Кровь по аво. Генетика группы крови и их полиморфизмы

Анализ на антитела по системе ABO – общеклиническое исследование, направленное на выявление в крови альфа- либо бета-изогемагглютининов – естественных антител класса IgG к отсутствующим антигенам A или В. Определяются в случае несовместимости матери и плода по антигенам системы ABO. Выявление антигрупповых антител в крови беременной необходимо для диагностики межгруппового конфликта и своевременного проведения лечебных мероприятий с целью предупреждения выкидыша, преждевременных родов, гемолитической болезни плода (новорожденного). Забор крови производится из вены. Метод исследования – реакция агглютинации. В норме (при низкой вероятности межгруппового конфликта) результат отрицательный. Готовность результатов анализа – один рабочий день.

Антитела по системе ABO или антигрупповые антитела – иммуноглобулины, которые вырабатываются при появлении в крови антигена, несовместимого в групповом отношении. Группа крови зависит от присутствующих на внешней стороне мембраны эритроцитов специальных белков – агглютиногенов. В медицинской практике определяются агглютиногены A, B, и D. У людей с I группой крови эритроциты без белков A и B, при II группе – с белками типа A, при III группе – с белками типа B, при IV группе – с белками типов A и B. Наличие или отсутствие агглютиногена D определяет положительный или отрицательный резус-фактор. Антигрупповые антитела производятся организмом, когда в кровоток попадают эритроциты с незнакомыми агглютиногенами A или B. Реакция этих антител приводит к разрушению чужеродных эритроцитов.

Производство антител по системе ABO возможно при переливаниях крови, при смешении крови плода и матери. Теоретически групповая несовместимость крови определяется в следующих случаях: если реципиент (мать) имеет I или III группу крови, а донор (плод) – II; если реципиент (мать) имеет I или II группу крови, а донор (плод) – III; если реципиент (мать) имеет I, II или III группу крови, а донор (плод) – IV. На практике выработка антигрупповых антител чаще всего отмечается у женщин с I группой крови, так как она не содержит агглютиногенов A и B и при этом является самой распространенной. Иммуноконфликт в период беременности способен привести к эритробластозу новорожденного, при переливаниях крови – к внутрисосудистому гемолизу эритроцитов. В группе риска находятся реципиенты после нескольких трансфузий, а также беременные, перенесшие переливания крови, искусственные и естественные прерывания, у которых имеются дети с гемолитической болезнью.

Для анализа крови на антитела по системе ABO забор крови производится из вены. Наиболее распространенным методом исследования является реакция агглютинации с использованием диффузного геля. Результаты находят применение в акушерстве и гинекологии при планировании и мониторинге беременности, а также в хирургии и реаниматологии при проведении гемотрансфузий.

Показания

Исследование крови на антитела по системе ABO показано женщинам в период беременности, если существует вероятность развития иммунологического группового конфликта. При определении риска учитывается сочетание групп крови родителей. Наличие антител в крови чаще всего определяется у беременных с I группой, если от отца ребенку передалась II, III или IV. Также вероятностно конфликтными являются сочетания II материнская + III или IV отцовская, III материнская + II или IV отцовская. При назначении анализа учитываются и другие факторы риска: нарушение проницаемости плаценты, травмы живота, инвазивные диагностические процедуры (например, амниоцентез). Во всех этих случаях возможно попадание эритроцитов плода в кровь матери с последующей выработкой антигрупповых антител. Клинически определить наличие иммунологического конфликта такого типа нельзя – женщина не чувствует никаких изменений. Но если не отслеживать титр антител, то существует риск развития у ребенка гемолитической болезни, которая проявляется отеками, желтушностью, анемией, увеличением селезенки и печени, в тяжелых случаях – отставаниями в развитии.

