Диагностикум из вируса клещевого энцефалита. Способ получения диагностикума клещевого энцефалита Диагностикум из вируса клещевого энцефалита

Содержит в высоком титре антитела против вируса клещевого энцефалита. Получают из сыворотки крови лошадей, гипериммунизированных вирусом клещевого энцефалита. Применяется для экстренной профилактики и лечения больных клещевым энцефалитом.

ФСМЕ-Булин. Человеческий иммуноглобулин против клещевого энцефалита (Baxter AG, Австрия)

Содержит антитела, нейтрализующие вирус клещевого энцефалита, стабилизатор – глицерин, консервант отсутствует. Применяется для экстренной профилактики и лечения больных клещевым энцефалитом.

Диагностические препараты

Сыворотки

Противооспенная сыворотка

Содержит антитела к вирусу натуральной оспы. Применяется для идентификации вируса в реакциях нейтрализации.

Антирабическая флюоресцирующая сыворотка

Содержит антитела к вирусу бешенства, меченые флюорохромом. Применяется для поиска возбудителя в РИФ.

Специфическая сыворотка против вируса клещевого энцефалита

Содержит антитела к вирусу клещевого энцефалита. Применяется для идентификации вируса в РТГА, РНГА и др.

Диагностикумы

Оспенный диагностикум

Содержит антигены вируса натуральной оспы. Применяется в серологическом методе диагностики.

Диагностикум из вируса клещевого энцефалита

Содержит антиген вируса, готовят из мозга мышей, зараженных вирусом клещевого энцефалита. Применяется для постановки реакции в серологическом методе.

Тест-система для выявления антител к ВИЧ в ИФА

Содержит специфический антиген ВИЧ и дополнительные ингредиенты, необходимые для постановки ИФА. Применяется на первом этапе серологической диагностики ВИЧ-инфекции.

Тест-система для постановки иммуноблоттинга при диагностике ВИЧ-инфекции

Содержит комплекс разделенных методом электрофореза фракций (антигенов) ВИЧ: gp41, gp120, p24, p31 и др. Применяется как подтверждающий тест на заключительном этапе серологической диагностики ВИЧ-инфекции.

Примеры описания иммунобиологических препаратов:

Преципитирующая сибиреязвенная сыворотка

КП: Сыворотка

ДН: At

С: Фракция сыворотки крови животных гипериммунизированных антигенами возбудителя сибирской язвы, содержащая преципитины

Пр: Экспресс-диагностика возбудителя в исследуемом материале

СПр: Для постановки реакции кольцеприципитации

Люминесцирующая брюшнотифозная сыворотка

КП: Сыворотка

ДН: At

С: Фракция сыворотки крови животных гипериммунизированных антигенами возбудителя брюшного тифа, содержащая антитела меченые ФИТЦ

Пр: Экспресс-диагностика брюшного тифа

СПр: Для постановки РИФ.

Чумной бактериофаг

КП: Бактериофаг

ДН: Бактериофаг

С: Стерильный фильтрат фаголизата бульонной культуры возбудителя чумы

Пр: Бактериологический метод диагностики

СПр: Для постановки реакция нарастания титра фага с целью обнаружения возбудителя чумы в объектах внешней среды

Бактериофаг дизентерийный поливалентный в таблетках

С кислотоустойчивым покрытием

КП: Бактериофаг

ДН: Бактериофаг

С: Стерильный фильтрат фаголизата бульонной культуры фаголизатов шигелл дизентерии Флекснера и Зонне

Пр: Экстренная профилактика и терапия бактериальной дизентерии

СПр: Перорально

Бруцеллезная вакцина лечебная

КП: Вакцина

C: Убитые нагреванием Brucella abortus и B. melitensis

Пр: Для лечения больных с острым, подострым и хроническим бруцеллезом

СПр: Парентерально

Коклюшная моновакцина

КП: Вакцина

ДН: Ag

С: Аттенуированные штаммы возбудителя коклюша

Пр: Для создания активного искусственного антимикробного иммунитета

СПр: Парентерально по эпидпоказаниям

Календарь профилактических прививок России, 2002 г. 1

Возраст	Наименование прививки
Новорожденные впервые 12 часов	Первая вакцинация – гепатит В
Новорожденные 3-7 день	Вакцинация – туберкулез
1 месяц	Вторая вакцинация – гепатит В 2
3 месяца	Первая вакцинация – дифтерия, столбняк, коклюш и полиомиелит
4,5 месяца	Вторая вакцинация – дифтерия, столбняк, коклюш, полиомиелит
6 месяцев	Третья вакцинация – дифтерия, столбняк, коклюш, полиомиелит Третья вакцинация – гепатит В
12 месяцев	Вакцинация – корь, эпидемический паротит, краснуха
18 месяцев	Первая ревакцинация – дифтерия, коклюш, столбняк, полиомиелит
20 месяцев	Вторая ревакцинация – полиомиелит
6 лет	Вторая вакцинация – корь, эпидемический паротит, краснуха
7 лет	Вторая ревакцинация – дифтерия и столбняк Первая ревакцинация – туберкулез 5
13 лет	Вакцинация против вирусного ГВ Вакцинация против краснухи (девочки) 4
14 лет	Третья ревакцинация – дифтерия и столбняк Ревакцинация – туберкулез 6
16 лет	Третья ревакцинация – полимиелит
Взрослые	Ревакцинация – дифтерия и столбняк каждые 10 лет после последней ревакцинации

Примечания:

1 Иммунизация в рамках Национального календаря прививок проводится вакцинами отечественного и зарубежного производства, зарегистрированными и разрешенными к применению в установленном порядке в соответствии с инструкцией по их применению.

