Ротавирусная инфекция животных. Ротавирусная инфекция телят
Ротавирусная инфекция (РВИ) КРС (диарея неонатальных телят) - остропроте-кающая контагиозная болезнь новорожденных телят, характеризующаяся поражением ЖКТ. Болезнь широко распространена во всех географических регионах земного шара. Практически ее регистрировали везде, где проводили исследования. Доказана широкая диссиминация ротавирусов (РВ) телят среди животных разных видов и наличие AT у грызунов (морских свинок, крыс, хомяков, мышей).
В 1978 г. Международным комитетом по таксономии возбудитель РВИ отнесен к семейству Reoviridae, роду Rotavirus.
РВ размножается в дифференцированных эпителиальных клетках ворсинок (в апикальной части ворсинок) всего тонкого отдела кишечника. На вершинах ворсинок происходит ускоренная миграция и преждевременное слущивание энтероцитов. Ускоренная регенерация поверхности апикальной части ворсинок за счет незрелых, резистентных к вирусной инфекции эпителиальных клеток и крипт, является причиной нарушенного пищеварения уже после окончания инфекционного процесса. В дальнейшем происходит восстановление нормальной структуры ворсинок и пищеварения (15).
Симптомы и патологоанатомические изменения. Инфекция клинически проявляется только у телят в виде рецидивирующей диареи. Заболеваемость достигает 90 %, смертность - 5-25 %. Наиболее часто болезнь регистрируют поздней зимой и ранней весной. Телята заражаются в первые часы после рождения. У заболевших в первые дни жизни телят наблюдаются диарея, атония, слабость, отказ от воды. В отсутствие сопутствующих заболеваний РВИ телят вызывает энтерит, который связан с незначительными изменениями крови и может сопровождаться легко проходящей диареей. Клинически болезнь у телят характеризуется депрессией, потерей аппетита, диареей. Цвет фекалий зависит от вида корма. Температура тела иногда поднимается до 41 °С. Если инфекция не осложняется E. coli, то через 2-3 дня телята выздоравливают. Чем моложе теленок, тем продолжительнее диарея.
При патологоанатомическом исследовании основные изменения отмечаются в тонком кишечнике. Мебус (1974) нашел, что верхушки ворсинок часто обнажаются, увеличивается количество ретикулоподобных клеток. В отдельных участках кишечника ворсинки полностью исчезают, крипты укорочены, ворсинки неоднородны, форма эпителиальных клеток изменена (они принимали кубическую форму), в них появились вирионы, и это вело к изменению функции клеток. Поступающее в кишечник молоко не переваривается, накапливается в пищеварительном тракте, обусловливая появление диареи. По мере накопления вирус выходит из клеток ворсинок. У переболевших животных изменения в кишечнике исчезают через 8-10 суток после начала заболевания.
На патогенность РВ и тяжесть течения болезни у телят могут влиять многочисленные факторы: штамм и доза вируса, возраст телят во время инфицирования, возможные сопутствующие инфекции. Наличие циркулирующих в крови AT недостаточно для предотвращения РВ диареи у телят. AT должны находиться в просвете кишечника. Для защиты может оказаться полезным экзогенный интерферон.
Устойчив к хлороформу, эфиру, фреону, кислой среде (рН 3-4). В отличие от реовирусов MgCb при рН 6-7 не стабилизирует терморезистентность вирионов РВ в течение 1 ч при 50 °С. РВ высокорезистентны к протеазам. В отличие от реовирусов интактные вирионы РВ устойчивы к химотрипсину. Полевые штаммы-изоляты (Cody и Lincoln) вируса сохраняют свои свойства в течение нескольких месяцев при -60 °С и менее 30 дней при 4 °С. Оба изолята стабильны при рН 3, резистентны к прогреванию, но погибают при 50 °С за 1 ч в присутствии 1 М MgCb. 10 % формалин, 5 % лизол инактивируют вирус за 2 ч.
Морфология и химический состав. Изучены недостаточно. Описаны частицы РВ 2 типов, вызывающие диарею у телят: частицы плотностью 1,38 г/см3, диаметром 55+0,4 нм и частицы плотностью 1,36 г/см3, диаметром 66+0,4 нм. Частицы обоих типов содержат два основных полипептида с мол. м. 1,3105Д и 4,4-104 Д. Частицы вируса диаметром 66 нм содержат ещё один полипептид с мол. м. 6,3-104 Д, который не обнаружен в частицах вируса диаметром 55 нм. У частиц обоих типов минорные полипептиды 1 и 3 идентичны. Более высокий уровень инфекционное™ у частиц вируса диаметром 66 нм связан с внешней оболочкой капсида и дополнительным (белок 4) полипептидом. Размножение РВ не ингибируется 5-йод-2-дезоксиуридином. Концентрацию и быструю очистку ротавируса, позволяющую сохранить двухоболочеч-ную структуру вирионов, обеспечивали с помощью коллоидного кремния или преципитацией полиэтиленгликолем 8000 с последующим равновесным центрифугированием в градиенте коллоидного кремния. Контроль очистки осуществляли с помощью электронной микроскопии или гельэлектрофореза в полиакриламидном геле. Этот метод позволял получить 1500-кратную очистку с сохранением 80 % инфекционное - ти. Метод технически не сложен и позволяет получать любое количество вируса.
Антигенная структура, вариабельность и родство. Вирус, выделенный из фекалий больных диареей телят, был первым этиологическим агентом диареи неонатальных телят. Изучение морфологии, частичная характеристика нуклеиновой кислоты очищенного вируса, отсутствие чувствительности к липидным растворителям и поведение в культуре клеток позволило предположить, что вирус относится к группе вирусов, содержащих 2-нитевую РНК, куда включены реовирусы трех типов и вирус блу-танга. Однако он серологически не связан с реовирусами 1 -, 2- и 3-го типов. В АГ отношении РВ телят и человека очень близки, но не идентичны. Обнаружена общность группоспецифических и типоспецифических АГ РВ телят и человека.
AT к РВ телят реагируют с внутренним и не реагируют с внешним капсидным слоем РВ человека. Однако сыворотки детей, переболевших гастроэнтеритом, реагируют с обоими слоями капсида РВ человека и телят. Это позволило предположить, что два капсидных слоя отличаются друг от друга: АГ внутреннего слоя - групповые АГ, общие для ротавирусов телят, мышей, человека, в то время как АГ наружного слоя - ти-по- или видоспецифические. У 54 % детей, больных гастроэнтеритом, в начале заболевания в фекалиях найдены РВ, которые оказались серологически родственны аналогичным вирусам телят.
Геном РВ состоит из 11 фрагментов 2-спиральной РНК с мол. м. 0,2-2,2 МД. РВ КРС присуща значительная вариабельность вирулентности и антигенности. Известны три серотипа возбудителя и, кроме того, у КРС выявлены AT к трем серотипам РВ человека. Кроме существования трех серотипов вируса, не исключается возможность циркуляции атипичных РВ (параротавирусов РВ 86), что значительно затрудняет решение и без того сложной проблемы специфической профилактики ротавирус-ной диареи телят. Иногда выделенные от одних и тех же телят штаммы отличались между собой. Это результат реинфицирования одних и тех же телят различными штаммами или это связано с АГ дрейфом вируса. В 1990 г. в ФРГ выделен изолят РВ КРС, серологически отличный от референтных штаммов 1, 2, 3, 4, 5, 6, 8 и 9, но он давал перекрестную нейтрализацию с прототипными шт. В223 и Е4049 и был отнесен к серотипу 10. АГ специфичность связана с полипептидами наружного капсида. Белок VP7 является основным протективным АГ РВ КРС, ответственным за образование ВНА. До сих пор не выяснено, играет ли гликопротеин VP7 РВ такую же роль, как отдельные белки вирусов гриппа, ответственные за АГ «дрейф».
В процессе персистентной инфекции заражение разными серотипами РВ КРС не сопровождается перекрестной защитой. Проводили вирусологическое наблюдение за телятами с признаками диареи, вызванной РВ КРС на закрытой молочной ферме. Вирус выделяли из 32 образцов (всего исследовано 219) фекалий от телят преимущественно 2-6-недельного возраста за период 1992-1993 гг. При электрофоретическом анализе 2-цепочечных геномных РНК вируса 32 штаммов картина их миграции была сходной с таковой у преобладающих штаммов РВ КРС, выделенных на этой же ферме в 1990-1991 гг. С помощью тестов нейтрализации вируса и ПЦР все штаммы идентифицированы как серотип G6 и Р5. Таким образом, электрофоретическая характеристика геномной РНК и АГ-свойства РВ КРС не изменились за период (1990-93 гг.) циркуляции в изолированном молочном стаде. Однако РВ КРС является серологически родственным с РВ человека лишь по групповой АГ детерминанте и индуцирует выработку, в основном, видоспецифических ВНА, естественно малоэффективных для нейтрализации РВ человека. Этим, в частности, можно объяснить относительно невысокую эффективность вакцины на основании РВ КРС при иммунизации детей раннего возраста.