Еще одним показанием для исследования крови на антитела по системе ABO являются осложнения после гемотрансфузии. При групповом конфликте часто развивается острый внутрисосудистый гемолиз – реакция разрушения эритроцитов введенной крови. Он проявляется жжением в месте инфузии, лихорадкой, ознобом, болью в спине и в туловище, паническими приступами. При мониторинге беременности решение о проведении анализа принимается врачом с учетом совокупности факторов риска развития группового конфликта. Исследование крови на антитела по системе ABO не является скрининговым в отличие, например, от теста на антиэритроцитарные антитела. Это связано с тем, что иммунологический конфликт такого типа развивается нечасто, а гемолитическая болезнь протекает в легкой форме и в основном проявляется желтухой новорожденных

Подготовка к анализу и забор материала

Материалом для исследования на антитела по системе ABO является венозная кровь. Процедура забора, как правило, выполняется в утренние часы. Специальных требований к подготовке нет, желательно сдавать кровь спустя 4-6 часов после принятия пищи. Последние 30 минут необходимо провести в спокойной обстановке, без физического и эмоционального напряжения. Кровь берется из локтевой вены с помощью вакуумной системы без антикоагулянта или с активатором свертывания. Хранится при температуре от 2 до 8° C, в течение 2-3 часов доставляется в лабораторию.

Антитела по системе ABO определяются в крови методом агглютинации. Процедура исследования состоит из нескольких этапов. Сначала исследуемый образец добавляют в микропробирки с гелем фильтрации. Затем их на некоторое время устанавливают в инкубатор, после – в центрифугу. Эритроциты, которые соединены с антигрупповыми антителами, имеют больший размер и поэтому не проходят сквозь гель, а остаются на его поверхности. Свободные эритроциты в результате центрифугирования оседают на дно пробирки. По распределению эритроцитов оценивается наличие антител в образце. Подготовка результатов исследования занимает 1 день.

Нормальные значения

Антитела системы ABO представлены двумя типами – α и β. Первые вырабатываются в агглютиногену A, вторые – к агглютиногену B. Оба типа антител могут быть естественными и иммунными, то есть приобретенными в результате сенсибилизации. В норме титр естественных α-антител составляет от 1:8 до 1:256, титр естественных β-антител – от 1:8 до 1:128. Иммунные антигрупповые антитела в норме не обнаруживаются. Физиологическое снижение уровня естественных антител может определяться у детей и пожилых людей.

Повышение значений

Причиной повышения значений анализа на антитела по системе ABO является сенсибилизация организма, вызванная поступлением антигена, несовместимого по групповому признаку. В этих случаях повышаются титры естественных антигрупповых антител, иногда определяются иммунные антигрупповые антитела полной и неполной формы. Чаще всего отклонения такого характера диагностируются у беременных женщин с I группой крови, так как эритроциты не имеют агглютиногенов ни типа A, ни типа B, а частота встречаемости группы составляет 45%.

Снижение значений

Снижение значений анализа на антитела по системе ABO не имеет диагностического значения, его причинами могут стать некоторые патологии, например, агаммаглобулинемия, болезнь Ходжкина, хронический лимфоцитарный лейкоз. При отсутствии изоиммунизации специфическими факторами иммунные антигрупповые антитела отсутствуют, а титры естественных невысоки.

Лечение отклонений от нормы

Анализ крови на антитела по системе ABO имеет наибольшую прогностическую значимость при мониторинге беременностей у женщин с I группой крови. Его результаты позволяют выявить состояние сенсибилизации к групповым факторам и предупредить развитие иммунологического конфликта, приводящего к эритробластозу новорожденного. Если обнаружен повышенный титр естественных антигрупповых антител, определяются иммунные антитела, то необходимо обратиться за консультацией к ведущему беременность акушеру-гинекологу. Решение о необходимости и тактике терапии принимается специалистом индивидуально.

Про системы групп крови, пожалуй, слышали все, но у большинства людей знания заканчиваются сведениями о групповой несовместимости и о том, что при переливании можно вливать только одноименную группу крови. Как правило, для человека, не связанного с медициной, этих знаний бывает достаточно, а тем, кому интересны особенности подразделения по системе ABO и причины различия групп, можно ознакомиться с дополнительным материалом.