2 Дети, родившиеся от матерей-носителей вируса гепатита В или больных гепатитом В в 3-м триместре беременности, прививаются по схеме 0-1-2-12 месяцев.

3 Вакцинация против гепатита В в 13 лет проводится ранее не привитым или получившим только одну прививку.

4 Вакцинацию против краснухи проводят девочкам в 13 лет, ранее не привитым или получившим только одну прививку.

5 Ревакцинация БЦЖ в 7 лет проводится туберкулиноотрицательным детям, не инфицированным микобактериями туберкулеза.

6 Ревакцинация БЦЖ в 14 лет проводится туберкулиноотрицательным детям, не инфицированным микобактериями туберкулеза и не получившим прививку в 7 лет.

7 Применяемые в рамках Национального календаря профилактические вакцины (кроме БЦЖ), можно вводить одновременно (или с интервалом 1 месяц) разными шприцами в разные участки тела.

8 При нарушении срока начала прививок, последние проводят по схемам, предусмотренным настоящим календарем и инструкциями по применению препаратов.

Библиографический список

1. Руководство для внеаудиторной работы студентов по иммунологическим препаратам: учеб. пособие / Л.А. Леванова, В.А. Громова, И.Е. Филиппова, Е.В. Сурикова, Л.П. Осипова, Ю.В. Захарова, В.П. Ковтун, Т.Э. Гаранина. – Кемерово: КемГМА, 2010 – 107 с.

2. Руководство к практическим занятиям по медицинской микробиологии, вирусологии и иммунологии» /Под редакцией академика РАМН О.В. Бухарина. М.: Медицина; УрО РАН, 2002 – 340 с.

3. Справочник по применению бактерийных и вирусных препаратов (под ред. С.Г. Дзагурова и Ф.Ф. Резепова). – М.: Медицина, 1975.

4. Борисов, Л.Б. Руководство к лабораторным занятиям по медицинской микробиологии, вирусологии и иммунологии: Учеб. пособие. / Л.Б. Борисов, Б.Н. Козьмин-Соколов, И.С. Фрейдлин. – М.: Медицина, 1993. – 240 с.

5. Клинико-иммунологическая эффективность иммунобиологических препаратов: (справочник) Т.И. Абакумова и др. под ред. М.П. Костинова и Н.А. Озерецкого – М.: Миклош, 2008 г. – 256 с.

ДИАГНОСТИКУМЫ (греч, diagnostikos способный распознавать) - взвеси обезвреженных микроорганизмов, используемые в качестве антигенов для серологических реакций. Опасность работы с живыми культурами, их способность к изменчивости и наличие широких антигенных связей делают целесообразным применение Д.- более стандартных и гомогенных препаратов, содержащих определенные антигенные компоненты.

С помощью Д. в реакциях агглютинации, пассивной (непрямой) гемагглютинации (РПГА) и др. выявляют специфические антитела в сыворотках людей и животных с целью постановки диагноза и изучения иммунного состояния организма.

Особенно широко используют Д. в лабораторных исследованиях при кишечных инфекциях. Однако общность антигенной структуры кишечных бактерий обусловливает наличие перекрестных реакций и требует дифференцированного выявления антител. С этой целью проводят избирательное подавление отдельных антигенов: с помощью фенола или формалина подавляют О-агглютинабельность, как предложили Феликс и Олицкий (A. Felix, L. Olitzki, 1928). Воздействуя спиртом по способу Вина и Зонтага или прогреванием по Кауффманну, получают O-диагностикумы с инактивированным жгутиковым антигеном. Еще более перспективно применение моно диагностикумов, принцип создания которых разработан Ф. Г. Бернгофом (1944). В этих препаратах содержится лишь один антигенный компонент, и они взаимодействуют только с определенными специфическими антителами.

Показана возможность сохранения свойств бактериальных Д. путем их лиофилизации (см.).

Д., применяемые для серодиагностики различных инфекций, принципиально сходны, однако отдельные виды этих препаратов имеют определенную специфику.

Общепризнано, что РПГА более чувствительна и специфична, чем бактериальная агглютинация. В качестве антигенов в РПГА применяют формалинизированные эритроциты, сенсибилизированные антигенами, полученными по методам Буавена и Вестфаля.

Возможно также использование эритроцитарных Д. для выявления антигена в тканях, выделениях больных, экстрактах различных веществ и т. п. В этих случаях применяют эритроциты, сенсибилизированные антителами,- «антительные диагностикумы».

Вирусные Д. применяют в основном в реакции связывания комплемента (РСК), РТГА и реакции нейтрализации. Готовят их из вируссодержащих культуральных жидкостей, обработанных (инактивированных) различными способами.

Краткая характеристика основных Д. и сфера их применения представлены в таблице.

Имеются также экспериментальные препараты, используемые в научной работе: эритроцитарные колидиагностикумы, дифтерийные эритроцитарные Д., гемагглютинирующие антигены вирусов паротита, коревой Гемагглютинирующий антиген и др.