В 1974 г. впервые была показана серологическая связь между РВ телят и человека. Они имеют общий АГ, выявляемый в РСК, установлено родство РВ телят, свиней, жеребят и кроликов (в РСК, РИФ и РДП). Группоспецифические АГ этих вирусов локализованы во внутреннем капсиде РВ. Получен реассортант первого типа РВ КРС WC-3, шт.\У179-9, который индуцировал политипичный AT ответ у детей раннего возраста.
Ротавирус NGRBg8, выделенный в Нигерии из фекалий больной диареей коровы, был охарактеризован с использованием ОТ-ПЦР, блот-гибридизации по Нозерну и секвенирования. По нуклеотидной последовательности гена VP7 он оказался наиболее близок штамму HMG035 (99,9 %) серотипа G-8, выделенному от больного нигерийца. Ген NSP1 штамма NGRBg8 близкородственен (99,4 %) Штамму КРС А5-10 серотипа Thai G8. Блот-гибридизация по Нозерну выявила тесное общее родство NGPBg8 с человеческим штаммом HMG035: все 11 сегментов РНК гибридизовались друг с другом. В работе итальянских исследователей представлены данные по определению и молекулярной характеристике ротавирусного штамма 10 733, выделенного из фекалий теленка буйвола, пораженного диареей. Штамм 10 733 был классифицирован как Р ротавирус. VP8, очищенный от трипсина продукт VP4, продемонстрировал высокую аминокислотную идентичность (96,2 %) с таковой ротавируса резус штамма RRV (Р5В), использовавшегося как реципиентный вирус в рекомби-нантной вакцине человека и обезьяны. Анализ VP7 генного продукта показал, что штамм 10 733 обладает специфичностью серотипа G5 - типа, распространенного у жвачных, с аминокислотной идентичностью для G6 ротавирусных штаммов от 88 до 98 %, к венесуэльскому штамму крупного рогатого скота BRV033 и венгерскому человеческому штамму Hun4. Филогенетический анализ VP7 гена G6 ретровирусов выявил, по крайней мере, четыре ряда поколений и очевидную связь между поколениями и VP4 специфичностью, что позволяет предполагать наличие повторных межвидовых передач и генетических рекомбинаций между ротавирусами жвачных и человека.
Помимо тонкого кишечника, РВ обнаруживают в легких и мезентериальных лимфоузлах больных телят. Вирус поражает цилиндрические эпителиальные клетки ворсинок тонкого кишечника, размножаясь в эндоплазматической сети этих клеток и вызывая их гибель и десквамацию. Отмершие клетки заменяются неинфицированными кубическими клетками из крипт. Эти клетки не имеют рецепторов к РВ. Пораженные вирусом эпителиальные клетки выделяются с фекалиями в первые 4-5 ч от начала диареи, вирус обычно выделяется с фекалиями в течение 23 дней, а у животных диарея обычно длится на 3-7 дней дольше, чем выделяется вирус во внешнюю среду. При естественной инфекции среди новорожденных удается выделить вирус из фекалий клинически здоровых телят через 30-40 дней после болезни. Методом ВИЭФ обнаружен ротавирусный АГ в фекалиях клинически здоровых телят в возрасте от 6 недель до 3 месяцев. Есть сообщение о выявлении комплексов PB-Ig у здоровых животных, что указывает на субклиническую форму инфекции, и на то, что такие животные могут быть источником заражения новорожденных телят.
Антигенная активность. В организме, пораженном РВ, главную роль играют AT, продуцируемые слизистой оболочкой кишечника. В опытах на безмолозивных телятах с фистулами тощей кишки показано, что в ней AT появляются между 3 и 12-м днем, а в фекалиях - между 4- и 18-м днем после инфицирования телят РВ. AT в фекалиях телят выявляли в период от 25 до 58 дней после заражения. Реинфекция их через 5-70 дней после первичной инфекции обычно приводила к вторичному иммунному ответу.
У разных телят наблюдается значительное различие в сроках и количестве продукции кишечных AT В жидкости из тощей кишки выявляли AT классов IgA, IgG и IgM. У большинства больных телят преобладали IgG. У телят, зараженных per os в возрасте 8-10 дней, вирус обнаруживали в фекалиях 1-3 дня. Интересно, что AT появлялись в тонком кишечнике на 2-12-й день, т. е. раньше, чем в фекалиях (на 4-8-й день). Из фекалий они исчезали через 30-60 дней. Вследствие кратковременной секреции AT в кишечнике возможности локальной (per os) иммунизации ограничены. AT выявлены и в секретах молочной железы; они также принадлежали к IgG и в меньшей степени к IgG 2, IgA и IgM, а в сыворотке крови после иммунизации коров живой куль-туральной вакциной они распределялись между IgG и IgG 2. Показано, что в ответ на экспериментальное заражение и прививку живой вакциной первыми выявлялись AT класса IgM, которые в дальнейшем всегда заменялись AT класса IgG. Во время проявления клинического симптома диареи у больных телят в тонком кишечнике и крови выявлялся интерферон. РВ не вызывают внутриутробной инфекции, но иммуноглобулины могут пассивно передаваться плоду через неповрежденную плаценту, поэтому антитела против ротавирусного белка обнаружены в сыворотках эмбриона КРС.
Все РВ имеют общий внутренний АГ, выявляемый в РСК, ИФ, РДП и иммуноэлектронной микроскопией.
Культивирование. РВ КРС размножается в культуре клеток (вначале первичной культуре клеток трахеи эмбриона КРС). Вирус вызывает специфическое ЦПД во вторичной культуре ПЭК через 3-7 дней после заражения. При высокой множественности заражения вызывает появление очагов серповидных клеток без разрушения клеточного монослоя. Сначала в клетках монослоя появляются мелкие гранулы, которые постепенно увеличиваются в размере. Поражённые клетки не отделяются от стенок пробирок. Инфекционный титр вируса (шт. Линкольн) в 2-6-суточной культуре 3,5-4,2 lg ТЦДзо/ол мл. При низкой множественности заражения изменения заражённой культуры ничем не отличаются от изменений, наблюдаемых при старении незаражённых культур. Поэтому для обнаружения вируса в заражённой культуре используется прямой метод ИФ.
Недавно показано, что данный вирус размножается в первичной культуре почек обезьян (макак-резус и зелёных мартышек) и однодневных поросят. К РВ (изоляту Cody) нечувствительны перевиваемые клетки почки хомяков ВПК, Vero, Lik-MK2, HeLa и кишечника. В культуре клеток почки эмбриона КРС к 18 ч титр клеточко ассоциированного РВ достигал максимальной величины и оставался высоким до наступления следующего цикла размножения. Циклы репродукции рео - и ротавирусов были сходны. Интерферон вырабатывался клетками, заражёнными вирусом, обработанным УФ лучами и активным вирусом. При 56 °С активность интерферона несколько снижалась в течение 2 ч, исчезала при рН 12,5 в течение 48 ч.
Помимо первичных культур, РВ КРС культивируют в перевиваемых клетках почки телят, МДВК, L, Vero, Ma-104 при 37 °С в течение 7 дней. Перевиваемые культуры клеток МА-104, ZZC-MK2 (BSC-1 и CV-1) и Madin-Darby оказались высокочувствительными к РВ КРС. К вирусу (изоляту Cody) нечувствительны перевиваемые клетки почки хомяков ВНК, lie-MK2 и HeLa. При культивировании РВ лучшие результаты получают при добавлении в поддерживающую среду трипсина 5-10 мкг/мл. Полагают, что действие трипсина состоит в диспергировании вирусных агрегатов, повышении проницаемости клеточных мембран, а также инактивации интерферона. В составе вирионов происходит протеолитическое расщепление крупного полипептида VP3 на два полипептида VP5 и VP8 и повышение инфекционности самого вируса. Кроме того, при обработке РВ КРС трипсином в концентрации 1 мкг/мл титр его возрастает почти в 45 раз. Для всех РВ обработка трипсином неочищенных или высокоочищенных препаратов вируса приводит к увеличению инфекционности (в среднем в 4,2 раза). Показана способность бляшкообразования РВ КРС в клетках BSG-1 при добавлении в агаровую среду 4-10 мкг/мл трипсина и 25 мкг/мл ДЕАЕ-декстрана. В отсутствии трипсина бляшки не образуются. Шт. BSG-1 и CV-1 в присутствии 5 мкг/мл трипсина образуют бляшки, которые более четко контурируются при введении в покрытие 4 %-ной нормальной куриной сыворотки. Размер бляшек может служить маркером для аттенуированных штаммов и титрования их. РВ КРС различаются не только по РНК- Сегментам и РТГА, но и по размеру бляшек, индуцируемых в культуре клеток.