Принципы деления по ABO

Система ABO группы крови основана на различном содержании на поверхности эритроцитов агглютиногенов A и B. А также на присутствии в плазме агглютининов a и b.

Выделяется 4 группы крови АВО и характеристики каждой основаны на соотношении агглютиногенов и агглютининов:

1. I - эритроцит не несет на своей поверхности агглютиногенов, зато в кровеносном русле содержится оба вида агглютининов. В этом случае обозначается группа крови ab0 или 0 (I). Считается, что это самый «древний» вид крови.
2. II - эритроцитарная поверхность содержит компонент A, при этом в плазме выявляется агглютинин b, обозначением станет A (II).
3. III - эритроцит является носителем элемента B, при этом в плазме будет содержаться только b, и обозначаться это будет как B (III).
4. IV - на поверхности эритроцитов имеются агглютиногены A и B, но при этом в составе плазмы совсем нет агглютининов. Ее принято обозначать AB (IV). Есть мнение о том, что это самая «молодая» кровь.

Таким образом, в крови человека могут присутствовать сочетания:

Но никогда не встречается сочетаний Aa или Bb.

Ученые строят теории относительно того, как связана данная система с психологическим типом человека, предрасположенностью его к тем или иным патологиям и т. п.

Наличие одноименных агглютиногенов и агглютининов всегда провоцирует реакцию агглютинации, которая всегда заканчивается летальным исходом.

Именно агглютинация служит причиной гемотрансфузионного шока, который возникает при групповой несовместимости.

Немного о гемотрансфузионном шоке

Даже после того как была открыта система АВО группы крови, осложнения при гемотрансфузии раньше происходили довольно часто по причине того, что на ранних этапах не учитывалось значение агглютининов, а принимался во внимание только показатель агглютеногенов. Ранее считалось, что переливание группы крови АВ0 или 0 (I) допускается всем, в то время как AB (IV) можно вливать только для четвертой группы. Такое ошибочное мнение служило основной причиной осложнений после гемотрансфузии.

Постепенно в процессе лабораторных исследований было обнаружено, что одноименные агглютиногены и агглютинины при попадании в общей кровоток провоцируют следующую реакцию:

• агглютинацию (склеивание) эритроцитов;
• после агглютинации происходит гемолиз (разрушение) эритроцита и сильное повышение количества свободного гемоглобина в плазме;
• изменение кровяной формулы приводит к эритропении и общей интоксикации организма из-за избыточного количества свободного гемоглобина.

Такое состояние называется гемотрансфузионным шоком и часто заканчивается гибелью больного из-за того, что нарушается полноценное кровоснабжение тканей, а организм из-за недостатка кислорода испытывает сильную гипоксию. В первую очередь от недостатка питания страдают жизненно важные органы - сердце и мозг.

До того как медиками были открыты и исследованы группы крови системы АВО, а также принципы из совместимости, гибель пациентов после переливания случалась довольно часто из-за гемотрансфузионного шока, возникавшего на фоне массивного разрушения эритроцитов.

Дополнительная информация о рисках переливания

Даже полная совместимость донора и рецепиента крови по системе АВО не дает 100% гарантии, что гемотрансфузия произойдет без осложнений.

Возникновение осложнений может быть связано со следующим:

1. Агглютиногены или агглютинины донора сильно отличаются по своему составу от одноименных у рецепиента и при попадании в организм вызывают иммунную реакцию. Несмотря на основное деление на группы, состав крови у каждого человека индивидуален, именно эти индивидуальные особенности вызывают иммунологические реакции при переливании.
2. Сильное различие в составе плазмы. Лабораторные исследования проверяют только соотношения основных биохимических компонентов, многие показатели при этом не учитываются. Такое несовпадение также может послужить причиной острого иммунного ответа.

Но бывают ситуации, когда переливание необходимо по жизненным показателям.