Таблица. Краткая характеристика основных диагностикумов и цель их применения

Диагностикумы	Краткая характеристика	Цель применения (используется сыворотка обследуемого)
Бактериальные диагностикумы
Диагностикумы из бактерий семейства кишечных: шигелл Флекснера, Зонне, Ньюкасла; сальмонелл тифа (ОН, О), паратифа А и В, холеры су ис, тифимуриум, энтеритидис	Микробная взвесь (3 млрд. микробных тел в 1 мл), инактивированная 0,4-0,5% р-ром формалина	Постановка реакции агглютинации для уточнения клин, диагноза заболевания
Сальмонеллезные О-диагностикумы (2, 4, 7, 8, 9 и 3, 10)	Микробная взвесь, содержащая парциальный О-антиген (3 млрд. микробных тел в 1 мл),полученная из селекционированных штаммов, инактивированная 15% р-ром глицерина	Постановка реакции агглютинации для выявления О-антител при сальмонеллезах
Сальмонеллезные Н-монодиагностикумы (а, b, с, d, eh, с, k, lv, gm, p, st и антигены второй фазы - 1, 2, 5, 6, 7)	Микробная взвесь, содержащая компоненты жгутикового антигена 1-й и 2-й фаз (3 млрд. микробных тел в 1 мл), полученная из селекционированных штаммов, инактивированная 0,5% р-ром формалина	Постановка реакции агглютинации для выявления Н-антител с диагностической целью и для установления заболевания в анамнезе
Vi-диагностикум	Микробная взвесь (3 млрд. микробных тел в 1 мл) из штаммов, содержащих Vi-фактор, обработанная 0,4% р-ром формалина и 0,6% р-ром хлорида кальция	Постановка реакции агглютинации для выявления брюшнотифозного бактерионосительства
Бруцеллезный единый диагностикум	Взвесь бруцелл в 12% р-ре поваренной соли, окрашенная в синий цвет и инактивированная 0,5% р-ром фенола	Постановка реакции агглютинации (реакция Райта и реакция Хаддлсона для выявления инфицированных людей и животных- см.Бруцеллез, методы исследования)
Туляремийный диагностикум	Микробная взвесь (25 млрд. микробных тел в 1 мл) вакцинного штамма, инактивированная 0,5% р-ром формалина	Постановка объёмно-капельной реакция агглютинации на стекле для серодиагностики и изучения иммунного состояния привитых
Лептоспирозные диагностикумы	Лиофилизированная микробная взвесь 11 штаммов наиболее распространенных серотипов	Постановка РСК для подтверждения клин, диагноза заболевания
Риккетсиозные диагностикумы	Корпускулярные антигены - взвесь риккетсий, выращенная в желточных мешках куриных эмбрионов или легочнориккетсиозный материал от зараженных грызунов, обработанный эфиром, целитом или при дифференциальном центрифугировании	Постановка реакции агглютинации для дифференциальной диагностики риккетсиозов
Эритроцитарные диагностикумы
Эритроцитарные диагностикумы из шигелл Флекснера - Зонне	Формалинизированные эритроциты, сенсибилизированные антигенами Буавена, Вестфаля и др.	Постановка РПГА для уточнения клин» диагноза дизентерии
Эритроцитарный сальмонеллезный Vi-диагностикум	Формалинизированные эритроциты, сенсибилизированные очищенным Vi-антигеном	Постановка РПГА для выявления брюшнотифозного бактерионосительства
Эритроцитарные сальмонеллезные О-диагностикумы (1, 2, 12; 1, 4, 12; 6, 7; 6, 8; 1, 9, 12; 3, 10 и комплексный)	1% взвесь формалинизированных эритроцитов, сенсибилизированных антигенами Буавена, Вестфаля и др.	Постановка РПГА для уточнения клин» диагноза заболевания
Лиофилизированный туляремийный эритроцитарный диагностикум	Формалинизированные лиофилизированные эритроциты, сенсибилизированные туляремийным антигеном	Постановка РПГА для уточнения клин., диагноза туляремии, а также реакции нейтрализации антител для обнаружения: антигена
Вирусные диагностикумы
Антиген вируса осповакцины	Сухой препарат живого вируса осповакцины, культивированного на хорион-аллантоисной оболочке куриных эмбрионов	Постановка РПГА для выявления антигемагглютининов у больных и привитых
Аденовирусный специфический антиген	Готовят культивированием вируса 6 типа в культуре перевиваемых клеток А-1 (антиген, общий для всех аденовирусов)	Постановка РСК для выявления комплементсвязывающих антител в сыворотке больных
Диагностикумы клещевого энцефалита и этиологически сходных с ним заболеваний		Постановка РСК и РТГА для уточнения клин, диагноза заболевания
Орнитозный антиген	Сухой препарат из кипяченых вируссодержащих желточных мешков куриных эмбрионов, экстрагированных эфиром, осажденных ацетоном и инактивированных мертиолатом	Постановка РСК для диагностики орни-тоза людей, птиц и животных
Гриппозный диагностикум сухой	Аллантоисная жидкость развивающихся куриных эмбрионов, инфицированных одним из штаммов вируса гриппа типа А, В или С, инактивированная формалином, мертиолатом. В связи с изменчивостью антигенной структуры вируса гриппа предусмотрена частая смена производственных штаммов	Постановка РТГА для уточнения клин., диагноза заболевания
Парагриппозный диагностикум типа 1, 2, 3 для РТГА, сухой	Культуральная жидкость (почки эмбриона человека), содержащая один из штаммов вируса парагриппа, обработанная твином-80, эфиром и мертиолатом	Постановка РТГА для уточнения клин, диагноза заболевания

Библиография: Зуев А. С. Бактериальный vi-диагностикум для выявления хронических носителей брюшнотифозных бактерий, Журн, микр., эпид, и иммун., № 2, с. 51, 1959, библиогр.; Зуев А. С., Новоселова А. И. и Ликина И. В. Разработка методики производственного изготовления О-диагностикумов и Н-монодиагностикумов и применение их при серодиагностике салмонеллезов, там же, № 3, с. 42, 1956; Иммунология и профилактика кишечных инфекций, под ред. С. И. Диденко, с. 180, М., 1962; Каральник Б. В. Эритроцитарные диагностикумы, М., 1976; Руководство по микробиологической диагностике инфекционных болезней, под ред. К. И. Матвеева, с. 172, М., 1973; Субботина Ю. Л. и д р. Серологическая диагностика сальмонеллезов и антигенные связи в реакциях с эритроцитарными и бактериальными О-диагностикумами, Журн, микр., эпид, и иммун., № 3, с. 19, 1970, библиогр.