При этом клетки культуры ткани в присутствии сыворотки кур не отслаивались под действием трипсина. Описана дифференциация двух серологически родственных штаммов РВ телят: UK и NJ - по морфологии бляшек в культуре диплоидной линии клеток почки теленка и в РН. Размножение вируса в клетках СПЭВ сопровождается слабым ЦПД. Репликация вируса в роллерной и стационарной культурах зависит от наличия трипсина в питательной среде. В роллерной культуре титр вируса был в 100 раз выше, чем в стационарной. При длительном пассировании РВ шт. Reims 18/77 в культуре почечных клеток в присутствии специфических AT получен АГ измененный вариант. Видимо, подобный дрейф может происходить и в естественных условиях под воздействием AT, содержащихся в молозиве.
Гемагглютинирующие свойства обусловлены наличием ГА на поверхности интактных вирионов. Гемагглютинация не происходит с вирионами, у которых отсутствует внешний капсидный слой. ГА нестабилен, при 22 °С его активность за 24 ч снижается на 50 %, при 45 °С он инактивируется за 2 мин. С эритроцитами морской свинки ГА-титр вируса достигает 1:64. Было показано, что этот вирус агглютинирует эритроциты 0 группы человека в разведении 1:256. Однако штаммы РВ, выделенные от больных диареей телят в Англии, не агглютинировали эритроциты морской свинки и человека.
Гемадсорбирующие свойства не установлены. У новорожденных телят заражение РВ сопровождается продукцией интерферона.
Экспериментальная инфекция. У телят-гнотобиотов, заражённых РВ (per os), через 12-14 ч наблюдают депрессию, анорексию, диарею. Если в жидких фекалиях не было E. coli, телёнок через 24 ч выздоравливал, а при наличии E. coli 50 % телят погибало. В естественных условиях РВИ у телят протекает гораздо тяжелее, чем при эспери-ментальном заражении. Вирус в фекалиях появляется через 1-2 дня после заражения и выделяется в течение месяца. ВНА обнаруживаются в крови на 7-й день и достигают максимума через 4 недели после заражения. Клинически выраженную болезнь удается воспроизвести на телятах, свободных от специфических патогенных агентов, и на телятах-гнотобиотах, не получающих молозива. Для заражения используют фекалии, очищенные ультрацентрифугированием и проверенные под электронным микроскопом на присутствие вирионов РВ. У телят-гнотобиотов, зараженных РВ (per os), через 12-24 ч наблюдают депрессию, анорексию, диарею.
После экспериментального заражения вирус размножается преимущественно в эндоплазматическом ретикулуме, а вирусный АГ обнаруживается в эпителиальных клетках тонкого кишечника (замороженные срезы) или в фекальных смывах методом ИФ. Вирионы обычно обнаруживают в эндоплазматических скоплениях высоких бокаловидных эпителиальных клеток сегментов кишечника. Ультраструктурные изменения клеток отмечают редко. Макрофаги, содержащие вирионы, обнаруживают только в тощей кишке телят 5- 6- и 10-дневного возраста. Новорожденные телята оказались чувствительны и к РВ кроликов. Они в возрасте 4-5 недель заболевают и погибают. В 1974 г. впервые была показана серологическая связь между РВ телят и человека. Они имеют общий АГ, выявляемый в РСК, установлено родство РВ телят, свиней, жеребят и кроликов (в РСК, РИФ И РДП). Группоспецифические АГ этих вирусов локализованы во внутреннем капсиде РВ. РВ КРС WC3, uit. W179-9 индуцировал политипический AT ответ у детей раннего возраста.
Источники и пути передачи инфекции. Основной источник инфекции - больные телята, выделяющие с фекалиями вирус. Однако последний удается обнаружить и в фекалиях клинически здоровых телят. Заражение телят РВ происходит вскоре после рождения. Важное эпизоотологическое значение придается фактам обнаружения РВ в фекалиях клинически здоровых телят, а также способности вируса поражать значительное число гетерологичных хозяев (широкий спектр естественной патогенности). Мягкие сыры, изготовленные из сырого или прогретого коровьего молока, могут содержать РВ КРС. РВ телят вызывает диарею у поросят; РВ жеребят и ягнят размножается у свиней, последние могут явиться источником заражения телят. AT к нуклеокапсиду РВ телят обнаружены в сыворотках крови собак, кошек и лошадей.
В распространении РВ существенную роль могут играть собаки, кошки и даже дикие жвачные, например краснохвостые олени. Концентрация вируса в фекалиях может достигать 1010-1012 частиц/мл. В персистенции РВ в стаде важное значение имеет повторное инфицирование взрослых животных от телят. В лабораторных условиях исследовали факторы, влияющие на механический перенос ротавирусов (РВ) комнатными мухами (КМ). РВ попадал на ноги КМ, когда КМ ходили по мазкам, сделанным из суспензии РВ. Добавление к суспензии глицерина и фекалий человека повышало число КМ, загрязненных РВ, но интенсивность загрязненности отдельных КМ в случае глицерина уменьшалась, а фекалий - увеличивалась. Перенос РВ на другую поверхность прямым образом зависел от длительности контакта с этой поверхностью и чаще происходил, когда поверхностью служил агар, по сравнению со стеклом. Перенос РВ осуществлялся при первом же контакте с поверхностью. При помещении РВ на крылья КМ последние освобождались от РВ сразу же после начала полета. Полученные данные показывают, что механический перенос РВ КМ зависит прежде всего от условий нахождения РВ на поверхности, от длительности контакта КМ с этой поверхностью и с поверхностью, на которую КМ переносят РВ, а также от численности КМ.
Основной путь заражения - алиментарный. Передача осуществляется путем прямого контакта, а также через инфицированные предметы ухода. Считают, что возможно внутриутробное заражение плода в результате проникновения вируса через плаценту. Однако, по другим данным, наоборот, РВ не проникает через плаценту, тогда как иммуноглобулины пассивно передаются через нее.
РВ, выделенные от телят, патогенны и для поросят. Была воспроизведена диарея у телят-гнотобиотов путем заражения их РВ человека. О спектре патогенности РВ КРС можно косвенно судить по выявлению ВНА у различных видов животных. Так, например, из 288 сывороток, взятых в разных районах Японии в 1975-77 гг., исследованных на наличие ВНА к шт. Линкольн РВ, в титре 1:2 или выше AT к бычьему РВ были найдены у всех видов животных. Частота положительных находок у каждого вида в отдельности колебалась от 30 до 100 %. Высокие титры AT (до 1:250) характерны для лошадей, овец, свиней и телят.