К ним относятся:

• тяжелые формы анемий;
• обширные кровопотери при травмах или операциях:
• снижение свертываемости;
• онкологические процессы;
• тяжелые ожоги.

Современная медицина в зависимости от возникшего состояния больного рекомендует делать не полную гемотрансфузию, а вливать пациенту отдельные компоненты крови:

1. Эритроцитарная масса. Готовится из донорской крови и содержит только «отмытые» эритроциты, несущие минимум информации о доноре. Эритроцитарная масса применяется для лечения анемий, онкологических процессов системы кроветворения или при кровопотерях.
2. Тромбоцитарная масса. Обезличенные донорские тромбоциты переливают при нарушении свертываемости.
3. Лейкоцитарная масса. Помогает восполнить количество лейкоцитов при онкологических заболеваниях, связанных с угнетением лейкоцитарного ростка и при других состояниях, сопровождающихся лейкопенией.
4. Плазма. Вливание плазмы проводится в основном при сильных ожогах, во время других заболеваний плазмотрансфузия применяется редко.

Для подбора совместимых элементов крови также используется система АВО, но при этом гемотрансфузионные осложнения встречаются значительно реже.

Система АВО групп крови важна при подборе донора для больного и позволяет снизить риск возникновения гемотрансфузионного шока.

Во всех других случаях сочетание агглютининов и агглютиногенов не влияет на общее состояние здоровья человека.

ОБЩИЕ ПОЛОЖЕНИЯ

Систему группы крови АВО составляют два групповых агглютиногена - А и В и два соответствующих агглютинина в плазме - альфа (анти-А) и бета (анти-В). Различные сочетания этих антигенов и антител образуют четыре группы крови: группа 0(1) - оба антигена отсутствуют; группа А(II) - на эритроцитах присутствует только антиген А; группа В(III) - на эритроцитах присутствует только антиген В; группа АВ (IV) - на эритроцитах присутствуют антигены А и В.

Уникальность системы АВО состоит в том, что в плазме у неиммунизированных людей имеются естественные антитела к отсутствующему на эритроцитах антигену: у лиц группы 0(1) - антитела к А и В; у лиц группы А(II) - анти-В-антитела; у лиц группы В(III) - анти-А-антитела; у лиц группы АВ(IV) нет антител к антигенам системы АВО.

В последующем тексте анти-А- и анти-В-антитела будут обозначаться как анти-А и анти-В.

Определение группы крови АВО проводят путем идентификации специфических антигенов и антител (двойная или перекрестная реакция). Анти-А и анти-В выявляют в сыворотке крови с помощью стандартных эритроцитов А(II) и В(III). Наличие или отсутствие на эритроцитах антигенов А и В устанавливают при помощи моноклональных или поликлональных антител (стандартных гемагглютинирующих сывороток) соответствующей специфичности.

Определение группы крови проводят дважды: первичное исследование - в лечебном отделении (бригаде заготовки крови); подтверждающее исследование - в лабораторном отделении. Алгоритм проведения иммуногематологических лабораторных исследований при переливании крови представлен на рис. 18.1.

Результат определения группы крови записывается в правом верхнем углу лицевого листа истории болезни или в донорский журнал (карту)с указанием даты и за подписью врача, производившего определение.

На северо-западе России распределение групп крови системы АВО в популяции следующее: группа 0(I) - 35%; группа А(II) - 35-40%; группа В(III) - 15-20%; группа АВ (IV) - 5-10%.

Следует отметить, что существуют различные виды (слабые варианты) как антигена А (в большей степени), так и антигена В. Наиболее часто встречаются виды антигена А - А 1 и А 2 . Распространенность антигена А 1 у лиц групп А(II) и АВ(IV) составляет 80%, а антигена А 2 - около 20%. Образцы крови с А 2 могут содержать анти-А 1 -антитела , взаимодействующие со стандартными эритроцитами группы А(II). Наличие анти-А 1 выявляется при перекрестном определении групп крови и при проведении пробы на индивидуальную совместимость.