Л. Б. Богоявленская.

№ 26 Диагностикумы. Получение, применение.
В диагностических целях при обнаружении антител в сы­воротке крови больных, реконвалесцентов и бактерионосите­лей используются серологические реакции.
Для постановки таких реакций применяются диагностикумы - препараты, содержащие взвесь обезвреженных микроор­ганизмов или определенные антигены.
Необходимость использования диагностикумов для сероло­гических реакций связана не только с явным их преимущест­вом перед живыми культурами микробов (безопасность в ра­боте), но еще и потому, что для приготовления диагностикумов подбираются штаммы микроорганизмов с высокой чувст­вительностью к антителам и способностью длительно сохра­нять антигенные свойства.
Для инактивации микроорганизмов при приготовлении диагностикумов чаще всего используются химические вещест­ва, особенно формалин, являющийся лучшим консервантом. Убитые нагреванием микробы хуже сохраняют антигенные свойства и применяются редко.
В серологических реакциях (реакции агглютинации, реак­ции пассивной гемагглютинации, реакции связывания компле­мента, реакции торможения гемагглютинации) для выявления специфических антител применяются: бактериальные, эритроцитарные и вирусные диагностикумы.
Бактериальные диагностикумы могут содержать инактивированную микробную взвесь или отдельные антигенные компоненты бактерий: О, Н или Vi -антигены и используются в реакциях агглютинации.
Эритроцитарные диагностикумы представляют собой эритроциты (обработанные танином или формалином) с ад­сорбированными на них антигенами, извлеченными из бакте­рий, и применяются в РПГА (реакции пассивной гемагглютинации). В том случае, когда РПГА используется для выяв­ления антигена в выделениях больных, в тканях и др., при­меняют «антительные диагностикумы», т. е. эритроциты, сен­сибилизированные антителами.
Вирусные диагностикумы - препараты, содержащие инактированные вируссодержащие жидкости (культуральные, из куриных эмбрионов или организма животных, зараженных соответствующим вирусом), применяются в РСК (реакции связывания комплемента), реакции торможения гемагглютинации (РТГА) и реакции нейтрализации.
В настоящее время в лабораториях используются следу­ющие диагностикумы.
1. Бактериальный диагностикум сальмонелл тифа. Приме­няется в реакции агглютинации для обнаружения антител в сыворотке больных.
2. Сальмонеллезные О-диагностикумы содержат О-антигены различных групп сальмонелл (инактивированных 15%-ным раствором глицерина). Применяются для выявления О-антител при сальмонеллезных инфекциях в реакции агглю­тинации с сывороткой больных.
3. Сальмонеллезные Н-монодиагностикумы. Исполь­зуются в реакции агглютинации для определения заболевания в прошлом (анамнестическая реакция агглютинации) и реже с диагностической целью.
4. Vi - брюшнотифозный диагностикум. Применяется в реакции агглютинации при выявлении брюшноти­фозного бактерионосительства.
5. Единый бруцеллезный диагностикум - взвесь бруцелл (инактивированных фенолом), подкрашенная метиленовым синим. Применяется для определения антител в сыворотках крови больных бруцеллезом людей и животных в реакциях агглютинации Райта и Хеддльсона.
6. Эритроцитарный сальмонеллезный О-диагностикум - взвесь эритроцитов с адсорбированными на них О-антигенами различных групп сальмонелл. Используется для постановки РПГА с сывороткой больного при уточнении клинического диагноза сальмонеллезной инфекции.
7. Эритроцитарный Vi -диагностикум - эритроциты, сенси­билизированные очищенным Vi -антигеном S . typhi , применяет­ся в РПГА при выявлении брюшнотифозного бактерионоси­тельства.
8. Гриппозный диагностикум представляет собой аллантоисную жидкость инфицированных вирусом гриппа (типов А, В) куриных эмбрионов и инактивированную мертиолатом или формалином. Диагностикумы необходимы при постановке РТГА с парными сыворотками больных для уточнения кли­нического диагноза и циркулирующего типа вируса гриппа.
9. Диагностикум вируса клещевого энцефалита получают из суспензии мозга белых мышей, зараженных вирусом кле­щевого энцефалита. Суспензию подвергают центрифугирова­нию (для осветления) и инактивируют химическими вещест­вами.
Диагностикум используется в РТГА и РСК с сывороткой больных при диагностике заболевания.

В диагностических целях при обнаружении антител в сы­воротке крови больных, реконвалесцентов и бактерионосите­лей используются серологические реакции.

Для постановки таких реакций применяются диагностикумы - препараты, содержащие взвесь обезвреженных микроор­ганизмов или определенные антигены.

Необходимость использования диагностикумов для сероло­гических реакций связана не только с явным их преимущест­вом перед живыми культурами микробов (безопасность в ра­боте), но еще и потому, что для приготовления диагностикумов подбираются штаммы микроорганизмов с высокой чувст­вительностью к антителам и способностью длительно сохра­нять антигенные свойства.