Иммунитет и специфическая профилактика. Наряду с системным иммунным ответом при РВ диарее телят важную роль играет местный кишечный иммунитет. AT в тощей кишке появляются через 3-12 дней, а в фекалиях через 4-18 дней после инфицирования телят РВ. В содержимом тощей кишки выявляют AT классов IgA, IgG, IgM. У большинства телят преобладали AT типа IgGl. Предполагают, что иммунная система КРС распознает нейтрализующие АГ, общие для разных РВ. Например, повторная иммунизация коров одним из четырех серотипов РВ, РВ обезьян или КРС ведет к индукции нейтрализующей активности против всех указанных РВ. При этом отмечается повышение в 10-100 раз нейтрализующей РВ активности в молоке в первые 8 дней. Молоко гипериммунизированных коров может быть использовано для пассивной пероральной иммунизации детей. Гомо - и гетерологическая защита телят представляется более надежной, чем вакцинация самих телят. Кормление телят молозивом от матерей, ранее иммунизированных инактивированной вакциной, может предотвращать появление диареи новорожденных. Титр капро AT существенно повышается после заражения телят вторым вирусом. Высказано предположение, что перекрестная защитная активность разных штаммов (серотипов) РВ у телят обусловлена не ВНА, а другими, не выясненными факторами. Специфическая профилактика РВИ КРС находится в стадии разработки и испытания. Создаются и проверяются живые и инактивированные вакцины; предпочтение, как правило, отдается разработке инактивированных вакцин и способам их применения. Эмульгированную инактиви-рованную формолвакцину вводят коровам 2-кратно в область подгрудка по 10 мл за месяц до отела и перед самым отелом. Скармливание иммунного молока новорожденным телятам оказывает заметный защитный эффект. Комбинированную вакцину готовят из рота - и коронавирусов КРС, инактивированных БПЛ, и вводят коровам подкожно дважды по 5,0 мл. Вакцинация сопровождалась нарастанием титра сывороточных AT, который достигал максимума через 3-4 недели после неё, а затем постепенно снижался. Живую вакцину из аттенуированных штаммов рота - и коронавирусов КРС вводят стельным коровам в заднюю четверть вымени в дозе 2 мл. У родившихся от них телят в 2 раза и более снижались случаи и продолжительность диареи по сравнению с контрольными группами животных. Вакцинация телят в суточном возрасте дала сходные результаты.
Иммунопрофилактика основана на вакцинации коров, причем необходимо стимулировать высокое, продолжающееся свыше 3-5 дней, выделение с молоком специфических AT. Механизм защиты основан на постоянном присутствии молочных AT в кишечнике новорожденных, которые нейтрализуют РВ в просвете тонкого кишечника. Рекомендуется консервирование молозива глубоким замораживанием и скармливание его телятам в первые недели жизни. В комбинации со специфической активной пероральной прививкой против E. coli этот метод является оптимальным, хотя и не вполне удовлетворительным способом профилактики диареи новорожденных телят. Почти все коровы выделяют специфичные AT к РВ с молозивом, но не установлена связь между исходным титром клостральных AT против РВ и развитием связанной с РВ диареей у телят.
С целью профилактики диареи, вызванной РВ, стельных коров вакцинируют в конце сухостойного периода, что обеспечивает высокую концентрацию AT в организме новорожденных телят, хотя высказано выше, что циркулирующие в крови AT сами по себе несущественны в защите телят против РВ. По мнению ряда авторов, вирус, выделенный от новорожденных телят и с ассимптоматической инфекцией, может быть естественно аттенуирован и пригоден для иммунизации (12). Во Франции применяется комбинированная инактивированная (3-пропиолактоновая вакцина против рота - и коронавирусной инфекции. В Болгарии применяют бивалентную вакцину против рота - и коронавирусной инфекции телят Ро Ко-81 из местных штаммов, адаптированных к культуре клеток. Телята, инфицированные серотипами I или И бычьего РВ, не приобретают перекрестной защиты к гетерологичным бычьим РВ и могут заболеть вторично.
Описана вакцина, которая содержит новые реассортанты вируса. Один реассортант содержит ген, кодирующий VP7 ротавируса человека, другой - VP4. Другие гены получены из штамма WC3 ротавируса крупного рогатого скота (33). Проведено изучение иммуногенности очищенного и концентрированного ротавируса, выделенного от больных телят. Показано, что полученная вакцина способствует повышению активности иммунокомпетентных клеток в организме у иммунизированных животных и образованию вируснейтрализующих антител в высоком титре, которые передаются с молозивом новорожденным телятам, обеспечивая стойкую защиту их от ротавирусной инфекции.
Серологическая оценка поствакцинального иммунитета не разработана. В неблагополучном по инфекции стаде или при иммунизации стельных коров AT содержатся в молозиве в высоких титрах в 1-й день отела, а затем резко снижаются и исчезают к 4-6-му дню. Данные о роли пассивных AT при РВИ КРС весьма противоречивы. Новорожденные телята имеют в сыворотке AT к РВ, хотя из их фекалий выделяли РВ на 1-2 недели жизни. Это указывает на то, что материнские AT не подавляют РВИ и репликацию вируса у телят. Относительно сывороточных AT как фактора защиты существует мнение, что они не являются необходимыми для защиты против РВИ. Для защиты нужно присутствие AT в кишечнике теленка. Поэтому выпаивание больших количеств молозива в 1-й день жизни обеспечивает защиту, по крайней мере, в течение 48 ч. Более эффективно частое выпаивание молозива мелкими порциями. Двукратная вакцинация коров инактивированной вакциной за 20-40 дней до отела приводит к значительному повышению специфических AT в молозиве, скармливание которого новорожденным телятам предохраняет их от желудочно-кишечных заболеваний. Средний уровень AT в молозиве и молоке достаточен, чтобы предотвратить развитие инфекции до 5 дней жизни телят, но не более.
Ротавирусная диарея новорожденных телят - остропротекающая контагиозная болезнь, характеризующаяся поражением желудочно-кишечного тракта.
Заболевание широко распространено во всех географических районах земного шара. В СССР в 1976 г. было впервые сообщено об обнаружении ротавирусов в фекалиях телят с признаками диареи (О. В. Богатыренко и др., 1976).
Заболевание наносит значительный экономический ущерб в связи с гибелью животных, замедлением роста и развития телят, затратами на лечение, организацию и проведение оздоровительных мероприятий. Предполагают, что ротавирус вызывает до 60-100 % случаев заболеваний телят к 25 % общего числа погибших телят.
В естественных условиях болеют телята первых двух недель жизни. Некоторые авторы наблюдали диарею, вызванную ротавирусом, у телят вплоть до 4-недельного и даже 6-7-недельного возраста. О спектре патогенности ротавируса крупного рогатого скота можно косвенно судить по выявлению вируснейтрализующих антител у животных различных видов. Частота положительных находок у животных каждого вида колеблется от 30 до 100 %. Высокие титры антител (до 1: 250) характерны для лошадей, овец, свиней и телят. Результаты серологических исследований свидетельствуют о широком распространении ротавирусной инфекции.
Характеристика возбудителя . Вирус относится к семейству Reoviridae, роду Rotavirus. Название «ротавирус» (от лат. rota - колесо) вирионы получили за свою форму: при электронной микроскопии они напоминают маленькие колеса с широкой ступицей, короткими спицами и тонким четко выделенным ободком.
Вирионы - это икосаэдрические частицы диаметром 60- S0 нм. Состоят из сердцевины, содержащей двуспиральную РНК и внутренние белки, и двойного капсида - наружного и внутреннего. Суперкапсидной оболочки нет. Встречаются частицы, лишенные наружного капсида, а также пустые частицы без сердцевины; и те и другие не обладают инфекционностью. Геном вируса состоит из 11 уникальных фрагментов двуспиральной РНК. Вирусы размножаются в цитоплазме клетки.
Представители рода ротавирус являются возбудителями диареи многих видов животных (крупного рогатого скота, овец, лошадей, собак, кроликов, мышей и др.), а также человека.
Устойчивость к физико-химическим воздействиям . Вирус не чувствителен к хлороформу, эфиру, фреону, устойчив к pH 3,0 и относительно резистентен к тепловому воздействию. Его не удается полностью инактивировать при 60 °С в течение 30 мин. В фекалиях при комнатной температуре вирус сохраняет свои свойства в течение 7 мес. Формалин (10%-ный) и лизол (5%-ный) в течение 2 ч инактивируют вирус.
Антигенная структура . В сердцевине вируса локализовано три белка (VP1, VP2 и VP3), внутренний капсид содержит белок VP6, наружный капсид построен из белков VP7 и VP4. Белки наружного капсида вируса играют основную роль в возникновении инфекционного процесса и развитии иммунитета. Они ответственны за осуществление ранних этапов взаимодействия вирионов с чувствительными клетками - адсорбцию и проникновение, с ними связывают вирулентность ротавирусов. Эти же белки (VP7 и VP4) вызывают образование специфических вируснейтрализующих антител. Они ответственны за иммуногенность ротавирусов.
Антигенная вариабельность . Ротавирусу крупного рогатого скота присуща значительная вариабельность вирулентности и антигенности. Все вирусы человека и животных по наличию группоспецифического антигена, обусловленного белком внутреннего капсида VP6, подразделяются на семь групп (А, В, С, D, Е, F, Y) и выявляются в РСК, РДП, РИФ, ИЭМ. Большинство ротавирусов входят в группу А - типичные ротавирусы.