Для дифференцированного определения вариантов антигена А (А 1 и А 2) необходимо использовать специфические реагенты (фитогемагглютинины или моноклональные антитела анти-А 1 . Пациентам групп А 2 (II) и А 2 В(IV) нужно переливать эритроцитосодержащие гемокомпоненты, соответственно, групп А 2 (II) и А 2 В(IV). Также могут быть рекомендованы трансфузии отмытых эритроцитов: 0(I) - пациентам с группой крови А 2 (II); 0(I) и В(III) - пациентам с группой крови А 2 В(II).

Таблица 18.4. Результаты определения группы крови АВО
Результаты исследования						Групповая принадлежность исследуемой крови
эритроцитов с реагентом			сыворотки (плазмы) со стандартными эритроцитами
анти-АВ	анти-А	анти-В	0(I)	А(II)	В (III)
-	-	-	-	+	+	0(I)
+	+	-	-	-	+	А(II)
+	-	+	-	+	-	В(III)
+	+	+	-	-	-	АВ(IV)
Обозначения : + - наличие агглютинации, - - отсутствие агглютинации

Определение групповой принадлежности крови по системе АВО

Группы крови определяют по стандартным сывороткам (простая реакция) и стандартным эритроцитам (двойная или перекрестная реакция).

Группу крови простой реакцией определяют обязательно двумя сериями стандартных изогемагглютинирующих сывороток.

• Ход определения [показать] .

  Определение группы крови производят при хорошем освещении и температуре от + 15 до + 25°С на планшетах. На левой стороне планшета надписывают 0(1), в середине - А(II), на правой стороне - В(III). В середине верхнего края планшета отмечают фамилию донора или номер исследуемой крови. Используют активные стандартные сыворотки трех групп (О, А, В) с титром не ниже 1:32, двух серий. Сыворотки располагают в специальных штативах в два ряда. Каждой сыворотке соответствует маркированная пипетка. Для дополнительного контроля используют сыворотку группы АВ(IV).

  На планшет наносят по одной - две капли стандартных сывороток в два ряда: сыворотку группы 0(1) - слева, сыворотку группы А(II) - в середину, сыворотку группы В(III) - справа.

  Капли крови из пальца или пробирки наносят пипеткой или стеклянной палочкой около каждой капли сыворотки и смешивают палочкой. Количество крови должно быть в 8-10 раз меньше, чем сыворотки. После смешивания тарелку или планшет осторожно покачивают в руках, что способствует более быстрой и четкой агглютинации эритроцитов. По мере наступления агглютинации, но не ранее чем через 3 мин, к каплям сыворотки с эритроцитами, где наступила агглютинация, добавляют по одной капле 0,9% раствора хлорида натрия и продолжают наблюдение до истечения 5 мин. Через 5 мин читают реакцию в проходящем свете.

  Если агглютинация нечеткая, к смеси сыворотки и крови дополнительно добавляют по одной капле 0,9% раствора хлорида натрия, после чего дают заключение о групповой принадлежности (табл. 18.4).

• Результаты реакции [показать] .
  1. Отсутствие агглютинации во всех трех каплях указывает на то, что в исследуемой крови нет агглютиногена, то есть кровь относится к группе 0(I).
  2. Наступление агглютинации в каплях с сыворотками 0(I) и В(III) указывает на то, что в крови имеется аггглютиноген А, то есть кровь относится к группе А(II).
  3. Наличие агглютинации в каплях с сыворотками группы 0(I) и А(II) указывает на то, что в исследуемой крови имеется агглютиноген В, то есть кровь группы В(III).
  4. Агглютинация во всех трех каплях указывает на наличие в исследуемой крови агглютиногенов А и В, то есть кровь относится к группе АВ(IV). Однако в этом случае, учитывая, что агглютинация со всеми сыворотками возможна за счет неспецифической реакции, необходимо нанести на планшет или тарелку две-три капли стандартной сыворотки группы АВ(IV) и добавить к ним 1 каплю исследуемой крови. Сыворотку и кровь перемешивают и результат реакции наблюдают в течение 5 мин.