Для инактивации микроорганизмов при приготовлении диагностикумов чаще всего используются химические вещест­ва, особенно формалин, являющийся лучшим консервантом. Убитые нагреванием микробы хуже сохраняют антигенные свойства и применяются редко.

В серологических реакциях (реакции агглютинации, реак­ции пассивной гемагглютинации, реакции связывания компле­мента, реакции торможения гемагглютинации) для выявления специфических антител применяются: бактериальные, эритроцитарные и вирусные диагностикумы.

Бактериальные диагностикумы могут содержать инактивированную микробную взвесь или отдельные антигенные компоненты бактерий: О, Н или Vi-антигены и используются в реакциях агглютинации.

Эритроцитарные диагностикумы представляют собой эритроциты (обработанные танином или формалином) с ад­сорбированными на них антигенами, извлеченными из бакте­рий, и применяются в РПГА (реакции пассивной гемагглютинации). В том случае, когда РПГА используется для выяв­ления антигена в выделениях больных, в тканях и др., при­меняют «антительные диагностикумы», т. е. эритроциты, сен­сибилизированные антителами.

Вирусные диагностикумы - препараты, содержащие инактированные вируссодержащие жидкости (культуральные, из куриных эмбрионов или организма животных, зараженных соответствующим вирусом), применяются в РСК (реакции связывания комплемента), реакции торможения гемагглютинации (РТГА) и реакции нейтрализации.

В настоящее время в лабораториях используются следу­ющие диагноста кумы.

1. Бактериальный диагностикум сальмонелл тифа. Приме­няется в реакции агглютинации для обнаружения антител в сыворотке больных.

2. Сальмонеллезные О-диагностикумы содержат О-антигены различных групп сальмонелл (инактивированных 15%-ным раствором глицерина). Применяются для выявления О-аптител при сальмонеллезных инфекциях в реакции агглю­тинации с сывороткой больных.

3. Сальмонеллезные Н-монодиагностикумы. Исполь­зуются в реакции агглютинации для определения заболевания в прошлом (анамнестическая реакция агглютинации) и реже с диагностической целью.

4. Vi - брюшнотифозный диагностикум. Применяется в реакции агглютинации при выявлении брюшноти­фозного бактерионосительства.

5. Единый бруцеллезный диагностикум - взвесь бруцелл (инактивированных фенолом), подкрашенная метиленовым синим. Применяется для определения антител в сыворотках крови больных бруцеллезом людей и животных в реакциях агглютинации Райта и Хеддльсона.

6. Эритроцитарный сальмонеллезный О-диагностикум - взвесь эритроцитов с адсорбированными на них О-антигенами различных групп сальмонелл. Используется для постановки РПГА с сывороткой больного при уточнении клинического диагноза сальмонеллеэной инфекции.

7. Эритроцитарный Vi-диагностикум - эритроциты, сенси­билизированные очищенным Vi-антигеиом S. typhi, применяет­ся в РПГА при выявлении брюшнотифозного бактерионоси­тельства.

8. Гриппозный диагностикум представляет собой аллантоисную жидкость инфицированных вирусом гриппа (типов А, В) куриных эмбрионов и инактивированную мертиолатом или формалином. Диагностикумы необходимы при постановке РТГА с парными сыворотками больных для уточнения кли­нического диагноза и циркулирующего типа вируса гриппа.

9. Диагностикум вируса клещевого энцефалита получают из суспензии мозга белых мышей, зараженных вирусом кле­щевого энцефалита. Суспензию подвергают центрифугирова­нию (для осветлення) и инактивируют химическими вещест­вами.

Диагностикум используется в РТГА и РСК с сывороткой больных при диагностике заболевания.

Владельцы патента RU 2247991:

Изобретение относится к медицине и касается средства, способа его получения и способа экспресс-диагностики вируса клещевого энцефалита. Средство представляет собой 2%-ный коагглютинирующий реагент, полученный путем добавления к 10%-ному растворенному в дистиллированной деионизованной воде стафилококковому реагенту равного количества 0,1%-ного высокоочищенного и высокоавидного иммуноглобулина против клещевого энцефалита, проведения сенсибилизации в течение 1-1,5 часов при температуре 25-30°С, ресуспендирования осадка в 0,15 М растворе хлорида натрия рН 5,4-5,5 и доведения полученного коагглютинирующего реагента до 2%-ного содержания. Способ экспресс - диагностики антигена вируса клещевого энцефалита заключается в нанесении на предметное стекло 15-20 мкл исследуемого материала, добавлении в него равного количества средства, для экспресс-диагностики, тщательном перемешивании посредством покачивания предметного стекла и визуальном определении через 2-7 минут по феномену коагглютинации наличия антигена вируса клещевого энцефалита. 3 н. и 3 з.п. ф-лы, 3 табл.

Изобретение относится к биотехнологии и медицине, касается производства медицинских иммунобиологических препаратов и лабораторной диагностики возбудителя инфекционного заболевания человека, в частности средства и способа экспресс-диагностики (индикации) вируса клещевого энцефалита.

Известно средство и способ экспресс-диагностики антигена вируса клещевого энцефалита путем иммуноферментного анализа (ИФА) с использованием приготовленного иммуноглобулина против клещевого энцефалита и его конъюгата с пероксидазой хрена .

Однако данный способ длителен по времени (6-7 часов), трудоемок, так как необходимо выполнение пяти этапов исследования, а также при выполнении способа требуется дорогостоящее оборудование.