По наличию типоспецифических антигенных детерминант на белках наружного капсида VP7 и VP4 ротавирусы группы А подразделяются на несколько серотипов. Известно три серотипа возбудителя у крупного рогатого скота и, кроме того, у него выявлены антитела к трем серотипам ротавируса человека. Впервые серологическая связь между ротавирусом телят и человека была показана в 1974 г.
Заражение разными серотипами ротавируса крупного рогатого скота не сопровождается перекрестной защитой. Реинфекция телят даже через 4 нед после перенесенной диареи другим серотипом вируса приводит к повторному заболеванию.
Антигенная активность . При естественном и экспериментальном заражении вирус индуцирует образование вируснейтрализующих, комплементсвязывающих, преципитирующих антител, которые выявляют в PH, РСК, РДП, РНИФ и др.
В организме, пораженном ротавирусом, главную роль играют антитела, продуцируемые слизистой кишечника. Показано, что в кишечнике антитела появляются между третьим и двенадцатым днями, а в фекалиях - между четвертым и восемнадцатым днями после инфицирования телят ротавирусом. У разных телят наблюдается значительное различие в сроках и количестве продукции кишечных антител. В жидкости из тощей кишки выявляли антитела классов IgM, IgY, IgG. Установлено, что иммуноглобулины могут пассивно передаваться плоду через неповрежденную плаценту, поэтому антитела против ротавируса обнаруживают в сыворотке эмбриона крупного рогатого скота.
Культивирование вируса . Ротавирус крупного рогатого скота трудно культивируется в культуре клеток. Показана возможность адаптации вируса к ряду культур клеток как первичных (клетки легких и почек эмбриона коровы, ягненка, теленка, обезьян и др.), так и перевиваемых (МДВК, L, Vero и др.). Большинство исследователей считают, что лучшей культурой является почка эмбриона коровы или кишечник плода коровы. Вирус вызывает специфические ЦДП - появление очагов серповидных клеток. Эпителиоподобные клетки более чувствительны к ротавирусу по сравнению с фибробластоподобными.
Установлено, что обработка вируссодержащей суспензии трипсином облегчает выделение ротавируса и его адаптацию к культуре клеток. Оптимальный эффект достигается при контакте вируса с трипсином (30 мин при 22-37 °С) и добавлении в поддерживающую среду трипсина (5-10 мкг/мл). Титр вируса повышается в 10-1000 раз. Полагают, что механизм этого феномена обусловлен диспергирующим действием фермента на вирусные агрегаты, повышением проницаемости клеточных мембран, а также инактивацией интерферона. Кроме того, при вирусовыделении трипсин способствует удалению антител, присутствующих в фекалиях. Некоторые штаммы способны образовывать бляшки в культуре клеток под агаром.
Гемагглютинирующие свойства . Опубликованы данные о гемагглютинирующей активности некоторых штаммов ротавируса. Гемагглютинирующая активность вируса обусловлена наличием на поверхности полноценных частиц вируса гемагглютинина, который очень нестабилен, при 22 °С его активность снижается на 50 % за 24 ч. Наивысшие титры получены с эритроцитами морской свинки и человека группы 0.
Гемадсорбирующие свойства не установлены.
Интерфероногенная активность . Инокуляция в культуру клеток интактного или инактивированного УФ-лучами ротавируса вызывала образование в клетках интерферона. Заражение новорожденных телят ротавирусом сопровождается продукцией интерферона.
Экспериментальная инфекция . При экспериментальном заражении телят, лишенных молозива, и гнотобионтов диарея развивается обычно через 18-24 ч после орального введения им вируса. При заражении телят, получивших молозиво, наблюдали слабовыраженные признаки болезни. Удалось вызвать заболевание телят-гнотобионтов 10-недельного возраста и даже в возрасте 14-17 мес. Вирус в фекалиях зараженных телят появляется через 1-2 дня и выделяется в течение месяца. Вируснейтрализующие антитела в крови обнаруживают на 7-й день, и максимума их количество достигает через 4 нед после заражения.
Долгое время вирус, выделенный у человека, считали апатогенным для телят. Однако С. А. Мебус с сотр. в 1976 г. воспроизвел диарею у телят-гнотобионтов, заразив их ротавирусом, выделенным у больных гастроэнтеритом детей младшего возраста. Ротавирусы крупного рогатого скота и человека патогенны и для поросят.
Клинические признаки . Инкубационный период болезни зависит от возраста и иммунологического состояния теленка и составляет от 14 до 72 ч. Болеют телята в возрасте 1 - 12 дней. Клинически болезнь характеризуется депрессией, потерей аппетита и наличием водянистого соломенно-желтого поноса со слизью. Температура тела иногда поднимается до 41 °С. Если инфекция не осложняется E. coli, то через 2-3 дня телята выздоравливают. Обычно животные болеют 1-8 сут, а в некоторых случаях до 15 дней. Чем моложе теленок, тем дольше наблюдается диарея. Тяжесть заболевания зависит от степени вирулентности штаммов вируса и резистентности животных. Большую роль играют условия содержания и кормления. Ротавирусы, повреждая эпителий кишечника, способствуют проникновению кишечной палочки и тем самым осложняют заболевание. Особенно тяжело болезнь протекает в хозяйствах, где животные поражены рота — и коронавирусами. В таких хозяйствах погибает до 75 % заболевших животных. Большинство исследователей считают, что неосложненная ротавирусная инфекция протекает легко.
Патологоанатомические изменения . Основные изменения наблюдаются в тонком кишечнике, в котором вирус поражает цилиндрические эпителиальные клетки ворсинок. Размножаясь в этих клетках, он вызывает их гибель и десквамацию, что приводит к нарушению процессов переваривания и всасывания. При микроскопическом исследовании находят уменьшение кишечных ворсинок, прогрессирующее замещение эпителия кубическими клетками. Верхушки ворсинок часто обнажаются, увеличивается количество ретикулоподобных клеток. В отдельных участках кишечника полностью исчезают ворсинки. У переболевших животных патологические изменения в кишечнике исчезают через 8- 10 сут.
Локализация вируса . Ротавирус обнаруживают в кишечнике (в основном в тонком отделе), в мезентериальных лимфатических узлах и легких. Пораженные вирусом клетки кишечника выделяются с фекалиями в первые 4-5 ч от начала диареи и обычно в течение 2-3 дней. Удавалось выделить вирус из фекалий клинически здоровых телят через 30-49 дней после болезни.
Источник инфекции - больные телята и вирусоносители. Из 1 г фекалий больных телят выделяют 10 9 -10 10 вирусных частиц. Выделение вируса с фекалиями продолжается до трех недель. Возможно скрытое течение диареи ротавирусной этиологии, а также реинфекция ротавирусами телят более старшего возраста.
Основной путь передачи инфекции - алиментарный: при контакте с больными, а также через обслуживающий персонал и инфицированный инвентарь. Вопрос о прохождении ротавируса через плаценту коров остается открытым, так как получены противоречивые данные. Видимо, заражение телят возможно в момент отела и при совместном содержании их с матерью.
Диагностика . Предварительный диагноз ставят на основании эпизоотологических, клинических и патологоанатомических данных. Окончательный диагноз устанавливают лабораторными методами. При диагностике кишечных заболеваний необходимо обследовать животных на наличие нескольких патогенных агентов. Так, например, показано, что в 93 % случаев причиной диареи были рота — и коронавирусы: в 25 % - только ротавирусы; в 24 % - только коронавирусы; в 13 % - одновременно рота — и коронавирусы, а в 38 % - одновременно бактерии, рота — и коронавирусы.
Взятие и подготовка материала . В лабораторию направляют не менее 10 проб жидких фекалий, взятых в первые (1-3) дни болезни, фрагмент тонкого кишечника с содержимым, полученный не позднее 1-2 ч с момента гибели или вынужденного убоя телят. Для серологического исследования направляют 10-15 проб парных сывороток крови от больных животных и не менее 10 проб сыворотки крови коров и 10 проб молозива. Материал направляют в термосе с охлаждающей смесью.
Для вирусологических и электронно-микроскопических исследований готовят 10%-ную суспензию фекалий на растворе Хенкса, гомогенизируют, центрифугируют (1 ч при 3000 мин -1), надосадочную жидкость обрабатывают антибиотиками, выдерживают 10-16 ч при 4 °С и исследуют.
