на централната нервна система и червени и бели кръвни клетки, в които вирусът изглежда лежи в латентно състояние за дълго време, преди да започне активно да се възпроизвежда. Факторите, влияещи върху прогресията на заболяването, са разнообразни: генетични характеристики, щам на вируса, психологическо състояние на пациента, битови условия и др.

Протичането на заболяването и продължителността на етапите също зависят от това дали лицето получава лечение и ако „да“, тогава какви лекарства.

4 етапа на HIV инфекцията

• Инкубационният период („прозоречен период“) е времето от момента на заразяването до появата на антитела (защитни протеини на имунната система) срещу вируса в човешката кръв. През този период инфекцията не се проявява по никакъв начин, всички тестове са отрицателни, но човекът вече е заразен. Инкубационният период може да продължи до 3 месеца (средно 25 дни).
• Етап на първични прояви. Продължава средно 2-3 седмици и се характеризира с рязко увеличаване на количеството на вируса в кръвта. Това състояние се нарича "сероконверсионна болест", тъй като по това време антитела срещу вируса се появяват в кръвта в количества, достатъчни, за да бъдат открити по време на тестване. Този период не се проявява по никакъв начин при повечето хора, но 20-30% могат да изпитат грипоподобни симптоми: треска, подути лимфни възли, главоболие, болки в гърлото, неразположение, умора и болки в мускулите. Това състояние отзвучава след 2-4 седмици без никакво лечение.
• Безсимптомен период. Настъпва след края на първичните прояви на инфекцията и продължава средно 10 години, ако не се лекува. През този период имунната система се бори с вируса в човешкото тяло: броят на вирусните частици постепенно се увеличава и имунитетът намалява. До края на този етап заразените индивиди изпитват увеличени лимфни възли, нощно изпотяване, общо неразположение и се появяват първите прояви на опортюнистични инфекции, които се появяват при хората, със силно отслабена имунна система. Тези инфекции се причиняват от микроорганизми, които ни заобикалят и не причиняват инфекции при здрави хора. Отслабената имунна система може също да доведе до развитие на други заболявания, като рак.
• СПИН е последният стадий на това заболяване и се характеризира с появата на редица заболявания, дължащи се на отслабване на имунната система на организма. Обикновено пациентите имат много нисък брой на CD4 T; една или повече тежки опортюнистични инфекции (Pneumocystis пневмония, тежка гъбична инфекция, туберкулоза и др.), които причиняват смърт, ако не се лекуват; онкологични заболявания; енцефалопатия (увреждане на мозъка, придружено от развитие на деменция).

Основният метод за лабораторна диагностика е откриването на антитела срещу вируса с помощта на ензимен имуноанализ.

Процедурата за провеждане на лабораторни изследвания за наличие на антигени на вируса на човешката имунна недостатъчност и антитела към този вирус е строго регламентирана от заповеди на Министерството на здравеопазването на Руската федерация и включва:

• етап на изследване за скрининг (селекция) с използване на одобрени за използване методи за ензимен имуноанализ (ELISA);
• етап на проверка (потвърждаване) изследване по метода на имуноблот в лабораторията на градския център за СПИН.

Лабораторната диагностика на наличието на вируса на имунната недостатъчност при деца, родени от майки, заразени с този вирус, има свои собствени характеристики. Майчините антитела срещу вируса (клас Ig G) могат да циркулират в кръвта на децата до 15 месеца от раждането. Липсата на антитела срещу вируса при новородени не означава, че той не е проникнал през плацентарната бариера. Децата на майки, заразени с вируса на имунната недостатъчност, подлежат на лабораторно диагностично изследване в рамките на 36 месеца след раждането.

До получаване на положителен резултат от имуноблота и при отрицателен резултат от изследването лицето се счита за здраво и с него не се провеждат противоепидемични мерки.

Материалът за изследване на антитела срещу вируса на имунната недостатъчност е венозна кръв, която е за предпочитане да се дарява на празен стомах.

Разбира се, тестването за наличие на вируса е доброволен въпрос за всеки човек. Тестовете за носителство на вируса на имунната недостатъчност не могат да се предписват принудително, без съгласието на пациента. Но също така трябва да разберете, че колкото по-рано се постави правилната диагноза, толкова по-голям е шансът да живеете дълъг и пълноценен живот, дори ако сте носител.

Показания:

• подути лимфни възли в повече от две области;
• левкопения с лимфопения;
• нощно изпотяване;
• внезапна загуба на тегло по неизвестна причина;
• диария за повече от три седмици с неизвестна причина;
• треска с неизвестна причина;
• планиране на бременност;
• предоперативна подготовка, хоспитализация;
• идентифициране на следните инфекции или техните комбинации: туберкулоза, манифестна токсоплазмоза, често рецидивираща херпесна вирусна инфекция, кандидоза на вътрешните органи, повтаряща се невралгия херпес зостер, пневмония, причинена от микоплазми, пневмоцисти или легионела;
• Сарком на Капоши в млада възраст;
• случаен секс.

Правила за регистрация за ХИВ:
Заявленията за изследване в DNAOM се попълват с помощта на паспорт или документ, който го замества (миграционна карта, временна регистрация по местоживеене, лична карта на военен персонал, удостоверение от паспортната служба в случай на загуба на паспорт, регистрационна карта от хотел) . Представеният документ трябва задължително да съдържа информация за временна или постоянна регистрация в Руската федерация и снимка. При липса на паспорт (документ, който го замества), пациентът има право да попълни анонимно заявление за даряване на биоматериал. При анонимен преглед, заявление и проба от биоматериал, получени от клиента, се присвоява номер, който е известен само на пациента и медицинския персонал, който е направил поръчката.