Ближайшим по технологической сущности (прототипом) к предлагаемому нами способу экспресс-диагностики антигена вируса клещевого энцефалита является способ путем проведения реакции непрямой гемагглютинации (РНГА) ближайшим средством и способом для экспресс-диагностики антигена вируса клещевого энцефалита (прототипом) служит эритроцитарный диагностикум и способ его получения. Эритроцитарный диагностикум представляет собой 3%-ную взвесь эритроцитов барана, фиксированных формалином или акролеином, обработанных танином и сенсибилизированных иммуноглобулином к вирусу клещевого энцефалита .

Эритроцитарный диагностикум получают следующим образом:

3%-ную взвесь фиксированных акролеином или формалином и тонизированных бараньих эритроцитов сенсибилизируют 0,05-0,1%-ным иммуноглобулином против клещевого энцефалита при 56°С в течение 30 минут. Затем центрифугируют 10 минут при 2000 оборотах в минуту, дважды отмывают в 1%-ной НКС с последующим центрифугированием, осадок ресуспендируют наполнителем: ФБР рН 7,2, пептон - 3%, сахароза - 1%.

Сенсибилизированные эритроциты специфически связываются с антигеном возбудителя в исследуемом материале, что визуально выражается в проявлении феномена гемагглютинации в РНГА.

Способ РНГА ставят микрометодом в общем объеме 75 мкл, используя пластины U системы "Такачи" фирмы "Мэтримпэкс" или любые другие планшеты, предназначенные для серологических анализов.

Способ РНГА ставят следующим образом:

Во все лунки планшета раскапывают по 25 мкл 1%-ного раствора НКС. В первую лунку каждого ряда вносят по 25 мкл антигена (К+, К-, исследуемый материал). Перемешивают и последовательно переносят во все лунки соответствующих рядов. Получают разведения антигенов с коэффициентом 2, затем во все лунки добавляют по 25 мкл 1%-ной НКС и 1%-ную взвесь эритроцитарного диагностикума. Проводят контроль эритроцитов на спонтанную агглютинацию: в 2-3 лунки вносят по 50 мкл 1%-ной НКС и по 25 мкл 1%-ной взвеси эритроцитарного диагностикума. Планшет встряхивают в горизонтальной плоскости для перемешивания ингредиентов и помещают при температуре (20±2)°С на 2-2,5 часа или на 1-1,5 часа при температуре (37±2)°С.

При отсутствии агглютинации в контролях эритроцитов реакцию учитывают по 4-крестовой системе визуально. Положительным результатом в РНГА считают агглютинацию эритроцитов на +3 +4. За титр антигена принимают его максимальное разведение, давшее гемагглютинацию на +3 +4. РНГА с К+ должна быть положительной, с К- - отрицательной.

Однако данное средство, способ его получения и способ экспресс-диагностики антигена вируса клещевого энцефалита имеет следующие недостатки:

Длительность приготовления эритроцитарного диагностикума, чувствительность которого зависит от многих факторов: физиологического состояния эритроцитов барана, чистоты акролеина (или формалина), танина, температурных режимов каждого этапа технологического процесса и, наконец, от чистоты, специфической активности и авидности иммуноглобулина;

Выполнение способа РНГА занимает несколько часов, при этом теряется время и падает эффективность экстренной серопрофилактики пострадавшим, которая наиболее высока в первые сутки после укуса инфицированного клеща;

Способ РНГА недостаточно чувствителен и тем самым не дает желаемого результата, что является одним из важных условий для экспресс-диагностики антигена вируса клещевого энцефалита.

Задачей, решаемой предлагаемым изобретением, является сокращение времени, повышение чувствительности, доступность и экономичность способа при сохранении высокой его специфичности.

Поставленная задача решается средством для экспресс-диагностики, содержащим 2%-ный коагглютинирующий реагент, полученный путем добавления к 10%-ному растворенному в дистиллированной деионизованной воде стафилококковому реагенту равного количества 0,1%-ного высокоочищенного и высокоавидного иммуноглобулина против клещевого энцефалита, проведения сенсибилизации в течение 1-1,5 часов при температуре 25-30°С, ресуспендирования осадка в 0,15 М растворе хлорида натрия рН 5,4-5,5 и доведения полученного коагглютинирующего реагента до 2%-ного содержания и способом экспресс-диагностики антигена вируса клещевого энцефалита путем нанесения на предметное стекло 15-20 мкл исследуемого материала и добавления в него равного количества средства, для экспресс-диагностики, содержащего 2%-ный коагглютинирующий реагент, полученный путем сенсибилизации 10%-ного стафилококкового реагента высокоавидным и высокоочищенным иммуноглобулином против клещевого энцефалита, тщательного перемешивания посредством покачивания предметного стекла и визуального определения через 2-7 минут по феномену коагглютинации наличия антигена вируса клещевого энцефалита и его количества по 3-х балльной системе.

В проанализированной авторами патентной и научно-медицинской литературе не найдено данной совокупности отличительных признаков, приводящих к новому техническому результату, и они явным образом не следуют для специалиста из уровня техники. Способ, средство для экспресс-диагностики антигена вируса клещевого энцефалита и способ его получения были апробированы в лабораторных условиях. Таким образом, данные технические решения соответствуют критериям изобретения: "новизна", "изобретательский уровень", "промышленно применимо".

Средство для экспресс-диагностики антигена вируса клещевого энцефалита готовят следующим образом:

Сухой 10%-ный стафилококковый реагент растворяют в дистиллированной деионизованной воде, выдерживают 1,5-2,0 часа при комнатной температуре для набухания и прибавляют к 10%-ному растворенному в дистиллированной деионизованной воде стафилококковому реагенту равное количество 0,1%-ного высокоочищенного и высокоавидного иммуноглобулина против клещевого энцефалита и проводят сенсибилизацию в течение 1-1,5 часов при температуре 25-30°С, затем центрифугируют 20 минут при 3000 оборотах в минуту, осадок ресуспендируют в 0,15 М растворе хлорида натрия рН 5,4-5,5 до 2%-ного содержания коагглютинирующего реагента, добавляют мертиолят натрия до 0,001%-ного содержания и сохраняют при температуре (7±3)°С в течение 4-6 месяцев.