Лабораторная диагностика . Индикацию вируса в патологическом материале проводят путем:
обнаружения вирионов ротавируса методом электронной и иммуноэлектронной микроскопии;
обнаружения вирусного антигена с помощью РИФ, ИФА, ВИЭФ, РДП, РСК. Предложены и другие методы, такие, как реакция латексагглютинации (РЛА), а также метод с использованием специфических антител, фиксированных на белке А золотистого стафилококка;
обнаружения вирусной нуклеиновой кислоты методом точечной гибридизации, ПНР.
Изоляцию вируса из патологического материала в диагностических лабораториях обычно не проводят, так как лабораторные животные и куриные эмбрионы нечувствительны к вирусу, а выделение ротавируса в культурах клеток требует предварительной адаптации и проведения дополнительных манипуляций: применение трипсина или центрифугирование вируса на слое клеток. Наличие вируса в культурах клеток проверяют методом РИФ или электронной микроскопии.
Идентификацию вируса проводят в указанных выше серологических реакциях.
Ретроспективная диагностика . Для этой цели парные сыворотки крови исследуют в серологических реакциях РСК, РТГА (с эритроцитами человека группы 0 или морской свинки), непрямой РИФ, PH. Некоторые исследователи считают, что серологические исследования сывороток крови телят имеют весьма ограниченную ценность, так как в течение первых недель жизни не удается обнаружить прирост титра антител, несмотря на прошедшую болезнь. Для установления общего иммунного состояния стада до и после вакцинации определенное практическое значение имеет исследование сывороток и молозива коров. Уровень антител можно определить с помощью PH при наличии в лаборатории адаптированного к культуре клеток штамма ротавируса телят.
Дифференциальный диагноз . Ротавирусную инфекцию у новорожденных телят следует дифференцировать от коронавирусной инфекции, кол и бактериоза и диареи алиментарного происхождения.
Иммунитет и специфическая профилактика . При ротавирусной инфекции иммунитет изучен недостаточно. Установлено, что наличие антител в сыворотке крови не играет существенной роли в обеспечении защиты против ротавирусной инфекции. Гуморальные антитела только облегчают течение естественного заболевания.
Большое значение имеет местный иммунитет, возникающий при контакте вируса с клетками кишечного эпителия. У новорожденных животных защитную роль играют антитела, полученные с молозивом. Относительно в высоком титре обнаруживают антитела к ротавирусам непосредственно после отела (в молозиве 1: 320-1: 240, в крови 1: 20-1: 80), но их количество в молоке быстро снижается уже в течение первых суток; через 4-6 дней они не выявлялись. Иммунитет после скармливания молозива связан с антителами, остающимися в просвете кишечника, а не с антителами, всосавшимися в кровь. Поэтому телята, сосущие иммунную мать, поражаются к 5-дневному возрасту. Рекомендуется молозиво консервировать путем замораживания и скармливать телятам в первые недели жизни. Титр антител в сыворотке крови, молозиве и молоке многих нетелей относительно низок, поэтому их телята поражаются чаще и болеют тяжелее.
Специфическая профилактика ротавирусной инфекции крупного рогатого скота находится в стадии разработки и испытания. Создаются и проверяются инактивированные и живые вакцины. Предпочтение отдается инактивированным вакцинам. Защита телят через молозиво и молоко бустеризованных коров представляется более надежной, чем вакцинация самих телят. Кормление телят молозивом от матерей, ранее иммунизированных инактивированной вакциной, предотвращает появление диареи новорожденных.
Бельгийские ученые предложили для продления секреции специфических антител в молозиве и молоке до 20 дней вводить отелившимся коровам адъювант, что усиливает секреции антител в молоке только против вирусов, которые были в организме коровы. Если у коров не было вирусов, обусловливающих диарею телят, то матерей до или во время стельности необходимо обработать вакциной.
В настоящее время считают, что более эффективна иммунизация матерей перед отелом с последующей подкормкой телят молозивом.
Если вы нашли ошибку, пожалуйста, выделите фрагмент текста и нажмите Ctrl+Enter .
Ротавирусная инфекция телят (rotaviridae infection bovinum ) – остро протекающее, высококонтагиозное заболевание новорожденных телят, выделяющееся профузным поносом, обезвоживанием организма, формированием катарального либо катарально-геморрагического гастроэнтерита и значительной смертностью.
Этиология . Возбудитель ротавирусной инфекции телят принадлежит к семейству Reoviridae, роду Rotavirus. Все ротавирусы по строению идентичны и обладают общим внутренним антигеном, выявленным в РСК, РИФ, РИД и ИФА.
Полные вирионы обладают правильной сферической архитектоникой, сходную с формой колеса. Данная форма зрелых вирионов представляет собой особенность ротавирусов, дозволяющая различать их от энтеровирусов.
Эпизоотологические данные . В естественных условиях заболевают новорожденные телята в возрасте от 2 до 12 суток, однако очень часто в первые 2-6 суток жизни, когда заболеваемость составляет 75,5-100%, при 30%-ной смертности. Наиболее подвержены болезни телочки (45,5%), чем бычки (32,0%). У взрослых животных болезнь проходит без симптомов и сопутствуется продолжительным выделением возбудителя во внешнюю среду.
Источник возбудителя ротавирусной инфекции телят - нездоровые и переболевшие животные, выделяющие вирус во внешнюю среду с фекалиями. В одном мл фекалий нездорового теленка способно содержаться до одного млрд. вирионов.
Установлена продолжительная персистенция вируса у лактирующих коров, что доказывается присутствием специфических антител у 95% осмотренных животных. Это свидетельствует о широком вирусоносительстве.
Обстоятельствами передачи возбудителя способна стать посуда, а также станки, вещи ухода, спецодежда, руки обслуживающего персонала, заражённые выделениями нездоровых животных. Инфицирование случается алиментарным путем и внутри утробы матери. В распространении инфекционного заболевания существенное значение могут играть собаки и кошки. Определено близкое родство ротавирусов крыс и людей к штамму бычьего ротавируса группы В.
Протекание и признаки . Инкубационный этап у телят колеблется от 12-18 часов до 2-суток. Протекание заболевания сверхострое и острое. Она длится от 2 до 5 дней и проявляется профузным поносом, общей депрессией, отказом от корма, небольшим, кратковременным увеличением температуры тела.
При этих признаках испражнения водянистые, соломенно-желтого цвета, изредка со слизью, кислого запаха. Усиленно формируется дегидратация организма и депрессия, дегенерация мышечной ткани и западение глаз. Определено, что чем моложе теленок, тем дольше время диареи. Наибольшее число вирионов (десять частиц/мл) в фекалиях заболевших телят хранится в начале заболевания, а с 5-6-го дня их число падает.
У 4-14-дневных телят ротавирусная инфекция способно осложняться коронавирусным энтеритом и эшерихиозом. В данном случае заболевание проходит тяжело и заканчивается смертью.
При вскрытии главные патологоанатомические изменения у павших телят выявляют в тонком кишечнике в виде катарального либо катарально-геморрагического воспаления. Стенка кишечника истончена, слизистая оболочка гиперемирована.
В кишечнике - жидкое желтовато-зеленое содержимое, в сычуге - сгустки молока и молозива. Фиксируют петехиальные кровоизлияния под серозной оболочкой предсердий и точечные – на селезенке, а также гиперплазию брыжеечных лимфатических узлов, атрофию лимфофолликулов. При гистологическом изучении выявляют некротический энтерит.
Диагноз на ротавирусную инфекцию . При диагностике придают значение широкому диапазону показателей: эпизоотологические данные, клинические симптомы заболевания, патологоанатомические трансформации с непременным проведением вирусологических и иммунологических изучений.
Лабораторная диагностика ротавирусной инфекции новорожденных телят организована на выявлении специфических антигенов в отправном вируссодержащем материале с употреблением реакции иммунодиффузии (РИД), иммуноферментном анализе (ИФА), иммунофлуоресценции (РИФ) и иммуноэлектронной микроскопии. Определение присутствия антиротавирусных глобулинов в сыворотке крови нездоровых и перенесших заболевание телят, а также в крови и молозиве коров производится с целью оценки иммунного статуса организма телят и исследования эпизоотической ситуации.
Дифференциальный диагноз . Ротавирусную инфекцию отличают от вирусной диареи, парвовирусной и коронавирусной инфекции, хламидиоза, колибактериоза.
Лечение . Для лечения применяют гипериммунные сыворотки и сыворотки реконвалесцентов, в которых существуют антитела к ротавирусу в то же время с антибактериальными и иммуностимулирующими препаратами, пробиотики. Используют также симптоматические методы лечения.