     Если агглютинация не наступила, то исследуемую кровь относят к группе АВ(IV). Если же агглютинация появляется с сывороткой группы АВ(IV), значит, реакция неспецифическая. При слабой агглютинации и во всех сомнительных случаях кровь заново проверяют со стандартными сыворотками других серий.

Определение группы крови АВО двойной реакцией
(по стандартным сывороткам и стандартным эритроцитам)

Стандартные эритроциты представляют собой 10-20% взвесь свежих нативных эритроцитов (или отмытых от консерванта тест-клеток) группы 0(I), А(II) и В(III) в 0,9% растворе хлорида натрия или цитратно-солевом растворе. Нативные стандартные эритроциты могут быть использованы в течение 2-3 дней при условии хранения их в изотоническом солевом растворе при температуре +4°С. Консервированные стандартные эритроциты хранят при температуре +4°С в течение 2-х месяцев и отмывают от консервирующего раствора перед использованием.

Ампулы или флаконы со стандартными сыворотками и стандартными эритроцитами располагают в специальных штативах с соответствующей маркировкой. Для работы с типирующими реагентами используют сухие чистые пипетки, отдельные для каждого реагента. Для промывания стеклянных (пластмассовых) палочек и пипеток подготавливают стаканы с 0,9% раствором хлорида натрия.

Для определения группы берут 3-5 мл крови в пробирку без стабилизатора. Кровь должна отстояться в течение 1,5-2 ч при температуре + 15-25° С.

• Ход определения [показать] .

  На планшет наносят по две капли (0,1 мл) стандартных сывороток групп 0(I), А(II), В(III) двух серий. Соответственно каждой группе сывороток располагают по одной маленькой капле (0,01 мл) стандартных эритроцитов групп 0(I), А(II), В(III). В стандартные сыворотки добавляют по одной капле исследуемой крови, а в стандартные эритроциты - по две капли исследуемой сыворотки. Количество крови должно быть в 8-10 раз меньше, чем сыворотки. Капли перемешивают стеклянной палочкой и, покачивая планшет в руках в течение 5 мин, следят за наступлением агглютинации. Если агглютинация нечеткая, к смеси сыворотки и крови дополнительно добавляют по одной капле 0,9% раствора хлорида натрия (0,1 мл), после чего делают заключение о групповой принадлежности (табл. 18.4).

• Оценка результатов определения группы крови системы АВО [показать] .
  1. Наличие агглютинации со стандартными эритроцитами А и В и отсутствие агглютинации в трех стандартных сыворотках двух серий указывает на то, что в исследуемой сыворотке присутствуют оба агглютинина - альфа и бета, а в исследуемых эритроцитах нет агглютиногенов, то есть кровь относится к группе 0(I).
  2. Наличие агглютинации со стандартными сыворотками групп 0(I), В(III) и со стандартными эритроцитами группы В(III) указывает на то, что в исследуемых эритроцитах имеется агглютиноген А, а в исследуемой сыворотке - агглютинин бета. Следовательно, кровь относится к группе А(II).
  3. Наличие агглютинации со стандартными сыворотками групп 0(I), А(II) и со стандартными эритроцитами группы А(II) указывает на то, что в исследуемых эритроцитах имеется агглютиноген В, а в исследуемой сыворотке - агглютинин альфа. Следовательно кровь относится к группе В(III).
  4. Наличие агглютинации со всеми стандартными сыворотками и отсутствие агглютинации со всеми стандартными эритроцитами указывает на то, что в исследуемых эритроцитах имеются оба агглютинина, то есть кровь относится к группе АВ(IV).

Определение групповой принадлежности крови
с использованием цоликлонов анти-А и анти-В

Цоликлоны анти-А и анти-В (моноклональные антитела к антигенам А и В) предназначены для определения группы крови системы АВО человека взамен стандартных изогемагглютинирующих сывороток. Для каждого определения группы крови применяют по одной серии реагента анти-А и анти-В.