Способ экспресс-диагностики антигена вируса клещевого энцефалита осуществляют следующим образом:

На предметное стекло наносят 15-20 мкл исследуемого материала и добавляют в него равное количество средства для экспресс-диагностики, содержащее 2%-ный коагглютинирующий реагент, полученный путем сенсибилизации 10%-ного стафилококкового реагента высокоавидным и высокоочищенным иммуноглобулином против клещевого энцефалита, тщательно перемешивают посредством покачивания предметного стекла и визуально определяют через 2-7 минут по феномену коагглютинации наличие антигена вируса клещевого энцефалита по 3-х балльной системе.

“3+” - образование агглютината и интенсивное просвечивание реакционной смеси (реакция резко положительная);

“2+” - отчетливое просветление смеси (реакция положительная);

“+” - маловыраженное просветление смеси (реакция слабоположительная);

“-” - отсутствие просветления (реакция отрицательная).

Предлагаемый способ позволяет выявить как наличие, так и количественное содержание антигена вируса клещевого энцефалита в исследуемом материале. Для количественного определения делают разведения исследуемого материала на 0,15 М растворе хлорида натрия с коэффициентом 2 и наносят их по 15-20 мкл на предметное стекло, добавляют равное количество средства для экспресс-диагностики, содержащее 2%-ный коагглютинирующий реагент, полученный путем сенсибилизации 10%-ного стафилококкового реагента высокоавидным и высокоочищенным иммуноглобулином против клещевого энцефалита, перемешивают путем покачивания предметного стекла и через 2-7 минут визуально по феномену коагглютинации определяют титр антигена вируса клещевого энцефалита в исследуемом материале по 3-х балльной системе.

Положительным результатом предлагаемого способа считают коагглютинацию на +3 +2. За титр антигена (1 коагглютинирующая единица - КОАЕ) принимают его последнее разведение, давшее интенсивную коагглютинацию (на +2).

Предлагаемый нами способ и средство для экспресс-диагностики антигена вируса клещевого энцефалита основаны на феномене коагглютинации при взаимодействии специфических антител и антигена.

Для подтверждения специфичности предлагаемого способа и средства для экспресс-диагностики антигена вируса клещевого энцефалита титровали материал (субстрат), содержащий и не содержащий антиген вируса клещевого энцефалита (см. табл.1).

Предлагаемый способ и средство для экспресс-диагностики антигена вируса клещевого энцефалита сравнивали по чувствительности, определяя количество (титр) антигена вируса клещевого энцефалита путем разведения с коэффициентом 2 исследуемого материала на 0,15 М растворе хлорида натрия со способами экспресс-диагностики ИФА и РНГА. При этом титровали один и тот же материал, содержащий антиген вируса клещевого энцефалита, тремя способами: путем ИФА, РНГА и предлагаемым (см. табл.2). Исследуемым материалом служила вакцина клещевого энцефалита на разных стадиях технологического процесса.

Из приведенного материала следует, что предлагаемый способ экспресс-диагностики антигена вируса клещевого энцефалита, выполненный с помощью средства, содержащего 2%-ный коагглютинирующий реагент, полученный путем сенсибилизации 10%-ного стафилококкового реагента высокоавидным и высокоочищенным иммуноглобулином против клещевого энцефалита, специфичен, по количеству выявленного антигена вируса клещевого энцефалита и минимальному количеству белка Е во много раз чувствительнее способа РНГА и в среднем в 2-4 раза чувствительнее способа ИФА.

Таким образом, предлагаемый способ экспресс-диагностики антигена вируса клещевого энцефалита, выполненный с помощью средства, содержащего 2%-ный коагглютинирующий реагент, полученный путем добавления к 10%-ному растворенному в дистиллированной деионизованной воде стафилококковому реагенту равного количества 0,1%-ного высокоочищенного и высокоавидного иммуноглобулина против клещевого энцефалита, проведения сенсибилизации в течение 1-1,5 часов при температуре 25-30°С, ресуспендирования осадка в 0,15 М растворе хлорида натрия рН 5,4-5,5 и доведения полученного коагглютинирующего реагента до 2%-ного содержания, как и способы ИФА и РНГА, специфичен, но превосходит их по чувствительности и во много раз по экспрессности (время выполнения по ИФА - 6-7 часов, по РНГА 1.5-2.5 часа, по предлагаемому способу 2-7 минут), при простоте выполнения и экономичности (табл.3).

Список литературы

1. Лаптакова М.М., Морякин А.В., Лаврова Н.А. Разработка и применение иммунопероксидазной тест-системы для индикации вируса клещевого энцефалита. Сб. Актуальные вопросы медицинской биотехнологии и прикладной иммунологии. - Томск. - 1990. – том 36. – с 50-65.

2. Подоплекина Л.Е., Унгер Т.Н. Диагностикум эритроцитарный к вирусу клещевого энцефалита иммуноглобулиновый крысинный сухой для РНГА (эритроцитарный диагностикум к вирусу клещевого энцефалита). - ВФС 42. - 2874 - 97.