Предупреждение и меры борьбы . Для предупреждения применяют живые и инактивированные моно- и ассоциированные вакцины, гипериммунные сыворотки. Для устранения болезни применяют общие противоэпизоотические процедуры – ограниченность движения скота, обеззараживание, помещение на карантин нездоровых животных, выполнение принципа пусто-занято.
Ротавирусная инфекция телят (rotaviridae infection bovinum) – остро протекающая, высококонтагиозная болезнь новорожденных телят, характеризующаяся профузным поносом, дегидратацией организма, развитием катарального или катарально-геморрагического гастроэнтерита и высокой летальностью.
Этиология. Возбудитель ротавирусной инфекции относится к семейству Reoviridae, роду Rotavirus. Все ротавирусы морфологически идентичны и имеют общий внутренний антиген, выявленный в РСК, РИФ, РИД и ИФА.
Полные вирионы имеют правильную сферическую архитектонику, напоминающую форму колеса. Эта форма зрелых вирионов является специфической особенностью ротавирусов, позволяющая дифференцировать их от энтеровирусов.
Эпизоотологические данные. В естественных условиях болеют новорожденные телята в возрасте 2-12 дней, но чаще в первые 2-6 дней жизни, когда заболеваемость составляет 75,5-100%, при 30%-ной летальности. Более подвержены заболеванию телочки (45,5%), чем бычки (32,0%). У взрослых животных заболевание протекает бессимптомно и сопровождается длительным выделением возбудителя во внешнюю среду. Источник возбудителя инфекции - больные и переболевшие животные, выделяющие вирус во внешнюю среду с экскрементами. В 1 мл фекалий больного теленка может содержаться до 1 млрд. вирионов.
Установлена длительная персистенция вируса у лактирующих коров, что подтверждается наличием специфических антител у 95% исследованных животных. Это указывает на широкое вирусоносительство.
Факторами передачи возбудителя может быть посуда, станки, предметы ухода, спецодежда, руки обслуживающего персонала, инфицированные выделениями больных животных. Заражение происходит алиментарным путем и внутриутробно. В распространении инфекции существенную роль могут играть собаки и кошки. Установлено близкое родство ротавирусов крыс и людей к штамму бычьего ротавируса группы В.
Течение и симптомы. Инкубационный период у телят колеблется от 12-18 часов до 2-суток. Течение болезни сверхострое и острое. Она продолжается от 2 до 5 суток и проявляется профузным поносом, общей депрессией, отказом от корма, незначительным, кратковременным повышением температуры тела. При этом фекалии водянистые, соломенно-желтого цвета, иногда со слизью, кислого запаха. Интенсивно развивается дегидротация организма и депрессия, дегенерация мышечной ткани и западение глаз. Установлено, что чем моложе теленок, тем длиннее период диареи. Наибольшее число вирионов (10 частиц/мл) в фекалиях больных телят содержится в начале болезни, а с 5-6-го дня их число уменьшается. У 4-14-дневных телят ротавирусная инфекция может осложняться коронавирусным энтеритом и эшерихиозом. В этом случае болезнь протекает тяжело и заканчивается летальным исходом. При вскрытии основные патологоанатомические изменения у павших телят обнаруживают в тонком кишечнике в виде катарального или катарально-геморрагического воспаления. Стенка кишечника истончена, слизистая оболочка гиперемирована. В кишечнике - жидкое желтовато-зеленое содержимое, в сычуге - сгустки молозива и молока. Регистрируют петехиальные кровоизлияния под серозной оболочкой предсердий и точечные – на селезенке, а также гиперплазию брыжеечных лимфатических узлов, атрофию лимфофолликулов. При гистологическом исследовании обнаруживают некротический энтерит.
Диагноз на ротавирусную инфекцию. При диагностике учитывают широкий диапазон показателей: эпизоотологические данные, клинические признаки болезни, патологоанатомические изменения с обязательным проведением вирусологических и иммунологических исследований.
Лабораторная диагностика ротавирусной инфекции новорожденных телят основана на выявлении специфических антигенов в исходном вируссодержащем материале с использованием реакции иммунодиффузии (РИД), иммунофлуоресценции (РИФ), иммуноферментном анализе (ИФА) и иммуноэлектронной микроскопии. Определение наличия антиротавирусных глобулинов в сыворотке крови больных и переболевших телят, а также в крови и молозиве коров проводится с целью оценки иммунного статуса организма телят и изучения эпизоотической ситуации.
Дифференциальный диагноз. Ротавирусную инфекцию дифференцируют от вирусной диареи, парво- и коронавирусной инфекции, хламидиоза, колибактериоза.
Лечение. Для лечения используют гипериммунные сыворотки и сыворотки реконвалесцентов, в которых имеются антитела к ротавирусу одновременно с антибактериальными и иммуностимулирующими препаратами, пробиотики. Применяют также симптоматические методы лечения.
Профилактика и меры борьбы. Для специфической профилактики используют живые и инактивированные моно- и ассоциированные вакцины, гипериммунные сыворотки. Для ликвидации заболевания используют общие противоэпизоотические мероприятия – ограничение движения скота, дезинфекция, карантинирование больных животных, соблюдение принципа пусто-занято.
Ротавирусная инфекция (лат. -Diarrhearotaviralisvitulorum,Rotavirosisingectiosabovuim; ротавирусная диарея телят) - остро протекающая болезнь телят, характеризующаяся поражением желудочно-кишечного тракта, диареей и дегидратацией.
347 Историческая справка, распространение, степень опасности и ущерб. Мебус с сотр. (США) в 1969 г. выделили из фекалий больных новорожденных телят вирусный агент и воспроизвели диарею у телят-гнотобиотов, не получавших молозива. Впоследствии рота-вирусы были обнаружены у поросят, ягнят и других животных. В настоящее время рота-вирусная диарея описана в 20 странах мира и является актуальной проблемой. Могут заболевать люди.
Возбудитель болезни. Возбудитель относится к РНК-содержащим вирусам семействаReoviridae, родуRotavirus. В последний входят ротавирусы человека, коров, овец, коз, свиней, обезьян, лошадей, оленей, кроликов, уток. Установлена общность группоспецифических и типоспецифических антигенов ротавирусов телят и человека, а также групповых антигенов вируса телят, мышей и человека. Ротавирусы крупного рогатого скота, свиней, лошадей и кроликов также родственны. Известно три серотипа возбудителя.
Для культивирования ротавируса используют первично трипсинизиро-ванные культуры клеток, цитопатогенное действие вируса проявляется через различное число пассажей.
Ротавирусы крупного рогатого скота устойчивы к воздействию физических и химических факторов, в частности к колебаниям рН от 3,0 до 5,0, действию концентрированных солей, жирорастворителей, ферментов желудка и сычуга. Вирус сохраняется в фекалиях до 9 мес, при температуре -60 °С - в течение нескольких месяцев, при 4 "С - не менее 1 мес. При 50 °С ротавирус интактивируется в течение 1 ч.
Губительно воздействуют на вирус хлор, диоксид хлора, монохлор-амин, а также 10%-ный раствор формалина, 5%-ный раствор лизола при экспозиции 2 ч.
Эпизоотология. К ротавирусной диарее восприимчивы животные разных видов. Чаще болеют телята 2...3-дневного возраста в зимне-осенний и весенний периоды. Заболеваемость достигает 100 %, летальность - 50 %. Отмечена прямая связь между заболеванием новорожденных телят диареей и присутствием в их фекалиях ротавируса, который обнаружен у 19,1...45,2 % телят в возрасте до 12 дней.
Источник возбудителя инфекции - больные и переболевшие животные, выделяющие вирус с каловыми массами. Важный аспект при распространении - возможность скрытого течения болезни. В распространении болезни немаловажную роль играют дикие животные, собаки, кошки, а также животные со скрытым течением болезни. В сохранении вируса в стаде имеет значение повторное инфицирование взрослых особей от молодняка.
Заражение телят происходит алиментарно после рождения. Имеются сообщения, что ротавирусы могут проходить через плаценту и инфицировать плод.
Биологическая особенность возбудителя - поражение гетерологичных хозяев. Ротавирусы телят вызывают диарею у поросят; ротавирусы жеребят и ягнят также репродуцируются у свиней, которые, в свою очередь, могут заражать телят; ротавирусы крыс поражают людей; ротавирусы человека - телят, поросят, щенков. Антитела к ротавирусу телят обнаружены в сыворотке крови собак, лошадей и кошек.