• Ход определения [показать] .

  На планшет (пластинку) наносят по одной большой капле цоликлонов анти-А и анти-В (0,1 мл) под соответствующими надписями: "Анти-А" или "Анти-В". Рядом помещают по одной маленькой капле исследуемой крови (соотношение кровыреагент - 1:10), затем реагент и кровь смешивают и наблюдают за ходом реакции при легком покачивании планшета или пластинки.

  Агглютинация с цоликлонами анти-А и анти-В обычно наступает в первые 5-10 с. Наблюдение следует вести 2,5 мин, ввиду возможности более позднего наступления агглютинации с эритроцитами, содержащими слабые разновидности антигенов А или В.

• Оценка результатов реакции агглютинации с цоликлонами анти-А и анти-В представлена в табл. 18.4, в которую также включены результаты определения агглютининов в сыворотке доноров с помощью стандартных эритроцитов.

При подозрении на спонтанную агглютинацию у лиц с группой крови АВ(IV) проводят контрольное исследование с 0,9% раствором хлорида натрия. Реакция должна быть отрицательной.

Цоликлоны анти-А (розового цвета) и анти-В (синего цвета) выпускаются как в нативной, так и лиофилизированной форме в ампулах по 20, 50, 100 и 200 доз с растворителем, приложенным к каждой ампуле, по 2, 5, 10, 20 мл соответственно.

Дополнительным контролем правильности определения группы крови АВО реагентами анти-А и анти-В является моноклональный реагент анти-АВ ("Гематолог", Москва). Реагент анти-АВ целесообразно использовать параллельно как с иммунными поликлональными сыворотками, так и с моноклональными реагентами. В результате реакции с реагентом анти-АВ развивается агглютинация эритроцитов групп А(II), В(III) и АВ(IV); у эритроцитов группы 0(I) агглютинация отсутствует.

ОШИБКИ ПРИ ОПРЕДЕЛЕНИИ ГРУППОВОЙ ПРИНАДЛЕЖНОСТИ

Ошибки при определении групп крови могут зависеть от трех причин:

1. технических;
2. неполноценности стандартных сывороток и стандартных эритроцитов;
3. биологических особенностей исследуемой крови.

К ошибкам по техническим причинам относятся:

• а) неправильное расположение сывороток на планшете;
• б) неправильные количественные соотношения сывороток и эритроцитов;
• в) применение недостаточно чистых планшетов и других предметов, соприкасающихся с кровью. Для каждой сыворотки должна быть отдельная пипетка; для промывания пипеток следует применять только 0,9% раствор хлорида натрия;
• г) неправильная запись исследуемой крови;
• д) несоблюдение положенного для реакции агглютинации времени; при поспешности, когда реакцию учитывают до истечения 5 мин, агглютинация может не наступить, если в исследуемой крови имеются слабые агглютиногены; при передержанной более 5 мин реакции может произойти подсыхание капель с краев, симулирующее агглютинацию, что также поведет к ошибочному заключению;
• е) отсутствие агглютинации из-за высокой (выше 25°С) температуры окружающего воздуха. Во избежание этой ошибки целесообразно использовать специально приготовленные сыворотки для работы в условиях жаркого климата; производить определение групп крови на тарелке или пластмассовом подносе, внешняя поверхность дна которых опущена в холодную воду.
• ж) неправильное центрифугирование: недостаточное может привести к ложноотрицательному результату, а избыточное - к ложноположительному.

Ошибки, зависящие от применения неполноценных стандартных сывороток и стандартных эритроцитов:

• а) слабые стандартные сыворотки с титром ниже чем 1:32 или с истекшим сроком годности могут вызывать позднюю и слабую агглютинацию;
• б) применение негодных стандартных сывороток или эритроцитов, которые были приготовлены нестерильно и недостаточно законсервированы, ведет к возникновению неспецифической "бактериальной" агглютинации.