3. Подоплекина Л.Е., Унгер Т.Н. Экспериментально-производственный регламент № 527 - 95 Диагностикум эритроцитарный к вирусу клещевого энцефалита иммуноглобулиновый крысиный сухой для РНГА. НИИВС НПО “Вирион”.

Таблица 1.
№ п/п	ИССЛЕДУЕМЫЙ МАТЕРИАЛ	ТИТР АНТИГЕНА ВИРУСА КЭ (в обр.ед.)
1	Вакцина КЭ “ЭнцеВир” сер. 10. с.г. 11.02. (производства ФГУП НПО “Вирион”)	512
2	Антиген вируса КЭ (К+) сер. 46 из набора эритроцитарного диагностикума. с.г. 2001 г. (производства ФГУП НПО “Вирион”)	256
3	Антиген мозга неинфицированных мышей (К-) сер.45 из набора эритроцитарного диагностикума с.г. 2001 г. (производства ФГУП НПО “Вирион”)	0
4	Антиген вируса КЭ (К+) сер. 55 из набора ИФА с.г. 30.10.02 (производства ФГУП НПО “Вирион”)	3200
5	Антиген мозга неинфицированных мышей (К-) сер.54 из набора ИФА с.г. 30.10.02 г. (производства ФГУП НПО “Вирион”)	0
Таблица 2.
№ п/п	ИССЛЕДУЕМЫЙ МАТЕРИАЛ	ТИТР АНТИГЕНА ВИРУСА КЭ (в обр.ед.)
ИФА	РНГА	РКОА
1	Объединенный полуфабрикат вакцины КЭ (1)	32	<8	128
2	Концентрат вакцины КЭ (1)	1024	64	4096
3	Очищенный концентрат вакцины КЭ (1)	512	32	2048
4	Полуфабрикат вакцины КЭ (1)	128	<8	512
5	Объединенный полуфабрикат вакцины КЭ (2)	16	<8	32
6	Концентрат вакцины КЭ (2)	1024	64	2048
7	Очищенный концентрат вакцины КЭ (2)	512	32	512
8	Очищенный концентрат вакцины КЭ (3)	256	32	1024
9	Полуфабрикат вакцины КЭ до сорбции	256	32	256
Таблица 3. Чувствительность ИФА, РНГА, РКОА по белку Е.
№ п/п	ИССЛЕДУЕМЫЙ МАТЕРИАЛ	СОДЕРЖАНИЕ БЕЛКА Е (мкг/мл)	ИФА (обр.ед) БЕЛОК Е (нг)	РНГА (обр.ед.)	РКОА (обр.ед.)
БЕЛОК Е (нг)	БЕЛОК Е (нг)
1	Объединенный полуфабрикат вакцины КЭ(1)	0,06		<8
2	Концентрат вакцины КЭ(1)	11,93
3	Очищенный концентрат вакцины КЭ(1)	8,78
4	Полуфабрикат вакцины КЭ до сорбции (1)	4,13		<8
5	Концентрат вакцины КЭ(2)	2,48
6	Очищенный концентрат вакцины КЭ(2)	5,5
7	Очищенный концентрат вакцины КЭ(3)	6,93
8	Полуфабрикат вакцины КЭ до сорбции (2)	7,83

1. Средство для экспресс-диагностики антигена вируса клещевого энцефалита, содержащее 2%-ный коагглютинирующий реагент, полученный путем сенсибилизации 10%-ного стафилококкового реагента высокоочищенным и высокоавидным иммуноглобулином против клещевого энцефалита.

2. Способ приготовления средства для экспресс-диагностики антигена вируса клещевого энцефалита, заключающийся в сенсибилизации, центрифугировании приготовленной взвеси, удалении надосадочной жидкости, ресуспендировании осадка и приготовлении реагента, отличающийся тем, что до сенсибилизации к 10%-ному растворенному в дистиллированной деионизованной воде стафилококковому реагенту добавляют высокоочищенный и высокоавидный иммуноглобулин против клещевого энцефалита, проводят сенсибилизацию в течение 1-1,5 ч, затем ресуспендируют осадок в 0,15 М растворе хлорида натрия и доводят полученный коагглютинирующий реагент до 2%-ного содержания.

3. Способ по п.2, отличающийся тем, что сенсибилизацию проводят при температуре 25-30°С.

4. Способ по п.2, отличающийся тем, что к 10%-ному растворенному в дистиллированной деионизованной воде стафилококковому реагенту добавляют равное количество 0,1%-ного высокоочищенного и высокоавидного иммуноглобулина против клещевого энцефалита.

5. Способ по п.2, отличающийся тем, что осадок ресуспендируют в растворе 0,15 М хлорида натрия рН 5,4-5,5.

6. Способ экспресс-диагностики антигена вируса клещевого энцефалита путем исследования материала, определения наличия и/или количественного содержания антигена вируса клещевого энцефалита путем разведения в 0,15 М растворе хлорида натрия, отличающийся тем, что на предметное стекло наносят исследуемый материал или его разведения в количестве 15-20 мкл, добавляют равное количество средства для экспресс-диагностики антигена вируса клещевого энцефалита, содержащего 2%-ный коагглютинирующий реагент, полученный путем сенсибилизации 10%-ного стафилококкового реагента высокоочищенным и высокоавидным иммуноглобулином против клещевого энцефалита, тщательно перемешивают путем покачивания предметного стекла и через 2-7 мин визуально определяют по феномену коагглютинации наличие и/или количество антигена вируса клещевого энцефалита.

Похожие патенты:

Изобретение относится к медицине, а именно к медицинской микробиологии, и может быть использовано для серологической диагностики урогенитального хламидиоза, и касается способа получения видоспецифического антигена С.