Патогенез. Ротавирус репродуцируется и поражает эпителиальные клетки апикальной части ворсинок тонкого отдела кишечника и мезентериальные лимфатические узлы, вызывая вакуолизацию и преждевременное слущивание, что приводит к укорачиванию ворси-
348нок кишечника и покрытию их незрелым кубическим эпителием. Всасывающая функция ворсинок частично или полностью прекращается. Незрелые клетки эпителия ослабляют глюкозосвязанный транспорт натрия, что способствует развитию острой диареи и часто приводит к летальному исходу.
Пораженные вирусом эпителиальные клетки выделяются с фекалиями в первые 4...5 ч после начала диарейного синдрома. Антитела, продуцируемые слизистой оболочкой кишечника, появляются между 3-м и 12-м днем, а в фекалиях - между 4-м и 18-м днем после заражения телят.
Течение и клиническое проявление. Инкубационный период длится 16...24 ч. На степень тяжести болезни могут влиять различные факторы: вирулентность и доза вируса, возраст телят, иммунный статус молодняка, сопутствующие инфекции (эшерихиоз, протейная инфекция и др.).
Течение болезни острое. Симптомы проявляются выделением водянистых фекалий желтоватого цвета с кисловатым запахом. Температура тела, как правило, нормальная, иногда поднимается до 41 "С, аппетит несколько снижен. Телята угнетены, отказываются от воды, у них отмечают атаксию, депрессию.
При развитии болезни фекалии становятся грязно-желтого цвета, а в дальнейшем - с примесью крови. Отмечают западание глаз, дегидратацию и фибрилляцию мышц конечностей, истечение вязкой слюны, тахикардию, коматозное состояние. Болезнь длится от 2 до 5 сут. У телят 1...2-дневного возраста болезнь протекает наиболее остро.
Патологоанатомические признаки. При вскрытии обнаруживают язвы на слизистой оболочке ротовой полости, пищевода и двенадцатиперстной кишки. Стенки кишечника истончены, слизистая оболочка гипере-мирована, обнаруживают геморрагии, кишечник заполнен жидким жел-товато-зеленым содержимым. Устанавливают увеличение мезентериаль-ных лимфатических узлов, иногда их дегенеративно-некротические поражения.
Отмечают петехиальные кровоизлияния под серозной оболочкой предсердий и точечные на селезенке, дистрофическо-некротические изменения в печени и почках. Иногда отмечают гиперемию и отечность слизистой оболочки бронхов, нехарактерные изменения в легких.
При гистологическом исследовании обнаруживают некротический энтерит и деструкцию ворсинок тонкого кишечника.
Диагностика и дифференциальная диагностика. Диагноз ставится комплексно на основании эпизоотологических данных, клинических признаков, патологоанатомических изменений, но основной метод диагностики-лабораторные исследования, включающие методы электронной и иммуноэлектронной микроскопии.
В лабораторию направляют не менее 10 проб жидких фекалий, взятых от 2... 14-дневных телят с клиническими признаками диареи на 1...3-Й день заболевания, а также от трупов - тонкий кишечник с содержимым, пробы парных сывороток крови больных и переболевших животных, а также пробы сыворотки крови и молока коров.
Для индикации и идентификации ротавирусов применяют методы ИФА, метод моноклональных антител в ИФА, РДП, РТГА, РИФ, РН, РСК, радиоиммунологический метод. Выявление ротавирусов в патологическом материале возможно также при помощи электронной и иммуноэлектронной микроскопии со специфической сывороткой и другими методами.
Для экспресс-диагностики используют реакцию латекс-агглютинации, реакции непрямой гемагглютинации или торможения гемагглютинации и
349связывания комплемента с диагностикумом «Ротатест», а также полиме-разную цепную реакцию.
Ретроспективная диагностика при помощи серологических исследований имеет ограниченную ценность, так как в первые недели жизни не удается обнаружить прироста титра антител, несмотря на перенесенную болезнь.
При постановке диагноза следует учитывать, что ротавирусная инфекция крупного рогатого скота может протекать в виде смешанных инфекций с участием таких возбудителей, как бычий коронавирус, парвовирус крупного рогатого скота.
При дифференциальной диагностике необходимо исключить корона- и парвовирусные инфекции, эшерихиоз и вирусную диарею, псевдомоноз, сальмонеллез, протейную и другие энтеробактери-альные инфекции; различные диареи неинфекционного характера. Следует учитывать высокую вероятность смешанных инфекций.
Иммунитет, специфическая профилактика. У новорожденных животных антитела к ротавирусу секретируются в наибольших концентрациях в 1 -й день и резко падают к 3-му дню после рождения. Многие из них имеют антитела, адсорбированные из молозива. Считают, что колостральный иммунитет обеспечивает устойчивость новорожденного теленка к вирусу или снижает тяжесть переболевания.
Для иммунизации животных разработаны и применяются вакцины: ассоциированная вакцина «Ротавак К-99», «Роко-81», «Роковак» (ВГНКИ), ассоциированная вакцина против рота-, корона-, герпесвирусной инфекций и эшерихиоза; бивалентная вакцина против рота- и коронавирусной инфекций крупного рогатого скота сорбированная инактивированная, вакцина ВНИИЗЖ против рота-, корона- и реовирусной инфекций крупного рогатого скота сорбированная инактивированная.
Профилактика и меры борьбы. Для более полного выявления инфицированных животных целесообразно проводить 1 раз в год поголовное обследование коров с целью обнаружения антител к ротавирусу и исследование сыворотки крови телят в реакции торможения (непрямой) гемаг-глютинации на 1...5-Й день после рождения и повторно на 10...20-й день. Исследование фекалий телят с целью выявления антигена ротавируса необходимо проводить с 1-го до 10-го дня жизни.
Общая основа профилактики - предупреждение стрессов. Важное значение имеет правильное и полноценное кормление коров, обеспечивающее нормальный обмен веществ и поддерживающее достаточную концентрацию каротина в плазме крови.
На комплексах необходимо проведение профилактической обработки животных иммунной сывороткой реконвалесцентов. Своевременное выпаивание достаточного количества молозива от коров-матерей, двукратно иммунизированных инактивированной вакциной против рота- и корона-вирусных инфекций, и применение новорожденным телятам синкогеля значительно сокращают заболеваемость диареей и гибель телят.
Стельных коров вакцинируют одной из выпускаемых промышленностью вакцин. Новорожденным выпаивают ассоциированную вакцину (ВГНКИ) против рота- и коронавирусного энтерита телят за 30 мин до первого приема молозива.
В хозяйстве при ротавирусной диарее крупного рогатого скота необходимо проведение вынужденной дезинфекции помещений растворами формалина, лизола, хлорсодержащими препаратами.
350Лечение. Больных животных изолируют и проводят комбинированное лечение. Для специфической терапии применяют полиспецифическую гипериммунную сыворотку против рота-, корона-, герпесвирусной и эшерихиозной диареи новорожденных телят. При ее отсутствии телятам вводят сыворотку животных-реконвалесцентов (доноров). Эффективность такого лечения достигала 100 %.
Применяют перорально смектит - гидрат силиката алюминия в виде порошка. Перорально в капсулах или с регидратационной жидкостью назначают рекомбинант 1 - гибрид интерферона из Е. coli. Исключив из рациона заменители цельного молока и вводя растворы электролитов без бикарбоната натрия, удается предотвратить дальнейшее нарушение кис-лотно-щелочного равновесия.
При выявлении болезни больных животных изолируют и применяют противодиарейные средства: физиологический раствор, антибиотики (например, раствор байтрила, канамицин), электролиты внутрь. Для симптоматической и патогенетической терапии разработан препарат комплексного действия - антидиарин.
Терапевтический эффект получен от применения таких препаратов, как фоспренил, нуклеинат натрия, гамавит и др.
Вяжущее и противовоспалительное действие в желудочно-кишечном тракте оказывают настои щавеля конского и ромашки аптечной. Кроме того, назначают пробиотики, например ацидофиллин, биотин, бактонео-тим, биод 5 и др. Комплексное лечение проводят 3...4 дня.
Кон трольные вопросы и задания. 1. Охарактеризуйте эпизоотологический процесс при данной болезни. 2. Каковы клинические признаки и патологоанатомические изменения при ротавирусной инфекции телят? 3. Когда диагноз на ротавирусную инфекцию считают установленным и от каких болезней следует ее дифференцировать? 4. Назовите основные принципы лечения и специфические средства профилактики. 5. Охарактеризуйте основные меры борьбы и профилактики ротавирусной инфекции телят.