Ошибки, зависящие от биологических особенностей исследуемой крови:

Ошибки, зависящие от биологических особенностей исследуемых эритроцитов:

• а) поздняя и слабая агглютинация объясняется "слабыми" формами антигенов, эритроцитов, чаще - наличием в группах А и АВ слабого агглютиногена А 2 . При этом, в случае определения группы крови без исследования сыворотки на наличие агглютининов (простая реакция) могут наблюдаться ошибки, вследствие которых кровь группы А 2 В определяют как группу В(III), а кровь А 2 - как группу 0(I). Поэтому, во избежание ошибок, определение группы крови как доноров, так и реципиентов необходимо проводить с использованием стандартных эритроцитов (двойная или перекрестная реакция). Для идентификации агглютиногена А 2 рекомендуется повторить исследование с другими видами (сериями) реагентов, используя другую лабораторную посуду, с увеличением времени регистрации реакции.

  Специфическими реагентами уточнения группы крови при наличии слабых вариантов антигена А (А 1 , А 2 , А 3) методом прямой реакции агглютинации являются цоликлон анти-А сл и реагент анти-А).

• б) "панагглютинация" или "аутоагглютинация", то есть способность крови давать одинаковую неспецифическую агглютинацию со всеми сыворотками и даже со своей собственной. Интенсивность подобной реакции после 5 мин ослабевает, в то время как истинная агглютинация усиливается. Наиболее часто встречается у гематологических, онкологических больных, обожженных и др. Для контроля рекомендуется оценить, происходит ли агглютинация тестируемых эритроцитов в стандартной сыворотке группы АВ (IV) и физиологическом растворе.

  Группа крови при "панагглютинации" может быть определена после трехкратного отмывания эритроцитов. Для устранения неспецифической агглютинации планшет помещают в термостат при температуре +37°С на 5 мин, после чего неспецифическая агглютинация исчезает, а истинная остается. Целесообразно повторить определение с использованием моноклональных антител, постановки пробы Кумбса.

  В том случае, когда отмывание эритроцитов не дает желаемого результата, необходимо произвести повторное взятие образца крови в предварительно согретую пробирку, поместить пробу в термоконтейнер для поддержания температуры +37°С и доставить в лабораторию на исследование. Определение группы крови необходимо производить при температуре +37°С, для чего используют предварительно подогретые реактивы, физиологический раствор и планшет.

• в) эритроциты тестируемой крови складываются в "монетные столбики", которые при макроскопии можно принять за агглютинаты. Прибавление 1-2 капель изотонического раствора хлорида натрия с последующим мягким покачиванием планшета, как правило, уничтожает "монетные столбики".
• г) смешанная или неполная агглютинация: часть эритроцитов агглютинирует, а часть остается свободной. Наблюдается у пациентов групп А(II), В(III) и АВ(IV) после трансплантации костного мозга или в течение первых трех месяцев после переливания крови группы 0(I). Разнородность эритроцитов периферической крови четко верифицируется в гелевом тесте DiaMed.

Ошибки, зависящие от биологических особенностей исследуемой сыворотки:

• а) выявление антител другой специфичности при рутинном тестировании является результатом предшествующей сенсибилизации. Целесообразно определить специфичность антител и подобрать типированные эритроциты без антигена, к которому выявлена иммунизация. Иммунизированному реципиенту обязателен индивидуальный подбор совместимой донорской крови;
• б) при выявлении образования "монетных столбиков" стандартных эритроцитов в присутствии тестируемой сыворотки аномальный результат целесообразно подвердить, используя стандартные эритроциты группы 0(I). Для дифференцировки "монетных столбиков" и истинных агглютинатов добавляют 1-2 капли изотонического раствора хлорида натрия и покачивают планшет, при этом "монетные столбики" разрушаются;
• в) отсутствие анти-А- или анти-В-антител. Возможно у новорожденных и пациентов с угнетением гуморального иммунитета;