Резултатите от анонимно проведени изследвания не могат да се предоставят за хоспитализация, професионални прегледи и не подлежат на регистрация в ОРУИБ.

Тълкуване на резултатите
Тестът за антитела срещу HIV 1/2 е качествен. Ако няма антитела, отговорът е „отрицателен“. Ако се открият антитела срещу HIV, тестът се повтаря в друга серия. Ако положителният резултат от ензимно-свързания имуносорбентен тест се повтори, пробата се изпраща за изследване с помощта на потвърдителния имуноблот метод, който е „златен стандарт“ при диагностицирането на HIV.

Положителен резултат:

• HIV инфекция;
• фалшив положителен резултат, изискващ повторни или допълнителни изследвания*;
• проучването не е информативно при деца под 18 месеца, родени от HIV-инфектирани майки.

Отрицателен резултат:

• не е заразен (спазени са диагностичните срокове за анализ);
• серонегативна версия на инфекцията (антитела се произвеждат късно);
• терминален стадий на СПИН (образуването на антитела срещу HIV е нарушено);
• изследването не е информативно (диагностичните срокове не са спазени).

Уместността на идентифицирането на заразени с ХИВ лица в ранните етапи на инфекцията се определя от необходимостта от провеждане на по-ефективно епидемиологично проучване, своевременно организиране на необходимите превантивни мерки сред контактните лица, както и възможното използване на кратък цикъл на антиретровирусна терапия за намаляване на вирусния товар за подобряване на прогнозата на заболяването. Навременното информиране на пациента за инфекцията помага за намаляване на риска от предаване на болестта и евентуалното му участие в донорството.

Диагнозата HIV инфекция преди появата на положителен резултат от имуноблотинг (IB) се потвърждава чрез откриване на p24 антиген и/или HIV нуклеинова киселина в кръвния серум на пациента.

Определянето на антигена p24 с помощта на ензимно-свързан имуносорбентен анализ (ELISA) е прост и икономичен начин за доказване на наличието на вирусен протеин в кръвта на пациента поради интензивна вирусна репликация през първите седмици след инфекцията. Тестът за антиген p24 е достъпен за лаборатории с рутинни възможности за ELISA. В сравнение с определянето на вирусния товар чрез метода на полимеразна верижна реакция, той е по-евтин и трудоемък. Въпреки факта, че стратегията за определяне на инфекцията в серонегативния период е известна, този тест все още не е включен в алгоритъма за диагностициране на ХИВ. Известно е, че най-високият процент на откриване на p24 се наблюдава в серуми със съмнителни резултати от IB. Доказано е обаче, че тест системите със стандартен аналитичен праг на чувствителност (10 pg/ml) имат недостатъчна диагностична чувствителност и прогностична значимост на открития p24 за включване в рутинния диагностичен процес. В тази връзка голям интерес представлява разработването и внедряването на тестова система за антиген p24 с повишена аналитична чувствителност.

Целта на работата е да се оцени прогностичната значимост на откриването на HIV p24 антигена при използване на тестови системи с различни прагове на аналитична чувствителност при лица със съмнителни резултати от IB.

В ретроспективно проучване на серуми, които имат неопределен резултат за антитела срещу HIV при IB, използването на тестова система за p24 антиген с аналитичен праг на чувствителност от 0,5 pg/ml идентифицира 50% от заразените пациенти и използването на тест система, откриваща 8 pg/ml - 22.9%. Използването на допълнителен набор от реагенти за унищожаване на имунния комплекс позволява да се увеличи откриването на р24 антиген до 55,3%. Прогностичната значимост на наличието на HIV инфекция с допълнително изследване за р24 антиген е 91,7-96%. Въвеждането на допълнителен HIV p24 антигенен тест с аналитична чувствителност от 0,5 pg/ml в диагностичния алгоритъм на HIV прави възможно потвърждаването на диагнозата HIV в ранен стадий на заболяването в най-малко 13% от случаите при лица с неопределен IB резултат. (Вижте статията: Neshumaev D.A. et al. „Прогностично значение на откриването на HIV p24 антиген с помощта на тестови системи с повишена аналитична чувствителност“).

"Клинична лабораторна диагностика", 2009, № 2, стр. 40 - 42.

СПИН е заболяване, при което човешката имунна система не е в състояние да защити тялото от животозастрашаващи опортюнистични инфекции и рак. ХИВ заразява Т-лимфоцитите чрез вмъкване на част от вирусна ДНК в генома на заразеното лице.

Без да получават антиретровирусна терапия, 50% от заразените с ХИВ развиват СПИН 10 години след заразяването. Смъртта настъпва от опортюнистични (проявяващи се чрез намален имунитет) инфекции или злокачествени заболявания.

Антителата срещу HIV 1.2 обикновено се появяват в серума 12 седмици след инфекцията, рядко (в 5-9% от случаите) - по-късно.

Антигенът p24 HIV 1.2, открит в кръвния серум, показва ранен стадий на заболяването. През първите няколко седмици след инфекцията, количеството на вируса и р24 антигена в кръвта нараства бързо. Веднага след като започнат да се произвеждат антитела срещу ХИВ 1.2, нивото на антигена p24 започва да намалява. Определянето на антигена p24 дава възможност да се диагностицира HIV инфекцията в ранните стадии на инфекцията, преди производството на антитела.

Едновременното откриване на антитела срещу вируса HIV-1.2 и антигена на вируса p24 повишава диагностичната стойност на изследването.

• Следните тестове се вземат строго на празен стомах (поне 12 часа след последното хранене):

Общ клиничен кръвен тест; определяне на кръвна група и Rh фактор;

Биохимични изследвания (глюкоза, холестерол, триглицериди, ALT, AST и др.);

Изследване на системата за хемостаза (APTT, протромбин, фибриноген и др.);

Туморни маркери.